从地锦草里提取总黄酮的新方法
【专利摘要】本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草总黄酮的方法。其特点是：超临界CO2流体萃取技术在萃取过程中保持着药用植物的有效成分，萃取过程中不发生化学反应，安全性好，不仅萃取的效率高而且能耗较少，提高了生产效率也降低了费用成本。应用大孔吸附技术分离纯化总黄酮，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量30％以上的总黄酮半成品和含量95％以上的总黄酮终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
【专利说明】从地锦草里提取总黄酮的新方法
【技术领域】:
[0001]本发明属于天然有机化学领域，涉及一种地锦草总黄酮的纯化方法，特别是涉及一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法。
【背景技术】:
[0002]地锦草一年生匍匐草本。茎纤细，近基部分枝，带紫红色，无毛。叶对生；叶柄极短；托叶线形，通常3裂；叶片长圆形，长4-10mm，宽4_6mm，先端钝圆，基部偏狭，边缘有细齿，两面无毛或疏生柔毛，绿色或淡红色。杯状花序单生于叶腋；总苞倒圆锥形，浅红色，顶端4裂，裂片长三角形；腺体4，长圆形，有白色花瓣状附属物；子房3室；花柱3，2裂。蒴果三棱状球形，光滑无毛；种子卵形，黑褐色，外被白色蜡粉，长约1.2mm，宽约0.7mm。花期6-10月，果实7月渐次成熟。主治:痢疾；泄泻；黄疸；咳血；吐血；尿血；便血；崩漏；乳汁不下；跌打肿痛及热毒疮疡。生态环境:生于平原、荒地、路旁及田间，为习见杂草。
[0003]地锦草含有三种黄酮甙，其中两个甙的甙元为山柰酚(kaempferol)，另一个甙的甙元为槲皮素(quercetin)。还含香豆精类成分:东莨菪素(scopoletin)，伞形花内酯(umbelliferone),阿牙潘泽兰内酯(ayapin)。又含棕榈酸(palmitic acid),没食子酸(Gallic acid),没食子酸甲 酯(methylgallate)和内消旋肌醇(mesoinositol)。近年来，人们发现天然植物地锦草中含有大量的总黄酮，由于原料地锦草来源较广，从中提取总黄酮已取得了可喜进展。目前国内对总黄酮的提取方法主要是微波逆流提取或甲醇制备工艺，其工艺主要为干品粉碎后用甲醇浸泡过夜，在用布氏滤斗过滤，提取4次，合并滤液，最后旋转蒸发、减压浓缩、喷雾干燥得总黄酮，所用的提取分离方法其效果远远不如超临界CO2流体萃取后进行大孔吸附树脂分离的效果。
【发明内容】
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[0004]本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法。
[0005]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是:
[0006]一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下:
[0007](I)将干地锦草粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，萃取压力为20MPa~40MPa，温度为50°C~60°C，萃取时间IOOmin~140min，得萃取物；
[0008](2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.0~4.0，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物；
[0009](3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；
[0010](4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗
脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液；
[0011](5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为在30%以上；
[0012](6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
[0013](7)将所收集的总黄酮浓缩液用溶剂结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮，其含量在95%以上。
[0014]所述步骤(1)中，地锦草粉碎过80~100目筛；
[0015]所述步骤(3)中，所用的大孔吸附树脂为DlOl型、HPD400型、S_8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
[0016]本发明应用超临界CCV流体萃取可确保原有的色、味不因受热破坏，更能确保其中热敏性，易氧化物质不被破坏；还可在萃取的过程中同时对萃取物进行分离纯化；大孔吸附技术分离纯化总黄酮，对总黄酮的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35%以上的总黄酮半成品和含量95%以上的总黄酮终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的特点。
[0017]本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附总黄酮，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
【具体实施方式】:
[0018]实施案例1:一种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下:
[0019](I)将1000g干地锦草粉碎后过80目筛，加入到0)2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3%，萃取压力为20MPa，温度为55°C，CO2流量为2mg/g生药.min,萃取时间IOOmin,得萃取物；
[0020](2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.0，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物；
[0021](3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为HPD400型树脂；
[0022](4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗
脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液；
[0023](5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为30.2% ；
[0024](6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
[0025](7)将所收集的总黄酮浓缩液用无水乙醇结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮0.169g，其含量在97.2%。
[0026]实施案例2: —种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下:
[0027](I)将1000g干地锦草粉碎后过90目筛，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力为30MPa，温度为55°C，CO2流量为2mg/g生药.min,萃取时间120min,得萃取物；
[0028](2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.8，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物；
[0029](3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为DlOl型树脂；
[0030](4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗
脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液；
[0031](5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为31.5% ；
[0032](6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
[0033](7)将所收集的总黄酮浓缩液用无水乙醇结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮0.197g，其含量在96.6%。
[0034]实施案例3: —种利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下:
[0035](I)将1000g干地锦草粉碎后过100目筛，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力为40MPa，温度为60°C，CO2流量为3mg / g生药.min,萃取时`间140min,得萃取物；
[0036](2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为4.0，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物；
[0037](3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为AB-8H型树脂；
[0038](4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗
脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液；
[0039](5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为33.7% ；
[0040](6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
[0041](7)将所收集的总黄酮浓缩液用无水乙醇结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮0.186g，其含量在98.3%。
【权利要求】
1.一种利用超临界CCV流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其步骤如下: (1)将干地锦草粉碎，加入到CO2超临界萃取器中，用乙醇作为夹带剂，萃取压力为20MPa~40MPa，温度为50°C~60°C，萃取时间IOOmin~140min，得萃取物； (2)将经步骤(1)处理的地锦草萃取液用盐酸调其pH值为3.0~4.0，静置、抽滤、减压浓缩得总黄酮粗提物； (3)将所得总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附； (4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液； (5)将总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得总黄酮半成品，其含量为在30%以上； (6)将所得总黄酮半成品上硅胶层析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集总黄酮各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂； (7)将所收集的总黄酮浓缩液用溶剂结晶，分离结晶，洗涤，干燥精制得总黄酮，其含量在95%以上。 所述步骤(1)中，干地锦草粉碎过80~100目筛； 所述步骤(3)中，所用 的大孔吸附树脂为DlOl型、HPD400型、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
2.根据权利要求3所述的利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其特征是:所述的步骤(1)中，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3%~6%。
3.根据权利要求4所述的利用超临界CO2流体萃取和大孔吸附树脂耦合法富集纯化地锦草中总黄酮的方法，其特征是:所述的步骤(7)中，浓缩液结晶所用的溶剂为无水乙醇。
【文档编号】A61K36/47GK103655677SQ201310706335
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月10日 优先权日:2013年12月10日
【发明者】万莉, 姚德坤, 张亚红 申请人:大兴安岭嘉迪欧营养原料有限公司