一种凤尾草总黄酮的制备方法及其应用
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，具体涉及一种凤尾草总黄酮的制备方法及其应用。其制备方法包括如下步骤：（1）将凤尾草切成2~3cm的小段，备用；（2）复合酶酶解；（3）超声波提取；（4）大孔吸附树脂纯化，收集洗脱液，减压浓缩，即得凤尾草总黄酮。经药效学评价，该提取物抗氧化效果明显，可将其用于制备抗氧化的药品中，具有原料产量大且价格低廉、疗效显著、使用方便等优点，是开发新型高效的天然抗氧化剂的一个好选择。
【专利说明】
一种凤尾草总黄酮的制备方法及其应用
[0001 ]
技术领域： 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种凤尾草总黄酮的制备方法及其应用。
[0002]
【背景技术】： 自由基是人体生命活动中多种生化反应的中间代谢产物。细胞在正常的代谢过程中， 或者受到高能辐射，以及高压氧、药物、香烟烟雾和光化学空气污染等作用，都会产生自由 基。
[0003] 研究表明，自由基从产生到衰亡的过程就是电子转移的过程。在生命体系中，电子 的转移是一种最基本的运动，而氧的得电子能力很强，因此，生物体内许多化学反应都与氧 有关。研究发现损害人体健康的自由基几乎都与那些活性较强的含氧物质有关，与这些物 质相结合的自由基叫做活性氧自由基。活性氧自由基对人体的损害实际上是一种氧化过 程。因此，要降低自由基的损害，就要从抗氧化做起。
[0004] 据现代医学研究证明，黄酮类化合物分子中含有多电子的羟基部分，使其具有良 好的抗氧化性能，是一种天然抗氧化剂，具有清除人体中超氧离子自由基、抗衰老和增加机 体免疫力的生理活性作用。近30年来黄酮类化合物一直是国内外研究开发利用的热点，国 内外许多专家对各种黄酮药理作用做了较深入的研究，使得黄酮的药理药效研究有了很大 的发展。但有关凤尾草主要活性成分总黄酮的药理研究主要集中在其抗肿瘤作用上，对其 抗氧化性的研究尚未见文献报道。我国凤尾草资源极其丰富，价格便宜，迫切需要广大学者 在凤尾草的植物化学、提取分离、药理药效和临床应用等方面进行广泛的研究，以充分发挥 我国的凤尾草资源优势，开发凤尾草新药，造福人类。
[0005]
【发明内容】
： 本发明的目的在于寻求新型高效的天然抗氧化剂的开发利用，提供了一种凤尾草总黄 酮的制备方法及其应用。
[0006] 本发明是通过如下技术方案完成的： (1) 原料处理:将凤尾草切成2~3cm的小段，备用； (2) 酶解:将处理后的凤尾草加入其质量卜2倍的蒸馏水，再加入其原料质量2~3%的复 合酶液，调节pH至4.5~5.5，在50 °C恒温酶解2~3h; (3) 超声波提取:将酶解后的溶液加入到频率为40KHz的超声装置中，加入其原料质量4 ~6倍的60~70%的乙醇溶液，于60~70°C的条件下，超声提取2~4h，提取液浓缩至无醇味，备 用； (4) 大孔吸附树脂纯化:将所得浓缩液上大孔吸附树脂柱，65~75%的乙醇溶液洗脱，收 集洗脱液，减压浓缩，即得凤尾草总黄酮。
[0007] 步骤(2)中所述的复合酶为质量比3:1的纤维素酶和半纤维素酶。
[0008] 步骤(4)中所述的大孔吸附树脂类型为HPD-100、D-101、XDA-1。
[0009] 步骤(4)中所述的树脂用量与原料的质量比为1:1。
[0010] 本发明制得的凤尾草总黄酮在制备具有抗氧化作用的药物中的应用 本发明获得的凤尾草总黄酮，通过对其清除超氧阴离子自由基(_〇2)2能力和清除DPPH 自由基能力等指标的研究表明：凤尾草总黄酮可以有效清除超氧阴离子自由基和DPPH自由 基。因此，凤尾草总黄酮是开发新型高效的天然抗氧化剂的一个好选择。
[0011]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
[0012]
【具体实施方式】： 实施例1: 将凤尾草切成2~3cm的小段，加入其质量1倍的蒸馏水，再加入其原料质量2%的复合酶 液(质量比为3:1的纤维素酶和半纤维素酶），调节pH至4.5,在50°C恒温酶解2h;将酶解后的 溶液加入到频率为40KHz的超声装置中，加入其原料质量4倍的60%的乙醇溶液，于60 °C的条 件下，超声提取2h，提取液浓缩至无醇味，将所得浓缩液上HPD-100大孔吸附树脂柱，65%的 乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，即得凤尾草总黄酮，经UV检测，凤尾草总黄酮的含量 为79.09%。
[0013] 实施例2: 将凤尾草切成2~3cm的小段，加入其质量2倍的蒸馏水，再加入其原料质量2.5%的复合 酶液(质量比为3:1的纤维素酶和半纤维素酶），调节pH至5.5，在50°C恒温酶解3h;将酶解后 的溶液加入到频率为40KHz的超声装置中，加入其原料质量6倍的70%的乙醇溶液，于65°C的 条件下，超声提取3h，提取液浓缩至无醇味，将所得浓缩液上D-101大孔吸附树脂柱，75%的 乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，即得凤尾草总黄酮，经UV检测，凤尾草总黄酮的含量 为82.13%。
[0014] 实施例3: 将凤尾草切成2~3cm的小段，加入其质量2倍的蒸馏水，再加入其原料质量3%的复合酶 液(质量比为3:1的纤维素酶和半纤维素酶），调节pH至5.0，在50°C恒温酶解3h;将酶解后的 溶液加入到频率为40KHz的超声装置中，加入其原料质量5倍的65%的乙醇溶液，于70 °C的条 件下，超声提取3h，提取液浓缩至无醇味，将所得浓缩液上XDA-1大孔吸附树脂柱，70%的乙 醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，即得凤尾草总黄酮，经UV检测，凤尾草总黄酮的含量为 86.47%。
[0015] 具体药效学研究实验： 将lg上述3个实施例中所得的凤尾草总黄酮，分别用30%的乙醇将其溶解定容在50mL容 量瓶中，记为A、B、C，备用。
[0016] a.清除超氧阴离子自由基Γ〇2)2能力的测定 采用邻苯三酚自氧化法，取50mmol/L Tris-HCl缓冲溶液(ρΗ=8.2)4.5mL，置于25°C水 浴中预热20min，分别加入lmL样品和0.4mL 25mmol/L邻苯三酸溶液，混勾后于25°C水浴中 反应5min后，加入8mol/L HC1 0.8mL终止反应。自氧化管以lmL蒸馏水代替样品管中样品， 操作方法同样品管，在325nm处测定吸光值，以等体积pH值8.2的Tris-HCl缓冲液为空白。结 果见表1: 超氧阴离子的清除率zUtHU/Ao] X100% 式中:Ao为自氧化管的吸光度； Μ为样品管的吸光度。
[0017]表1凤尾草总黄酮清除超氧阴离子自由基能力测定(X土S)
' 凤尾草总黄酮对清除超氧阴离子自由基有较好的清除效果，清除率随样品中总黄酮含1 量的增加而增大。由表1可以看出，凤尾草总黄酮对超氧阴离子自由基的清除率尤为显著， 明显强于Vc(在浓度为lmg/mL时，清除率为70.54%)。
[0018] b.凤尾草总黄酮对DPPH自由基的清除作用 在试管中分别加入2.00mL各浓度的凤尾草总黄酮溶液，编号为A、B、C，加入 2. OOmLO. 2mml/LDPPH乙醇溶液，摇匀，放置30min，以2.OOmL无水乙醇代替样品和2.00mL70% 乙醇混合后作为参比，测定517nm波长处的吸光度(仏）。空白对照组以2.OOmL无水乙醇代替 样品，测定517nm波长处的吸光度(A〇)，同时测定2 · OOmL待测液与2 · OOmL无水乙醇在517nm 波长处的吸光度(Aj)。以Vc为对照品。结果见表2: DPPH自由基清除率按以下公式计算： 清除率=[Αο - (Ai-Aj)]/ ΑοΧΙΟΟ% 式中:A〇-不加黄酮的吸光值，Ai-测定液的吸光值，Aj-黄酮的本底吸光值。
[0019] 表2凤尾草总黄酮对DPHH自由基能力测定土S)
从表2中可以看出，随着含量的增加，凤尾草总黄酮清除DPPH自由基的能力随着浓度的 增大而增大，有明显的剂量依赖性，实验结果说明凤尾草总黄酮是良好的质子供体，具有显 著的抗氧化作用。
【主权项】
1. 一种凤尾草总黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 原料处理:将凤尾草切成2~3cm的小段，备用； (2) 酶解:将处理后的凤尾草加入其质量1~2倍的蒸馏水，再加入其原料质量2~3%的复 合酶液，调节pH至4.5~5.5，在50 °C恒温酶解2~3h; (3) 超声波提取:将酶解后的溶液加入到频率为40KHz的超声装置中，加入其原料质量4 ~6倍的60~70%的乙醇溶液，于60~70°C的条件下，超声提取2~4h，提取液浓缩至无醇味，备 用； (4) 大孔吸附树脂纯化:将所得浓缩液上大孔吸附树脂柱，65~75%的乙醇溶液洗脱，收 集洗脱液，减压浓缩，即得凤尾草总黄酮。2. 根据权利要求1所述的一种凤尾草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述 的复合酶为质量比3:1的纤维素酶和半纤维素酶。3. 根据权利要求1所述的一种凤尾草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述 的大孔吸附树脂类型为HPD-100、D-101、XDA-1。4. 根据权利要求1所述的一种凤尾草总黄酮的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述 的树脂用量与原料的质量比为1:1。5. 根据权利要求1所述的凤尾草总黄酮在制备具有抗氧化作用的药物中的应用。
【文档编号】A61P39/06GK106038617SQ201610299594
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月9日
【发明人】杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司