一种瞿麦总黄酮的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物中有效成分的分离纯化方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002]瞿麦(学名:Dianthus superbus)是石竹科石竹属的一种植物。别名:野麦、石柱花、十样景花。拉丁文名为Dianthus superbus。其所含的化学成分主要为:黄酮类和阜苷类。经现代研宄证明，瞿麦具有的药理作用为:1、利尿作用；2、对心血管的作用；3、对肠管的作用；4、对子宫的作用。
[0003]目前国内有关从瞿麦中提取瞿麦总黄酮的方法主要为超声波浸提法，在现有公开的发明专利“从瞿麦中提取黄酮的超声提取方法”(专利号201310081020.1 )中就是应用这一方法。该种方法具有有机溶剂消耗量大、所得瞿麦总黄酮的纯度低、有效成分提取率低的缺点，不符合中药现代化的要求，亦不利于瞿麦总黄酮在各个行业的应用与发展。
【发明内容】
[0004]本发明是针对现有制备瞿麦总黄酮的方法所存在的缺陷和不足而进行的研宄，旨在提供一种高效性和选择性、操作简便、产率高、低污染的制备方法。
[0005]为实现上述目的，本发明的技术方案按照下列步骤进行:
1)材料预处理:取干燥的瞿麦药材，粉碎，过20~60目筛，收集粗粉，备用；
2)酶解:称取一定量的药材粉末，加入原料重量0.3%~0.5%的生物酶，并同时加入料液比为1:10~15的水，在pH值为4~5，温度为45~50°C的条件下酶解l~3h ；
3)微波提取:酶解完成后，将酶解物在温度为60~90°C的条件下微波提取300~600s，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/4~1/2，收集浓缩液备用；
4)上大孔吸附树脂柱纯化:将上述所得浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用2~5倍柱体积的水洗脱，再用2~4倍柱体积、5%~10%的乙醇洗脱，最后用3~5倍柱体积、50%~70%的乙醇洗脱，收集507『70%的乙醇洗脱液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液，备用；
5)上聚酰胺层析柱纯化:将4)中所得浓缩液上聚酰胺层析柱，先用2~4倍柱体积的水洗脱，再用3~5倍柱体积、50~60%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压干燥得瞿麦总黄酮。
[0006]步骤2)中所述的生物酶为果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶中的一种。
[0007]步骤3)中所述微波的提取功率为800~1000W。
[0008]步骤4)中所述大孔吸附树脂型号为 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、DlOUWLD中的一种。
[0009]步骤5)中所述聚酰胺树脂的粒径为60~80目。
[0010]瞿麦总黄酮是胞内物质，植物细胞壁主要由纤维素和果胶组成。纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶是可以将其水解。瞿麦细胞用生物酶处理后，细胞壁的水解破裂，有利于细胞内有效成分的溶出。而微波是一种超高速电磁波，具有很强的穿透作用，使植物细胞中的水分或有机溶剂迅速升温升压，细胞壁穿孔，使成分从细胞中溶出，以增加瞿麦中有效成分在溶剂中的溶解，而且微波电磁场使分子运动短时间内加剧，从而缩短了时间，提高了提取率。本发明把酶法和微波提取两种技术联用，优势互补，大大地提高了瞿麦总黄酮的提取率。另外聚酰胺层析柱与大孔吸附树脂柱的连用来纯化瞿麦总黄酮，可以使所得产品的纯度在一定程度上得到很大的提高。
[0011]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0012]【具体实施方式】:
实施例1:
取干燥的瞿麦药材，粉碎，过20目筛；称取100g预处理好的药材粉末，加入原料重量的0.3%的纤维素酶，并同时加入料液比为1:10的水，在pH值为4，温度为45°C的条件下酶解Ih ;酶解完成后，将酶解物在温度为60°C的条件下，使用功率为800W的微波提取300s，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/2，收集浓缩液备用；将所得浓缩液上D3520型大孔吸附树脂柱，先用2倍柱体积的水洗脱，再用2倍柱体积、5%的乙醇洗脱，最后用3倍柱体积、50%的乙醇洗脱，收集50%的乙醇洗脱液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液；将所得浓缩液上粒径大小为60目聚酰胺层析柱，先用2倍柱体积的水洗脱，再用3倍柱体积、50%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压干燥得瞿麦总黄酮。经检测，提取物中瞿麦总黄酮含量为85.6%。测定方法，以芦丁标准品为对照，按紫外分光光度测定吸收度，计算总黄酮的含量。下同。
[0013]实施例2:
取干燥的瞿麦药材，粉碎，过40目筛；称取100g预处理好的药材粉末，加入原料重量的0.4%的半纤维素酶，并同时加入料液比为1:12的水，在pH值为4，温度为45°C的条件下酶解2h ;酶解完成后，将酶解物在温度为70°C的条件下，使用功率为900W的微波提取500s，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/3，收集浓缩液备用；将所得浓缩液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积的水洗脱，再用3倍柱体积、7%的乙醇洗脱，最后用4倍柱体积、60%的乙醇洗脱，收集60%的乙醇洗脱液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液；将所得浓缩液上粒径大小为80目聚酰胺层析柱，先用3倍柱体积的水洗脱，再用4倍柱体积、55%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压干燥得瞿麦总黄酮。经检测，提取物中瞿麦总黄酮含量为86.4%。
[0014]实施例3:
取干燥的瞿麦药材，粉碎，过60目筛；称取100g预处理好的药材粉末，加入原料重量的0.5%的果胶酶，并同时加入料液比为1:15的水，在pH值为5，温度为50°C的条件下酶解3h ；:酶解完成后，将酶解物在温度为90°C的条件下，使用功率为1000W的微波提取600s，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/4，收集浓缩液备用；将所得浓缩液上D-101型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积的水洗脱，再用4倍柱体积、10%的乙醇洗脱，最后用5倍柱体积、70%的乙醇洗脱，收集70%的乙醇洗脱液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液；将所得浓缩液上粒径大小为80目聚酰胺层析柱，先用4倍柱体积的水洗脱，再用5倍柱体积、60%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压干燥得瞿麦总黄酮。经检测，提取物中瞿麦总黄酮含量为87.2%。
【主权项】
1.一种瞿麦总黄酮的制备方法，其特征在于采用以下制作步骤: 1)材料预处理:取干燥的瞿麦药材，粉碎，过20~60目筛，收集粗粉，备用； 2)酶解:称取一定量的药材粉末，加入原料重量0.3%~0.5%的生物酶，并同时加入料液比为1:10~15的水，在pH值为4~5，温度为45~50°C的条件下酶解l~3h ； 3)微波提取:酶解完成后，将酶解物在温度为60~90°C的条件下微波提取300~600s，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/4~1/2，收集浓缩液备用； 4)上大孔吸附树脂柱纯化:将上述所得浓缩液上大孔吸附树脂柱，先用2~5倍柱体积的水洗脱，再用2~4倍柱体积、5%~10%的乙醇洗脱，最后用3~5倍柱体积、50%~70%的乙醇洗脱，收集507『70%的乙醇洗脱液减压浓缩至无醇味，收集浓缩液，备用； 5)上聚酰胺层析柱纯化:将4)中所得浓缩液上聚酰胺层析柱，先用2~4倍柱体积的水洗脱，再用3~5倍柱体积、50~60%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液减压干燥得瞿麦总黄酮。2.根据权利要求1所述的一种瞿麦总黄酮的制备方法，其特征在于:步骤2)中所述的 生物酶为果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶中的一种。3.根据权利要求1所述的一种瞿麦总黄酮的制备方法，其特征在于:步骤3)中所述微波的提取功率为800~1000W。4.根据权利要求1所述的一种瞿麦总黄酮的制备方法，其特征在于:步骤4)中所述大孔吸附树脂型号为 X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、DlOl、WLD 中的一种。5.根据权利要求1所述的一种瞿麦总黄酮的制备方法，其特征在于:步骤5)中所述聚酰胺树脂的粒径为60~80目。
【专利摘要】本发明涉及一种瞿麦总黄酮的制备方法，具体涉及一种生物酶辅助微波法提取瞿麦中总黄酮的方法。其处理步骤包括：材料预处理→酶解→微波法提取→大孔吸附树脂柱纯化→上聚酰胺层析柱纯化回收试剂、减压干燥即得瞿麦总黄酮。本方法高效、快速、应用范围广，适合高纯度瞿麦总黄酮的生产。
【IPC分类】A61K36/36
【公开号】CN104906168
【申请号】CN201510264559
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月22日