专利名称：一种蓬子菜总黄酮的制备方法
技术领域：
本发明属于植物提取技术领域，涉及一种蓬子菜总黄酮的制备方法，尤其是涉及 一种采用大孔树脂和纳滤技术提取制备蓬子菜总黄酮的方法。
背景技术：
蓬子菜为茜草科猪殃殃属植物蓬子菜(Galium verum L.的全草。生于山坡灌丛 及旷野草地，分布于东北、西北至长江流域。蓬子菜的干燥全草在民间有广泛的药用基础， 药用最早始于《救荒本草》，别名黄米花、疗毒蒿、鸡肠草、针叶蒿等；民间用于治疗肝炎、 稻田皮炎、跌打损伤、尊麻疹、妇科疾病等。国外研究显示莲子菜可用于治疗多种疾病，包 括淋巴腺炎、扁桃体炎等，还具有降血压、解热作用，并可作为收敛剂；配以止痛剂还能治 疗膀胧炎、结石、病气等泌尿系统疾病。近年来临床上用莲子菜治疗下肢深静脉血栓效果 较好，对其药效物质基础及药理活性的研究逐渐得到重视。蓬子菜根含蒽醌类化合物， 地上部分含黄酮类和环烯醚萜类化合物。其黄酮类化合物包括芸香苷(rutin)、喇叭茶 苷(palustroside)、槲皮素-3-葡萄糖苷(3-glucosylquercetin)、香叶木苷、香叶木素 (2-1)葡萄阿拉伯糖，异槲皮苷，香叶木素7-0-β-D葡萄糖苷等。蓬子菜具有行血、消瘀、 祛风、治痒之功效，中国专利申请号94104335. 5以蓬子菜的煎煮液和乙醇为主料配置成外 用擦剂，用于治疗荨麻疹，具有良好的治疗效果。蓬子菜中的黄酮类化合物具有较好的生理 活性，其中有效部位中香叶木苷含量较高，最高可达0. Μ%，并且研究表明香叶木苷具有维 生素P样作用，降低兔毛细血管渗透性的作用强于儿茶酚水合物、陈皮昔、槲皮素和芦丁 ； 有维生素C样作用，能增强豚鼠毛细血管的抵抗力和减少肾上腺抗坏血酸的排出；有抗炎 作用，对角叉菜胶引起的大鼠足水肿有消肿作用。王静等模拟航天用药要求，进行了香叶木 苷对尾吊大鼠血液系统的作用研究，通过对尾吊大鼠耳廓微循环、体外血栓形成、循环内皮 细胞的观察以及椎动脉恒速灌流脑血管阻力的影响进行实验，发现香叶木昔可使大鼠耳廓 细动脉和细静脉血管口径增大，血流速度加快，尤其使静脉血流速度加快明显，毛细血管开 放量增多，与对照组有显著差异，表明香叶木昔具有明显改善尾吊大鼠耳廓微循环的作用。 与对照组相比，香叶木昔可显著减小血栓长度，降低血栓的干质量和湿质量，大鼠新鲜脱落 内皮细胞数量显著减少，明显降低血压和脑血管阻力。此外，还发现香叶木苷具有消肿、止 血、抗癌、保肝等作用。国内外提取黄酮的方法很多，有水煮法、有机溶剂提取法、酶解法、超临界萃取法、 超声波提取法、微波提取法。分离黄酮的方法有树脂吸附法、高效液相色谱法等。蓬子菜的 研究，目前仅限于药理和化学成分研究，提取工艺研究较少，卢卫红等发表的“大孔吸附树 脂分离纯化香叶木苷”，采用70%乙醇回流提取，浓缩提取液得浸膏，水溶解上大孔吸附树 脂柱，该方法提取得到的杂质多，树脂吸附容量很低，对树脂污染大，不适用于工业生产。从 蓬子菜中提取制备高含量总黄酮的方法还没有公开文献。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种蓬子菜总黄酮的制备方法。该方法能够得到 较高含量的蓬子菜总黄酮，操作简单，便于工业操作。本发明提取技术方案如下一种蓬子菜总黄酮的制备方法，其特征在于包含以下步骤(1)将蓬子菜净制、干燥、粉碎，得粗粉；将粗粉与水按质量比1 1-5混合置于提 取釜中，加热提取2-3次，每次1-3小时，过滤，滤渣再用20-50%乙醇超声提取1-2次，每次 0. 5-2小时，合并滤液；(2)滤液加热至50_80°C，搅拌条件下加入碱液，调节PH至7. 5_13，保持10_30分 钟，趁热过滤，滤液在50-80°C，搅拌条件下用酸调节pH至2-5，静置冷却至室温，放置析出 沉淀，抽滤，收集沉淀物；(3)加去离子水分散沉淀物，以石油醚萃取至石油醚萃取层颜色变浅，弃石油醚萃 取液，水层药液蒸去残留石油醚，缓慢加入预处理好的树脂柱，饱和吸附后依次用水、30% 乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，干燥即得莲子菜总黄酮。所述步骤(1)中10-80%乙醇溶液用量为滤渣质量的4-10倍。所述步骤( 碱液为0. 1-10%的氨水或氢氧化钠水溶液；所述酸为5-15%的盐酸 或硫酸水溶液。所述步骤(3)中加入的石油醚与分散液的体积比为0.5-2 1。所述步骤(3)中大孔树脂为HPD400、HPD500、AB-8中的一种。综上所述，本发明具有的优点本发明采用水煎煮和醇超声提取结合，提取充分； 采用石油醚萃取脱除脂溶性杂质，使上柱液有效去除了杂质，减轻了对树脂吸附干扰，使树 脂对黄酮的吸附能力大大增强，更能适应规模化提取需要。膜浓缩温度低，有效减少了黄酮 成分的分解。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式
具体实施例方式实施例1 将采购的蓬子菜地上部分净制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；称取5kg蓬子菜粉 末用15L水加热至70°C，提取3次，每次2小时，过滤，保留滤液，滤渣再加入30L50%乙醇水 溶液超声提取半小时，合并所有滤液，加热至60°C，在搅拌下用0.5%氨水溶液调pH至11， 在60°C条件下保持10分钟，趁热过滤得到滤液，滤液在60°C条件下，边搅拌边加入10%盐 酸水溶液，调节PH至3，冷却至室温，静置析出沉淀，抽滤，收集沉淀物，加去离子水分散沉 淀物，用石油醚(沸程60°C )萃取至石油醚萃取层颜色变浅，每次石油醚用量为分散液体 积的1倍，弃石油醚萃取液，水层药液蒸去残留石油醚，缓慢加入预处理好的AB-8大孔树脂 柱，饱和吸附后用水、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩，低温真空干燥粉碎得 干粉，纯度73%。实施例2:将采购的蓬子菜地上部分净制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；称取5kg蓬子菜粉末用23L水加热至80°C，提取2次，每次3小时，过滤，保留滤液，滤渣再加入37L40 %乙醇 水溶液超声提取1小时，合并所有滤液，加热至50°C，在搅拌下用0. 3%氢氧化钠水溶液调 PH至13，在50°C条件下保持20分钟，趁热过滤得到滤液，滤液在50°C条件下，边搅拌边加 入5%盐酸水溶液，调节pH至2，冷却至室温，静置析出沉淀，抽滤，收集沉淀物，加去离子水 分散沉淀物，用石油醚(沸程60°C)萃取至石油醚萃取层颜色变浅，每次石油醚用量为分散 液体积的0. 5倍，弃石油醚萃取液，水层药液蒸去残留石油醚，缓慢加入预处理好的HPD400 大孔树脂柱，饱和吸附后用水、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩，低温真空干 燥粉碎得干粉，纯度69%。实施例3 将采购的莲子菜地上部分净制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；称取5kg蓬子菜粉 末用20L水加热至70°C，提取3次，每次1小时，过滤，保留滤液，滤渣再加入43L30%乙醇 水溶液超声提取1小时，合并所有滤液，加热至80°C，在搅拌下用2%氨水溶液调pH至8. 5， 在80°C条件下保持15分钟，趁热过滤得到滤液，滤液在80°C条件下，边搅拌边加入10%硫 酸水溶液，调节PH至5，冷却至室温，静置析出沉淀，抽滤，收集沉淀物，加去离子水分散沉 淀物，用石油醚(沸程60°C)萃取至石油醚萃取层颜色变浅，每次石油醚用量为分散液体积 的1. 5倍，弃石油醚萃取液，水层药液蒸去残留石油醚，缓慢加入预处理好的HPD500大孔树 脂柱，饱和吸附后用水、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩，低温真空干燥粉碎 得干粉，纯度76%。实施例4 将采购的蓬子菜地上部分净制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；称取15kg蓬子菜粉 末用30L水加热至80°C，提取3次，每次3小时，过滤，保留滤液，滤渣再加入120L40%乙醇 水溶液超声提取半小时，合并所有滤液，加热至70°C，在搅拌下用5%氢氧化钠水溶液调pH 至10，在70°C条件下保持30分钟，趁热过滤得到滤液，滤液在70°C条件下，边搅拌边加入 8%盐酸水溶液，调节pH至4，冷却至室温，静置析出沉淀，抽滤，收集沉淀物，加去离子水分 散沉淀物，用石油醚(沸程60°C)萃取至石油醚萃取层颜色变浅，每次石油醚用量为分散液 体积的2倍，弃石油醚萃取液，水层药液蒸去残留石油醚，缓慢加入预处理好的HPD400大孔 树脂柱，饱和吸附后用水、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩，低温真空干燥粉 碎得干粉，纯度65%。实施例5 将采购的蓬子菜地上部分净制、干燥、粉碎，得到蓬子菜粉末；称取35kg蓬子菜粉 末用170L水加热至70°C，提取2次，每次2. 5小时，过滤，保留滤液，滤渣再加入200L50% 乙醇水溶液超声提取1小时，合并所有滤液，加热至60°C，在搅拌下用10%氨水溶液条pH 至12，在60°C条件下保持15分钟，趁热过滤得到滤液，滤液在60°C条件下，边搅拌边加入 15%盐酸水溶液，调节pH至2，冷却至室温，静置析出沉淀，抽滤，收集沉淀物，加去离子水 分散沉淀物，用石油醚(沸程60°C)萃取至石油醚萃取层颜色变浅，每次石油醚用量为分散 液体积的1. 5倍，弃石油醚萃取液，水层药液蒸去残留石油醚，缓慢加入预处理好的AB-8大 孔树脂柱，饱和吸附后用水、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩，低温真空干燥 粉碎得干粉，纯度67%。
权利要求
1.一种蓬子菜总黄酮的制备方法，其特征在于，该方法按照下列步骤(1)将蓬子菜净制、干燥、粉碎，得粗粉；将粗粉与水按质量比1 1-5混合置于提取 釜中，加热提取2-3次，每次1-3小时，过滤，滤渣再用20-50%乙醇超声提取1-2次，每次 0. 5-2小时，合并滤液；(2)滤液加热至50-80°C，搅拌条件下加入碱液，调节pH至7.5_13，保持10-30分钟，趁 热过滤，滤液在50-80°C，搅拌条件下用酸调节pH至2-5，静置冷却至室温，放置析出沉淀， 抽滤，收集沉淀物；(3)加去离子水分散沉淀物，以石油醚萃取至石油醚萃取层颜色变浅，弃石油醚萃取 液，水层药液蒸去残留石油醚，缓慢加入预处理好的树脂柱，饱和吸附后依次用水、30%乙 醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，干燥即得蓬子菜总黄酮。
2.如权利要求1所述的一种蓬子菜总黄酮的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中 10-80%乙醇溶液用量为滤渣质量的4-10倍。
3.如权利要求1所述的一种蓬子菜总黄酮的制备方法，其特征在于所述步骤O)中碱 液为0. 1-10%的氨水或氢氧化钠水溶液；所述酸为5-15%的盐酸或硫酸水溶液。
4.如权利要求1所述的一种莲子菜总黄酮的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中加 入的石油醚与分散液的体积比为0.5-2 1。
5.如权利要求1所述的一种莲子菜总黄酮的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中大 孔树脂为HPD400、HPD500、AB-8中的一种。
全文摘要
本发明公开了一种蓬子菜总黄酮的制备方法，属于植物提取技术领域。所述蓬子菜总黄酮中主要包含芸香苷、喇叭茶苷、香叶木苷、香叶木素(2→1)葡萄阿拉伯糖，异槲皮苷，香叶木素7-O-β-D葡萄糖苷等。蓬子菜中总黄酮由水提、有机溶剂提取、浓缩，除杂，大孔树脂吸附洗脱制备获得。所制得的蓬子菜总黄酮中黄酮含量高达50-95％。本方法采用石油醚萃取脱除脂溶性杂质，上柱液有效去除了杂质，减轻了对树脂吸附干扰，使树脂对黄酮吸附能力增强，并且本方法成本低廉，工艺合理，能适应规模化生产。
文档编号A61P15/00GK102038782SQ20101029324
公开日2011年5月4日 申请日期2010年9月27日 优先权日2010年9月27日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司