专利名称：一种检测安胃疡中总黄酮含量的方法
技术领域：
本发明属于药物技术领域。具体而言，本发明涉及一种检测甘草提取物、优选安胃疡(原料药)中总黄酮含量的方法。
背景技术：
安胃疡(原料药)具有补中益气，解毒生肌，抑制胃液分泌，修复和保护胃粘膜的功效。适用于胃及十二指肠球部溃疡，对虚寒型和气滞型患者疗效较好。亦可用于溃疡愈合后的维持治疗。安胃疡(原料药)为甘草提取物，其主要活性成分为甘草黄酮，因此对该甘草提取物的总黄酮进行检测具有重要意义。安胃疡(原料药)的现行质量标准编号为WS3-001-(Z-001)-98-(Z)，其中规定总黄酮含量测定的方法为重量法；由于重量法操作误差较大，受人为因素的影响较大，故重现性较差。随着时间的推移与科学技术的日新月异，安胃疡的检测方法已跟不上发展的形势，不利于产品质量的控制与产业化生产，工艺水平和质量标准也有待提高。因此，目前需要提供一种简便、准确、重现性好的检测安胃疡原粉中总黄酮含量的方法。
发明内容
甘草提取物一安胃疡(原料药)主要成份为甘草黄酮，以二氢黄酮类(如甘草苷)和查尔酮类化合物为主，并且二氢黄酮类易在碱液中开环，转变成相应的异构体——查尔酮类化合物。如果在碱性条件下测定安胃疡中甘草黄酮的含量，就能够近似代表安胃疡原粉中总黄酮的含量。本发明的发明人经过研究发现，查尔酮类化合物在紫外337nm波长处有特征峰， 同时在一定浓度范围内呈线性关系，在碱性条件下所测得的结果是测试品中二氢黄酮类化合物和查尔酮类化合物的总量，而这些化合物是安胃疡原粉中的主要黄酮成份。因此，采用紫外法测定可得甘草提取物中总黄酮的含量。因此本发明的目的在于，提供一种检测甘草提取物中总黄酮含量的方法，且该方法与重量法相比，具有简便、精确度高、受人为因素的影响小、重现性好的特点。针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案本发明提供一种检测甘草提取物中总黄酮含量的方法，所述方法包括测定碱性甘草提取物溶液在337nm处的吸光度。所述方法优选包括以下步骤1)将甘草苷标准品溶解于低级醇水溶液中制备不同浓度的甘草苷溶液，并调节溶液的PH为碱性；2)测定步骤1)中制备的甘草苷溶液在337nm处的吸光度，绘制标准曲线；3)将待测甘草提取物溶解于低级醇水溶液中制备溶液，并调节溶液的PH为碱性， 在337nm处测定吸光度，然后根据步骤2)中绘制的标准曲线，以甘草苷计得到所述甘草提取物中总黄酮的含量。优选地，步骤1)中的低级醇水溶液为甲醇水溶液和/或乙醇水溶液；其中，低级醇水溶液优选为乙醇水溶液，进一步优选为60-80% (体积/体积)乙醇水溶液，更优选为70%乙醇水溶液。本说明书和所附权利要求书中采用的乙醇水溶液其浓度都以体积/体积计算。根据本发明的具体实施方式
，该检测方法包括以下步骤1)精密称取甘草苷标准品，用70%乙醇水溶液制成O.aiig/ml的溶液，然后精密量取该溶液0. ImUO. 3ml、0. 5ml、0. 7ml、0. 9ml，分别置IOml量瓶中，各加70%乙醇水溶液 Iml，再加10 % (重量/体积)氢氧化钾水溶液0. 5ml，混勻，放置5分钟，加70 %乙醇水溶液稀释至刻度；2)以相应的试剂制成的溶液为空白(即，除不含待测物外其它成分相同)，按照紫外-可见分光光度法在337nm波长处测定步骤1)中制备的溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，溶液中甘草苷的浓度为横坐标，绘制标准曲线；3)精密称取待测甘草提取物，用70%乙醇水溶液配制成0. 16mg/ml的溶液，然后精密量取该溶液Iml置IOml量瓶中，加70%乙醇水溶液1ml，再加10%氢氧化钾水溶液 0. 5ml，混勻，放置5分钟，加70%乙醇水溶液稀释至刻度，以相应的试剂制成的溶液为空白 (即，除不含待测物外其它成分相同)，按照紫外-可见分光光度法在337nm波长处测定溶液的吸光度，从步骤2)中绘制的标准曲线读出该吸光度对应的甘草苷的浓度，从而得到以甘草苷计的待测甘草提取物中的总黄酮含量。其中该紫外-可见分光光度法参照《中国药典2010年版一部》附录VA。
优选地，上述方法步骤3)中的0. 16mg/ml的溶液制法如下精密称取待测粉状甘草提取物0. 2g，置25ml容量瓶中，加70 %乙醇适量，超声处理，室温放置，加70%乙醇水溶液至刻度，摇勻；然后精密量取0. 2ml置IOml容量瓶中，加 70%乙醇水溶液至刻度，摇勻。其中，该超声处理的条件优选为功率120W，频率25KHz，处理20分钟。本发明提供了一种检测甘草提取物、优选安胃疡中的总黄酮含量的方法，该方法采用紫外-可见分光光度法，在碱性条件下，检测甘草提取物溶液在337nm处的吸光度。与重量法相比，采用紫外法测定甘草提取物、优选安胃疡中总黄酮的含量具有方法简便、精确度高、受人为因素的影响小、重现性好等优点。
下文将结合下列附图来详细说明本发明的实施例。图1至图7为实施例1的200 450nm吸光度扫描图，其中图1为甘草苷对照品溶于70%乙醇水溶液后在200-450nm的光谱扫描图，图中峰 1 为 268. OOnm,吸光度 0. 7759 ；峰 2 为 219. OOnm,吸光度 1. 5495 ；谷 1 为 265. OOnm,吸光度0. 6618 ；谷2为247. OOnm,吸光度0. 3648 ；谷3为205. OOnm,吸光度0. 4259 ；谷4为 203. OOnm,吸光度 0. 4026 ；图2为甘草苷对照品溶于70%乙醇水溶液，再加入10%氢氧化钾水溶液后在 200-450nm的光谱扫描图，图中峰1为400. OOnm,吸光度0. 1667 ；峰2为337. OOnm,吸光度 0. 5901 ；峰 3 为 255. OOnm,吸光度 0. 2025 ；谷 1 为 368. OOnm,吸光度 0. 1140 ；谷 2 为 269. OOnm,吸光度 0. 1008 ；谷 3 为 207. OOnm,吸光度 0. 2714 ；图3为安胃疡(批号050101)溶于70 %乙醇水溶液后在200-450nm的光谱扫描图，图中峰1为沈8. OOnm,吸光度0. 3532 ；峰2为OOnm,吸光度0. 4266 ；峰3为 218. OOnm,吸光度 0. 6817 ；谷 1 为 266. OOnm,吸光度 0. 2848 ；谷 2 为 230. OOnm,吸光度 0. 1818 ；谷 3 为 206. OOnm,吸光度 0. 1494 ；图4为安胃疡(批号050101)溶于70%乙醇水溶液，再加入10%氢氧化钾水溶液后在200-450nm的光谱扫描图，图中峰1为409. OOnm,吸光度0. 6307 ；峰2为338. OOnm, 吸光度0. 8354 ；谷1为379. OOnm,吸光度0. 5494 ；谷2为293. OOnm,吸光度0. 5231 ；谷3为 205. OOnm,吸光度 0. 5990 ；谷 4 为 203. OOnm,吸光度 0. 6060 ；图5为70%醇水溶液在200-450nm的光谱扫描图，图中峰1为沈3. OOnm,吸光度 0. 0031 ；峰 2 为 224. OOnm，吸光度 0. 0025 ；峰 3 为 220. OOnm，吸光度 0. 0030 ；谷 1 为 269. OOnm,吸光度-0. 0061 ；谷 2 为 220. OOnm,吸光度-0. 0235 ；谷 3 为 214. OOnm,吸光度-0. 0104 ；图6为10%氢氧化钾水溶液在200-450nm的光谱扫描图，图中峰1为四0. OOnm, 吸光度0. 0551 ；图7为空白溶液(即，除不含待测物外其它成分相同)，在200-450nm的光谱扫描图；图8为本发明实施例2绘制的标准曲线；图9为本发明实施例3的精密度试验中，采用本发明的检测方法测定的安胃疡在200-450nm的光谱扫描图，图中峰1为409. OOnm,吸光度0. 5194 ；峰2为337. OOnm,吸光度 0. 6813 ；峰 3 为 219. OOnm,吸光度 0. 9736 ；谷 1 为 379. OOnm,吸光度 0. 4811 ；谷 2 为 293. OOnm,吸光度 0. 4114 ；谷 3 为 214. OOnm,吸光度 0. 5512 ；谷 4 为 208. OOnm,吸光度 0. 4776 ；谷 5 为 203. OOnm,吸光度 0. 4451 ；图10为本发明实施例3的稳定性试验中，采用本发明的检测方法测定的安胃疡在200-450nm的光谱扫描图，图中峰1为409. OOnm,吸光度0. M41 ；峰2为337. OOnm, 吸光度0. 6964 ；峰3为219. OOnm,吸光度1. 1565 ；谷1为379. OOnm,吸光度0. 5000 ；谷2 为 293. OOnm,吸光度 0. 4268 ；谷 3 为 207. OOnm,吸光度 0. 5057 ；谷 4 为 205. OOnm,吸光度 0. 4832 ；谷 5 为 203. OOnm,吸光度 0. 4848。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。实施例中采用紫外分光光度计Tu 1900(购自瑞士 CAMAG公司)，光度模式Abs ； 扫描速度快速；光谱带宽2nm ；采样间隔1. OOnm。实施例中使用的甘草苷购于中国药品生物制品检定所，批号111610-200503。供试品安胃疡由新疆金鹿药业科技有限责任公司提供，批号分别为050101、050102,050103,050701,050702,050703,050704,050705,050706,050707ο实施例1 最大吸收波长的诜择在紫外分光光度计上进行下述样品的200 450nm吸光度扫描(1)将甘草苷对照品溶于70%乙醇水溶液，取样，光谱扫描结果见图1 ；(2)将甘草苷对照品溶于70%乙醇水溶液，加入10%氢氧化钾水溶液，取样，光谱扫描结果见图2;(3)将供试品溶于70%乙醇水溶液，取样，光谱扫描结果见图3 ；(4)将供试品溶于70%乙醇水溶液，加入10%氢氧化钾水溶液，取样，光谱扫描结果见图4;(5)70%乙醇水溶液，取样，光谱扫描结果见图5 ；(6) 10%氢氧化钾水溶液，取样，光谱扫描结果见图6 ；(7)空白溶液(即，除不含待测物外其它成分相同)，取样，光谱扫描结果见图7。从以上结果可以看出，甘草苷对照品和供试品在337nm处有最大吸收，所用试剂以及空白溶液、氢氧化钾水溶液在337nm处无最大吸收，同时噪声水平也符合要求，因此确定337nm处为本发明方法的测定波长。实施例2 绘制标准曲线精密量取甘草苷对照品在70 %乙醇水溶液中的溶液(0. 2116mg/ml) 0. Iml、 0. 3ml,0. 5ml,0. 7ml,0. 9ml，分别置IOml容量瓶中，各加70%乙醇水溶液lml，加10%氢氧化钾水溶液0. 5ml，混勻，放置5分钟，加70%乙醇水溶液稀释至刻度，以相应的试剂制成的溶液为空白(即，除不含待测物外其它成分相同)，照紫外-可见分光光度法(《中国药典 2010年版一部》附录VA)在337nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标， 绘制标准曲线，结果见表1和附图8。表1甘草苷对照品标准曲线
权利要求
1.一种检测甘草提取物、优选安胃疡中总黄酮含量的方法，所述方法包括测定碱性甘草提取物溶液在337nm处的吸光度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括1)将甘草苷标准品溶解于低级醇水溶液中制备不同浓度的甘草苷溶液，并调节溶液的 PH为碱性；2)测定步骤1)中制备的甘草苷溶液在337nm处的吸光度，绘制标准曲线；3)将待测甘草提取物溶解于低级醇水溶液中制备溶液，并调节溶液的pH为碱性，在 337nm处测定吸光度，然后根据步骤2)中绘制的标准曲线，以甘草苷计得到所述甘草提取物中总黄酮的含量。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中的低级醇水溶液为甲醇水溶液和/或乙醇水溶液。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述低级醇水溶液为乙醇水溶液。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述低级醇水溶液为60 80%乙醇水溶液。
6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述低级醇水溶液为70% 乙醇水溶液。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括1)精密称取甘草苷标准品，用70%乙醇水溶液制成0.2mg/ml的溶液，然后精密量取该溶液0. ImUO. 3ml,0. 5ml,0. 7ml,0. 9ml，分别置IOml量瓶中，各加70%乙醇水溶液lml，再加10%氢氧化钾水溶液0. 5ml，混勻，放置5分钟，加70%乙醇水溶液稀释至刻度；2)以相应的试剂制成的溶液为空白，按照紫外-可见分光光度法在337nm波长处测定步骤1)中制备的溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，溶液中甘草苷的浓度为横坐标，绘制标准曲线；3)精密称取待测甘草提取物，用70%乙醇水溶液配制成0.16mg/ml的溶液，然后精密量取该溶液Iml置IOml量瓶中，加70%乙醇水溶液1ml，再加10%氢氧化钾溶液0. 5ml，混勻，放置5分钟，加70%乙醇水溶液稀释至刻度，以相应的试剂制成的溶液为空白，按照紫外-可见分光光度法在337nm波长处测定溶液的吸光度，从步骤幻中绘制的标准曲线读出该吸光度对应的甘草苷的浓度，从而得到以甘草苷计的待测甘草提取物中的总黄酮含量。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法步骤幻中的 0. 16mg/ml的溶液制法如下精密称取待测粉状甘草提取物0. 2g，置25ml容量瓶中，加70 %乙醇适量，超声处理，室温放置，加70%乙醇水溶液至刻度，摇勻；然后精密量取0. 2ml置IOml容量瓶中，加70%乙醇水溶液至刻度，摇勻。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述超声处理为功率120W，频率25KHz，处理20分钟。
全文摘要
本发明提供了检测甘草提取物、优选安胃疡中总黄酮含量的方法，该方法包括在碱性条件下测定该甘草提取物在337nm处的吸光度。与现有检测甘草提取物——安胃疡中总黄酮含量的重量法相比，本发明的检测方法具有方法简便、精确度高、受人为因素影响小和重现性好等优点。
文档编号G01N21/33GK102230892SQ20111016764
公开日2011年11月2日 申请日期2011年6月21日 优先权日2011年6月21日
发明者于新兰, 刘晓芳, 李革, 王海峰, 邓继华 申请人:新疆全安药业有限公司