一种总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种同时分析总黄酮和绿原酸含量的简便方法，该方法分别用芦丁和绿原酸对照品配成梯度标准溶液，用氯化钴溶液显色反应后，测定标准溶液在256nm和330nm波长处的吸光度；确定在同一浓度的标准溶液中上述二个波长处芦丁和绿原酸吸光度的比值关系，建立标准曲线。再测定经氯化钴显色反应后的待测样品溶液分别在上述二个波长处的吸光度，根据公式计算扣除干扰组份在目标吸收峰上的吸光度后，通过标准曲线，分别计算得到绿原酸和黄酮的含量。本发明有效地避免了黄酮和绿原酸对吸光度的相互影响，结果准确可靠，简便快速，重复性好。可用于同时测定金银花及其提纯物或者其它类似植物草药中总黄酮与绿原酸的含量，对其进行质量控制和监测。
【专利说明】一种总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于分光光度计检测技术，涉及一种采用扣除干扰的紫外可见分光光度计检测方法，此法同时测定样品中两类主要化合物的含量；具体是一种同时分析总黄酮和绿原酸含量的简便方法，特别是一种同时分析金银花及其提取液、提纯物或者其它类似植物草药中的总黄酮与绿原酸含量的方法。
【背景技术】
[0002]绿原酸和黄酮在植物中分布很广，其中黄酮一般以几种结构相似或相近的成分共存于植物中，其总量称为总黄酮含量。绿原酸具有利胆、抗菌、抗病毒、降压、消炎及升高白细胞、止血、缩短血凝和出血时间及兴奋中枢神经系统生理功能，近年来研究发现绿原酸还具有抗HIV病毒和抗肿瘤等作用。黄酮类化合物具有软化血管，降血糖，降低心肌耗氧量，抗心律不齐，降血脂等作用，同时还具有抗衰老和增加机体免疫力功能。因为两者具有独特的生物活性，在医药、食品和日用化工等领域有着越来越广泛的应用前景。
[0003]金银花是我国民间一种常用的中草药，其中同时含有黄酮类化合物和绿原酸等生物活性成分，对金银花及其提取液、提纯物中总黄酮与绿原酸含量的准确分析一直没有得到很好的解决。分析绿原酸和总黄酮含量的方法较多，应用最多的是紫外分光光度法，当用传统的NaNO2-Al (NO3)3-NaOH显色方法来测定金银花及其提取和提纯产品中的黄酮含量时，因为在波长510nm处绿原酸等多酚类物质也有显色红移作用(见附图1)，分析误差很大。用直接法测定总黄酮含量时，一般选择波长368nm处最大吸收峰进行分析，但因为绿原酸在波长368nm处有一定的吸光作用(见附图2)，测定结果明显偏高。而对于绿原酸的测定，传统采用在330nm波长处的直接法测定，从附图2可知在330nm波长处芦丁对照品的吸光值较高，结果使得绿原酸的含量严重偏大。
[0004]综上所述，金银花中同时含有绿原酸和黄酮，由于两者之间互相干扰，使现有的紫外分光光度法的分析结果误差大。
【发明内容】
[0005]本发明提供一种总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法，目的在于解决目前分析误差大，分析过程复杂，两类化合物不能同时检测等问题，实现对黄酮与绿原酸含量进行准确、快捷分析。
[0006]本发明提供的一种总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法，该方法包括下述步骤:
[0007]第I步采用与制作标准曲线相同的方式对待测样品进行氯化钴显色处理；
[0008]第2步测定经氯化钴显色反应后的待测样品溶液分别在256nm、330nm波长处的吸
光度！256、1330 ;
[0009]第3步计算样品溶液中绿原酸在330nm波长处已扣除黄酮干扰的吸光度，以及黄酮在256nm波长处已扣除绿原酸干扰的吸为UIr56，即:
【权利要求】
1.一种总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法，该方法包括下述步骤: 第I步采用与制作标准曲线相同的方式对待测样品进行氯化钴显色处理； 第2步测定经氯化钴显色反应后的待测样品溶液分别在256nm、330nm波长处的吸光度T T.丄256Λ 丄330 ? 第3步计算样品溶液中绿原酸在330nm波长处已扣除黄酮干扰的吸光度，以及黄酮在256nm波长处已扣除绿原酸干扰的吸光度/&，即:
2.根据权利要求1所述的总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法，其特征在于，该方法用于金银花及其提取液，绿原酸固体产品，或者其它类似植物草药中的黄酮与绿原酸含量的测定。
3.根据权利要求1所述的总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法，其特征在于，制作绿原酸标准曲线和芦丁的标准曲线的过程为: 绿原酸标准曲线:精密称取一定量的绿原酸对照品，用蒸馏水溶解并定容，即得到绿原酸对照品溶液；分别精确量取一定量绿原酸对照品溶液和氯化钴溶液，置于容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，即得到一组不同浓度的绿原酸标准溶液；另外以相同体积的氯化钴溶液经乙醇溶液定容的溶液为空白，依次取上述绿原酸标准溶液，分别测定绿原酸不同浓度的溶液在256nm波长和330nm波长处的吸光度；由所得数值确定在同一浓度的溶液中绿原 酸在256nm波长和330nm波长处吸光度的比值关系为
4.根据权利要求1所述的总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法，其特征在于，所述采用的显色体系是浓度为0.05~0.25mol/L的氯化钴水溶液。
5.根据权利要求1所述的总黄酮和绿原酸含量的同时检测方法，其特征在于，A=3.008，B = 0.812。
【文档编号】G01N21/31GK103645149SQ201310672040
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月11日 优先权日:2013年12月11日
【发明者】朱康玲, 陈晶, 王定官, 田乾位, 葛志鹏, 于飞 申请人:华中科技大学