一种金银花绿原酸的制备方法

专利名称：一种金银花绿原酸的制备方法
技术领域：
本发明属于制药技术领域，涉及一种金银花绿原酸的制备方法。
背景技术：
绿原酸(cNorogenic acid)是植物体在有氧呼吸过程中合成的一种苯丙素类物 质，它是许多中草药如金银花、杜仲、茵陈等的主要有效成分之一，也是众多水果蔬菜中的 重要活性成分。金银花的绿原酸含量为1. 81 2. 92%，越冬期老叶绿原酸含量为花的1. 41 倍，叶中绿原酸含量相当于藤的4倍。越冬老叶和修剪枝叶的经济产量指数为金银花干花 的1.5倍。因此，现代仅以花为药用原料及饮料、化妆品原料是自然资源的浪费。绿原酸具 有清除自由基、抗茵消炎、抗病毒、降糖、降脂、保肝利胆等多种功效，尤其近年来发现绿原 酸类物质有抗癌、抗艾滋病的作用，可做为先导设计开发抗癌、抗艾滋病药物。同时，其抗氧 化能力要强于咖啡酸、对经苯酸、阿魏酸、丁香酸等，是良好的抗氧化剂。绿原酸不仅应用于 医药行业上，在日用化工、食品等领域都有广泛的应用。经检索，金银花中绿原酸的提取纯 化方法摘录如下中国专利申请号01144170. 4，金银花中绿原酸的提取纯化方法。该方法的技术方 案是将金银花粗碎成小段，用稀乙醇对金银花进行二次回流提取，浓缩提取物再用絮凝法 初步除杂纯化，最后采用大孔树脂法或酸性乙酸乙酯萃取法纯化精制。中国专利申请号200410035758. 5，从金银花中提取制各绿原酸的工艺。该工艺的 技术方案是金银花加水或乙醇进行三次，每次时间为2. 5 3. 5小时，金银花与水或乙醇 之比为1 5回流提取，过滤，收集滤液并回收溶剂，加乙醇沉淀杂质，过夜，过滤，减压回收 溶剂，加水适量，静置过夜，过滤，滤液上粒度为20 60目的苯乙烯型树脂DM130或丙烯脂 型树脂DlOl大孔树脂柱，用洗脱剂浓缩，收集含有绿原酸的组分，上聚酰胺柱，用洗脱剂水 或乙醇洗脱，收集含有绿原酸的组分，浓缩，用有机溶剂指乙酸乙酯或异戊醇萃取精制，或 用硅胶色谱柱纯化得到绿原酸。中国专利申请号200510020265. 9，金银花绿原酸提取技术。该技术是采用金银花 鲜花、鲜叶、鲜藤为原料，将打浆、醇沉、膜分离工艺与超临界流体CO2萃取联用，提取出活性 物质金银花绿原酸及附产物金银花总黄酮。中国专利申请号200910047915. 7，一种从金银花中提取分离绿原酸的方法。该方 法的技术是通过如下制备步骤实现的(1)醇浸泡将金银花置于醇溶液中浸泡，加热回流 3次，每次1. 3小时，加水，冷藏12小时以上，过滤，减压浓缩；(2)脱脂所得滤液采用弱极 性溶剂脱脂三次，取水层；(3)上大孔树脂富集(2)步所得水层溶液通过大孔树脂，水洗， 收集流出液及水洗液，浓缩，调节PH值1.8 2.21 ;(4)萃取采用中等极性溶剂萃取(3) 步所得，取有机层，浓缩回收溶剂，得到淡黄色蓬松固体物；(5)重结晶。本发明采用醇提 法以提高绿原酸的提取率和转移率，使绿原酸的最终转移率高达84%，所得产品纯度可达 98%以上。中国专利申请号200910116384. 2，金银花中绿原酸的萃取方法。该方法技术要点
4是将粉碎的金银花用石油醚进行动态浸提，提取液经过滤回收石油醚后，浓缩获得金银花 香浸膏；石油醚浸提后的金银花，再以乙酸乙酪进行回流提取，提取液经过滤后回收乙酸乙 酪，浓缩获金银花总黄酮；乙酸乙酪回流提取后的金银花，加水，动态提取，提取液经过滤、 减压、浓缩、醇沉、脱色、纯化、浓缩、干燥，即得金银花绿原酸。中国专利申请号201010196913. 7，从金银花中提取高纯度绿原酸的方法。该方法 技术方案是将金银花物料用低温超音速气流粉碎，得到细胞级金银花微粉；经酶化，超声 波处理，水提过滤，得到绿原酸初液，再经絮凝，脱色、纯化、浓缩干燥，即得高纯度绿原酸。中国专利申请号CN200510105658. X，一种由金银花粗提物制备高纯度绿原酸的方 法。该方法是将金银花粗提物醇沉过滤、逆流萃取、浓缩、配制水相、柱析、收集解吸液，结 晶干燥，得到绿原酸含量50 92%的产品。但是该方法制备的绿原酸纯度较低，最高仅能 达到92%，且层析柱不适合商业化工业生产，实用意义不大。中国专利申请号200510020080. 8，金银花高纯度绿原酸提取工艺。该工艺是(1) 是通过加入NaH-S031收率促进剂和澄清剂，板框压滤，再通过大孔吸附树脂柱上柱，得浓 缩液，喷雾干燥得口服液绿原酸；(2)是通过加入乙醇沉淀，再加水水沉，二次澄清处理得 澄清液，经活性炭处理，减压浓缩，喷雾干燥得注射用金银花提取物；(3)将所述澄清液加 入5-⑶络合反应，再加入环己酮解络、转型得绿原酸浓缩液，真空干燥得含量90%左右的 绿原酸，环己酮免回收，套用于下一批次；(4)是将(3)所述的浓缩液，用乙醇溶解，上硅胶 层析柱，分段解析，用薄层层析，测定，合并相同部分，减压干燥，结晶，得含量> 95 %绿原 酸。虽然该方法所得绿原酸含量事95%。但同样为硅胶柱层析，而且所得纯度在95%左右， 不适合商业化工业生产，实用意义不大。中国专利申请号200910115669. 4，一种绿原酸提取的方法。绿原酸提取工艺流程 为水提-4过柱‘萃取’分相、重结晶。(1)水提对原料金银花(或杜仲叶、杜仲皮)进 行预处理。将原料干燥，粉碎；粉碎后的原料经水提，过滤；(2)过柱将步骤(1)所得滤液 调节pH 1. 5 3，上大孔树脂柱，洗脱，洗脱液浓缩；(3)萃取将调节步骤(2)所得浓缩液 pHl. 5 3，加乙酸乙酪萃取；(4)分相将步骤(3)所得萃取液加入分相剂，混合，收集下层 水相(5)重结晶将步骤(4)所得水相结晶，重结晶。获得绿原酸成品。李萍等用低极性溶剂提取，然后用乙醇提取忍冬属植物叶，得到的浸膏水溶解，然 后上大孔树脂柱，先用0 10%乙醇洗脱，收集0 10%乙醇洗脱液；再用20 40%乙醇 洗脱，收集20 40%乙醇洗脱液。然后取0 10 %乙醇洗脱液，浓缩后，先加入乙醇至含 醇量为45 60%，除去沉淀，上清液浓缩，再加入乙醇至含醇量为75 85%，除去沉淀，取 上清液浓缩，得绿原酸粗品。目前，绿原酸的市售产品多从植物杜仲里边提取，而且所含杂质较多，从金银花中 提取分离绿原酸尚未形成大规模商业化的生产。金银花中绿原酸进行提取的传统工艺有水 煮法、水提醇沉、萃取、大孔树脂吸附等。但是由于绿原酸的不稳定特性，在提取分离过程 中常常伴随着绿原酸的分解，很难得到高含量产品。一些已有技术中去杂纯化过程中因沉 淀量大而导致的过滤困难，大孔树脂法存在的主要问题是，需要时间长，处理原料量底下、 产品纯度低。一根大孔树脂柱，每次处理的浸膏样品量仅为吸附填料的5%，而浸膏中目标 物质的含量为0. 1 10%，甚至更低经过分离后得到的粗产品产量很少，一根装填一吨填 料的大孔树脂柱，一个流程仅能生产数公斤的粗产品。一个流程包括浸膏溶解成约5%水溶液，加到层析住上，需要十数小时；然后水洗把未被吸附的游离物质洗去，又需十数小时； 然后用一定比例的水_溶剂乙醇进行第一次洗脱，除去非有效物质，需要数十小时；之后再 用另一种溶剂体系把有效物质部位洗脱下来，又耗时数十小时。最后用纯溶剂乙醇洗脱柱 子，洗去可溶解物质。若柱子污染程度较轻，乙醇洗后，用水把乙醇替换，即可进行下一次的 分离。若柱子污染严重，醇洗、水洗后，还要进行碱溶液洗涤，然后水洗至中性；再用酸溶液 洗涤，然后再用水洗至中性，再生过程才得以完成。从投溶液上柱，直到组分完全洗下，柱子 再生，整个流程需要4天甚至更长时间。某些实验室的制备方法虽然能获得较高的纯度，却 无法进行规模化工业生产。因此，虽然绿原酸的疗效确切，却一直由于提取分离的技术原因 而无法申报国家一类新药。

发明内容
本发明的目的是克服已有技术中金银花处理量小，去杂纯化过程中因沉淀量大而 导致的过滤困难，工艺流程长，难进行连续操作，绿原酸分离效果不理想，难工业化生产的 技术问题，提供一种金银花绿原酸的制备方法。本发明的技术方案是将水提取金银花提取液采用无机盐水溶液_水溶性有机溶 剂_水难溶性有机溶剂的液相萃取体系，分离过程不经过层析住分离工序，分离均在液相 中进行。从总提取物中分离纯化，浓缩、结晶得到绿原酸产品。本发明是这样实现的金银花绿原酸的制备方法，是采用水提_液液萃取法将金银花有效成分绿原酸 分离纯化方法，将金银花用热水浸提，浓缩水提液，液相萃取，用水溶性有机溶剂与盐溶液 和水溶性复合物按比例组成双水相体系，然后把总提取物浸膏溶解在双水相体系中进行分 配，使之达到浸膏在两相中的平均浓度为30 50%的分配平衡，然后用与两水相不相溶的 萃取剂进行萃取，分出萃取液，先把极性小于绿原酸的杂质去掉，余下双水相再用另一萃取 剂进行萃取，后径脱色、结晶和干燥得到绿原酸产品，其工艺操作过程为1、预处理将原料金银花经除杂，粗破碎或剪段后备用。2、水提将预处理的金银花加入提取设备中，按原料与水1 3的比例加入水，并 加入抗氧化剂，加热保温提取三次，控制温度为60 70°C，保温时间为0. 5 1. 5h，合并提取液。3、浓缩将提取液导入浓缩设备进行减压浓缩，控制温度为< 60°C，真空度为 彡0. 08MPa，浓缩成7. 5 8. 5波美度的浸膏。4、萃取将浓缩的浸膏加入萃取设备中，加入原料金银花的重量100 200倍的乙 醇，并加入无机盐，搅拌，静置0. 5 1. 5h形成两相，得到上相萃取液，加入水难溶和水溶的 两相萃取剂萃取，分离萃取液，下部分溶液加入水溶萃取剂萃取，得到水溶相萃取液。5、脱色将上步萃取液经过活性碳脱色，过滤得到纯化萃取液。6、结晶将上步纯化萃取液加入丙酮结晶，得到结晶绿原酸，并蒸馏过滤液回收有 机溶剂。7、干燥真空干燥，控制温度为60°C以下，真空度为0. 08≥MPa,得到高纯度绿原
酸产品。以上所述的液液萃取法，是复合物辅助的无机盐水溶液_水溶性有机溶剂_水难溶性有机溶剂的三相萃取体系。以上所述的原料金银花，包括金银花干或鲜的花、叶和枝杆中的一种或多种。以上所述的抗氧化剂，包括亚硫酸氢钠和EDTA，使用量为万分之0. 5 2. 0，调节 溶液Ph值为3.2。以上所述的水难溶萃取剂，包括石油醚、乙酸乙酯、丁醇中的一种或多种复合物， 加入量为原料金银花的重量的1 1. 5倍。以上所述的水溶萃取剂，包括乙醇、甲基聚丙二醇，聚乙二醇，聚氧乙烯醇，聚乙烯 吡咯烷酮、羟丙基葡聚糖、甲基纤维素、葡聚糖及其衍生物中的一种或多种复合物，加入量 为原料金银花的重量的0. 2 0. 4%。以上所述的无机盐，为水溶性无机盐，包括硫酸铵、磷酸钾、磷酸氢钾和氯化钠中 的一种或多种复合物，加入量为原料金银花的重量的3. 5 4. 5%。以上所述的搅拌，为离心分相均勻搅拌。以上所述的提取设备、浓缩设备和萃取设备，包括采用不锈钢、搪瓷和铝合金制作 的反应罐、反应釜和反应锅中的一种或多种设备。本发明的特点为本发明的金银花绿原酸的制备方法，是利用聚合物辅助的双水相-有机溶剂三相 萃取方法，选择性地直接富集和分离纯化得到绿原酸初产品，分离过程不经过层析住分离 工序，分离均在液相中进行。经过脱色、浓缩、结晶后得到95%高纯绿原酸。该方法与以往 传统的硅胶柱层析、大孔吸附树脂层析方法相比，具有处理量大，工艺流程短，可进行连续 操作、分离效率高的优点，其生产效率是传统方法的3 10倍，而且为均相体系，易于连续 生产操作。


图1是本发明的工艺流程示意图； 具体实施方案下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。实施例一将经除杂、粗破碎或剪段的原料金银花干花、叶枝杆5重量份加入不锈钢反应罐 中，按原料与水1 3的重量份比例加入去离子水，并加入抗氧化剂亚硫酸氢钠使用量为 总投料量的万分之1. 0，调节ph值为3. 2，加热保温提取三次，控制温度为65 67°C，保 温时间为1.2h，合并提取液。然后将提取液导入不锈钢反应罐进行减压浓缩，控制温度为 (60°C，真空度为> 0. 08MPa，浓缩成8波美度的浸膏。再将浓缩的浸膏加入不锈钢反应釜 中，加入原料金银花的重量份180倍的乙醇，并加入无机盐硫酸铵40重量份，搅拌均勻，静 置1. 5h形成两相，得到上相萃取液，加入水难溶和水溶的两相萃取剂乙酸乙脂-石油醚4 重量份(5 l，v/v)萃取，分离萃取液，下部分溶液加入水溶萃取剂丁醇-乙酸乙脂重量份 0.8份萃取，得到水溶相萃取液。将萃取液经过活性碳脱色，过滤得到纯化萃取液。将纯化 萃取液加入微量丙酮结晶，得到结晶绿原酸，并蒸馏过滤液回收有机溶剂，最后控制温度为 60°C以下，真空度为0. OSMpa以上进行真空干燥，得到高纯度绿原酸产品。
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产品绿原酸得率为0. 5%，产品用高效液相色谱法测定纯度为95. 3%。实施例二 将经除杂、粗破碎或剪段的原料金银干花5重量份加入铝合金反应罐中，按原料 与水1 3的重量份比例加入去离子水，并加入抗氧化剂亚硫酸氢钠为总投料量的万分之 1. 4，调节ph值为3. 2，加热保温提取三次，控制温度为67 69°C，保温时间为1 1. 5h， 合并提取液。然后将提取液导入搪瓷反应釜进行减压浓缩，控制温度为< 60°C，真空度为 ^ 0. 08MPa，浓缩成7. 8波美度的浸膏。再将浓缩的浸膏加入搪瓷反应釜中，加入原料金银 花200重量份的乙醇，甲基聚丙二醇0. 113重量份，并加入无机盐硫酸铵40重量份，搅拌均 勻，静置Ih形成两相，得到上相萃取液，加入水难溶和水溶的两相萃取剂乙酸乙脂_石油醚 4重量份(5 l，v/v)萃取，分离萃取液，下部分溶液加入水溶萃取剂丁醇-乙酸乙脂4重 量份萃取，得到水溶相萃取液。将萃取液经过活性碳脱色，过滤得到纯化萃取液。将纯化 萃取液加入微量丙酮结晶，得到结晶绿原酸，并蒸馏过滤液回收有机溶剂，最后控制温度为 60°C以下，真空度为0. OSMpa以上进行真空干燥，得到高纯度绿原酸产品。产品绿原酸得率为0. 7%，产品用高效液相色谱法测定纯度为95. 1%。
权利要求
1.一种金银花绿原酸的制备方法，其特征在于采用水提-液液萃取法将金银花有效 成分绿原酸分离纯化方法，金银花用热水浸提，水提液浓缩，液相萃取，用水溶性有机溶剂 与盐溶液和水溶性复合物按比例组成双水相体系，然后把总提取物浸膏溶解在双水相体系 中进行分配，使之达到浸膏在两相中的平均浓度为30 50%的分配平衡，再用与两水相不 相溶的萃取剂进行萃取，分出萃取液，先把极性小于绿原酸的杂质去掉，余下双水相再用另 一萃取剂进行萃取，后经脱色、结晶和干燥得到绿原酸产品，其工艺操作过程为(1)预处理将原料金银花经除杂，粗破碎或剪段后备用；(2)水提将预处理的金银花加入提取设备中，按原料与水1 3的比例加入水，并加 入抗氧化剂，加热保温提取三次，控制温度为60 70°C，保温时间为0. 5 1. 5h，合并提取 液；(3)浓缩将提取液导入浓缩设备进行减压浓缩，控制温度为<60°C，真空度为 彡0. 08MPa,浓缩成7. 5 8. 5波美度的浸膏；(4)萃取将浓缩的浸膏加入萃取设备中，加入原料金银花的重量100 200倍的乙 醇，并加入无机盐，搅拌，静置0. 5 1. 5h形成两相，得到上相萃取液，加入水难溶和水溶的 两相萃取剂萃取，分离萃取液，下部分溶液加入水溶萃取剂萃取，得到水溶相萃取液；(5)脱色将上步萃取液经过活性碳脱色，过滤得到纯化萃取液；(6)结晶将上步纯化萃取液加入微量丙酮结晶，得到结晶绿原酸，并蒸馏过滤液回收 有机溶剂；(7)干燥真空干燥，控制温度为60°C，真空度为0.08MPa，得到高纯度绿原酸产品。
2.根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的液液萃取法， 是复合物辅助的无机盐水溶液_水溶性有机溶剂_水难溶性有机溶剂的三相萃取体系。
3.根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的原料金银花， 包括金银花干或鲜的花、叶和枝杆中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的抗氧化剂，包 括亚硫酸氢钠和EDTA，使用量为万分之0. 5 2. 0，调节溶液ph值为3. 2。
5.根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的水难溶萃 取剂，包括石油醚、乙酸乙酯、丁醇中的一种或多种复合物，加入量为原料金银花的重量的 1 1. 5倍。
6.根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的水溶萃取 剂，包括乙醇、甲基聚丙二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基葡聚糖、甲基 纤维素、葡聚糖及其衍生物中的一种或多种复合物，加入量为原料金银花的重量的0. 2 0. 4%。
7.根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的无机盐，为水 溶性无机盐，包括硫酸铵、磷酸钾、磷酸氢钾和氯化钠中的一种或多种复合物，加入量为原 料金银花的重量的3. 5 4. 5%。
8.根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的搅拌，为离心 分相均勻搅拌。
9.根据权利要求1所述的金银花绿原酸的制备方法，其特征在于所述的提取设备、浓 缩设备和萃取设备，包括采用不锈钢、搪瓷和铝合金制作的反应罐、反应釜和反应锅中的一种或多种设备。
全文摘要
本发明公开了一种金银花绿原酸的制备方法，是采用金银花及其枝叶为原料，水提后用水溶性有机溶剂与盐溶液和水溶性复合物按比例组成双水相体系，然后把总提取物浸膏溶解在双水相体系中进行分配，使之达到浸膏在两相中的平均浓度为30～50％的分配平衡，再用与两水相不相溶的萃取剂进行萃取，分出萃取液，先把极性小于绿原酸的杂质去掉，余下双水相再用另一萃取剂进行萃取的三相萃取方法，选择性地直接富集和分离纯化得到绿原酸初产品，后经过脱色、结晶和干燥得到质量分数为95％绿原酸产品。本发明减化了生产工艺，重复性较好，生产的绿原酸质量分数高，无污染物排放，适合工业化生产。
文档编号C07C69/732GK102001947SQ20101057711
公开日2011年4月6日 申请日期2010年12月8日 优先权日2010年12月8日
发明者关健敏, 罗亚东 申请人:广西金宏昕生物科技有限公司