专利名称：总黄酮含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种测定物质含量的方法，特别是一种测定柚或与柚总黄酮成份相同的物质中总黄酮含量的方法。
本发明可由以下方式来实现(1)先将干燥后的柚子或其提取物溶解，配制成待测液，然后用标准纯度99.9％以上柚皮苷作对照品，配制成梯度的标准溶液，在283nm波长下，分别测定该标准溶液的吸光值，根据吸光值与浓度之间的对应关系建立标准曲线；(2)将待测液在283nm波长下测吸光值，根据所得吸光值，由标准曲线查得该待测液浓度，该浓度值即为待测液总黄酮含量，然后根据稀释倍数换算出柚子或其提取物总黄酮含量。溶解柚子和提取物以及配制柚皮苷标准溶液所用的溶剂为甲醇或无水乙醇。
本发明具有以下优点1、检测结果准确、针对性强。
本发明专门针对柚或其提取物中总黄酮含量的测定，283±1nm波长处的吸收，为
结构在紫外的最大吸收处，而柚中所含黄酮均具有该结构，因此283nm处的吸光值，为多种黄酮的总吸光值，测定结果比较准确。以柚粉(批号为2002-04-09)为例，利用HPLC法(中华人民共和国药典一部<2000版>化橘红项下提供)检测柚皮苷含量为10％，以芦丁为对照品，360nm为检测波长，测得其总黄酮含量为1％左右，以柚皮苷为对照品，Al3+络合法测得总黄酮含量为7％，本发明测得总黄酮含量为11％，测定结果见表1。可见本发明较之同类测定方法具有更高原可信度。另外，经加样回收试验表明，该方法加样回收率可达99％，测定结果可靠。
表1批号为2002-04-09柚中黄酮含量测定比较
2、操作简便使用本发明步骤少，不需加碱及络合试剂，待测样品预处理后，即可利用紫外分光光度计进行检测，操作方便。
3、稳定性好，易于控制本发明经time-coursre试验表明，其吸光值48小时内无变化，见图2、图3。而采用Al3+络合法测定柚及其提取物时，稳定性极差，其吸光值在24小时内不断变小。
4、重复性好本发明对于同一样品，每次检测结果相对偏差不超过0.5％，见表2。
表2批号为2002-04-09柚粉总黄酮含量四次测定结果比较表
本发明正被申请人使用在原料质量控制，如柚子中总黄酮含量；半成品质量控制，如柚提取物中总黄酮含量；以及成品质量控制，如出厂产品抽样检测总黄酮含量。
图1为本发明柚皮苷紫外扫描图。
图2为本发明柚皮苷对照品TIME COURSE结果图，A为第1d吸光值随时间的变化。
图3为本发明柚皮苷对照品TIME COURSE结果图，B为第2d吸光值随时间的变化。
图4为本发明的标准曲线。
其计算公式为A=C•Vm×100%]]>A—待测物中总黄酮含量C—根据标准曲线，由待测物吸光值查得待测溶液浓度(μg/ml)V—溶解及稀释待测物所用甲醇体积(ml)m—待测物质量(μg)实例一柚中总黄酮含量测定1、将柚子洗净，破碎至粗粉、干燥，随机抽取一定样品。
2、将待测样品110℃干燥至恒重，准确称取1g样品置索氏抽提器中，加沸程60-90℃石油醚80ml，加热回流2-3小时，弃去石油醚，柚渣挥去石油醚。
3、加甲醇80ml，加热回流3小时至提取液无色，放冷过滤，滤液置100ml溶量瓶中，再用少量甲醇洗涤容器，洗液滤入同一容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
4、准确吸取1ml该溶液置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度、摇匀即为待测液。
5、将柚皮苷对照品，由中国药品生物制品检定所提供，110℃干燥至恒重，称取柚皮苷对照品0.003g，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解，并定容，摇匀，作为母液。
6、分别准确吸取对照品溶液0ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、8.0ml、10.0ml于25ml容量瓶中，分别定容到刻度，摇匀，则其浓度分别为0μg/ml、2.4μg/ml、4.8μg/ml、9.6μg/ml、19.2μg/ml、38.4μg/ml、48.0μg/ml。
7、于283nm波长下分别测吸光值为0、0.082、0.165、0.326、0.657、1.313、1.637。
8、以吸光值为纵坐标，浓度为横坐标，建立标准曲线，见图4。
9、将待测液置283nm波长下测吸光值为1.601，由标准曲线得待测液浓度为44ug/ml。
10、由计算公式A=C•Vm×100%,]]>求得柚子干粉中总黄酮含量为11％。
实例二柚提取物总黄酮含量测定1、将柚提取物110℃干燥至恒重，准确称取该样品0.005g，置25ml容量瓶中用甲醇溶解，并定容，摇匀。
2、取1ml至25ml容量瓶中，加甲醇到刻度，得待测液，若待测样品不能完全溶解，可取澄清液。
3、标准曲线制作同实例一。
4、将待测液于283nm波长下测吸光值为0.262，由标准曲线可得其浓度为7.6μg/ml，由计算公式A=C•Vm×100%,]]>求得该提取物总黄酮含95％。
权利要求
1.一种总黄酮含量的测定方法，其特征在于(1)先将干燥后的柚子或其提取物溶解，配制成待测液，然后用标准纯度99.9％以上柚皮苷作对照品，配制成梯度的标准溶液，在283nm波长下，分别测定该标准溶液的吸光值，根据吸光值与浓度之间的对应关系建立标准曲线；(2)将待测液在283nm波长下测吸光值，根据所得吸光值，由标准曲线查得该待测液浓度，该浓度值即为待测液总黄酮含量，然后根据稀释倍数换算出柚子或其提取物总黄酮含量。
2.依权利要求1所述的方法，其特征在于溶解柚子和提取物以及配制柚皮苷标准溶液所用的溶剂为甲醇或无水乙醇。
全文摘要
本发明涉及一种测定柚或与柚总黄酮成份相同的物质中总黄酮含量的方法，(1)先将干燥后的柚子或其提取物溶解，配制成待测液，然后用标准纯度99.9％以上柚皮苷作对照品，配制成梯度的标准溶液，在283nm波长下，分别测定该标准溶液的吸光值，根据吸光值与浓度之间的对应关系建立标准曲线；(2)将待测液在283nm波长下测吸光值，根据所得吸光值，由标准曲线查得该待测液浓度，该浓度值即为待测液总黄酮含量，然后根据稀释倍数换算出柚子或其提取物总黄酮含量。本发明具有检测结果准确、针对性强；操作简便；稳定性好，易于控制；重复性好。本发明正被申请人使用在原料质量控制，如柚子中总黄酮含量；半成品质量控制，如柚提取物中总黄酮含量；以及成品质量控制，如出厂产品抽样检测总黄酮含量。
文档编号G01N21/33GK1442687SQ03114240
公开日2003年9月17日 申请日期2003年4月14日 优先权日2003年4月14日
发明者李江平, 万云鹏, 王建勇, 曾文辉 申请人:广东梅州市梅雁螺旋藻高科技研究所