专利名称：野菊花提取工艺、野菊花总黄酮测定方法
技术领域：
本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及ー种野菊花提取エ艺、野菊花总黄酮测定方法。
背景技术：
野菊花是菊科植物菊花(Chrysanthemum indicum L)的干燥头状花序,是我国常用中药，具有疏风、清热、明目、解毒之功效。主要治疗头痛、眩晕、目赤、心胸烦热、疔疮、肿毒等症。现代药理研究表明，菊花具有治疗冠心病、降低血压、预防高血脂、抗菌、抗病毒、抗炎、抗衰老等多种药理活性。菊花的化学成分比较复杂，其中黄酮类化合物是其主要有效成分。目前研究表明，黄酮类化合物能防治心脑血管系统和呼吸系统疾病，具有抗炎抑菌、降血糖以及增强免疫功能等药理作用。I、野菊花化学成分研究，野菊花的化学成分有黄酮类，包括木犀黄酮甙、刺槐素甙、木犀草素、洋芹素、金和欢素类等。挥发油分为萜类化合物和非萜类化合物。萜类化合物包括单萜、倍半萜、三萜及其含氧衍生物等；非萜类化合物包括樟脑、烯类化合物、酮类化合物、冰片、野菊花内酷、野菊花醇类等。其他成分如绿原酸、野菊花多糖、氨基酸及各种微量元素等。2、野菊花总黄酮的主要药理作用野菊花总黄酮具有抗炎和保肝药理作用，有研究表明250、500mg/kg野菊花总黄酮连续3d灌胃，能明显抑制ニ甲苯诱导的小鼠耳肿胀；168、336mg/kg的野菊花总黄酮连续3d灌胃，能减轻角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀，连续7d给药，还能抑制棉球诱发的肉芽肿；体外还能明显抑制腹腔巨噬细胞分泌前列腺素E2和白三烯B4的水平。84、168、336mg/kg的野菊花总黄酮灌胃给药于关节炎模型大鼠28d，能显著减轻关节的炎性足趾肿胀；能明显抑制大鼠滑膜细胞的増殖反应，诱导其凋亡；研究发现其发挥抗炎作用可能与通过下调关节炎滑膜细胞TRA IL的表达而诱导其凋亡有关；野菊花总黄酮还可以部分恢复关节炎模型大鼠滑膜分泌细胞器的形态，抑制炎性介质白细胞介素1B、肿瘤坏死因子A的分泌而发挥抗炎作用。野菊花总黄酮还可以通过激活caspase-3，诱导佐剂所致的大鼠关节炎模型的滑膜细胞凋亡，抑制其增值而发挥抗炎作用。此外，还能保护四氯化碳所致急性肝损伤，这可能与清除氧自由基、抑制脂质过氧化作用、抑制肿瘤坏死因子A表达有夫。3、野菊花总黄酮的測定与提取エ艺研究目前，对野菊花总黄酮的提取及分离纯化工艺研究报道不多，尚未有深入全面的研究。贾凌云等以本犀草素-7-0-葡萄糖昔为指标，用紫外分光光度法对总黄酮提取方式进行系统研究。结果发现こ醇回流法最好，且用14倍量95%こ醇回流提取SOmin (2次)的方法提取菊花中的总黄酮可以获得较高提取效率。王加文等以杭菊总黄酮含量为考察指标，对提取エ艺和溶媒进行考察，采用正交实验，对其主要影响因素进行研究。结果表明，こ醇回流提取率最高，用20倍量50%こ醇在85°C下回流提取O. 5h (两次)方法提取杭菊总黄酮可以获得较高提取率。伍晓春用超声波提取技术提取菊花中黄酮，在单因素提取基础上，采取正交优化试验，探讨こ醇浓度、料液比、提取温度和提取时间对菊花总黄酮提取エ艺的影响。结果表明，影响菊花黄酮超声提取的主要因素为こ醉浓度，其次为提取时间、提取温度和料液比。最佳提取エ艺条件为こ醇浓度60%，料液比I : 40，提取温度40°C，提取时间50min，测得菊花总黄酮为3.97%。罗显华等以贵州产野菊花为原料，采取沸水提取及こ醇浸提L9(34)正交试验法，确定各方法对野菊花总黄酮的最佳提取エ艺条件。结果发现こ醇提取法的野菊花总黄酮提取量较高，其提取率是沸水提取法的I. 9倍。
发明内容
本发明g在克服上述现有技术中存在的技术问题，提出一种提取率高、測定方法可靠的野菊花提取エ艺、野菊花总黄酮測定方法。本发明采用的技术方案如下野菊花提取エ艺，其特征在于，包括如下步骤①、こ醇提取向野菊花干品粗粉中加入60%こ醇，加热回流，于70°C条件下提取3次，每次提取3h，毎次提取时野菊花干品粗粉与60%こ醇的重量比为10 1，得こ醇提取液；②、第一次浓缩及过滤将こ醇提取液减压浓缩，减压回收こ醇至尽，趁热过滤；③、树脂吸附将こ醇浓缩液在AB-8型大孔吸附树脂中进行吸附，AB-8型大孔吸附树脂与こ醇浓缩液的重量比为7 1，吸附完成后用70%こ醇洗脱，70%こ醇与こ醇浓缩液液的重量比为12 1，再回收こ醇洗脱液；④、第二次浓缩将こ醇洗脱液再次减压浓缩，得浸膏，浸膏的比重为I. I I. 2 ;⑤、喷雾干燥将浸膏进行喷雾干燥，得野菊花提取物。本发明还公开了野菊花总黄酮測定方法，包括如下步骤①、仪器与试剂仪器UV-2450紫外-可见分光光度仪；试剂芦丁对照品、60%こ醇、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、lmol/L氢氧化钠试液；②、溶液制备标准品溶液制备精密称取芦丁对照品10mg，置50mL量瓶中，加こ醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得；工作曲线绘制
精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5与6mL，分别置25mL量瓶中，各加こ醇至6mL，加5%亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液lmL，摇匀，放置6分钟，カロlmol/L氢氧化钠试液10mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度与其对应的浓度计算回归方程；供试品溶液制备精密称取样品30mg，置25mL量瓶中，加こ醇适量，超声波振荡30min，冷却至室温，加こ醇稀释至刻度，摇匀，过滤即得；空白溶液制备以相应溶液作为空白；③、样品测定 精密吸取供试品溶液2mL，置25mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，加こ醇至6mL,加5%亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加lmol/L氢氧化钠试液10mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，在500nm的波长处测定吸光度值；④、结果计算从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。本发明野菊花提取エ艺、野菊花总黄酮測定方法的优点在于①、采取正交试验方法，对野菊花进行こ醇加热回流浸提，与菊花成分不发生反应，且能最大限度溶解野菊花总黄酮成分，获得了最佳的提取エ艺。②、野菊花总黄酮提取率达到6. 23%，总黄酮含量9. 5mg/mL。野菊花的原材料成本低，适合大工业生产，开发菊花黄酮的提取更具实际意义。③、采用大孔树脂具有吸附量大，解吸率大的特点。
具体实施例方式一、提取实施例①、こ醇提取向野菊花干品粗粉中加入60%こ醇(体积百分比，下同)，加热回流，于70°C条件下提取3次，每次提取3h，毎次提取时野菊花干品粗粉与60%こ醇的重量比为10 1，得こ醇提取液；②、第一次浓缩及过滤将こ醇提取液减压浓缩，减压回收こ醇至尽，趁热过滤；③、树脂吸附将こ醇浓缩液在AB-8型大孔吸附树脂中进行吸附，AB-8型大孔吸附树脂与こ醇浓缩液的重量比为7 1，吸附完成后用70%こ醇(体积百分比，下同)洗脱，70%こ醇与こ醇浓缩液液的重量比为12 1，再回收こ醇洗脱液；④、第二次浓缩将こ醇洗脱液再次减压浓缩，得浸膏，浸膏的比重为I. I I. 2 ;⑤、喷雾干燥将浸膏进行喷雾干燥，得野菊花提取物。
ニ、野菊花总黄酮測定方法实施例①、仪器与试剂仪器UV-2450紫外-可见分光光度仪；试剂芦丁对照品、60%こ醇、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、lmol/L氢氧化钠试液；②、溶液制备标准品溶液制备精密称取芦丁对照品10mg，置50mL量瓶中，加こ醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得；
工作曲线绘制精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5与6mL，分别置25mL量瓶中，各加こ醇至6mL，加5%亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液lmL，摇匀，放置6分钟，カロlmol/L氢氧化钠试液10mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度与其对应的浓度计算回归方程；供试品溶液制备精密称取样品30mg，置25mL量瓶中，加こ醇适量，超声波振荡30min，冷却至室温，加こ醇稀释至刻度，摇匀，过滤即得；空白溶液制备以相应溶液作为空白；③、样品测定精密吸取供试品溶液2mL，置25mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，加こ醇至6mL,加5%亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加lmol/L氢氧化钠试液10mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，在500nm的波长处测定吸光度值；④、结果计算从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。三、提取エ艺条件的选择①、こ醇提取エ艺条件的选择取野菊花干品粗粉50g，根据单因素试验结果每次取10倍量的こ醇按表I条件，取L9 (34)正交设计表安排试验提取，提取后合并醇提液过滤，减压回收こ醇至尽，趁热过滤，加等量水并用4%氢氧化钠溶液调pH至6 7，于3 5°C冷藏静置12h过滤，60°C加热后用蒸馏水定容至250mL，得总黄酮提取液。超滤后，按上述总黄酮含量測定方法进行測定。提取率按下式计算(样品总黄酮量/样品量)X 100，具体结果见表I、表2和表3。表I因素和水平
权利要求
1.野菊花提取工艺，其特征在于，包括如下步骤 ①、乙醇提取 向野菊花干品粗粉中加入60%乙醇，加热回流，于70°C条件下提取3次，每次提取3h，每次提取时野菊花干品粗粉与60%乙醇的重量比为10 1，得乙醇提取液； ②、第一次浓缩及过滤 将乙醇提取液减压浓缩，减压回收乙醇至尽，趁热过滤； ③、树脂吸附 将乙醇浓缩液在AB-8型大孔吸附树脂中进行吸附，AB-8型大孔吸附树脂与乙醇浓缩液的重量比为7 1，吸附完成后用70%乙醇洗脱，70%乙醇与乙醇浓缩液液的重量比为12 1，再回收乙醇洗脱液； ④、第二次浓缩 将乙醇洗脱液再次减压浓缩，得浸膏，浸膏的比重为I. I I. 2 ; ⑤、喷雾干燥 将浸膏进行喷雾干燥，得野菊花提取物。
2.野菊花总黄酮测定方法，其特征在于，包括如下步骤 ①、仪器与试剂 仪器UV-2450紫外-可见分光光度仪； 试剂芦丁对照品、60 %乙醇、5 %亚硝酸钠溶液、10 %硝酸铝溶液、lmol/L氢氧化钠试液； ②、溶液制备 标准品溶液制备 精密称取芦丁对照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得； 工作曲线绘制 精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5与6mL，分别置25mL量瓶中，各加乙醇至6mL，加5%亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加lmol/L氢氧化钠试液10mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度与其对应的浓度计算回归方程； 供试品溶液制备 精密称取样品30mg，置25mL量瓶中，加乙醇适量，超声波振荡30min，冷却至室温，加乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤即得； 空白溶液制备 以相应溶液作为空白； ③、样品测定 精密吸取供试品溶液2mL，置25mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，加乙醇至6mL，加5%亚硝酸钠溶液lmL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液lmL，摇匀，放置6分钟，力口lmol/L氢氧化钠试液10mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，放置15分钟，在500nm的波长处测定吸光度值； ④、结果计算 从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。
全文摘要
本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种野菊花提取工艺、野菊花总黄酮测定方法。野菊花提取工艺，依次包括乙醇提取、第一次浓缩及过滤、树脂吸附、第二次浓缩以及喷雾干燥等工序，得野菊花提取物。本发明野菊花提取工艺、野菊花总黄酮测定方法的优点在于采取正交试验方法，对野菊花进行乙醇加热回流浸提，与菊花成分不发生反应，且能最大限度溶解野菊花总黄酮成分，获得了最佳的提取工艺。野菊花总黄酮提取率达到6.23％，总黄酮含量9.5mg/mL。野菊花的原材料成本低，适合大工业生产，开发菊花黄酮的提取更具实际意义。采用大孔树脂具有吸附量大，解吸率大的特点。
文档编号G01N21/31GK102961427SQ20121054895
公开日2013年3月13日 申请日期2012年12月14日 优先权日2012年12月14日
发明者朱林, 李玉玺, 邱玉礼, 王玉中 申请人:安徽老炊食品有限公司