一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法及其抗癌用途
【专利摘要】一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法，包括下述工艺方法：（1）取旋覆花适量，加5-30倍量30-95％的乙醇，回流提取1-3次，每次1-5h，过滤，滤液合并，作为提取液，备用；（2）将步骤（1）所制取的旋覆花提取液，加热浓缩至提取液浓度为0.05-0.5g/ml，调节PH值为1-7，作为上样液；（3）上样液纯化：将步骤2制得的上样液，上HPD300大孔树脂，原药材与树脂用量比为0.1-1.0g/ml，用3-10BV水除杂后，再用3-10BV的10-95%乙醇洗脱，一次纯化后的总黄酮含量≥70%。本发明纯度增加，可减小服用剂量、降低不良反应，同时为开发以旋覆花总黄酮富集物为原料的具有广泛临床使用价值和商业开发价值的抗癌新药和工业生产提供理论和实验依据。
【专利说明】一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法及其抗癌用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中药的制备方法，特别是涉及一种中药材旋覆花总黄酮富集物的制备方法及其在制备抗癌药物中的应用。
【背景技术】
[0002]癌症，又称为恶性肿瘤，是当今世界上第一大严重威胁人类健康的疾病，多种诱发因素都可导致癌症的产生。目前癌症的治疗包括手术切除、化疗、放射线治疗、免疫治疗、单克隆抗体治疗或其他方法治疗，虽然这些手段对癌症的治疗都有一定效果，但是其作用效果有限，且放疗、化疗对正常组织损害也较大，因此癌症的治疗仍然是人类面对的极大考验。中医药无论在抑制或杀伤肿瘤细胞方面还是术后调理，减轻放、化疗不良反应，改善症状和体征，提高生存质量等方面，均发挥了重要的作用，因此近年来中医中药在癌症的治疗方面日益被人们所关注。
[0003]中药旋覆花为2010版《中国药典》收载的中药材，始载于《神农本草经》。《神农本草经》曰:“主结气胁下满，惊悸。除水，去五脏间寒热，补中，下气。”《本草衍义》曰:“旋复花，行痰水，去头目风，亦走散之药也。”《纲目》云:“旋复所治诸病，其功只在行水、下气、通血脉尔。”《药性论》曰:“主肋胁气，下寒热水肿，主治膀胱宿水，去逐大腹，开胃，止呕逆不下食:“从古代各家本草对其性状、产地、用途等方面进行考证与目前习用的旋覆花，即主要为含黄酮类及倍半萜内酯类等物质相符。临床上旋覆花多见于止咳化痰、止呕及治疗胸痞胁痛的复方中，效果显著。而有关其有效成分之一总黄酮富集物的高纯度纯化方法、抗癌活性研究迄今为止尚未见报道。
[0004]旋覆花中黄酮类化合物作为其中主要的活性成分，具有广泛的生物活性，在心血管系统、中枢神经系统、血液系统、免疫系统、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等方面都有较显著的疗效，但其生物活性的研究主要集中在抗氧化活性方面(耿红梅，王云志，张嫡群.治疗阿尔茨海默症的天然药物[J].中国药房，2006,17(13):1019)。旋覆花中除黄酮类化合物，还含有其它类多种化学成分，主要有黄酮类、倍半萜内酯类、萜类、留体及挥发油等成分(赵平，张文治，王凯.旋覆花化学成分研究[J].齐齐哈尔大学学报:自然科学版，2012，28(2):12-14.吴一兵，王云志，查建蓬，等.欧亚旋覆花中三萜和留体化合物的分离和结构鉴定[J].中草药2006，37 (5):666.查建蓬，付炎，吴一兵，等.欧亚旋覆花挥发油的GC-MS分析[J].中药材，2005,38?):466.)。因此药材提取液中含有大量非黄酮类杂质，不利于阐明药效物质组分和作用机制，难以投入到新药的研发中，因此对旋覆花总黄酮纯化方法的研究具有现实意义。根据文献报道，对旋覆花中总黄酮富集纯度未达到90%以上，不利于研究其发挥药效的物质基础、作用机制及其药效组分的解析和表征，很难将其研发成临床新药。本发明对旋覆花中总黄酮的纯化工艺进行研究，并达到了较为理想的高纯度，此纯化方法可使旋覆花中总黄酮富集物纯度达到93%以上，可以有效排除杂质对药效成分的干扰并且为药效物质组分的解析及阐明其作用机制奠定基础。作为传统中药的植物药旋覆花已见于各种止咳化痰、止呕的复方中，疗效显著。本研究通过体外药效实验发现其具有明显的抗肿瘤活性，并呈明显的量效关系，同时纯度增加，可减小服用剂量、降低不良反应，扩大了旋覆花的应用范围，为开发以旋覆花总黄酮富集物为原料的具有广泛临床使用价值和商业开发价值的抗癌新药和工业生产奠定物质基础、提供理论和实验依据。
【发明内容】
[0005]本发明的目的，是提供一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法。
[0006]本发明的另一目的，是提供和证明从旋覆花药材中提取的总黄酮具有抗癌作用，可制备抗癌药物。
[0007]本发明中所指的旋覆花包括旋覆花及欧亚旋覆花的干燥头状花序。
[0008]采用的技术方案是:
一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法，包括下述工艺方法:
(1)取旋覆花适量，加5-30倍量30-95%的乙醇，回流提取1-3次，每次l_5h，过滤，滤液合并，作为提取液，备用；
(2)将步骤(I)所制取的旋覆花提取液，加热浓缩至提取液浓度为0.05-0.5g/ml，用HCl溶液调节pH值为1-7，作为上样液；
(3)上样液纯化:将步骤2制得的上样液，上HPD300大孔树脂，原药材与树脂用量比为
0.1-1.0g/ml，用3-10BV水除杂后，再用3-10BV的10-95%乙醇洗脱，一次纯化后的总黄酮含量> 70%ο
[0009]采用如步骤(3)所述的上样液纯化方法，连续过树脂柱进行三次纯化，总黄酮含量彡 93%。
[0010]上述步骤(I)中加25倍量55%乙醇，回流提取3次，每次提取3h，制成0.lg/ml生药浓度的提取液。
[0011]上述步骤(2)中上样液pH值为3，上样液浓度为0.2g/ml。
[0012]本发明的发明人根据临床需要将旋覆花总黄酮富集物制备为各个剂型而可添加药学上可接受的辅料及载体供临床治疗癌症选择应用。
[0013]具体实施方案:
本发明提供以下技术措施，实施例仅用于说明本发明，并不是限制发明的权利范围。
[0014]旋覆花总黄酮的提取纯化工艺及对肝癌细胞抑制作用的研究
1.旋覆花总黄酮提取工艺研究
1.1单因素水平考察
表I不同醇浓度提取液中总黄酮的含量(%)
乙醇浓度|0 135% 155% 175% |95%
总黄酮含量(％) K.71 \&.61 \7.10 \&.17 \2.15
结果表明，用55%乙醇提取时总黄酮含量较高，因此确定提取溶媒为55%乙醇。
[0015]1.2正交试验设计
选择提取时间、提取次数、溶剂用量三个因素，对主要影响因素各取三个水平，进行L9(34)正交试验考察。以总黄酮含量为考察指标，优选其最佳提取工艺。正交试验1^9(34)因素水平表见表2，正交试验设计表及直观分析结果见表3，方差分析结果见表4。
[0016]表2因素水平表
【权利要求】
1.一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法，其特征在于包括下述工艺方法: (1)取旋覆花适量，加5-30倍量30-95%的乙醇，回流提取1-3次，每次l_5h，过滤，滤液合并，作为提取液，备用； (2)将步骤(I)所制取的旋覆花提取液，加热浓缩至提取液浓度为0.05-0.5g/ml，调节PH值为1-7，用HCl溶液调节pH值为1-7，作为上样液； (3)上样液纯化:将步骤2制得的上样液，上HPD300大孔树脂，原药材与树脂用量比为0.1-1.0g/ml，用3-10BV水除杂后，再用3-10BV的10-95%乙醇洗脱，一次纯化后的总黄酮含量> 70%ο
2.根据权利要求1所述的一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法，其特征是采用如步骤(3)所述的上样液纯化方法，连续过树脂柱进行三次纯化，总黄酮含量> 93%。
3.根据权利要求1所述的一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法，其特征在于步骤(I)中加25倍量55%乙醇，回流提取3次，每次提取3h，制成0.lg/ml生药浓度的提取液。
4.根据权利要求1所述的一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法，其特征在于步骤(2)中上样液PH值为3，上样液浓度为0.2g/ml。
5.根据权利要求1或2所述的一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法，其特征在于从旋覆花药材中提取的总黄酮能抑制癌细胞的增长，应用于癌病的治疗。
6.根据权利要求1或2所述的一种旋覆花药材中总黄酮的制备方法，其特征在于从旋覆花药材中提取的总黄酮加入药学上可接受的辅料或载体能制成不同剂型的治疗癌病的药物。
【文档编号】A61P35/00GK104173402SQ201410397260
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年8月14日 优先权日:2014年8月14日
【发明者】孟宪生, 包永睿, 王帅, 黄一凡 申请人:辽宁中医药大学