专利名称：一种红凤菜总黄酮提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及从中药红凤菜中提取制备总黄酮的方法。
背景技术：
红凤菜(Gynura bicolor DC.)为菊科多年生草本植物，该植物全草有活血、止血、 解毒消肿的功效，用于治疗痛经、血崩、咳血、创伤出血、溃疡久不收口 ；其根有行气活血的 功用，用于治疗产后停瘀腹痛、血崩、疟疾。目前从红凤菜中分离的化学成分主要有黄酮类 等成分，但尚未有针对红凤菜总黄酮的制备工艺方面的报道。
发明内容
本发明提供了一种红凤菜总黄酮提取物的制备方法，该方法包括以下步骤(1)将红凤菜干燥粉碎；(2)用乙醇或甲醇提取，合并提取液，减压浓缩成浸膏；(3)将步骤( 浸膏加水放置冷沉，离心去沉淀，上清液备用；(4)将(3)得到的上清液上大孔吸附树脂，用乙醇梯度洗脱；(5)收集步骤乙醇洗脱液减压浓缩，再上大孔树脂，用乙醇梯度洗脱；(6)步骤(5)乙醇洗脱液浓缩干燥得红凤菜总黄酮提取物。其中步骤O)的提取方法为每千克红凤菜药材，加入8-12L浓度为70% -80%的 乙醇或甲醇，热回流或浸渍或渗漉提取2-4次，热回流提取每次l_3h，浸渍或渗漉提取每次 15天，合并提取液。步骤(3)中加入水量为浸膏重量比8-10倍水。步骤(4)中所述大孔树脂为DlOl型大孔树脂，大孔树脂与步骤(1)中所述红凤菜 的重量比为0. 5-5 1。步骤⑷中洗脱溶剂采用大孔树脂体积比10-15倍的20%乙醇、40%乙醇梯度洗 脱，合并40%乙醇洗脱液。步骤(5)中所述大孔树脂为DlOl型大孔树脂，大孔树脂与步骤(1)中所述红凤菜 的重量比为0. 5-5 1。步骤(5)中洗脱采用大孔树脂体积比10-15倍的20%乙醇、40%乙醇梯度洗脱，合 并40%乙醇洗脱液。本发明优点有以下几点(1)本发明采用醇提取结合大孔树脂富集法对红凤菜中总黄酮进行精制，能够有 效提高总黄酮含量，经紫外分光光度法测得总黄酮含量以芦丁计均高于50%。(2)本发明在红凤菜醇提取后增加了加水冷沉步骤，可以使叶绿素等低极性杂质 沉降滤去，而黄酮类大极性成分留于上清液中，使得溶液中总黄酮含量得到提高。(3)大孔吸附树脂是以苯乙烯和丙酸酯为单体，加入乙烯苯为交联剂，甲苯、二甲 苯为致孔剂，它们相互交联聚合形成了多孔骨架结构。树脂吸附作用是依靠它和被吸附的分子(吸附质)之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作，使有机化合 物根据有吸附力及其分子量大小可以经一定溶剂洗脱分开而达到分离、纯化、除杂、浓缩等 不同目的。红凤菜中除含有黄酮类成分外还含有多糖类，小分子氨基酸等杂质。采用大孔 树脂水-醇梯度洗脱方法，可以使黄酮和杂质得到较好分离，提高成品中黄酮含量。(4)本发明中使用了大孔树脂二次洗脱的方法，红凤菜总黄酮从第一次大孔精制 后含量30%增加到50%，提高了总黄酮含量。
具体实施例方式工艺优选实施例本试验采用以下4种方法制备红凤菜总黄酮提取物，根据紫外分光光度法测定总 黄酮含量，并进行比较A、醇提取法100g红凤菜药材粗粉，分别加药材重量12倍量和10倍量70%乙醇 回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液并浓缩干燥。B、醇提水沉法100g红凤菜药材粗粉，分别加药材重量12倍量和10倍量70%乙 醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液并浓缩成浸膏，浸膏加 入重量比10倍量水溶解，冷沉12小时，离心，上清液浓缩干燥。C、醇提水沉结合大孔树脂精制法IOOg红凤菜药材粗粉，分别加药材重量12倍量 和10倍量70%乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液并浓 缩成浸膏，浸膏加入重量比10倍量水溶解，冷沉12小时，离心，上清液加入50gD101大孔树 脂中，分别以大孔树脂10倍体积20%乙醇、40%乙醇梯度洗脱，收集40%乙醇洗脱液，浓缩干燥。D、醇提水沉结合大孔树脂再精制方法100g红凤菜药材粗粉，分别加药材重量12 倍量和10倍量70%乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液 并浓缩成浸膏，浸膏加入重量比10倍量水溶解，冷沉12小时，离心，上清液加入50gD101大 孔树脂，分别以大孔树脂10倍体积20%乙醇、40%乙醇梯度洗脱，收集40%乙醇洗脱液。 40%乙醇洗脱液浓缩至无醇味，加入50gD101大孔树脂中，分别以大孔树脂10倍体积20% 乙醇、40%乙醇梯度洗脱，收集40%乙醇洗脱液，浓缩干燥。总黄酮的含量测定方法对照品溶液的制备精密称取芦丁标准品5. Omg于25mL容量瓶中，以70%乙醇超 声溶解，定容，得浓度为0. 2mg · mL—1的芦丁标准液。样品溶液的制备精密移取红凤菜总黄酮提取物0. 5g于25mL的容量瓶中，加入 70%乙醇超声使溶解，摇勻即得。样品中总黄酮含量的测定精密移取样品溶液Iml加入0. Imol · L—1 AlCl3 · 6H20 l.OmL，用70%乙醇定容，摇勻，放置15min后于412nm处测定吸光度，根据芦丁标准曲线计
算样品总黄酮含量。结果见表1，方法D醇提水沉结合大孔树脂再精制方法得到的总黄酮含量明显高 于其它三种方法得到的总黄酮含量。表1不同制备方法所得提取物的总黄酮含量
权利要求
1.一种红凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)将红凤菜干燥粉碎；(2)用乙醇或甲醇提取，合并提取液，减压浓缩成浸膏；(3)将步骤( 浸膏加水放置冷沉，离心去沉淀，上清液备用；(4)将C3)得到的上清液上大孔吸附树脂，用乙醇梯度洗脱；(5)收集步骤乙醇洗脱液减压浓缩，再上大孔树脂，用乙醇梯度洗脱；(6)步骤(5)乙醇洗脱液浓缩干燥得红凤菜总黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述的红凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于步骤(3)中 加入水量为浸膏重量比8-10倍水。
3.根据权利要求1所述的红凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于步骤(4) 中所述大孔树脂为DlOl型大孔树脂，大孔树脂与步骤(1)中所述红凤菜的重量比为 0.5-5:1。
4.根据权利要求1所述的红凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于步骤(5) 中所述大孔树脂为DlOl型大孔树脂，大孔树脂与步骤(1)中所述红凤菜的重量比为 0. 5-5 1。
5.根据权利要求1至4任一所述的红凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于步 骤(2)的提取方法为每千克红凤菜药材，加入8-12L浓度为70%-80%的乙醇或甲醇，热回 流或浸渍或渗漉提取2-4次，热回流提取每次l_3h，浸渍或渗漉提取每次15天，合并提取液。
6.根据权利要求要求1至4任一所述的红凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于 步骤中洗脱溶剂采用大孔树脂体积比10-15倍的20%乙醇、40%乙醇梯度洗脱，合并 40%乙醇洗脱液。
7.根据权利要求要求1至4任一所述的红凤菜总黄酮提取物的制备方法，其特征在于 步骤(5)中洗脱溶剂采用大孔树脂体积比10-15倍的20%乙醇、40%乙醇梯度洗脱，合并 40%乙醇洗脱液。
全文摘要
本发明公开了一种红凤菜总黄酮提取物的制备方法，该方法包括以下步骤(1)将红凤菜干燥粉碎；(2)用乙醇或甲醇提取，合并提取液，减压浓缩成浸膏；(3)将步骤(2)得到的浸膏加水放置冷沉，离心去沉淀，上清液备用；(4)将步骤(3)得到的上清液上大孔吸附树脂，用乙醇梯度洗脱；(5)收集步骤(4)乙醇洗脱液减压浓缩，再上大孔树脂，用乙醇梯度洗脱；(6)步骤(5)乙醇洗脱液浓缩干燥得红凤菜总黄酮提取物。
文档编号A61K36/28GK102078357SQ201010611189
公开日2011年6月1日 申请日期2010年12月29日 优先权日2010年12月29日
发明者任冰如, 吕寒, 李维林, 裴咏萍, 赵慧芳, 陈剑 申请人:江苏省中国科学院植物研究所