专利名称：一种亳菊总黄酮的生产方法
技术领域：
本发明公开一种亳菊总黄酮的生产方法。属于制药领域。
背景技术：
菊花是菊科植物菊花Dendranthema morifolium(Ramat.)的干燥头状花序，是我 国常用中药，味甘、苦。归肺、肝经。2010版药典上收录了滁菊，亳菊，贡菊和杭菊，其中亳菊 和滁菊为安徽省道地药材。菊花在我国的栽培历史至少已有1500多年，其食用入药早在 《神农本草经》就有记载“久服利血气、轻身、耐老、延年。”《本草备要》则云“菊花味兼甘 苦，性禀平和，备受四气，饱经霜露，得金水之精，益肺肾二脏”。《牧署闲谈》曰“食菊延龄， 紫者入血分，可药可饵，可酿可枕，仙经重之”。皆说菊花有抗老防衰、滋润肌肤的功效菊花在临床上使用十分广泛，用于多种疾病的治疗。所含化学成分复杂，具有多种 生物活性，有挥发油、黄酮、多糖、绿原酸等。其中黄酮类化合物广泛存在于植物体内，无不 良反应，分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下 功能消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、 活化大脑及其它脏器细胞的功能，既可以开发为天然抗氧化剂，作为老年功能性食品、食品 的添加剂，同时对冠心病、心绞痛、高血压、心血管疾病均具有很好的疗效，极具广阔的开发 前景，在天然药物领域内研究活跃。目前市场上菊花制剂甚少，大多由于生产工艺限制，含杂质较多，服用剂量大，质 量可控性差，直接影响产品质量和临床疗效。随着对菊花的化学成分、提取方法及药理作用 等进行的一系列研究，菊花的开发价值和经济价值将日益体现。为此，本发明用现代科学的理论方法和技术，在现有研究的基础上，选取亳菊中总 黄酮含量为指标，对影响菊花黄酮含量的主要条件进行优化，选出最佳提取工艺，并通过反 复试验，选择了一种最适合纯化和精制的亳菊总黄酮的方法，对其进行了富集纯化，使亳菊 总黄酮含量达到50%以上，从而适合作为中药有效部位，适于进行现代药物制剂的原料药。
发明内容
为实现上述发明目的，本发明提供一种亳菊总黄酮的生产方法。具体通过如下技 术方案实现一种亳菊总黄酮的生产方法，包括如下步骤(1)亳菊花原药材经提取得到粗提取物；(2)步骤(1)所得到的粗提取物经纯化过程制得亳菊总黄酮；其特征在于，步骤O)中所述的纯化是采用大孔树脂纯化，并且所述的大孔树脂 是AB-8型大孔树脂。上述所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤O)中，大孔树脂采 用湿法装柱，吸附容量为 8. 50mg/g, 10. 41mg/g, 12. 30mg/g，7. 95mg/g, 11. 67mg/g ；其中优 选为12. 30mg/g(相当于0. 25g生药/g树脂)。
上述所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤O)中，上样液浓度 为 4. 61mg/ml，l. 54mg/ml，0. 92mg/ml，0. 66mg/ml ；其中优选为 4. 61mg/ml。(相当于 0. Ig 生 药/ml)上述所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤O)中，上样吸附速 率为 lBV/h，2BV/h，;3BV/h，4BV/h，5BV/h，优选为 lBV/h。上述所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤O)中，用水和乙醇 梯度洗脱，具体是先用水洗脱除去杂质，再用浓度为50 90%、优选50 70%乙醇洗脱， 收集乙醇洗脱液。上述所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤O)中，洗脱速率为 lBV/h, 2BV/h, 3BV/h, 4BV/h, 5BV/h,优选为 2BV/h。上述所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于步骤( 所用树脂用如下方法预 处理树脂用95%乙醇浸泡Mh，待树脂充分溶胀后湿法装柱，用95%乙醇在柱上流动冲洗 至流出液与水(1 幻混合无白色混浊现象，再用蒸馏水反复冲洗至无醇味，备用。上述所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于步骤( 用过的树脂用如下方法 再生处理用3% -5%盐酸溶液浸泡树脂2-4小时，以5-7BV同浓度的盐酸溶液冲淋树脂 层，然后用蒸馏水洗至PH值呈中性；再用3% -5%的氢氧化钠溶液浸泡树脂2-4小时，以 5-7BV同浓度的氢氧化钠溶液冲淋树脂层，最后用蒸馏水洗至PH值呈中性。上述所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤(1)中，采用溶剂回 流提取，所述溶剂为水和/或乙醇，优选为70%乙醇。作为本发明最佳实施方式之一，本发明提供了一种所述的亳菊总黄酮的生产方 法，其特征在于(1)取亳菊花，加10倍量70%乙醇，回流提取2次，每次2h，合并提取液，回收乙醇 至无醇味，离心，取上清液，用蒸馏水定容至浓度为4. 61mg/ml (相当于0. Ig生药/ml)，备 用；(2)将步骤⑴所得的溶液上样于AB-8大孔吸附树脂柱，上样液浓度为4.61mg/ ml (相当于0. 25g生药/g树脂)，以lBV/h速率上样吸附，先用IOBV蒸馏水洗脱除去杂质， 再用4BV/h50%乙醇以2BV/h的流速进行洗脱，收集50%乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥， 得到亳菊总黄酮。总黄酮含量的测定(1)对照品溶液的制备精密称取120°C干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇适量，置水 浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇勻，即得0. 2mg/mL芦丁标准品溶液。(2)供试品溶液的制备将正交试验提取所得溶液浓缩定容至IOOmL,精密量取50mL经浓缩后真空干燥至 恒重，计算浸膏得率。另50ml中取适量于25mL容量瓶中，按标准曲线制作方法进行操作、 显色，测定吸光度，计算总黄酮含量。(3)测定波长的选择分别精密量取一定量的对照品溶液与样品溶液，置25mL量瓶中，精密加入5%的 亚硝酸钠溶液lmL，摇勻，放置6min ；加入10%硝酸铝的溶液lmL，振摇，放置6min ；再加入
410%氢氧化钠溶液10mL，振摇并加水至刻度，放置15min。另精密量取蒸馏水ImL置25mL 量瓶中，精密加入5%的亚硝酸钠溶液lmL，摇勻，同上法操作，作为参比溶液。照紫外-可 见分光光度法，于400 600nm波长范围内扫描，结果样品溶液和对照品溶液在510nm处有 均有最大吸收，故选择510nm为测定波长。(4)标准曲线的制备精密量取芦丁对照品溶液0. 0,1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0,6. OmL,分别置于25mL容 量瓶中，加蒸馏水至6mL，加5% (g/v)亚硝酸钠溶液lmL，混勻，放置6min，加10% (g/v) 硝酸铝溶液lmL，摇勻，放置6min，加4% (g/v)氢氧化钠溶液10mL，加水至刻度，摇勻，放 置15min，以第一份作为空白试剂，在510nm处测定各溶液吸光度。以吸光度为纵坐标，质 量为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程为y = 0. 5479x-0. 0107, r = 0.9996，可知在 0. 2-1. 2mg范围呈良好的线性关系。本发明的从亳菊中生产得到亳菊总黄酮的方法，工艺简单，环保，得到的亳菊总黄 酮纯度超过50%，可以作为有效部位，当原料药做成制剂，从而提高亳菊药材的制剂水平和 临床使用。本发明方法还易于工业化，适于大生产。
具体实施例方式以下通过最佳实施例来进一步说明本发明的技术方案，但不构成对本发明权利要 求保护范围的限制。实施例1 最佳提取方法分别选定水提、醇提的各四个因素，每个因素3个水平。取亳菊花5g，按L9(34)正 交表进行试验，以药材中总黄酮提取率为评价指标，筛选最佳提取工艺。水提因素水平安排见表1，正交试验结果表2，方差分析结果见表3，表4。表1水提因素水平表
权利要求
1.一种亳菊总黄酮的生产方法，包括如下步骤(1)亳菊花原药材经提取得到粗提取物；(2)步骤(1)所得到的粗提取物经纯化过程制得亳菊总黄酮；其特征在于，步骤O)中所述的纯化是采用大孔树脂纯化，并且所述的大孔树脂是 AB-8型大孔树脂。
2.根据权利要求1所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤( 中，大孔 树脂采用湿法装柱，吸附容量分别为 8. 50mg/g, 10. 41mg/g, 12. 30mg/g, 7. 95mg/g, 11. 67mg/ g，优选为 12. 30mg/g。
3.根据权利要求1所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤( 中，上样 液浓度为 4. 61mg/ml, 1. 54mg/ml，0. 92mg/ml，0. 66mg/ml，优选为 4. 61mg/ml。
4.根据权利要求1所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤( 中，上样 吸附速率为 lBV/h，2BV/h，;3BV/h，4BV/h，5BV/h，优选为 lBV/h。
5.根据权利要求1所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤( 中，用水 和乙醇梯度洗脱，具体是先用水洗脱除去杂质，再用浓度为50 90%、优选50 70%乙醇 洗脱，收集乙醇洗脱液。
6.根据权利要求1所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤( 中，洗脱 速率为 lBV/h，2BV/h，;3BV/h，4BV/h，5BV/h，优选为 2BV/h。
7.根据权利要求1-6所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于步骤( 所用树脂用 如下方法预处理树脂用95%乙醇浸泡Mh，待树脂充分溶胀后湿法装柱，用95%乙醇在柱 上流动冲洗至流出液与水(1 幻混合无白色混浊现象，再用蒸馏水反复冲洗至无醇味，备 用。
8.根据权利要求1-6所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于步骤( 用过的树脂 用如下方法再生处理用3% -5%盐酸溶液浸泡树脂2-4小时，以5-7BV同浓度的盐酸溶液 冲淋树脂层，然后用蒸馏水洗至PH值呈中性；再用3% -5%的氢氧化钠溶液浸泡树脂2-4 小时，以5-7BV同浓度的氢氧化钠溶液冲淋树脂层，最后用蒸馏水洗至PH值呈中性。
9.根据权利要求1-6所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于所述的步骤(1)中，采 用溶剂回流提取，所述溶剂为水和/或乙醇，优选为70%乙醇。
10.根据权利要求1-6所述的亳菊总黄酮的生产方法，其特征在于(1)取亳菊花，加10倍量70%乙醇，回流提取2次，每次2h，合并提取液，回收乙醇至无 醇味，离心，取上清液，用蒸馏水定容。浓度为4.61mg/ml(相当于0. Ig生药/ml)，备用；(2)将步骤(1)所得的溶液上样于AB-8大孔吸附树脂柱，上样液浓度为4.61mg/ml(相 当于0. 25g生药/g树脂)，以lBV/h速率上样吸附，先用IOBV蒸馏水洗脱除去杂质，再用 4BV/h50%乙醇以2BV/h的流速进行洗脱，收集50%乙醇洗脱液，回收溶剂，减压干燥，得到 亳菊总黄酮。
全文摘要
本发明涉及一种亳菊总黄酮的生产方法，包括亳菊花原药材经提取得到粗提取物和粗提取物经纯化过程制得亳菊总黄酮，其特征在于所述的纯化是采用大孔树脂纯化，并且所述的大孔树脂是AB-8型大孔树脂。本发明方法制得的亳菊总黄酮含量高于50％，达到75％，纯度较高，产率等较好，并且工艺环保、易于工业大生产。
文档编号A61P9/10GK102100721SQ201110027770
公开日2011年6月22日 申请日期2011年1月26日 优先权日2011年1月26日
发明者吴德玲, 李素亮, 金传山, 陈慧芳 申请人:安徽中医学院, 安徽协和成药业饮片有限公司