一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，步骤为：在40-60℃条件下，将表面活性剂、辛酸/癸酸甘油三酯和助乳化剂充分混溶得到空白自微乳；向空白自微乳中加入白藜芦醇磷脂复合物，搅拌均匀得到白藜芦醇自微乳；向白藜芦醇自微乳中加入羟丙基甲基纤维素，搅拌均匀得到混悬状白藜芦醇自微乳；通过加入微晶纤维素使白藜芦醇自微乳变为固态颗粒状粉末，即得到产品。通过上述方式，本发明的白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，该方法简单且制备过程中无需特殊的高能耗生产设备，得到的产品能有效提高白藜芦醇水中的溶解度，提高了胃分散及肠道脂解的影响，生物有效利用度高。
【专利说明】一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物制药领域，特别是涉及一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制 备方法。
【背景技术】
[0002] 白藜芦醇是含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，又称为芪三酚。广泛存在于葡 萄、松树、虎杖、决明子和花生等天然植物或果实当中，主要来源于葡萄(红葡萄酒)、虎杖、 花生、桑椹等植物。到目前为止至少已在21科、31属的72种植物中被发现。白藜芦醇是许 多植物受到生物或非生物胁迫(如真菌感染、紫外照射等）时产生的一种植物抗毒素。白藜 芦醇除了能提高植物的抗病性，研究发现它还有有益于人类健康的多种生物学活性及药理 作用，深受生物医学界的重视。到目前为止，发现白藜芦醇是肿瘤的化学预防剂，也是对降 低血小板聚集，预防和治疗动脉粥样硬化、心脑血管疾病的化学预防剂，同时证实白藜芦醇 具有对对抗癌症的有益作用。
[0003] 基于白藜芦醇的功能，它在保健品、化妆品及药物中有着巨大的潜在应用价值。 2002年-2013年的国际保健品市场分析结果表明，作为新一代的"维生素"，白藜芦醇系列 产品的应用会越来越广泛，同时这个市场的销售额将达到数二十亿美元。在欧美已批准上 市的白藜芦醇高端药物及保健品制剂产品已近百余种，膳食补充剂白藜芦醇应用较为广泛 的一个领域。
[0004] 白藜芦醇在药物方面的应用：白藜芦醇已广泛用于治疗高血压、高血脂及动脉硬 化等心血管疾病。有研究机构认为未来十年内，白藜芦醇制剂将形成巨大的产业，销售额将 达到5-8亿美元。据统计，现在已批准上市的白藜芦醇高端药物制剂近1000种，全球使用 者约2亿人，并且以平均每年5000万人的速度增长。国际巨头葛兰素史克正在测试部分白 藜芦醇新药，预期能为人类的长寿与一些疾病的治疗带来福音。
[0005] 但是由于受其自身理化性质的限制，白藜芦醇在水与油中的溶解度均不好，使其 生物有效利用度极低。因此如何提高白藜芦醇的生物有效利用度成为国内外专家的研究 焦点之一，目前，国内外研究了采用多种载体技术用来提高为提高白藜芦醇口服生物利用 度： 1、白藜芦醇纳米粒：有研究人员基于白藜芦醇一定的亲油性而制备了 mPEG-PCL纳米 粒，获得了较高的负载，而且通过细胞实验发现与不包裹的白藜芦醇相比，该纳米粒可以以 更低的剂量获得更高的细胞毒性。并且通过细胞内活性氧水平的检测，最终认为白藜芦醇 的细胞毒性可能与其调控细胞内的活性氧的产生有关。基于以上特性，白藜芦醇纳米粒可 以用于一些癌症的治疗。
[0006] 2、白藜芦醇脂质体：帕金森综合症的发病机理之一就是氧化应激导致黑质多巴胺 神经元细胞的损伤，研究人员制备了白藜芦醇的脂质体，并研究它对于大鼠黑质细胞的作 用。实验中采用向大鼠纹状体进行6羟基多巴胺显微注射，然后进行持续两周的白藜芦醇 及白藜芦醇的脂质体灌胃，然后对大鼠的行为、酪氨酸羟化酶阳性细胞、凋亡细胞、活性氧 及总抗氧化水平等的检测。实验中发现，白藜芦醇处理后，大鼠非正常转动行为、黑质细胞 的损伤和凋亡、活性氧的水平显著改善，总抗氧化水平显著提高。
[0007] 3、白藜芦醇生物素酯：研究人员以DCC为催化剂，采用低温化学催化法获得了白 藜芦醇生物素酯，该方法无需对白藜芦醇的羟基进行保护，并且是在相对温和及相对简洁 的方法下进行操作，简单易行。
[0008] 4、白藜芦醇自微乳：Bolko，K等使用油相Capmul MCM、蓖麻油及乳化剂RH40 或RH60等制备了白藜芦醇的自微乳，并大幅提升了白藜芦醇的溶解度。有研究人员使用 Miglyol 812、Montanox 80和乙醇等制备得到100 nm左右的白藜芦醇自微乳，并且使用牛 动脉内皮细胞研究白藜芦醇的摄取，以及白藜芦醇对过氧化氢导致的细胞死亡的保护。实 验中的对照是白藜芦醇的乙醇溶液。实验中发现，浓度为25 ii M的白藜芦醇处理牛动脉内 皮细胞180 min后，自微乳制剂显著增加了膜及细胞内的白藜芦醇的浓度，并且与乙醇溶液 相比，自微乳制剂可以显著保护细胞应对过氧化氢导致的损伤。
[0009] 自微乳给药系统（self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS)是 由油、表面活性剂和助表面活性剂或少量水组成的均一透明溶液，可作为疏水性、难吸收或 易水解药物的载体。磷脂复合物（Phytosome)是药物和磷脂分子通过电荷迁移作用而形 成的较为稳定的化合物或络合物。磷脂复合物作为一种新型的药物制剂，能显著地改善药 物的脂溶性、增强药物吸收、提高药物生物利用度、减少药物不良反应等。磷脂复合物虽然 能改善药物的脂溶性，但是其在水分散效果不佳，尤其是浓度高时形成混悬液。美国专利 US2004116386A1公开了一种白藜芦醇磷脂复合物及制备方法，中国专利CN101095664公开 了一种白藜芦醇类化合物的磷脂复合物及其制备方法和应用，这两专利所报道的白藜芦醇 复合物改变了白藜芦醇的脂溶性，使白藜芦醇由难溶物转变为亲脂性物质，从而提高白藜 芦醇在油中的溶解度。
【发明内容】
[0010] 本发明主要解决的技术问题是提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备 方法，该方法得到的产品能有效提高生物利用度。
[0011] 为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种白藜芦醇磷脂复 合物自微乳颗粒的制备方法，所述制备方法包括的步骤为： (1) 在40-60°C条件下，将100重量份的表面活性剂、5?30重量份的辛酸/癸酸甘油三 酯和1~40重量份的助乳化剂充分混溶得到空白自微乳； (2) 在40-60°C条件下，称取3重量份的白藜芦醇磷脂复合物，加入12~57重量份的所 述空白自微乳中，搅拌均匀得到透明状白藜芦醇自微乳； (3) 在40-60°C条件下，称取1重量份的羟丙基甲基纤维素，加入9?49重量份的所述白 藜芦醇自微乳中，搅拌混匀得到混悬状白藜芦醇自微乳； (4) 在40-60°C条件下，称取1-3重量份的微晶纤维素，加入1重量份的所述混悬状白 藜芦醇自微乳中，充分混合均匀、研磨、粉碎整粒及过筛，得到白藜芦醇磷脂复合物自微乳 颗粒。
[0012] 在本发明一个较佳实施例中，步骤（1)中所述表面活性剂为吐温80、聚氧乙烯 醚（35)蓖麻油、聚氧乙烯醚（40)氢化蓖麻油、聚乙二醇-8-辛酸/癸酸甘油酯、聚乙二 醇-15-羟基硬脂酸酯中的一种或多种。
[0013] 在本发明一个较佳实施例中，步骤（1)中所述助乳化剂为甘油、1，2_丙二醇或聚 乙二醇400中的一种或多种。
[0014] 在本发明一个较佳实施例中，步骤（2)中所述白藜芦醇磷脂复合物中白藜芦醇与 卵磷脂的重量比为
[0015] 本发明的有益效果是：本发明的白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，该 方法简单且制备过程中无需特殊的高能耗生产设备，得到的白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗 粒能有效提高白藜芦醇水中的溶解度，提高了胃分散及肠道脂解的影响，生物有效利用度 商。
【具体实施方式】
[0016] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施 例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范 围。
[0017] 实施例一： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1) 在40°C条件下，分别称取IOOg的吐温80、5g的辛酸/癸酸甘油三酯及1重量份的 甘油充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在40°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:2,加入12g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均匀 的透明状白藜芦醇自微乳； (3) 在40°C条件下，称取Ig羟丙基甲基纤维素，加入9g步骤（2)得到的白藜芦醇自微 乳中，充分搅拌混匀形成混悬状白藜芦醇自微乳； (4) 在40°C条件下，称取Ig微晶纤维素，加入Ig步骤（3)得到的混悬状白藜芦醇自微 乳中，充分混合均匀、研钵研磨、粉碎整粒，过200目筛，得到白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗 粒。
[0018] 实施例二： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1) 在50°C条件下，分别称取IOOg聚氧乙烯醚（35)蓖麻油、15g辛酸/癸酸甘油三酯 及20g PEG400充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在50°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:4,加入30g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均匀 的透明状白藜芦醇自微乳； (3) 在50°C条件下，称取Ig羟丙基甲基纤维素，加入20g步骤（2)得到的白藜芦醇自 微乳中，充分搅拌混匀形成混悬状白藜芦醇自微乳； (4) 在50°C条件下，称取1.5g微晶纤维素，加入Ig步骤（3)得到的混悬状白藜芦醇自 微乳中，充分混合均匀、研钵研磨、粉碎整粒及过300目筛，得到白藜芦醇磷脂复合物自微 乳颗粒。
[0019] 实施例三： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1) 在60°C条件下，分别称取IOOg聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯、30g辛酸/癸酸甘油 三酯及40g 1，2-丙二醇充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在60°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:3,加入57g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均匀 的透明状白藜芦醇自微乳； (3) 在60°C条件下，称取Ig羟丙基甲基纤维素，加入49g步骤（2)得到的白藜芦醇自 微乳中，充分搅拌混匀形成混悬状白藜芦醇自微乳； (4) 在60°C条件下，称取3g微晶纤维素，加入Ig步骤（3)得到的混悬状白藜芦醇自微 乳中，充分混合均匀、研磨、粉碎整粒及过400目筛，得到白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒。
[0020] 实施例四： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1) 在50°C条件下，分别称取IOOg聚乙二醇-8-辛酸/癸酸甘油酯、30g辛酸/癸酸甘 油三酯及20gl，2-丙二醇充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在50°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:1. 5,加入30g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均 匀的透明状白藜芦醇自微乳； (3) 在50°C条件下，称取Ig羟丙基甲基纤维素，加入19g步骤（2)得到的白藜芦醇自 微乳中，充分搅拌混匀形成混悬状白藜芦醇自微乳； (4) 在50°C条件下，称取1.5g微晶纤维素，加入Ig步骤（3)得到的混悬状白藜芦醇自 微乳中，充分混合均匀、研磨、粉碎整粒及过400目筛，得到白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗 粒。
[0021] 实施例五： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1) 在55°C条件下，分别称取IOOg聚氧乙烯醚（35)蓖麻油、25g辛酸/癸酸甘油三酯 及30g 1，2-丙二醇充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在55°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:2,加入17g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均匀 的透明状白藜芦醇自微乳； (3) 在55°C条件下，称取Ig羟丙基甲基纤维素，加入19g步骤（2)得到的白藜芦醇自 微乳中，充分搅拌混匀形成混悬状白藜芦醇自微乳； (4) 在55°C条件下，称取1.5g微晶纤维素，加入Ig步骤（3)得到的混悬状白藜芦醇自 微乳中，充分混合均匀、研钵研磨、粉碎整粒及过400目筛，得到白藜芦醇磷脂复合物自微 乳颗粒。
[0022] 实施例六： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1)在55°C条件下，分别称取IOOg吐温80、25g辛酸/癸酸甘油三酯及30g助1，2-丙 二醇充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在55°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:2,加入17g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均匀 的透明状白藜芦醇自微乳； (3) 在55°C条件下，称取Ig羟丙基甲基纤维素，加入19g步骤（2)得到的白藜芦醇自 微乳中，充分搅拌混匀形成混悬状白藜芦醇自微乳； (4) 在55°C条件下，称取1.5g微晶纤维素，加入Ig步骤（3)得到的混悬状白藜芦醇自 微乳中，充分混合均匀、研钵研磨、粉碎整粒及过400目筛，得到白藜芦醇磷脂复合物自微 乳颗粒。
[0023] 实施例七： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1) 在55°C条件下，分别称取IOOg聚乙二醇-8-辛酸/癸酸甘油酯、25g辛酸/癸酸甘 油三酯及30g 1，2-丙二醇充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在55°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:2,加入17g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均匀 的透明状白藜芦醇自微乳； (3) 在55°C条件下，称取Ig羟丙基甲基纤维素，加入19g步骤（2)得到的白藜芦醇自 微乳中，充分搅拌混匀形成混悬状白藜芦醇自微乳； (4) 在55°C条件下，称取1.5g微晶纤维素，加入Ig步骤（3)得到的混悬状白藜芦醇自 微乳中，充分混合均匀、研钵研磨、粉碎整粒及过400目筛，得到白藜芦醇磷脂复合物自微 乳颗粒。
[0024] 实施例八： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1) 在55°C条件下，分别称取IOOg聚氧乙烯醚（35)蓖麻油、25g辛酸/癸酸甘油三酯 及30g 1，2-丙二醇充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在55°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:2,加入17g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均匀 的透明状白藜芦醇自微乳。
[0025] 实施例九： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1) 在55°C条件下，分别称取IOOg吐温80、25g辛酸/癸酸甘油三酯及30g 1，2-丙二 醇充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在55°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:2,加入17g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均匀 的透明状白藜芦醇自微乳。
[0026] 实施例十： 提供一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，包括步骤为： (1) 在55°C条件下，分别称取IOOg聚乙二醇-8-辛酸/癸酸甘油酯、25g辛酸/癸酸甘 油三酯及30g 1，2-丙二醇充分混溶形成透明均匀的空白自微乳； (2) 在55°C条件下，称取3g白藜芦醇磷脂复合物，其中所述白藜芦醇磷脂复合物中白 藜芦醇与卵磷脂重量比为1:2,加入17g步骤（1)得到的空白自微乳中，搅拌均匀形成均匀 的透明状白藜芦醇自微乳。
[0027]实施例^^一 ： 将实施例5、6、7、8、9、10六个样品进行口服生物利用率测定，取30只颈静脉插管SD大 鼠（250 ± 20g)，随机分成6组，每组5只，禁食过夜，按照50 mg/kg剂量灌胃给药，于0 min、 30 min、60 min、120 min、240 min、360 min、480 min、720 min 及 1440 min 时刻分别各取 500 iiL血样，3500 rpm离心10 min，取200 iiL血浆于1.5ml EP管中，-20°C保存，待检 测分析用。采用RP-HPLC法检测血浆中白藜芦醇含量，取上清100 ii L与900 ii L的色谱 级甲醇进行混合，在涡旋振荡器上振荡30 s，使之混合均匀，然后10000 rpm离心10 min， 将上层溶液过0.22 微孔滤膜，20 yL进样，将样品峰面积代入标准曲线，计算实时血药 浓度，通过PKsolver药代动力学软件计算其药时曲线下面积AUC (9_t)。
【权利要求】
1. 一种白藜芦醇磷脂复合物自微乳颗粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括 的步骤为： (1) 在40-60°C条件下，将100重量份的表面活性剂、5?30重量份的辛酸/癸酸甘油三 酯和1~40重量份的助乳化剂充分混溶得到空白自微乳； (2) 在40-60°C条件下，称取3重量份的白藜芦醇磷脂复合物，加入12~57重量份的所 述空白自微乳中，搅拌均匀得到透明状白藜芦醇自微乳； (3) 在40-60°C条件下，称取1重量份的羟丙基甲基纤维素，加入9?49重量份的所述白 藜芦醇自微乳中，搅拌混匀得到混悬状白藜芦醇自微乳； (4) 在40-60°C条件下，称取1-3重量份的微晶纤维素，加入1重量份的所述混悬状白 藜芦醇自微乳中，充分混合均匀、研磨、粉碎整粒及过筛，得到白藜芦醇磷脂复合物自微乳 颗粒。
2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)中所述表面活性剂为吐温 80、聚氧乙烯醚（35)蓖麻油、聚氧乙烯醚（40)氢化蓖麻油、聚乙二醇-8-辛酸/癸酸甘油 酯、聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯中的一种或多种。
3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)中所述助乳化剂为甘油、1， 2_丙二醇或聚乙二醇400中的一种或多种。
4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)中所述白藜芦醇磷脂复合物 中白藜芦醇与卵磷脂的重量比为1:1~1:4。
【文档编号】A61K47/24GK104382888SQ201410616779
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月6日 优先权日:2014年11月6日
【发明者】周华锋, 段明星, 徐之伟, 严泽民, 刘廷强, 孙春华 申请人:江苏隆力奇生物科技股份有限公司, 清华大学