富氢水对免疫性卵巢早衰的保护作用的制作方法

本发明涉及用富氢水治疗及预防卵巢早衰的方法，属于生物与新医药领域。

背景技术：

活性氧作为氧化应激的主要产物，可影响卵母细胞、胚胎本身及其所处的微环境。需氧代谢可激发活性氧产生，即促氧化剂，而限制活性氧产生的便是抗氧化剂，此二者一旦失衡便将导致氧化应激的发生。在生殖道中，活性氧发挥着生理和病理两方面的作用，调节女性生殖系统生理功能的重要信号，参与卵母细胞成熟、卵泡产生、子宫内膜周期性改变、类固醇激素合成、维持黄体功能、黄体溶解等生理过程，然而，过多的活性氧却将对生殖系统的各个功能产生一定的损害，比如卵子的损伤或畸形甚至不孕症。此外，自由基的产生对于女性生殖系统具有双刃剑的作用，特别是对于排卵过程。

不孕症被定义为：在无任何保护措施下性交一年而未能受孕。尽管不孕症发病率逐年增加，但是由于病因尚不完全清楚，即使应用试管婴儿技术也不能解决全部问题。目前已证实，氧化应激对于自然生育与辅助生殖均将造成影响，过度的脂质过氧化便是女性不孕的病生理因素之一。既往研究显示，特发性不孕患者的抗氧化能力明显降低，而氧化应激诱导的脂质过氧化损伤却明显增加。

在哺乳动物的卵巢中，颗粒细胞与卵母细胞的发育紧密相关。在原始卵泡与卵泡形成中，颗粒细胞不仅局限于卵丘，还是形成卵泡壁的主要成分。颗粒细胞可以分泌性类固醇激素、生长因子、细胞因子等等，这对卵泡的生长与维持均至关重要。此外，颗粒细胞还可以调节最终排卵前卵泡的选择。氧化应激可以诱导颗粒细胞的凋亡。T-2毒素可以通过氧化应激途径剂量依赖性地抑制大鼠卵巢中颗粒细胞的生长，诱导其凋亡，这主要是通过活性氧介导的线粒体途径完成的。此外，低温贮存诱导的氧化应激也可以通过激活caspase-8、caspase-9、caspase-3依赖性的凋亡途径介导颗粒细胞的凋亡。此外，氧化应激还对卵泡的发展方向起着决定性的作用。有研究显示，活性氧不但可以抑制窦状卵泡的生长，还可启动窦状卵泡的凋亡。

氢气是一种安全有效的抗氧化剂，它可以穿透生物膜，弥散进入胞浆、线粒体与细胞核中，通过选择性消除相应部位的羟基自由基（即最具有细胞毒性的自由基），保护细胞与组织免受氧化应激的损伤。除此之外，氢气还具有抗凋亡作用。氢对于多种疾病均可以产生治疗性抗氧化的作用，但对于免疫性卵巢早衰的保护作用尚未有研究报道。

本研究发现，通过饮用富氢水的方法可以抵抗小鼠免疫性卵巢早衰的发生，改善小鼠卵巢组织中过氧化氢酶的浓度，提高卵巢早衰小鼠卵巢的功能与反应性，降低小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的比例，从而对卵巢早衰小鼠的生殖系统功能起到一定的保护性作用。由于人类的生殖系统与小鼠的生殖系统有一定的相似性，同时富氢水又及其安全无副作用，因此，富氢水可作为药物提高不孕女性卵巢的功能，同时可以预防性的保护卵巢组织出现早衰。

技术实现要素：

本发明是一种通过饮用富氢水对抗免疫性卵巢早衰的方法。试验中采用雌性BALB/c小鼠，将其分成4组。模型组与模氢组小鼠制备免疫性卵巢早衰模型；空白组与氢水组小鼠不制备免疫性卵巢早衰模型；空白组与模型组小鼠持续饮用普通水；氢水组与模氢组小鼠持续饮用富氢水。每天对小鼠进行阴道涂片观察动情周期的改变，直至模型组小鼠出现动情周期的紊乱（自造模第一天起35天左右），将全部小鼠处死进行相关指标的检测。研究结果表明，持续饮用富氢水可以改善提高内过氧化氢酶（一种抗氧化酶）的浓度，提高血清中抗苗勒管激素AMH的浓度，降低卵巢颗粒细胞的凋亡指数，提高卵巢组织抗凋亡物质Bcl-2的表达，从而提高Bcl-2与Bax的比值，从而起到抑制凋亡的作用。

附图说明

图1为不同组小鼠卵巢组织中过氧化氢酶的含量。图中可见，氢水组小鼠卵巢组织过氧化氢酶含量高于空白组小鼠，但无显著性差异。模氢组小鼠卵巢组织过氧化氢酶含量高于模型组小鼠，但无显著性差异。

图2为不同组小鼠血清中抗苗勒管激素的浓度。图中可见，模型组小鼠血清抗苗勒管激素的浓度明显低于空白组小鼠，且具有显著性差异。模氢组小鼠血清抗苗勒管激素浓度明显高于模型组小鼠，且具有显著性差异。氢水组小鼠血清抗苗勒管激素浓度明显高于模型组小鼠，且具有非常显著性差异。模氢组小鼠血清抗苗勒管激素浓度略低于空白组小鼠，无显著性差异。

图3为不同组小鼠卵巢颗粒细胞的凋亡指数。图中可见，模型组小鼠卵巢颗粒细胞凋亡指数明显高于空白组、氢水组、模氢组，且均具有极其显著性差异。模氢组小鼠卵巢颗粒细胞凋亡指数高于氢水组，且具有显著性差异。模氢组小鼠卵巢颗粒细胞凋亡指数略高于空白组，无显著性差异。

图4为不同组小鼠卵巢组织Bcl-2的表达情况。图中可见，模氢组小鼠卵巢组织中Bcl-2水平明显高于模型组小鼠。氢水组小鼠卵巢组织中Bcl-2水平明显高于空白组小鼠。

图5为不同组小鼠卵巢组织Bax的表达情况。图中可见，模型组小鼠卵巢组织中Bax水平略高于其他三组小鼠，但差异并不明显。空白、氢水、模氢三组小鼠卵巢组织中Bax水平未见明显差异。

星号与井号表示两组之间存在显著性差异，“*”或“#”代表p＜0.05，“**”或“##”代表p＜0.01；“***”或“###”代表p＜0.001。

具体实施方式

让小鼠长期饮用富氢水，自由饮水。