本发明涉及用于治疗不育的组合物和药物产品。辅助生殖技术(assistedreproductivetechnology，art)方法，如体外受精(invitrofertilisation，ivf)，是公知的。这些art技术通常需要控制的卵巢刺激(controlledovarianstimulation，cos)的步骤，其中刺激一组卵泡至完全成熟。标准的cos方案包括施用促性腺激素，如单独的促卵泡激素(folliclestimulatinghormone，fsh)或与促黄体激素(促黄体激素，lh)活性组合，以刺激卵泡发育，通常在刺激之前和/或过程中伴有gnrh类似物给药，以防止不成熟的lh波动。通常用于cos的药物组合物包括重组促卵泡激素(rfsh)，尿液来源的fsh，重组fsh+lh制剂，尿液来源的尿促性素[人绝经促性腺激素(humanmenopausalgonadotrophin，hmg)]和高度纯化的人绝经促性腺激素(highlypurifiedhumanmenopausalgonadotrophin，hp-hmg)。ivf可能与卵巢过度刺激综合征(ovarianhyperstimulationsyndrome，ohss)的危险相关，在严重病例中其可能是有生命危险的。如上文所示，标准的cos流程通常包括施用fsh。fsh的剂量通常取决于多种因素，包括年龄、任意之前对fsh刺激的反应、fsh的基础水平、囊状卵泡计数和最近的抗副中肾管激素(anti-müllerianhormone，amh)。临床医师将预测响应给定的剂量的卵巢多卵泡发育，以及循环17-β-雌二醇的升高。如果对给定剂量的响应(卵巢多卵泡发育，循环17-β-雌二醇的升高)是充分的或与预测的，这表示正常的卵巢功能，其也称为正常的卵巢储备。对fsh刺激响应不良的患者产生很少的卵泡，并且因此他们在刺激过程中的17-β-雌二醇水平缓慢升高并且达到相对低的水平。这些患者称为“低响应者”，并且任意认为他们具有减少的卵巢储备。相信低响应涉及一些因素，包括增长的年龄、盆腔粘连(pelvicadhesions)、卵巢疾病和免疫学因素。预测妇女对控制的卵巢刺激(cos)的响应潜力的能管理可能允许开发个性化的cos流程。例如，这可能降低预测对刺激具有过度响应的妇女中ohss的风险，提高归类为差响应者的妇女的妊娠结果，和/或在特定患者中引起减少的fsh剂量(和对其的暴露)并且因此减少的治疗成本(并且增加的治疗安全性)。现在将血清抗副中肾管激素(amh)浓度确定为卵巢储备的可靠标记。在cos过程中，降低的amh水平与减少的对促性腺激素的卵巢响应相关。此外，高水平的amh是过度卵巢响应的良好预测剂，和ohss风险的指示剂。在正在进行art的35岁以下的妇女中的初步研究中，利用consort剂量给药算法(结合基础fsh，bmi，年龄和afc)预测用于处在发展ohss的风险中的妇女的cos的最佳fsh起始剂量(olivennes等人，2009)。使剂量个性化确实导致充分的卵母细胞产量和良好的妊娠率。然而，由于不充分的响应，在低剂量组(75iufsh)中存在高流产率，并且在显著比例的患者中确实发生ohss。如上文所示，标准cos流程可能包括施用fsh。fsh是由前叶垂体腺天然分泌的，并且功能是支持卵泡发育和排卵。fsh包含92个氨基酸的α亚基(这也是糖蛋白激素lh和cg共有的)和fsh特有的111个氨基酸的β亚基，所述β亚基赋予该激素生物学特异性(pierce和parsons，1981)。每个亚基通过添加复杂的碳水化合物残基而进行翻译后修饰。两个亚基携带2个用于n-连接的聚糖连接的位点，α亚基在氨基酸52和78，β亚基在氨基酸残基7和24(rathnam和saxena，1975，saxena和rathnam，1976)。因此，fsh约有30质量％被糖基化(dias和vanroey.2001.fox等人2001)。从绝经后人尿中纯化的fsh已经在不育症治疗中使用了多年；在天然生殖中促进排卵，并且提供用于辅助生殖技术非卵母细胞。目前核准用于卵巢刺激的重组fsh(rfsh)产品，诸如促卵泡激素α(gonal-f，merckserono/emdserono)和促卵泡激素β(puregon/follistim，msd/schering-plough)，是来源于中国仓鼠卵巢(cho)细胞系。当前，还没有来源于人细胞系的rfsh产品可以商购得到。存在大量与fsh制备相关的异质性，其涉及存在的多种异构体的数量之间的差异。个体fsh异构体表现出相同的氨基酸序列，但是在它们进行翻译后修饰的程度上不同；具体的异构体由碳水化合物分支结构的异质性和唾液酸(末端糖)掺入的不同量来表征，二者似乎影响具体的异构体的生物活性。天然fsh的糖基化是高度复杂的。天然来源的垂体fsh中的聚糖可能包含宽泛的结构，其可能包括单-、二-、三-和四-触角聚糖的组合(pierce和parsons，1981.ryan等人，1987.baenziger和green，1988)。所述聚糖可能携带进一步的修饰：核心岩藻糖基化，平分型葡糖胺，以乙酰乳糖胺延伸的链，部分或完全的唾液酸化，具有α2，3和α2，6连接的唾液酸化，和置换半乳糖的硫酸化半乳糖胺(dalpathado等人，2006)。此外，在单个糖基化位点处聚糖结构的分布存在差异。在来源于给体血清和来源于绝经后妇女的尿液的fsh中已经发现了相当的聚糖复杂性水平(wide等人，2007)。重组fsh产物的糖基化反映在宿主细胞系中存在的糖基转移酶的范围。商购的rfsh产品来源于工程改造的中国仓鼠卵巢细胞(cho细胞)。cho细胞来源的rfsh中聚糖修饰的范围比在天然产品中发现的那些聚糖修饰的范围更加有限。cho细胞来源的rfsh中减少的聚糖异质性的实例包括缺少平分型葡糖胺和减少含量的核心岩藻糖基化和乙酰乳糖胺延伸(hard等人，1990)。另外，cho细胞仅能够利用α2，3连接添加唾液酸(kagawa等人，1988，takeuchi等人，1988，svensson等人，1990)；cho细胞来源的rfsh仅包含α2，3-连接的唾液酸，不包含α2，6-连接的唾液酸。因此，cho细胞来源的fsh与天然产生的fsh(例如人垂体/血清/尿液fsh)不同，天然产生的fsh包含具有α2，3和α2，6-连接的唾液酸的混合物的聚糖(前者占多数)。因此，利用cho系统表达的重组蛋白在它们的末端唾液酸连接形式上与它们的天然对应体不同。这是在生产用于药物应用的生物制品中重要的考虑，原因在于碳水化合物结构部分可能有助于分子的药理学属性。本申请人已经开发了人源的重组fsh，其是国际专利申请号pct/gb2009/000978(公布为wo2009/127826a)的主题。通过改造人细胞系，使其表达rfsh和α2，3唾液酸转移酶，而制备具有α2，3和α2，6-连接的唾液酸二者的混合物的重组fsh。表达的产物是高度酸性的，并且携带α2，3-和α2，6-连接的唾液酸二者的混合物；后者由内源性唾液酸转移酶活性提供。发现唾液酸连接的形式，α2，3-或α2，6-，可能对fsh的生物学清除具有显著的影响。与在常规cho细胞中表达的rfsh相比，具有α2，3和α2，6-连接的唾液酸二者的混合物的重组fsh具有两个优点：第一，由于两种唾液酸转移酶合并的活性，该物质的唾液酸化程度更高；第二，该物质更接近天然fsh。与cho细胞来源的重组产品(其仅具有α2，3连接的唾液酸(kagawa等人，1988，takeuchi等人，1988，svensson等人，1990)并且具有减少的唾液酸含量(ulloa-aguirre等人1995.，andersen等人2004))相比，这可能是生物学更合适的。最近，已经提议促卵泡激素受体或fsh受体(fshr)可能与减少的卵巢储备相关或参与减少的卵巢储备。fsh受体是一种与fsh相互作用的跨膜受体。fsh是与腺苷酸环化酶连接的g-蛋白偶联的7跨膜受体，具有大的n端配体结合结构域和富含丝氨酸和苏氨酸残基的c端细胞质尾(作为推定的磷酸化位点)。其激活是fsh发挥技术功能所需要的。已经假设fsh受体中的突变可能导致减少的卵巢储备。除了突变之外，还发现了fsh受体变体(fsh受体多态性)。两种这样的多态性位于fsh受体外显子10的位置307(ala/thr)和位置680(asn/ser)(图4)。这些是位置307的变体ala或thr以及位置680的asn或ser。这些多态性导致关于位置680的三种截然不同的fsh受体基因型：asn/asn，asn/ser和ser/ser[参见simoni等人，journalofclinicalendocrinologyandmetabolism，vol84，no.2，751-755(1999)，falconer等人，actaobstetgynecolscand2005：84：806-811(2005)，和loutradis等人，journalofassistedreproductionandgenetics，vol.23，no.4，(2006年4月)]。本申请人已经发现，与具有低amh和在fsh受体的位置680的变体asn/asn或变体asn/ser的患者相比，鉴定为具有低amh[amh水平＜15pmol/l，其通常伴有低响应]以及在fsh受体的位置680具有变体ser/ser的患者具有更长久的fsh治疗持续时间。因此，对于具有低amh[amh水平＜15pmol/l，(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l，例如5.0pmol/l至14.9pmol/l)]以及在fsh受体的位置680具有变体ser/ser的患者，增加的起始fsh剂量可能是避免更长久的fsh治疗持续时间的备选方案。这允许对鉴定具有特定的amh水平以及fshr的特定多态性的特定患者定制fsh的剂量。对具有低amh[amh水平＜15pmol/l，(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l，例如5.0pmol/l至14.9pmol/l)]以及在fsh受体的位置680具有变体ser/ser的患者施用较高的起始fsh剂量是有利的，原因在于其可以提供提高的成功可能性(关于妊娠和/或婴儿安全出生)和更好的成功预见性。如果患者具有在理想的治疗窗口发生的充分的响应(预测的卵巢多卵泡发育，循环17-β-雌二醇的升高)，则更可能成功。如果响应是在该治疗窗口的中心，即，不是在窗口的太早的时间也不是太晚的时间，则成功进一步提高。在具有低amh和在fsh受体的位置680的变体ser/ser的患者中治疗持续时间的减少(通过将剂量增加至高于12μg)可以使响应趋向于治疗窗口的中心，具有提高的成功可能性。按照本发明，在第一方面，提供用于治疗不育的组合物(例如，药物组合物)，所述组合物包含9-24μg促卵泡激素(fsh)，其中所述组合物用于(例如，每日)施用给(在治疗前)鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体ser/ser的患者。所述组合物可以用于(例如，每日)施用给鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体ser/ser并且(在治疗前)鉴定(例如，选择)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者。所述组合物可以包含9-24μgfsh，例如10-18μgfsh，例如12-16μgfsh，例如12-15μgfsh。所述组合物可以包含＞12μgfsh，例如12.3-24μgfsh，例如12.33-24μgfsh，例如12.67-24μgfsh，例如13-24μgfsh，例如13-16μgfsh，例如13-15μgfsh。所述组合物(例如药物组合物)可以包含上文、此处和权利要求书中定义的人源rfsh的量的每日剂量或与其等价的每日剂量。所述组合物(例如药物组合物)可以用于在治疗的第一天开始(每日)施用fsh并且持续六至十六天，例如七至十六天，例如8-16天，例如8-13天。不育的治疗可以包括鉴定(例如确定，例如测定)患者的fsh受体的位置680处的变体的步骤；和向(鉴定)在fsh受体的位置680具有变体ser/ser的患者施用剂量的步骤。不育的治疗可以包括鉴定(例如确定，例如测定)患者的血清amh水平，并向(鉴定)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者施用剂量的步骤。fsh可以是重组fsh。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh，其中总唾液酸化的1-99％是α2，6-唾液酸化，并且总唾液酸化的99％-1％是α2，3-唾液酸化。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh，其中总唾液酸化的1-50％是α2，6-唾液酸化，并且总唾液酸化的50％-99％是α2，3-唾液酸化。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh，其中总唾液酸化的5-40％是α2，6-唾液酸化，并且总唾液酸化的60％-95％是α2，3-唾液酸化。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。按照本发明，在另一方面，提供包含促卵泡激素(fsh)的组合物(例如，药物组合物)，其用于治疗具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)并且在fsh受体的位置680具有变体ser/ser的患者中的不育，其中所述组合物以9至24μg重组fsh/天或与其等价的剂量使用；并且其中所述不育的治疗包括鉴定(例如确定)患者的血清amh水平的步骤；鉴定在患者fsh受体的位置680的变体的步骤；和向(鉴定)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)和fsh受体的位置680处的变体ser/ser的患者施用所述组合物的步骤。所述组合物可以包含9-24μgfsh，例如10-18μgfsh，例如12-16μgfsh，例如12-15μgfsh。所述组合物可以包含＞12μgfsh，例如12.3-24μgfsh，例如12.33-24μgfsh，例如12.67-24μgfsh，例如13-24μgfsh，例如13-16μgfsh，例如13-15μgfsh。组合物(例如药物组合物)可以用于治疗具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)并且在fsh受体的位置680具有变体ser/ser的患者中的不育[其中，所述不育的治疗包括鉴定(例如确定)患者的血清amh水平的步骤；鉴定患者fsh受体的位置680处的变体的步骤；和向(鉴定)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)且在fsh受体的位置680的变体ser/ser的患者施用剂量的步骤]。fsh可以是重组fsh。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh，其中总唾液酸化的1-99％是α2，6-唾液酸化并且总唾液酸化的99％-1％是α2，3-唾液酸化。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh，其中总唾液酸化的1-50％是α2，6-唾液酸化，并且总唾液酸化的50％-99％是α2，3-唾液酸化。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh，其中总唾液酸化的5-40％是α2，6-唾液酸化，并且总唾液酸化的60％-95％是α2，3-唾液酸化。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。所述剂量提供有效的响应同时最小化ohss风险。上述剂量可以用于在患者(受试者)的第一刺激流程中的不育的治疗。应该理解，对于进一步的刺激周期，可以按照第一周期中的实际卵巢响应调节剂量。rfsh可以作为单一同种型或多种同种型的混合物存在。申请人已经设计了“个性化的”cos流程，其中基于患者具体的amh水平和fshr单核苷酸多态性，使用特定的重组fsh剂量对他们进行治疗，由此增加对刺激充分响应的可能性(例如，在具有低响应可能性的患者中)，和/或降低ohss风险或其他副作用。血清amh水平可以通过本领域已知的方法确定(例如测量)。例如，使用amhgen-ii酶联免疫吸附测定(一种试剂盒(beckmancoulter，inc.，webster，texas))测量血清amh水平。该测定可以检测大于0.57pmol/l的amh浓度，最低定量限度是1.1pmol/l。可以使用其他测定。此处，血清amh值通常以pmol/l为单位引用。这可以利用转化等式1ng/mlamh＝7.1pmol/lamh转化为ng/ml。因此，所述组合物可以用于(例如每日)施用给鉴定(例如选择)使用beckmann-coultergen-ii酶联免疫吸附测定检测具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)或通过不同的方法测定的相当的amh水平的患者。此处术语“患者”和“受试者”可互换使用。所述组合物(例如药物组合物)优选地包含上文、此处和权利要求书中定义的人源rfsh的量的每日剂量或与其等价的每日剂量。(每日)剂量可以是初始剂量(即，其可以在治疗过程中减少、增加或维持)。鉴定在fsh受体的位置680处具有变体ser/ser的患者可以通过本领域公知的方式鉴定，例如，通过在经本领域公知的方法提取基因组dna后鉴定fsh受体的位置680处的等位基因变体[例如，通过用于从血液提取基因组dna的试剂盒，然后dna测序，如在例如gromoll等人，methods，21，83-97(2000)，simoni等人，journalofclinicalendocrinologyandmetabolism，vol84，no.2，751-755(1999)，falconer等人，actaobstetgynecolscand2005：84：806-811(2005)中以及其中的参考文献中所述，或dna提取，然后单链构象多态性(sscp，之后凝胶电泳等)，或通过pcr和rflp法，诸如loutradis等人，journalofassistedreproductionandgenetics，vol.23，no.4，2006年4月中所述]而进行。因此，所述组合物可以用于(例如每日)施用给鉴定(例如选择)通过提取基因组dna(例如，从血液)以及随后通过pcr和rflp法分析(诸如在loutradis等人，journalofassistedreproductionandgenetics，vol.23，no.4，2006年4月中所述)或相当的方法检测在fsh受体的位置680处具有变体ser/ser的患者。组合物(例如药物组合物)可以用于在治疗的第一天开始(每日)施用fsh并且持续六至十六天，例如七至十六天，例如8-16天，例如8-13天。组合物(例如药物组合物)可以用于在施用(例如，在施用开始后，例如在每日施用开始后)gnrh激动剂(例如醋酸那法瑞林喷鼻液(synarel)，醋酸亮丙瑞林(lupron)，达必佳(decapeptyl))后12-16天，例如13-15天，例如14天施用。组合物(例如药物组合物)可以用于与gnrh激动剂一起施用。组合物(例如药物组合物)可以用于在gnrh拮抗剂(例如加尼瑞克(ganirelix)，西曲瑞克(cetrorelix))施用之前施用，例如，在gnrh拮抗剂施用之前五天或六天施用。组合物(例如药物组合物)可以与gnrh拮抗剂一起施用。组合物(例如药物组合物)可以用于在治疗的第六天施用的gnrh拮抗剂(例如加尼瑞克，西曲瑞克)一起施用。优选地，组合物(例如药物组合物)用于在高(排卵)剂量的hcg(例如4,000-11,000iuhcg，例如5,000iuhcg，10,000iuhcg等；或150-350微克的重组hcg，例如250微克的重组hcg)施用之前使用，以诱导最终的卵泡成熟。应该理解，组合物可以用于以大于(或小于)每日的频率剂量给药，在该情形中，相关的剂量等价于本文指定的(每日)剂量。本文中，术语“治疗不育”包括通过控制的卵巢刺激(cos)或包括控制的卵巢刺激(cos)的步骤或阶段的方法(例如，子宫内人工受精(intrauterineinsemination，iui)，体外受精(ivf)，或细胞质内精子注射(intracytoplasmicsperminjection，icsi))治疗不育。术语“治疗不育”包括通过排卵诱导(ovulationinduction，oi)或通过包括排卵诱导(oi)的步骤或阶段的方法治疗不育。术语“治疗不育”包括治疗患有输卵管性不育或不能解释的不育的受试者中的不育，包括治疗患有子宫内膜异位症(endometriosis)(例如，i期或ii期子宫内膜异位症)的受试者和/或患有无排卵性不孕(anovulatoryinfertility)(例如，whoii型无排卵性不孕)的受试者和/或具有有男性性征不育(malefactorinfertility)的配偶的受试者中的不育。所述组合物可以用于(用在)患有子宫内膜异位症的受试者的不育的治疗(和/或用于控制的卵巢刺激)，例如，患有美国生殖医学学会(theamericansocietyforreproductivemedicine，asrm)针对子宫内膜异位症的各个阶段的分类系统(iv期最严重；i期严重性最小)[americansocietyforreproductivemedicine.revisedamericansocietyforreproductivemedicineclassificationofendometriosis：1996.fertilsteril1997；67,817821.]定义为i期或ii期子宫内膜异位症的受试者的不育的治疗。组合物可以用于(用在)在早期卵泡期具有1至16iu/l，例如1至12iu/l的正常血清fsh水平的受试者中的不育的治疗(和/或用于控制的卵巢刺激)。组合物可以用于(用在)鉴定为年龄为18-42岁，例如25-37岁的受试者中的不育的治疗(和/或用于控制的卵巢刺激)。产品可以用于(用在)鉴定具有bmi＞15且bmi＜38kg/m2的受试者中的不育的治疗(和/或用于控制的卵巢刺激)，例如，鉴定具有bmi＞18且bmi＜25kg/m2的受试者，例如，具有bmi＞20且bmi＜25kg/m2的受试者中的不育的治疗。rfsh可以具有6mol/mol以上的唾液酸含量[以唾液酸摩尔数与蛋白摩尔数的比例表示]，例如6mol/mol-15mol/mol，例如8mol/mol-14mol/mol，例如9mol/mol-14mol/mol，例如10mol/mol-14mol/mol，例如11mol/mol-14mol/mol，例如12mol/mol-14mol/mol，例如12mol/mol-13mol/mol的唾液酸含量。rfsh可以在人细胞系中产生或表达。按照本发明使用的fsh(rfsh)可以具有作为总唾液酸化的1％-99％的α2，3-唾液酸化。rfsh可以具有作为总唾液酸化的10％以上的α2，3-唾液酸化。例如，总唾液酸化的20，30，40，50，60，70，80或90％以上可以是α2，3-唾液酸化。rfsh可以优选地包含量为总唾液酸化的50-95％，例如，为总唾液酸化的50-70％，例如，为总唾液酸化的60-69％，例如，为总唾液酸化的63-67％，例如约为65％的α2，3-唾液酸化。按照本发明使用的fsh(rfsh)可以具有作为总唾液酸化的1％-99％的α2，6-唾液酸化。本发明的rfsh(或rfsh制剂)可以具有作为总唾液酸化的5％以上，例如5％-99％，例如5％-50％的α2，6-唾液酸化。rfsh可以具有作为总唾液酸化的50％以下的α2，6-唾液酸化。rfsh可以优选地包含量为总唾液酸化的5-50％，例如为总唾液酸化的10-50％，例如为总唾液酸化的31-38％，例如约为35％的α2，6-唾液酸化。唾液酸化意指在fsh碳水化合物结构上存在的唾液酸残基的量。α2，3-唾液酸化意指在2，3位置(这是本领域公知的)的唾液酸化，并且α2，6唾液酸化在2，6位置(这也是本领域公知的)。“总唾液酸化的％可以是α2，3唾液酸化”是指fsh中存在的在2，3位置处被唾液酸化的唾液酸残基总数的％。术语“总唾液酸化的％是α2，6-唾液酸化”是指fsh中存在的在2，6位置处被唾液酸化的唾液酸残基总数的％。rfsh可以具有质量为6％以上的(例如6％-15％，例如7％-13％，例如8％-12％，例如11％-15％，例如12％-14％)唾液酸含量(每个fsh分子唾液酸化的量)(基于蛋白质量，而不是基于蛋白加碳水化合物的质量)。rfsh可以在人细胞系中产生或表达，例如，在per.c6细胞系，ht1080细胞系等中产生或表达。由于例如保留唾液酸化的细胞生长培养基的操作和控制可以不如已知的方法重要，这可以简化(并使其更有效)制备方法。由于与已知的rfsh产品的制备相比，产生很少的碱性rfsh，所述方法也可能是更有效的；产生酸性更强的rfsh，并且碱性fsh的分离/去除难度较小。rfsh可以在细胞系、衍生的细胞系或该量的细胞系中产生或表达。在人细胞系(例如细胞系，ht1080细胞系等)中产生或表达的rfsh包含由[所述细胞系的]内源性唾液酸转移酶活性提供的α2，6-连接的唾液酸(α2，6唾液酸化)，并且将包含一些由内源性唾液酸转移酶活性提供的α2，3-连接的唾液酸s(α2，3唾液酸化)。细胞系可以用α2，3-唾液酸转移酶修饰。细胞系可以用α2，6-唾液酸转移酶修饰。备选地，或另外地，rfsh可以包含由[所述细胞系的]内源性唾液酸转移酶活性提供的α2，6-连接的唾液酸(α2，6唾液酸化)。本文中，术语“人源的重组fsh”意指在人细胞系中产生或表达的重组fsh(例如通过改造人细胞系制备的重组fsh)。rfsh可以是由α2，3-和/或α2，6-唾液酸转移酶制备。在一个实例中，rfsh使用α2，3-唾液酸转移酶制备。rfsh可以包含由内源性唾液酸转移酶活性提供的α2，6-连接的唾液酸(α2，6唾液酸化)。组合物可以是药物组合物。所述药物组合物用于治疗不育。不育的治疗可以包括辅助生殖技术(art)，排卵诱导或子宫内人工受精(iui)。例如，所述药物组合物可以用在使用已知的fsh制剂的医学适应证中。所述产品或组合物可以配制成公知的用于任何药物给药途径的组合物，例如，口服、直肠、肠胃外、经皮(例如，贴片技术)、静脉内、肌肉内、皮下、intrasusternal、阴道内、腹膜内、局部(粉剂、药膏或滴剂)或作为口腔或鼻喷雾剂。典型的组合物包含药用载体，诸如水溶液，无毒赋形剂，包括盐和防腐剂，缓冲剂等，特别如在remington’spharmaceuticalsciences(雷明顿药典)第十五版(mattpublishingcompany，1975)，第1405-1412页和1461-87页以及thenationalformularyxiv(国家处方典xiv)第十四版(americanpharmaceuticalassociation，1975)中所述。适当的水性和非水性药物载体、稀释剂、溶剂或赋形剂(vehicles)包括水，乙醇，多元醇(如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)，羧甲基纤维素和它们适当的混合物，植物油(如橄榄油)，和可注射的有机酯，如油酸乙酯。本发明的组合物还可以包含添加剂，诸如，但不限于，防腐剂，湿润剂，乳化剂，表面活性剂和分散剂。可以包含抗细菌剂和抗真菌剂以防止微生物生长，并且包括，例如，间-甲酚，苯甲醇，对羟苯甲酸酯，氯丁醇，苯酚，山梨酸等。如果包含防腐剂，则优选苯甲醇、苯酚和/或间-甲酚；然而，防腐剂并不限于这些实例。此外，可以理想地包含等渗剂，如糖、氯化钠等。所述产品或组合物可以进一步包含含有药用碱金属阳离子的盐，所述盐选自由na+-或k+-盐或它们的组合组成的组。优选地，所述盐是na+-盐，例如nacl或na2so4。优选地，所述产品或组合物包含重组fsh和下述中的一种或多种：聚山梨酯20、l-甲硫氨酸、苯酚、硫酸二钠和磷酸钠缓冲液。在一些情形中，为了实施延长的作用，需要减缓fsh(以及其他活性成分，如果存在的话)从皮下或肌肉内注射的吸收。这可以通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂而实现。那么fsh的吸收率取决于其溶出度，所述溶出度有可能取决于晶体粒度和晶型。备选地，通过将fsh组合溶解或悬浮在油赋形剂中而实现肠胃外施用的fsh组合形式的延缓的吸收。可注射的长效形式可以通过在可生物降解的聚合物(如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成fsh(和其他试剂，如果存在的话)的微胶囊基质而制成。取决于fsh与聚合物的比例和所用的特定聚合物的性质，可以控制fsh释放的速率。其他可生物降解的聚合物的实例包括聚乙烯吡咯烷酮，聚(原酸酯)，聚(酐)等。长效可注射制剂还通过将fsh截留在脂质体或微乳液中而制成，所述脂质体或微乳液与身体组织是相容的。可注射的制剂可以进行无菌处理，例如，通过截留细菌的滤器的过滤，或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，所述无菌固体组合物可以在使用前溶解或分散在无菌水或其他无菌注射介质中。可注射制剂可以提供在任意适当的容器中，例如，小瓶、预装的注射器、注射筒等。所述产品或组合物可以配制成单次应用或多次应用的(多剂量)。如果所述产品或组合物配制成多次应用的，则优选地包含防腐剂。如果包含防腐剂，则优选苯甲醇、苯酚和/或间-甲酚；然后，防腐剂绝不限于这些实例。单次应用或多次应用配制的产品或组合物可以进一步包含含有药用碱金属阳离子的盐，所述盐选自由na+-或k+-盐或它们的组合组成的组。优选地，所述盐是na+-盐，例如nacl或na2so4。所述产品或组合物可以包含在容器中，如在小瓶、预装的筒(例如用于单次给药或多次应用)或注射装置如用于多剂量给药的“钢笔”中。所述产品或组合物可以是包含fsh(任选地具有hcg，lh，lh活性等)的制剂(例如，可注射制剂)。lh活性，如果存在的话，可以来自lh或人绒毛膜促性腺激素hcg(humanchorionicgonadotropin)。如果存在多于一种活性成分(即，fsh和例如hcg或lh)，这些可以适于分开或一起施用。如果分开施用，施用可以是顺序的。所述产品可以提供在任意适当的包装中。例如，产品可以包括多个容器(例如，预装的注射器或小瓶)，所述容器中包含fsh或hcg，或fsh与hcg二者的组合(或组合)。hcg可以是重组hcg或尿液hcg。如果所述产品包括多个包含fsh(例如重组fsh)的容器(例如，预装的注射器或小瓶)，则每个容器可以包含相同量的fsh。一个或多个容器可以包含不同量的fsh。注射器或小瓶可以以泡包装或其他方式包装，以保持无菌性。任意产品可以任选地包含关于使用fsh(并且例如hcg，如果存在的话)的使用说明。按照本领域常规实践调节药物组合物的不同成分的ph和准确浓度。参见goodmanandgilman’sthepharmacologicalbasisfortherapeutices，第7版。在优选的实施方案中，本发明的组合物可以作为用于肠胃外施用的组合物提供。制备肠胃外制剂的通用方法在本领域中是公知的，并且记述在remington；thescienceandpracticeofpharmacy，同前所述，第780-820页中。肠胃外组合物可以提供在液体制剂中或作为固体提供，所述固体将仅在施用前与无菌注射介质混合。在特别优选的实施方案中，肠胃外组合物以单位剂型提供，以便于施用和剂量的统一性。按照本发明，在另一方面，提供治疗不育的方法[例如，具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)并且在fsh受体的位置680处具有变体ser/ser的患者中的不育]，其中所述不育的治疗包括：(a)鉴定(例如确定)所述患者的血清amh水平；(b)鉴定所述患者fsh受体的位置680处的变体；和(c)向(鉴定)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)且在fsh受体的位置680的变体ser/ser的患者施用9-24μg重组促卵泡激素(fsh)/天的剂量或与其等价的剂量。所述组合物可以包含9-24μgfsh，例如10-18μgfsh，例如12-16μgfsh，例如12-15μgfsh。所述组合物可以包含＞12μgfsh，例如12.3-24μgfsh，例如12.33-24μgfsh，例如12.67-24μgfsh，例如13-24μgfsh，例如13-16μgfsh，例如13-15μgfsh。fsh的施用可以在治疗的第一天起始，并且持续六至十六天，例如七至十六天，例如8-16天，例如8-13天。fsh可以是重组fsh。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh，其中总唾液酸化的1-99％是α2，6-唾液酸化，并且总唾液酸化的99％-1％是α2，3-唾液酸化。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh，其中总唾液酸化的1-50％是α2，6-唾液酸化，并且总唾液酸化的50％-99％是α2，3-唾液酸化。fsh可以是包含α2，3-和α2，6-唾液酸化的重组fsh，其中总唾液酸化的5-40％是α2，6-唾液酸化，并且总唾液酸化的60％-95％是α2，3-唾液酸化。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。施用优选地包含上文和权利要求书中定义的fsh的量的每日剂量或与其等价的每日剂量。(每日)剂量可以是初始剂量(即，其可以在治疗过程中减少、增加或维持)。所述方法可以是在患者(受试者)的第一刺激程序中治疗不育的方法。应该理解，对于其他的刺激周期，剂量可以按照第一周期的实际卵巢响应进行调节。按照本发明，在另一方面，提供用于制备治疗不育的药物的包含fsh的组合物(例如，药物组合物)，所述组合物包含9-24μg促卵泡激素(fsh)，其中所述药物用于(例如每日)施用给(治疗前)鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体ser/ser的患者。所述药物可以用于(例如每日)施用给(治疗前)鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体ser/ser并且鉴定(例如，选择)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者。所述组合物可以包含9-24μgfsh，例如10-18μgfsh，例如12-16μgfsh，例如12-15μgfsh。所述组合物可以包含＞12μgfsh，例如12.3-24μgfsh，例如12.33-24μgfsh，例如12.67-24μgfsh，例如13-24μgfsh，例如13-16μgfsh，例如13-15μgfsh。本申请人还发现，向鉴定具有低amh[amh水平＜15pmol/l(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)，其通常伴有低响应]以及在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser的患者在卵泡发育方面提供良好的响应。与具有低amh和在fsh受体的位置680的变体ser/ser的患者的治疗相比，这以减少剂量的fsh和/或缩短的治疗持续时间实现。这允许在鉴定具有特定amh水平以及在fshr的这些特定多态性的特定患者中定制fsh剂量。如下文所述，对具有＜15pmol/l的amh水平和变体asn/asn的患者的刺激的预计持续时间是1.5天，低于具有＜15pmol/l的amh水平和变体ser/ser的患者所需要的刺激持续时间(见图7)。因此，对治疗前鉴定具有＜15pmol/l的amh水平和变体asn/asn二者(或＜15pmol/l的amh水平和变体asn/ser二者)的患者定制剂量可以允许药物成本的极大的节约，以及降低由于施用高于这些患者需要的总fsh剂量引起的潜在副作用的危险。按照本发明，在另一方面，提供用于治疗不育的组合物(例如，药物组合物)，所述组合物包含10-12μg促卵泡激素(fsh)，其中所述组合物用于(例如每日)施用给(治疗前)鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser的患者。所述组合物可以用于(例如每日)施用给鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser并且(治疗前)鉴定(例如，选择)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者。所述组合物可以用于施用给鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体asn/asn并且(治疗前)鉴定(例如，选择)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者。所述组合物可以包含10至＜12μgfsh，例如10-11.9μgfsh，例如11-11.9μgfsh，例如11.33或11.67μgfsh。组合物(例如药物组合物)可以包含上文、此处和权利要求书中定义的人源rfsh的量的每日剂量或与其等价的每日剂量。组合物(例如药物组合物)可以用于在治疗的第一天开始(每日)施用fsh，并且持续六至十六天，例如七至十六天，例如8-16天，例如8-13天。不育的治疗可以包括鉴定(例如确定，例如测量)在患者的fsh受体的位置680处的变体的步骤；和向(鉴定)在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser的患者施用剂量的步骤。不育的治疗可以包括鉴定(例如确定，例如测量)患者的血清amh水平，并且向(鉴定)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者施用剂量的步骤。按照本发明，在另一方面，提供包含促卵泡激素(fsh)的组合物(例如，药物组合物)，其用于治疗具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)并且在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser的患者中的不育，其中所述组合物用于以10-12μg重组fsh/天的剂量或与其等价的剂量施用；并且其中不育的治疗包括鉴定(例如确定)患者的血清amh水平的步骤；鉴定患者的fsh受体的位置680处的变体的步骤；和向(鉴定)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)并且在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser的患者施用所述组合物的步骤。所述组合物可以包含10至＜12μgfsh，例如10-11.9μgfsh，例如11-11.9μgfsh，例如11.33或11.67μgfsh。所述组合物(例如，药物组合物)可以用于治疗具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)并且在fsh受体的位置680具有变体asn/asn的患者中的不育[其中不育的治疗包括鉴定(例如，确定)患者的血清amh水平的步骤；鉴定患者的fsh受体的位置680处的变体的步骤；和向(鉴定)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)和在fsh受体的位置680具有变体asn/asn的患者施用剂量的步骤]。按照本发明，在另一方面，提供治疗不育[具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)并且在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser的患者中的不育]的方法，其中不育的治疗包括：(a)鉴定(例如确定)患者的血清amh水平；(b)鉴定患者的fsh受体的位置680处的变体的步骤；和(c)向(鉴定)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)并且在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser的患者施用10-12μg重组促卵泡激素(fsh)/天或与其等价的剂量。所述组合物可以包含10至＜12μgfsh，例如10-11.9μgfsh，例如11-11.9μgfsh，例如11.33或11.67μgfsh。fsh的施用可以从治疗第一天开始并且持续六至十三天，例如，七至十三天，例如8-13天，例如8-11天。按照本发明，在另一方面，提供用于制备治疗不育的药物的包含fsh的组合物(例如，药物组合物)，所述组合物包含10-12μg促卵泡激素(fsh)，其中所述药物用于(例如每日)施用给(治疗前)鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser的患者。药物可以用于(例如每日)施用给鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体asn/asn或变体asn/ser且(治疗前)鉴定(例如，选择)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者。药物可以用于施用给鉴定(例如，选择)在fsh受体的位置680具有变体asn/asn且(治疗前)鉴定(例如，选择)具有＜15pmol/l的血清amh水平(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者。所述组合物可以包含10至＜12μgfsh，例如10-11.9μgfsh，例如11-11.9μgfsh，例如11.33或11.67μgfsh。应该理解，用于本发明这些方面的fsh、鉴定患者的血清amh水平和fsh受体的位置680处的变体等可以同样用于本文所述的本发明的其他方面。发明详述现在将参考附图更详细地描述本发明，在所述附图中：图1显示pfshα/β表达载体的质粒图谱；图2显示α2，3-唾液酸转移酶(st3gal4)表达载体；图3显示α2，6-唾液酸转移酶(st6gal1)表达载体；图4是fsh受体的示意图，其显示外显子10的氨基酸位置307和680和启动子位置29的多态性位置；图5显示在实施例8的研究中用fsh治疗的222名患者的fsh受体基因的snp单元型的分布；图6是结果表格，其显示对于完全分析组对在关于位置680的三种不同fsh受体基因型asn/asn，asn/ser和ser/ser的每一种具有＜15pmol/l的amh的患者/受试者观察到的促性腺激素(fsh)治疗持续时间(天)和递送的(μg)总促性腺激素(fsh)剂量；以及图7是结果表格，其显示对于完全分析组对在关于位置680的三种不同fsh受体基因型asn/asn、asn/ser和ser/ser的每一种的具有＜15pmol/l的amh的患者/受试者针对剂量调节的所递送的促性腺激素(fsh)治疗的预计持续时间(天)。序列选择人fsh按照fiddes和goodman.(1981)使用fshα多肽的基因的编码区。该序列以ah007338在库中登记，并且在构建时没有该蛋白序列的其他变体。所述序列在本文中称为seqidno：1。按照keene等人(1989)使用fshβ多肽的基因的编码区。该序列以nm_000510在库中登记，并且在构建时没有该蛋白序列的其他变体。所述序列在本文中称为seqidno：2。唾液酸转移酶α2，3-唾液酸转移酶-按照kitagawa和paulson(1994)使用β-半乳糖苷α-2，3-唾液酸转移酶4(α2，3-唾液酸转移酶，st3gal4)的基因的编码区。该序列以l23767在库中登记，并且在本文中称为seqidno：3。α2，6-唾液酸转移酶-按照grundmann等人(1990)使用β-半乳糖酰胺(beta-galactosamide)α-2，6-唾液酸转移酶1(α2，6-唾液酸转移酶，st6gal1)的基因的编码区。该序列以nm_003032在库中登记，并且在本文中称为seqidno：4。实施例实施例1构建fsh表达载体分别使用引物组合fsha-fw与fsha-rev和fshb-fw与fshb-rec，通过pcr扩增fshα多肽(ah007338，seqidno：1)和fshβ多肽(nm_003032，seqidno：2)的编码序列。fsha-fw5’-ccaggatccgccaccatggattactacagaaaaatatgc-3’(seqidno：9)fsha-rev5’-ggatggctagcttaagatttgtgataataac-3’(seqidno：10)fshb-fw5’-ccaggcgcgccaccatgaagacactccagtttttc-3’(seqidno：11)fshb-rev5’-ccgggttaacttattattctttcatttcaccaaagg-3’(seqidno：12)将产生的扩增的fshβdna用限制酶asci和hpai消化，并且插入到携带新霉素选择标记的cmv驱动的哺乳动物表达载体上的asci和hpai位点之间。类似地，将fshαdna用bamhi和nhei消化，并且插入到已经包含fshβ多肽dna的表达载体的位点bamhi和nhei之间。使用载体dna转化大肠杆菌(e.coli)dh5α菌株。挑取菌落用于扩增。选择包含含有fshα和β二者的载体的菌落用于测序，并且全都包含正确的seqidno：1和seqidno：2所示的序列。选择质粒pfsha+b#17用于转染(图1)。实施例2构建st3表达载体使用引物组合2，3stfw与2，3strev，通过pcr扩增β-半乳糖苷α-2，3-唾液酸转移酶4(st3，l23767，seqidno：3)的编码区。2，3stfw5’-ccaggatccgccaccatgtgtcctgcaggctggaagc-3’(seqidno：13)2，3strev5’-tttttttcttaagtcagaaggacgtgaggttcttg-3’(seqidno：14)将产生的扩增的st3dna用限制酶bamhi和aflii消化，并且插入到携带潮霉素抗性标记的cmv驱动的哺乳动物表达载体上的bamhi与aflii位点之间。按之前所述扩增载体并且测序。克隆pst3#1(图2)包含seqidno：3所述的正确的序列，并且选择用于转染。实施例3构建st6表达载体使用引物组合2，6stfw与2，6strev，通过pcr扩增β-半乳糖酰胺α-2，6-唾液酸转移酶1(st6，nm_003032，seqidno：4)的编码序列。2，6stfw5’-ccaggatccgccaccatgattcacaccaacctgaag-3’(seqidno：15)2，6strev5’-tttttttcttaagttagcagtgaatggtccgg-3’(seqidno：16)将产生的扩增的st6dna用限制酶bamhi和aflii消化，并且插入到携带潮霉素抗性标记的cmv驱动的哺乳动物表达载体上的bamhi与aflii位点之间。按之前所述扩增载体并且测序。克隆pst6#11(图3)包含seqidno：4所述的正确的序列，并且选择用于转染。实施例4在细胞中稳定表达pfshα+β。克隆的转染、分离和筛选。通过表达来自单个质粒的fsh的两条多肽链(见实施例1)而产生生产fsh的克隆。为了获得稳定的克隆，使用基于脂质体的转染剂与pfshα+β构建体。在补充了10％fcs并且含有g418的vpro中选择稳定的克隆。转染后三周，g418抗性克隆长出。选择克隆用于分离。将分离的克隆在选择培养基中培养至70-80％汇合。使用fsh选择性elisa测定上清的fsh蛋白含量，并且使用camp积聚测定检测克隆的细胞系中fsh受体的药理学活性。将表达功能性蛋白的克隆继续培养扩增至24孔、6孔和t80烧瓶中。在t80烧瓶中开始确定来自七个克隆的物质的生产率和质量的研究，以产生充分的物质。将细胞在之前所述的补充的培养基中培养7天，并且收集上清。使用fsh选择性elisa确定生产率。通过本领域已知的方法进行等电聚焦(ief)而确定物质的等电模式。选择具有充分的生产率和质量的克隆用于唾液酸转移酶改造。实施例5在过表达α2，3-唾液酸转移酶的细胞中，唾液酸化水平提高。pst3在表达fsh的细胞中稳定表达；克隆的转染、分离和筛选。通过在已经表达fsh的两条肽链的细胞(来自实施例4)中由分开的质粒(实施例2)表达α2，3唾液酸转移酶而产生生产高度唾液酸化的fsh的克隆。对由实施例4所述的细胞产生的克隆的特征进行选择，所述特征包括生产率、良好的生长模式、功能的蛋白产生、和产生的包含一些唾液酸化的fsh。如之前在实施例4中所述产生稳定的克隆。分离克隆，扩增并测定。α2，3-唾液酸转移酶克隆适应不含血清的培养基和悬浮条件。如之前所述，使用fsh选择性elisa、fsh受体细胞系中的功能响应、ief、代谢清除率和steelmanpohley分析，测定克隆，将结果与商购的重组fsh(gonal-f，serono)和亲本细胞系比较。与不与α2，3-唾液酸转移酶一起表达的fsh相比，由大部分克隆产生的fsh具有显著提高的唾液酸化(即，平均更多的fsh同种型具有大量的唾液酸)。总之，与仅表达fsh的细胞相比，在细胞中与唾液酸转移酶一起表达fsh导致升高水平的唾液酸化的fsh。实施例6生产和纯化回顾开发一种方法，用于在无血清培养基中悬浮培养的细胞中产生fsh。该方法在下文中描述，并且适用于一些产生fsh的细胞系。使用lowry等人(1976)所述的方法的改进方案，制备来自α2，3-克隆(实施例5)的fsh。对于的生产，细胞系适应无血清培养基，即，excell525(jrhbiosciences)。首先将细胞在t80培养烧瓶中培养至70％-90％汇合的单层。传代时，将细胞重悬在无血清培养基中，即excell525+4mml-谷氨酰胺中，至细胞密度为0.3x106个细胞/ml。将25ml细胞混悬液置于250ml摇动烧瓶中，并在37℃，5％co2以100rpm摇动。在细胞密度达到＞1x106个细胞/ml时，将细胞传代培养至细胞密度为0.2或0.3x106个细胞/ml，并在摇动烧瓶中在37℃，5％co2和100rpm进一步培养。对于fsh的生产，将细胞转移至无血清生产培养基中，即vpro(jrhbiosciences)中，其支持细胞生长至非常高的细胞密度(在批次培养中通常＞107个细胞/ml)。将细胞首先在excell525中培养至＞1x106个细胞/ml，然后以1000rpm离心5分钟，随后重悬在vpro培养基+6mml-谷氨酰胺中至1x106个细胞/ml的密度。然后将细胞在摇动烧瓶中在37℃，5％co2和100rpm培养7-10天。在这一时间期内，细胞生长至>107个细胞/ml的密度。在细胞存活力开始下降后收集培养基。将细胞以1000rpm离心5分钟，并且将上清用于fsh的定量和纯化。使用elisa(drgeia1288)确定fsh的浓度。然后，使用lowry等人(1976)所述的方法的改进方案进行fsh纯化。进行利用电荷选择性层析的纯化，以通过本领域公知的方法富集高度唾液酸化的形式。在所有的层析方法中，本文所述的唾液酸化形式fsh的富集通过ria(drgeia1288)和/或ief证实。实施例7α2，3和α2，6唾液酸的相对量的定量使用已知的技术测量α2，3和α2，6唾液酸对纯化的rfsh的相对百分数量(实施例6)。在变性条件下使用png酶f由样品释放n-聚糖，然后用2-氨基苯甲酰胺标记。然后通过弱阴离子交换(weakanionexchange，wax)柱分离并分析释放的聚糖形式，以确定电荷分布。标记的聚糖用2，3，6，8唾液酸酶处理以用于确定总唾液酸，用2，3唾液酸酶处理以用于确定2，3唾液酸，将它们通过wax柱进一步进行分析。由在未消化的和消化的聚糖库中存在的结构计算带电荷聚糖的相对百分数，并且显示在图4中(8种样品)。发现这些对于α2，3唾液酸化在50％-95％(例如约80％-90％)的范围内，并且对于α2，6唾液酸化在5％-50％，通常约10-20％(或约31％或35％)的范围内。实施例8-与性腺-f相比较研究fe999049的多剂量研究。以下描述随机化的、对照的、测定者不知情的、平行组的、多国家的、多中性试验，其测定正常进行控制的卵巢刺激的患者中fe999049对于体外受精(ivf)/细胞质内精子注射(icsi)的剂量-响应关系。患者群体是265ivf患者，他们的年龄在18-37岁，bmi为18.5至32.0kg/m2。试验设计为剂量-响应试验，以取出的卵母细胞数量作为初级终点。次级终点将研究不同剂量的fe999049对内分泌模式、卵泡发育、卵母细胞受精、胚胎质量和治疗效果(即，总促性腺激素消耗与刺激持续时间)的定性和定量影响。该试验设计用来评价fe999049在用于ivf/icsi周期中的控制的卵巢刺激时建立妊娠的效果。在随机化3个月前对受试者进行测定，以符合纳入和排除标准，包括抗副中肾管激素(amh)测定，以关于卵巢响应提高试验群体的一致性并使对该试验中使用的fe999049剂量和gonal-f剂量的潜在的差响应者和超响应者的人数降至最少。amh测定使用amhgen-ii酶联免疫吸附测定试剂盒(beckmancoulter，inc.，webster，texas)进行测量。该测定可以检测大于0.57pmol/l的amh浓度，定量的下限是1.1pmol/l。在她们的月经周期的第2-3天，将受试者以1∶1∶1∶1∶1∶1方式随机化用90iu，120iu，150iu，180iu或210iufe999049或150iugonal-f中的任一种治疗，并且开始卵巢刺激。按照筛查时的amh水平对随机化进行分等级[5.0-14.9pmol/l(低amh)和15.0-44.9pmol/l(高amh)]。依fda要求，将性腺-f(gonal-f)按质量配药(fbm)；因此，提及μg剂量是适当的。性腺-f标签标示600iu/44μg，这表示150iu为11μg。然而，存在一些变化，并且用于该试验的批次证书表示11.3μg性腺-f等价于150iu。fe999049剂量用蛋白含量(μg)表示，而不是用生物学活性表示。因此，fe999049的剂量为5.2μg(90iu)，6.9μg(120iu)，8.6μg(150iu)，10.3μg(180iu)或12.1μg(210iu)。受试者和剂量分布列出如下(数据是受试者的数量)：表1在整个刺激期间，fe999049或性腺-f的每日剂量水平是固定不变的。在刺激过程中，在刺激第1、4和6天，此后至少每两天监测受试者。当观察到有3个≥15mm的卵泡时，每天进行随访。受试者用fe999049或性腺-f治疗最多16天。为了防止不成熟的lh激增，在刺激第6天，可以以0.25mg的每日剂量开始gnrh拮抗剂(醋酸加尼瑞克(ganirelixacetate)，orgalutran，msd/schering-plough)，并且在整个刺激期间持续。当观察到≥3个直径≥17mm的卵泡时，进行最终卵泡成熟引发。如果有＜25个卵泡的直径≥12mm，则施用250μg重组hcg(绒毛膜促性腺激素α，ovitrelle，merckserono/emdserono)。如果有25-35个卵泡直径≥12mm，则施用0.2mggnrh激动剂(醋酸曲普瑞林(triptorelinacetate)，decapeptyl/gonapeptyl，ferringpharmaceuticals)。在过度卵巢响应(定义为有＞35个卵泡的直径≥12mm)的情形中，取消治疗。在差卵巢响应(定义为，在刺激第10天观察到有＜3个卵泡的直径≥10mm)的情形中，取消该周期。在引发最终卵泡成熟后36小时(±2小时)发生卵母细胞取出，并且将所述卵母细胞通过ivf和/或icsi人工受精。从卵母细胞取出到植入那天测定受精和胚胎发育。对于进行了使用hcg引发最终卵泡成熟的受试者，在卵母细胞取出后第5天，将一个最佳质量的可用的胚泡植入，而将其余的胚泡冷冻。对于进行了使用gnrh激动剂引发最终卵泡成熟的受试者，在新鲜的周期(freshcycle)没有发生胚胎植入，并且相反在第5天冷冻胚泡。从卵母细胞取出那天起直到临床妊娠随访那日，每天3次提供阴道孕酮片剂(lutinus，ferringpharmaceuticals)100mg，用于黄体期支持。在胚胎植入后13-15天进行βhcg测试，并且在胚胎植入后5-6周通过经阴道超声(transvaginalultrasound，tvu)证实临床妊娠。结果取出的卵母细胞的数目(初级终点)显示在下表中。表2数据是平均值(sd)满足主要目标：关于取出的卵母细胞数目，对于fe999049确定显著的剂量-响应关系。这一发现不仅对整个试验群体观察到，也对随机化所用的两个amh等级中的每一个观察到。对于所有的关键目标药效参数，例如，雌二醇，抑制素b和抑制素a，都证实了对fe999049的显著的剂量-响应。以相似的微克剂量水平，使用fe999049的药效响应大于使用性腺-f的药效响应(这些结果未显示)。与性腺-f相比，暴露于fe999049后的血清fsh浓度显著更高。该结果证实了fe999049的pk模式不同于性腺-f的pk模式。用fe999049治疗的ivf/icsi患者中的受精率、胚泡发育和妊娠率在预期之内。对于fe999049应用没有安全顾虑。记录了良好的局部耐受性。进一步的分析申请人进一步分析所述数据，以鉴定fe999049的剂量，所述剂量在取出的卵母细胞数目方面满足下述标准：·取出的卵母细胞在8-14个范围内·使具有＜8个卵母细胞的患者比例最小化·使具有＜4个或≥20个卵母细胞的患者的比例最小化低amh等级如表2中可见，满足第一标准(取出的卵母细胞在8-14个范围内)的fe999049剂量为12.1μg(平均取出9.4个卵母细胞)。卵母细胞的分布显示在下表3中。表3数据是受试者％如方框和箭头所示，12.1μgfe999049的剂量在60％的低amh组受试者中提供更合乎需要数目的卵母细胞取出。这是对性腺-f的显著改善(仅在33％的受试者中有更合乎需要数目的卵母细胞)。没有中度或重度性质的早期ohss的指征，并且没有需要的预防措施发生；没有与在具有低amh的患者中的12.1μgfe999049剂量相关的顾虑。因此，申请人已经发现，6-24μg，例如9-14μg，例如12μg人源重组fsh的剂量或与其等价的剂量适合用于具有＜15pmol/l的血清amh(例如0.05-14.9pmol/l，例如5.0-14.9pmol/l)的患者中的不育的治疗。该剂量提供有效的响应同时使ohss的危险最小化。研究评价关于研究评价，本发明人研究了fsh受体多态性对用fe999049刺激后的卵巢响应和治疗效果的贡献。在意大利的摩德纳大学(universityofmodenaandreggioemilia)分析试验中所有患者的基因组dna在fsh-r的位置29、307和680处的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，snp)。图4是fsh受体的示意图，显示子外显子10的氨基酸位置307和680处以及在启动子中位置29处的多态性位置。snpfsh-r组合的分布如下述：对于位置29，aa7％，ag35％和gg58％；对于位置307，thr/thr29％，ala/thr54％和ala/ala17％；对于位置680，asn/asn30％，asn/ser53％和ser/ser17％。图5显示对于在实施例8的研究中用fsh治疗的222名患者在fsh受体基因处的snp单元型分布。在低amh和高amh等级之间，关于每个位置和整体组合的分布没有显著差异。进一步分析临床试验的结果，以测定snp是否对治疗持续时间和需要的总剂量具有任何影响。对于低amh组和高amh组进行此。fshr多态性通过本领域已知的方法经由pcr(聚合酶链式反应)和rflp(限制性片段长度多态性)检验。妇女分为asn/asn、asn/ser和ser/ser基因型。遗传分析记载在下述综述流程中，并且患者签订特殊的知情同意书。样品取自刺激第1天的其他血液样品的部分。将它们在摩德纳大学进行检测。用于fsh受体基因的snp-分析的程序的总结通用程序：1.基因dna提取(使用nucleon基因组dna提取试剂盒(nucleongenomicdnaextractionkit，gehealthcare)从血液中提取)2.使用纳米小滴的操作方法。hrm程序：snp基因分型通过高分辨率熔融(highresolutionmelting，hrm)方法进行(使用ssofastevagreensupermixcod酶。172-5201，bio-rad；hsp-96平板，cat.hsp9645，bio-rad；和cfx96实时热循环仪bio-rad)。测序程序：在怀疑hrm结果的情形中，(对相同的样品两次独立的hrm后)，使用下述测序方法：1.pcr反应和扩增。2.pcr产物纯化。3.纯化的pcr的定量。4.序列反应流程。5.序列产物纯化。6.通过abiprism3130仪器运行毛细管电泳。7.通过用abiprism3100毛细管电泳测序得到的结果的评估和验证。结果图7是结果表格，显示对于完全分析组，对在关于位置680的三种不同的fsh受体基因型asn/asn，asn/ser和ser/ser中的每一种的具有＜15pmol/l的amh的患者/受试者针对剂量调节的所递送的促性腺激素(fsh)治疗的预计持续时间(天)。图7显示刺激具有＜15pmol/l的amh水平和变体ser/ser的患者所需要的预计平均持续时间为9.59天，其比刺激具有＜15pmol/l的amh水平和变体asn/asn(8.13天)的患者所需要的长约1.5天，并且比刺激具有＜15pmol/l的amh水平和变体ser/asn(8.26天)的患者所需要的长约1.3天。如上文所示，如果患者具有在理想的治疗窗口内发生的适当的响应(预测的卵巢多卵泡发育，循环17-β-雌二醇升高)，更可能成功(关于妊娠和/或婴儿安全出生)。通过响应处在该治疗窗口的中心，则更提高成功；即，在窗口中不太早也不太晚。缩短对具有低amh和fsh受体的位置680处的变体ser/ser的患者的治疗持续时间(通过使剂量增加高于12μg)可能使得响应趋向于治疗窗口的中心，具有提高的成功可能性。因此，对治疗前鉴定具有＜15pmol/l的amh水平和变体ser/ser的患者定制剂量可以是可行的。与具有ser/asn和asn/asn的那些相比，治疗前具有ser/ser的患者的鉴定可能允许在这些患者中的起始剂量增加。如上述，12.1μgfe999049的剂量在60％的低amh组受试者中提供最理想数量的卵母细胞取出(表3)。表3所示的低amh组包括具有变体ser/ser的患者，以及具有ser/asn和asn/asn的那些患者。向具有低amh[amh水平＜15pmol/l，(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l，例如5.0pmol/l至14.9pmol/l)]以及在fsh受体的位置680具有变体ser/ser的患者施用较高的起始剂量(例如9-24μg，例如＞12-24μg，例如12.33μg或13μg人源重组物)可能是有利的，原因在于其可以提供提高的成功可能性(关于妊娠和/或婴儿安全出生)和更好的成功预测性。图7显示刺激具有＜15pmol/l的amh水平和变体asn/asn的患者所需要的平均治疗持续时间为8.13天，并且刺激具有＜15pmol/l的amh水平和变体ser/asn的患者所需要的平均治疗持续时间为8.26天，比对具有＜15pmol/l的amh水平和变体ser/ser的患者的等价治疗的持续时间(9.59天)短约1.5-1.3天。因此，治疗前鉴定具有＜15pmol/l的amh水平和变体ser/asn与asn/asn的患者可以允许用于这些患者的起始剂量减少至少于12μgfe999049，例如10-12μg，或缩短治疗的持续时间，同时在卵泡发育方面仍然提供良好的响应。这可以在药物成本方面、以及在与施用比这些患者实际需要更高的剂量相关的风险降低方面提供益处。图6是结果表，显示对于完全分析组对在关于位置680的三种不同fsh受体基因型asn/asn、asn/ser和ser/ser的每一种的具有＜15pmol/l的amh的患者/受试者所观察到的促性腺激素(fsh)治疗持续时间(天)和所递送的总促性腺激素(fsh)剂量(μg)。这证实了图7中所示的效果。结果没有显示该效果与高amh群体中的snp相关。这允许对鉴定具有特定amh水平以及在fshr的特定多态性的特定患者定制fsh剂量。实施例9-个体化cos流程(低amh)选择的患者要进行cos，以便通过本领域已知的方法进行体外受精(ivf)/细胞质内精子注射(icsi)。治疗前流程包括使用amhgen-ii酶联免疫吸附测定试剂盒(beckmancoulter，inc.，webster，texas)测定/筛查患者血清amh。该测定可以检测大于0.57pmol/l的amh浓度，定量下限为1.1pmol/l。amh可以使用其他测定试剂盒(例如，可从roche(罗氏)获得)测量。治疗前流程包括在通过本领域公知的方法提取基因组dna后鉴定fsh受体位置680处的等位基因变体(例如，通过用于从血液中提取基因组dna的试剂盒，以及后续的dna测序，如例如gromoll等人，methods，21，83-97(2000)，simoni等人，journalofclinicalendocrinology和metabolism，vol84，no.2，751-755(1999)，falconer等人，actaobstetgynecolscand2005：84：806-811(2005)，以及其中的参考文献，或通过pcr和rflp方法，诸如loutradis等人，journalofassistedreproductionandgenetics，vol.23，no.4，2006年4月中所述)。cos流程以通常的方式进行，例外之处在于依据筛查时的amh水平施用初始fe999049剂量。具有＜15pmol/l的amh水平和变体ser/asn或asn/asn的患者将施用大约12μgfe999049(按照实施例6的方法制备的人源重组fsh产品)的初始每日剂量，或＜12μgfe999049，例如10-12μg，例如11.33μg或11.67μg人源重组fsh。具有＜15pmol/l的amh水平和变体ser/ser的患者将接受更高的初始每日剂量，所述初始每日剂量大于12μg(例如12.33-24μg，或13-24μg)人源重组fsh。参考文献andersency，westergaardlg，和vanwelym.(2004).fshisoformcompositionofcommercialgonadotrophinpreparations：aneglectedaspect？(商业促性腺激素制剂的fsh同种型组成：忽视的方面？)reprodbiomedonline.9(2)，231-236.areybj，stevispe，deecherdc，shenes，frailde，negro-vilara，和lopezfj.(1997)inductionofpromiscuousgproteincouplingofthefollicle-stimulatinghormone(fsh)receptor：anovelmechanismfortransducingpleiotropicactionsoffshisoforms(诱导促卵泡激素(fsh)受体的泛宿主性g蛋白偶联：转导fsh同种型的多向性作用的新机制).molendocrinol.11(5)，517-526.baenzigerju和greened.(1988).pituitaryglycoproteinhormoneoligosaccharides：structure，synthesisandfunctionoftheasparagine-linkedoligosaccharidesonlutropin，follitropinandthyrotropin(垂体糖蛋白激素寡糖：天冬酰胺-连接的寡糖对促黄体素、促卵泡素和促甲状腺素的结构、合成和功能).biochimbiophysacta.947(2)，287-306.bassettrm，和driebergenr.(2005).continuedimprovementsinthequalityandconsistencyoffollitropinalfa，recombinanthumanfsh(促卵泡素α，重组人fsh的质量和一致性的持续改进).reprodbiomedonline.10(2)，169-177.damián-matsumurap，zagav，maldonadoa，sánchez-hernándezc，timossic，和ulloa-aguirrea.(1999).oestrogensregulatepituitaryalpha2，3-sialyltransferasemessengerribonucleicacidlevelsinthefemalerat(雌激素调节雌性大鼠中的垂体α2，3-唾液酸转移酶信使核糖核酸水平).jmolendocrinol.23(2)，153-165.d’antoniom.，borrellif.，datolaa.，buccir.，masciam.，pollettap.，piscitellid.，和papoianr.(1999)biologicalcharacterizationofrecombinanthumanfolliclestimulatinghormoneisoforms(重组人促卵泡激素同种型的生物学表征).humanreproduction14，1160-1167dalpathadods，irunguj，goep，butnevvy，nortonk，bousfieldgr，和desaireh.(2006).comparativeglycomicsoftheglycoproteinfolliclestimulatinghormone：glycopeptideanalysisofisolatesfromtwomammalianspecies(糖蛋白促卵泡激素的比较糖原组学：来自两个哺乳动物物种的分离物的糖肽分析).biochemistry.45(28)，8665-8673.diasja，vanroeyp.(2001).structuralbiologyofhumanfollitropinanditsreceptor(人促卵泡素及其受体的结构生物学).archmedres.32(6)，510-519fiddes，j.c.和goodman，h.m.(1979)isolation，cloningandsequenceanalysisofthecdnaforthealpha-subunitofhumanchorionicgonadotropin(人绒毛膜促性腺激素的α-亚基的cdna的分离、克隆和序列分析).nature，281，351-356.flack，m.r.，bennet，a.p.，froehlich，j.anasti，jn和nisula，b.(1994).increasedbiologicalactivityduetobasicisoformsinrecombinanthumanfollicle-stimulatinghormoneproducedinahumancellline(由于在人细胞系中产生的重组人促卵泡激素中的碱性同种型导致的提高的生物学活性).j.clin.endocrinol.metab.，79，756-760foxkm，diasja，和vanroeyp.(2001).three-dimensionalstructureofhumanfollicle-stimulatinghormone(人促卵泡激素的三维结构).molendocrinol.15(3)，378-89grabenhorste，hoff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agaagcgggtgcgaaagggtttctggaaacagcctcccctcatc660tgggatgtcaatcctaaacagattcggattctcaaccccttcttcatggagattgcagct720gacaaactgctgagcctgccaatgcaacagccacggaagattaagcagaagcccaccacg780ggcctgttggccatcacgctggccctccacctctgtgacttggtgcacattgccggcttt840ggctacccagacgcctacaacaagaagcagaccattcactactatgagcagatcacgctc900aagtccatggcggggtcaggccataatgtctcccaagaggccctggccattaagcggatg960ctggagatgggagctatcaagaacctcacgtccttctga999<210>4<211>1221<212>dna<213>智人(homosapiens)<400>4atgattcacaccaacctgaagaaaaagttcagctgctgcgtcctggtctttcttctgttt60gcagtcatctgtgtgtggaaggaaaagaagaaagggagttactatgattcctttaaattg120caaaccaaggaattccaggtgttaaagagtctggggaaattggccatggggtctgattcc180cagtctgtatcctcaagcagcacccaggacccccacaggggccgccagaccctcggcagt240ctcagaggcctagccaaggccaaaccagaggcctccttccaggtgtggaacaaggacagc300tcttccaaaaaccttatccctaggctgcaaaagatctggaagaattacctaagcatgaac360aagtacaaagtgtcctacaaggggccaggaccaggcatcaagttcagtgcagaggccctg420cgctgccacctccgggaccatgtgaatgtatccatggtagaggtcacagattttcccttc480aatacctctgaatgggagggttatctgcccaaggagagcattaggaccaaggctgggcct540tggggcaggtgtgctgttgtgtcgtcagcgggatctctgaagtcctcccaactaggcaga600gaaatcgatgatcatgacgcagtcctgaggtttaatggggcacccacagccaacttccaa660caagatgtgggcacaaaaactaccattcgcctgatgaactctcagttggttaccacagag720aagcgcttcctcaaagacagtttgtacaatgaaggaatcctaattgtatgggacccatct780gtataccactcagatatcccaaagtggtaccagaatccggattataatttctttaacaac840tacaagacttatcgtaagctgcaccccaatcagcccttttacatcctcaagccccagatg900ccttgggagctatgggacattcttcaagaaatctccccagaagagattcagccaaacccc960ccatcctctgggatgcttggtatcatcatcatgatgacgctgtgtgaccaggtggatatt1020tatgagttcctcccatccaagcgcaagactgacgtgtgctactactaccagaagttcttc1080gatagtgcctgcacgatgggtgcctaccacccgctgctctatgagaagaatttggtgaag1140catctcaaccagggcacagatgaggacatctacctgcttggaaaagccacactgcctggc1200ttccggaccattcactgctaa1221<210>5<211>116<212>prt<213>智人(homosapiens)<400>5metasptyrtyrarglystyralaalailepheleuvalthrleuser151015valpheleuhisvalleuhisseralaproaspvalglnaspcyspro202530glucysthrleuglngluasnprophepheserglnproglyalapro354045ileleuglncysmetglycyscyspheserargalatyrprothrpro505560leuargserlyslysthrmetleuvalglnlysasnvalthrserglu65707580serthrcyscysvalalalyssertyrasnargvalthrvalmetgly859095glyphelysvalgluasnhisthralacyshiscysserthrcystyr100105110tyrhislysser115<210>6<211>129<212>prt<213>智人(homosapiens)<400>6metlysthrleuglnphephepheleuphecyscystrplysalaile151015cyscysasnsercysgluleuthrasnilethrilealaileglulys202530gluglucysargphecysileserileasnthrthrtrpcysalagly354045tyrcystyrthrargaspleuvaltyrlysaspproalaargprolys505560ileglnlysthrcysthrphelysgluleuvaltyrgluthrvalarg65707580valproglycysalahishisalaaspserleutyrthrtyrproval859095alathrglncyshiscysglylyscysaspseraspserthraspcys100105110thrvalargglyleuglyprosertyrcysserpheglyglumetlys115120125glu<210>7<211>332<212>prt<213>智人(homosapiens)<400>7metcysproalaglytrplysleuleualametleualaleuvalleu151015valvalmetvaltrptyrserileserarggluaspargtyrileglu202530leuphetyrpheproileproglulyslysgluprocysleuglngly354045glualagluserlysalaserlysleupheglyasntyrserargasp505560glnproilepheleuargleugluasptyrphetrpvallysthrpro65707580seralatyrgluleuprotyrglythrlysglysergluaspleuleu859095leuargvalleualailethrserserserileprolysasnilegln100105110serleuargcysargargcysvalvalvalglyasnglyhisargleu115120125argasnserserleuglyaspalaileasnlystyraspvalvalile130135140argleuasnasnalaprovalalaglytyrgluglyaspvalglyser145150155160lysthrthrmetargleuphetyrprogluseralahispheasppro165170175lysvalgluasnasnproaspthrleuleuvalleuvalalaphelys180185190alametaspphehistrpilegluthrileleuserasplyslysarg195200205valarglysglyphetrplysglnproproleuiletrpaspvalasn210215220prolysglnileargileleuasnprophephemetgluilealaala225230235240asplysleuleuserleuprometglnglnproarglysilelysgln245250255lysprothrthrglyleuleualailethrleualaleuhisleucys260265270aspleuvalhisilealaglypheglytyrproaspalatyrasnlys275280285lysglnthrilehistyrtyrgluglnilethrleulyssermetala290295300glyserglyhisasnvalserglnglualaleualailelysargmet305310315320leuglumetglyalailelysasnleuthrserphe325330<210>8<211>406<212>prt<213>智人(homosapiens)<400>8metilehisthrasnleulyslyslysphesercyscysvalleuval151015pheleuleuphealavalilecysvaltrplysglulyslyslysgly202530sertyrtyraspserphelysleuglnthrlysglupheglnvalleu354045lysserleuglylysleualametglyseraspserglnservalser505560serserserthrglnaspprohisargglyargglnthrleuglyser65707580leuargglyleualalysalalysproglualaserpheglnvaltrp859095asnlysaspserserserlysasnleuileproargleuglnlysile100105110trplysasntyrleusermetasnlystyrlysvalsertyrlysgly115120125proglyproglyilelyspheseralaglualaleuargcyshisleu130135140argasphisvalasnvalsermetvalgluvalthrasppheprophe145150155160asnthrserglutrpgluglytyrleuprolysgluserileargthr165170175lysalaglyprotrpglyargcysalavalvalserseralaglyser180185190leulysserserglnleuglyarggluileaspasphisaspalaval195200205leuargpheasnglyalaprothralaasnpheglnglnaspvalgly210215220thrlysthrthrileargleumetasnserglnleuvalthrthrglu225230235240lysargpheleulysaspserleutyrasngluglyileleuileval245250255trpaspproservaltyrhisseraspileprolystrptyrglnasn260265270proasptyrasnphepheasnasntyrlysthrtyrarglysleuhis275280285proasnglnprophetyrileleulysproglnme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