用于防止白发的组合物的制作方法

本发明涉及用于防止白发的组合物。本申请要求2015年9月30日向韩国特许厅提交的韩国专利申请第10-2015-0137839号的申请日的利益，其全部内容包含在本说明书中。
背景技术：
：毛发与头皮作为人体的一部分，其与皮肤相同，会随着年龄的增长发生老化现象。随着头皮的老化，因毛发内部油分、水分的不足而导致的弹性的降低，会使毛发易断并会降低弹性，或者因毛发内部的油分、水分的不足而导致角质层翘起，从而会发生静电、发梢分叉并发质变得枯干，或者因毛发外部的角质层受损而翘起且内部皮质层破坏，从而导致由光引起的漫反射严重而会造成整体毛发的光泽度降低，或者会发生头皮的红斑，并且会发生毛发从头皮的毛囊脱落而不再生长的脱发现象。此外，随着头皮的老化，毛发中的黑色素的量会减少或发生不存在黑色素的白发现象。另外，已知基于Wnt蛋白的Wnt信号传递(Wntsignalingpathway)不仅对人类大脑的形成及神经细胞的分化起到决定性的作用，而且作为Wnt抑制剂(Wntinhibitor)的APCDD1具有抑制毛发生长的效果(非专利文献1)。但是，对于皮肤的斑，已知作为Wnt抑制剂的WIF-1(Wnt抑制因子-1，Wntinhibitoryfactor-1)抑制黑色素的合成(非专利文献2)。因此，由于Wnt抑制剂抑制毛发的生长，因此一直以来进行了通过活化Wnt信号来促进毛发生长的研究。但是，目前为止Wnt抑制剂与白发的形成之间的关系尚未明确公开，因此也没有公开用于调节其的抑制、改善及防止白发现象的物质。(非专利文献1)Nature464,1043-1047,YutakaShimomuraetal(2010.04.15.)(非专利文献2)JournalofInvestigativeDermatology(2013)133,191-200,Ji-YoungKimetal(2012.09.06.)技术实现要素：要解决的技术问题本发明的目的在于提供能够防止头皮老化所引起的白发现象的组合物，其通过减少Wnt抑制剂的表达来促进黑色素的合成。技术方案本发明提供用于防止白发的组合物，其含有由下述化学式1表示的人参皂苷作为有效成分。[化学式1]所述化学式1中，R1为氢，R2为-O-glc或-O-glc(2-1)rha，R3为-glc。发明效果本发明的用于防止白发的组合物含有所述人参皂苷作为有效成分，将其涂抹于头皮时，会降低作为Wnt抑制剂的WIF-1的表达，因此，基于已知的WIF-1对面部等皮肤的黑色素抑制机理，改善或活化毛囊及毛发的黑色素传递，从而防止白发现象。附图说明图1示出下述实验例1中各年龄段实验组的WIF-1的基因相对表达量。图2示出下述实验例2中未经处理组、阳性对照组、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Re及人参皂苷Rg1处理组的WIF-1的基因相对表达量。图3示出下述实验例3中的未经处理组、阴性对照组、人参皂苷Re及人参皂苷Rg1处理组的黑色素相对合成量。具体实施方式以下，对本发明的用于防止白发的组合物进行详细说明。本发明中，防止白发应解释为如下：其不仅包括预防白发现象，而且还包括改善白发现象，其中预防白发现象是指预防毛发中的黑色素的量减少或不存在的现象，所述改善白发现象是指抑制或中断已发生的白发现象。本说明中所提及的化合物的名称，若没有特别提及，则表示登载于美国化妆品协会(Cosmetic,ToiletryandFragranceAssociation,CTFA)发行的国际化妆品原料词典(InternationalCosmeticIngredientDictionary,ICID)中的INCI(国际化妆品原料命名，InternationalNomenclatureCosmeticIngredient)名所对应的化合物，若INCI名中没有该名称，则表示根据国际纯粹与应用化学联合会(InternationalUnionofPureandAppliedChemistry,IUPAC)所制定的IUPAC命名法的化合物，若不存在根据IUPAC命名法的化合物，则表示对应于本发明
技术领域：
中通用的化合物的名称的化合物。本发明的用于防止白发的组合物含有由下述化学式1表示的人参皂苷作为有效成分。[化学式1]所述化学式1中，R1为氢，R2为-glc或-glc(2-1)rha，R3为-glc。本说明书中，人参皂苷(Ginsenoside)是指从人参中分离出的皂苷的配糖体(glycoside)。在本发明所属
技术领域：
中，人参皂苷的结构具体命名为人参皂苷Rx，在人参皂苷Rx中，“R”是指根(Radix或Root)，“x”是根据TLC(薄层色谱法，ThinLayerChromatography)上所显示的点(spot)的移动距离(Rf值)从下往上以o、a、b、c、d、e、f、g及h等顺序进行命名的。根据所述人参皂苷命名法的人参皂苷化合物及其结构如下述表1所示，结构均由所述化学式1表示，化学式中只有R1～R3的取代基不同。[表1]本发明的用于防止白发的组合物的所述人参皂苷可以从人参的提取物中进行分离，所述人参的提取物可以是从人参的根、茎、叶或果肉中提取的，优选可以是从人参的根或叶中提取的。但是，本发明并不受限于所述人参提取物的提取部位。本发明的一个实施方式中，就所述人参的提取物而言，可以用碳原子数为1～4的低级醇或它们的混合溶剂，优选用甲醇对经过干燥的人参的全草或一个部位进行过滤及减压浓缩来进行提取，但本发明并不受限于其提取方法。本发明的一个实施方式中，就所述人参皂苷而言，优选可以在所述人参的提取物中添加有机溶剂，例如依次添加正己烷、乙酸乙酯、正丁醇等，并对其进行精制分馏，然后利用色谱法，例如利用硅胶柱色谱法(silicagelcolumnchromatography)、LH-20柱色谱法(LH-20columnchromatography)、薄层色谱法(TLC；thinlayerchromatography)、高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography)等进行分离，但本发明并不受限于其分离方法。本说明书中，glc是指β-D-吡喃葡萄糖基，ara(pyr)是指L-阿拉伯吡喃糖基(arabinopyranosyl)，ara(fur)是指L-阿拉伯呋喃糖基(arabinofuranosyl)，rha是指α-L-吡喃鼠李糖基(rhamnopyranosyl)。本说明书中，人参(Panaxginseng)是指五加科的多年生草本植物。本发明的一个实施方式中，由所述化学式1表示的人参皂苷是人参皂苷Re、人参皂苷Rg1或它们的混合物。本发明的一个实施方式中，由所述化学式1表示的人参皂苷是人参皂苷Re或人参皂苷Rg1。本发明的一个实施方式中，所述人参皂苷是在所述化学式1中R1为氢，R2为-glc，R3为-glc的人参皂苷Re。本发明的一个实施方式中，所述人参皂苷是在所述化学式1中R1为氢，R2为-glc(2-1)rha，R3为-glc的人参皂苷Rg1。本发明的一个实施方式中，由所述化学式1表示的人参皂苷是人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1或它们的混合物。本发明的一个实施方式中，相对于组合物的总重量，所述人参皂苷的含量为0.000001重量％至10重量％，优选为0.0001重量％至10重量％。当所述人参皂苷的含量为小于0.000001重量％时，防止白发的活性微弱，当所述人参皂苷的含量超过10重量％时，防止白发的活性的增加微弱。本发明的一个实施方式中，所述用于防止白发的组合物是抑制WIF-1的表达。本说明书中，WIF-1是指抑制Wnt蛋白的蛋白质。本说明书中，Wnt蛋白是具有350～400个氨基酸长度的经过脂质调节的信号传递糖蛋白的一种，其在Wnt信号传递(Wntsignalingpathway)中起到传递信号的作用，就人类而言，其的蛋白质为Wnt1、Wnt2、Wnt2B、Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8A、Wnt8B、Wnt9A、Wnt9B、Wnt10A、Wnt10B、Wnt11、Wnt16等。本发明的用于防止白发的组合物可以剂型化为皮肤外用剂组合物，尤其可以剂型化为化妆料组合物，也可以含有化妆品学或皮肤科学上可接受的介质或基质来进行剂型化。此外，本发明的组合物可以以适合用于局部的所有剂型来提供，例如可以提供为溶液、将油相分散于水相而获得的乳液、将水相分散于油相的乳液、悬浮液、固体、凝胶、粉末、膏剂、泡沫(foam)或喷雾组合物的剂型。这些剂型的组合物可以通过本发明所属领域中通常的方法来制备。本发明提供含有由所述化学式1表示的人参皂苷作为有效成分的皮肤外用剂组合物在制备用于防止白发的化妆料中的用途。本发明提供防止白发的方法，所述方法包括将含有由化学式1表示的人参皂苷作为有效成分的皮肤外用剂组合物涂抹于头皮的步骤。本发明的一个实施方式中，所述用于防止白发的组合物可以为选自洗发水、润发剂、生发液、毛发营养化妆水、亮发素、头皮护理精华液、焗油膏、护发素、洗发香波及护发乳中的任意一种以上的剂型。本发明的用于防止白发的组合物根据所述剂型可以进一步含有适当的成分，对其进行具体说明如下。本发明的一个实施方式中，进一步含有选自表面活性剂、防腐剂、粘度调节剂、pH调节剂、香料、染料、毛发调理剂及水中的任意一种以上。本发明的一个实施方式中，所述表面活性剂为选自阴离子型表面活性剂、两性表面活性剂及非离子型表面活性剂中的任意一种以上。所述阴离子型表面活性剂可以为烷基硫酸盐或烷基醚硫酸盐，具体可以举例为月桂醇硫酸酯钠、月桂醇硫酸酯铵、月桂醇硫酸三乙醇胺、月桂醇聚氧乙烯硫酸钠、月桂醇聚氧乙烯硫酸铵等。所述两性表面活性剂可以为烷基甜菜碱或烷基酰胺丙基甜菜碱，具体可以举例为椰油基二甲基羧甲基甜菜碱、月桂基二甲基羧甲基甜菜碱、月桂基二甲基α-羧乙基甜菜碱、十六烷基二甲基羧甲基甜菜碱、椰油酰胺丙基甜菜碱等。所述非离子型表面活性剂可以是烷醇酰胺或氧化胺，具体可以举例为月桂基二乙基氧化胺、椰子油烷基二甲基氧化胺、月桂酸二乙醇酰胺、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、椰子油脂肪酸单乙醇酰胺等。本发明的一个实施方式中，所述防腐剂为选自对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、甲基氯异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮及苯甲酸钠中的任意一种以上。本发明的一个实施方式中，所述粘度调节剂是椰油酰胺MEA(CME)、椰油酰胺DEA(CDE)及氯化钠中的任意一种以上。本发明的一个实施方式中，所述pH调节剂是磷酸钠、磷酸氢二钠、柠檬酸及柠檬酸钠中的任意一种以上。本发明的一个实施方式中，所述毛发调理剂为聚二甲基硅氧烷基质(base)、阳离子型聚合物或它们的组合。本发明的一个实施方式中，所述毛发调理剂可以进一步包含叔酰胺胺、季铵化合物、高熔点化合物及硅化合物中的任意一种以上。所述叔酰胺胺具体可以举例为椰油酰胺丙基二甲胺、硬脂酰胺丙基二甲胺、山嵛醇酰胺丙基二甲胺、油酰胺丙基二甲胺、异硬脂酰胺丙基二甲基胺等。所述季铵化合物具体可以举例为烷基(碳原子数为14～22)三甲基氯化铵、二烷基(碳原子数为14～22)二甲基氯化铵、氢化牛脂烷基三甲基氯化铵及二牛脂烷基二甲基氯化铵等。所述高熔点化合物具体可以举例为脂肪醇类、脂肪酸类、脂肪醇衍生物及碳氢化合物类等，更具体地可以举例为鲸蜡醇、硬脂醇、十六醇十八醇混合物等。所述硅化合物具体可以举例为聚烷基硅氧烷类、聚芳基硅氧烷类、聚烷基芳基硅氧烷类及聚醚硅氧烷共聚物等。下面，将通过实施例对本发明进行更详细的说明。但是，这些实施例仅用于具体地说明本发明，本发明的权利范围并不受限于这些实施例。<试验例1>基于头皮老化的WIF-1表达量的测量将35岁男性作为对象，分别采集10根头顶部位的毛发，以1cm的尺寸剪取毛发根部，然后采用RNA分离试剂盒对存在于剪取的毛发根部的细胞进行WIF-1表达量的测量。将上述过程分别实施于36岁男性、81岁男性及89岁男性，从而测量WIF-1的表达量，并以35岁男性的WIF-1表达量为基准，将其相对值示于下述表2及图1中。[表2]试验组(年龄)基因相对表达量偏差P值3510.15944-362.6393870.0910110.0004243813.0690440.1231349.0948E-05895.9224710.9005880.07659135如图1及表2中所示，可以确认头皮中WIF-1的表达量随年龄的增长而增加。<试验例2>WIF-1抑制测量试验将NIH3T3细胞株(韩国细胞株银行)作为使用于未经处理的组、阳性对照组、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Re及人参皂苷Rg1处理组的细胞株，对于每个组将所述细胞株分别放入3个孔(well)的培养基(DMEM，10％的FBS，1％的P/S)中进行培养。之后，在培养基中以100ng/ml的浓度稀释赛默飞世尔科技公司(ThermoFisherSCIENTIFIC)的商标名为GIPCO的BMP4诱导剂(Inducer)，对除未经处理组之外的所有组进行处理。接着，对于除未经处理组和阳性对照组之外的人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Re及人参皂苷Rg1处理组，分别将所对应的该人参皂苷(西格玛奥德里奇，Sigma-Aldrich)以10mM的浓度制成储存液(stock)，然后稀释于培养基中，去除各处理组的孔(well)中的现有培养基，并以0.1μM的浓度放入经过处理的培养基。若在所有组的孔中，将包含WIF-1启动子的载体插入细胞中，则在细胞内部产生WIF-1表达的信号到达时，会表达能够检测其的荧光素酶(luciferase)。用基质对其进行处理时，会发光，并使用光度计(luminometer)对其进行测量。这时，为了标准化各细胞的载体插入量，会一同插入对照载体(controlvector)，作为对照基因会表达碱性磷酸酶(alkalinephosphatase)，用光度计也对所述碱性磷酸酶测量光量，并进行定量。计算各孔中WIF-1表达测量值与对照基因表达测量值的比值来确认随着药物的处理相对于对照基因的WIF-1的表达的增减。其结果，以阳性对照组的WIF-1的表达为基准，以百分率将其他组的基因表达量的相对量示于下述表3及图2中。[表3]如图2及表3所示，可以确认，用人参皂苷Re及人参皂苷Rg1进行处理的组的WIF-1表达量不仅比其他人参皂苷处理组少，而且WIF-1表达量也比未经任何处理的未经处理组少。<试验例3>黑色素合成测量试验将作为鼠的黑素细胞株(murinemelanocytecellline)的Melan-a细胞(melan-acell，购自ATCC)作为使用于未经处理组、阴性对照组、人参皂苷Re及人参皂苷Rg1处理组的细胞株，将所述细胞株以1.5×104细胞/孔的方式接种(seeding)于48孔板中，并在10％的CO2，37℃的条件下培养24小时。接着，对于除了未经处理组及阴性对照组之外的人参皂苷Re及人参皂苷Rg1处理组，分别用100ng/ml浓度的BMP4蛋白质和10μM浓度的相应的该人参皂苷(西格玛奥德里奇，Sigma-Aldrich)处理各个处理组的孔，然后培养72小时，并分别用所述物质以相同浓度处理所述人参皂苷Re及人参皂苷Rg1处理组，然后进一步培养72小时。之后，用DPBS(杜氏磷酸盐缓冲液，Dulbecco'sPhosphate-BufferedSaline)分别对未经处理组、阴性对照组、人参皂苷Re及人参皂苷Rg1处理组进行洗涤。之后，对所有的组分别加入2N的NaOH(10％的DMSO)，并在60℃下溶解1小时，然后将细胞溶解产物(celllysate)移至96孔板中，并在475nm下测量吸光度，并测量蛋白质的量。接着，通过合成黑色素的标准曲线，将所述测量的值计算为黑色素含量(melanincontent)。对于计算出的黑色素含量，以各实验组的蛋白质总量进行标准化后与对照组比较相对值，从而评价其功效。其结果示于下述表4及图3中。[表4]如表4及图3的结果所示，可以确认人参皂苷Rg1及Re处理组在因WIF-1而使黑色素合成受阻的黑素细胞中显示出促进黑色素生成的功效。抑制作为黑色素合成信号之一的Wnt信号的WIF-1阻碍黑色素的合成，因此会导致白发，综合上述表4及图3的结果和上述实施例2的结果可以确认，人参皂苷Re和Rg1通过抑制WIF-1的表达而使黑色素合成信号正常化，从而合成了黑色素，通过这些结果可以确认，用人参皂苷Re和Rg1进行处理的组能够提供优异的防止白发的功效。当前第1页1 2 3