使用胎盘细胞治疗糖尿病性周围神经病变的制作方法

1.技术领域

本文提供了使用组织培养塑料粘附胎盘细胞(例如，胎盘干细胞)治疗糖尿病性周围神经病变(DPN)的方法。

2.

背景技术：

胎盘是特别有吸引力的干细胞来源。由于哺乳动物胎盘丰富，且通常作为医疗废弃物被丢弃，因此它们代表了医学上有用的干细胞的独特来源。

3.

技术实现要素：

本文提供了治疗有需要的受试者中的糖尿病性周围神经病变(DPN)的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的组织培养塑料粘附胎盘细胞，例如胎盘干细胞，例如CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘干细胞。在一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞被配制成药物组合物。

在具体的实施方案中，根据本文提供的方法治疗的具有DPN的受试者患有I型糖尿病。在另一个具体实施方案中，根据本文提供的方法治疗具有DPN的受试者患有II型糖尿病。在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的受试者在手臂、手、腿或脚中的一个或多个具有DPN。在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的受试者在手臂、手、腿和脚中的每一个具有DPN。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的受试者具有DPN并且还具有引起受试者的外周血管系统中血流中断的病症。在一个具体的实施方案中，受试者患有外周动脉疾病(PAD)。在一个具体的实施方案中，受试者患有外周血管疾病。

在某些实施方案中，本文提供的方法导致根据本文提供的方法治疗的受试者中DPN的一种或多种症状的可检测的改善。DPN的示例性症状包括但不限于，对疼痛或温度变化的无感觉或感觉能力降低、四肢刺痛或烧灼感、剧烈疼痛或痛性痉挛、对触摸的敏感度增加、肌肉无力、反射丧失(如踝关节中)、失去平衡和/或协调、足部问题(如溃疡、感染、畸形及骨和关节疼痛)。

在某些实施方案中，本文提供的方法包括向患有DPN的受试者施用胎盘干细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)，其量和时间足以在一个或多个改善指标中实现可检测的改善。在一个具体的实施方案中，所述改善指标是，与基线相比，治疗后表皮神经纤维密度的变化。表皮神经纤维密度是用于评估糖尿病性外周神经病变的程度的量度。为了评估表皮神经纤维密度，测定皮肤活组织检查样品中神经纤维的数量。神经纤维数量/密度的增加指示神经病变的改善。

在某些实施方案中，本文提供的方法包括向患有DPN的受试者施用胎盘干细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)，其量和时间足以使受试者的生活质量得到可检测的改善，如通过例如以下评估的：(i)36项简式健康调查(36-item Short Form Health Survey)(SF-36)(参见，例如，Ware等，Medical Care 30(6)：473-483)；(ii)测量糖尿病性周围神经病变对生活质量的影响的糖尿病性周围神经病变量表简式(DFS-SF)(参见，例如，Bann等，Pharmacoeconomics，2003,21(17)：1277-90)；(iii)患者整体印象变化量表，用来评估神经病变随时间的变化(参见，例如，Kamper等，J.Man.Manip.Ther.，2009,17(3)：163-170)；和/或(iv)EuroQol5D(EQ-5D^TM)量表，其是用于获得患者健康状态的描述性概况和单一指标值的健康问卷。

在本文所述的治疗DPN的方法的具体实施方案中，通过注射施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文描述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，通过向所述受试者植入包含胎盘细胞的基质或支架将胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)施用于进行治疗的受试者。

在本文描述的治疗DPN的方法的具体实施方案中，肌肉内施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在另一具体实施方案中，在DPN区域(例如，在腿、脚、手臂或手的一个或多个中)肌肉内施用胎盘细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)。在另一具体实施方案中，在DPN区域附近肌肉内施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在另一个具体的实施方案中，在已诊断患有DPN的受试者的膝盖之下和脚踝之上施用胎盘细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文所述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，静脉内施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文描述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，皮下施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文描述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，局部地施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文所述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，全身地施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。

在某些实施方案中，本文描述的治疗DPN的方法包括施用约1×10³、3×10³、5×10³、1×10⁴、3×10⁴、5×10⁴、1×10⁵、3×10⁵、5×10⁵、1×10⁶、3×10⁶、5×10⁶、1×10⁷、3×10⁷、5×10⁷、1×10⁸、3×10⁸、5×10⁸、1×10⁹、5×10⁹或1×10¹⁰个胎盘细胞(例如，作为包含胎盘干细胞的药物组合物的部分)。在某些实施方案中，本文描述的治疗DPN的方法包括施用约1×10³至3×10³、3×10³至5×10³、5×10³至1×10⁴、1×10⁴至3×10⁴、3×10⁴至5×10⁴、5×10⁴至1×10⁵、1×10⁵至3×10⁵、3×10⁵至5×10⁵、5×10⁵至1×10⁶、1×10⁶至3×10⁶、3×10⁶至5×10⁶、5×10⁶至1×10⁷、1×10⁷至3×10⁷、3×10⁷至5×10⁷、5×10⁷至1×10⁸、1×10⁸至3×10⁸、3×10⁸至5×10⁸、5×10⁸至1×10⁹、1×10⁹至5×10⁹或5×10⁹至1×10¹⁰个胎盘细胞(例如，作为包含胎盘干细胞的药物组合物的部分)。在一个具体的实施方案中，本文所述的治疗DPN的方法包括施用约3×10⁶个胎盘细胞。在另一个具体实施方案中，本文所述的治疗DPN的方法包括施用约1×10⁷个胎盘细胞。在另一个具体实施方案中，本文所述的治疗DPN的方法包括施用约3×10⁷个胎盘细胞。

在本文所述的治疗DPN的方法的具体实施方案中，将所述胎盘干细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)肌肉内施用于受试者超过一次，施用之间间隔一周，例如，在第1天(施用的第一天)施用胎盘细胞，并在一周后(即在第8天)施用第二剂量的胎盘干细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在另一个具体的实施方案中，所述方法包括在施用的每一天(即在第1天和第8天)施用约3×10⁶个胎盘干细胞。在另一个具体的实施方案中，所述方法包括在施用的每一天(即在第1天和第8天)施用约3×10⁷个胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，在至少三个不同的场合将胎盘细胞施用于受试者，施用之间间隔约一周。

在本文描述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，将胎盘干细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)施用于受试者超过一次，施用之间间隔一个月，例如，在第1天(施用的第一天)施用胎盘细胞，并且在约一个月后(例如，在第27、28、29、30、31、32或33天)施用第二剂量的胎盘干细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)。在一个具体的实施方案中，所述方法包括在施用的每一天施用约3×10⁶个胎盘干细胞(例如，在第1天施用3×10⁶个胎盘干细胞，并且在第1天后约1个月，例如在第27、28、29、30、31、32或33天施用约3×10⁶个胎盘干细胞)。在另一个具体的实施方案中，所述方法包括在施用的每一天施用约3×10⁷个胎盘细胞(例如，在第1天施用3×10⁷个胎盘干细胞，并且在第1天后约1个月，例如在第27、28、29、30、31、32或33天施用约3×10⁷个胎盘干细胞)。在另一个具体的实施方案中，在至少三个不同的场合将被施用的胎盘细胞施用于受试者，施用之间间隔约一个月。

在某些实施方案中，使用多个不同的注射施用胎盘细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)的剂量，例如，通过多次注射被治疗的受试者来施用单剂量的胎盘细胞(例如，包含约3×10⁶个胎盘干细胞的剂量或包含约3×10⁷个胎盘干细胞的剂量)。在某些实施方案中，经2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次注射施胎盘细胞的剂量(例如，包含约3×10⁶个胎盘干细胞的剂量或包含约3×10⁷个胎盘干细胞的剂量)。在某些实施方案中，构成单剂量胎盘细胞的施用的单次注射可包含0.1ml的胎盘细胞(或其药物组合物)、0.2ml的胎盘细胞(或其药物组合物)、0.3ml的胎盘细胞(或其药物组合物)、0.4ml的胎盘细胞(或其药物组合物)或0.5ml的胎盘细胞(或其药物组合物)。在具体实施方案中，总共构成单剂量胎盘细胞(例如，包含约3×10⁶胎盘干细胞的剂量或包含约3×10⁷胎盘干细胞的剂量)的单次注射包含0.3ml的胎盘细胞。

在一个具体的实施方案中，通过15个单独的注射施用胎盘细胞的剂量(例如，包含约3×10⁶个胎盘干细胞的剂量或包含约3×10⁷个胎盘干细胞的剂量)，其中每次注射含有0.3ml的包含胎盘细胞(或其药物组合物)的溶液。在一个具体的实施方案中，所述施用是肌肉内施用。在另一个具体的实施方案中，所述施用是肌肉内施用，并且肌肉内注射是在患有DPN的受试者的膝盖以下和脚踝以上施用。

在一个具体的实施方案中，本文提供了治疗受试者中的DPN的方法，所述方法包括向所述受试者施用约3×10⁶个胎盘干细胞的剂量，其中(i)大约每月肌肉内施用所述胎盘干细胞，持续至少3个月(例如，在第1天；在第27、28、29、30、31或32天；以及在第56、57、58、59、60、61、62或63天施用胎盘干细胞)，(ii)每个剂量经15次单独注射施用，其中每次注射含有0.3ml包含胎盘细胞(或其药物组合物)的溶液，和(iii)所述肌肉内注射是在患有DPN的受试者的膝盖以下和脚踝以上施用。

在一个具体的实施方案中，本文提供了治疗受试者中的DPN的方法，所述方法包括向所述受试者施用约3×10⁷个胎盘干细胞的剂量，其中(i)大约每月肌肉内施用所述胎盘干细胞，持续至少3个月(例如，在第1天；在第27、28、29、30、31或32天；以及在第56、57、58、59、60、61、62或63天施用胎盘干细胞)，(ii)每个剂量经15次单独注射施用，其中每次注射含有0.3ml包含胎盘细胞(或其药物组合物)的溶液，和(iii)所述肌内注射是在患有DPN的受试者的膝盖以下和脚踝以上施用。

用于本文所述方法中的胎盘细胞粘附于组织培养塑料，并且是可通过例如流式细胞术检测的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺和CD200⁺。本文提供的方法中使用的胎盘细胞的其它特征在4.1节中描述。包含待用于本文提供的方法中的胎盘干细胞的组合物(例如药物组合物)在4.3节中描述。

3.1定义

当提及所陈述的数值时，如本文所使用的术语“约”表示在所述数值的正负10％内的值。

如本文所用，术语“源自”是指分离自或以其他方式纯化的。例如，源自胎盘的粘附细胞是从胎盘分离的。术语“源自”涵盖从直接从组织(例如胎盘)分离的细胞培养的细胞，以及从初级分离株培养或扩增的细胞。

如本文所用的术语“分离的细胞”，例如“分离的胎盘细胞”、“分离的胎盘干细胞”等是指与干细胞源自其中的组织(例如，胎盘)的其他不同细胞基本上分离的细胞。如果从干细胞中移除(例如在干细胞的收集和/或培养过程中)至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或至少99％的干细胞与之天然相关的细胞(例如非干细胞)或者显示不同标志物谱的干细胞，则细胞是“分离的”。

如本文所用，术语“分离细胞的群体”是指与细胞群体所来源的组织(例如胎盘)的其他细胞基本上分离的细胞群体。

如本文所用，术语“胎盘细胞”是指从哺乳动物胎盘分离的(例如在下文4.1节中所述)，或者从哺乳动物胎盘分离的细胞培养的(作为初级分离物或培养的细胞)干细胞或祖细胞，无论原代培养后的传代次数如何。但是，在某些实施方案中，如本文所使用的术语“胎盘细胞”不是指滋养层、细胞滋养层、合胞体滋养层、血管母细胞、成血管细胞、胚胎生殖干细胞、胚胎干细胞、从胚泡的内细胞团获得的细胞或从后期胚的生殖脊获得的细胞例如胚胎生殖细胞。

如本文所使用的，当特定标志物可检测到高于背景时，胎盘细胞对于该标志物是“阳性的”。例如，可以通过使用抗体，或者通过基于编码该标志物的基因或mRNA的序列的寡核苷酸探针或引物来实现特定标志物的检测。例如，胎盘细胞对于例如CD73是阳性的，因为CD73在胎盘细胞上可以可检测地高于背景(与例如同种型对照相比)的量检测。当标志物可以用于将细胞与至少一种其他细胞类型区分时或者在存在或被细胞表达时可以用于选择或分离细胞时，细胞对于该标志物也是阳性的。在例如抗体介导的检测的情况下，作为存在特定细胞表面标志物的指示的“阳性”是指该标志物使用对该标志物特异性的抗体例如荧光标记的抗体可检测；“阳性”还指以产生可检测地高于背景的信号(例如在细胞计数器中)的量表现标志物的细胞。例如，细胞是“CD200⁺”，其中细胞用对CD200特异的抗体可检测地标记，并且来自抗体的信号可检测地高于对照(例如背景或同种型对照)的信号。相反，在相同的情况下，“阴性”是指与对照(例如背景或同种型对照)相比，细胞表面标志物使用对该标志物特异性的抗体不能检测到。例如，细胞是“CD34^–”，其中细胞不能以比对照(例如背景或同种型对照)更高的程度用对CD34特异性的抗体可再现地可检测地标记。使用抗体未检测到或不能检测到的标志物使用适当的对照以相似的方式确定为阳性或阴性的。例如，如果在来自细胞或细胞群体的RNA中检测到的OCT-4RNA的量可检测地高于背景，例如通过检测RNA的方法如RT-PCR、狭缝印迹等测定的，则细胞或细胞群体可以确定为OCT-4⁺。除非本文另有说明，使用抗体检测分化群(“CD”)标志物。在某些实施方案中，如果OCT-4使用RT-PCR可检测，则确定OCT-4存在，并且细胞是“OCT-4⁺”。

如本文所用，术语“受试者”、“患者”和“个体”可以互换使用来指用本文所述的治疗方法治疗的哺乳动物。在具体实施方案中，待治疗的受试者是人。

4.具体实施方式

本文提供了治疗有需要的受试者中的糖尿病性周围神经病变(DPN)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的组织培养塑料粘附胎盘细胞，例如胎盘干细胞，例如CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘干细胞。在一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞被配制成药物组合物。

在具体的实施方案中，根据本文提供的方法所治疗的具有DPN的受试者患有I型糖尿病。在另一个具体实施方案中，根据本文提供的方法所治疗的具有DPN的受试者患有II型糖尿病。在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的受试者在手臂、手、腿或脚中的一个或多个具有DPN。在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的受试者在手臂、手、腿和脚中的每一个具有DPN。

在某些实施方案中，根据本文提供的方法治疗的受试者具有DPN并且还具有引起受试者的外周脉管系统中的血流中断的病症。在一个具体的实施方案中，受试者患有外周动脉疾病(PAD)。在一个具体的实施方案中，受试者患有外周血管疾病。

在某些实施方案中，本文提供的方法导致根据本文提供的方法治疗的受试者中DPN的一种或多种症状的可检测的改善。DPN的示例性症状包括但不限于，对疼痛或温度变化的无感觉或感觉能力降低、四肢刺痛或烧灼感、剧烈疼痛或痛性痉挛、对触摸的敏感度增加、肌肉无力、反射丧失(如踝关节中)、失去平衡和/或协调、足部问题(如溃疡、感染、畸形及骨关和节疼痛)。

在某些实施方案中，本文提供的方法包括向患有DPN的受试者施用胎盘干细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)，其量和时间足以在一个或多个改善指标中实现可检测的改善。在一个具体的实施方案中，所述改善指标是，与基线相比，治疗后表皮神经纤维密度的变化。表皮神经纤维密度是用于评估糖尿病性外周神经病变的程度的量度。为了评估表皮神经纤维密度，测定皮肤活组织检查样品中神经纤维的数量。神经纤维数量/密度的增加指示神经病变的改善。

在某些实施方案中，本文提供的方法包括向患有DPN的受试者施用胎盘干细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)，其量和时间足以使受试者的生活质量得到可检测的改善，如通过，例如(i)36项简式健康调查(SF-36)(参见，例如，Ware等，Medical Care 30(6)：473-483)；(ii)测量糖尿病性周围神经病变对生活质量的影响的糖尿病性周围神经病变量表简式(DFS-SF)(参见，例如，Bann等，Pharmacoeconomics，2003,21(17)：1277-90)；(iii)患者整体印象变化量表，用来评估神经病变随时间的变化(参见，例如，Kamper等，J.Man.Manip.Ther.，2009,17(3)：163-170)；和/或(iv)EuroQol5D(EQ-5D^TM)量表，其是用于获得患者健康状态的描述性概况和单一指标值的健康问卷，评估的。

在本文所述的治疗DPN的方法的具体实施方案中，通过注射施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文描述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，通过向所述受试者植入包含胎盘细胞的基质或支架将胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)施用于进行治疗的受试者。

在本文描述的治疗DPN的方法的具体实施方案中，肌肉内施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在另一具体实施方案中，在DPN区域(例如，在腿、脚、手臂或手中的一个或多个)中肌肉内施用胎盘细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)。在另一具体实施方案中，在DPN区域附近肌肉内施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在另一个具体的实施方案中，在已诊断患有DPN的受试者的膝盖以下和脚踝以上施用胎盘细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文所述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，静脉内施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文描述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，皮下施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文描述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，局部地施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在本文所述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，全身地施用胎盘细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。

在某些实施方案中，本文描述的治疗DPN的方法包括施用约1×10³、3×10³、5×10³、1×10⁴、3×10⁴、5×10⁴、1×10⁵、3×10⁵、5×10⁵、1×10⁶、3×10⁶、5×10⁶、1×10⁷、3×10⁷、5×10⁷、1×10⁸、3×10⁸、5×10⁸、1×10⁹、5×10⁹或1×10¹⁰个胎盘细胞(例如，作为包含胎盘干细胞的药物组合物的部分)。在某些实施方案中，本文描述的治疗DPN的方法包括施用约1×10³至3×10³、3×10³至5×10³、5×10³至1×10⁴、1×10⁴至3×10⁴、3×10⁴至5×10⁴、5×10⁴至1×10⁵、1×10⁵至3×10⁵、3×10⁵至5×10⁵、5×10⁵至1×10⁶、1×10⁶至3×10⁶、3×10⁶至5×10⁶、5×10⁶至1×10⁷、1×10⁷至3×10⁷、3×10⁷至5×10⁷、5×10⁷至1×10⁸、1×10⁸至3×10⁸、3×10⁸至5×10⁸、5×10⁸至1×10⁹、1×10⁹至5×10⁹或5×10⁹至1×10¹⁰个胎盘细胞(例如，作为包含胎盘干细胞的药物组合物的部分)。在一个具体的实施方案中，本文所述的治疗DPN的方法包括施用约3×10⁶个胎盘细胞。在另一个具体实施方案中，本文所述的治疗DPN的方法包括施用约1×10⁷个胎盘细胞。在另一个具体实施方案中，本文所述的治疗DPN的方法包括施用约3×10⁷个胎盘细胞。

在本文所述的治疗DPN的方法的具体实施方案中，将胎盘干细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)肌肉内施用于受试者超过一次，施用之间间隔一周，例如，在第1天(施用的第一天)施用胎盘细胞，并在一周后(即在第8天)施用第二剂量的胎盘干细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)。在另一个具体的实施方案中，所述方法包括在施用的每一天(即在第1天和第8天)施用约3×10⁶个胎盘干细胞。在另一个具体的实施方案中，所述方法包括在施用的每一天(即在第1天和第8天)施用约3×10⁷个胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，在至少三个不同的场合将胎盘细胞施用于受试者，施用之间间隔约一周。

在本文所述的治疗DPN的方法的另一个具体实施方案中，将胎盘干细胞(例如，包含胎盘干细胞的药物组合物)施用于受试者超过一次，给药之间间隔一个月，例如，在第1天(施用的第一天)施用胎盘细胞，并且在约一个月后(例如，在第27、28、29、30、31、32或33天)施用第二剂量的胎盘干细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)。在一个具体的实施方案中，所述方法包括在施用的每一天施用约3×10⁶个胎盘干细胞(例如，在第1天施用3×10⁶个胎盘干细胞，并且在第1天后约1个月，例如在第27、28、29、30、31、32或33天施用约3×10⁶个胎盘干细胞)。在另一个具体的实施方案中，所述方法包括在施用的每一天施用约3×10⁷个胎盘细胞(例如，在第1天施用3×10⁷个胎盘干细胞，并且在第1天后约1个月，例如在第27、28、29、30、31、32或33天施用约3×10⁷个胎盘干细胞)。在另一个具体的实施方案中，在至少三个不同的场合将被施用的胎盘细胞施用于受试者，施用之间间隔约一个月。

在某些实施方案中，使用多个不同的注射施用胎盘细胞(例如包含胎盘干细胞的药物组合物)的剂量，例如，通过多次注射被治疗的受试者来施用单剂量的胎盘细胞(例如，包含约3×10⁶个胎盘干细胞的剂量或包含约3×10⁷个胎盘干细胞的剂量)。在某些实施方案中，经2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次注射施用胎盘细胞的剂量(例如，包含约3×10⁶个胎盘干细胞的剂量或包含约3×10⁷个胎盘干细胞的剂量)。在某些实施方案中，构成单剂量胎盘细胞施用的单个注射可包含0.1ml的胎盘细胞(或其药物组合物)、0.2ml的胎盘细胞(或其药物组合物)、0.3ml的胎盘细胞(或其药物组合物)、0.4ml的胎盘细胞(或其药物组合物)或0.5ml的胎盘细胞(或其药物组合物)。在具体实施方案中，总体构成胎盘细胞单剂量(例如，包含约3×10⁶胎盘干细胞的剂量或包含约3×10⁷胎盘干细胞的剂量)的单个注射包含0.3ml的胎盘细胞。

在一个具体的实施方案中，经15个单独的注射施用胎盘细胞的剂量(例如，包含约3×10⁶个胎盘干细胞的剂量或包含约3×10⁷个胎盘干细胞的剂量)，其中每次注射含有0.3ml的包含胎盘细胞(或其药物组合物)的溶液。在一个具体的实施方案中，所述施用是肌肉内施用。在另一个具体的实施方案中，所述施用是肌肉内施用，并且肌肉内注射是在患有DPN的受试者的膝盖以下和脚踝以上施用。

在一个具体的实施方案中，本文提供了治疗受试者中的DPN的方法，所述方法包括向所述受试者施用约3×10⁶个胎盘干细胞的剂量，其中(i)大约每月肌肉内施用所述胎盘干细胞，持续至少3个月(例如，在第1天；在第27、28、29、30、31或32天；以及在第56、57、58、59、60、61、62或63天施用胎盘干细胞)，(ii)每个剂量经15次单独注射施用，其中每次注射含有0.3ml包含胎盘细胞(或其药物组合物)的溶液，和(iii)所述肌肉内注射是在患有DPN的受试者的膝盖以下和脚踝以上施用。

在一个具体的实施方案中，本文提供了治疗受试者中的DPN的方法，所述方法包括向所述受试者施用约3×10⁷个胎盘干细胞的剂量，其中(i)大约每月肌肉内施用所述胎盘干细胞，持续至少3个月(例如，在第1天；在第27、28、29、30、31或32天；以及在第56、57、58、59、60、61、62或63天施用胎盘干细胞)，(ii)每个剂量经15次单独注射施用，其中每次注射含有0.3ml包含胎盘细胞(或其药物组合物)的溶液，和(iii)所述肌肉内注射是在患有DPN的受试者的膝盖以下和脚踝以上施用。

用于本文所述方法中的胎盘细胞粘附于组织培养塑料，并且是可通过例如流式细胞术检测的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺和CD200⁺。本文提供的方法中使用的胎盘细胞的其它特征在4.1节中描述。包含待用于本文提供的方法中的胎盘干细胞的组合物(例如药物组合物)在4.3节中描述。

4.1分离的胎盘细胞和分离的胎盘细胞群体

在本文提供的治疗DPN的方法中有用的分离的胎盘细胞，有时在本文中称为PDAC(并且有时也称为“PDA-002”)，可从胎盘或其部分获得，粘附到组织培养基质，并具有多能细胞或干细胞的特征，但不是滋养层细胞。在某些实施方案中，可用于本文公开的方法的分离的胎盘细胞具有分化成非胎盘细胞类型的能力。

可用于本文公开的方法的分离的胎盘细胞可以是胎儿或母体起源的(即，可以分别具有胎儿或母体的基因型)。优选地，分离的胎盘细胞和分离的胎盘细胞群体是胎儿起源的。如本文所用，短语“胎儿起源的”或“非母体起源的”表示分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体是从与胎儿相关的脐带或胎盘结构获得的，即具有胎儿基因型。如本文所用，短语“母体起源的”表示细胞或细胞群体从与母亲相关的胎盘结构，例如具有母体基因型的胎盘结构获得。分离的胎盘细胞(例如PDAC)或包含分离的胎盘细胞的细胞群体可以包含仅胎儿或母体起源的分离的胎盘细胞，或者可以包含胎儿和母体起源的分离的胎盘细胞的混合群体。分离的胎盘细胞和包含分离的胎盘细胞的细胞群体可通过下文讨论的形态学、标志物和培养物特征来鉴定和选择。在某些实施方案中，任何胎盘细胞(例如本文所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞)对于接受体(例如具有DPN的个体)是自体的。在某些其他实施方案中，任何胎盘细胞(例如本文所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞)对于接受体(例如具有DPN的个体)是异源的。

4.1.1物理和形态学特征

当在原代培养物或细胞培养物中培养时，本文所述的分离的胎盘细胞(PDAC)粘附于组织培养基质，例如组织培养容器表面(例如组织培养塑料)或包被有细胞外基质或配体如层粘连蛋白、胶原(例如，天然的或变性的)、明胶、纤连蛋白、鸟氨酸、玻璃粘连蛋白和细胞外膜蛋白的组织培养表面(例如，(BD Discovery Labware,Bedford,Mass.))。培养中的分离的胎盘细胞通常呈现出成纤维细胞样，星状外观，并具有从中央细胞体延伸的多个胞质突。然而，细胞在形态学上是与相同条件下培养的成纤维细胞可区分的，因为分离的胎盘细胞比成纤维细胞显示出更多的这种胞质突。在形态学上，分离的胎盘细胞也可与造血干细胞区分开来，造血干细胞通常在培养物中呈现更圆的或鹅卵石的形态。

在某些实施方案中，当在生长培养基中培养时，可用于本文公开的方法的分离的胎盘细胞发育成胚样体。胚样体是不连续的细胞团块，其可以在增生的分离胎盘细胞的粘附层的顶部上生长。使用术语“胚样的”是因为细胞团块类似于类胚体，从胚胎干细胞的培养物生长的细胞团块。胚样体在其中可发育成分离的胎盘细胞的增殖培养物的生长培养基包括含有，例如，DMEM-LG(例如，来自Gibco)；2％胎牛血清(例如来自Hyclone Labs.)；1x胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)；1x亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA)；10^-9M地塞米松(例如，来自Sigma)；10^-4M抗坏血酸2-磷酸酯(例如，来自Sigma)；表皮生长因子10ng/mL(例如，来自R&D Systems)；和血小板源生长因子(PDGF-BB)10ng/mL(例如，来自R&D Systems)的培养基。

4.1.2细胞表面、分子和遗传标志物

在本文公开的方法(例如，治疗受试者的DPN的方法)中有用的分离的胎盘细胞，例如分离的多能胎盘细胞或分离的胎盘干细胞以及这种分离的胎盘细胞的群体，是具有多能细胞或干细胞特征的组织培养塑料粘附人胎盘细胞，并表达可用于鉴定和/或分离包含干细胞的细胞或细胞群体的多种标志物。在某些实施方案中，PDAC是血管生成的，例如在体外或体内。本文所述的分离的胎盘细胞和胎盘细胞群体(即两个或更多个分离的胎盘细胞)包括直接从胎盘或其任何部分(例如，绒毛膜、胎盘小叶等)获得的胎盘细胞和含胎盘细胞的细胞群体。分离的胎盘细胞群体还包括培养中的分离的胎盘细胞群体(即两个或更多个)，以及容器(例如，袋)中的群体。本文所述的分离的胎盘细胞不是骨髓来源的间充质细胞、脂肪来源的间充质干细胞或从脐带血、胎盘血或外周血获得的间充质细胞。可用于本文所述的方法和组合物中的胎盘细胞，例如胎盘多能细胞和胎盘细胞，被描述于本文中，并且被描述于，例如，美国专利号7,311,904；7,311,905和7,468,276中；和美国专利申请公开号2007/0275362中，其公开内容通过引用整体并入本文。

在某些实施方案中，分离的胎盘细胞是分离的胎盘干细胞。在某些其他实施方案中，分离的胎盘细胞是分离的胎盘多能细胞。在一个实施方案中，分离的胎盘细胞(例如，PDAC)是如通过流式细胞术检测的CD34^–、CD10⁺和CD105⁺。在另一个具体实施方案中，分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞具有分化成神经表型的细胞、成骨表型的细胞和/或成软骨表型的细胞的潜力。在另一个具体的实施方案中，分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外是CD200⁺。在另一个具体实施方案中，分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外是CD45^–或CD90⁺。在另一个具体实施方案中，如通过流式细胞术检测的，分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞另外是CD45^–或CD90⁺。在另一个具体的实施方案中，如通过流式细胞术检测，分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞另外是CD90⁺或CD45^–。在另一个具体的实施方案中，如通过流式细胞术检测的，分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺胎盘细胞另外是CD90⁺和CD45^–，即细胞是CD34^–、CD10⁺、CD45^–、CD90⁺、CD105⁺和CD200⁺。在另一个具体的实施方案中，所述CD34^–、CD10⁺、CD45^–、CD90⁺、CD105⁺、CD200⁺细胞另外是CD80^-和CD86^-。

在某些实施方案中，所述胎盘细胞，通过流式细胞术检测的，是CD34^–、CD10⁺、CD105⁺和CD200+以及CD38^–、CD45^–、CD80^-、CD86^-、CD133^–、HLA-DR,DP,DQ^-、SSEA3^-、SSEA4^-、CD29⁺、CD44⁺、CD73⁺、CD90⁺、CD105⁺、HLA-A,B,C⁺、PDL1⁺、ABC-p⁺和/或OCT-4⁺中的一种或多种。在其他实施方案中，上述任何CD34^–、CD10⁺、CD105⁺细胞另外是CD29⁺、CD38^–、CD44⁺、CD54⁺、SH3⁺或SH4⁺中的一种或多种。在另一个具体实施方案中，细胞另外是CD44⁺。在上述任何分离的CD34^–、CD10⁺、CD105⁺胎盘细胞的另一个具体实施方案中，细胞另外是CD117^–、CD133^–、KDR^-(VEGFR2^-)、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^–或程序性死亡-1配体(PDL1)⁺中的一种或多种，或其任何组合。

在另一个实施方案中，CD34–、CD10+、CD105+细胞另外是CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD62E–、CD62L–、CD62P–、SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+)、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-cadherinlow、CD184/CXCR4–、CD200+、CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4–、ABC-p+、KDR–(VEGFR2–)、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR–、HLA-G–或程序性死亡-1配体(PDL1)+中的一种或多种，或者它们的任何组合。在另一个实施方案中，CD34–、CD10+、CD105+细胞另外是CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62E–、CD62L–、CD62P–、SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+)、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-cadherinlow、CD184/CXCR4–、CD200+、CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4–、ABC-p+、KDR–(VEGFR2–)、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR–、HLA-G–和程序性死亡-1配体(PDL1)+。

在另一个具体的实施方案中，本文描述的任何胎盘细胞另外是如通过流式细胞术检测的ABC-p+或如通过RT-PCR测定的OCT-4+(POU5F1+)，其中ABC-p是胎盘特异性ABC转运蛋白(又称乳腺癌抗性蛋白(BCRP)和米托蒽醌抗性蛋白(MXR))，和OCT-4是Octamer-4蛋白(POU5F1)。在另一个具体的实施方案中，本文描述的任何胎盘细胞另外是如流式细胞术所测定的SSEA3-或SSEA4–，其中SSEA3是阶段特异性胚胎抗原3，并且SSEA4是阶段特异性胚胎抗原4。在另一个具体实施方案中，任何本文所述的胎盘细胞另外是SSEA3–和SSEA4–。

在另一具体实施方案中，本文所述的任何胎盘细胞另外是MHC-I+(例如，HLA-A,B,C+)、MHC-II–(例如，HLA-DP,DQ,DR–)或HLA-G–中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，本文所述的任何胎盘细胞另外是MHC-I+(例如，HLA-A,B,C+)、MHC-II–(例如，HLA-DP,DQ,DR–)和HLA-G–中的一种或多种。

本文还提供了可用于本文公开的方法和组合物中的分离的胎盘细胞群或细胞群体，例如胎盘细胞群体，其包含(例如富集)分离的胎盘细胞。包含分离的胎盘细胞的优选细胞群体，其中细胞群体包含，例如，至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％的分离的CD10+、CD105+和CD34–胎盘细胞；即所述群体中至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％的细胞是分离的CD10+、CD105+和CD34–胎盘细胞。在具体的实施方案中，分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞另外是CD200+。在另一个具体的实施方案中，如通过流式细胞术检测的，分离的CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘细胞另外是CD90+或CD45–。在另一个具体实施方案中，如通过流式细胞术检测的，分离的CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘细胞另外是CD90+和CD45–。在另一具体实施方案中，上述任何分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞另外是CD29+、CD38–、CD44+、CD54+、SH3+或SH4+中的一种或多种。在另一个具体的实施方案中，分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞或分离的CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘细胞另外是CD44+。在包含以上分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞的任何细胞群体的具体实施方案中，分离的胎盘细胞另外是CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD62E–、CD62L–、CD62P–、SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+)、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-cadherinlow、CD184/CXCR4–、CD200+、CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4–、ABC-p+、KDR–(VEGFR2–)、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR–、HLA-G–或程序性死亡-1配体(PDL1)+中的一种或多种，或其任何组合。在另一个具体实施方案中，CD34–、CD10+、CD105+细胞另外是CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62E-–、CD62L–、CD62P–、SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+)、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-cadherinlow、CD184/CXCR4–、CD200+、CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4–、ABC-p+、KDR–(VEGFR2–)、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR–、HLA-G–和程序性死亡-1配体(PDL1)+。

在某些实施方案中，可用于本文所述方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–、SSEA4–、OCT-4+和ABC-p+中的一种或多种或者全部，其中所述分离的胎盘细胞通过胎盘组织的物理和/或酶促破坏而获得。在一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+和ABC-p+。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+和CD34–，其中所述分离的胎盘细胞具有以下特征中的至少一种：CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH3+、SH4+、SSEA3–和SSEA4–。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+、CD34–、CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH3+、SH4+、SSEA3–和SSEA4–。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+、CD34–、SSEA3–和SSEA4–。在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+和CD34–，且是SH2+或SH3+任一。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+、CD34–、SH2+和SH3+。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+、CD34–、SSEA3–和SSEA4–，且是SH2+或SH3+任一。在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+和CD34–，且是SH2+或SH3+任一，并且是CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SSEA3–或SSEA4–中的至少一种。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+、CD34–、CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SSEA3–和SSEA4–，且是SH2+或SH3+任一。

在另一个实施方案中，可用于本文公开的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是SH2+、SH3+、SH4+和OCT-4+。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞是CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+、CD34–、CD45–、SSEA3–或SSEA4–。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–和SSEA4–。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞是SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–和SSEA4–、CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+、OCT-4+、CD34–或CD45–。

在另一个实施方案中，用于本文公开的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+和SH4+，其中所述分离的胎盘细胞另外是OCT-4+、SSEA3–或SSEA4–中的一种或多种。

在某些实施方案中，可用于本文公开的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD200+或HLA-G–。在一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是CD200+和HLA-G–。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞另外是CD73+和CD105+。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一具体实施方案中，所述干细胞是CD34–、CD38–、CD45–、CD73+和CD105+。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200+或HLA-G–胎盘细胞在允许胚样体形成的条件下促进在包含分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体中胚样体的形成。在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞与不是干细胞或多能细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含(例如，富集)CD200+、HLA-G–干细胞的细胞群体。在一个具体的实施方案中，所述群体是胎盘细胞群体。在各种实施方案中，所述细胞群体中至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％或至少约60％的细胞是分离的CD200+、HLA-G–胎盘细胞。优选地，所述细胞群体中至少约70％的细胞是分离的CD200+、HLA-G–胎盘细胞。更优选地，至少约90％、95％或99％的所述细胞是分离的CD200+、HLA-G–胎盘细胞。在细胞群体的具体实施方案中，所述分离的CD200+、HLA-G–胎盘细胞也是CD73+和CD105+。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200+、HLA-G–胎盘细胞也是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200+、HLA-G–胎盘细胞也是CD34–、CD38–、CD45–、CD73+和CD105+。在另一个实施方案中，所述细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时产生一个或多个胚样体。在另一个具体实施方案中，所述细胞群体与不是干细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200+、HLA-G–胎盘细胞与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD73+、CD105+和CD200+。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞是HLA-G–。在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞是CD34–、CD38–、CD45–和HLA-G–。在另一个具体的实施方案中，当群体在允许形成胚样体的条件下培养时，分离的CD73+、CD105+和CD200+胎盘细胞促进在包含分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚样体。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞与不是分离的胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述方法和组合物的细胞群体是包含(例如富集)分离的CD73+、CD105+、CD200+胎盘细胞的细胞群体。在各种实施方案中，所述细胞群体中至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％或至少约60％的细胞是分离的CD73+、CD105+、CD200+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中至少约70％的所述细胞是分离的CD73+、CD105+、CD200+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中至少约90％、95％或99％的细胞是分离的CD73+、CD105+、CD200+胎盘细胞。在所述群体的具体实施方案中，分离的胎盘细胞是HLA-G–。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞另外是CD34–、CD38–、CD45–和HLA-G–。在另一个具体的实施方案中，当在允许形成胚样体的条件下培养时，所述细胞群体产生一个或多个胚样体。在另一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞群体与不是干细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述胎盘细胞群体与不显示这些特征的胎盘细胞分离。

在某些其他实施方案中，分离的胎盘细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD44+、CD45–，CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–、SSEA4–、OCT-4+、HLA-G–或ABC-p+中的一种或多种。在具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3-、SSEA4–和OCT-4+。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD45–、CD54+、SH2+、SH3+和SH4+。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD45–、CD54+、SH2+、SH3+、SH4+和OCT-4+。在另一具体实施方案中，分离的胎盘细胞是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、HLA-G–、SH2+、SH3+、SH4+。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+和ABC-p+。在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是SH2+、SH3+、SH4+和OCT-4+。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+、CD34–、SSEA3–和SSEA4–。在一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4+、CD34–、SSEA3–和SSEA4–胎盘细胞另外是CD10+、CD29+、CD34–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+和SH4+。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是OCT-4+和CD34–，且是SH3+或SH4+任一。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是CD34–，且是CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+或OCT-4+任一。

在另一个实施方案中，可用于本文所述方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD200+和OCT-4+。在具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是CD73+和CD105+。在另一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞是HLA-G–。在另一个具体实施方案中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体实施方案中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞是CD34–、CD38–和CD45–。在另一具体实施方案中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞是CD34–、CD38–、CD45–、CD73+、CD105+和HLA-G–。在另一个具体的实施方案中，当群体在允许形成胚样体的条件下培养时，分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞促进由包含分离的细胞的胎盘细胞群体产生一个或多个胚样体。在另一具体实施方案中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞与不是干细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体实施方案中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞与不显示这些特征的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含(例如富集)CD200+、OCT-4+胎盘细胞的细胞群体。在各种实施方案中，所述细胞群体中至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％或至少约60％的细胞是分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞。在另一个实施方案中，至少约70％的所述细胞是所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中至少约80％、90％、95％或99％的细胞是所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞。在分离的群体的具体实施方案中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞另外是CD73+和CD105+。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞另外是HLA-G–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一具体实施方案中，所述分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–、CD45–、CD73+、CD105+和HLA-G–。在另一个具体的实施方案中，细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时产生一个或多个胚样体。在另一个具体实施方案中，所述细胞群体与不是分离的CD200+、OCT-4+胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另一具体实施方案中，所述细胞群体与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述方法和组合物中的分离的胎盘细胞是CD73+、CD105+和HLA-G–。在另一个具体的实施方案中，分离的CD73+、CD105+和HLA-G–胎盘细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一具体实施方案中，分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施方案中，分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞另外是OCT-4+。在另一个具体实施方案中，分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞另外是CD200+。在另一个具体的实施方案中，分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞另外是CD34–、CD38–、CD45–、OCT-4+和CD200+。在另一个具体的实施方案中，当群体在允许形成胚样体的条件下培养时，分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞促进包含所述细胞的胎盘细胞群体中胚样体的形成。在另一具体实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞与不是分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含(例如富集)分离的CD73+、CD105+和HLA-G–胎盘细胞的细胞群体。在各种实施方案中，所述细胞群体中至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％或至少约60％的细胞是分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中至少约70％的细胞是分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中至少约90％、95％或99％的细胞是分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞。在上述群体的具体实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一具体实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞另外是OCT-4+。在另一具体实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞另外是CD200+。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞另外是CD34–、CD38–、CD45–、OCT-4+和CD200+。在另一个具体实施方案中，所述细胞群体与不是CD73+、CD105+、HLA-G–胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另一具体实施方案中，所述细胞群体与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，在本文所述的方法和组合物中有用的分离的胎盘细胞是CD73+和CD105+，并且包含所述CD73+、CD105+细胞的分离的胎盘细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时，促进所述群体中一个或多个胚样体的形成。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一具体实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞另外是OCT-4+。在另一具体实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞另外是OCT-4+、CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞与不是所述细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞与不显示这些特征的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含(例如富集)作为CD73+、CD105+的分离的胎盘细胞的细胞群体，并当包含所述细胞的分离的胎盘细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时，促进所述群体中一个或多个胚样体的形成。在各种实施方案中，所述细胞群体中至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％或至少约60％的细胞是所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约70％的细胞是所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中至少约90％、95％或99％的细胞是所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞。在上述群体的具体实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞另外是OCT-4+。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞另外是CD200+。在另一个具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–、CD45–、OCT-4+和CD200+。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体与不是所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另一具体实施方案中，所述细胞群体与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是OCT-4+，并且当在允许形成胚样体的条件下培养时，促进包含所述细胞的分离的胎盘细胞群体中一个或多个胚样体的形成。在一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞另外是CD73+和CD105+。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞另外是CD200+。在另一具体实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞另外是CD73+、CD105+、CD200+、CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞与不是OCT-4+胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞与不显示这些特征的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含(例如富集)为OCT-4+的分离的胎盘细胞的细胞群体，并当包含所述细胞的分离的胎盘细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时，促进所述群体中一个或多个胚样体的形成。在各种实施方案中，所述细胞群体中的至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％或至少约60％的细胞是所述分离的OCT-4+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中至少约70％的细胞是所述分离的OCT-4+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群体中至少约80％、90％、95％或99％的细胞是所述分离的OCT-4+胎盘细胞。在上述群体的具体实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–或CD45–。在另一个具体实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞另外是CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞另外是CD73+和CD105+。在另一个具体的实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞另外是CD200+。在另一具体实施方案中，所述分离的OCT-4+胎盘细胞另外是CD73+、CD105+、CD200+、CD34–、CD38–和CD45–。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群体与不是所述细胞的胎盘细胞分离。在另一具体实施方案中，所述细胞群体与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的HLA-A,B,C+、CD45–、CD133–和CD34–胎盘细胞。在另一个实施方案中，用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述分离的细胞群体中至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的细胞是分离的HLA-A,B,C+、CD45–、CD133–和CD34–胎盘细胞。在一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体与不是HLA-A,B,C+、CD45–、CD133–和CD34–胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体起源的。在另一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞群体基本上不含母体组分；例如所述分离的胎盘细胞群体中至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的所述细胞是非母体起源的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的CD10+、CD13+、CD33+、CD45–、CD117–和CD133–胎盘细胞。在另一个实施方案中，用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述细胞群体中至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的细胞是分离的CD10+、CD13+、CD33+、CD45–、CD117–和CD133–胎盘细胞。在一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体与不是所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体实施方案中，所述分离的CD10+、CD13+、CD33+、CD45–、CD117–和CD133–胎盘细胞是非母体起源的，即具有胎儿基因型。在另一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞群体中至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的所述细胞是非母体起源的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体与不显示这些特征的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的CD10–、CD33–、CD44+、CD45–和CD117–胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含(例如富集)分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述细胞群体中至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的细胞是分离的CD10–、CD33–、CD44+、CD45–和CD117–胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体与不是所述细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体起源的。在另一个具体实施方案中，所述细胞群体中至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的所述细胞是非母体起源的。在另一具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的CD10–、CD13–、CD33–、CD45–和CD117–胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体是包含(例如富集)分离的CD10–、CD13–、CD33–、CD45–和CD117–胎盘细胞的细胞群体，其中所述群体中至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的细胞是CD10–、CD13–、CD33–、CD45–和CD117–胎盘细胞。在一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体与不是所述细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体起源的。在另一个具体实施方案中，所述细胞群中至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的所述细胞是非母体起源的。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体与不显示这些特征的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是HLA A,B,C+、CD45–、CD34–和CD133–，和另外是CD10+、CD13+、CD38+、CD44+、CD90+、CD105+、CD200+和/或HLA-G–，和/或对于CD117是阴性的。在另一个实施方案中，可用于本文所述方法中的细胞群体是包含分离的胎盘细胞的细胞群体，其中所述群体中至少约20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或约99％的细胞是分离的胎盘细胞，其是HLA A,B,C–、CD45–、CD34–、CD133–，并且另外对CD10、CD13、CD38、CD44、CD90、CD105、CD200是阳性的和/或对于CD117和/或HLA-G是阴性的。在一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体与不是所述细胞的胎盘细胞分离。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体起源的。在另一个具体实施方案中，所述细胞群体中至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的所述细胞是非母体起源。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体与不显示这些标志物的胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是如通过抗体结合测定的为CD200+和CD10+以及如通过抗体结合和RT-PCR测定的为CD117–的分离的胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于本文所述方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞，其为CD10+、CD29–、CD54+、CD200+、HLA-G–、MHC I类+和β-2-微球蛋白+。在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是胎盘细胞，其中至少一种细胞标志物的表达比间充质干细胞(例如骨髓来源的间充质干细胞)高至少两倍。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞是非母体起源的。在另一个具体实施方案中，所述细胞群体中的至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的所述细胞是非母体起源的。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞，其是CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62E–、CD62L–、CD62P–、CD80–、CD86–、CD103–、CD104–、CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE--cadherinlow、CD184/CXCR4–、β2-microglobulinlow、MHC-Ilow、MHC-II–、HLA-Glow和/或PDL1low中的一种或多种。在一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是至少CD29+和CD54+。在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是至少CD44+和CD106+。在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞是至少CD29+。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的细胞群体包含分离的胎盘细胞，和所述细胞群体中的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％的细胞是分离的胎盘细胞，其是CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62-E–、CD62-L–、CD62-P–、CD80–、CD86–、CD103–、CD104–、CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-cadherindim、CD184/CXCR4–、β2-microglobulindim、HLA-Idim、HLA-II–、HLA-Gdim和/或PDL1dim中的一种或多种。在另一个具体实施方案中，所述细胞群体中至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％的细胞是CD10+、CD29+、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62-E–、CD62-L–、CD62-P–、CD80–、CD86–、CD103–、CD104–、CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-cadherindim、CD184/CXCR4–、β2-microglobulindim、MHC-Idim、MHC-II–、HLA-Gdim和PDL1dim。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞是分离的胎盘细胞，其是CD10+、CD29+、CD34–、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3–、SSEA4–、OCT-4+和ABC-p+中的一种或多种或者全部，其中ABC-p是胎盘特异性ABC转运蛋白(也称为乳腺癌抗性蛋白(BCRP)和米托蒽醌抗性蛋白(MXR))，其中所述分离的胎盘细胞通过灌注已经排出脐带血并灌注去除残余血液的哺乳动物(例如人)胎盘来获得。

在任何上述特征的另一具体实施方案中，通过流式细胞术确定细胞标志物(例如分化群或免疫原性标志物)的表达；在另一具体实施方案中，通过RT-PCR确定标志物的表达。

基因谱型确认分离的胎盘细胞和分离的胎盘细胞群体可与其他细胞例如间充质干细胞(例如骨髓衍生的间充质干细胞)区分开。本文所述的分离的胎盘细胞可以基于一种或多种基因的表达与例如间充质干细胞区分，在分离的胎盘细胞中或在某些分离的脐带干细胞中所述基因的表达与骨髓衍生的间充质干细胞相比显著更高。具体而言，可用于本文提供的治疗方法中的分离的胎盘细胞可以基于一种或多种基因的表达区别于间充质干细胞，当细胞在等同条件下生长时，分离的胎盘细胞中所述基因的表达与等同数量的骨髓间充质干细胞中相比显著更高(即，至少高两倍)，其中所述一种或多种基因是ACTG2、ADARB1、AMIGO2、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、COL4A1、COL4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、ELOVL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G、ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN、ZC3H12A或前述任何的组合。参见例如，美国专利申请公开号2007/0275362，其公开内容通过引用整体并入本文。在某些具体实施方案中，例如通过RT-PCR或微阵列分析，例如使用U133-A微阵列(Affymetrix)，确定所述一个或多个基因的所述表达。在另一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在包含DMEM-LG(例如来自Gibco)；2％胎牛血清(例如来自Hyclone Labs.)；1x胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)；1x亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA)；10-9M地塞米松(例如来自Sigma)；10-4M抗坏血酸2-磷酸酯(例如来自Sigma)；表皮生长因子10ng/mL(例如来自R&D Systems)；和血小板源生长因子(PDGF-BB)10ng/mL(例如来自R&D Systems)的培养基中培养多次群体倍增(例如约3至约35次群体倍增)时表达所述一种或多种基因。在另一个具体实施方案中，分离的胎盘细胞特异性的或分离的脐带细胞特异性的基因是CD200。

这些基因的特定序列可以在GenBank中找到，其登录号NM_001615(ACTG2)，BC065545(ADARB1)，NM_181847(AMIGO2)，AY358590(ARTS-1)，BC074884(B4GALT6)，BC008396(BCHE)，BC020196(C11orf9)，BC031103(CD200)，NM_001845(COL4A1)，NM_001846(COL4A2)，BC052289(CPA4)，BC094758(DMD)，AF293359(DSC3)，NM_001943(DSG2)，AF338241(ELOVL2)，AY336105(F2RL1)，NM_018215(FLJ10781)，AY416799(GATA6)，BC075798(GPR126)，NM_016235(GPRC5B)，AF340038(ICAM1)，BC000844(IER3)，BC066339(IGFBP7)，BC013142(IL1A)，BT019749(IL6)，BC007461(IL18)，(BC072017)KRT18，BC075839(KRT8)，BC060825(LIPG)，BC065240(LRAP)，BC010444(MATN2)，BC011908(MEST)，BC068455(NFE2L3)，NM_014840(NUAK1)，AB006755(PCDH7)，NM_014476(PDLIM3)，BC126199(PKP-2)，BC090862(RTN1)，BC002538(SERPINB9)，BC023312(ST3GAL6)，BC001201(ST6GALNAC5)，BC126160或BC065328(SLC12A8)，BC025697(TCF21)，BC096235(TGFB2)，BC005046(VTN)和BC005001(ZC3H12A)，至2008年3月。

在某些具体实施方案中，当细胞在等同条件下生长时，所述分离的胎盘细胞以比等同数量的骨髓来源的间充质干细胞可检测地更高的水平表达ACTG2、ADARB1、AMIGO2、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、COL4A1、COL4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、ELOVL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G、ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A中的每一个。

在具体的实施方案中，胎盘细胞以比等同数量的骨髓来源的间充质干细胞(BM-MSC)可检测地更高的水平表达CD200和ARTS1(1型肿瘤坏死因子的氨肽酶调节剂)；ARTS-1和LRAP(白细胞衍生的精氨酸氨肽酶)；IL6(白细胞介素-6)和TGFB2(转化生长因子β2)；IL6和KRT18(角蛋白18)；IER3(即刻早期反应3)、MEST(中胚层特异性转录同源物)和TGFB2；CD200和IER3；CD200和IL6；CD200和KRT18；CD200和LRAP；CD200和MEST；CD200和NFE2L3(核因子(类红细胞衍生2)-样3)；或CD200和TGFB2，其中所述骨髓来源的间充质干细胞已经在培养中经历了与所述分离的胎盘细胞已经经历的传代次数相等的传代次数。在其他具体的实施方案中，胎盘细胞以比等同数量的骨髓来源的间充质干细胞BM-MSC可检测地更高的水平表达ARTS-1、CD200、IL6和LRAP；ARTS-1、IL6、TGFB2、IER3、KRT18和MEST；CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3和TGFB2；ARTS-1、CD200、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3和TGFB2；或IER3、MEST和TGFB2，其中所述骨髓来源的间充质干细胞在培养中经历了与所述分离的胎盘细胞已经经历的传代次数相等的传代次数。

上述提及的基因的表达可以通过标准技术来评估。例如，可以通过常规技术单独地选择和构建基于基因序列的探针。可以例如在包含针对一种或多种基因的探针的微阵列，例如Affymetrix Human Genome U133A 2.0阵列或Affymetrix Human Genome U133Plus 2.0(Santa Clara,California)，上评估基因的表达。即使特定GenBank登录号的序列被修改，也可以评估这些基因的表达，因为可以使用众所周知的标准技术容易地生成对于修改的序列特异性的探针。

这些基因的表达水平可用于确认分离的胎盘细胞群体的身份，将细胞群体鉴定为包含至少多个分离的胎盘细胞等。已证实其身份的分离的胎盘细胞群体可以是克隆的，例如从单一分离的胎盘细胞或干细胞的混合群体(例如仅包含如本文所述的从多个分离的胎盘细胞或包含分离的胎盘细胞的细胞群体扩增的分离的胎盘细胞的细胞群体，以及至少一种其他类型的细胞)扩增的分离的胎盘细胞群体。

这些基因的表达水平可用于选择分离的胎盘细胞的群体。例如，如果来自细胞群体的样品中上述所列一种或多种基因的表达显著高于等同间充质干细胞群体中的表达，则可以选择细胞群体，例如克隆扩增的细胞。这样的选择可以为来自多个分离的胎盘细胞群体，来自多个其身份未知的细胞群体，等等的群体。

可以基于一种或多种这样的基因的表达水平与例如间充质干细胞对照中所述一个或多个基因中的表达水平(例如，在当同数量的骨髓来源的间充质干细胞中所述一种或多种基因中的表达水平)的对比来选择分离的胎盘细胞。在一个实施方案中，将包含相等数量的间充质干细胞的样品中所述一种或多种基因的表达水平用作对照。在另一个实施方案中，对于在某些条件下测试的分离的胎盘细胞，对照是代表在所述条件下的间充质干细胞中所述一种或多种基因表达水平的数值。

在某些实施方案中，如通过免疫定位所检测的，可用于本文提供的方法中的胎盘细胞(例如PDAC)在暴露于1至100ng/mL VEGF 4至21天后不表达CD34。在一个具体的实施方案中，所述胎盘粘附细胞粘附于组织培养塑料。在另一个具体的实施方案中，当在血管生成因子如血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板源生长因子(PDGF)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)存在下，例如在诸如MATRIGEL^TM的基质上培养时，所述细胞群诱导内皮细胞形成芽或管状结构。

另一方面，本文提供的PDAC、细胞群体(例如PDAC群体)或其中在所述分离的细胞群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％或98％的细胞是PDAC的细胞群体分泌VEGF、HGF、IL-8、MCP-3、FGF2、卵泡抑素、G-CSF、EGF、ENA-78、GRO、IL-6、MCP-1、PDGF-BB、TIMP-2、uPAR或者半乳糖凝集素-1中的一种或多种或者全部至例如该一个或多个细胞在其中生长的培养基中。在另一个实施方案中，与常氧条件(例如，约20％或约21％的O2)相比，PDAC在低氧条件(例如，低于约5％的O2)下表达增加水平的CD202b、IL-8和/或VEGF。

在另一个实施方案中，本文所述的任何PDACS或包含PDAC的细胞群体可以导致在与所述胎盘来源的粘附细胞接触的内皮细胞群体中形成芽或管状结构。在一个具体的实施方案中，PDAC与人内皮细胞共培养，其形成芽或管状结构或支持内皮细胞芽的形成，例如当在细胞外基质蛋白，例如I型和IV型胶原蛋白和/或血管生成因子如血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板源生长因子(PDGF)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)存在下培养时，例如，在如胎盘胶原蛋白或MATRIGEL^TM的基质中或其上培养至少4天。在另一个实施方案中，本文所述的包含胎盘来源的粘附细胞的任何细胞群体分泌血管生成因子如血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)、血小板源生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)或白细胞介素-8(IL-8)，且因此可以例如在基质如胎盘胶原蛋白或MATRIGEL^TM之中或之上在细胞外基质蛋白如I型和IV型胶原蛋白存在下培养时，诱导人内皮细胞形成芽或管状结构。

在另一个实施方案中，包含胎盘来源的粘附细胞(PDAC)的任何上述细胞群体分泌血管生成因子。在具体实施方案中，细胞群体分泌血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)、血小板源生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和/或白细胞介素-8(IL-8)。在其他具体的实施方案中，包含PDAC的细胞群体分泌一种或多种血管生成因子，和从而诱导人内皮细胞在体外伤口愈合测定中迁移。在其他具体的实施方案中，包含胎盘来源的粘附细胞的细胞群体诱导人内皮细胞、内皮祖细胞、肌细胞或成肌细胞的成熟、分化或增殖。

本文所述的分离的胎盘细胞在原代培养物中或在包含例如DMEM-LG(Gibco)、2％胎牛血清(FCS)(Hyclone Laboratories)、1x胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)、1x亚麻酸-牛血清白蛋白(LA-BSA)、10-9M地塞米松(Sigma)、10-4M抗坏血酸2-磷酸(Sigma)、表皮生长因子(EGF)10ng/ml(R&D Systems)、血小板源生长因子(PDGF-BB)10ng/ml(R&D Systems)和100U青霉素/1000U链霉素的培养基中的增殖期间显示上述特征(例如，细胞表面标志物和/或基因表达谱的组合)。

在本文公开的任何胎盘细胞的某些实施方案中，细胞是人的。在本文公开的任何胎盘细胞的某些实施方案中，细胞标志物特征或基因表达特征是人标志物或人基因。

在所述分离的胎盘细胞或包含分离的胎盘细胞的细胞群体的另一个具体实施方案中，所述细胞或群体已经扩增，例如传代至少、约或不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次或更多，或增殖至少、约或不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个群体倍增。在所述分离的胎盘细胞或包含分离的胎盘细胞的细胞群体的另一个具体实施方案中，所述细胞或群体是初级分离株。在本文公开的分离的胎盘细胞或包含分离的胎盘细胞的细胞群体的另一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞是胎儿起源的(即，具有胎儿基因型)。

在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞在生长培养基(即配制成促进增殖的培养基，例如在生长培养基中增殖期间)中培养过程中不分化。在另一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞不需要饲养层以增殖。在另一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞在不存在饲养层的情况下在培养中不分化，这仅仅是因为缺乏饲养细胞层。

在另一个实施方案中，可用于本文所述的方法和组合物的细胞是分离的胎盘细胞，其中多个所述分离的胎盘细胞对醛脱氢酶(ALDH)是阳性的，如通过醛脱氢酶活性测定评估的。这样的测定法是本领域已知的(参见例如Bostian和Betts,Biochem.J.,173,787,(1978))。在一个具体的实施方案中，所述ALDH测定使用(Aldagen,Inc.,Ashland,Oregon)作为醛脱氢酶活性的标志物。在具体实施方案中，所述多个是所述细胞群中的细胞的约3％至约25％。在另一个实施方案中，本文提供了分离的脐带细胞的群体，例如多能的分离的脐带细胞，其中多个所述分离的脐带细胞对于醛脱氢酶是阳性的，如通过使用作为醛脱氢酶活性的指标的醛脱氢酶活性测定评估的。在具体实施方案中，所述多个是所述细胞群体中的细胞的约3％至约25％。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的脐带细胞的群体显示出比具有大致相同细胞数量并在相同条件下培养的骨髓来源的间充质干细胞群体高至少三倍或至少五倍的ALDH活性。

在本文所述的包含分离的胎盘细胞的任何细胞群体的某些实施方案中，所述细胞群体中的胎盘细胞基本上不含具有母体基因型的细胞；例如所述群体中至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的胎盘细胞具有胎儿基因型。在本文所述的包含分离的胎盘细胞的任何细胞群体的某些其他实施方案中，包含所述胎盘细胞的细胞群体基本上不含具有母体基因型的细胞；例如所述群体中至少40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的细胞具有胎儿基因型。

在任何上述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞的细胞群体的具体实施方案中，所述细胞或所述群体中至少约95％或约99％的细胞的核型是正常的。在任何上述胎盘细胞或细胞群体的另一个具体实施方案中，所述细胞或细胞群体中的细胞是非母体起源的。

携带任何上述标志物组合的分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体可以以任何比率组合。任何两种或更多种上述分离的胎盘细胞群体可以组合以形成分离的胎盘细胞群体。例如，分离的胎盘细胞群体可以包含由上述标志物组合之一定义的分离的胎盘细胞的第一群体和由上述标志物组合中的另一个定义的分离的胎盘细胞的第二群体，其中所述第一和第二群体以约1:99、2:98、3:97、4:96、5:95、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、95:5、96:4、97:3、98:2或约99:1的比率组合。以类似的方式，可以将任何三种、四种、五种或更多种上述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体组合。

可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞可以例如通过在有或没有酶消化(参见第4.2.3节)或灌注(参见第4.2.4部分)的情况下破坏胎盘组织获得。例如，分离的胎盘细胞群体可以根据包括灌注已经排出脐带血并灌注以去除残余血液的哺乳动物胎盘；用灌注溶液灌注所述胎盘；和收集所述灌注溶液，其中灌注后的所述灌注溶液包含胎盘细胞群体，其包含分离的胎盘细胞；并从所述细胞群体分离多个所述分离的胎盘细胞的方法产生。在一个具体的实施方案中，灌注溶液经过脐静脉和脐动脉两者，并在其从胎盘流出后收集。在另一具体实施方案中，灌注溶液通过脐静脉并从脐动脉收集，或通过脐动脉并从脐静脉收集。

在各种实施方案中，包含在从胎盘灌注获得的细胞群体内的分离的胎盘细胞为所述胎盘细胞群体的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或至少99.5％。在另一个具体的实施方案中，通过灌注收集的分离的胎盘细胞包含胎儿和母体细胞。在另一个具体的实施方案中，通过灌注收集的分离的胎盘细胞是至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或至少99.5％的胎儿细胞。

在另一个具体的实施方案中，本文提供了包含通过灌注收集的如本文所述的分离的胎盘细胞群体的组合物，其中所述组合物包含用于收集分离的胎盘细胞的灌注溶液的至少一部分。

本文所述的分离的胎盘细胞的分离群体可以通过用组织破坏酶消化胎盘组织来产生，以获得包含所述细胞的胎盘细胞群体，并且从所述胎盘细胞的其余部分分离或基本上分离多个胎盘细胞。胎盘的全部或任何部分可被消化以获得本文所述的分离的胎盘细胞。在具体的实施方案中，例如，所述胎盘组织可以是完整的胎盘、羊膜、绒毛膜、羊膜和绒毛膜的组合或者前述任何的组合。在其他具体实施方案中，组织破坏酶是胰蛋白酶或胶原蛋白酶。在各种实施方案中，包含在从消化胎盘获得的细胞群体内的分离的胎盘细胞是所述胎盘细胞群体的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或至少99.5％。

上述分离的胎盘细胞群体和分离胎盘细胞的群体通常可以包含约、至少或不超过1×10³、3×10³、5×10³、1×10⁴、3×10⁴、5×10⁴、1×10⁵、3×10⁵、5×10⁵、1×10⁶、3×10⁶、5×10⁶、1×10⁷、3×10⁷、5×10⁷、1×10⁸、3×10⁸、5×10⁸、1×10⁹、5×10⁹或1×10¹⁰个分离的胎盘细胞(例如，作为包含胎盘干细胞的药物组合物的部分)或约1×10³至3×10³、3×10³至5×10³、5×10³至1×10⁴、1×10⁴至3×10⁴、3×10⁴至5×10⁴、5×10⁴至1×10⁵、1×10⁵至3×10⁵、3×10⁵至5×10⁵、5×10⁵至1×10⁶、1×10⁶至3×10⁶、3×10⁶至5×10⁶、5×10⁶至1×10⁷、1×10⁷至3×10⁷、3×10⁷至5×10⁷、5×10⁷至1×10⁸、1×10⁸至3×10⁸、3×10⁸至5×10⁸、5×10⁸至1×10⁹、1×10⁹至5×10⁹或5×10⁹至1×10¹⁰个分离的胎盘细胞(例如，作为包含胎盘干细胞的药物组合物的部分)。可用于本文所述的治疗方法的分离胎盘细胞群体包含至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的存活的分离胎盘细胞，例如，通过例如台盼蓝排除法测定的。

4.2获得分离的胎盘细胞的方法

4.2.1干细胞收集组合物

本文进一步提供采集和分离胎盘细胞的方法，例如上文第4.1节中描述的分离的胎盘细胞。通常，这些细胞使用生理上可接受的溶液(例如细胞收集组合物)从哺乳动物胎盘获得。示例性的细胞收集组合物在名为“用于收集胎盘干细胞和保存器官的改进的培养基”的相关的美国专利申请公开第2007/0190042号中详细描述，其公开内容通过引用整体并入本文。

细胞收集组合物可以包含适于细胞(例如本文所述的分离的胎盘细胞)的收集和/或培养的任何生理上可接受的溶液，例如盐水溶液(例如，磷酸盐缓冲盐水、Kreb's溶液、改良的Kreb's溶液、Eagle's溶液、0.9％的NaCl等)、培养基(例如DMEM、H.DMEM等)，等。

细胞收集组合物可包含倾向于从收集时到培养时保持分离的胎盘细胞的一种或多种组分，即，防止分离的胎盘细胞死亡或延迟分离的胎盘细胞的死亡，减少细胞群体中死亡的分离的胎盘细胞数量等。这样的组分可以是，例如凋亡抑制剂(例如半胱天冬酶抑制剂或JNK抑制剂)；血管扩张剂(例如硫酸镁、抗高血压药、心钠肽(ANP)、促肾上腺皮质激素、促肾上腺皮质激素释放激素、硝普钠、肼苯哒嗪、三磷酸腺苷、腺苷、吲哚美辛或硫酸镁、磷酸二酯酶抑制剂等)；坏死抑制剂(例如2-(1H-吲哚-3-基)-3-戊基氨基马来酰亚胺，吡咯烷二硫代氨基甲酸盐或氯硝西泮)；TNF-α抑制剂；和/或携氧的全氟化碳(例如全氟辛基溴、全氟癸基溴等)。

细胞收集组合物可包含一种或多种组织降解酶，例如金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、RNA酶或DNA酶等。这样的酶包括但不限于胶原酶(例如，胶原酶I、II、III或IV，来自溶组织梭菌的胶原酶等)；分散酶、嗜热菌蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、LIBERASE、透明质酸酶等。

细胞收集组合物可以包含杀菌或抑菌有效量的抗生素。在某些非限制性实施方案中，抗生素是大环内酯(例如妥布霉素)、头孢菌素(例如头孢氨苄、头孢拉定、头孢呋辛、头孢罗齐、头孢克洛、头孢克肟或头孢羟氨苄)、克拉霉素、红霉素、青霉素(例如青霉素V)或喹诺酮(例如氧氟沙星、环丙沙星或诺氟沙星)、四环素、链霉素等。在一个具体的实施方案中，抗生素对格兰氏(+)和/或格兰氏(–)菌，例如绿脓假单胞菌、金黄色葡萄球菌等是活性的。在一个实施方案中，抗生素是庆大霉素，例如在培养基中约0.005％至约0.01％(w/v)。

细胞收集组合物还可以包含一种或多种以下化合物：腺苷(约1mM至约50mM)；D-葡萄糖(约20mM至约100mM)；镁离子(约1mM至约50mM)；在一个实施方案中，分子量大于20,000道尔顿的大分子以足以维持内皮完整性和细胞活力的量存在(例如以约25g/l至约100g/l，或约40g/l至约60g/l存在的合成的或天然存在的胶体，多糖如葡聚糖或聚乙二醇)；抗氧化剂(例如，丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、谷胱甘肽、维生素C或维生素E，以约25μM至约100μM存在)；还原剂(例如，以约0.1mM至约5mM存在的N-乙酰半胱氨酸)；防止钙进入细胞的试剂(例如，以约2μM至约25μM存在的维拉帕米)；硝酸甘油(例如，约0.05g/L至约0.2g/L)；抗凝剂，在一个实施方案中，以足以帮助防止残留血液凝结的量存在(例如，以约1000单位/升至约100,000单位/升的浓度存在的肝素或水蛭素)；或含有阿米洛利的化合物(例如阿米洛利、乙基异丙基阿米洛利、六亚甲基阿米洛利、二甲基阿米洛利或异丁基阿米洛利，以约1.0μM至约5μM存在)。

4.2.2胎盘的收集和处理

一般来说，人胎盘在出生后排出不久被回收。在一个优选的实施方案中，在知情同意后并且在获取患者的完整病历并且与胎盘关联之后从患者回收胎盘。优选地，分娩之后病历继续。这种病历可用于协调随后胎盘的使用或从其收获的分离的胎盘细胞。例如，根据病历，分离的人胎盘细胞可用于与胎盘有关的婴儿或婴儿的父母、兄弟姐妹或其他亲属的个性化医疗。

在恢复分离的胎盘细胞之前，优选地除去脐带血和胎盘血。在某些实施方案中，在分娩后，回收胎盘中的脐带血。胎盘可以经受传统的脐带血回收过程。典型地，借助重力使用针或套管使胎盘放血(参见例如，Anderson，美国专利号5,372,581；Hessel等，美国专利号5,415,665)。通常将针或套管置于脐静脉中，并可以轻轻地按摩胎盘以帮助从胎盘排出脐带血。这种脐带血回收可以商业地进行，例如LifeBank USA,Cedar Knolls,N.J.。优选地，胎盘在没有进一步操作的情况下通过重力排出，以使脐带血回收期间的组织破坏最小化。

典型地，胎盘从分娩室或产房运送到另一位置，例如实验室，用于通过例如灌注或组织分离来回收脐带血和收集干细胞。胎盘优选地在无菌的、绝热的运输装置(保持胎盘的温度在20-28℃之间)中运输，例如通过将带有夹紧的近端脐带的胎盘置于无菌的拉链塑料袋中，然后将其放置在绝热容器中。在另一个实施方案中，胎盘在脐带血收集试剂盒中运输，基本上如未决美国专利第7,147,626号中所描述的，其公开内容通过引用并入本文。优选地，分娩后四到二十四小时将胎盘运送到实验室。在某些实施方案中，在脐带血回收之前，将近端脐带夹紧，优选地插入胎盘中4-5cm(厘米)内。在其他实施方案中，在脐带血回收之后但在进一步处理胎盘之前，将近端脐带夹紧。

在细胞收集之前，胎盘可以在无菌条件下并在室温或5℃至25℃的温度下储存。在灌注胎盘以除去任何残留的脐带血之前，可以将胎盘储存四至二十四小时、至多四十八小时或超过四十八小时的一段时间。在一个实施方案中，胎盘在排出后约0小时至约2小时之间收获。胎盘优选地储存在温度为5℃至25℃的抗凝剂溶液中。合适的抗凝剂溶液在本领域中是公知的。例如，可以使用肝素或华法林钠的溶液。在优选的实施方案中，抗凝剂溶液包含肝素溶液(例如，在1：1000溶液中1％w/w)。在收集胎盘细胞之前，放血的胎盘优选储存不超过36小时。

哺乳动物胎盘或其部分，一旦如以上总体所述收集和制备，可以以任何本领域已知的方式进行处理，例如可灌注或破坏(例如用一种或多种组织破坏酶消化)，以获得分离的胎盘细胞。

4.2.3胎盘组织的物理破坏和酶消化

在一个实施方案中，干细胞通过物理破坏器官的部分或全部从哺乳动物胎盘中收集。例如，可以将胎盘或其一部分例如粉碎、剪切、剁碎、切碎、斩碎、浸软等。然后可以培养组织以获得分离的胎盘细胞群体。通常，使用例如培养基、盐水溶液或干细胞收集物来破坏胎盘组织。

胎盘可以在物理破坏和/或酶消化和干细胞回收之前被解剖成部分。分离的胎盘细胞可以从全部或部分羊膜、绒毛膜、脐带、胎盘小叶或其任何组合(包括从整个胎盘)获得。优选地，分离的胎盘细胞从包含羊膜和绒毛膜的胎盘组织获得。通常，分离的胎盘细胞可以通过破坏胎盘组织的小块来获得，例如体积大约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或约1000立方毫米的胎盘组织块。可以使用物理破坏的任何方法，条件是破坏的方法保留所述器官中的多个，更优选大部分，和更优选至少60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％的细胞存活，如通过例如台盼蓝排除法测定的。

通常可以在排出后大约头三天内的任何时间，但是优选地排出后大约8小时至大约18小时，从胎盘或其部分收集分离的粘附胎盘细胞。

在一个具体的实施方案中，破坏的组织在适合于分离的胎盘细胞的增殖的组织培养基中培养。

在另一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞通过胎盘组织的物理破坏来收集，其中物理破坏包括酶消化，其可以通过使用一种或多种组织消化酶来完成。胎盘或其部分也可以物理破坏和用一种或多种酶进行消化，然后将所得材料浸入或混合到细胞收集组合物中。

优选的细胞收集组合物包含一种或多种组织破坏性酶。可用于破坏胎盘组织的酶包括木瓜蛋白酶、脱氧核糖核酸酶、丝氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胶原酶、分散酶或弹性蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可被血清中的α2微球蛋白抑制，且因此用于消化的培养基通常不含血清。EDTA和DNA酶通常用于酶消化过程中以提高细胞回收的效率。消化物优选地被稀释以避免将细胞封闭在粘性消化物内。

可以使用组织消化酶的任何组合。使用胰蛋白酶消化的典型浓度包括0.1％至约2％胰蛋白酶，例如，约0.25％胰蛋白酶。蛋白酶可以组合地使用，即在相同的消化反应中的两种或更多种蛋白酶，或者可以顺序地使用以释放胎盘细胞，例如胎盘干细胞和胎盘多能细胞。例如，在一个实施方案中，首先用合适量的胶原蛋白酶I以约1至约2mg/ml消化胎盘或其部分例如30分钟，然后在37℃下用浓度为约0.25％的胰蛋白酶消化，例如10分钟。丝氨酸蛋白酶优选地在使用其他酶之后顺序使用。

在另一个实施方案中，可通过将螯合剂例如乙二醇双(2-氨基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA)添加到包含干细胞的干细胞收集组合物中，或在用干细胞收集组合物分离干细胞之前添加到组织在其中被破坏和/或消化的溶液中，来进一步破坏组织。

消化后，消化液物用培养基洗涤例如三次，并将洗涤的细胞接种到培养瓶中。然后细胞通过差异粘附分离，并针对例如存活力、细胞表面标志物、分化等进行表征。

应当理解的是，在包含胎儿和母体细胞的整个胎盘或胎盘部分(例如，胎盘部分包含绒毛膜或小叶)的情况下，分离的胎盘细胞可以包含来源于胎儿和母体来源两者的胎盘细胞的混合物。当胎盘的一部分不包含或包含可忽略数量的母体细胞(例如羊膜)时，从其分离的胎盘细胞几乎只包含胎儿胎盘细胞(即具有胎儿基因型的胎盘细胞)。

可以通过差异胰蛋白酶消化(参见下面4.2.5节)，然后在新鲜增殖培养基中的一个或多个新培养容器中培养，任选接着进行第二差异胰蛋白酶消化步骤，来从破坏的胎盘组织中分离胎盘细胞，例如上文4.1节中所述的胎盘细胞。

4.2.4胎盘灌注

胎盘细胞，例如上文4.1节中所述的胎盘细胞，也可以通过灌注哺乳动物胎盘来获得。灌注哺乳动物胎盘以获得胎盘细胞的方法公开于例如Hariri，美国专利第7,045,148和7,255,729号，美国专利申请公开号2007/0275362和2007/0190042中，其公开内容的完整内容通过应用作为参考引入。

可通过灌注(例如通过胎盘脉管系统)使用例如细胞收集组合物作为灌注溶液来收集胎盘细胞。在一个实施方案中，通过使灌注溶液通过脐动脉和脐静脉中的一者或两者来灌注哺乳动物胎盘。灌注溶液通过胎盘的流动可以使用例如重力流入胎盘中来完成。优选地，使用泵(例如蠕动泵)将灌注溶液强制通过胎盘。脐静脉可以例如用套管例如或塑料套管进行插管，其与无菌连接装置如无菌管道连接。无菌连接装置连接到灌注歧管。

在准备灌注时，胎盘优选地以使得脐动脉和脐静脉位于胎盘的最高点的方式定向(例如，悬挂)。胎盘可以通过灌注流体通过胎盘脉管系统和周围组织来灌注。胎盘还可以通过灌注流体进入脐静脉中并从脐动脉收集或灌注流体进入脐动脉中并从脐静脉收集来灌注。

在一个实施方案中，例如，脐动脉和脐静脉同时连接到例如经由柔性连接器连接到灌注溶液的储存器的移液管。灌注溶液通入脐静脉和脐动脉中。灌注溶液从血管壁流出和/或穿过血管壁进入胎盘的周围组织中，并在合适的开放血管中从消化过程中胎盘附着于母体子宫的胎盘表面收集。灌注溶液也可以通过脐带开口引入，并允许从与母体子宫壁交界的胎盘壁中的开口流出或渗出。通过这种方法(可称为“淘洗(pan)”方法)收集的胎盘细胞通常是胎儿和母体细胞的混合物。

在另一个实施方案中，灌注溶液通过脐静脉并从脐动脉收集，或通过脐动脉并从脐静脉收集。通过这种方法(其可以被称为“闭路”方法)收集的胎盘细胞通常几乎全是胎儿的。

可以理解的是，采用淘洗方法(也就是灌注液从胎盘的母体侧流出之后收集的方法)进行的灌注导致胎儿和母体细胞的混合物。结果，通过该方法收集的细胞可以包含胎儿和母体起源的胎盘细胞(例如，胎盘干细胞或胎盘多能细胞)的混合群体。相反，在闭路方法(灌注流体由此通过一个或两个胎盘血管并且仅通过剩余的血管收集)中仅通过胎盘脉管系统进行的灌注导致收集几乎仅胎儿起源的胎盘细胞群体。

在一个实施方案中，闭路灌注方法可以如下进行。产后约48小时内获得产后胎盘。脐带被夹紧并在夹子上方切割。脐带可以被丢弃，或者可以被处理以回收例如脐带干细胞，和/或处理脐带膜用于生产生物材料。羊膜可以在灌注期间保留，或者可以从绒毛膜分离，例如使用利用手指的钝性分离。如果羊膜在灌注之前从绒毛膜分离，则其可例如丢弃或处理，例如通过酶消化获得干细胞，或产生例如羊膜生物材料，例如美国申请公开号2004/0048796中所述的生物材料，其公开内容通过引用整体并入本文。在例如使用无菌纱布清洁胎盘的所有可见血液凝块和残余血液之后，脐带血管例如通过部分切割脐带膜以暴露脐带的横截面来暴露。血管被识别并打开，例如通过推进闭合的鳄鱼夹通过每个血管的切割端。然后将装置(例如连接到灌注装置或蠕动泵的塑料管)插入每个胎盘动脉中。该泵可以是适用于该目的的任何泵，例如蠕动泵。然后将连接到无菌收集储器(例如，诸如250mL收集袋的血液袋)的塑料管插入到胎盘静脉中。或者，将连接到泵的管插入胎盘静脉中，并将通向收集储器的管插入一个或两个胎盘动脉中。然后用一定体积的灌注溶液灌注胎盘，例如约750mL的灌注溶液。然后收集灌注液中的细胞，例如通过离心。在某些实施方案中，用灌注溶液(例如100-300mL灌注溶液)灌注胎盘，以在灌注之前去除残余血液以收集胎盘细胞，例如胎盘干细胞和/或胎盘多能细胞。在另一个实施方案中，在灌注以收集胎盘细胞之前不用灌注溶液灌注胎盘以去除残余血液。

在一个实施方案中，近端脐带在灌注期间被夹住，且更优选地在脐带插入胎盘中4-5cm(厘米)内被夹住。

在放血过程中从哺乳动物胎盘的第一次灌注溶液收集通常被脐带血和/或胎盘血的残余红细胞着色。随着灌注的进行和残留的脐带血细胞被洗出胎盘，灌注流体变得更无色。通常30-100ml(毫升)的灌注流体足以初始胎盘放血，但根据观察结果可以使用更多或更少的灌注流体。

用于分离胎盘细胞的灌注流体的体积可以根据要收集的细胞的数量、胎盘大小、从单个胎盘进行收集的次数等而变化。在各种实施方案中，灌注液体的体积可以为50mL到5000mL，50mL到4000mL，50mL到3000mL，100mL到2000mL，250mL到2000mL，500mL到2000mL，或750mL到2000mL。通常，放血后，用700-800mL灌注液体灌注胎盘。

胎盘可以在数小时或数天的时间内灌注多次。在胎盘多次灌注的情况下，胎盘可以在无菌条件下在容器或其他合适的器皿中维持或培养，并用细胞收集组合物或标准灌注溶液(例如生理盐水溶液如磷酸盐缓冲盐水(“PBS”))，含有和/或不含有抗凝剂(例如肝素、华法林钠、香豆素、双羟基香豆素)和/或含有或不含有抗微生物剂(例如β-巯基乙醇(0.1mM))、抗生素例如链霉素(例如40-100μg/mL)、青霉素(例如40U/mL)、两性霉素B(例如0.5μg/mL)灌注。在一个实施方案中，分离的胎盘维持或培养一段时间而不收集灌注液，使得所述胎盘维持或培养1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时，或者2天或3天或更多天，然后灌注和收集灌注液。灌注的胎盘可以保持一个或多个额外的时间，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或更多个小时，并用例如700-800mL灌注流体第二次灌注。胎盘可以灌注1、2、3、4、5或更多次，例如每1、2、3、4、5或6小时灌注一次。在一个优选的实施方案中，重复胎盘的灌注和灌注溶液(例如，细胞收集组合物)的收集直至回收的有核细胞的数量降至100个细胞/ml以下。不同时间点的灌注液可以进一步单独地处理以回收时间依赖性的细胞(例如干细胞)的群体。来自不同时间点的灌注液也可以合并。在一个优选的实施方案中，胎盘细胞在排出后约8小时至约18小时之间的一个或多个时间收集。

灌注优选导致收集比从未用所述溶液灌注并且不另外处理以获得胎盘细胞(例如通过组织破坏，例如酶消化)的哺乳动物胎盘可获得的数量显著更多的胎盘细胞。在这种情况下，“显著更多”意味着至少10％以上。与可从例如胎盘或其部分在其中培养的培养基分离的胎盘细胞的数量相比，灌注产生显著更多的胎盘细胞。

可以通过用包含一种或多种蛋白酶或其他组织破坏酶的溶液灌注来从胎盘中分离胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，将胎盘或其部分(例如羊膜，羊膜和绒毛膜、胎盘小叶或子叶、脐带或任何前述的组合)置于25-37℃，并与一种或多种组织破坏酶在200mL培养基中温育30分钟。收集来自灌注液的细胞，使其达到4℃，并用包含5mM EDTA、2mM二硫苏糖醇和2mMβ-巯基乙醇的冷的抑制剂混合物洗涤。几分钟后用冷的(例如4℃)干细胞收集组合物洗涤胎盘细胞。

4.2.5胎盘细胞的分离、分选和表征

分离的胎盘细胞(例如上文4.1节中描述的细胞)，无论是通过灌注还是物理破坏(例如通过酶消化)获得，可以最初通过Ficoll梯度离心从其他细胞纯化(即与其分离)。这样的离心可以遵循对于离心速度等的任何标准方案。在一个实施方案中，例如，通过在室温下以5000×g离心15分钟从灌注液回收从胎盘收集的细胞，其将细胞从例如污染碎片和血小板分离。在另一个实施方案中，将胎盘灌注液浓缩至约200ml，在Ficoll上温和地分层，并在22℃下以约1100×g离心20分钟，且收集细胞的低密度界面层用于进一步处理。

可以将细胞团块重悬浮于新鲜干细胞收集组合物或适合于细胞维持(例如干细胞维持)的培养基中，例如含有2U/mL肝素和2mM EDTA(GibcoBRL，NY)的IMDM无血清培养基。可以根据制造商推荐的程序，例如使用Lymphoprep(Nycomed Pharma,Oslo,Norway)分离总单核细胞部分。

通过灌注或消化获得的胎盘细胞可以例如通过使用例如0.05％胰蛋白酶和0.2％EDTA(Sigma,St.Louis,MO)的溶液通过差异胰蛋白酶消化来进一步或初始分离。差异胰蛋白酶消化是可能的，因为组织培养塑料粘附的分离的胎盘细胞通常在约五分钟内从塑料表面脱离，而其他粘附的群体通常需要超过20-30分钟的温育。在胰蛋白酶消化和胰蛋白酶中和(使用例如胰蛋白酶中和溶液(TNS,Cambrex))后收获脱离的胎盘细胞。在粘附细胞分离的一个实施方案中，将例如约5-10×10⁶个细胞的等分试样置于数个T-75烧瓶(优选纤连蛋白包被的T75烧瓶)中的每一个中。在这样的实施方案中，细胞可以用市售间充质干细胞生长培养基(MSCGM)(Cambrex)培养，并置于组织培养箱(37℃，5％CO2)中。10-15天后，通过用PBS洗涤从烧瓶除去非粘附细胞。然后用MSCGM代替PBS。优选每天检查烧瓶中各种粘附细胞类型的存在，且特别是用于成纤维细胞样细胞的团的鉴定和扩增。

可以例如通过使用标准细胞检测技术如流式细胞术、细胞分选、免疫细胞化学(例如用组织特异性或细胞标志物特异性抗体染色)、荧光激活细胞分选(FACS)、磁性激活细胞分选(MACS)测量形态和细胞表面标志物的变化，通过使用光学或共焦显微镜检查细胞的形态，和/或通过使用本领域中众所周知的技术如PCR和基因表达谱分析测量基因表达的变化，来监测从哺乳动物胎盘收集的细胞的数量和类型。也可以使用这些技术来鉴定对一种或多种特定标志物阳性的细胞。例如，使用针对CD34的抗体，可以使用上述技术确定细胞是否包含可检测量的CD34；如果包含，则细胞是CD34⁺。同样，如果细胞产生可通过RT-PCR检测的足够的OCT-4RNA，或者比成人细胞显著更多的OCT-4RNA，则细胞是OCT-4+。针对细胞表面标志物(例如CD标志物如CD34)的抗体和干细胞特异性基因如OCT-4的序列在本领域中是公知的。

可以使用荧光激活细胞分选器(FACS)分选胎盘细胞，特别是已通过Ficoll分离、差异粘附或两者的组合分离的细胞。荧光激活细胞分选(FACS)是基于颗粒的荧光特性分离颗粒(包括细胞)的公知方法(Kamarch,1987,Methods Enzymol,151:150-165)。单个颗粒中的荧光部分的激光激发产生小的电荷，从而允许从混合物电磁分离正颗粒和负颗粒。在一个实施方案中，细胞表面标志物特异性的抗体或配体用不同的荧光标记进行标记。细胞通过细胞分选器进行处理，从而允许基于其结合所用的抗体的能力分离细胞。FACS分选的颗粒可以直接沉积到96孔板或384孔板的各个孔中以帮助分离和克隆。

在一种分选方案中，基于一种或多种标志物CD34、CD38、CD44、CD45、CD73、CD105、OCT-4和/或HLA-G的表达对来自胎盘的细胞，例如PDAC进行分选。这可以结合基于其在培养物中的粘附特性选择这样的细胞的程序来实现。例如，可以在基于标志物表达进行分选之前或之后完成组织培养塑料粘附选择。在一个实施方案中，例如，细胞首先根据其CD34的表达进行分选；CD34^-细胞被保留，而另外是CD200+和HLA-G–的CD34–细胞与所有其他CD34^-细胞分离。在另一个实施方案中，来自胎盘的细胞基于其标志物CD200和/或HLA-G的表达分选；例如，展示CD200并且缺乏HLA-G的细胞被分离用于进一步的使用。在具体的实施方案中，表达例如CD200和/或缺乏例如HLA-G的细胞可以基于它们的CD73和/或CD105的表达或者被抗体SH2、SH3或SH4识别的表位或者缺乏表达CD34、CD38或CD45进一步分选。例如，在另一个实施方案中，胎盘细胞通过CD200、HLA-G、CD73、CD105、CD34、CD38和CD45的表达或其缺乏来分选，并且为CD200⁺、HLA-G^–、CD73⁺、CD105⁺、CD34^-、CD38^-和CD45^-的胎盘细胞与其他胎盘细胞分离以供进一步使用。

在分选的胎盘细胞的任何上述实施方案的具体实施方案中，分选后剩余的细胞群体中至少50％、60％、70％、80％、90％或95％的细胞是所述分离的胎盘细胞。胎盘细胞可以通过上面4.1节中描述的任何标志物中的一种或多种进行分选。

在一个具体的实施方案中，例如，从其他胎盘细胞分选(即分离)(1)粘附于组织培养塑料的，和(2)为CD10+、CD34–和CD105+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，从其他胎盘细胞分选(即从分离)(1)粘附于组织培养塑料，和(2)为CD10+、CD34–、CD105+和CD200+的胎盘细胞。在另一具体实施方案中，从其他胎盘细胞分选(即分离)(1)粘附于组织培养塑料，和(2)为CD10+、CD34–、CD45–，CD90+、CD105+和CD200+的胎盘细胞。

关于胎盘细胞的基于核苷酸序列的检测，本文所列标志物的序列容易在公众可获得的数据库例如GenBank或EMBL中获得。

就胎盘细胞(例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞)的抗体介导的检测和分选而言，可以与适于检测和分选细胞的任何荧光团或其他标记(例如荧光激活的细胞分选)结合使用对特定标志物特异性的任何抗体。针对特定标志物的抗体/荧光团组合包括但不限于异硫氰酸荧光素(FITC)缀合的抗HLA-G单克隆抗体(可从Serotec，Raleigh，North Carolina获得)、抗CD10单克隆抗体(可从BD Immunocytometry Systems，San Jose，California获得)、抗CD44单克隆抗体(可从BD Biosciences Pharmingen，San Jose，California获得)和抗CD105单克隆抗体(可从R&D Systems Inc.，Minneapolis，Minnesota获得)的单克隆抗体；藻红蛋白(PE)缀合的抗CD44、CD200、CD117和CD13单克隆抗体(BD Biosciences Pharmingen)；藻红蛋白-Cy7(PE Cy7)缀合的抗CD33和CD10单克隆抗体(BD Biosciences Pharmingen)；别藻蓝蛋白(APC)缀合的抗生蛋白链菌素和抗CD38的单克隆抗体(BD Biosciences Pharmingen)；和生物素化的CD90(BD Biosciences Pharmingen)。可使用的其他抗体包括但不限于CD133-APC(Miltenyi)、KDR-生物素(CD309、Abcam)、细胞角蛋白K-Fitc(Sigma或Dako)、HLA ABC-Fitc(BD)、HLA DR,DQ,DP-PE(BD)、β-2-微球蛋白-PE(BD)、CD80-PE(BD)和CD86-APC(BD)。可使用的其他抗体/标记组合包括但不限于CD45-PerCP(peridin叶绿素蛋白)；CD44-PE；CD19-PE；CD10-F(荧光素)；HLA-G-F和7-氨基-放线菌素-D(7-AAD)；HLA-ABC-F；等等。该清单并非穷尽的，来自其他供应商的其他抗体也可以在市场上买到。

可使用例如藻红蛋白-Cy5(PE Cy5)缀合的抗生蛋白链菌素和生物素缀合的抗CD117或CD133单克隆抗体来测定本文提供的分离的胎盘细胞的CD117或CD133；然而，使用该系统，由于相对较高的背景，细胞可能表现为分别对CD117或CD133是阳性的。

分离的胎盘细胞可以用针对单一标志物的抗体标记并进行检测和/分选。胎盘细胞也可以同时用针对不同标志物的多种抗体标记。

在另一个实施方案中，可以使用磁珠来分离细胞。可以使用磁激活细胞分选(MACS)技术来分选细胞，所述技术是基于其结合磁珠(直径0.5-100μm)的能力来分离颗粒的方法。可以在磁性微球上进行多种有用的改变，包括共价添加特异性识别特定细胞表面分子或半抗原的抗体。然后将珠与细胞混合以允许结合。然后将细胞通过磁场以分离出具有特定细胞表面标志物的细胞。在一个实施方案中，然后可以将这些细胞分离并与针对另外的细胞表面标志物的抗体偶联的磁珠重新混合。细胞再次通过磁场，从而分离结合两种抗体的细胞。然后可以将这些细胞稀释到单独的培养皿中，例如用于克隆分离的微量滴定盘。

还可以基于细胞形态和生长特征来表征和/或分选分离的胎盘细胞。例如，可以将分离的胎盘细胞表征为具有例如培养中的成纤维细胞样外观和/或基于培养中的成纤维细胞样外观进行选择。分离的胎盘细胞也可以被表征为具有形成胚样体的能力和/或基于其被选择。在一个实施方案中，例如，形状为成纤维细胞样、表达CD73和CD105并在培养中产生一个或多个胚样体的胎盘细胞与其他胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，在培养中产生一个或多个胚样体的OCT-4⁺胎盘细胞与其他胎盘细胞分离。

在另一个实施方案中，可以通过集落形成单位测定来鉴定和表征分离的胎盘细胞。集落形成单位测定在本领域中是公知的，例如MesenCult^TM培养基(Stem Cell Technologies,Inc.,Vancouver，British Columbia)。

可以使用本领域已知的标准技术如台盼蓝排除测定法、荧光素二乙酸酯摄取测定法、碘化丙啶摄取测定法(评估存活力)和胸苷摄取测定法、MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物)细胞增殖测定(评估增殖)评估分离的胎盘细胞的存活力、增殖潜力和寿命。寿命可以通过本领域众所周知的方法确定，例如通过确定扩展培养物中群体倍增的最大次数来确定。

分离的胎盘细胞(例如上文4.1节中所述的分离的胎盘细胞)还可以使用本领域已知的其他技术，例如期望细胞的选择性生长(阳性选择)、不需要的细胞的选择性破坏(阴性选择)、基于混合群体中差异细胞凝集性(例如用大豆凝集素)的分离、冻融程序、过滤、常规和区域离心、离心淘洗(逆流离心分离)、单位重力分离、逆流分配、电泳等，与其他胎盘细胞分离。

4.2.6分离的胎盘细胞的群体

本文还提供了分离的胎盘细胞(例如上文第4.1节中描述的分离的胎盘细胞)的群体，其可用于本文所述的方法和组合物中。分离的胎盘细胞的群体可直接从一个或多个胎盘分离；也就是说，细胞群体可以是包含分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体，其中分离的胎盘细胞从灌注液获得或包含在灌注液中，或从破碎的胎盘组织例如胎盘组织消化液(即，通过胎盘或其部分的酶消化获得的细胞集合)获得或包含在其中。本文所述的分离的胎盘细胞也可以被培养和扩增以产生分离的胎盘细胞的群体。包含分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体也可以被培养和扩增以产生胎盘细胞群体。

可用于本文提供的治疗方法中的胎盘细胞群体包含分离的胎盘细胞，例如本文第4.1节中所述的分离的胎盘细胞。在各种实施方案中，胎盘细胞群体中至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的细胞是分离的胎盘细胞。也就是说，分离的胎盘细胞的群体可以包含例如多达1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的不是分离的胎盘细胞的细胞。

可用于本文所述方法和组合物中的分离的胎盘细胞群体可通过例如选择表达特定标志物和/或特定培养或形态特征的分离的胎盘细胞来产生，无论所述分离的胎盘细胞源自酶消化或是灌注。在一个实施方案中，例如，本文提供了通过选择(a)粘附于基质，和(b)表达CD200并缺乏HLA-G的表达的胎盘细胞；并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生细胞群体的方法。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择表达CD200并缺乏HLA-G表达的胎盘细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择(a)粘附于基质，和(b)表达CD73、CD105和CD200的胎盘细胞；并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过鉴定表达CD73、CD105和CD200的胎盘细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体而产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择(a)粘附于基质和(b)表达CD200和OCT-4的胎盘细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体而产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择表达CD200和OCT-4的胎盘细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择(a)粘附于基底，(b)表达CD73和CD105，和(c)当细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时促进包含所述干细胞的胎盘细胞群体中一个或多个胚样体的形成的胎盘细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择表达CD73和CD105，并且当细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时促进在包含所述干细胞的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚样体的胎盘细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择(a)粘附于基质，和(b)表达CD73和CD105并且缺乏HLA-G表达的胎盘细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择表达CD73和CD105并缺乏HLA-G的表达的胎盘细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，产生细胞群体的方法包括选择(a)粘附于基质，(b)表达OCT-4，和(c)当细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时促进包含所述干细胞的胎盘细胞群体中一个或多个胚样体形成的胎盘细胞；并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择表达OCT-4，并且当所述群体在允许形成胚样体的条件下培养时促进在包含所述干细胞的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚样体的胎盘细胞，并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。

在另一个实施方案中，细胞群体通过选择(a)粘附于基质，和(b)表达CD10和CD105且不表达CD34的胎盘细胞；并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择表达CD10和CD105且不表达CD34的胎盘细胞，并且将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择(a)粘附于基质，和(b)表达CD10、CD105和CD200并且不表达CD34的胎盘细胞；并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个实施方案中，细胞群体通过选择表达CD10、CD105和CD200并且不表达CD34的胎盘细胞，并且将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个具体的实施方案中，细胞群体通过选择(a)粘附于基质，和(b)表达CD10、CD90、CD105和CD200并且不表达CD34和CD45的胎盘细胞；并将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。在另一个具体的实施方案中，细胞群体通过选择表达CD10、CD90、CD105和CD200并且不表达CD34和CD45的胎盘细胞，并且将所述细胞与其他细胞分离以形成细胞群体来产生。

可以以类似的方式分离或获得包含具有上文4.1节中所述的任何标志物组合的胎盘细胞的细胞群体的选择。

在任何上述实施方案中，选择分离的细胞群体可另外包括选择表达ABC-p的胎盘细胞(胎盘特异性ABC转运蛋白；参见例如Allikmets等，Cancer Res.58(23):5337-9(1998))。该方法还可以包括选择展现至少一种对于，例如间充质干细胞特异性的特征，例如CD44的表达、CD90的表达或前述的组合的表达的细胞。

在上述实施方案中，基质可以是可以在其上完成细胞(例如分离的胎盘细胞)的培养和/或选择的任何表面。通常，基质是塑料的，例如组织培养皿或多孔板塑料。组织培养塑料可以用生物分子如层粘连蛋白或纤连蛋白包被。

可以通过细胞选择领域已知的任何手段选择用于胎盘细胞群体的细胞(例如分离的胎盘细胞)。例如，细胞可以使用针对一种或多种细胞表面标志物的抗体或多种抗体来选择，例如在流式细胞术或FACS中。选择可以使用与磁珠结合的抗体完成。对某些干细胞相关标志物特异性的抗体是本领域已知的。例如，针对OCT-4(Abcam，Cambridge，MA)、CD200(Abcam)、HLA-G(Abcam)、CD73(BD Biosciences Pharmingen，San Diego，CA)、CD105(Abcam；BioDesign International，Saco，ME)等的抗体。针对其他标志物的抗体也可商购获得，例如CD34、CD38和CD45可从例如StemCell Technologies或BioDesign International获得。

分离的胎盘细胞群体可以包含不是干细胞的胎盘细胞或不是胎盘细胞的细胞。

本文描述的包含胎盘来源的粘附细胞的分离的细胞群体可以包含第二细胞类型，例如不是胎盘来源的粘附细胞的胎盘细胞，或者例如不是胎盘细胞的细胞。例如，分离的胎盘来源的粘附细胞群体可包含第二类型细胞的群体，例如可与其组合，其中所述第二类型细胞为例如，胚胎干细胞、血细胞(例如胎盘血、胎盘血细胞、脐带血、脐带血细胞、外周血、外周血细胞、来自胎盘血、脐带血或外周血的有核细胞，等)、从血液分离的干细胞(例如，从胎盘血、脐带血或外周血分离的干细胞)、来自胎盘灌注液的有核细胞，例如来自胎盘灌注液的总有核细胞；脐带干细胞、血液来源的有核细胞群体、骨髓来源的间充质基质细胞、骨髓来源的间充质干细胞、骨髓来源的造血干细胞、粗骨髓、成熟(体细胞)干细胞、包含在组织内的干细胞群体、培养的细胞(例如培养的干细胞)、完全分化的细胞(例如软骨细胞、成纤维细胞、羊膜细胞、成骨细胞、肌细胞、心脏细胞等)的群体、周细胞等。在具体的实施方案中，包含胎盘来源的粘附细胞的细胞群体包含胎盘干细胞或来自脐带的干细胞。在其中第二类型细胞是血液或血细胞的某些实施方案中，红细胞已经从细胞群体中移除。

在一个具体的实施方案中，第二类型细胞是造血干细胞。这样的造血干细胞可以是，例如包含在未处理的胎盘、脐带血或外周血中；包含在来自胎盘血、脐带血或外周血的总有核细胞中；包含在来自胎盘血、脐带血或外周血的分离的CD34+细胞群体中；包含在未处理的骨髓中；包含在来自骨髓的总有核细胞中；包含在来自骨髓的分离的CD34+细胞群体中，等等。

在另一个实施方案中，分离的胎盘来源的粘附细胞的群体与来自血管系统的多种成熟细胞或祖细胞组合。在各种不同的实施方案中，细胞是内皮细胞、内皮祖细胞、肌细胞、心肌细胞、周细胞、成血管细胞、成肌细胞或成心肌细胞。

在另一个实施方案中，第二细胞类型是在培养中操作的非胚胎细胞类型，以表达与胚胎干细胞相关的多能性和功能的标志物。

在上述分离的胎盘来源粘附细胞群体的具体实施方案中，胎盘来源的粘附细胞和第二类型细胞中的任一者或两者对于预期的细胞接受者是自体的或同种异体的。

在另一具体实施方案中，组合物包含胎盘来源的粘附细胞和胚胎干细胞。在另一个具体的实施方案中，组合物包含胎盘来源的粘附细胞和间充质基质或干细胞，例如骨髓来源的间充质基质或干细胞。在另一具体实施方案中，组合物包含骨髓来源的造血干细胞。在另一个具体实施方案中，组合物包含胎盘来源的粘附细胞和造血祖细胞，例如来自骨髓、胎儿血、脐带血、胎盘血和/或外周血的造血祖细胞。在另一个具体实施方案中，组合物包含胎盘来源的粘附细胞和体干细胞。在更具体的实施方案中，所述体干细胞是神经干细胞、肝干细胞、胰腺干细胞、内皮干细胞、心脏干细胞或肌肉干细胞。

在其他具体实施方案中，第二类型细胞包含所述群体中的约、至少或不超过10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％的细胞。在其他具体实施方案中，所述组合物中的PDAC包含所述组合物中至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％的细胞。在其他具体的实施方案中，所述胎盘来源的粘附细胞包含所述群体中的约、至少或不超过10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％或45％的细胞。

分离的胎盘来源粘附细胞群体中的细胞可以与另一类型的多个细胞，例如，与干细胞群体，以约100,000,000:1、50,000,000:1、20,000,000:1、10,000,000:1、5,000,000:1、2,000,000:1、1,000,000:1、500,000:1、200,000:1、100,000:1、50,000:1、20,000:1、10,000:1、5,000:1、2,000:1、1,000:1、500:1、200:1、100:1、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、1:2、1:5、1:10、1:100、1:200、1:500、1:1,000、1:2,000、1:5,000、1:10,000、1:20,000、1:50,000、1:100,000、1:500,000、1:1,000,000、1:2,000,000、1:5,000,000、1:10,000,000、1:20,000,000、1:50,000,000或约1：100,000,000的比率组合，比较每个群体中的总有核细胞的数量。分离的胎盘来源粘附细胞群体中的细胞也可以与多种细胞类型的多个细胞组合。

在其他实施方案中，将本文描述的胎盘细胞群体(例如上述PDAC)与成骨胎盘粘附细胞(OPAC)(例如，在2009年8月24日提交的题为“Methods and Compositions for Treatment of Bone Defects With Placental Stem Cells”的12/546,556号专利申请中所描述的OPAC)组合，或者与羊膜来源的血管生成细胞(AMDAC)(例如，标题为“Amnion Derived Angiogenic Cells”的美国专利申请号12/622,352中描述的AMDAC，其公开内容通过引用整体并入本文)组合。

4.3包含分离的胎盘细胞的组合物

本文(例如在第4.1节中)所述的胎盘细胞可以与用于本文所述的方法和组合物中的任何生理上可接受的或医学上可接受的化合物、组合物或装置组合。可用于本文提供的治疗方法中的组合物可包含本文所述的任何一种或多种胎盘细胞。在某些实施方案中，组合物是药学上可接受的组合物，例如包含药学上可接受的载体中的胎盘细胞的组合物。

在某些实施方案中，包含分离的胎盘细胞的组合物另外包含基质，例如脱细胞基质或合成基质。在另一个具体实施方案中，所述基质是三维支架。在另一具体实施方案中，所述基质包含胶原蛋白、明胶、层粘连蛋白、纤连蛋白、胶质、鸟氨酸或玻连蛋白。在另一个具体实施方案中，基质是羊膜或羊膜衍生的生物材料。在另一个具体实施方案中，所述基质包含细胞外膜蛋白。在另一个具体实施方案中，所述基质包含合成的化合物。在另一具体实施方案中，所述基质包含生物活性化合物。在另一具体实施方案中，所述生物活性化合物是小于5,000道尔顿的生长因子、细胞因子、抗体或有机分子。

在另一个实施方案中，可用于本文提供的治疗方法中的组合物包含通过任何前述胎盘细胞或任何前述胎盘细胞群体条件化的培养基。

4.3.1冷冻保存的分离的胎盘细胞

可以保存(例如，冷冻保存)可用于本文所述的方法和组合物中的分离的胎盘细胞群体以备后用。用于冷冻保存细胞(例如干细胞)的方法是本领域众所周知的。分离的胎盘细胞群体可以以容易施用给个体的形式制备，例如，容纳在适于医疗用途的容器内的分离的胎盘细胞群体。这样的容器可以是，例如注射器、无菌塑料袋、烧瓶、罐子或其他容器，分离的胎盘细胞群体可以容易地从其分配。例如，容器可以是血液袋或其他塑料的、医学可接受的袋子，其适用于向接受者静脉内施用液体。在某些实施方案中，容器是允许组合的细胞群体的冷冻保存的容器。

冷冻保存的分离的胎盘细胞群体可以包含源自单个供体或来自多个供体的分离的胎盘细胞。分离的胎盘细胞群体可以与预期的接受体完全HLA匹配，或部分或完全HLA失配。

因此，在一个实施方案中，分离的胎盘细胞可以在容器中包含组织培养塑料粘附胎盘细胞群体的组合物的形式用于本文所述的方法中。在一个具体的实施方案中，分离的胎盘细胞被冷冻保存。在另一个具体的实施方案中，该容器是袋子、烧瓶或罐子。在另一具体实施方案中，所述袋子是无菌塑料袋。在另一个具体的实施方案中，所述袋适用于，允许或促进所述分离的胎盘细胞群体的静脉内施用，例如通过静脉内输注。袋可包含多个腔或隔室，所述多个腔或隔室相互连接以允许分离的胎盘细胞与一种或多种其他溶液(例如药物)在施用之前或期间混合。在另一个具体实施方案中，该组合物包含一种或多种促进组合细胞群体的冷冻保存的化合物。在另一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞群体包含在生理上可接受的水性溶液中。在另一个具体实施方案中，所述生理上可接受的水性溶液是0.9％NaCl溶液。在另一具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞群体包含与所述细胞群体的接受者HLA匹配的胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述组合的细胞群体包含与所述细胞群体的接受者至少部分HLA-失配的胎盘细胞。在另一个具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞源自多个供体。

在某些实施方案中，容器中的分离的胎盘细胞是分离的CD10+、CD34–、CD105+胎盘细胞，其中所述细胞已被冷冻保存，并且被容纳在容器内。在一个具体的实施方案中，所述CD10+、CD34–、CD105+胎盘细胞也是CD200+。在另一个具体的实施方案中，所述CD10+、CD34–、CD105+、CD200+胎盘细胞也是CD45–或CD90+。在另一个具体实施方案中，所述CD10+、CD34–、CD105+、CD200+胎盘细胞也是CD45–和CD90+。在另一具体实施方案中，该CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞另外是CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、CD54+、CD62E–、CD62L–、CD62P–、SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+)、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-cadherindim、CD184/CXCR4–、CD200+、CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4–、ABC-p+、KDR–(VEGFR2–)、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR–、HLA-G–或程序性死亡-1配体(PDL1)+中的一个或者多个，或其任何组合。在另一个具体的实施方案中，该CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞另外是CD13+、CD29+、CD33+、CD38–、CD44+、CD45–、CD54/ICAM+、CD62E–、CD62L–、CD62P–、SH3+(CD73+)、SH4+(CD73+)、CD80–、CD86–、CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CD117–、CD144/VE-cadherindim、CD184/CXCR4–、CD200+、CD133–、OCT-4+、SSEA3–、SSEA4–、ABC-p+、KDR–(VEGFR2–)、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR–、HLA-G–和程序性死亡-1配体(PDL1)+。

在某些其他实施方案中，上述分离的胎盘细胞是分离的CD200+、HLA-G–胎盘细胞，其中所述细胞已冷冻保存，并且被容纳在容器内。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是已经冷冻保存并被容纳在容器内的CD73+、CD105+、CD200+细胞。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是已经冷冻保存并被容纳在容器内的CD200+、OCT-4+干细胞。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是已冷冻保存并被容纳在容器内的CD73+、CD105+细胞，并且其中所述分离的胎盘细胞当在允许形成胚样体的条件下与胎盘细胞群体一起培养时促进形成一个或多个胚样体。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是已经冷冻保存并被容纳在容器内的CD73+、CD105+、HLA-G–细胞。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞是已经冷冻保存且被容纳在容器内的OCT-4+胎盘细胞，并且其中当在允许形成胚样体的条件下与胎盘细胞群体一起培养时，所述细胞促进形成一个或多个胚样体。

在另一个具体的实施方案中，上述分离的胎盘细胞是如通过流式细胞术检测的CD34–、CD10+和CD105+的胎盘干细胞或胎盘多能细胞(例如PDAC)。在另一个具体实施方案中，分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞具有分化成神经表型的细胞、成骨表型的细胞或成软骨表型的细胞的潜能。在另一个具体的实施方案中，分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞另外是CD200+。在另一个具体的实施方案中，如通过流式细胞术检测的，分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞另外是CD90+或CD45–。在另一个具体的实施方案中，如通过流式细胞术检测的，分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞另外是CD90+或CD45–。在另一个具体的实施方案中，如通过流式细胞术检测的，CD34–、CD10+、CD105+、CD200+胎盘细胞另外是CD90+或CD45–。在另一个具体实施方案中，如通过流式细胞术检测的，CD34–、CD10+、CD105+、CD200+细胞另外是CD90+和CD45–。在另一个具体的实施方案中，如通过流式细胞术检测的，CD34–、CD10+、CD105+、CD200+、CD90+、CD45–细胞另外是CD80–和CD86–。在另一个具体实施方案中，CD34–、CD10+、CD105+细胞另外是CD29+、CD38–、CD44+、CD54+、CD80–、CD86–、SH3+或SH4+中的一种或多种。在另一个具体实施方案中，细胞另外是CD44+。在上述任何分离的CD34–、CD10+、CD105+胎盘细胞的具体实施方案中，所述细胞另外是CD117–、CD133–、KDR-(VEGFR2-)、HLA-A,B,C+、HLA-DP,DQ,DR–和/或PDL1+中的一种或多种。

在任何前述冷冻保存的分离的胎盘细胞的具体实施方案中，所述容器是袋子。在各种具体实施方案中，所述容器包含约、至少或至多1×10⁶个所述分离的胎盘细胞、5×10⁶个所述分离的胎盘细胞、1×10⁷个所述分离的胎盘细胞、5×10⁷个所述分离的胎盘细胞、1×10⁸个所述分离的胎盘细胞、5×10⁸个所述分离的胎盘细胞、1×10⁹个所述分离的胎盘细胞、5×10⁹个所述分离的胎盘细胞、1×10¹⁰个所述分离的胎盘细胞或1×10¹⁰个所述分离的胎盘细胞。在任何上述冷冻保存的群体的其他具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞已经传代约、至少或不多于5次、不多于10次、不多于15次或不多于20次。在任何前述冷冻保存的分离的胎盘细胞的另一具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞已经在所述容器内扩增。

在某些实施方案中，胎盘来源的粘附细胞的单个单位剂量在各种实施方案中可包含约、至少或不超过1×10³、3×10³、5×10³、1×10⁴、3×10⁴、5×10⁴、1×10⁵、3×10⁵、5×10⁵、1×10⁶、3×10⁶、5×10⁶、1×10⁷、3×10⁷、5×10⁷、1×10⁸、3×10⁸、5×10⁸、1×10⁹、5×10⁹或1×10¹⁰个胎盘细胞。在某些实施方案中，胎盘来源的粘附细胞的单个单位剂量可包含1×10³至3×10³、3×10³至5×10³、5×10³至1×10⁴、1×10⁴至3×10⁴、3×10⁴至5×10⁴、5×10⁴至1×10⁵、1×10⁵至3×10⁵、3×10⁵至5×10⁵、5×10⁵至1×10⁶、1×10⁶至3×10⁶、3×10⁶至5×10⁶、5×10⁶至1×10⁷、1×10⁷至3×10⁷、3×10⁷至5×10⁷、5×10⁷至1×10⁸、1×10⁸至3×10⁸、3×10⁸至5×10⁸、5×10⁸至1×10⁹、1×10⁹至5×10⁹或5×10⁹至1×10¹⁰个胎盘细胞。在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含胎盘来源的粘附细胞群体，其包含50％或更多的活细胞(即群体中至少50％的细胞是功能性的或活的)。优选地，群体中至少60％的细胞是存活的。更优选地，药物组合物中群体中的至少70％、80％、90％、95％或99％的细胞是存活的。

4.3.2药物组合物

可以将分离的胎盘细胞(例如PDAC)的群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体配制成用于体内使用例如在本文提供的治疗方法中的药物组合物。这样的药物组合物包含在药学上可接受的载体(例如盐水溶液或其他接受的生理上可接受的用于体内施用的溶液)中的分离的胎盘细胞群体或包含分离的胎盘细胞的细胞群体。包含本文所述的分离的胎盘细胞的药物组合物可包含本文别处所述的任何分离的胎盘细胞群体或分离的胎盘细胞群体的任何组合。药物组合物可以包含胎儿、母体或胎儿和母体两者的分离的胎盘细胞。本文提供的药物组合物还可以包含从单个个体或胎盘或者从多个个体或胎盘获得的分离的胎盘细胞。

本文提供的药物组合物可以包含任何数量的分离的胎盘细胞。例如，胎盘来源的粘附细胞的单个单位剂量可包含约、至少或不超过1×10³、3×10³、5×10³、1×10⁴、3×10⁴、5×10⁴、1×10⁵、3×10⁵、5×10⁵、1×10⁶、3×10⁶、5×10⁶、1×10⁷、3×10⁷、5×10⁷、1×10⁸、3×10⁸、5×10⁸、1×10⁹、5×10⁹或1×10¹⁰个胎盘细胞或1×10³至3×10³、3×10³至5×10³、5×10³至1×10⁴、1×10⁴至3×10⁴、3×10⁴至5×10⁴、5×10⁴至1×10⁵、1×10⁵至3×10⁵、3×10⁵至5×10⁵、5×10⁵至1×10⁶、1×10⁶至3×10⁶、3×10⁶至5×10⁶、5×10⁶至1×10⁷、1×10⁷至3×10⁷、3×10⁷至5×10⁷、5×10⁷至1×10⁸、1×10⁸至3×10⁸、3×10⁸至5×10⁸、5×10⁸至1×10⁹、1×10⁹至5×10⁹或5×10⁹至1×10¹⁰个胎盘细胞。

在某些实施方案中，本文提供的药物组合物施用于患有糖尿病性周围神经病变的受试者一次。在某些实施方案中，本文提供的药物组合物在多个场合(例如，两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次或多于十次)施用于患有糖尿病性周围神经病变的受试者。剂量之间的间隔可以是每周、每两周、每月、每两个月或每年。间隔也可以是不规则的。根据这种方案施用的胎盘干细胞的剂量包括但不限于1×10³、3×10³、5×10³、1×10⁴、3×10⁴、5×10⁴、1×10⁵、3×10⁵、5×10⁵、1×10⁶、3×10⁶、5×10⁶、1×10⁷、3×10⁷、5×10⁷、1×10⁸、3×10⁸、5×10⁸、1×10⁹、5×10⁹或1×10¹⁰个胎盘细胞，或者1×10³至3×10³、3×10³至5×10³、5×10³至1×10⁴、1×10⁴至3×10⁴、3×10⁴至5×10⁴、5×10⁴至1×10⁵、1×10⁵至3×10⁵、3×10⁵至5×10⁵、5×10⁵至1×10⁶、1×10⁶至3×10⁶、3×10⁶至5×10⁶、5×10⁶至1×10⁷、1×10⁷至3×10⁷、3×10⁷至5×10⁷、5×10⁷至1×10⁸、1×10⁸至3×10⁸、3×10⁸至5×10⁸、5×10⁸至1×10⁹、1×10⁹至5×10⁹或5×10⁹至1×10¹⁰个胎盘干细胞。在一个具体的实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是1×10³个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量为3×10³个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁴个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁵个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量为1×10⁶个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁶个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁷个胎盘干细胞。

在某些实施方案中，包含胎盘干细胞(例如CD10+、CD105+、CD200+、CD34–胎盘干细胞)的药物组合物作为单剂量施用于患有糖尿病性周围神经病变的受试者一次。在某些实施方案中，包含胎盘干细胞(例如CD10+、CD105+、CD200+、CD34–胎盘干细胞)的药物组合物作为单剂量施用于患有糖尿病性周围神经病变的受试者，然后在约1周后施用第二剂量。在某些实施方案中，将包含胎盘干细胞(例如CD10+、CD105+、CD200+、CD34–胎盘干细胞)的药物组合物作为单剂量施用于患有糖尿病性周围神经病变的受试者，然后在约1周后施用第二剂量，和在这之后的大约一周后(即，初次施用后约两周)施用第三次剂量。根据这种方案施用的胎盘干细胞的剂量包括但不限于1×10³、3×10³、5×10³、1×10⁴、3×10⁴、5×10⁴、1×10⁵、3×10⁵、5×10⁵、1×10⁶、3×10⁶、5×10⁶、1×10⁷、3×10⁷、5×10⁷、1×10⁸、3×10⁸、5×10⁸、1×10⁹、5×10⁹或1×10¹⁰个胎盘细胞，或者1×10³至3×10³、3×10³至5×10³、5×10³至1×10⁴、1×10⁴至3×10⁴、3×10⁴至5×10⁴、5×10⁴至1×10⁵、1×10⁵至3×10⁵、3×10⁵至5×10⁶、5×10⁵至1×10⁶、1×10⁶至3×10⁶、3×10⁶至5×10⁶、5×10⁶至1×10⁷、1×10⁷至3×10⁷、3×10⁷至5×10⁷、5×10⁷至1×10⁸、1×10⁸至3×10⁸、3×10⁸至5×10⁸、5×10⁸至1×10⁹、1×10⁹至5×10⁹或5×10⁹至1×10¹⁰个胎盘干细胞。在一个具体的实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是1×10³个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量为3×10³个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁴个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁵个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量为1×10⁶个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁶个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁷个胎盘干细胞。

在某些实施方案中，包含胎盘干细胞(例如CD10+、CD105+、CD200+、CD34–胎盘干细胞)的药物组合物作为单剂量施用于患有糖尿病性周围神经病变的受试者，然后在约1个月之后(例如，初始剂量后约27、28、29、30、31、32或33天)施用第二剂量。在某些实施方案中，包含胎盘干细胞(例如CD10+、CD105+、CD200+、CD34–胎盘干细胞)的药物组合物作为单剂量施用于患有糖尿病性周围神经病变的受试者，然后在约1个月后施用第二剂量，和在这之后约一个月后(即，在最初施用后约两个月，例如在首次施用后约第55、56、57、58、59、60、61、62、63或64天)施用第三剂量。根据这种方案施用的胎盘干细胞的剂量包括但不限于1×10³、3×10³、5×10³、1×10⁴、3×10⁴、5×10⁴、1×10⁵、3×10⁵、5×10⁵、1×10⁶、3×10⁶、5×10⁶、1×10⁷、3×10⁷、5×10⁷、1×10⁸、3×10⁸、5×10⁸、1×10⁹、5×10⁹或1×10¹⁰个胎盘细胞，或者1×10³至3×10³、3×10³至5×10³、5×10³至1×10⁴、1×10⁴至3×10⁴、3×10⁴至5×10⁴、5×10⁴至1×10⁵、1×10⁵至3×10⁵、3×10⁵至5×10⁶、5×10⁵至1×10⁶、1×10⁶至3×10⁶、3×10⁶至5×10⁶、5×10⁶至1×10⁷、1×10⁷至3×10⁷、3×10⁷至5×10⁷、5×10⁷至1×10⁸、1×10⁸至3×10⁸、3×10⁸至5×10⁸、5×10⁸至1×10⁹、1×10⁹至5×10⁹或5×10⁹至1×10¹⁰个胎盘干细胞。在一个具体的实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是1×10³个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量为3×10³个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁴个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁵个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量为1×10⁶个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁶个胎盘干细胞。在另一个具体实施方案中，药物组合物中胎盘干细胞的剂量是3×10⁷个胎盘干细胞。

本文提供的药物组合物包含含有50％或更多存活细胞的细胞群体(即，群体中至少50％的细胞是功能性的或活的)。优选地，群体中至少60％的细胞是存活的。更优选地，药物组合物中群体的至少70％、80％、90％、95％或99％的细胞是存活的。

本文提供的药物组合物可以包含一种或多种例如促进植入的化合物(例如，抗T细胞受体抗体、免疫抑制剂等)、稳定剂如白蛋白、右旋糖40、明胶、羟乙基淀粉、血浆液(plasmalyte)等。

当配制成可注射溶液时，在一个实施方案中，药物组合物包含约1％至1.5％的HSA和约2.5％的萄聚糖。在一个优选的实施方案中，所物组合物在包含5％HSA和10％萄聚糖，任选地包含免疫抑制剂，例如，例如10mg/kg的环孢菌素A的溶液中包含约5×10⁶个细胞/毫升至约2×10⁷个细胞/毫升。

在其他实施方案中，药物组合物(例如溶液)包含多个细胞，例如分离的胎盘细胞，例如胎盘干细胞或者胎盘多能细胞，其中所述药物组合物包含约1.0±0.3×10⁶个细胞/毫升至约每毫升5.0±1.5×10⁶个细胞。在其他实施方案中，药物组合物包含约1.5×10⁶个细胞/毫升至约3.75×10⁶个细胞/毫升。在其他实施方案中，药物组合物包含约1×10⁶个细胞/mL至约50×10⁶个细胞/mL，约1×10⁶个细胞/mL至约40×10⁶个细胞/mL，约1×10⁶个细胞/mL至约30×10⁶个细胞/mL，约1×10⁶个细胞/mL至约20×10⁶个细胞/mL，约1×10⁶个细胞/mL至约15×10⁶个细胞/mL或约1×10⁶个细胞/mL至约10×10⁶个细胞/mL。在某些实施方案中，药物组合物不包含可见的细胞团块(即，没有大细胞团块)，或基本没有这种可见的团块。如本文所用，“大细胞团块”是指在没有放大的情况下可见的细胞聚集，例如肉眼可见的，并且通常指大于约150微米的细胞聚集。在一些实施方案中，药物组合物包含约2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％、5.5％、6.0％、6.5％、7.0％、7.5％、8.0％、8.5％、9.0％、9.5％或10％的萄聚糖，例如萄聚糖-40。在具体的实施方案中，所述组合物包含约7.5％至约9％的萄聚糖-40。在具体的实施方案中，所述组合物包含约5.5％的萄聚糖-40。在某些实施方案中，药物组合物包含约1％至约15％的人血清白蛋白(HSA)。在具体的实施方案中，药物组合物包含约1％、2％、3％、4％、5％、65、75、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％的HSA。在一个具体的实施方案中，所述细胞已经被冷冻保存和解冻。在另一个具体的实施方案中，所述细胞已经通过70μM至100μM的过滤器过滤。在另一个具体实施方案中，所述组合物不包含可见的细胞团块。在另一个具体的实施方案中，所述组合物包含少于每10⁶个细胞约200个细胞团块，其中所述细胞团块仅在显微镜如光学显微镜下可见。在另一个具体的实施方案中，所述组合物包含少于每10⁶个细胞约150个细胞团块，其中所述细胞团块仅在显微镜如光学显微镜下可见。在另一个具体的实施方案中，所述组合物包含少于每10⁶个细胞约100个细胞团块，其中所述细胞团块仅在显微镜如光学显微镜下可见。

在一个具体的实施方案中，药物组合物包含约1.0±0.3×10⁶个细胞/毫升、约5.5％萄聚糖-40(w/v)、约10％HSA(w/v)和约5％DMSO(v/v)。在另一个具体的实施方案中，包含本文提供的胎盘干细胞的药物组合物包含约5.75％的萄聚糖-40、约10％的人血清白蛋白和约2.5％的DMSO。

在其他实施方案中，药物组合物包含多个细胞，例如在包含10％萄聚糖-40的溶液中的多个分离的胎盘细胞，其中所述药物组合物包含约1.0±0.3×10⁶个细胞/毫升至约5.0±1.5×10⁶个细胞/毫升，并且其中所述组合物不包含肉眼可见的细胞团块(即，不包含大细胞团块)。在一些实施方案中，药物组合物包含约1.5×10⁶个细胞/毫升至约3.75×10⁶个细胞/毫升。在一个具体的实施方案中，所述细胞已经被冷冻保存和解冻。在另一个具体的实施方案中，所述细胞已经通过70μM至100μM的过滤器过滤。在另一个具体实施方案中，所述组合物包含少于每10⁶个细胞约200个微细胞团块(即，仅在放大的情况下可见的细胞团块)。在另一个具体的实施方案中，药物组合物包含少于每10⁶个细胞约150个微细胞团块。在另一个具体的实施方案中，药物组合物包含少于每10⁶个细胞约100个微细胞团块。在另一具体实施方案中，药物组合物包含小于15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％或2％的DMSO或小于1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％的DMSO。

本文还提供了包含细胞的组合物，其中所述组合物通过本文公开的方法之一产生。例如，在一个实施方案中，药物组合物包含细胞，其中所述药物组合物通过包括过滤包含胎盘细胞(例如，胎盘干细胞或者胎盘多能细胞)的溶液以形成过滤的含细胞溶液；用第一溶液稀释过滤的含细胞溶液至每毫升约1至50×10⁶、1至40×10⁶、1至30×10⁶、1至20×10⁶、1至15×10⁶或1至10×10⁶个细胞，例如在冷冻保存之前；并用包含萄聚糖但不包含人血清白蛋白(HSA)的第二溶液稀释得到的过滤的含细胞溶液以产生所述组合物的方法产生。在某些实施方案中，所述稀释达到不超过约15×10⁶个细胞/毫升。在某些实施方案中，所述稀释达到不超过约10±3×10⁶个细胞/毫升。在某些实施方案中，所述稀释达到不超过约7.5×10⁶个细胞/毫升。在其他某些实施方案中，如果过滤的含细胞溶液在稀释之前包含小于约15×10⁶个细胞/毫升，则过滤是任选的。在其他某些实施方案中，如果过滤的含细胞溶液在稀释之前包含小于约10±3×10⁶个细胞/毫升，则过滤是任选的。在其他某些实施方案中，如果在稀释之前，过滤的含细胞溶液包含小于约7.5×10⁶个细胞/毫升，则过滤是任选的。

在一个具体的实施方案中，细胞在用第一稀释溶液的所述稀释和用所述第二稀释溶液的所述稀释之间冷冻保存。在另一具体实施方案中，第一稀释溶液包含萄聚糖和HSA。第一稀释溶液或第二稀释溶液中的萄聚糖可以是任何分子量的萄聚糖，例如分子量为约10kDa至约150kDa的萄聚糖。在一些实施方案中，所述第一稀释溶液或所述第二溶液中的所述萄聚糖为约2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％、5.5％、6.0％、6.5％、7.0％、7.5％、8.0％、8.5％、9.0％、9.5％或10％的萄聚糖。在另一具体实施方案中，所述第一稀释溶液或所述第二稀释溶液中的萄聚糖是萄聚糖-40。在另一具体实施方案中，所述第一稀释溶液和所述第二稀释溶液中的萄聚糖是萄聚糖-40。在另一具体实施方案中，所述第一稀释溶液中的所述萄聚糖-40是5.0％的萄聚糖-40。在另一具体实施方案中，所述第一稀释溶液中的所述萄聚糖-40是5.5％的萄聚糖-40。在另一具体实施方案中，所述第二稀释溶液中的所述萄聚糖-40是10％的萄聚糖-40。在另一个具体的实施方案中，所述包含HSA的溶液中的所述HSA为1-15％的HSA。在另一个具体实施方案中，所述包含HSA的溶液中的所述HSA为约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％的HSA。在另一个具体的实施方案中，所述包含HSA的溶液中的所述HSA是10％的HSA。在另一具体实施方案中，所述第一稀释溶液包含HSA。在另一个具体的实施方案中，所述第一稀释溶液中的所述HSA是10％的HSA。在另一具体实施方案中，所述第一稀释溶液包含冷冻保护剂。在另一个具体实施方案中，所述冷冻保护剂是DMSO。在另一具体实施方案中，所述第二稀释溶液中的所述萄聚糖-40是约10％的萄聚糖-40。在另一个具体的实施方案中，所述包含细胞的组合物包含约7.5％至约9％的萄聚糖。在另一个具体的实施方案中，药物组合物包含每毫升约1.0±0.3×10⁶个细胞至每毫升约5.0±1.5×10⁶个细胞。在另一个具体的实施方案中，药物组合物包含每毫升约1.5×10⁶个细胞/毫升至约3.75×10⁶个细胞/毫升。

在另一个实施方案中，药物组合物通过包括以下步骤的方法制备：(a)在冷冻保存之前过滤包含胎盘细胞(例如，胎盘干细胞或者胎盘多能细胞)的含细胞溶液以产生过滤的含细胞溶液；(b)冷冻保存在过滤的含细胞溶液中每毫升约1-50×10⁶、1-40×10⁶、1-30×10⁶、1-20×10⁶、1-15×10⁶或1-10×10⁶个细胞的细胞；(c)解冻细胞；和(d)用萄聚糖-40溶液将过滤的含细胞溶液稀释约1:1至约1:11(v/v)。在某些实施方案中，如果在步骤(a)之前细胞的数量少于约10±3×10⁶个细胞/毫升，则过滤是任选的。在另一个具体的实施方案中，步骤(b)中的细胞以约10±3×10⁶个细胞/毫升冷冻保存。在另一个具体的实施方案中，将步骤(b)中的细胞在包含约5％至约10％萄聚糖-40和HSA的溶液中冷冻保存。在某些实施方案中，步骤(b)中的所述稀释达到不超过约15×10⁶个细胞/毫升。

在另一个实施方案中，药物组合物通过包括以下步骤的方法制备：(a)将胎盘细胞(例如，胎盘干细胞或者胎盘多能细胞)悬浮于包含10％HSA的5.5％萄聚糖-40溶液中以形成含细胞溶液；(b)通过70μM过滤器过滤含细胞溶液；(c)用含有5.5％萄聚糖-40、10％HSA和5％DMSO的溶液将含细胞溶液稀释至每毫升约1-50×10⁶、1-40×10⁶、1-30×10⁶、1-20×10⁶、1-15×10⁶或1-10×10⁶个细胞；(d)冷冻保存细胞；(e)解冻细胞；和(f)用10％萄聚糖-40将含细胞溶液1:1至1:11(v/v)稀释。在某些实施方案中，步骤(c)中的所述稀释达到不超过约15×10⁶个细胞/毫升。在某些实施方案中，步骤(c)中的所述稀释达到不超过约10±3×10⁶个细胞/mL。在某些实施方案中，步骤(c)中的所述稀释达到不超过约7.5×10⁶个细胞/mL。

在另一个实施方案中，包含细胞的组合物通过包括以下步骤的方法制备：(a)离心多个细胞以收集细胞；(b)将细胞重悬于5.5％萄聚糖-40中；(c)离心细胞以收集细胞；(d)将细胞重悬于含有10％HSA的5.5％萄聚糖-40溶液中；(e)通过70μM滤器过滤细胞；(f)在5.5％萄聚糖-40、10％HSA和5％DMSO中稀释细胞至每毫升约1-50×10⁶、1-40×10⁶、1-30×10⁶、1-20×10⁶、1-15×10⁶或1-10×10⁶个细胞；(g)冷冻保存细胞；(h)解冻细胞；和(i)用10％萄聚糖-40将细胞1:1至1:11(v/v)稀释。在某些实施方案中，步骤(f)中的所述稀释达到不超过约15×10⁶个细胞/毫升。在某些实施方案中，步骤(f)中的所述稀释达到不超过约10±3×10⁶个细胞/mL。在某些实施方案中，步骤(f)中的所述稀释达到不超过约7.5×10⁶个细胞/mL。在其他某些实施方案中，如果细胞的数量少于每毫升约10±3×10⁶个细胞，则过滤是可选的。

本文所述的组合物(例如，包含分离的胎盘细胞的药物组合物)可以包含本文所述的任何分离的胎盘细胞。

可以使用适于施用细胞产物的其他可注射制剂。

在一个实施方案中，药物组合物包含分离的胎盘细胞，其基本上或完全是非母体起源的，即具有胎儿基因型；例如至少约90％、95％、98％、99％或约100％是非母体起源的。例如，在一个实施方案中，药物组合物包含为CD200⁺和HLA-G–；CD73⁺、CD105⁺和CD200⁺；CD200⁺和OCT-4⁺；CD73⁺、CD105⁺和HLA-G–；CD73⁺和CD105⁺，并当胎盘细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时，促进在包含所述分离的胎盘细胞群体的胎盘细胞群体中形成一种或多种胚样体的分离的胎盘细胞群体；或者，药物组合物包含为OCT-4⁺，并当胎盘细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时，促进在包含所述分离的胎盘细胞群体的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚样体的分离的胎盘细胞群体；或前述的组合，其中所述分离的胎盘细胞的至少70％、80％、90％、95％或99％是非母体起源的。在另一个实施方案中，药物组合物包含为CD10⁺、CD105⁺和CD34^–；CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺和CD34^–；CD10⁺、CD105⁺、CD200⁺、CD34^–和CD90⁺或CD45^–中至少一种；CD10⁺、CD90⁺、CD105⁺、CD200⁺、CD34^–和CD45^–；CD10⁺、CD90⁺、CD105⁺、CD200⁺、CD34^–和CD45^–；CD200⁺和HLA-G^–；CD73⁺、CD105⁺和CD200⁺；CD200⁺和OCT-4⁺；CD73⁺、CD105⁺和HLA-G^–；CD73⁺和CD105⁺，并当所述胎盘细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时，促进在包含所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚样体的分离的胎盘细胞群体；或者，药物组合物包含为OCT-4⁺，并当胎盘细胞群体在允许形成胚样体的条件下培养时，促进在包含所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞群体中形成一个或多个胚样体的分离的胎盘细胞群体；或者药物组合物包含CD117^–、CD133^–、KDR^–、CD80^–、CD86^–、HLA-A,B,C⁺、HLA-DP,DQ,DR^–和/或PDL1⁺的一种或多种；或前述的组合，其中所述分离的胎盘细胞的至少70％、80％、90％、95％或99％是非母体起源的。在具体的实施方案中，药物组合物另外包含不是从胎盘获得的干细胞。

本文提供的组合物(例如药物组合物)中的分离的胎盘细胞可以包含源自单个供体或来自多个供体的胎盘细胞。分离的胎盘细胞可以与预期的接受者完全HLA匹配，或部分或完全HLA失配。

4.3.3包含分离的胎盘细胞的基质

本文进一步提供了包含含有胎盘细胞或分离的胎盘细胞群体的基质、水凝胶、支架等的组合物。这种组合物可以代替液体悬浮液中的细胞或在液体悬浮液中的细胞之外使用。

本文所述的分离的胎盘细胞可以被接种到天然基质上，例如胎盘生物材料如羊膜材料。这样的羊膜材料可以是例如直接从哺乳动物胎盘解剖的羊膜；固定或热处理的羊膜、基本干燥的(即<20％H2O)的羊膜、绒毛膜、基本干燥的绒毛膜、基本干燥的羊膜和绒毛膜等。在Hariri的美国申请公开号2004/0048796中描述了可以在其上接种分离的胎盘细胞的优选的胎盘生物材料，其公开内容通过引用整体并入本文。

本文所述的分离的胎盘细胞可以悬浮在适用于例如注射的水凝胶溶液中。用于这种组合物的合适的水凝胶包括自组装肽，如RAD16。在一个实施方案中，可以允许包含细胞的水凝胶溶液例如在模具中硬化以形成具有分散在其中的细胞用于植入的基质。在这种基质中的分离的胎盘细胞也可以培养，使得细胞在植入之前有丝分裂地扩增。水凝胶是例如通过共价键、离子键或氢键交联的有机聚合物(天然或合成的)以产生三维开放晶格结构，其截留水分子形成凝胶。水凝胶形成材料分别包括离子交联的多糖如藻酸及其盐、肽、聚磷腈和聚丙烯酸酯，或者通过温度或pH交联的嵌段聚合物如聚环氧乙烷-聚丙二醇嵌段共聚物。在一些实施方案中，水凝胶或基质是可生物降解的。

在一些实施方案中，制剂包含可原位聚合的凝胶(参见例如美国专利申请公开2002/0022676，其公开内容通过引用整体并入本文；Anseth等,J.Control Release,78(1-3):199-209(2002)；Wang等,Biomaterials,24(22):3969-80(2003)。

在一些实施方案中，具有带电侧基或其单价离子盐的聚合物至少部分地可溶于水溶液中，例如水、缓冲盐溶液或含水醇溶液。具有可与阳离子反应的酸性侧基的聚合物的实例是聚(磷腈)、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、聚(乙酸乙烯酯)和磺化聚合物，如磺化聚苯乙烯。也可以使用具有由丙烯酸或甲基丙烯酸与乙烯基醚单体或聚合物反应形成的酸性侧基的共聚物。酸性基团的实例是羧酸基团、磺酸基团、卤化(优选地氟化)醇基团、酚OH基团和酸性OH基团。

在一个具体的实施方案中，基质是毛毡，其可以由从生物可吸收材料例如PGA、PLA、PCL共聚物或共混物或者透明质酸制成的复丝纱线组成。纱线使用由卷曲、切割、梳理和针刺组成的标准纺织品加工技术制成毛毡。在另一个优选实施方案中，将本发明的细胞接种到可以是复合结构的泡沫支架上。另外，三维框架可以被模制成有用的形状，例如身体中待修复、替换或增强的特定结构。可以使用的支架的其他例子包括无纺垫、多孔泡沫或自组装肽。无纺垫可以使用由羟基乙酸和乳酸(例如，PGA/PLA)的合成可吸收共聚物(VICRYL,Ethicon,Inc.,Somerville,N.J.)组成的纤维形成。由例如聚(ε-己内酯)/聚(乙醇酸)(PCL/PGA)共聚物组成的，通过诸如冷冻干燥或冻干法形成的泡沫体(参见，例如，美国专利号6,355,699)也可以用作支架。

可将本文所述的分离的胎盘细胞或其共培养物接种到三维框架或支架上并体内植入。这样的框架可以与任何一种或多种生长因子、细胞、药物或例如刺激组织形成的其他组分组合植入。

可以使用的支架的实例包括无纺垫、多孔泡沫或自组装肽。无纺垫可以使用由羟基乙酸和乳酸(例如，PGA/PLA)的合成可吸收共聚物(VICRYL,Ethicon，Inc.，Somerville，N.J.)组成的纤维形成。由例如聚(ε-己内酯)/聚(乙醇酸)(PCL/PGA)共聚物组成的，通过诸如冷冻干燥或冻干法形成的泡沫体(参见，例如美国专利号6,355,699)也可以用作支架。

在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞可以被接种到毛毡上，或与毛毡接触，该毛毡例如可以由从诸如PGA、PLA、PCL共聚物或共混物或者透明质酸的生物可吸收材料制成的复丝纱线组成。

本文提供的分离的胎盘细胞在另一个实施方案中可以被接种到可以是复合结构的泡沫支架上。这种泡沫支架可以被模制成有用的形状，例如身体中待修理、替换或增强的特定结构的一部分的形状。在一些实施方案中，框架例如用0.1M乙酸处理，然后在接种细胞之前，在聚赖氨酸、PBS和/或胶原中温育以增强细胞附着。可修饰基质的外表面以改善细胞的附着或生长和组织的分化，例如通过血浆涂覆基质，或添加一种或多种蛋白质(例如胶原蛋白、弹性纤维、网状纤维)、糖蛋白、糖胺聚糖(例如硫酸肝素、硫酸软骨素-4、硫酸软骨素-6、硫酸皮肤素、硫酸角蛋白等)、细胞基质和/或其他材料，例如但不限于明胶、藻酸盐、琼脂、琼脂糖和植物胶，等。

在一些实施方案中，支架包含使其成为非血栓形成的材料或用其处理。这些处理和材料也可以促进和维持内皮生长、迁移和细胞外基质沉积。这些材料和处理的实例包括但不限于天然材料，例如基底膜蛋白如层粘连蛋白和IV型胶原蛋白、合成材料如EPTFE和分段聚氨酯脲硅酮如PURSPAN^TM(The Polymer Technology Group,Inc.,Berkeley,Calif.)。支架还可以包含抗血栓剂如肝素；在接种分离的胎盘细胞之前，支架也可以处理以改变表面电荷(例如,用血浆包被)。

本文提供的胎盘细胞(例如，PDAC)也可以接种到生理上可接受的陶瓷材料上或与其接触，所述陶瓷材料包括但不限于单、二、三、a-三-、β-三-和四-磷酸钙、羟基磷灰石、氟磷灰石、硫酸钙、氟化钙、氧化钙、碳酸钙、磷酸镁钙、生物活性玻璃如及它们的混合物。目前可商购获得的多孔生物相容性陶瓷材料包括(加拿大CanMedica公司)、(法国默克生物材料公司)、(Mathys公司，瑞士Bettlach)和矿化胶原骨移植产品如HEALOS^TM(DePuy,Inc.,Raynham，MA)和和(Orthovita,Malvern,Pa)。该框架可以是天然和/或合成材料的混合物、共混物或复合物。

在一个实施方案中，分离的胎盘细胞以约0.5×10⁶至约8×10⁶个细胞/mL接种到合适的支架上或与其接触。

5.实施例

5.1实施例1：治疗方法

5.1.1使用胎盘干细胞治疗DPN

具有I型糖尿病的52岁男性的左腿出现麻木和疼痛。进行糖尿病性周围神经病变的诊断。诊断后，根据以下方案用CD10+、CD34–、CD105+、CD200+胎盘干细胞治疗受试者：连续三个月每月肌肉内施用3x10⁷个CD10+、CD34–、CD105+、CD200+胎盘干细胞。在接下来的24个月内监测个体中DPN的任何症状改善的迹象。如果在监测期间DPN的任何症状改善，包括通过皮肤活组织检查中表皮神经纤维的量化和定性所测量的表皮神经纤维密度的改善，则确定治疗有效性。

5.2实施例2：DPN治疗方案

用CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘干细胞治疗年龄至少18岁的患有糖尿病性周围神经病变(DPN)的受试者。受试者组I：在第1天(治疗的第一天)、第29天和第57天肌肉内施用3x10⁶个CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘干细胞。受试者组II：在第1天(治疗的第一天)、第29天和第57天肌肉内注射3x10⁷个CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘干细胞。受试者组III：在第1天(治疗的第一天)、第29天和第57天肌肉内施用安慰剂。每个剂量的胎盘干细胞以15次0.30ml注射施用，并且在受试者的膝盖以下和脚踝以上施用。

临床终点

CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘干细胞用于治疗DPN的功效的主要临床终点可以是表皮神经纤维密度的改善，如通过皮肤活组织检查中表皮神经纤维的量化和定性所测量的。神经纤维数量/密度的增加指示神经病的改善。

受试者选择

可以使用以下合格标准来选择认为适合于用CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘干细胞治疗的受试者。在决定该治疗方案是否适用于特定受试者时，将考虑所有相关的医学和非医学状况。

受试者应该符合以下条件以适合于治疗方案：

·男性和女性，年满18岁或以上。

·如美国糖尿病协会(ADA)或世界卫生组织(WHO)标准定义的2型糖尿病(DM)。

·符合2型糖尿病导致的糖尿病性周围神经病变(DPN)的已建立标准，具有如下：(a)异常症状(对于一种或多种症状，NTSS-6≥6点(总分)或≥2.0点)和(b)异常体征(UENS得分为2-24和/或NIS-LL得分为2-10)。

·具有生育潜力的女性在筛查时必须血清妊娠试验阴性，和在用研究疗法治疗前尿妊娠试验阴性。此外，具有性行为的具有生育潜力的女性(FCBP)必须同意同时使用以下两种适当形式的避孕方法，例如：口服、注射或植入式激素避孕、输卵管结扎、宫内节育器(IUD)、用杀精子剂的屏障避孕器或在研究期间输精管结扎的伴侣。

·在研究期间，男性(包括输精管切除术者)必须同意在与FCBP发生性行为时使用屏障避孕(乳胶避孕套)。

具有一种或多种以下状况的受试者可以从治疗方案中排除：

·阻碍受试者参与研究的任何重大的医学状况、实验室异常情况或精神疾病。

·糖尿病患者中神经病的其他原因：慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病；由维生素B12缺乏引起的神经病，甲状腺功能减退症和尿毒症综合征；或由于夹伤或创伤引起的神经病。

·急性疼痛性糖尿病性神经病综合征的可逆过程：在快速血糖控制的情况下出现的治疗诱导的糖尿病性神经病；糖尿病性神经病性恶病质；和糖尿病性厌食症，对于有意减轻体重看到的一种糖尿病性神经病。

·严重外周动脉疾病(PAD)的先前诊断史。

·血小板减少症和凝血病，以避免由多次肌肉内(IM)注射引起的严重淤伤或出血。

·包括在受试者参加研究的情况下使他或她处于不可接受的风险中的实验室异常存在的任何情况。

·任何混淆解释研究数据的能力的情况。

·正在服用阿片类药物治疗DPN的受试者。

·怀孕或哺乳期的女性。

·筛查时体重指数>40kg/m²的受试者。

·由DM和/或重大共病神经疾病(如帕金森氏症、癫痫、多发性硬化症、酒精性周围神经病)以外的病症或暴露于怀疑会引起神经病的症状的药物(例如但不限于甲硝唑、抗结核药物和重金属)而导致的神经病。

·由于没有腓肠神经感觉动作电位或者UENS>24和/或NIS-LL>10所判断的晚期神经病。

·先前诊断为严重肢体缺血的历史。

·由糖尿病(DM)引起的糖尿病性足溃疡病史(任何时候)和/或正在进行肢体血管重建术和/或截肢的病史。

·诊断为1型糖尿病和/或以下任何情况：35岁前诊断为DM；DM诊断后1年内需要胰岛素治疗DM；糖尿病性酮症酸中毒史。

·筛查时天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)或碱性磷酸酶≥2.5倍正常上限(ULN)。

·筛查时使用肾病饮食改良研究公式计算的估计的肾小球滤过率(eGFR)<30mL/分钟/1.73m²或过去的一年中异常eGFR<60和下降低于正常值>15mL/分钟/1.73m²的病史。

·筛查时胆红素水平>2mg/dL(除非受试者患有已知的吉尔伯特氏病)。

·在用IP给药前4周内未治疗的慢性感染或用全身抗生素治疗任何感染。

·未控制的高血压(定义为，筛查过程中，在受试者坐下并休息至少5分钟时进行2次独立测量时，舒张压>100mmHg或收缩压>180mmHg)。

·严重心脏病史，包括但不限于，恶性室性心律失常、CCS III-IV级心绞痛、在签署知情同意书(ICF)前6个月内心肌梗塞/经皮冠状动脉介入治疗(PCI)/冠状动脉旁路搭桥术(CABG)、未来3个月内将发生的冠状动脉血管重建术、签署知情同意书前6个月内的短暂性脑缺血发作/脑血管意外和/或纽约心脏协会[NYHA]III或IV期充血性心力衰竭。注意：稳定的加拿大心血管协会(CCS)I-II级心绞痛是允许的。

·筛查时控制不良的DM(血红蛋白A1c>10％)。

·筛查时未治疗的增殖性视网膜病。

·由于伴随疾病，预期寿命少于2年。

·5年内恶性肿瘤的病史，除了以下情况：皮肤的基底细胞癌或鳞状细胞癌，目前认为治愈的癌症的远期病史或阳性子宫颈涂片试验随后复查为阴性。

·对牛或猪产品的任何组分、葡聚糖40和二甲亚砜[DMSO]过敏的历史。

·受试者在用研究疗法治疗前90天(或5个半衰期，以较长者为准)内已接受某一研究药剂-未经美国食品和药物管理局(FDA)批准用于任何适应症的市售用途的药剂或器械-或在此研究完成之前计划参与另一项治疗性研究，或在任何时间接受过先前的基因或细胞治疗。

临床结果

如果显示了一个或多个临床终点的改善，则证实了CD10⁺、CD34^–、CD105⁺、CD200⁺胎盘干细胞在治疗DPN中的功效。

等同：

本公开的范围不受在此描述的具体实施例的限制。事实上，除了所描述的那些之外，根据前述描述，对于本文提供的主题的各种修改对于本领域技术人员而言将变得显而易见。这些修改应落入所附权利要求的范围内。

本文引用了各种出版物、专利和专利申请，其公开内容通过引用整体并入。