本发明涉及医药，特别是山药水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用。
背景技术：
植物雌激素(phytoestrogen,pe)来源于植物，是一类具有雌激素样作用的活性成分，与类固醇激素—17β-雌二醇有相似的结构。植物雌激素与雌激素受体(estrogenreceptor,er)结合，雌激素受体与配体结合后诱导形成雌激素受体同源或异源二聚体，接着激活细胞核与细胞外的信号通路发挥雌激素样作用。有报道称长期使用合成的雌激素易产生高凝血状态、高血压、水肿等副反应，并有可能会增加乳腺癌、子宫内膜癌的发病率。而植物雌激素是一类不良反应小，对生殖系统、骨骼系统、心血管系统及中枢神经等方面具有广泛的作用的天然化合物，应用起来更加安全，因此对含有植物雌激素的中药的作用研究逐渐成为热点。
山药为薯蓣科植物薯蓣dioscoreaoppositathunb.的干燥根茎。冬季茎叶枯萎后采挖，切去根头，洗净，除去外皮和须根，干燥，或趁鲜切片，干燥。中国药典中记载，山药性甘，平。归脾、肺、肾经，具有补脾养胃，久泻不止，肺虚喘咳，肾虚遗精，带下，尿频，虚热消渴的功效。可见山药的药理作用十分广泛，但目前对山药水提物雌激素的研究还未见公开报道。
技术实现要素：
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种山药水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，可有效解决山药水提物的制备及其治疗雌激素缺乏症的用药问题。
本发明解决的技术方案是，一种山药水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，所述的山药水提物是，将山药洗净，切片烘干，每次加10倍药物重量的水煎煮3次，第一次先加10倍重量的水浸泡30min，煎煮30min，过滤，得第一次滤液；药渣再加药物10倍重量的水，煎煮30min，过滤，得第二次滤液；第二次药渣再加药物10倍重量的水，煎煮30min，过滤，得第三次滤液，合并三次滤液，减压浓缩，真空干燥得山药水提物。
本发明山药水提物具有雌激素样活性，作为唯一活性成分有效用于制备雌激素类药物，开拓了山药的药用价值和商业价值，有良好的经济和社会效益。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
实施例1
本发明在具体实施中，一种山药水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，所述的山药水提物是，将山药洗净，切片烘干，取干山药100g，每次加1000ml的水煎煮3次，第一次先加1000ml的水浸泡30min，煎煮30min，过滤，得第一次滤液；药渣再加1000ml的水，煎煮30min，过滤，得第二次滤液；第二次药渣再加1000ml的水，煎煮30min，过滤，得第三次滤液，合并三次滤液，减压浓缩，真空干燥得山药水提物，提取率为16.3％。
实施例2
本发明在具体实施中，一种山药水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，所述的山药水提物是，将山药洗净，切片烘干，取干山药50g，每次加500ml的水煎煮3次，第一次先加500ml的水浸泡30min，煎煮30min，过滤，得第一次滤液；药渣再加500ml的水，煎煮30min，过滤，得第二次滤液；第二次药渣再加500ml的水，煎煮30min，过滤，得第三次滤液，合并三次滤液，减压浓缩，真空干燥得山药水提物，提取率为15.9％。
实施例3
本发明在具体实施中，一种山药水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，所述的山药水提物是，将山药洗净，切片烘干，取干山药150g，每次加1500ml的水煎煮3次，第一次先加1500ml的水浸泡30min，煎煮30min，过滤，得第一次滤液；药渣再加1500ml的水，煎煮30min，过滤，得第二次滤液；第二次药渣再加1500ml的水，煎煮30min，过滤，得第三次滤液，合并三次滤液，减压浓缩，真空干燥得山药水提物，提取率为16.8％。
本发明提取物作为唯一活性成分经实验和实际应用，具有雌激素样活性和有效用于制备雌激素药物，有关试验资料如下：
本发明首先通过小鼠子宫增重实验对山药水提物进行雌激素样活性的筛选，接着采用mcf-7细胞增殖实验对山药水提物进行体外雌激素样活性的筛选，并且分析山药水提物对性未成熟雌性小鼠的脏器系数、血清e2(雌二醇)、lh(促黄体生成素)的影响，初步探讨其作用特点。
1实验材料
实验药物
本发明山药水提物。
实验动物与细胞株
清洁级昆明种小鼠，雌性，出生21天(刚断乳)，体重9～12g，购自于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：scxk(京)2016-0011。人乳腺癌细胞(mcf-7)购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。
1.3仪器与试剂
戊酸雌二醇片(拜耳医药)；酶标仪(bio-rad680)；zrd-7080全自动新型鼓风干燥箱(上海智城分析仪器制造有限公司)；微量加样器(nichipetexplus)；ab204-n电子读数分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品)；10cm培养皿、96孔培养板、冻存管(corning)；普通手术器械；90-3磁力搅拌器(上海振捷实验设备有限公司)；倒置显微镜(nikoneclipsets100)；二氧化碳培养箱(stik)；sorvallst16rcentrifuge高速低温冷冻离心机(thermofisherscientific公司)。
2实验方法
2.1小鼠子宫增重实验
将小鼠按体重均衡和随机的原则分组，连续给药7天。正常组每日蒸馏水0.02ml/g灌胃；阳性对照组隔日灌胃戊酸雌二醇(0.33mg/kg/d)灌胃；山药水提物按药典规定人用药量的20倍量×提取率为低剂量、40倍量×提取率为高剂量计算，配成相应浓度的混悬液，每日按0.02ml/g灌胃。最后一次给药24h后，摘眼球取血，立即摘取子宫称重，计算子宫系数(子宫湿重×(体重)-1×100％)。实验平行重复三次。结果与正常组相比，计算p值，考察有无统计学意义。
2.2mcf-7细胞增殖实验
mcf-7细胞经含5％去雌激素胎牛血清的无酚红dmem培养基培养1周后，选取对数生长期细胞，pbs洗两次，用0.05％胰蛋白酶消化后，加入无酚红dmem培养基吹打均匀，以2×104个/ml的浓度接种于96孔板内，每孔培养总体积为200μl。培养24h待细胞贴壁后，换为含药培养液继续培养。37℃、5％co2培养48h后，每孔加入mtt溶液(5mg/ml)20μl，37℃继续培养4h，小心吸净培养液，每孔加入150μldmso，震荡5-10min，使紫色结晶完全溶解。用酶标仪在490nm下测定各孔吸光度值(a)，计算平均a值和细胞活力。实验平行重复三次。
细胞活力＝各组od值/正常组od值
2.3elisa法检测血清e2、lh
小鼠摘眼球取血，3000转离心10min，取上清。按照elisa试剂盒说明书仔细操作。
2.4统计方法
采用spss20.0软件进行单因素方差分析统计处理，实验数据以
3.实验结果
3.1山药水提物对mcf-7细胞促增殖的作用
山药水提物在10-2mg/ml时与正常组比，对mcf-7细胞有显著的促增殖作用(p<0.05)，提示山药水提物在体外具有雌激素样作用，结果见表1。
表1山药水提物对促mcf-7细胞增殖的作用(
注:与正常组比较，表示p<0.05，表示p<0.01。
3.2山药水提物对小鼠子宫和胸腺系数的影响
与正常组相比，山药水提物能显著的增加性未成熟雌性小鼠的胸腺系数和子宫系数(p<0.05)，提示山药水提物在动物体内产生了雌激素样作用，结果见表2。
表2山药水提物对小鼠子宫和胸腺系数的影响
注:与正常组比较，表示p<0.05，表示p<0.01。
3.3山药水提物对小鼠血清e2和lh的影响
与正常组相比，山药水提物能显著增加小鼠血清e2、lh的水平(p＜0.01)，提示山药水提物在体内具有雌激素样作用，可能与其增加血清中e2以及lh的水平有关，结果见表3。
表3山药水提物对小鼠血清e2和lh的影响
注:与正常组比较，表示p<0.05，表示p<0.01。
四结论
子宫中含有大量的雌激素受体，雌激素类物质通过与该受体结合，可诱导子宫靶蛋白含量增加，表现为子宫组织增生等，因此可以通过测定外源雌激素对性未成熟小鼠子宫促增长作用来评价药物的雌激素样活性。本实验采用性未成熟雌性小鼠子宫湿重与体重之比(子宫系数)作为评价雌激素样活性的指标。实验结果表明，山药水提物可显著增加性未成熟小鼠子宫系数，提示山药水提物在体内具有雌激素样作用。
mcf-7细胞是雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株，能特异地受雌激素或雌激素样活性物质调节而增殖，是最常用的检测雌激素样活性的细胞株。实验结果发现，山药水提物在浓度为0.01mg/ml时对mcf-7细胞有显著的促增殖作用。提示山药水提物在体内、体外均有一定的雌激素样作用。
雌二醇是体内主要由卵巢成熟滤泡分泌的一种天然雌激素，能促进和调节女性性器官及副性征的正常发育。促黄体生成素由垂体产生的一种激素在在女性中刺激卵巢分泌女性雌激素。实验发现，山药水提物可以显著增加性未成熟雌性小鼠的血清e2以及lh的水平。推测山药水提物增加小鼠子宫系数发挥雌激素样活性可能与其增加体内e2以及lh的水平有关。
实验证明，山药水提物作为唯一活性成分有效用于制备雌激素药物，实现山药水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，开拓了制备雌激素类药物的新途径，提高了山药的药用价值和商业价值，有良好的经济和社会效益。