中药组合物的新用途的制作方法

本发明涉及中药组合物的新用途，具体涉及中药组合物在治疗心衰方面的新用途，属于医药领域。
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：金银花，又名双花、忍冬花等，为忍冬科植物忍冬(lonicerajaponicathunb.)的干燥花蕾或初开的花。夏初花开放前采收，干燥。性甘、寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、疏散风热的功效，可用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病，药用历史悠久，有“中药中的抗生素”之称。金银花在我国资源分布广泛，所含化学成分复杂，功能多样，除药用外，也被广泛应用于食品、化妆品及保健品等行业。玄参为玄参科植物玄参scrophularianingpoensishemsl.的干燥根。性甘、苦、咸，微寒；归肺、胃、肾经。清热凉血、滋阴降火、解毒散结。用于热入营血，温毒发斑、热病伤阴、痈肿疮毒等。当归为伞形科植物当归angelicasinensis(oliv.)diels的干燥根。性甘、辛、温。归肝、心、脾经。补血活血，调经止痛，润肠通便。用于血虚萎黄、月经不调、经闭痛经等症。甘草为豆科植物甘草glycyrrhizauralensisfisch.、胀果甘草glycyrrhizainflatabat.或光果甘草glycyrrhizaflabral.的干燥根和根茎。补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药。用于脾胃虚弱、倦怠乏力、咳嗽痰多等症。自目前尚未见金银花、玄参、当归、甘草组方在治疗心衰方面的研究报道。技术实现要素：本发明的目的是提供包含金银花的中药组合物的新用途。本发明研究表明，该中药组合物具有减缓心肌肥厚和减轻心衰小鼠心肌纤维化、改善心功能的作用。一种中药组合物在制备用于治疗、预防、减轻和/或缓解与心脏功能衰竭有关的疾病的药物中的用途，所述中药组合物的原料药包括金银花、玄参、当归、甘草。所述与心脏功能衰竭有关的疾病包括心肌肥厚或心肌纤维化。所述中药组合物的原料药重量配比为：金银花：玄参：当归：甘草＝(2～5)：(2～5)：(1～3)：(0.5～2)；优选的，所述中药组合物的原料药重量配比为：金银花：玄参：当归：甘草＝(2～4)：(2～4)：(1.5～2.5)：(0.5～1.5)；最优选的，所述中药组合物的原料药重量配比为：金银花：玄参：当归：甘草＝3:3:2:1。本发明中药组合物除了以金银花、玄参、当归、甘草的原药材形式投料以外，还可以金银花、玄参、当归、甘草的提取物或有效部位的形式投料，所述提取物包括水提取物、乙醇提取物或水提取物/乙醇提取物经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇等有机溶剂依次先后萃取或择一萃取得到的萃取物；所述有效部位是指提取物经过进一步纯化得到的具有活性的一类化合物。以上所述提取物采用常规的提取方法制备，包括煎煮提取、回流提取、浸渍提取、超声提取、渗漉提取、微波提取等；所述纯化方法包括水提醇沉、碱溶酸沉以及各种柱色谱纯化方法，如大孔树脂柱、硅胶柱、凝胶柱、反相柱等。所述中药组合物可加入药学上可接受的辅料制备成常规剂型，包括但不限于注射剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液、滴丸剂或纳米制剂。所述药学可接受的辅料包括：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等。本发明所述原料药金银花、玄参、当归、甘草均为《中国药典》(2015版)所收载，符合药典项下的各项规定。本发明研究表明，异丙肾上腺素过量会导致心脏重量增加、室壁增厚、顺应性降低，心功能有所下降。该中药组合物具有减缓过量异丙肾上素导致的病理性心肌肥厚和减轻过量异丙肾上腺素致心衰小鼠心肌纤维化、减轻氧化应激、改善心功能的作用。附图说明图1：中药组合物对过量异丙肾上腺素致心衰小鼠心脏形态的影响(1-a为空白组；1-b为模型组；1-c为中药组合物组；1-d为地高辛组；1-e为福辛普利组)；图2：中药组合物对过量异丙肾上腺素致心衰小鼠心肌组织形态的影响(he染色，40x)(1-a为空白组；1-b为模型组；1-c为中药组合物组；1-d为地高辛组；1-e为福辛普利组)；图3：中药组合物对过量异丙肾上腺素致心衰小鼠心肌组织ros的影响(dhe染色，200x)；图4：中药组合物对过量异丙肾上腺素致心衰小鼠血浆中sod的影响；图5：中药组合物对过量异丙肾上腺素致心衰小鼠血浆中mda的影响；图6：中药组合物对过量异丙肾上腺素致心衰小鼠心肌中sod-1表达的影响；图7：中药组合物对过量异丙肾上腺素致心衰小鼠心肌中sod-2表达的影响。具体实施方式实施例1按照金银花-玄参-当归-甘草3:3:2:1的比例，取金银花、玄参、当归、甘草4味饮片，以10倍量水回流提取2次，每次2.0h，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为2.22g/ml的稠膏，备用。1材料和方法1.1分组与造模小鼠适应性饲养1周后，随机分为模型组、空白组、中药组合物组、福辛普利组、地高辛组。心衰模型的制作采用盐酸异丙肾上腺素(iso)梯度造模法：第1日20mg/kg，第2日10mg/kg，第3-14日5mg/kg给予小鼠皮下注射iso。给药组和模型组按上述方案，皮下注射iso。空白组皮下注射生理盐水，每日1次，连续14d。从造模即日起，福辛普利组每日予福辛普利5.5mg/kg，地高辛组每日予地高辛0.165mg/kg，中药组合物14.85g/kg(以生药量计)，模型组与空白组动物给予同体积纯净水。连续给药14d。1.2小鼠心脏超声检测实验终点，胸部褪毛，异氟烷呼吸麻醉，仰卧位。使用vevo2100超声仪(visualsonics加拿大)及配置的相应探头(ms-400号)，中心频率30mhz，标准帧频449fps的小动物高分辨率显微超声成像系统评价各组实验小鼠的心脏结构及功能，计算射血分数(ejectionfraction，ef)和短轴缩短率(fractionalshortening，fs)。每只动物采样3次，记录3个心动周期的平均值用于后续分析。1.3心脏形态实验终点，腹腔麻醉小鼠后处死动物，迅速开胸，摘取心脏，用预冷的磷酸缓冲液(pbs)冲净心腔中的血块，剪除心脏周围结缔组织和血管，数码相机拍照记录心脏形态。1.4病理学检测心脏组织分别放入4％多聚甲醛固定，常规乙醇梯度脱水、石蜡包埋、切片、he染色，显微镜下观察并记录病变情况。1.5心肌组织中氧化应激指标的测定采用dhe-ros检测试剂盒，观察冰冻切片中心肌活性氧(ros)含量变化。tba法测定心肌组织丙二醛(maleicdialdehyde，mda)水平间接评估心肌组织的氧化应激状态。采用wst-1法测定心肌组织超氧化物歧化酶(sod)活性。rt-pcr检测sod-1、sod-2的表达量的变化。2结果2.1心脏超声结果结果见表1。表1中药组合物对过量iso致心衰小鼠心功能的影响组别ef(％)fs(％)空白组58.04±4.5429.55±2.94模型组45.29±8.37##22.11±5.02##中药组合物组56.68±10.51**29.00±6.79**福辛普利组53.41±8.30*26.97±5.21*地高辛组56.68±8.39**28.94±5.49**#与空白组比，p<0.05；##与空白组比，p<0.01。*与模型组比，p<0.05；**与模型组比，p<0.01。结果表明，与空白组相比，模型组左室射血分数(ef)和左室短轴缩短率(fs)显著降低(p<0.01)；与模型组相比，中药组合物可以显著改善异丙肾致心肌肥厚小鼠的左室射血分数和左室短轴缩短率(p<0.01)，该作用与阳性药地高辛相近。2.2心脏形态心脏形态结果见图1。图1结果显示，模型动物心肌肥厚，中药组合物组能显著改善小鼠心肌肥厚的状况。2.3心脏组织病理学结果结果见图2。he染色可见，空白组表现为正常心肌组织，心肌细胞排列整齐有序；模型组小鼠心肌细胞排列紊乱，心肌细胞坏死、丧失正常结构，发生肌纤维溶解；中药组合物组心肌细胞排列较为整齐，细胞基本维持原有形态。2.4心肌组织中氧化应激指标的测定2.4.1dhe法冰冻切片ros染色dhe荧光染色检测c57小鼠接受iso刺激前后活性氧簇变化，结果见图3。如图3所示，与空白组相比，模型组小鼠接受iso刺激后，其ros含量增多(p<0.01)，氧化应激损伤程度严重。给予中药组合物后，与模型组比，中药组合物组dhe荧光强度明显减小(p<0.01)，与福辛普利组、地高辛组作用相似。2.4.2血浆中sod、mda的含量测定结果见图4、5。如图4、图5所示，和空白组相比，模型组血浆mda含量明显增多(p<0.01)、sod含量明显降低(p<0.01)，表明iso可引起氧化应激损伤。应用中药组合物可降低iso所致血浆mda水平(p<0.01)；增加iso所致血浆sod水平(p<0.01)。2.4.3rt-pcr法检测心肌sod-1、sod-2含量变化结果如图6、图7所示，用rt-pcr的方法观察心肌sod亚型sod-1、sod-2的改变。过量iso使心肌sod-1、sod-2表达明显减少(p<0.05，p<0.01)，中药组合物能明显使心肌中sod-1、sod-2含量升高(p<0.01)，并作用优于地高辛与福辛普利组。以上实验结果表明:模型组动物心脏重量增加、室壁增厚、顺应性降低，心功能有所下降，本发明组合物可以抑制室壁过度增厚，延缓心肌重塑，改善心功能，在心力衰竭的重要机制-氧化应激方面，可能有明显的优势。实施例2按照金银花-玄参-当归-甘草4:2:2.5:0.5的比例，取金银花、玄参、当归、甘草4味饮片，以10倍量水煎煮提取2次，每次0.5h，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为2.22g/ml的稠膏，加入辅料制成片剂。实施例3按照金银花-玄参-当归-甘草2:4:1.5:1.5的比例，取金银花、玄参、当归、甘草4味饮片，以10倍量95％乙醇回流提取2次，每次0.5h，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为2.22g/ml的稠膏，加入辅料制成胶囊剂。实施例4按照金银花-玄参-当归-甘草5:2:3:0.5的比例，取金银花、玄参、当归、甘草4味饮片，以10倍量70％乙醇超声提取2次，每次0.5h，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为2.22g/ml的稠膏，加入辅料制成颗粒剂。实施例5按照金银花-玄参-当归-甘草2:3:1:1的比例，取金银花、玄参、当归、甘草4味饮片，以10倍量水浸泡提取2次，每次24h，提取液滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为2.22g/ml的稠膏，加入辅料制成滴丸剂。以上实施例2-5的中药组合物均能实现本发明抑制室壁过度增厚、延缓心肌重塑、改善心功能的效果。当前第1页12