用于药物流产的胎盘靶向纳米颗粒及其制备方法和应用与流程

本发明属于药物技术领域，特别涉及一种用于药物流产的胎盘靶向纳米颗粒及其制备方法和应用。

背景技术：

世界卫生组织估计，全球每年有7500万例意外妊娠发生，而以人工流产告终的约有2600万至5300万例。在如此高的人工流产率的前提下，更为安全有效的人工流产技术亟待开发。现有人工流产技术主要分为两类：药物流产和负压吸宫手术流产。但这两种技术都存在较大缺点。手术流产虽然成功率高、时间短，但其手术疼痛感高并伴有手术并发症；药物流产虽然具有方法简单、痛苦小等优点，但有一定比例不全流产、流产失败且有药物副作用的风险。相对于手术流产的有较多人为不确定因素，药物流产的创新提升空间更为宽广。

近年来基于纳米技术的靶向纳米颗粒的研究给药物流产带来了新的机遇。它能将治疗药物最大限度地输送到靶器官，而对非靶器官影响很小，从而达到高效低毒的治疗效果，并且纳米材料自身具有缓控释性、透粘膜、透皮等优势，对药物流产有重大意义。其中，将载药纳米颗粒表面连接能与目标细胞(构成血脑屏障的脑微血管内皮细胞)特异性结合的配体，如抗体、肽链等，使纳米颗粒通过受体介导的胞吞转运作用将纳米药物递送到特定部位是较常用的技术。

因此，研发一种高流产成功率同时低副作用的新型纳米流产药物有望突破现有人工流产的瓶颈。但目前仍未见有对胎盘高靶向的纳米颗粒。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明提供了一种胎盘靶向的纳米颗粒，用于解决现有技术中药物流产的失败率较高，流产不全的缺点，同时提高流产效率，降低药物副作用。

第一方面，本发明提供了一种靶向胎盘样硫酸软骨素a(pl-csa)的多肽，其中，所述多肽的氨基酸序列选自seqidno:1-seqidno:3所示的氨基酸序列中的一种或多种。

其中，seqidno:1所示的氨基酸序列为lkpshekknddngkklckac。

seqidno:2所示的氨基酸序列为edvkdinfdtkekflagclivsfhegkc。

seqidno:3所示的氨基酸序列为gkktqelknirtnsellkewiiaafhegkc。

所述多肽可以修饰在聚合物(如聚乙烯亚胺、壳聚糖等)、脂质体、金纳米颗粒、二氧化硅、血清白蛋白等常见的药物载体或基因载体上，用于靶向表达pl-csa的组织，如胎盘细胞。

第二方面，本发明提供了一种胎盘靶向纳米颗粒，用于药物流产，所述胎盘靶向纳米颗粒包括疏水性内核、包裹所述疏水性内核的单层脂类分子层和靶向胎盘的亲水性外壳，所述疏水性内核包括所述疏水性多聚物及其负载的目标投递物，所述目标投递物包括流产药物；所述亲水性外壳的成分为靶向pl-csa的多肽接枝的两亲性大分子化合物，所述两亲性大分子化合物的疏水端穿插于所述单层脂类分子层中，所述两亲性大分子化合物的亲水端与所述多肽通过酰胺键连接，所述多肽暴露在所述单层脂类分子层外，其中，所述多肽的氨基酸序列选自seqidno:1-seqidno:3所示的氨基酸序列中的一种或多种。

本发明中，所述多肽可以是如seqidno:1、seqidno:2或如seqidno:3所示的一种序列，也可以如seqidno:1-seqidno:3所示序列中的多种。

优选地，所述胎盘靶向纳米颗粒的直径为80～150nm。所述粒径是采用透射电子显微镜测得。

优选地，所述疏水性多聚物、单层脂类分子、所述两亲性大分子化合物的质量比为1：(0.04-0.2)：(0.1-0.4)。在该质量比下，所述胎盘靶向纳米颗粒的各组分间可以形成形貌较规则、分散性良好、粒径分布较均匀的结构，所述胎盘靶向纳米颗粒的结构稳定，不易被人体体液稀释、溶解而解体，有利于所述胎盘靶向纳米颗粒靶向到构成胎盘的主体细胞(如胎盘滋养细胞)。

优选地，所述单层脂类分子选自卵磷脂和脑磷脂(磷脂酰乙醇胺)中的至少一种，所述卵磷脂选自大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂和磷脂酰胆碱中的一种或多种。进一步优选地，所述单层脂类分子具有面向所述疏水性内核的疏水部分和面向所述纳米颗粒外部的亲水部分。

优选地，所述两亲性大分子化合物与所述多肽的质量比为1:(1-4)。在该质量比下，多肽对所述两亲性大分子化合物的接枝率较高。

如本发明所述的，所述多肽接枝的两亲性大分子化合物层包括两亲性大分子化合物和多肽，所述两亲性大分子化合物具有疏水端和与所述脂端连接的亲水端。本发明中，所述两亲性大分子化合物的疏水端可帮助所述两亲性大分子化合物插入到所述单层脂类分子层，并且所述亲水端与所述多肽相接枝并延伸在所述纳米颗粒的外部。

优选地，所述两亲性大分子化合物为聚乙二醇衍生化磷脂，所述聚乙二醇衍生化磷脂由聚乙二醇及其衍生物通过共价键和磷脂类物质相连得到。此时，所述两亲性大分子化合物的疏水端为所述磷脂类物质，所述亲水端为羧基或氨基修饰的聚乙二醇、或者是带有其他活性官能团的聚乙二醇衍生物。

其中，所述聚乙二醇的分子量优选为200～20000。具体地，聚乙二醇分子的分子量可以为200、500、1000、2000、5000、7000、10000、15000或20000。所述磷脂类物质可以为人工合成的或自然界存在的磷脂，所述磷脂类物质可以为但不限于二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe)、二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)或胆固醇。

进一步优选地，所述两亲性大分子化合物为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧酸共聚(dspe-peg-cooh，又称为磷脂-peg-羧基)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基共聚(dspe-peg-nh2，又称为磷脂-peg-氨基)或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰胺。

优选地，所述疏水性多聚物选自聚乳酸-羟基乙酸共聚物(又称聚乙交酯丙交酯，简写为plga)、聚乳酸和聚己内酯的一种或多种，但不限于此。

进一步优选地，所述疏水性多聚物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(简写为plga)，所述plga的分子量为7000-17000。其中，单体乳酸与羟基乙酸的共聚比为50:50。

本申请中，所述目标投递物(含流产药物)与所述疏水性多聚物共同构成所述疏水性内核。疏水性聚合物可以吸附或包裹目标投递物构成疏水性内核，可以有效避免装载的目标投递物在到达胎盘细胞之前发生聚集或泄露，保证负载的投递物的稳定性。

优选地，所述目标投递物还包括造影剂和荧光追踪剂中的一种或多种。

优选地，所述疏水性聚合物与所述目标投递物的质量比为1:(0.1-0.8)。进一步优选为1:(0.1-0.6)，更优选为1:(0.1-0.2)。最优选为1:(0.1-0.16)。

进一步优选地，所述目标投递物中，所述流产药物与所述荧光追踪剂和/或造影剂的质量比为1:(0.1-0.8)。

优选地，所述流产药物选自米非司酮、米索前列醇、前列甲酯、硫前列酮、三苯氧胺、来曲唑和甲氨蝶呤中的一种或多种，但不限于此。

优选地，所述荧光追踪剂选自吲哚青绿、伊文思蓝、异硫蓝、专利蓝、亚甲蓝、香豆素6、ir780碘化物(11-氯-1,1'-二正丙基-3,3,3',3'-四甲基-10,12-三亚甲基吲哚三碳花青碘盐)和dir碘化物中的一种或多种，但不限于此。

优选地，所述造影剂选自碘苯六醇、碘普罗胺、碘必乐、碘苯酯和硫酸钡中的一种或多种，但不限于此。

本发明第二方面提供的胎盘靶向纳米颗粒，单层脂类分子在制备过程中，可自组装成单层脂类分子层，并包裹所述疏水性内核，所述两亲性大分子化合物中的疏水端通过物理作用与所述单层脂类分子层中的脂类分子结合从而穿插于所述单层脂类分子层中，所述多肽与所述两亲性大分子化合物的亲水端共价连接并延伸在所述靶向纳米颗粒的外部，所述多肽接枝的两亲性大分子化合物为所述靶向纳米颗粒提供了亲水性外层和靶向胎盘的受体，因此，所述胎盘靶向纳米颗粒对胎盘滋养层细胞具有良好的靶向性，能很好地携带目标投递物进入胎盘滋养层细胞内，有助于保证靶向部位足够的给药浓度，提高流产效率。

第三方面，本发明提供了一种胎盘靶向纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

(1)将疏水性多聚物溶于有机溶剂中，得到疏水性多聚物溶液；

(2)将单层脂类分子、两亲性大分子化合物和目标投递物溶于第一溶剂，得到第一混合溶液，其中，所述目标投递物包括流产药物；

(3)将所述疏水性多聚物溶液加入到所述第一混合溶液中，超声处理4-6min，得到第二混合溶液，对所述第二混合溶液进行离心处理，收集上清液，得到靶向纳米颗粒前驱体；

(4)取所述靶向纳米颗粒前驱体，将其与靶向胎盘样硫酸软骨素a的多肽、催化剂、脱水剂在第二溶剂中进行酰胺反应，以使所述多肽所接枝到两亲性大分子化合物上；收集应液，将所述反应液经分离纯化后，得到所述胎盘靶向纳米颗粒。所得胎盘靶向纳米颗粒如本发明第一方面所述。

优选地，步骤(1)中，所述有机溶剂包括乙腈、丙酮、乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷和正己烷中的一种或多种，但不限于此。所述有机溶剂优选为能溶解疏水性多聚物的易挥发溶剂。

其中，所述第一溶剂包括至少一种亲水溶剂，或者水与至少一种亲水溶剂形成的混合溶剂。其中，所述亲水溶剂选自乙醇、甲醇、1-辛醇、乙腈、丙酮、二甲基甲酰胺(dmf)和二甲基亚砜(dmso)，但不限于此。所述第一溶剂需使得两亲性大分子化合物、单层脂类分子和目标投递物均能溶解。

优选地，所述第一溶剂为水与至少一种亲水溶剂形成的混合溶剂，例如各种浓度的乙醇水溶液、各种浓度的甲醇水溶液。进一步优选地，所述第一溶剂中，水的体积分数为3-8％。

在本发明一实施方式中，所述第一溶剂为体积分数为4％的乙醇水溶液或体积分数为4％的甲醇水溶液。

其中，所述第一溶剂含有水，可在后期与疏水性多聚物的有机溶剂溶液相混合时，使疏水多聚物的溶解度降低，可便于后期超声、乳化成球。

优选地，所述第一混合溶液中，所述单层脂类分子的浓度为10-300μg/ml，所述两亲性大分子化合物浓度为30-600μg/ml。

优选地，所述第一混合溶液中，所述流产药物的浓度为33-750μg/ml。

优选地，所述第一混合溶液中，所述流产药物与所述两亲性大分子化合物的质量比为(1-5)：1。进一步优选为(1.9-3.5)：1或(1-1.5)：1。更优选为(1-1.5)：1。

优选地，步骤(1)中，所述疏水性多聚物溶液的浓度为1-4mg/ml。

优选地，步骤(3)中，所述疏水性多聚物溶液与所述第一混合溶液的体积比为1：3。

优选地，步骤(3)中，将疏水性多聚物溶液以逐滴加入的方式与所述第一混合溶液相混合，进一步优选地，所述疏水性多聚物溶液的滴加速度为0.2-0.5ml/min。这样可以使疏水性多聚物充分络合目标投递物，并包裹进外壳中，配合超声才能形成载药纳米颗粒。

优选地，在所述超声之后，将所述第二混合溶液在40-80℃下温和搅拌。温和搅拌，提供了合适的溶剂挥发条件，促进疏水多聚物、目标投递物与单层脂类分子、两亲性分子相互作用，最终所得的纳米颗粒前驱体的分散性较好、粒径较均匀。所述纳米颗粒前驱体相对于最终得到的胎盘靶向纳米颗粒而言，不同之处仅在于，其表面没有修饰有对胎盘靶向的多肽。

优选地，步骤(3)中，所述离心处理在截留分子量为5-10kda的超滤离心管中离心2-5次，采用水洗涤。

优选地，步骤(3)中，所述离心处理是在离心转速3000-5000rpm下，每次离心3-6min。

优选地，步骤(3)中，所述超声是采用超声波细胞破碎仪以20khz的频率80-160w的功率进行。

步骤(3)中，所述疏水性多聚物、目标投递物、单层脂类分子和两亲性大分子化合物通过自组装过程形成所述靶向纳米颗粒前驱体(即无靶向性的纳米颗粒)，不需要进行化学反应，制备过程环保无毒，方法简单易操作。

优选地，步骤(4)中，所述酰胺反应是在室温下进行。可选地，所述酰胺反应的时间为15-24h。

所述第二溶剂可以为水或其他亲水性溶剂。优选地，步骤(4)中，所述第二溶剂包括水、ph值为5.5-6.7的2-(n-吗啡啉)乙磺酸缓冲液(简称为“mes缓冲溶液”)、ph值为7.0-7.9的磷酸盐(pbs)缓冲液等，但不限于此。

步骤(4)中，所述酰胺化反应的方法为本领域的技术人员所熟知。催化剂又可称为活化剂，常与缩合剂联用，用于酰胺化反应。

优选地，步骤(4)中，所述缩合剂包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(简称edc)。

优选地，步骤(4)中，所述催化剂包括n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)、n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐(sufo-nhs)中的任意一种。

优选地，步骤(4)中，所述缩合剂、催化剂与所述两亲性大分子化合物的质量比为(0.2-0.4)：(0.05-0.3)：1。

更优选地，所述edc、nhs、dspe-peg-cooh的质量比为1:0.4:5。

优选地，步骤(4)中，所述分离纯化为采用截留分子量为5-10kda的超滤离心管进行超滤离心，收集离心后所得上清液，得到胎盘靶向纳米颗粒。优选地，所述超滤离心进行2-5次。除最后一次超滤离心外，每次离心后均采用水或pbs洗涤。

在本发明的另外一种实施方式中，也可以先将所述多肽接枝到两亲性大分子化合物上，然后再将疏水性多聚物、目标投递物、多肽接枝的两亲性大分子化合物、单层脂类分子按照步骤(1)-(3)的操作，制成所述胎盘靶向纳米颗粒。

本发明提供的胎盘靶向纳米颗粒的制备方法简单易行，便于操作。制得的胎盘靶向纳米颗粒对胎盘滋养层细胞的靶向性强和富集程度高，流产成功率高，副作用较低。

第四方面，本发明提供了一种如本发明第一方面所述的用于靶向胎盘的多肽或者如本发明第二方面所述的胎盘靶向纳米颗粒在制备哺乳动物流产药物中的应用。优选地，在制备哺乳动物早期妊娠流产药物中的应用。

第五方面，本发明提供了一种药物组合物，包括本发明第二方面所述的胎盘靶向纳米颗粒。所述药物组合物用于哺乳动物流产。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的胎盘靶向纳米颗粒的结构示意图；

图2为本发明实施例1制备的胎盘靶向纳米颗粒的透射电镜图；

图3是本发明实施例1中制备的胎盘靶向纳米颗粒和其他实验组对孕鼠的流产实验的超声显影结果；

图4是本发明实施例1中制备的胎盘靶向纳米颗粒和其他实验组对胚胎体重的影响结果。

具体实施方式

以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

本发明中，用于靶向胎盘样硫酸软骨素a(pl-csa)的多肽的序列如seqidno:1-seqidno:3所示。具体地，lkpshekknddngkklckac如sequenceno.1所示。

edvkdinfdtkekflagclivsfhegkc如sequenceno.2所示。

gkktqelknirtnsellkewiiaafhegkc如sequenceno.3所示。

所述多肽是按照常规的多肽合成工艺进行，其中每个序列的最左端为n端，最右端为多肽的c端，c端或n端均可以与所述两亲性高分子化合物进行共价连接，这依据所用两亲性高分子化合物的性质而定。其中，当两亲性高分子化合物带有-cooh时，可利用其上的羧基与所述多肽的c端上的氨基(即，半胱氨酸c上的氨基)来进行酰胺反应。当两亲性高分子化合物带有氨基时，可利用其上的氨基与所述多肽的n端上的羧基来进行酰胺反应。

实施例1

一种胎盘靶向纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga，分子量为15000，单体乳酸与羟基乙酸的共聚比为50：50)溶于乙腈中，得到plga的乙腈溶液，浓度为2mg/ml；

(2)将90μg的大豆卵磷脂、210μg的dspe-peg-cooh(peg的分子量为2000)、315μg的甲氨蝶呤溶于3ml的体积分数为4％的乙醇水溶液中，得到第一混合溶液；

(3)将1ml的plga乙腈溶液以0.3ml/min的速度逐滴加入到3ml的第一混合溶液中，并采用超声波细胞破碎仪以20khz的频率及130w的功率进行超声处理，超声时间为5min；

将超声后的溶液在截留分子量为10kda的超滤离心管中进行超滤离心，并用水洗涤，重复4次，其中离心转速4000rpm，每次离心4min，收集上清液得到靶向纳米颗粒前驱体；

(4)将所述靶向纳米颗粒前驱体溶于水中，加入42μgedc和17μgnhs进行表面活化2h，之后加入0.5mg的序列为lkpshekknddngkklckac(如sequenceno.1所示)的多肽，在室温下进行酰胺化反应16h，得到反应液；

将所述反应液用截留分子量为10kda超滤管进行超滤离心，并用水洗涤，重复4次，其中离心转速3500rpm下，每次离心4min，收集上清液得到胎盘靶向纳米颗粒。

图1为本发明实施例1制得的胎盘靶向纳米颗粒的结构示意图。所述胎盘靶向纳米颗粒包括疏水性内核1、包裹所述疏水性内核的单层脂类分子层2和靶向胎盘的亲水性外壳3，单层脂类分子层2的成分为大豆卵磷脂，所述亲水性外壳3的成分为多肽32接枝的dspe-peg31，11为甲氨蝶呤、12为疏水性多聚物plga，1为11与12构成的疏水性内核；多肽接枝的dspe-peg中，dspe-peg31的脂端dspe插于所述大豆卵磷脂层22中，亲水端peg与所述多肽通过酰胺键连接，所述多肽暴露在所述单层脂类分子层外。

图2为所述靶向纳米颗粒的透射电镜图，从图2可以看出，所制备的胎盘靶向纳米颗粒呈球形，分散性较好。用粒度分析仪测得所述胎盘靶向纳米颗粒的平均粒径为90-120nm。

利用以下公式分别计算出甲氨蝶呤的包封率：en％＝(1-cf/ct)×100％，其中，cf为游离药物的量，ct为药物的总量，得到所述靶向纳米颗粒对甲氨蝶呤的包封率en％为52.3±4.4％。此外，采用bca法测得多肽的连接率为：53.4±3.5％。

实施例2

一种胎盘靶向纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

(1)将聚己内酯(分子量为10000)溶于丙酮中，得到聚己内酯溶液，浓度为1mg/ml；

(2)将40μg的蛋黄卵磷脂、100μg的dspe-peg-nh2(peg的分子量为3000)、50μg的米非司酮和50μg的米索前列醇溶于3ml体积分数为4％的甲醇水溶液中，得到第一混合溶液；

(3)将1ml的聚己内酯溶液以0.2ml/min的速度逐滴加入到3ml的第一混合溶液中，并采用超声波细胞破碎仪以20khz的频率及80w的功率进行超声处理，超声时间为6min；

将超声后的溶液在截留分子量为5kda的超滤离心管中进行超滤离心，并用水洗涤，重复4次，其中离心转速3000rpm下，每次离心6min，收集上清液得到靶向纳米颗粒前驱体；

(4)将所述靶向纳米颗粒前驱体溶于水中，加入20μgedc和5μgnhs进行表面活化2h，之后加入0.4mg的序列为lkpshekknddngkklckac(如sequenceno.1所示)的多肽，在室温下进行酰胺化反应15h，得到反应液；

将所述反应液用截留分子量为5kda超滤管进行超滤离心，并用水洗涤，重复4次，其中离心转速3000rpm下，每次离心6min，收集上清液得到胎盘靶向纳米颗粒。

实施例3

一种胎盘靶向纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

(1)将聚乳酸(分子量为21800)溶于dmf中，得到浓度为4mg/ml的聚乳酸溶液；

(2)将800μg的脑磷脂、1600μg的dspe-peg-nh2(peg的分子量为2000)、2250μg的来曲唑溶于3ml的丙酮中，得到第一混合溶液；

(3)将1ml的聚乳酸溶液以0.4ml/min的速度逐滴加入到3ml的第一混合溶液中，并采用超声波细胞破碎仪以20khz的频率及160w的功率进行超声处理，超声时间为4min；

将超声后的溶液在截留分子量为10kda的超滤离心管中进行超滤离心，并用水洗涤，重复4次，其中离心转速5000rpm下，每次离心3min，收集上清液得到靶向纳米颗粒前驱体；

(4)将所述靶向纳米颗粒前驱体溶于水中，加入640μgedc和80μgnhs进行表面活化4h，之后加入1.6mg的序列为edvkdinfdtkekflagclivsfhegkc(如sequenceno.2所示)的多肽，在室温下进行酰胺化反应18h，得到反应液；

将所述反应液用截留分子量为10kda超滤管进行超滤离心，并用水洗涤，重复4次，其中离心转速5000rpm下，每次离心3min，收集上清液得到胎盘靶向纳米颗粒。

本实施例制得的所述胎盘靶向纳米颗粒的tem粒径为100-120nm；采用bca法测得多肽的连接率为：55.4±2.5％。

实施例4

一种胎盘靶向纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plga，分子量为10000，单体乳酸与羟基乙酸的共聚比为50：50)溶于乙腈中，得到plga的乙腈溶液，浓度为2mg/ml；

(2)将120μg的磷脂酰胆碱、250μg的dspe-peg-nh2(peg的分子量为3000)、300μg的前列甲酯溶于3ml的甲醇中，得到第一混合溶液；

(3)将1ml的plga的乙腈溶液以0.5ml/min的速度逐滴加入到3ml的第一混合溶液中，并采用超声波细胞破碎仪以20khz的频率及120w的功率进行超声处理，超声时间为5min；

将超声后的溶液在截留分子量为5kda的超滤离心管中进行超滤离心，并用水洗涤，重复4次，其中离心转速3500rpm下，每次离心4min，收集上清液得到靶向纳米颗粒前驱体；

(4)将所述靶向纳米颗粒前驱体溶于水中，加入75μgedc和50μgnhs进行表面活化3h，之后加入0.75mg的序列为gkktqelknirtnsellkewiiaafhegkc(如sequenceno.3所示)的多肽，在室温下进行酰胺化反应17h，得到反应液；

将所述反应液用截留分子量为5kda超滤管进行超滤离心，并用水洗涤，重复4次，其中离心转速3000rpm下，每次离心3min，收集上清液得到胎盘靶向纳米颗粒。

本实施例制得的所述胎盘靶向纳米颗粒的tem粒径为90-130nm；采用bca法测得多肽的连接率为54％。

应用实施例

对本发明实施例1制得的包被甲氨蝶呤的胎盘靶向纳米颗粒(简写为csa-mnps)进行孕鼠流产的效果试验，并以pbs组、游离甲氨蝶呤组、普通纳米颗粒组、乱序多肽组作对照，其中，乱序多肽组scr-mnps所修饰的多肽的序列为：pnnkcesdklakhkklgdkc(如sequenceno.4所示)，该多肽对胎盘无靶向性。具体操作如下：

采用6周龄，体重为15-20g的雌性cd-1鼠作为试验动物，将雌鼠与雄鼠以1:2比例合笼，次日对雌鼠检查阴栓，见阴栓之日为妊娠0.5天。从孕鼠妊娠5.5天开始，每隔一天，对孕鼠通过尾静脉注射的不同药物(甲氨蝶呤的当量为1μg/g体重)，并分成以下各组：pbs组、游离甲氨蝶呤组(freedox)、普通纳米颗粒组(mnps，未修饰胎盘靶向的多肽，即本发明中的纳米颗粒前驱体)、乱序多肽组(scr-mnps)、包载甲氨蝶呤的胎盘靶向纳米颗粒(csa-mnps)。同时每天使用vevo2100超高分辨率小动物超声实时分子影像系统观察并记录胚胎大小和生长情况，超声显影的试验结果如图3所示。同时，每天取出胚胎称量胎儿体重并记录，实验结果如图4所示。

图3中，其中第10天、第12天的超声显影结果中，每行的倒数2个图均是csa-mnps的实验结果，显示用药后孕鼠胚胎的两种不同的状态，倒数第2个图体现出有的孕鼠胚胎发育迟缓，倒数第1个图体现有的孕鼠胚胎接近死亡。从图3可以看出，csa-mnps组能够看到胚胎在妊娠第14天出现大量流产(流产率80％)，并且可在妊娠第9天-第12天间看到胚胎发育情况比pbs组缓慢，说明胎盘靶向纳米药物颗粒已经对胚胎生长产生阻碍，并进一步阻止了妊娠，freedox组也可以看到有流产情况，但截止妊娠第14天流产数量不多，而mnps组、scr-mnps组未见流产情况，胎儿生长状况较好。

从图4可以看出，与其他组比较，csa组胎儿体重并没有随着怀孕时间的增加而增加，即胎儿已经死亡。

以上试验结果说明，本发明中提供的胎盘靶向纳米颗粒能够显著抑制妊娠，可以起到良好的流产效果。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

sequencelisting

<110>中国科学院深圳先进技术研究院

<120>用于药物流产的胎盘靶向纳米颗粒及其制备方法和应用

<130>2017

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<170>patentinversion3.3

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glyasplyscys

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