本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种重组激肽释放酶冻干粉制剂。
背景技术：
：重组激肽释放酶是一组存在于多数组织和体液中的丝氨酸蛋白酶，是一种肽链内切酶。它特异性的在碳末端切割底物肽，可裂解激肽原释放具有活性的激肽，由激肽发挥扩张毛细血管、松弛血管平滑肌、改善微循环、抗凝、溶血栓、降低血液粘度和血压，以及具有治疗不孕不育症等作用。其英文名为kallikrein与kininogenase、kallidinogenase、kininogenin所描述的都是同一类成分。目前已经从人和动物体的不同组织、器官或尿液中获得许多kallikrein类成分，其中将含量最高，发现也最早的命名为kallikrein-1(重组激肽释放酶-1)。该成分在人或哺乳动物的胰腺和肾脏中含量最高，其代谢后又通过肾脏，随尿排出体外。因此，从人或动物尿中分离出来的早年所称的尿激肽原酶(或尿重组激肽释放酶)实际上就是新分类中的重组激肽释放酶(kallikrein)。重组激肽释放酶可以有效防止血栓，对糖尿病以及高血压引起的疾病也有很好的治疗作用。但是一方面，重组激肽释放酶在溶液状态下极不稳定，因此制备稳定的含重组激肽释放酶的药物一直是医学领域的迫切需要。另一方面，在制备成药物制剂后，不可避免地会引起各种不良反应。按照who国际药物监测合作中心的规定，药物不良反应(adversedrugreactions，adr)指正常剂量的药物用于预防、诊断、治疗疾病或调节生理机能时出现的有害的和与用药目的无关的反应。目前关于重组激肽释放酶注射液不良反应的报告主要为：心脑血管系统不良反应(例如皮肤潮红、血压下降、结膜充血、胸闷、伴发心绞痛等)、神经系统不良反应(头痛、出汗、头晕、乏力)、消化系统不良反应(恶心、呕吐、腹泻、上消化道出血)、全身性不良反应(发热等)以及其他不良反应(剧烈咳嗽、皮疹等)。也曾出现过严重的不良反应报告，例如梗死灶内出血，甚至患者死亡。上述药物不良反应可能会引起用药者的身体不适，甚至致使病情恶化，引发新的疾病。因此制备低不良反应的重组激肽释放酶制剂也是本领域的一个关注重点。例如中国专利申请200810038422中公开了一种稳定的重组激肽释放酶-1注射液，该注射液中除含有重组激肽释放酶-1、磷酸盐缓冲液、氯化钠和蛋白酶保护剂，为了提高其注射液的活性，还加入了一定量的防腐剂。由于以液体形式存在，其稳定性明显劣于冻干粉制剂，因此为了一定程度提高稳定性，该发明加入了各种蛋白酶保护剂以及防腐剂，无疑大大提高了其致敏风险，和不良反应发生率。再一方面，由于重组激肽释放酶-1是一种蛋白酶，其活性敏感，因此无法排除防腐剂的使用是否会导致重组激肽释放酶-1活性的降低。为了增加重组激肽释放酶类药物的稳定性及便携性，通常将重组激肽释放酶冻干保存，使用时将冻干制剂再配制成注射溶液。，但由于重组激肽释放酶在溶液中的活性稳定性很差，所以配制的溶液也需要尽快使用，以避免活性丧失。例如中国专利cn2004100960604中公开了一种用于提高人尿激肽原酶稳定性的药物组合物，该组合物用甘露醇、右旋糖酐、水解明胶和柠檬酸钠中的一种或几种组合，配制成水溶液，临床应用使用于溶解人尿激肽原酶冻干粉。该发明虽然提高了重组激肽释放酶冻干粉，然而其关注点并非含有重组激肽释放酶的药物制剂，而是用于溶剂药物的水溶液。也完全没有关注重组激肽释放酶制剂的不良反应情况。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是，提高重组激肽释放酶制剂的稳定性，降低其不良反应发生率。术语：1、重组激肽释放酶：根据本领域的常规使用惯例，本发明中使用的术语″重组激肽释放酶″，可与″重组激肽释放酶原″或″激肽原酶″互换使用；在以上名称前冠以来源方式(例如重组重组激肽释放酶或天然提取重组激肽释放酶)，或来源代谢产物(如胰重组激肽释放酶或尿重组激肽释放酶)等，均与本发明中所涉及的重组激肽释放酶这一术语指代的是同一种成分。它是一种丝氨酸蛋白酶，可作用于激肽原，使之水解释放出激肽，通过激肽发挥扩张毛细血管、松弛血管平滑肌、改善微循环、增加血流量、抗凝、溶血栓、降低血液粘度和血压等作用。根据本领域的国际惯例，重组激肽释放酶的英文名可以为kallikrein、kininogenase、kallidinogenase或kininogenin，不过目前多用kallikrein一词。2、缓冲剂：本发明中使用的术语″缓冲剂″指能其ph缓冲作用的一种化合物或多种化合物的组合物。3、白蛋白：本发明中使用的术语″白蛋白″可与″清蛋白″互换使用，其英文名称为albumin，英文简称为alb。定义：1、在本发明中，1pna单位被定义为：在37℃、ph8.0的条件下，1分钟水解1μmolval-leu-arg-pna的重组激肽释放酶量为1pna单位。一个方面，本发明提供了一种重组激肽释放酶冻干粉制剂，其含有药物活性成分重组激肽释放酶、赋形剂、渗透压调节剂、ph调节剂和缓冲剂。本发明提供的重组激肽释放酶冻干粉制剂的配方为，每1000瓶：优选地，所述的重组激肽释放酶冻干粉制剂的配方为，每1000瓶：更优选地，所述的重组激肽释放酶冻干粉制剂的配方为，每1000瓶：所述的赋形剂选自甘露醇、甘氨酸、右旋糖酐、水解明胶、柠檬酸钠、聚乙二醇和海藻糖中的一种或几种。优选地，所述的赋形剂选自甘露醇、甘氨酸、右旋糖酐、水解明胶和海藻糖中的一种或几种；进一步优选地，所述的赋形剂选自甘露醇、甘氨酸和右旋糖酐中的一种或几种。甘露醇是山梨糖醇的同分异构体，两种醇类物质的二号碳原子上羟基朝向不同，分子式是c6h14o6，分子量为182.17。易溶于水，为白色透明的固体，有类似蔗糖的甜味。甘露醇在医药、食品和工业生产领域有广泛用途。例如，甘露醇在医药上是良好的利尿剂，降低颅内压、眼内压及治疗肾药、脱水药、食糖代用品、也用作药片的赋形剂及固体、液体的稀释剂；以甘露醇为起始剂加压而制成的聚甘露醇-氧化丙烯醚广泛应用于塑料行业中；在食品方面，该品在糖及糖醇中的吸水性最小，并具有爽口的甜味，用于麦芽糖、口香糖、年糕等食品的防粘，以及用作一般糕点的防粘粉。甘氨酸又名氨基乙酸，白色单斜晶系或六方晶系晶体，或白色结晶粉末，无臭，有特殊的甜味，结构简式nh2ch2cooh，分子量为75.07，甘氨酸分子中同时具有酸性和碱性官能团，在水中可电离，具有很强的亲水性，属于极性氨基酸，溶于极性溶剂，而难溶于非极性溶剂；甘氨酸食品、医药、饲料和工业生产领域都有广泛的应用。例如，甘氨酸可做食品添加剂，营养增补剂等；甘氨酸可用作医药微生物和生物化学氨基酸代谢研究用药，用作头孢菌素的原料，甲砜霉素中间体等；可作为家禽、畜禽特别是宠物等食用的饲料增加氨基酸的添加剂与引诱剂等；在工业生产中可作农药中间体，如做为除草剂草甘磷的主要原料；电镀液添加剂；ph调节剂等。右旋糖酐是蔗糖经肠膜状明串珠菌-1226发酵合成的一种高分子葡萄糖聚合物，是目前最佳的血浆代用品之一，临床上常用的有中分子右旋糖酐，主要用作血浆代用品，用于出血性休克、创伤性休克及烧伤性休克等，低、小分子右旋糖苷，能改善微循环，预防或消除血管内红细胞聚集和血栓形成等，还可以用于各种休克所指的微循环障碍，弥漫性血管内凝血、心绞痛、急性心肌梗塞即其他周围血管疾病等。水解明胶是胶原蛋白经酶水解的产物，明胶水解的衍生物，水解后肽键断裂，变为多肽，能溶于常温下的水，水解明胶的化学机构式中的侧链仍和明胶相同，因此仍能保持动物胶的其他性能，如表面活性、胶体保护性、保水性和粘结性等。水解明胶在护肤品、食品和工业生产中都有应用，例如，水解明胶可用作保湿剂，容易被皮肤吸收，其护肤抗皱的作用；水解明胶添加在食品中其增稠和乳化作用；在纺织品印染时，加入水解明胶可增加纤维光泽，防止化学纤维在纺织中产生静电，并有助染作用。柠檬酸钠又名枸橼酸钠，是一种有机化合物，白色或无色晶体，无臭，具有清凉咸辣味，常温及空气中稳定，在湿空气中微有溶解性，再热空气中产生风化现象。柠檬酸钠在食品、饮料工业中用作酸度调节剂、风味剂、稳定剂；在医药工业中用作抗血凝剂、化痰剂和利尿剂；在洗涤剂工业中可替代三聚磷酸钠作为无毒洗涤剂的助剂；还可用于酿造、注射液、摄影药品和电镀等领域。聚乙二醇又称为a-氢-ω-羟基(氧-1，2-乙二基)的聚合物，分子式为ho(ch2ch2o)nh，无毒无刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并与许多有机物组分有良好的相容性。具有良好的润滑性、保湿性、分散性、粘结性、抗静电性和柔软性等，在化妆品、制药、化纤、橡胶、塑料、造纸、油漆、电镀农药、金属加工及食品加工等行业中均有极广泛的应用。海藻糖海藻糖又称漏芦糖、蕈糖等，是一种安全、可靠的天然糖类。海藻糖是由两个葡萄糖分子以1，1-糖苷键构成的非还原性糖，有3种异构体即海藻糖(α，α)、异海藻糖(β，β)和新海藻糖(α，β)，并对多种生物活性物质具有非特异性保护作用。海藻糖在医药、化妆品、食品加工及农业等领域有很好的应用。例如，海藻糖可广泛应用于饮料、巧克力及糖果、烘烤制品和速冻食品等方面；在医药方面，海藻糖替代血浆蛋白作为血液制品、疫苗、淋巴细胞、细胞组织等生物活性物质的稳定剂。在一些优选的实施方案中，上述各种赋形剂的重量配比为：甘露醇∶甘氨酸∶右旋糖酐∶水解明胶∶柠檬酸钠∶聚乙二醇∶海藻糖＝5∶1∶2∶2∶2∶3∶3。所述的渗透压调节剂可以选自氯化钠、葡萄糖或白蛋白中的一种或几种；优选为氯化钠或葡萄糖中的一种或两种。在本发明所述的重组激肽释放酶冻干粉制剂中，氯化钠的用量为，每1000瓶：1-10g；优选为每1000瓶：2-9g；更优选为每1000瓶：3-9g。在本发明所述的重组激肽释放酶冻干粉制剂中，葡萄糖的用量为，每1000瓶：1-50g；优选为每1000瓶：6-509；更优选为每1000瓶：15-509。在本发明所述的重组激肽释放酶冻干粉制剂中，白蛋白的用量为，每1000瓶：1-50g；优选为每1000瓶：10-50g；更优选为每1000瓶：14-50g。所述的缓冲剂可以选自磷酸氢二钠-磷酸二氢钠或枸橼酸-枸橼酸钠中的一种。本发明意料不到的发现，当所述的重组激肽释放酶冻干粉制剂的配方中加入强化剂后，其不良反应发生率并没有明显变化，但其稳定性明显提高。所述的强化剂选自甲硫氨酸、精氨酸、烟酰胺和维生素b6中的一种或几种；优选地，上述强化剂选自甲硫氨酸、精氨酸和维生素b6中的一种或几种；进一步优选地，上述强化剂选自甲硫氨酸和精氨酸中的一种或几种。甲硫氨酸，是构成人体的必需氨基酸之一，参与蛋白质合成。因其不能在体内自身生成，所以必须由外部获得。通常被用作营养补充剂、调味剂以及用于护肝、抗抑郁、防毒去毒和心肌保护等。精氨酸，精氨酸是一种α-氨基酸，pi(氨基酸等电点)＝10.76，亦是20种普遍的自然氨基酸之一。其具有改善男性性功能障碍、改善心血管相关疾病、增加胰岛素分泌以及减少感冒和呼吸道感染的作用，因此通常被用于男性性功能保健品、心脑血管保健品、减少糖尿病相关并发症药物和预防感冒药物的制备。烟酰胺，又称尼克酰胺，是烟酸的酰胺化合物。其通常在临床上用于防治糙皮并口炎、舌炎，病态窦房结综合征，房室传导阻滞等问题。维生素b6，又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素。其通常被用作食品添加剂、营养补充剂或药物制剂，用于抢救异烟肼中毒、治疗贫血、治疗白细胞减少症、治疗智力发育迟滞、治疗口腔溃疡、治疗动脉硬化及血栓栓塞性疾病、回乳、治疗帕金森综合征、治疗破伤风、治疗妊娠糖尿病、甾体避孕药引起的精神抑郁症、增强免疫力和抗癌、治疗维生素c引起的草酸盐结石、维生素b6依赖性惊厥、平喘、治疗腕管综合征等。所述的强化剂在本发明提供的重组激肽释放酶冻干粉制剂中的用量为，每1000瓶：0.2-1.4g；优选为每1000瓶：0.2-1g；更优选为每1000瓶：0.3-0.8g。因此，作为另一些优选的实施方案，所述的重组激肽释放酶冻干粉制剂的配方为，每1000瓶：在本发明提供的重组激肽释放酶冻干粉制剂中，甲硫氨酸的用量为，每1000瓶：0.2-4g；优选为每1000瓶：0.2-2g；更优选为每1000瓶：0.3-1g。在本发明提供的重组激肽释放酶冻干粉制剂中，精氨酸的用量为，每1000瓶：0.2-4g；优选为每1000瓶：0.2-2g；更优选为每1000瓶：0.3-1g。在本发明提供的重组激肽释放酶冻干粉制剂中，烟酰胺的用量为，每1000瓶：0.2-4g；优选为每1000瓶：0.2-2g；更优选为每1000瓶：0.3-1g。在本发明提供的重组激肽释放酶冻干粉制剂中，维生素b6的用量为，每1000瓶：0.2-4g；优选为每1000瓶：0.2-2g；更优选为每1000瓶：0.3-1g。在另一些优选的实施方案中，上述各种强化剂的重量配比为：甲硫氨酸∶精氨酸∶烟酰胺∶维生素b6＝2∶2∶1∶1。申请人意外地发现，适当的调节赋形剂和强化剂的重量配比可以使重组激肽释放酶冻干粉制剂的稳定性显著提高，其中赋形剂和强化剂的比例可以为10-30∶1；优选地，赋形剂和强化剂的比例为10-20∶1；进一步优选地，赋形剂和强化剂的比例为15∶1。另一个方面，本发明提供了上述重组激肽释放酶冻干粉制剂的制备方法，包括以下步骤：(1).按照配方用量称取除了重组激肽释放酶之外的其他原料并置于配液桶中，用温度为2～4℃注射用水搅拌至溶解；加入医用活性炭搅拌混匀后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到溶液a；用2～4℃的注射用水溶解配方用量的重组激肽释放酶，并与上述溶液a混合均匀，得到溶液b；(2).用磷酸或氢氧化钠调节步骤(1)得到的溶液b的ph值至6-7，得到溶液c；(3).用2～4℃注射用水将步骤(2)得到的溶液c补足体积至1500ml，混匀，得到溶液d；(4).采用0.22μm滤膜对步骤(3)得到的溶液d进行两次过滤除菌，得到溶液e；(5).分装溶液e，半加塞，于冻干机中冷冻干燥，轧盖，检查，包装，即得得。本发明所述的制备方法步骤(1)中的医用活性炭的添加量为0.5-2g；优选为1-2g；进一步优选为1-1.2g。本发明所述的制备方法步骤(1)中的医用活性炭的吸附处理时间为5-10分钟；优选为6-9分钟；进一步优选为7-8分钟。本发明所述的制备方法步骤(1)中的医用活性炭的平均粒径为3-7μm；优选为4-6μm；进一步优选为4.5-5.5μm。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：(1)本发明生产的重组激肽释放酶冻干粉所用配方组分简单，使用特定的赋形剂及强化剂，并控制两者比例，使制备的冻干粉稳定性高、杂质少、副作用低，安全性高；(2)本发明生产的重组激肽释放酶冻干粉生物利用度高，使用方便，吸收快，发挥作用迅速；(3)本发明生产的冻干粉，所用试剂简单，操作方便，生产成本低，便与储存和使用。具体实施方案本发明中提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所解释的所有特征可与任意组合物形式并用，说明书中揭示的各个特征，可被任何可提供相同、均等或相似目的的取代性特征取代。因此除有特殊说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。在本发明的具体实施方案中，重组激肽释放酶的来源为重组激肽释放酶，但这并不限制其他类型来源的重组激肽释放酶应用于本发明的技术方案，同样也能获得与本发明相同的技术效果。本发明具体实施方案中涉及的重组激肽释放酶可以通过本领域的常规技术手段获得，也可以通过商业途径购买。本发明具体实施方案中涉及到的药品、材料、溶液等，除特别说明外，其余均有商业途径购得。实施例1重组激肽释放酶冻干粉制剂配方为，每1000瓶：其中，甘露醇、甘氨酸、右旋糖酐的质量比为5∶1∶2制备方法：(1).按照配方用量称取除了重组激肽释放酶之外的其他原料并置于配液桶中，用温度为2～4℃注射用水搅拌至溶解；加入医用活性炭搅拌混匀后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，得到溶液a；用2～4℃的注射用水溶解配方用量的重组激肽释放酶，并与上述溶液a混合均匀，得到溶液b；(2).用磷酸或氢氧化钠调节步骤(1)得到的溶液b的ph值至6-7，得到溶液c；(3).用2～4℃注射用水将步骤(2)得到的溶液c补足体积至1500ml，混匀，得到溶液d；(4).采用0.22μm滤膜对步骤(3)得到的溶液d进行两次过滤除菌，得到溶液e；(5).分装溶液e，半加塞，于冻干机中冷冻干燥，轧盖，检查，包装，即得得。实施例2重组激肽释放酶冻干粉制剂配方为，每1000瓶：其中，甘露醇、甘氨酸、右旋糖酐的质量比5∶1∶2；甲硫氨酸、精氨酸的质量比1∶1；赋形剂、强化剂的质量比例为16∶1。制备方法：除原料外，其余步骤同实施例1。实施例3重组激肽释放酶冻干粉制剂配方为，每1000瓶：其中，甘露醇、甘氨酸的质量比为5∶1；甲硫氨酸、维生素b6的质量比为1∶1；赋形剂和强化剂的质量比为22∶1；制备方法：除原料外，其余步骤同实施例1。实施例4重组激肽释放酶冻干粉制剂配方为，每1000瓶：其中，甘露醇、甘氨酸的质量比为5∶1；甲硫氨酸、精氨酸的质量比为1∶1；赋形剂和强化剂的质量比为15∶1；制备方法：除原料外，其余步骤同实施例1。实施例5重组激肽释放酶冻干粉制剂配方为，每1000瓶：其中，甘露醇、水解明胶的质量比为5∶1；赋形剂和强化剂的质量比为17.5∶1；制备方法：除原料外，其余步骤同实施例1。实施例6重组激肽释放酶冻干粉制剂配方为，每1000瓶：其中，甘露醇、水解明胶、甘氨酸的质量比为5∶2∶1；赋形剂和强化剂的质量比为20∶1；制备方法：除原料外，其余步骤同实施例1。实施例7重组激肽释放酶冻干粉制剂配方为，每1000瓶：其中，甘露醇、右旋糖酐、甘氨酸的质量比为5∶2∶1；甲硫氨酸、精氨酸的质量比为1∶1；赋形剂与强化剂的质量比为15∶1；制备方法：除原料外，其余步骤同实施例1。对比例1重组激肽释放酶冻干粉制剂配方与实施例7的不同在于减小赋形剂和强化剂的比例，赋形剂和强化剂的比例为9∶1，使精氨酸的含量为1.35g，甲硫氨酸的含量为1.35g；其他与实施例7相同。制备方法：除原料外，其他与实施例7相同。对比例2重组激肽释放酶冻干粉制剂配方与实施例7的不同在于增大赋形剂和强化剂的比例，使赋形剂和强化剂的比例为40∶1，使精氨酸的含量为0.31g，甲硫氨酸的含量为0.31g；其他与实施例7相同。制备方法：除原料外，其他与实施例7相同。对比例3重组激肽释放酶冻干粉制剂配方：除不含有甲硫氨酸和精氨酸外，其余同实施例7。制备方法：除原料外，其他与实施例7相同。对比例4中国专利申请200810038422的实施例12中公开的含有重组激肽释放酶-1的注射液xi。1.稳定性试验将实施例1-7和对比例1-4制备的重组激肽释放酶冻干粉制剂或注射液，于(40±2℃)、相对湿度(75±5)％条件下放置6个月，监测湿度，于1、2、3、6个月末，取样，对冻干粉制剂中重组激肽释放酶进行稳定性检测(以相对活性为指标，即存放n个月后的活性与存放0个月时的活性的百分比)，以考察制剂加速稳定性。同样，样品瓶装于(25±2℃)、相对湿度(60±10)％条件下放置24个月，监测湿度，于0、3、6、9、12、24个月末取样，对冻干粉制剂中重组激肽释放酶的活性进行稳定性检测，以考察制剂长期稳定性。结果见表1和表2。表1加速试验结果表2长期稳定试验通过表1和表2的数据可以看出，本发明提供的重组重组激肽释放酶冻干粉制剂具有很好的稳定性，当含有优选赋形剂和强化剂并且在优选比例时(实施例7)，制备的冻干粉在实验过程中具有很好的稳定性，在长期的稳定实验中存放24个月后依然有很好的稳定性，高达95％；对比例1-2中只是调节了赋形剂与强化剂的比例，使强化剂的含量增加或减少，其稳定性并没有增加，而是与未加强化剂时的稳定性相差不大(对比例3)；而中国发明专利200810038422的实施例12中公开的含有重组激肽释放酶-1的注射液xi，在稳定性试验测定时24个月后稳定性降低到85％以下，药物失活，不能正常使用；所以本发明提供的赋形剂和强化剂的比例可以提高重组重组激肽释放酶冻干粉的稳定性。复溶实验复溶后不溶性微粒测定方法：将实施例1-7和对比例1-3制备的重组激肽释放酶冻干粉制剂各4支溶于250ml的0.9％氯化钠溶液中，复溶后测定溶液的不溶性微粒。结果见表3.表3不溶性微粒(个/ml)10μm颗粒25μm颗粒实施例152实施例241实施例331实施例421实施例531实施例642实施例710对比例162对比例263对比例332复溶后不溶性微粒测定方法：将实施例1-7和对比例1-3制备的重组激肽释放酶冻干粉制剂各4支溶于250ml的5％葡萄糖溶液中，复溶后测定溶液的不溶性微粒。结果见表4。表4由表3和表4中的数据可以看出，本发明所制备的重组激肽释放酶冻干粉在葡萄糖中的复溶效果要比在氯化钠中的复溶效果好，并且实施例相对于对比例复溶后不溶微粒明显少。特别是选用本发明提供的优选赋形剂和强化剂并且在提供的优选比例内(实施例1-7)相对于其他比例(对比例1-3)复溶后不溶微粒少很多。通过实验数据可以看出重组激肽释放酶冻干粉中只含有赋形剂时，重组重组激肽释放酶冻干粉的活性可以维持6个月依然可以正常使用，六个月后活性降低，药效消失，所以在本发明中强化剂具有增效赋形剂的作用，选用特定的赋形剂和强化剂可以显著提高重组激肽释放酶冻干粉的稳定性，从而减少了重组激肽释放酶冻干粉因活性丧失而造成的浪费。2.不良反应试验实验动物：sd大鼠，雌雄各半，体重240～300g，50只/组；给药方式：静脉注射0.2pna单位/kg体重；监测项目：心率、血压、体温、结膜出血情况、注射部位情况；实验组：本发明实施例7制备的冻干粉制剂，以0.9％氯化钠氯化钠注射液溶解；对照组1：本发明对比例3制备的冻干粉制剂，以0.9％氯化钠氯化钠注射液溶解；对照组2：本发明对比例4制备的冻干粉制剂，以0.9％氯化钠氯化钠注射液溶解；空白对照组：0.9％氯化钠氯化钠注射液；实验结果：统计每组小鼠上述各个监测项目发生的只数，结果如下表：实验组对照组1对照组2空白对照组心率提高1230血压降低1121体温升高1240结膜出血0130注射部位红痒痛2171由试验结果可知，本发明提供的加入和未加入强化剂的重组激肽释放酶冻干粉制剂的不良反应发生率没有明显差异，但不良反应发生的情况明显少于目前已经公开的注射液。说明本发明提供的重组激肽释放酶冻干粉制剂稳定性好，且不良反应发生率低。当前第1页12