本发明涉及化妆品领域，具体而言，本发明涉及互叶百千层的提取物及其制备方法以及这种提取物作为化妆品的用途。
背景技术：
：互叶百千层(melaleucaahemifolia)是桃金娘科白千层目，木本植物，多乔木。植物的新鲜枝叶经水蒸汽蒸馏而得的无色至淡黄色轻油状液体，植物学上定义为互叶白千层油，俗称“茶树精油”。互叶百千层具有良好的光谱杀菌保健及防虫驱蚊作用，并有宜人的肉豆蔻香气，是公认优良的天然芳香剂、抗菌剂、防腐剂，在日化、医药、食品行业广泛应用。1993年起，我国广东、广西、云南等地先后成功引种互叶百千层，由于引进渠道各不相同，造成白千层芳香油产品主要成分含量相差较大。目前互叶百千层的提取大多采用传统的水蒸气蒸馏法，只收取馏出液中的油相部分作为产品，而与水蒸气一起被带出并溶于或微溶于水的挥发性组分未收到关注。互叶白千层油是一种淡黄绿色或几乎水白色流动液体，具有温暖的辛香，带芳香萜类气息，让人们回忆起肉豆寇、小豆寇和甘牛至的香气，但它的香气中萜烯和松油醇的香气更突出。该精油的风味是温暖芳香，带某些焦香、辛香，但有新鲜感和淡淡的樟脑味，稍苦。目前澳大利亚年产大约500吨茶树油，几乎全都来自人工栽培的互叶白千层。现有技术一般认为，在确认的互叶百千层挥发性成分的油相成分中，碳氢化合物18种占油相部分总量的约30％，醇类物质约占50％，但对于互叶百千层中剩余物质的研究并不深入。本发明旨在通过对互叶百千层提取物质进行深入研究，以期获得具有抗紫外线、抗氧化或美白活性的新型物质。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种含互叶百千层纯露的喷雾剂；本发明的目的在于提供了一种制备互叶百千层纯露提取物的方法；本发明的目的在于提供了一种互叶百千层纯露提取物的化合物；本发明还有一目的在于提供了上述喷雾剂、互叶百千层纯露提取物在制备化妆品，或抗紫外线损伤方面的用途。本发明的目的是通过下述技术方案实现的：一种含互叶白千层纯露的喷雾剂，所述喷雾剂含有从互叶白千层纯露提取的式i化合物和化妆品中可用助剂：优选地，所述助剂为溶剂、稳定剂和乳化剂。优选地，所述溶剂选自水、甘油、丙二醇和乙醇中的一种或几种；所述稳定剂选自司盘、月桂醇和胶体二氧化硅中的一种或几种；所述乳化剂选自吐温。所述的喷雾剂的制备方法，包括下述步骤：将式i化合物加水溶解，依次加入其它溶剂、稳定剂和乳化剂，充分振荡至澄清，过滤，封装既得。本发明还提供了一种式i所示的化合物，如下所示：所示的化合物的制备方法是通过下述制备方法得到的：(1)取新鲜互叶白千层地上部分，粉碎，加热加压蒸馏，分离，循环提取得到纯露；(2)将步骤(1)的纯露与乙醇按质量比为1∶6～1∶15混合，恒温40～55℃搅拌3～6h，煎煮2-3次，每次1-2小时；(3)合并煎煮液，过滤浓缩至80℃时的相对密度为1.1～1.2时，得到淡黄色油状液体。(4)将所述淡黄色油状液体用硅胶柱层析，以体积比3∶1～8∶1的乙醇+水混合溶剂洗脱，tlc检测，收集含式i化合物馏分，浓缩得到浓缩物，干燥；(5)将步骤(3)得到的浓缩物用v乙酸乙酯∶v石油醚＝5∶1反复重结晶，得到白色的粉末状晶体，即为式i化合物，经hplc检测纯度为98.1％。优选地，互叶白千层地上部分是叶、花和茎。优选地，所述的浓缩方法可以为膜浓缩、减压浓缩、常压浓缩；所述的干燥方法可以为喷雾干燥、真空干燥、加热干燥、冷冻干燥。本发明所述的喷雾剂和式i化合物可用于制备化妆品。本发明所述的喷雾剂和式i化合物具有抗紫外线损伤的功能。本领域技术人员可以理解的是，喷雾剂也可称作气雾剂，指的是植物提取物或活性成分，与适宜的抛射剂共同封装在具有特制阀门装置的耐压容器中，使用时借助抛射剂的压力将内容物喷出呈雾状、泡沫状或其他形态的制剂。不合抛物剂，借助手动泵的压力或其他方法将内容物以雾状等形态喷出的制剂称喷雾剂。气雾剂和喷雾剂按内容物组成分为溶液型、乳状液型或混悬型。喷雾剂和气雾剂一般都是由植物提取物或活性成分与适当的助剂混合而成的。在制备溶液型气雾剂时，除抛射剂作溶剂外，必要时可加入适量溶剂，使提取物或活性成分与抛射剂混溶成均相溶液，当溶液喷出时，提取物或活性成分变成微粒分散在空气中形成雾状。常用的溶剂有水、甘油、丙二醇、乙醇等。固体提取物或活性成分制成混悬型气雾剂，有时需加入适量的润湿剂，使提取物或活性成分易分散混悬于抛射剂中，如司盘85、月桂醇、胶体二氧硅等。泡沫型气雾剂中提取物或活性成分不溶于或在水中不稳定时，可以加入适量乳化剂如吐温类或司盘类。另外，依据提取物或活性成分性质，还可选用抗氧剂、防腐剂等，有些应用于局部皮肤的气(喷)雾剂可加入适宜透皮促进剂如氮酮。气(喷)雾剂制备工艺的关键为提取物或活性成分的提取与配制，处方中的提取物或活性成分须经过适当的提取和精致。进一步根据提取物或活性成分性质制成溶液、混悬液、乳浊液等不同类型。如按配方粉碎后用水蒸气蒸馏法提取挥发油，分别加入芳香水、吐温80、司盘80，经乳化后制成水包油型(o/w)乳剂，分装在喷雾容器中即得喷雾剂。或加水浸泡4h，水蒸气蒸馏，收集芳香水，然后进行多次蒸馏，收集芳香水，然后加入薄荷油和吐温80，充分振摇使之澄清，滤过，灌封即得。本发明人分别对互叶白千层的不同药用部位进行了研究，对互叶白千层全草、互叶白千层地上部分、叶、种子、茎和根部分别进行了提取和活性研究，本发明人发现，互叶白千层的叶、种子、茎和根部分的抗紫外线活性是有差别的，活性以叶提取物为最佳；活性的强弱顺序是种子＞叶＞茎＞花＞根。本发明人从这一发现中得到启示，用互叶白千层的地上部分代替传统使用的互叶白千层全草进行提取，这样既保持和提高了提取物的活性，又避免使用互叶白千层的根部。“化妆品中可用助剂”一般指的是通常在该领域中接受的，可传递生物活性试剂的。配制喷雾剂上可接受载体，根据本领域普通技术人员所熟知的许多因素。这些包括没有限制被配制的活性试剂的类型和特性；含试剂组合物施予的受体；组合物施予途径；和定向治疗指示。化妆品上可接受的载体包括水性和非水性液态媒介，以及多种固态和半固态剂型。这些载体包括许多不同组分和添加剂，除了活性试剂之外，这些额外组分由于多种原因包含于配方中，如包括但不限于抛射剂、溶剂(水、甘油、丙二醇、乙醇等)、润湿剂(司盘85、月桂醇、胶体二氧硅)、乳化剂(吐温类或司盘类)。另外，依据提取物或活性成分性质，还可选用抗氧剂、防腐剂，这是本领域普通技术人员所熟知的。紫外线是最常见的物理损伤引自之一，其照射可造成生物体多种形式损伤，人们利用该作用机制进行消毒杀菌。近年来，开始注意到紫外线对人体的损害，尤其是自由基医学的研究发展，对紫外线的作用机制有了更深入的了解，认为紫外线照射可多途径诱发膜脂质过氧化链式反应，造成生物膜损伤。另外，紫外线的过量照射还可导致眼组织损伤，日常摄入抗氧化剂vc、ve和胡罗卜素或补充多种维生素的老年人群，白内障发生的危险降低，这可能是因为晶状体老化与自由基有关，急剧的氧化应力导致细胞机能障碍，细胞代谢过程和外部引自均可以使细胞不断形成自由基，如羟基自由基、超氧阴离子和过氧自由基等，这些自由基会损害细胞，特别是富含不饱和脂肪酸的细胞膜对氧化反应敏感。研究认为uvb和可见光能诱发晶状体产生自由基。自由基反应是机体正常生物体代谢过程中必不可少的重要环节。在胞内和胞液中，在许多酶促反应和电子传递过程中，均有自由基及其中介产物生成。最初产生的自由基可与周围的生物分子反应，生成其它自由基，形成一系列的连锁反应，造成周围组织的损伤。越来越多的氧自由基在细胞内出现会损伤细胞，引发各种疾病。本发明提取的式i化合物对氧自由基的产生具有一定的抑制作用。实施例下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。如无特别说明，实施例中用到的所有原料和溶剂均为市售分析纯产品。制备实施例1：喷雾剂的制备将式i化合物加水溶解，依次加入其它溶剂、稳定剂和乳化剂，充分振荡至澄清，过滤，封装既得。所述溶剂选自水、甘油、丙二醇和乙醇中的一种或几种；所述稳定剂选自司盘、月桂醇和胶体二氧化硅中的一种或几种；所述乳化剂选自吐温。其中式i化合物的加入量不超过总量的0.5％。本领域技术人员可以理解的是，现有技术中任意制备喷雾剂的方法均可以制备本发明的喷雾剂，其都属于对本发明喷雾剂的简单改进制备实施例2：式i化合物的制备(1)取新鲜互叶白千层的叶子500克，粉碎，放入蒸馏塔中，加热加压蒸馏，分离，循环提取得到纯露；本领域技术人员可以知晓的是纯露制备工艺是现有技术中已知的，本领域技术人员可以采用其它任意纯露提取方法，这都是对本发明方法的简单改进。(2)将步骤(1)的纯露与乙醇按质量比为1∶8混合，恒温约55℃搅拌6h，煎煮3次，每次2小时；(3)合并煎煮液，过滤浓缩至80℃时的相对密度为约1.2时，得到淡黄色油状液体。(4)将所述淡黄色油状液体用硅胶柱层析，以体积比3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1、8∶1的乙醇+水混合溶剂梯度洗脱，tlc检测，收集含式i化合物馏分，减压浓缩得到浓缩物，喷雾干燥；(5)将步骤(3)得到的浓缩物用v乙酸乙酯∶v石油醚＝5∶1反复重结晶，得到白色的粉末状晶体，即为式i化合物，经hplc检测纯度为98.1％。白色固体，m.p.204-205℃.66.1mg.1hnmr(400mhz，cdcl3)67.58(s，oh，1h)，6.76(q，j＝6.8hz，1h)，6.33(d，j＝8.8hz，1h)，5.40(s，oh，1h)，5.20(d，j＝6.8hz，1h)，4.54(s，1h)，4.50(t，j＝7.6hz，ch，1h)，4.49(s，oh，1h)，4.30-4.33(m，ch，1h)，4.08(q，j＝7.2hz，ch，1h)，3.84-3.86(m，ch，1h)，3.81(d，j＝4.4hz，ch，1h)，3.71(t，j＝5.2hz，ch，1h)，3.61(q，j＝6.0hz，ch2，2h)，3.30-3.33(m，ch，1h)，3.25(q，j＝6.0hz，ch2，2h)，2.33(t，j＝6.4hz，ch，1h)，2.17-2.20(m，ch，1h)，1.93-1.96(m，ch2，2h)，1.89-1.92(m，ch2，2h)，1.84-1.88(m，ch，1h)，1.82(d，j＝6.8hz，ch3，3h)，1.72-1.76(m，ch2，2h)，1.70(s，ch3，3h)，0.88(d，j＝6.8hz，ch3，3h).生物活性实施例：dpph自由基清除实验：dpph乙醇溶液的配制：精密称取dpph4mg，置于100ml棕色容量瓶中，加入50ml乙醇，超声30s，用乙醇定容至刻度，摇匀，待用。本品须现配现用。供试品溶液的配制：精密称取式i化合物，置于容量瓶中，加入乙醇，超声5min，用乙醇定容至100μg/ml，摇匀，即得。操作步骤：准确吸取2ml供试品溶液和2mldpph溶液混合均匀；准确吸取2ml供试品溶液和2ml乙醇混合均匀；准确吸取2mldpph溶液和2ml乙醇混合均匀，室温放置30min，在515nm波长处测定吸光度，并根据以下计算公式计算自由基清除率：ir％＝[1-(ai-aj)/a0]*100％；其中，ai表示待测溶液和dpph混合后溶液的吸光度；aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；a0表示dpph和溶剂混合后溶液的吸光度。abts+自由基清除实验：pbs缓冲液的配制：称取氯化钠8g，氯化钾0.2g，磷酸二氢钾0.24g，十二水合磷酸氢二钠3.62g，置于1000ml烧杯中，加入800ml蒸馏水，搅伴使其溶解，用盐酸或氢氧化钠调节ph至7.4，转移至1000ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待用。abts+贮存溶液的配制：精密称取abts+78mg左右，置于20ml棕色容量瓶中，加入15ml蒸馏水，超声5min，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。精密称取过硫酸钾76mg左右，置于2ml棕色容量瓶中，加入1ml蒸馏水，超声使其溶解，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。精确吸取352μl过硫酸钾溶液加入至abts溶液中，摇匀，静置过夜。abts+工作溶液的配制：精确吸取贮存溶液1ml，加入65ml左右pbs缓冲液，摇匀。供试品溶液的配制：精密称取式i化合物，置于容量瓶中，加入pbs缓冲液，超声5min，用pbs缓冲液定容至100μg/ml，摇匀，即得。操作步骤：准确吸取0.5ml供试品溶液和5mlabts工作溶液混合均匀；准确吸取0.5ml供试品溶液和5mlpbs缓冲液混合均匀；准确吸取5mlabts工作溶液和0.5mlpbs缓冲液混合均匀，立即在734nm处测定吸光度，并根据以下公式计算自由基清除率：ir％＝[1-(ai-aj)/a0]*100％；其中，ai表示待测溶液和abts混合后溶液的吸光度；aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；a0表示abts和溶剂混合后溶液的吸光度。srsa超氧阴离子自由基清除实验：0.1mol/lpbs缓冲液(ph7.4)的配制：称取氯化钠80g，氯化钾2g，磷酸二氢钾2.4g，三水合磷酸氢二钾23.1g，置于1000ml烧杯中，加入600ml蒸馏水，搅伴使其溶解，用盐酸或氢氧化钠调节ph至7.2，转移至1000ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待用。150μmol/lnbt溶液的配制：准确称取nbt12.5mg置于100ml棕色容量瓶中，加入蒸馏水，超声使其溶解，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。60μmol/lpms溶液的配制：准确称取pms18.8mg，置于1000ml的容量瓶中，加入蒸馏水，超声使其溶解，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。468μmol/lnadh溶液的配制：准确称取nadh33.9mg，置于100ml的容量瓶中，加入蒸馏水，超声使其溶解，并用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的配制：配制100μg/ml的式i化合物，待测。工作液的配制：取1ml0.1mol/lpbs缓冲液(ph7.4)于容量瓶中，加入1ml150μmol/lnbt溶液，加入2ml468μmol/lnadh溶液，加入1ml60μmol/lpms溶液，搅拌均匀，25℃下反应5min，与560nm波长处测定其吸光度值。操作步骤：准确吸取0.5ml供试品溶液和5ml上述工作溶液混合均匀；准确吸取0.5ml供试品溶液和5ml蒸馏水混合均匀；准确吸取5ml上述工作溶液和0.5ml蒸馏水混合均匀，立即在560nm处测定吸光度，并根据以下公式计算自由基清除率：ir％＝[1-(ai-aj)/a0]*100％；其中，ai表示待测溶液和srsa混合后溶液的吸光度；aj表示待测溶液和溶剂混合后溶液的吸光度；a0表示srsa和溶剂混合后溶液的吸光度。测试结果如表1所示：表1式i化合物抗氧化活性由表1可知，本发明的式i化合物有较好的抗氧化活性。抗紫外线损伤实验：取正常人混合抗静脉血，用生理盐水洗涤3次，配成悬液。取所述悬液0.1ml放入24孔培养板内，分别加入不同量的本发明式i化合物，以生理盐水补充体积至1.0ml混匀后至于紫外灯下，距离10厘米照射15分钟，然后加生理盐水2.0ml，离心10分钟，取上清测415nm光吸收，以红细胞在蒸馏水中溶血为100％，计算溶血度。按照下述公式计算防护率：防护率＝[(对照管溶血度-测定管溶血度)/对照管溶血度]×100％表2式i化合物对紫外线所致红细胞损伤的防护作用浓度(mg/l)防护率(％)浓度(mg/l)防护率(％)空白对照06070.4±6.1538.1±2.89084.6±4.01057.6±3.415090.9±4.11567.1±4.520098.7±5.7当前第1页12