本发明涉及一类物质的新用途，具体涉及丹皮酚衍生物在制备皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及祛除色素沉着的化妆品或外用药物中的应用。
背景技术：
天然药物被广泛推崇并使用的同时，其自身存在的一些问题又制约了它们的应用与发展。受资源及植物中含量的限制，从自然界直接获取有些天然活性物质十分困难。药理活性更显著，毒副作用更小，更易成药的化合物一直是研究者追求的目标。所以化学合成法就成为一条重要途径。化学合成的丹皮酚衍生物具有镇痛、抗炎、解热和抑制变态反应的作用。
某些丹皮酚衍生物已报道具有抗炎作用，例如(2-羟基苯乙酮缩苯基氨基硫脲，2,4-二羟基苯乙酮缩苯基氨基硫脲)，抗炎作用通常体现在对由角叉菜胶、蛋清、甲醛、组胺、5-羟基色胺或缓激肽所引发的大鼠足踢肿胀，及由二甲苯所引起的小鼠耳壳肿胀、内毒素所致的腹腔毛细血管通透性升高的抑制作用。
某些丹皮酚衍生物已报道对大鼠黑色素瘤b16f10细胞酪氨酸酶活性和黑色素合成具有抑制作用，及对由uvb引发的豚鼠皮肤色素沉积具有抑制作用，例如(4-甲氧基苯乙酮，2,4-二羟基苯乙酮)。研究结果显示，丹皮酚衍生物目前已知的对酪氨酸酶活性的抑制率为22.2～30.9％，对黑色素合成的抑制率在500～1000μm浓度范围内为27.4～37.2％，并且体内注射后明显降低由uvb引发的豚鼠皮肤色素沉积。其作用机理可能和上皮基底层的二羟基苯丙氨酸阳性黑色素细胞的减少、黑色素细胞中酪氨酸酶活性的降低及黑色素合成受到抑制有关。
丹皮酚衍生物(包括丹皮酚糖苷类衍生物，如：丹皮酚葡萄糖苷，丹皮酚半乳糖苷；丹皮酚磺酸盐类衍生物，如：丹皮酚磺酸，丹皮酚磺酸钠，丹皮酚磺酸钙，丹皮酚磺酸钾；丹皮酚酯类衍生物，如：乙酸丹皮酚酯，丙酸丹皮酚酯，乙酰阿魏酸丹皮酚酯；丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物衍生物，如：丹皮酚缩乙醇胺，丹皮酚2,4二硝基苯腙)的抗炎作用和对酪氨酸酶活性的抑制作用目前未见报道。
技术实现要素：
本发明的第一个目的在于提供一种皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑、祛除色素沉着(如黄褐斑等)的化妆品或药物。
一种皮肤消炎、祛痘的化妆品或药物，包括丹皮酚衍生物以及辅料，所述丹皮酚衍生物选自丹皮酚糖苷类衍生物、丹皮酚磺酸盐类衍生物、丹皮酚酯类衍生物、丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物中的至少一种，所述丹皮酚衍生物的质量分数为0.05％～20％。优选，丹皮酚糖苷类衍生物、丹皮酚磺酸盐类衍生物、丹皮酚酯类衍生物。
一种美白、祛斑、祛除色素沉着的化妆品或药物，包括丹皮酚衍生物以及辅料，所述丹皮酚衍生物选自丹皮酚糖苷类衍生物、丹皮酚磺酸盐类衍生物、丹皮酚酯类衍生物、丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物中的至少一种，所述丹皮酚衍生物的质量分数为0.05％～20％。优选，丹皮酚糖苷类衍生物、丹皮酚磺酸盐类衍生物。
一种皮肤消炎、祛痘及美白、祛斑、祛除色素沉着的化妆品或药物，包括丹皮酚衍生物以及辅料，所述丹皮酚衍生物选自丹皮酚糖苷类衍生物、丹皮酚磺酸盐类衍生物、丹皮酚酯类衍生物、丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物中的至少一种，所述丹皮酚衍生物的质量分数为0.05％～20％。
优选的，所述丹皮酚糖苷类衍生物选自丹皮酚葡萄糖苷或丹皮酚半乳糖苷；丹皮酚磺酸盐类衍生物选自丹皮酚磺酸、丹皮酚磺酸钠、丹皮酚磺酸钙或丹皮酚磺酸钾；丹皮酚酯类衍生物选自乙酸丹皮酚酯、丙酸丹皮酚酯或乙酰阿魏酸丹皮酚酯；丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物选自丹皮酚缩乙醇胺或丹皮酚2,4-二硝基苯腙。
优选的，上述化妆品或药物还包括遮光剂、抗氧化剂及其他消炎、美白或祛斑成分中的一种或多种；遮光剂的质量分数为0.1～5.0％，抗氧化剂的质量分数为0.01～20.0％，其他消炎、美白或祛斑成分的质量分数为0.1～20％。
优选的，所述遮光剂选自二氧化钛、肉桂酸酯类、氨基苯甲酸酯类、二苯甲酮类、褪黑激素或其他紫外线吸收剂；所述抗氧化剂选自维生素c、维生素e、维生素c的衍生物、维生素e的衍生物、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠或其他抗氧化剂；所述其他消炎、美白或祛斑成分选自熊果苷、褪黑激素或氢醌。
优选的，所述化妆品或药物的剂型选自酊剂、醑剂、糊剂、软膏剂、乳膏剂、乳剂、油剂、面膜、凝胶剂、涂膜剂、气雾剂或溶液剂(包括洗剂、搽剂)。
本发明的第二个目的在于提供丹皮酚衍生物在制备用于皮肤消炎、祛痘的化妆品或药物中的应用，所述丹皮酚衍生物选自上述丹皮酚糖苷类衍生物、丹皮酚磺酸盐类衍生物、丹皮酚酯类衍生物、丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物中的至少一种。
本发明的第三个目的在于提供丹皮酚衍生物在制备用于美白、祛斑、祛除色素沉着的化妆品或药物中的应用，所述丹皮酚衍生物选自上述丹皮酚糖苷类衍生物、丹皮酚磺酸盐类衍生物、丹皮酚酯类衍生物、丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物中的至少一种。
本发明的第四个目的在于提供丹皮酚衍生物在制备用于皮肤消炎、祛痘及美白、祛斑、祛除色素沉着的化妆品或药物中的应用，所述丹皮酚衍生物选自上述丹皮酚糖苷类衍生物、丹皮酚磺酸盐类衍生物、丹皮酚酯类衍生物、丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物中的至少一种。
本发明的有益效果体现在：
本发明通过实验发现，丹皮酚糖苷类衍生物(如：丹皮酚葡萄糖苷，丹皮酚半乳糖苷)、丹皮酚磺酸盐类衍生物(如：丹皮酚磺酸，丹皮酚磺酸钠，丹皮酚磺酸钙，丹皮酚磺酸钾)、丹皮酚酯类衍生物(如：乙酸丹皮酚酯，丙酸丹皮酚酯，乙酰阿魏酸丹皮酚酯)、丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物(如：丹皮酚缩乙醇胺，丹皮酚2,4-二硝基苯腙)具有显著的抗炎和抑制酪氨酸酶活性(抑制率最大值约为39～75％)的药理作用，在皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病(祛除色素沉着)方面具有广阔应用和市场前景。
进一步的，本发明发现了丹皮酚糖苷类衍生物(如丹皮酚葡萄糖苷)、丹皮酚磺酸盐类衍生物(如丹皮酚磺酸钾)、丹皮酚酯类衍生物(如乙酸丹皮酚酯)具有更显著的抗炎作用。
进一步的，本发明发现了丹皮酚糖苷类衍生物(如丹皮酚葡萄糖苷)、丹皮酚磺酸盐类衍生物(如丹皮酚磺酸钾)具有更显著的抑制酪氨酸酶活性的能力(美白作用更强)。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。
一、丹皮酚衍生物药理作用基础实验研究
(i)丹皮酚衍生物对酪氨酸酶活性的影响研究
黑色素的形成是酪氨酸酶在机体内将l-酪氨酸羟化，产生邻位二羟基苯丙氨酸(l-多巴)，再将多巴氧化成多醌，进而生成一系列引起褐化的色素类物质，最终导致人的皮肤变黑或是形成黄褐斑、雀斑。通过不同丹皮酚衍生物对酪氨酸酶的影响程度的研究，来评价各丹皮酚衍生物有无美白作用。
1、药物制备
丹皮酚衍生物：丹皮酚葡萄糖苷，丹皮酚磺酸钠，丹皮酚磺酸钾，乙酸丹皮酚酯，丙酸丹皮酚酯，丹皮酚缩乙醇胺等，均为实验室自制。
2、试剂
乙醇(分析纯)，l-多巴(sigma)
3、试验方法
以常用的美白添加剂熊果苷、维生素c(vc)为对照，应用紫外分光光度法建立酪氨酸酶催化多巴转换为黑色素的体外模型，测定不同浓度的丹皮酚衍生物对酪氨酸酶活性的影响。
3.1样品制备
3.1.1丹皮酚葡萄糖苷溶液的制备：取丹皮酚葡萄糖苷，用50％乙醇配制(水稀释定容)1％溶液(w/v，g/ml)，再用50％乙醇稀释2倍、5倍、8倍、10倍、20倍，得到不同浓度的样品溶液，备用。
3.1.2丹皮酚磺酸钠溶液的制备：取丹皮酚磺酸钠，用50％乙醇配制1％溶液(w/v)，再用50％乙醇稀释2倍、5倍、8倍、10倍、20倍，得到不同浓度的样品溶液，备用。
3.1.3丹皮酚磺酸钾溶液的制备：取丹皮酚磺酸钾，用50％乙醇配制1％溶液(w/v)，再用50％乙醇稀释2倍、5倍、8倍、10倍、20倍，得到不同浓度的样品溶液，备用。
3.1.4乙酸丹皮酚酯溶液的制备：取乙酸丹皮酚酯，用50％乙醇配制1％溶液(w/v)，再用50％乙醇稀释2倍、5倍、8倍、10倍、20倍，得到不同浓度的样品溶液，备用。
3.1.5丙酸丹皮酚酯溶液的制备：取丙酸丹皮酚酯，用50％乙醇配制1％溶液(w/v)，再用50％乙醇稀释2倍、5倍、8倍、10倍、20倍，得到不同浓度的样品溶液，备用。
3.1.6丹皮酚缩乙醇胺溶液的制备：取丹皮酚缩乙醇胺，用50％乙醇配制1％溶液(w/v)，再用50％乙醇稀释2倍、5倍、8倍、10倍、20倍，得到不同浓度的样品溶液，备用。
3.1.7酪氨酸酶的提取
去皮碎土豆100g(冷冻过夜)，按2:1(w/v)加入ph＝7.2的缓冲液50ml，捣碎制成匀浆，4000r/min下离心10min，取上清液(即酶提取液)置于冰箱中。取25ml酶提取液，用ph＝7.2的缓冲溶液稀释至100ml，即酪氨酸酶液，摇匀冷藏备用。
3.1.8熊果苷、vc样品的制备
精密称取熊果苷样品适量，用50％乙醇配制成20％(w/v)的溶液，再用50％乙醇稀释2倍、5倍、10倍、20倍，得到不同浓度的样品溶液，备用。
精密称取vc样品适量，用50％乙醇配制成1％的(w/v)溶液，再用50％乙醇稀释10倍、50倍、100倍、1000倍，得到不同浓度的样品溶液，备用。
3.2溶液配制
3.2.1缓冲液(0.10mol/l、ph＝7.2)制备
精密量取25ml0.20mol/l磷酸氢二钠和10ml0.1mol/l盐酸溶液至100ml容量瓶中，水定容至刻度，备用。
3.2.20.005mol/l多巴溶液制备
精密称取l-多巴0.1g，用蒸馏水溶解并定容至100ml，将配好的溶液置于黑暗处避光存放，冷藏备用。
3.3样品对酪氨酸酶作用的测定方法
按表1配制不同浓度丹皮酚衍生物的待测溶液，置30℃水浴3min后，加入2ml酪氨酸酶液，于30℃水浴恒温25min后，在波长480nm处测定不同浓度的a值。
表1.测试液的配比表(体积数ml)
注：表1中pbs就是3.2.1中的缓冲液，l-多巴指3.2.2中0.005mol/l多巴溶液
3.3判定方法
对酪氨酸酶活性的影响：以空白管调0，分别测定表1中a1、a2。若a1>a2，则样品对酪氨酸酶活性有抑制作用，抑制率(i％)＝(a1-a2)/a1×100％；若a1<a2，则样品对酪氨酸酶活性有激活作用，激活率(e％)＝(a2-a1)/a1×100％；a1：未加样品(丹皮酚衍生物)时所测得的吸光度值；a2：加入样品后所测得的吸光度值。
计算各样品抑制率(或激活率)，以浓度对数-抑制率(激活率)做标准曲线，得回归方程，并求得50％的抑制浓度(ic50)。
4、结果
4.1按3.3项下的公式计算抑制率，结果见表2。
表2.各种样品对酪氨酸酶的抑制作用
以抑制率做纵坐标，浓度对数为横坐标作图，得回归方程及线性范围，并计算各样品的50％抑制浓度(ic50)结果见表3，结果表明：在低浓度下，丹皮酚衍生物已能很好地抑制酪氨酸酶活性，各丹皮酚衍生物抑制酪氨酸酶活性的能力优于熊果苷，与维生素c相当。
表3.各样品的回归方程及线性范围
(ii)丹皮酚衍生物抗炎作用的实验研究
采用二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀模型研究丹皮酚衍生物的抗炎作用。
1、药物制备
丹皮酚衍生物：1％丹皮酚磺酸钾软膏、1％丹皮酚葡萄糖苷软膏、1％乙酸丹皮酚酯软膏等为实验室自制。各软膏基质均由硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、三乙醇胺、甘油、水组成。与丹皮酚软膏基质相似。
丹皮酚软膏(含丹皮酚4.5％)：长春普华制药股份有限公司
2、试剂
二甲苯(分析纯)，角叉菜胶(sigma)
3、实验动物
雄性昆明种小鼠，18～20g；雄性sd大鼠，190～210g。
4、试验方法
4.1.1二甲苯所致小鼠耳肿胀实验
选健康雄性昆明种小鼠50只，随机分成5组，每组10只。分别为空白对照组、丹皮酚磺酸钾组、丹皮酚葡萄糖苷组、乙酸丹皮酚酯组和阳性对照组。将小鼠左耳轻轻擦拭干净，并前后两面均匀涂以二甲苯0.1ml，右耳为对照，致炎15min后，给药。丹皮酚磺酸钾组、丹皮酚葡萄糖苷组、乙酸丹皮酚酯组和阳性对照组小鼠左耳分别涂1％丹皮酚磺酸钾软膏、1％丹皮酚葡萄糖苷软膏、1％乙酸丹皮酚酯软膏、丹皮酚软膏0.2g，空白对照组给于软膏基质0.2g。
给药后1h颈椎脱臼处死小鼠。用6mm打孔器于双耳对称部位取耳片，电子天平称重，左右耳片质量差值为炎症肿胀度。
按公式计算肿胀抑制率：抑肿率(％)＝(空白对照组平均肿胀度-用药组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度×100％
4.2.2角叉菜胶所致大鼠足肿胀实验
选用健康sd大鼠40只，随机分成5组，每组8只。分别为空白对照组、丹皮酚磺酸钾组、丹皮酚葡萄糖苷组、乙酸丹皮酚酯组和阳性对照组。在大鼠右后足跖部皮下注射1％角叉菜胶0.1ml致炎，并立即于踝关节以下均匀涂抹药物，丹皮酚磺酸钾组、丹皮酚葡萄糖苷组、乙酸丹皮酚酯组和阳性对照组分别给予1％丹皮酚磺酸钾软膏、1％丹皮酚葡萄糖苷软膏、1％乙酸丹皮酚酯软膏、丹皮酚软膏0.2g。分别于给药后1、2、3h测量sd大鼠右后足周长。
足肿胀率(％)＝(给药后右后足周长—给药前右后足周长)/给药前右后足周长×100％
5、结果
5.1对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
1％丹皮酚磺酸钾、1％丹皮酚葡萄糖苷、1％乙酸丹皮酚酯对二甲苯诱导的小鼠耳片肿胀有明显的抑制作用，且作用强于丹皮酚，见表4。
表4.各丹皮酚衍生物对小鼠二甲苯致耳肿胀的影响
5.2对角叉菜胶所致大鼠足肿胀的影响
与空白对照组比较，局部外用不同丹皮酚衍生物，能明显减轻角叉菜胶所致大鼠足肿胀，且消炎作用明显优于丹皮酚。
表5.丹皮酚衍生物对角叉菜胶所致sd大鼠足肿胀的影响
根据实验结果：
丹皮酚葡萄糖苷和丹皮酚磺酸钾的美白作用强于其他衍生物(丹皮酚半乳糖苷、丹皮酚磺酸、丹皮酚磺酸钙、乙酸丹皮酚酯、丙酸丹皮酚酯、乙酰阿魏酸丹皮酚酯、丹皮酚缩乙醇胺、丹皮酚2,4-二硝基苯腙)，其中丹皮酚葡萄糖苷美白作用最强。
丹皮酚磺酸钾、乙酸丹皮酚酯和丹皮酚葡萄糖苷的消炎作用强于其他衍生物(丹皮酚半乳糖苷、丹皮酚磺酸、丹皮酚磺酸钠、丹皮酚磺酸钙、丙酸丹皮酚酯、乙酰阿魏酸丹皮酚酯、丹皮酚缩乙醇胺、丹皮酚2,4-二硝基苯腙)，其中丹皮酚磺酸钾的消炎作用最强。
二、化妆品或外用药物举例
丹皮酚水溶性、酯溶性差，通过将丹皮酚糖苷化(如丹皮酚葡萄糖苷、丹皮酚半乳糖苷)，成盐(如丹皮酚磺酸、丹皮酚磺酸钠、丹皮酚磺酸钾、丹皮酚磺酸钙)，合成席夫碱(如丹皮酚缩乙醇胺、丹皮酚2,4-二硝基苯腙)增加其水溶性，制成溶液剂；或通过成酯(如乙酸丹皮酚酯、丙酸丹皮酚酯、乙酰阿魏酸丹皮酚酯)增加其油溶性，制成外用软膏剂，更好地发挥消炎、祛痘、美白、祛斑及祛除色素沉着的作用。
实例1
皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病的乳膏剂
活性成分：丹皮酚葡萄糖苷，有效质量浓度为2.0％。
处方：丹皮酚葡萄糖苷20g，硬脂酸120g，单硬脂酸甘油酯35g，液状石蜡60g，凡士林10g，羊毛脂50g，三乙醇胺4g，尼泊金乙酯1g，蒸馏水加至1000g。
实例2
皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病的软膏剂
活性成分：丹皮酚磺酸钠，有效质量浓度为5.0％。
处方：羊毛脂20g，凡士林880g，丹皮酚磺酸钠45g，液体石蜡10ml。
实例3
皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病的酊剂
活性成分：乙酸丹皮酚酯，有效质量浓度为3.0％。
处方：乙酸丹皮酚酯30g，60％乙醇加至1000ml。
实例4
皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病的凝胶剂
活性成分：丹皮酚缩乙醇胺，有效质量浓度为5.0％。
处方：丹皮酚缩乙醇胺5.0g，羧甲基纤维素钠3g，丙二醇20g，乙醇26g，加水至100g。
实例5
皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病的膏剂
活性成分：丹皮酚半乳糖苷，还含有另一消炎美白成分，即氢醌，丹皮酚半乳糖苷有效质量浓度为5.0％。
处方：甘油硬脂酸酯3.00％，鲸蜡硬脂醇3.00％，矿油10.00％，棕榈酸酯异丙酯2.00％，丹皮酚半乳糖苷5.0％，二苯酮4.00％，甲氧基肉桂酸乙基己酯7.00％，氢醌2.00％，焦亚硫酸钠0.05％，维生素c0.05％，精制水加至100.00％。
实例6
皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病的液剂
活性成分：丹皮酚磺酸钾，有效质量浓度为5.0％。
处方：黄原胶0.40％，二苯酮2.00％，丹皮酚2.0％，丁二醇10.00％，丹皮酚磺酸钾5.0％，羟苯异丙酯0.50％，精制水加至100.00％。
实例7
皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病的膏剂
活性成分：乙酰阿魏酸丹皮酚酯，有效质量浓度为3.0％，还含有遮光剂二氧化钛。
处方：乙酰阿魏酸丹皮酚酯3.00％，水飞蓟油3.00％，辛酸甘油三酯5.00％，椰油酸甘油酯类2.00％，山萮醇1.00％，甘油硬脂酸酯2.00％，鲸蜡硬脂醇3.00％，硬脂酸异丙酯4.00％，二氧化钛0.50％，1,6-己二醇6.00％，丙二醇5.00％，甘油5.00％，羟苯甲酯0.20％，抗坏血酸0.20％，精制水加至100％。
实例8
皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病面膜
活性成分：丹皮酚磺酸钙，有效质量浓度为3.0％。
处方：丹皮酚磺酸钙3.0％，高岭土40％，甘油3.0％，膨润土10％，peg-4000.2％，二氧化钛0.5％，硬脂酸1.0％，棕榈酸0.5％，月桂醇聚醚硫代琥珀酸二钠0.5％，鲸蜡硬脂醇0.5％，黄原胶0.5％，抗坏血酸磷酸酯钠0.1％，edta二钠0.1％，乳酸0.3％，羟苯甲酯0.2％，精制水加至100％。
总之，化学合成的丹皮酚衍生物，包括丹皮酚糖苷类衍生物(如：丹皮酚葡萄糖苷，丹皮酚半乳糖苷)；丹皮酚磺酸盐类衍生物(如：丹皮酚磺酸，丹皮酚磺酸钠，丹皮酚磺酸钙，丹皮酚磺酸钾)；丹皮酚酯类衍生物(如：乙酸丹皮酚酯，丙酸丹皮酚酯，乙酰阿魏酸丹皮酚酯)；丹皮酚氨基酸酯schiff碱类衍生物衍生物(如：丹皮酚缩乙醇胺，丹皮酚2,4-二硝基苯腙)用于皮肤消炎、祛痘、美白、祛斑及治疗色素沉着性疾病方面具有很大市场前景。