本发明涉及皮肤创伤治疗领域，具体地涉及一种复方中药及其制备方法和应用。
背景技术：
：皮肤是人体面积最大且容易受到创伤的器官，主要由表皮、真皮、皮下组织组成，由于皮肤的易损性，临床上皮肤创伤的病例比较常见。在皮肤创伤治疗中常用消炎药、止痛药和抗生素等控制感染和促进皮肤愈合。但抗生素的大量使用容易产生耐药性，导致创伤的皮肤创口恢复变慢，伤口持久未见愈合，甚至创口出现红肿、渗出与感染等情况。因此，如何在创伤后不用或者少用激素消炎药和抗生素的前提下，将患者感染死亡率控制到最低，提高愈合速度使患者皮肤创伤处更好地愈合，这是众多国内外学者关注的研究内容。对于皮肤创伤的理解，中兽医对皮肤创面治疗的原则：①行气活血、推陈致新；②燥湿收脓、去脓生肌；③酸涩收口、生肌收口，主要原则是通过袪腐达到生肌。外用中药在创伤修复的全过程中都发挥着促进修复的疗效，主要作用：①改善局部创面组织的血液循环，增强局部免疫功能；②抗炎、抗菌、消肿、止痛；③促进细胞增殖，加快肉芽组织生成；④促进不同时期细胞因子、趋化因子的表达。目前，针对皮肤的烧伤和烫伤已有较多的中药药物，但是针对机械性伤口目前还没有很好的中药药物。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种复方中药。本发明所述复方中药中四味中药之间发挥相互协同增效作用，加快创面凝血、消炎抗菌、减少创面渗出，促进创面结痂，从而控制感染，提高创面的愈合速度。本发明的另一目的在于提供所述复方中药的制备方法。本发明的再一目的在于提供所述复方中药在治疗皮肤创伤中的应用。本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的：一种复方中药，所述复方中药由黄芩、黄连、白芨和冰片组成，其质量比为2～20︰1～15︰1～10︰0.1～5。黄连有清热燥湿，泻火解毒之功效，而且还具有广谱的抗菌作用。黄芩有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩也具有较好的广谱抗菌作用，且不容易产生抗药性。白芨具有活血止血作用，且止血效果快，安全性高。同时还具有促进角质形成细胞游走作用，对皮肤创伤的早期愈合具有重要影响。冰片可用于闭证神昏、用于目赤肿痛，喉痹口疮、用于疮疡肿痛，溃后不敛等，同时还具有抗炎、抗菌的作用。优选地，所述复方中药中黄芩、黄连、白芨和冰片的质量比为4～10︰2～8︰1～7︰0.1～1。优选地，所述复方中药中黄芩、黄连、白芨和冰片的质量比为6︰4︰3︰0.13。上述复方中药由如下方法制备得到：s1.先将黄芩和黄连分别打磨成粉，再用质量分数为95％以上的乙醇分别浸泡黄芩和黄连，浓缩提取液后得到黄芩乙醇提取物和黄连乙醇提取物；白芨加水煮沸后浓缩得到白芨水提取物；s2.先将配方量的黄芩乙醇提取物和黄连乙醇提取物分别加水稀释并过筛，过筛溶液和白芨水提取物、冰片混合加热，浓缩后即得复方中药提取物。优选地，浸泡黄芩和黄连的乙醇其质量分数为95％；乙醇提取液的浓缩温度为65～70℃。优选地，黄芩乙醇提取物和黄连乙醇提取物加水稀释后过120目筛。优选地，黄芩和黄连在乙醇中浸泡的时间为24h。优选地，白芨加水煮沸后持续沸腾5～10min；煮沸前水的用量为白芨重量的10倍；最后得到的提取液与白芨重量相同。上述复方中药在制备治疗皮肤创伤药物中的应用也在本发明的保护范围内。优选地，所述皮肤创伤为机械性伤口。优选地，所述皮肤创伤为皮肤切伤。优选地，所述药物为外用药物；更优选地，为喷剂。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明所述复方中药采用了四味中药，四味中药之间发挥相互协同增效作用，加快创面凝血、消炎抗菌、减少创面渗出，促进创面结痂，从而控制感染，提高创面的愈合速度。本发明所述复方中药可明显加快创伤的早期愈合和后期愈合，对伤口的愈合情况明显优于京万红软膏，且愈合速度也明显优于京万红软膏；所述复方中药易吸收，外用后保证创面干燥，减少了创面分泌物，降低感染情况的发生；在创伤早期，能够快速调控细胞生长因子的含量，促进创伤的愈合。附图说明图1为各组实验兔皮肤全层切伤模型治疗后创面愈合的情况。图2为各组实验兔皮肤全层切伤模型第28天皮肤组织愈合情况(he染色，400倍)。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1一种复方中药，所采用的原料有：黄芩150g、黄连100g、白芨75g、冰片3.25g。复方中药的制备过程如下：①黄芩150g打粉，加入95％乙醇1500ml浸泡24小时；②黄连100g打粉，加入95％乙醇1000ml浸泡24小时；③冰片3.25g，研磨成粉状备用；④将在95％乙醇中浸泡了24小时的黄芩和黄连提取液，各放入旋转蒸发仪中加热(65-70摄氏度)浓缩30-50min成干浸膏；⑤黄芩干浸膏加入150ml纯水稀释，过120目筛备用；⑥黄连干浸膏加入100ml纯水稀释，过120目筛备用；⑦白芨75g加入750ml纯水煮开沸腾5-10min浓缩至75ml后，冷却备用；⑧将⑤、⑥、⑦里的备用液加热混匀后加入③，搅拌煮开即得复方中药。⑨将成品倒入喷雾瓶里，放置4-8摄氏度冰箱保存备用。实施例2一种复方中药提取物，所采用的原料有：黄芩250g、黄连150g、白芨100g、冰片20g。复方中药提取物的制备过程同实施例1。实施例3一种复方中药提取物，所采用的原料有：黄芩400g、黄连350g、白芨200g、冰片50g。复方中药提取物的制备过程同实施例1。实施例4一种复方中药提取物，所采用的原料有：黄芩100g、黄连130g、白芨40g、冰片8g。复方中药提取物的制备过程同实施例1。实施例5一种复方中药提取物，所采用的原料有：黄芩200g、黄连125g、白芨80g、冰片4g。复方中药提取物的制备过程同实施例1。实施例6以实施例1制备的复方中药为例，测试其对于皮肤创伤的治疗作用。1、实验分组选择健康成年兔24只，适应性饲养1周后，随机分成4组，每组6只(雌雄各半)，第1组复方中药组，第2组为京万红组，第3组为模型对照组，第4组为空白组。京万红软膏主要由白蔹、白芷、半边莲、冰片、苍术、赤芍、川芎、穿山甲、大黄、当归、地黄、地榆、红花、胡黄连、槐米、黄柏、黄连、黄芩、金银花、苦参、没药、木鳖子、木瓜、乳香、桃仁、土鳖虫、乌梅、五倍子、血竭、血余炭、罂粟壳、栀子、紫草、棕榈、麻油和蜂蜡等30多味中药制成的复方油膏制剂，具有清热活血、散瘀消肿、化腐生肌和收敛止痛等功效。将其运用与皮肤创面时，麻油和蜂蜡等赋形剂在皮肤创面不易吸收，因此皮肤创面为较为湿润的环境，容易导致皮肤创面的感染和分泌物增加，进而导致创面皮肤延期愈合。表1实验分组与处理情况组别数量(只)药物第1组6复方中药第2组6京万红软膏第3组6生理盐水第4组6无2、皮肤全层切伤模型的制备先将各组实验兔标记后称重，用剃刀剃去背部兔毛，在兔背部无毛皮肤上画一个直径5cm的圆圈，将兔放入自制的密闭小纸箱中，留一个小洞口通麻醉管，将呼吸麻醉管放入洞口，将呼吸麻醉机的氧气浓度控制在1-1.5之间，麻醉药浓度控制在3-4之间，维持2-5min兔便可进入深度麻状态。将兔俯卧，用组织剪制备皮肤全层切伤模型，深到筋膜层，创伤面积(见图1)。压迫止血后，将兔套上6号伊丽莎白圈放回笼子。3、治疗过程第1组做皮肤全层创伤模型后每天生理盐水清洗然后喷自制复方中药，第2组做皮肤全层创伤模型后每天生理盐水清洗后涂抹京万红软膏，第3组做皮肤全层创伤模型后每天用生理盐水清洗后涂抹生理盐水，第4组不做皮肤创伤造模，为正常试验兔，正常饲养。试验期内兔自由饮水、采食。4、结果(1)皮肤愈合情况从建模第1天～第28天，观察各组实验兔伤口的愈合情况，得到的结果见图1。观察图1中创伤的愈合情况，从皮肤切伤第3天开始，第1组的创面开始形成痂皮，第2组和第3组的皮肤无明显差异。从第7天至第14天，第2组创面边缘开始缩小，第1组创面可见痂皮增厚，痂皮边缘干硬，边缘与皮肤游离，创面面积与第2组无明显差异，比第3组显著减少。3组创面皮肤愈合速度为：第1组>第2组>第3组。从第14天至28天，第1组创面皮肤愈合速度加快，3组创面皮肤愈合速度为：第1组>第2组>第3组。观察图1中创伤表面渗出情况，第2组创面渗出明显，在创伤中后期兔皮肤创面上可见大量白色分泌物，第3组在第21天有水样渗出，第1组实验兔背部创面从第3天开始形成痂皮，随后痂皮脱落愈合，创面干燥无渗出。3组创面表面渗出程度为：第1组>第3组>第2组。在治疗后感染死亡统计中，第3组实验兔在造模后第5天、第8天和第9天各死一只，剖检结果证实死亡原因为伤口感染，感染死亡为50％。第2组实验兔在第8天死亡一只，剖检结果为伤口感染，感染死亡率为16.67％。第1组实验兔无死亡现象，感染死亡率为0％。3组实验创伤感染死亡情况为：第3组>第2组>第1组。从整体观察结果分析，第1组皮肤全层切伤在早期和后期的愈合速度都明显优于第2组和第3组，且第1组的创面无渗出物，为干燥环境。(2)血液学指标检测及结果在实验兔创伤后的第3、7、14、21、28天，用7号采血针通过兔耳缘静脉采1ml全血于edta抗凝管内，用于血液学指标检测。检测结果见表2。表24组治疗对实验兔皮肤全层切伤模型血常规的影响注：图标上字母不同表示差异显著(p<0.05)，字母相同或均无肩标表示差异不显著(p>0.05)。白细胞(wbc)亦名为免疫细胞，它通过吞噬作用来抵抗病原微生物入侵，是机体防御系统的一个重要组成部分。红细胞(rbc)具有清除免疫循环复合物，识别和呈递抗原作用，并参与机体的免疫调节。嗜中性粒细胞皮肤上在抗感染中起重要的防御作用，可引起感染部位的炎症反应。由表2可以看出，在实验兔皮肤切伤模型治疗的过程中，第3天时，第3组的白细胞(wbc)显著高于治疗组与空白组(p<0.05)，第2组比第1组明显减少，与第4组差异不显著。第3组单核细胞显著高于第1组、2组和4组，其他实验各组之间差异不显著。第1组、2组和3组之间的红细胞计数和血红蛋白差异不显著，均低于第4组。第7天，第2组的白细胞明显增加，第1组与第4组差异不显著；第14天，第2组嗜中性粒细胞显著高于其他各组，第1组与第4组差异不大。第1组的红细胞计数、血红蛋白与第4组无明显差异，比第2组和第4组显著增加。第1组的血小板数比第2组、第3组和第4组显著增加；第28天，第1组白细胞计数与第4组差异不显著，第3组白细胞组明显增加。在实验兔皮肤切伤模型治疗的过程中，炎症初期，第3组的白细胞(wbc)显著高于第1组、2组和4组(p<0.05)，说明第1组与第2组治疗皮肤创伤起到消炎作用。在炎症后期，第2组的白细胞明显增加，第1组与第4组差异不显著，说明复方中药在皮肤切创的治疗过程中消炎效果比京万红软膏消炎效果更为稳定。(3)血液生化指标检测及结果在兔创伤后的第3、7、14、21、28天，用7号采血针通过兔耳缘静脉采3ml全血于普通采血管内，室温静置30min，待血样完全凝固，3000转/min,离心5min分离血清，并放于-20℃冰箱保存，部分血清用于测定血液生化指标。检测结果见表3。表34组治疗实验兔皮肤全层切伤模型血液生化指标的影响注：图标上字母不同表示差异显著(p<0.05)，字母相同或均无肩标表示差异不显著(p>0.05)。alt和ast主要来自肝脏、心脏组织中，正常情况二者在细胞膜的平屏障作用下不易逸出，在血清中的含量是极低的，因此alt和ast被用作检测肝功能是否正常的敏感指标，alb对维持血容量、渗透压和循环灌注有重要作用，glo具有免疫作用，机体受到外来抗原的入侵时会根据入侵抗原的种类而产生不同类型和数量的免疫球蛋白，tp由alb和glo组成，是蛋白质代谢水平的重要标志之一。如表3所示，血液生化指标检测中，第3天时，第1组、第3组和第4组的的谷草转氨酶(ast)显著高于第2组。第1的白蛋白(alb)与第4组差异不显著。第3组的总蛋白(tp)明显高于第1组、2组和4组，这三组之间差异不显著。第2组的乳酸脱氢酶(ldh)显著低于第1组、3组和4组，这三组之间差异不显著；第7天时，第1组的ast、alb显著低于第2组、3组和4组。第1组的tp和第2组差异不显著，与第4组和模型组差异显著；第14天时，第1组、2组和3组的ast、alb显著低于第4组。第2的giu明显高于第1组、3组和4组；第21天时，第1组、2组和3组的tp显著高于第4组，而三组之间差异不明显。第28天时，第1组、2组和4组的alb、tp显著高于第3组。试验结果表明，血液生化指标检测中，在炎症初期，第1组、3组和4组的谷草转氨酶(ast)显著高于第2组。第1组的白蛋白(alb)与第4组差异不显著。第3组的总蛋白(tp)明显高于第1组、2组和4组，这三组之间差异不显著。说明复方中药在兔皮肤切创治疗中，肝、心功能基本处于正常值，结果较为稳定。在炎症后期，第1组、2组和4组的alb、tp显著高于第3组。第1组和2组能够增加皮肤切创实验兔外周血血清中tp、alb含量。(4)细胞因子指标检测及结果将分离得到的血清部分用于检测细胞因子(tnf-a、tgf-bi、ngf、pdgf、vegf、fgf-2)，采用夹心法酶联免疫吸附试验(elisa)测定，试剂盒购于上海酶联生物有限公司。检测结果见表4。表44组治疗实验兔皮肤全层切伤模型血液细胞因子指标的影响注：图标上字母不同表示差异显著(p<0.05)，字母相同或均无肩标表示差异不显著(p>0.05)。成纤维细胞生长因子(fgf-2)可促进内皮细胞的游走和平滑肌细胞的增殖，能够促进新血管形成，修复损害的内皮细胞，可以显著地加速慢性难愈合创面愈合，其可能的机制涉及外源性bfgf能够补充内源性bfgf的不足或调控内源性bfgf活性。神经生长因子(ngf)具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子，它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。人类皮肤毛细血管内皮细胞产生的神经生长因子与创伤修复过程有关。如表4所示，在实验兔皮肤切伤模型治疗的过程中，第14天时，第1组的fgf-2与第4组无明显差异，显著低于第2组和第3组；第28天时，第3组的ngf、tnf-a显著高于第1组、2组和3组。在实验兔皮肤切伤模型治疗的过程中，第14天时，第1组的fgf-2与第4组无明显差异，显著低于第2组和3组。说明第1组的成纤维生长因子在皮肤创面愈合调控程度与正常组无异，第2组和3组仍然还在调控中。第28天时，第3组的ngf、tnf-a显著高于第1组、2组和4组。以上结果说明创面愈合后期，第1组与2组的神经营养因子与抗肿瘤生长因子对皮肤切伤实验兔的调控基本稳定，第3组还处于调控状态。(5)组织学检测及结果在实验兔皮肤全层切伤模型创伤治疗后的第28天，每组随机处死一只实验兔，在创面组织创伤中心点取1cm2皮肤组织置于10％中性福尔马林固定，石蜡包埋，he染色，观察组织愈合情况。检测结果见图2所示。由图2可知，在第28天的组织切片观察中，第3组皮肤创面组织可见血管生成，皮肤组织愈合情况处于肉芽组织生成和血管形成期；第2组皮肤创面组织可见创面修复细胞处于在分化状态，一部分分化为紧密的上皮组织，一部分分化为疏松的皮下组织；第1组皮肤创面组织创面修复细胞已经分化完成，皮肤创面可见明显的组织重建状态。以上实验结果说明，本发明所述复方中药对于全切皮肤伤具有加速愈合的作用，可明显加快伤口的早起愈合和后期愈合，对伤口的愈合情况明显优于京万红软膏；在创伤早期，能够快速调控细胞生长因子的含量，促进创伤的愈合。另外，实验研究显示，黄芩、黄连、白芨和冰片四种组分的配比对于中药复方的皮肤创伤修复效果具有显著的影响，当黄芩、黄连、白芨和冰片的质量比为2～20︰1～15︰1～10︰0.1～5时，均可实现较好的疗效；而当质量比为4～10︰2～8︰1～7︰0.1～1时效果更佳；四者最佳的质量比为6︰4︰3︰0.13。最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。当前第1页12