本申请涉及猪源细胞因子的应用领域，特别是涉及重组的猪源IL-1β在制备药物中的用途。
背景技术：
：促炎细胞因子产生于各种人类疾病中，如癌症，自身免疫性疾病，肥胖症和器官移植。这些细胞因子在人类疾病的炎症中起重要作用。在异种移植中也产生各种促炎细胞因子，并与供体或受体细胞交叉反应，本申请的发明人预测它们将在免疫和凝血反应中发挥重要作用。许多促炎细胞因子增加组织因子(缩写TF)的表达，促进凝血反应。此前，本申请的发明人报道过人IL-6，IL-17，IL-1β和TNF-α以不同方式激活猪的主动脉内皮细胞(缩写PAECs)，并调节促炎相关基因和TF的表达，而人IFN-γ不能。本申请发明人的研究数据表明，人的IL-6，IL-17，IL-1β和TNF-α对猪的器官可能会促进炎症和凝血。除了人类细胞因子对猪内皮细胞的影响之外，猪细胞因子对这些细胞的影响也不容忽视。本申请发明人预测促炎性猪细胞因子，如IL-6，IFN-γ，IL-1β和TNF-α可能在异种移植中发挥重要的致病作用。这些细胞因子的促炎作用已经在小鼠或人类系统的几种病理生理学条件中得到证实。然而，猪细胞因子在异种移植中的调节作用仍未知或不确定。在异种移植后是否可以诱导猪细胞因子然后激活人类细胞或器官是一个有待研究的问题。技术实现要素：本申请的目的是提供重组的猪源IL-1β在制备药物中的用途。为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：本申请的一方面公开了重组的猪源IL-1β在制备激活人细胞中的信号通路的药物中的用途。本申请的另一方面公开了重组的猪源IL-1β在制备上调人细胞中的粘附因子、炎性细胞因子、趋化因子或组织因子表达的药物中的用途。本申请的再一方面公开了一种调节人脐静脉内皮细胞中信号通路或下游基因表达的药物，该药物的活性成份中含有重组的猪源IL-1β。需要说明的是，猪的细胞因子在猪到灵长类动物异种移植中能否被诱导以及能否激活人类细胞仍然未知。为研究该问题，本申请的发明人，首先，采用人血清刺激猪的主动脉内皮细胞(缩写PAECs)和猪外周血单核细胞(缩写PBMCs)，研究体外模型中异种移植中猪的IL-6，IFN-γ，IL-1β和TNF-α的调节作用并检测下游细胞因子、趋化因子的变化。在两种细胞中，IL-6、IFN-γ和IL-1β等促炎性细胞因子和IL-8、MCP-1和CXCL2等趋化因子的表达均上调。在PAECs中，TNF-α的表达上调了十倍，但在PBMCs中表达不变。然后，本申请选择人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为靶细胞，采用western-blotting法和实时定量PCR法检测了猪IL-6、IFN-γ、IL-1β和TNF-α在异种移植中的作用，研究了信号通路和下游基因，包括粘附因子、炎症因子和凝血因子以及趋化因子。结果显示，在HUVECs中，猪IL-1β和TNF-α可显著激活NF-κB和P38，猪IL-6可激活STAT3。猪IL-1β和TNF-α可上调粘附因子E-selectin、VCAM-1和ICAM-1，炎性细胞因子IL-6，IL-1β和TNF-α，趋化因子MCP-1和IL-8以及促凝血基因的表达。其中，促凝血基因即组织因子。猪IL-6可升高ICAM-1，IL-6，MCP-1和组织因子的表达，但使IL-8表达略有下降。但是，在HUVECs中，猪IFN-γ不能激活STAT1或调节上述任何基因。这些研究发现提示，猪IL-6，IL-1β和TNF-α可激活HUVEC并调节下游基因的表达，能促进异种移植中炎症和凝血反应。基于以上研究和认识，本申请提出了重组的猪源IL-1β在制备药物中的用途及药物。还需要说明的是，本申请的药物能够调节人脐静脉内皮细胞中信号通路或下游基因表达；可以理解，一方面，本申请的药物是基于本申请研究的重组猪源IL-1β的医药用途而提出的，重组猪源IL-1β可以单独作为活性成份调节信号通路或粘附因子、炎性细胞因子、趋化因子、趋化因子或组织因子的表达，也可以与其它活性成份配合一起使用，在此不做限定。另一方面，本申请的药物还可以包含其它药学上可接受辅剂或添加剂，亦或者将本申请的药物制成各种方便给药的剂型，在此不做具体限定。由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：本申请研究发现，重组猪源IL-1β可上调粘附因子E-selectin、VCAM-1和ICAM-1、炎性细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α、趋化因子MCP-1和IL-8，以及组织因子的表达，并可激活NF-κB或P38信号通路；因此，重组猪源IL-1β可以作为实现这些功能的药物的活性成分。附图说明图1是本申请实施例中人血清对PAECs和PBMC中的猪细胞因子/趋化因子表达的调节试验结果，其中A图是人血清对PAECs处理0、1h、2h和6h的后检测的IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、CXCL2和IL-4表达水平，B图是人血清对PBMCs处理0、1h、2h和6h的后检测的IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、CXCL2和IL-4表达水平；图中，“*”表示Student'st检验p<0.05，“**”表示Student'st检验p<0.01，“***”表示Student'st检验p<0.001；图2是本申请实施例中猪源IL-6、IL-1β和TNF-α对HUVECs中的信号通路的激活检测结果；图中，A图为猪源IL-6和人源IL-6分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，A图中左图是蛋白免疫印迹试验结果，右图是实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，图中0、15、30、60min是指处理时间；B图为猪源IFN-γ和人源IFN-γ分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，B图中左图是蛋白免疫印迹试验结果，右图是实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，图中0、15、30、60min是指处理时间；C图为猪源IL-1β和人源IL-1β分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，C图由上至下四个图中，第一个图是蛋白免疫印迹试验结果，其余三个图分别为对NF-κB、p-IκBα和p-P65的实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，图中0、15、30、60min是指处理时间；D图为猪源TNF-α和人源TNF-α分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，D图由上至下四个图中，第一个图是蛋白免疫印迹试验结果，其余三个图分别为对NF-κB、p-IκBα和p-P65的实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，图中0、15、30、60min是指处理时间；E图为添加Tocilizumab后猪源IL-6和人源IL-6分别对HUVECs中的信号通路的激活影响结果，E图中左图是蛋白免疫印迹试验结果，右图是实时荧光定量PCR检测的基因表达结果，蛋白免疫印迹图的上方0、15、30、60min是指处理时间，下方的数字是指Tocilizumab的用量；图3是本申请实施例中猪IL-6、IL-1β、IFN-γ和TNF-α对HUVECs中粘附因子E-selectin、VCAM-1和ICAM-1的表达调节结果图；图中，A图是猪源IL-6和人源IL-6对E-selectin、VCAM-1和ICAM-1的表达调节结果；B图是猪源IFN-γ和人源IFN-γ对E-selectin、VCAM-1和ICAM-1的表达调节结果；C图是猪源IL-1β和人源IL-1β对E-selectin、VCAM-1和ICAM-1的表达调节结果；D图是猪源TNF-α和人源TNF-α对E-selectin、VCAM-1和ICAM-1的表达调节结果；图4是本申请实施例中猪IL-6、IL-1β、IFN-γ和TNF-α对HUVECs中促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达调节结果图；图中，A图是猪源IL-6和人源IL-6对IL-6、IL-1β和TNF-α的表达调节结果；B图是猪源IFN-γ和人源IFN-γ对IL-6、IL-1β和TNF-α的表达调节结果；C图是猪源IL-1β和人源IL-1β对IL-6、IL-1β和TNF-α的表达调节结果；D图是猪源TNF-α和人源TNF-α对IL-6、IL-1β和TNF-α的表达调节结果；图5是本申请实施例中猪IL-6、IL-1β、IFN-γ和TNF-α对HUVECs中趋化因子IL-8和MCP-1，以及组织因子TF的表达调节结果图；图中，A图是猪源IL-6和人源IL-6对IL-8、MCP-1和组织因子的表达调节结果；B图是猪源IFN-γ和人源IFN-γ对IL-8、MCP-1和组织因子的表达调节结果；C图是猪源IL-1β和人源IL-1β对IL-8、MCP-1和组织因子的表达调节结果；D图是猪源TNF-α和人源TNF-α对IL-8、MCP-1和组织因子的表达调节结果。具体实施方式下面通过具体实施例和附图对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。实施例一、实验材料1.实验仪器37℃CO2细胞培养箱购自Heraus、超净工作台购自苏净集团安森公司、细胞/颗粒计数仪购自BECKMANCOULTER、CarlZEISS荧光显微镜、BIO-RAD蛋白电泳仪、流式细胞仪BD、常温和冷冻离心机Eppendorf、纯水装置Millipore、Haier超低温冰箱、摇床ThermoFisher、实时定量PCR仪ABI7900、自动冲片机DanafordML400、真空泵购自上海精宏。2.原代细胞和细胞系实验中主要用到猪主动脉内皮细胞(PAECs)、猪外周血单核细胞(PBMCs)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)。其中，PBMCs和PAECs均分离自野生型中华五指山猪。人血清来自20名健康志愿者(包括所有ABO类型)，所有人都提供知情同意书。本例的所有动物研究均遵照实验动物护理和使用指南进行；所有人和动物的研究均已获得深圳市第二人民医院生物医学研究伦理委员会批准。3.细胞因子和抗体本例采用的所有抗体均购自CellSignalingTechnology(Boston,MA,USA)；重组人、猪细胞因子均购自R&DSystems(Minneapolis,MN,USA)。Tocilizumab购自Genentech(SouthSanFrancisco,CA,USA)。人血清来自20名健康志愿者，其中包括所有ABO类型，所有人都提供知情同意书。4.其它试剂内皮细胞培养基(ECM)、胎牛血清(FBS,Cat.No.0025)、青霉素/链霉素溶液(P/S，Cat.No.0503)以及内皮细胞生长添加剂(ECGS,Cat.No.1052)均购自美国Sciencell公司。蛋白酶抑制剂Cocktail购自Roche公司。TEMED、丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺和过硫酸氨均购自Sigma-Aldrich公司。100×青霉素-链霉素浓缩液和非必需氨基酸购自Gibco公司。胎牛血清(FBS)购自Gibco公司。RPMI-1640、DMEM培养基购自Gibco公司。TRIzolRNA提取试剂购自Invitrogen公司。0.45μm硝酸纤维素膜(PVDF)购买自Millipore公司。胰酶Trypsin(EDTA)购自Gibco公司。Lipofectamine2000购自Invitrogen公司。磷酸缓冲液(phosphatebufferdsaline,PBS)购自Hyclone公司。ECL反应试剂盒购自Millipore公司。异丙醇、甲醇、三氯甲烷购自国药集团化学试剂有限公司。苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonylfluoride，PMSF)购自Sigma公司。DEPC购自上海生工公司。二、实验方法1.人血清对PAECs和猪PBMCs中的猪细胞因子/趋化因子表达的调节试验本例采用20％人血清体外孵育PAECs和猪PBMCs，分别孵育0、1、2、6小时，收取RNA，利用RT-PCR的方法检测下游基因；即分别检测了20％人血清体外处理前即孵育0h，以及孵育1小时、2小时、6小时后的IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、CXCL2和IL-4的表达。PAECs和猪PBMCs孵育0、1、2、6小时的总RNA提取以及RT-PCR在后面试验中详细说明。2.猪源IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γ对HUVECs中的信号通路的影响本例分别利用20ng/mL重组猪源IL-6(缩写rpIL-6)、40ng/mL重组猪源IFN-γ(rpIFN-γ)、20ng/mL重组猪源IL-1β(rpIL-1β)和20ng/mL重组猪源TNF-α(rpTNF-α)体外孵育HUVECs，分别孵育0、15、30、60min，收集细胞并提取蛋白，并通过蛋白免疫印迹(western-blotting)法检测这些细胞因子激活哪些信号通路。其中，蛋白免疫印迹在后面试验中详细说明。3.Tocilizumab对猪源IL-6的影响本例检测了在猪源IL-6激活HUVECs中的信号通路时，tocilizumab对信号通路激活的影响。利用tocilizumab预处理HUVECs30min，再利用20ng/mLrpIL-6体外孵育HUVECs，分别孵育0、15min，收集细胞并提取蛋白，并通过蛋白免疫印迹(western-blotting)法检测STAT3信号通路的激活。另外，本例分别设置了不同浓度的tocilizumab预处理，具体的，分别采用浓度为0ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的tocilizumab进行预处理，其中，0ng/mL即预处理时只添加了tocilizumab的溶剂其中不含tocilizumab，作为对照。Tocilizumab是一种抗人IL-6受体(hIL-6R)的人化单克隆抗体。在PAECs中，tocilizumab对IL-6激活STAT3没有阻断作用。4.猪源IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γ对HUVECs中的下游基因表达的影响本例分别利用20ng/mL重组猪源IL-6(缩写rpIL-6)、40ng/mL重组猪源IFN-γ(rpIFN-γ)、20ng/mL重组猪源IL-1β(rpIL-1β)和20ng/mL重组猪源TNF-α(rpTNF-α)体外孵育HUVECs，分别孵育0、2、6h，收集细胞并提取RNA，利用RT-PCR的方法检测下游基因；即分别检测了HUVECs孵育前即孵育0h，以及孵育2小时、6小时后的粘附因子、促炎因子、趋化因子和组织因子TF的表达；其中，粘附因子具体检测了E-selectin、VCAM-1和ICAM-1的表达，促炎因子具体检测了IL-6、IL-1β和TNF-α的表达，趋化因子具体检测了IL-8和MCP-1的表达。总RNA提取以及RT-PCR在后面试验中详细说明。5.蛋白免疫印迹试验本例的蛋白免疫印迹试验如下：采用冷的PBS(即磷酸盐缓冲液，phosphate-bufferedsaline的缩写)清洗PAECs和HUVECs细胞后收集细胞，用含10mMNaF、1mMNa3VO4、1mM苯甲基磺酰氟和蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液冰上裂解细胞30min，采用10％SDS-PAGE凝胶分离蛋白。分离蛋白后进行转膜，将蛋白转至PVDF膜(购自美国Millipore公司)，然后用含5％脱脂牛奶及0.1％Tween20的TBST溶液室温下封闭1h。其中，TBST中含有20mMTris-HCl和150mMNaCl、pH7.6。封闭后清洗PDVF膜，加入一抗在4℃孵育过夜，TBST清洗后加入二抗，在室温下孵育1h，用增强的化学发光(ECL)检测试剂(美国Millipore公司)显影。采用ImageJ软件计算磷酸化蛋白质表达水平，以Actin作为内参。6.荧光实时定量PCR试验本例采用的荧光实时定量PCR试验如下：采用美国Invitrogen的试剂提取PAECs或HUVECs的总RNA，用500ngRNA和TranscriptFirst-StrandcDNASynthesisSuperMix合成cDNA样品。采用中国大连Takara公司的SYBRPremixExTaq试剂盒，检测E-selectin、VCAM-1、ICAM-1、IL-6、IL-8、MCP-1及tissuefactor的水平。这些基因的表达以均以GAPDH作为内参，以2-ΔΔCt方法计算。在美国AppliedBiosystems公司的ViiA7Real-TimePCR仪上进行cDNA的扩增，核苷酸引物的序列如表1所示。PCR条件为：95℃，1min；然后进入40个循环：95℃10s，60℃34s；循环结束后95℃15s，60℃15s，95℃15s。表1核苷酸引物序列7.统计分析实验数据以平均值±SEM表示。采用Student'st检验计算各组之间显著性差异。p值<0.05表示存在显著差异。三、实验结果1.人血清对PAEC和猪PBMC中的猪细胞因子/趋化因子的表达(IL-6,IFN-γ,IL-1β,TNF-α,IL-8,MCP-1,CXCL2和IL-4)的调节采用20％人血清体外处理PAECs或PBMC，检测下游促炎细胞因子(IL-6，IFN-γ，IL-1β和TNF-α)，抗炎细胞因子(IL-4)和趋化因子(IL-8，MCP-1和CXCL2)mRNA的水平，结果如图1所示。图1的结果显示，人血清可诱导两种细胞中促炎细胞因子IL-6、IFN-γ和IL-1β，以及和趋化因子IL-8、MCP-1和CXCL2，的mRNA水平升高，图1的A图和B图。两种细胞中的IL-6，IL-8和CXCL2的mRNA水平都上调了几十倍。人血清可在1小时内诱导PBMC中IFN-γ的mRNA水平上调2.9倍，在6小时内上调了14.7倍。两种细胞中IL-1β的mRNA水平均上调，4小时内上调5.8至21.5倍。但是，人血清可在6小时内诱导PAECs中TNF-α的mRNA水平上调28.5倍，而对PBMC中TNF-α的mRNA水平无诱导作用，图1的A图和B图。IL-4的mRNA水平在6小时内在PBMC中上调2.3倍，但在PAEC中不上调，图1的A图和B图。这些数据表明，在异种移植后供体的血管内皮细胞和常驻白细胞中的促炎性细胞因子IL-6、IFN-γ、IL-1β和TNF-α，以及趋化因子IL-8、MCP-1和CXCL2，的水平可能会上调，并释放到受体的血液中。2.猪的IL-6,IL-1β和TNF-α对HUVECs中的信号通路的影响利用重组猪IL-6(rpIL-6)，rpIFN-γ，rpIL-1β和rpTNF-α刺激HUVEC，并通过western-blotting法检测这些细胞因子激活的信号通路，结果如图2和表2所示。表2HUVECs中的信号通路和下游基因检测结果统计rpIL-6rhIL-6rpIFN-γrhIFN-γrpIL-1βrhIL-1βrpTNF-αrhTNF-αE-selectinN.S.N.S.N.S.N.S.上调上调上调上调VCAM-1N.S.N.S.N.S.上调上调上调上调上调ICAM-1上调上调N.S.上调上调上调上调上调IL-6上调上调N.S.上调上调上调上调上调IL-1βN.S.N.S.N.S.N.S.上调上调上调上调TNF-αN.S.N.S.N.S.N.S.上调上调上调上调IL-8下调下调N.S.下调上调上调上调上调MCP-1上调上调N.S.上调上调上调上调上调Tissuefactor上调上调N.S.N.S.上调上调上调上调p-STAT3上调上调——————p-STAT1——N.S.上调————p-P65————上调上调上调上调p-IκBα————上调上调上调上调p-P38————上调上调上调上调表2中，rpIL-6表示重组猪源IL-6，rhIL-6表示重组人源IL-6，以此类推“rp”都是表示猪源，“rh”都是表示人源；“N.S”表示无显著差异；“—”表示未检测；“上调”表示基因表达上调；“下调”表示基因表达下降。表2和图2的结果发现，rpIL-6和rhIL-6可很大程度上激活磷酸化的STAT3(pSTAT3)。rhIFN-γ可激活HUVEC中的p-STAT1，而rpIFN-γ无激活p-STAT1的作用，图2的B图和表2。猪和人IL-1β均可激活核因子κB(包括NF-κB，p-IκBα和p-P65)和P38，图2的C图和表2。采用rpIL-1β或rhIL-1β刺激后，HUVEC中p-P65和p-P38的活化水平在15分钟时较高，而p-IκBα的活化水平在60分钟时较高，图2的C图和表2。rpTNF-α和rhTNF-α对HUVEC的刺激作用与rpIL-1β和rhIL-1β相似，图2的D图和表2。猪或人IL-6对HUVEC中下游信号通路的活化水平无显著差异，图2的A图和表2，与猪或人IL-1β和TNF-α的结果相似，图2的C图和D图及表2。3.Tocilizumab在HUVECs中对猪IL-6激活STAT3的影响Tocilizumab阻断IL-6对STAT3的激活作用，如图2的E图所示，结果显示，tocilizumab对rpIL-6激活STAT3的抑制作用比rhIL-6更为显著。Tocilizumab是一种抗人IL-6受体(hIL-6R)的人化单克隆抗体。在PAECs中，tocilizumab对IL-6激活STAT3没有阻断作用。4.猪IL-6、IL-1β、IFN-γ和TNF-α对HUVECs中粘附因子(E-selectin,VCAM-1和ICAM-1)的表达调节粘附因子(E-selectin,VCAM-1andICAM-1)在炎症反应中对白细胞的聚集发挥着重要的作用，本例对粘附因子在HUVECs中的作用进行研究，结果如图3和表2所示。结果显示，rpIL-6可上调ICAM-1mRNA水平，2小时内上调2.3倍，但不影响E-selectin及VCAM-1的表达，如图3的A图和表2所示。rpIFN-γ对以上三种粘附因子没有调节作用，如图3的B图和表2所示。rpIL-1β及rpTNF-α均可使该三种粘附因子上调数十至上百倍，如图3的C图和D图以及表2所示。这些数据与上述信号数值一致，如图2和图3以及表2所示。5.猪的IL-6、IL-1β、IFN-γ和TNF-α对HUVECs中促炎因子(IL-6,IL-1β和TNF-α)的表达调节本例对促炎因子，包括IL-6，IL-1β和TNF-α，在HUVECs中的作用进行研究，结果如图4和表2所示。结果显示，rpIL-6可轻微上调IL-6的mRNA水平，在6小时内仅上调1.8倍，但不影响IL-1β和TNF-α的表达，如图4的A图和表2所示。rhIFN-γ可上调IL-6mRNA的水平，但不影响IL-1β和TNF-α的表达，而rpIFN-γ对该三种促炎因子无明显作用，如图4的B图和表2所示。rpIL-1β及rpTNF-α刺激HUVECs可使该三种促炎因子的表达升高十至上百倍，如图4的C图和D图以及表2所示。6.猪IL-6、IL-1β、IFN-γ和TNF-α对HUVECs中趋化因子(IL-8和MCP-1)的表达调节趋化因子可引导免疫细胞迁移至炎症部位。IL-8和MCP-1是引导嗜酸性粒细胞和单核细胞的两种重要趋化因子。本例对HUVECs中的IL-8和MCP-1进行研究，结果如图5和表2所示。结果显示，rpIL-6可升高MCP-1mRNA的水平，在2小时内提升4.5倍，而轻微降低IL-8mRNA的水平，在2小时内降低0.7倍，如图5的A图和表2所示。rhIFN-γ可上调MCP-1mRNA的水平，在6小时内上调5.0倍，同时，下调IL-8mRNA的水平，6小时内下调0.6倍，而rpIFN-γ对IL-8及MCP-1的表达无调节作用，如图5的B图和表2所示。rpIL-1β和rpTNF-α刺激HUVECs2小时，可使IL-8mRNA的表达升高约100倍，而MCP-1mRNA表达上调15-40倍，如图5的C图和D图以及表2所示。7.猪的IL-6,IL-1β和TNF-α可诱导HUVECs中的组织因子组织因子(TF)是关键的促凝因子，是异种移植成功的主要限制因素。本例rpIL-6,rpIL-1β及rpTNF-α刺激HUVECs2小时，可使TF的水平上调约2-5倍，而rpIFN-γ及rhIFN-γ对TF水平没有上调作用，如图5的A图至D图以及表2所示。以上研究证实，猪IL-1β和TNF-α可上调粘附因子(包括E-selectin、VCAM-1和ICAM-1)、炎性细胞因子(包括IL-6、IL-1β和TNF-α)、趋化因子(MCP-1和IL-8)以及促凝血基因(即组织因子)的表达。猪IL-6可升高ICAM-1、IL-6、MCP-1和组织因子的表达，但使IL-8表达下降。在HUVECs中，猪IFN-γ不能激活STAT1或调节上述任何基因。可见，猪IL-6，IL-1β和TNF-α可激活HUVEC并调节下游基因的表达，能促进异种移植中炎症和凝血反应。以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本申请的保护范围。SEQUENCELISTING<110>深圳市第二人民医院<120>重组的猪源IL-1β在制备药物中的用途<130>18I26411<160>38<170>PatentInversion3.3<210>1<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>1agagtggagcctggtcttaca21<210>2<211>23<212>DNA<213>人工序列<400>2cctttgctgacaataagcactgg23<210>3<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>3gggaagatggtcgtgatcctt21<210>4<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>4tctggggtggtctcgatttta21<210>5<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>5atgcccagacatctgtgtcc20<210>6<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>6ggggtctctatgcccaacaa20<210>7<211>23<212>DNA<213>人工序列<400>7actcacctcttcagaacgaattg23<210>8<211>23<212>DNA<213>人工序列<400>8ccatctttggaaggttcaggttg23<210>9<211>23<212>DNA<213>人工序列<400>9atgatggcttattacagtggcaa23<210>10<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>10gtcggagattcgtagctgga20<210>11<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>11gaggccaagccctggtatg19<210>12<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>12cgggccgattgatctcagc19<210>13<211>23<212>DNA<213>人工序列<400>13actgagagtgattgagagtggac23<210>14<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>14aaccctctgcacccagttttc21<210>15<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>15ttctgtgcctgctgctcat19<210>16<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>16ggggcattgattgcatct18<210>17<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>17ggcgcttcaggcactacaa19<210>18<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>18ttgattgacgggtttgggttc21<210>19<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>19gagtcaacggatttggtcgt20<210>20<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>20tggaagatggtgatgggatt20<210>21<211>25<212>DNA<213>人工序列<400>21gctgcttctggtgatggctactgcc25<210>22<211>25<212>DNA<213>人工序列<400>22tgaaactccacaagaccggtggtga25<210>23<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>23cctcagatgtacctaatggtgg22<210>24<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>24gcttgatcacatccatgctcc21<210>25<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>25gagcatcaggcagatggtgt20<210>26<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>26caaggatgatgggctcttcttc22<210>27<211>23<212>DNA<213>人工序列<400>27atgagcactgagagcatgatccg23<210>28<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>28cctcgaagtgcagtaggcaga21<210>29<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>29agcccgtgtcaacatgacttcc22<210>30<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>30ttgtgttggcatctttactga21<210>31<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>31ctcccacaccgaagcttgaa20<210>32<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>32taattgcatctggctgggca20<210>33<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>33atccaggacctgaaggtga19<210>34<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>34ttcttcaccatgggggct18<210>35<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>35gcgagaaagaactcgtgcatgg22<210>36<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>36ctcaggaggctcttcatgcac21<210>37<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>37acagacagccgtgtgttcc19<210>38<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>38accttcaccatcgtgtctca20当前第1页1 2 3