一种玉米须黄酮抗氧化凝胶剂的制备方法与流程

本发明涉及化妆品，具体涉及一种玉米须黄酮抗氧化凝胶剂的制备方法。
背景技术：
：具有天然活性成分的药妆具有对皮肤刺激性小、渗透性好、安全指数高、高效等特点，越来越受到广大消费者的青睐，所以具有天然活性成分的药妆具有较大的市场潜力，将是世界化妆品行业发展的主流。玉米须黄酮是玉米须柱头中重要的活性成分之一，具有抑菌、消炎、降血脂、清除自由基等功能，玉米须黄酮对皮肤具有抗氧化、抗辐射、美白、保湿等功能；随着人们对天然化妆品研究的不断深入，玉米须黄酮的功能也愈来愈被人们所认识和应用；本专利在研究中将玉米须黄酮应用于凝胶剂中，制成了玉米须黄酮抗氧化凝胶剂化妆品，具有抗痤疮、抗氧化、亮白肤色作用的功能性药妆产品。适用于轻度和中度痤疮患者的治疗，长期使用安全有效，减少肌肤问题的产生，保持肌肤健康润泽。水杨酸的局部作用为角质溶解，作为角质软化剂使用，可因制剂浓度不同而药理作用各异；1%～3%有角化促成和止痒作用；5%～10%具有角质溶解作用，亦可产生抗真菌作用(因去除角质层抑制真菌生长，本品能帮助其他抗真菌药物的穿透，并抑制细菌生长)；水杨酸作用在毛囊壁细胞，能帮助清除被堵塞住的毛囊，恢复细胞的正常脱落，对黑头粉刺最有效，它也可以改变毛囊壁不正常脱落的现象，预防新病灶的产生。机体在代谢过程中产生各种自由基，如羟自由基、超氧阴离子自由基和脂基自由基等；皮肤老化的重要原因是皮肤中自由基增多，损伤生物膜，也会导致一些水解酶从细胞中释放，使表皮内胶原纤维、弹力纤维交联、变脆、变性而失去弹性，使得皮肤角质层变厚，最终使皮肤粗糙、松弛，形成皱纹。玉米须黄酮能捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害，能延缓皮肤老化，保持皮肤弹力和光滑，最终表现为抗氧化的作用。本发明对玉米须黄酮抗氧化凝胶剂化妆品原药材质量、提取工艺、成型工艺、质量标准、体外释放与透皮、稳定性及黄酮抗氧化活性进行了全面的研究和评价。本发明以玉米须黄酮粉末、水杨酸、卡波姆-940、甘油、丙二醇、三乙醇胺为原料，在基料的基础上，通过正交实验确定了玉米须黄酮抗氧化凝胶剂的生产工艺，有抗氧化的效果，而且具有杀菌、消炎、美白的功效，关于玉米须黄酮抗氧化凝胶剂及其制备方法未有报道，本专利对满足化妆品市场的需求具有一定的意义。技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种玉米须黄酮抗氧化凝胶剂；该产品具有抗氧化、去痤疮作用的功能性药妆产品；适用于有敏感、干性及中性皮肤问题的受损皮肤，以及对轻度痤疮患者的治疗，长期使用安全有效，减少肌肤问题的产生，保持肌肤健康润泽。本发明另一个目的是提供一种上述凝胶剂的制备方法。本发明采用的技术方案：一种玉米须黄酮抗氧化凝胶剂，是由组成卡波姆-940、甘油、丙二醇l、三乙醇胺、主药水杨酸、玉米须黄酮粉末和去离子水制备而成；其中按百分比计各组分含量为卡波姆-9401~5%、甘油10~40%、丙二醇10~40%、三乙醇胺适量、主药玉米须黄酮粉末3~6%、水杨酸1~4%和去离子水40~60%。一种上述凝胶剂的制备方法：(1)玉米须黄酮的提取：取玉米须粉末50g于烧杯中；添加600ml75%的乙醇溶液(玉米须：乙醇=1:6，v/v)，超声处理30min；将超声处理后的玉米须乙醇溶液真空抽滤，储存滤液，残渣与75%的乙醇以1:5的体积比，二次超声30min；真空抽滤，合并滤液，残渣再与75%的乙醇溶液以1:4的体积比，三次超声30min，将三次所得滤液合并旋转蒸发仪中在45℃下，以40rpm的转速进行浓缩；待浓缩液出现挂壁现象后即停止浓缩，将所得浓缩液转入烧杯中，置于45℃水浴锅中，2~3天后，真空干燥即得总黄酮提取物，保存于4℃冰箱中以防变质。精密称取玉米须总黄酮粉末2.5g，加入20ml纯化水超声溶解，过滤，滤液体积浓缩至1/5体积，滤液用硅藻土脱色，分别加入石油醚和氯仿进行隔夜萃取，以除去生物碱和干扰脂类的干扰作用，再用乙酸乙酯对上所得滤液进行萃取，得较纯黄酮溶液，干燥成粉末；(2)玉米须黄酮抗氧化凝胶剂的制备：称取甘油10g，将1g卡波姆均匀撒于表面充分浸润后，加10~15ml适量纯化水，搅匀放置过夜，使其充分溶胀，滴加1.35g三乙醇胺成透明凝胶基质，备用；精密称取纯化后玉米须黄酮粉末2.5g，加入20ml纯化水超声溶解，过滤，得玉米须制备液备用；另取过60目筛的1.5g水杨酸加入丙二醇与乙醇的混合液中溶解得水杨酸制备液，在40℃水浴条件下将两种药液（玉米须制备液与水杨酸制备液）缓慢加入凝胶基质中，边加边搅拌，滴加三乙醇胺调ph至6.0～7.0，加水至足量，搅匀即得。上述的一种玉米须黄酮抗氧化凝胶剂及其制备方法，设计合理，制剂制备工艺简单，性质稳定，质量可控，无刺激性适用于日化产品开发与利用。具体实施方式:以下结合具体实例对本发明进一步说明。实施例1:玉米须黄酮的提取、纯化及含量测定玉米须黄酮的提取纯化：取玉米须粉末50g于烧杯中；添加600ml75%的乙醇溶液(玉米须：乙醇=1:6，v/v)，于超声清洗仪中超声处理30min；将超声处理后的玉米须乙醇溶液真空抽滤，储存滤液，残渣与75%的乙醇以1:5的体积比，二次超声30min；真空抽滤，合并滤液，残渣再与75%的乙醇溶液以1:4的体积比，三次超声30min，将三次所得滤液储于烧瓶中。所得提取液置于45℃水浴锅中，2~3天后，真空干燥即得总黄酮提取物，保存于4℃冰箱中以防变质。精密称取玉米须总黄酮粉末2.5g，加入20ml纯化水超声溶解，过滤，滤液体积浓缩至1/5体积，滤液用硅藻土脱色，分别加入石油醚和氯仿进行隔夜萃取，以除去生物碱和干扰脂类的干扰作用，再用乙酸乙酯对上所得滤液进行萃取，得较纯黄酮溶液，干燥成粉末。黄酮定性实验：本实验采用hcl-zn粉反应和三氯化铝反应对玉米须中的黄酮进行鉴定，盐酸-锌粉反应：取1ml样品的乙醇溶液，加少许锌粉(镁粉)振摇，再滴加几滴浓盐酸，1～2min内(必要时加热)显色；三氯化铝反应：取1ml样品的乙醇溶液，加1%三氯化铝甲醇溶液，呈色；玉米须黄酮含量测定：根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。取黄酮提取液，取提液2ml至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。其余各份各加5%亚硝酸钠溶液0.3ml摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液0.3ml摇匀，放置6min，加1mol氢氧化钠溶液4ml，再用60%乙醇溶液稀释至刻度，放置15min后，分别在510nm处测定其吸光度。标准曲线回归方程可得浓度数据（以芦丁为参比），三次结果取平均值0.01mg/ml。经换算后得样品中黄酮含量为4~6mg/g。实施例2:凝胶剂的制备凝胶基质因素和水平的确定:根据预试验情况，确定考察因素为卡波姆用量(a)，甘油用量(b)，丙二醇用量(c)，每个因素安排3个水平进行优选，试验因素与水平安排见表1；表1凝胶基质制备单因素水平设计表因素卡波姆a（g/g）甘油b(g/g)丙二醇c(ml/g)115521.51010321515(1)凝胶基质配方筛选:以确定的3因素3水平，按照l9（3^3）正交表的设计配制9份样品，分别装于密闭的塑料盒中，于室温、55℃和-15℃放置1d。观察样品的颜色、澄明度、涂展性、稳定性、黏度等，并以其作为考察标准进行综合评分，各项指标均满意值为10分(满分为10分)，其他介于0～10分之间，结果见表2；表2凝胶基质正交试验方案及结果试验号abc室温55℃-15℃总分111154413.521228.5872.5313364444212789245223444126231443117313543.512.58321876219332443.511.5k150.549.545k24756.558.5k31512.212.5r1.83.47由表2结果可知，因素c对基质处方影响最显著，因素b次之，因素a再次之(rc>rb>ra)，由k平均值确定最佳基质条件为a3b3c2，即卡波姆1g，甘油10g，丙二醇10ml；(2)渗透促进剂剂量的确定:由于玉米须黄酮为主料，根据薄荷脑的浓度不同，设计多组配方配方一玉米须黄酮2.5g；水杨酸1.5g；卡波姆1g；甘油10g；丙二醇10ml；乙醇10ml；薄荷脑0.75g；三乙醇胺1.35g；去离子水加至50g；配方二玉米须黄酮2.5g；水杨酸1.5g；卡波姆1g；甘油10g；丙二醇10ml；乙醇10ml；薄荷脑1.0g；三乙醇胺1.35g；去离子水加至50g；配方三玉米须黄酮2.5g；水杨酸1.5g；卡波姆1g；甘油10g；丙二醇10ml；乙醇10ml；薄荷脑1.25g；三乙醇胺1.35g；去离子水加至50g。玉米须黄酮抗氧化凝胶剂的制备称取甘油，将卡波姆均匀撒于表面充分浸润后，加适量纯化水，搅匀放置过夜，使其充分溶胀，滴加三乙醇胺成透明凝胶基质，备用。精密称取纯化后玉米须黄酮粉末，加入适量纯化水超声溶解，过滤，得玉米须制备液，备用；另取过60目筛的水杨酸加入丙二醇与乙醇的混合液中溶解，得水杨酸制备液；在40℃水浴条件下将两种药液（玉米须制备液与水杨酸制备液）缓慢加入凝胶基质中，边加边搅拌，调ph至6.0～7.0，加水至足量，搅匀即得成品。实施例3：玉米须黄酮抗氧化凝胶剂主要原料的质量控制水杨酸的理化鉴别：fecl3显色法：取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色；含量测定：确定水杨酸最大吸收波长为298nm，精密称取置干燥器中24h的水杨酸对照品100mg，置100ml容量瓶中，以适量乙醇溶解后加纯化水至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液0.3，0.6，0.9，1.2，1.5，1.8，2.1，2.4，2.7ml，置100ml容量瓶中，依次加纯化水至刻度，摇匀。以纯化水为空白，在298nm处测定吸收度，以吸收度a对浓度c进行线性回归得水杨酸线性回归方程：y=0.2537c+0.024，r=0.9999(n=9)，结果表明水杨酸在3-21mg/l范围内，吸收度a与浓度c有很好的线性关系；黄酮鉴定和含测同[0016]、[0017]；酸碱度检查：从玉米须黄酮抗氧化凝胶剂成品三批小试样品中分别取三份检测，每份约取1.0g凝胶，置10ml烧杯中加少量蒸馏水，搅拌后转移至10ml容量瓶中，加蒸馏水适量，超声20min，放冷后定容，离心后滤过，取滤液测定ph值，三批小试样品的ph值在6.75~6.97范围内，故暂定本品ph值为6.8±0.2；微生物限度检查：取三批玉米须黄酮抗氧化凝胶剂成品样品各约1.0g，按《中国化妆品卫生规范》2007版微生物限度检查项下方法进行检查见表3，结果均符合规定；表3微生物检查项目指标蛋白型普通型焙烤型菌落总数，个/g≤30000≤1000≤1000大肠菌群，个/100g≤90≤40≤40致病菌，个/g≤50致病菌不得检出黏度检查：取玉米须黄酮抗氧化凝胶剂10.0g至50ml的量瓶中，加水溶解，摇匀，加水至刻度，超声脱气，用毛细管内径为1.0mm的平氏黏度计，照《中国药典》2015年版二部附录vig第一法依法测定，在20℃时实测3批的运动黏度，结果见表4。根据3批的的检验结果和凝胶剂的一般要求，本品的运动黏度应为10-100mm2/s；表4黏度检查批号201405102014051120140512黏度（mm2/s）39.840.140.3离心实验：取玉米须黄酮抗氧化凝胶剂1.0g置于离心试管中，转数为4000r/min离心15min。结果，所有的样品都为均匀细腻，未见有分层现象。证明所制备的玉米须黄酮抗氧化凝胶剂稳定；稳定性试验：根据试验结果，按筛选的处方及工艺生产的凝胶剂，按市售包装条件下，经强光照射试验、高温、高湿和低温试验，凝胶剂的性状、含量、有关物质均无明显改变，高温试验凝胶剂的有关物质略有增加，提示凝胶剂应避免在高温条件下贮藏。以上试验结果说明，本凝胶剂的处方、生产工艺及包装材料选择是合理的，凝胶剂以上市要求包装，产品稳定。透皮实验离体鼠皮的制备将(20±5)g左右的小白鼠分成6组，每组4只。小白鼠腹部皮肤用脱毛剂脱毛，处死，剥离腹部皮肤，去除皮下脂肪，用纯化水反复洗净，置生理盐水中冷藏备用；透皮实验方法利用旋转膜扩散装置，用药典溶出杯为接受室，供给室与旋转杆相连，扩散口在供给室底部；将1g的玉米须黄酮抗氧化凝胶剂均匀涂于旋转篮里，离体小鼠皮固定于旋转篮下端，角质层面向供给室与供试液紧密接触，渗透3.15cm2。接受池内装50ml生理盐水，内含10%peg400及2d滴油酸，在(37±1)℃、100r·min-1中恒温搅拌。间隔1，3，5，7，9h分别取接受液2ml(同时补充介质液2ml)加入6ml无水乙醇，摇匀，于284nm处测定吸收度值；以空白对照品同法操作，所得结果进行空白校正，并以公式1，计算累计渗透量q和增渗倍数er；结果见表5；q=[2×∑ci+v×cn]/ser=k/k0公式1q:累计渗透量；s:渗透面积；v:接受池体积；er:增渗倍数；k:增渗后的渗透速率；k0:未增渗的渗透速率；ci:第1次至上次取样时接受池中药物浓度；cn:该次取样时接受池中药物浓度；表5含不同浓度玉米须黄酮复方水杨酸凝胶剂对透皮累积渗透量的影响(mg••cm-2，n=3)黄酮含量1h3h5h7h9her0.0%0.05010.71060.43021.07631.27951.5%0.02541.16231.48771.93202.08321.632.0%0.11981.14191.61362.39372.15931.692.5%0.22781.48592.07892.76503.11232.43经统计学检验，含不同浓度玉米须黄酮的玉米须黄酮抗氧化凝胶剂均有较强的促渗作用(p<0.05)，其中2.5%玉米须黄酮对水杨酸差异具极显著性(p<0.01)。实施例5：玉米须黄酮抗氧化凝胶剂皮肤刺激性/腐蚀性试验急性皮肤刺激性试验步骤试验前约24h将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。取受试物约0.5ml（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采用封闭试验，敷用时间为4h。对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h敷用试验。试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min和4h取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。于清除受试物后的1、24、48和72h观察涂抹部位皮肤反应，按表6进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24、48和72h各观察时间最高积分均值，按表3判定皮肤刺激强度。观察时间的确定应足以观察到可逆或不可逆刺激作用的全过程，一般不超过14d；多次皮肤刺激性试验步骤试验前将实验动物背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛范围各为3cm×3cm，涂抹面积2.5cm×2.5cm。取受试物约0.5ml（g）涂抹在一侧皮肤上，当受试物使用无刺激性溶剂配制时，另一侧涂溶剂作为对照，每天涂抹1次，连续涂抹14d。从第二天开始，每次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物。一小时后观察结果，按表6评分，对照区和试验区同样处理按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表7判定皮肤刺激强度每天每只动物平均积分=红斑和水肿积分/受试动物数/14表6刺激性评分皮肤反应积分红斑和焦痂形成无红斑0轻微红斑（勉强可见）1明显红斑2中度~重度红斑3严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成4水肿形成无水肿0轻微水肿（勉强可见）1轻度水肿（皮肤隆起轮廓清楚）2中度水肿（皮肤隆起约1mm）3重度水肿（皮肤隆起超过1mm，范围扩大）4表7刺激性等级积分均值强度0~＜0.5无刺激性0.5~＜2.0轻刺激性2.0~＜6.0中刺激性6.0～8.0强刺激型表8刺激级别动物编号1h24h48h72h红斑水肿总分红斑水肿总分红斑水肿总分红斑水肿10000.50.10.60.500.50.3020000.50.10.60.500.50.3030000.500.50.50.10.60.20.140.50.510.50.10.60.50.10.60.10.1总积分均值0.11刺激强度分级无刺激性玉米须黄酮抗氧化凝胶剂是一款凝胶类型的化妆品，采用卡波姆-940为凝胶的基质，以玉米须黄酮和水杨酸为主要成分，具有抗氧化、抗痤疮作用的功能性药妆产品。适用于轻度和中度痤疮患者的治疗，长期使用安全有效，减少肌肤问题的产生，保持肌肤健康润泽。实施例4：玉米须黄酮抗氧化凝胶剂体外抗氧化活性试验样品前处理：精密称取不同质量的玉米须黄酮抗氧化凝胶剂，甲醇溶解并定容至不同浓度，超声混匀，离心，取上清液制得样品液。总还原力法：取磷酸盐缓冲溶液（ph6.60.2mol/l）2.5ml于试管中，分别加入0.3ml不同浓度的样品液（0.07,0.14,0.21,0.28,0.35mg/ml）混匀后加入1ml的铁氰化钾，置于50℃水浴反应20min，冷却后加入10%三氯乙酸1ml，混匀。取2.5ml上清液，加入2.5ml蒸馏水及0.5ml0.1%三氯化铁，反应5min后于700nm测吸光度。以vc作为对照。清除dpph自由基法：取0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml、2.5mg/ml不同质量浓度的样品液2ml，加入等体积的浓度为0.1mmol/l的dpph溶液(用无水乙醇配制)，混匀后在室温下避光反应30min。在517nm下测定吸光度ai，并以4ml无水乙醇和蒸馏水(二者分别为2ml)作为空白调零。空白对照组为2ml样品液加上2ml无水乙醇，其在517nm处的吸光值为aj,设置空白对照组目的是为了去除黄酮样品本身的吸光值。模型对照组为2mldpph溶液加上2ml无水乙醇,其在517nm处的吸光值为ao。平行测定3次取平均值，根据公式计算清除率：清除率（%）=[1-(ai-aj)/ao]×100％。清除abts自由基法：将7mmol／l的abts与2.45mmol／l的k2s2o8溶液等体积混合，室温避光放置12h，得abts备用液。用无水乙醇稀释,使其吸光度范围在2.000±0.100，得abts+检测液。取11只比色管,分为待测组：3．00mlabts+检测液与0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml不同质量浓度的样品液，对照组：以95％乙醇代替abts+检测液，空白组：95％乙醇代替玉米须黄酮待测液，各组混匀后，室温静置6min，以无水乙醇进行调零，迅速在波长为734nm处平行测定3次吸光度，取平均值。根据以下公式：清除率＝［1－（a待测－a对照）/a空白］×100％进行计算。结果：如说明书附图1、2、3所示，玉米须黄酮抗氧化凝胶剂具有还原铁离子的能力，能抑制自由基转移电子，使得自由基转化为较为稳定的产物终止自由基系列反应，且其还原能力随着浓度的增大而增强。同浓度下玉米须黄酮抗氧化凝胶剂的吸光值略低于vc，结果表明玉米须黄酮抗氧化凝胶剂具有较强的抗氧化能力，但低于vc。附图说明：图1玉米须黄酮抗氧化凝胶剂对fe3+的还原能力，图2玉米须黄酮抗氧化凝胶剂对dpph自由基的清除能力，图3玉米须黄酮抗氧化凝胶剂对abts自由基的清除能力。当前第1页12