本发明涉及生物制药领域，特别是涉及一种治疗肝硬化、肝腹水及肝肿瘤的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
：肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生，结缔组织增生与纤维隔形成，导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形，变硬而发展为肝硬化。临床上以肝功能损害和门脉高压症为主要表现，并有多系统受累。晚期常出现上消化道出血，肝性脑病，继发性感染、肝腹水等并发症。一旦出现肝腹水时，提示肝硬化已进入晚期，是失代偿的表现，在出现腹水前，常有腹胀，其后腹水逐渐出现，短期出现较多量腹水者常有诱因可寻，如上消化道出血，感染，门静脉血栓等等。目前还没有治疗肝硬化的特效药，主要是补充维生素、保护肝细胞及中药治疗。中药采取辨病与辨证相结合，多途径、多层次整体调控，治疗肝纤维化取得了不少进展。肝肿瘤是指发生在肝脏部位的肿瘤病变。肝脏是肿瘤好发部位之一，良性肿瘤较少见，恶性肿瘤中转移性肿瘤较多。原发性肿瘤可发生于肝细胞索、胆管上皮、血管或其他中胚层组织，转移性肿瘤中多数为转移性癌，少数为转移性肉瘤。目前在治疗肝硬化、肝腹水或肝肿瘤临床方面还不能令人满意，因此肝硬化难治性已成为医学界普遍关注的问题。技术实现要素：本发明目的是为了克服现有技术不足而提供一种对治疗肝硬化、肝腹水及肝肿瘤的有显著效果的药物组合物。本发明另一目的在于提供一种治疗肝硬化、肝腹水及肝肿瘤的的药物组合物的制备方法。本发明是通过如下技术方案实现的：本发明组合物的原料药组成为：本发明组合物的原料药组成优选为：本发明组合物的原料药组成优选为：本发明组合物的原料药组成优选为：本发明组合物的原料药组成优选为：本发明组合物的制备方法为：分别取1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星及全部黑蚂蚁超微粉碎得超微细粉，在超微粉碎过程中喷入20-60重量份干冰作为冷却剂；在超微粉碎中至少85％以上的微粉粒径不超过6微米；将余下1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星洗净，加6-10倍量的水浸泡15-45分钟，然后进行煎煮，第一次煎煮1-3小时，过滤得滤液；药渣再用2-6倍量的水煎煮1-2小时，过滤，得滤液，合并两次滤液，过滤，滤液离心分离，3000rpm离心，离心2-6分钟，分离上清液，水浴蒸干浓缩至1.25-1.30的浸膏a；将玉米须、牡丹皮和鸦胆子加4-12倍量水浸泡15-45分钟，加入20-40重量份的复合酶，所述复合酶为4∶1的木瓜蛋白酶和纤维素酶，先进行20-60℃15-45分钟的酶解，然后煎煮两次，每次0.5-1.5小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至25-75℃测相对密度为1.35～1.40的浸膏b；将余下的半边莲、葶苈子、地骨皮、鸡血藤、人参、红花、三七和沉香8味原料药超微粉碎至20-60目，将超微粉放在co2萃取釜中浸泡1.5-4.5小时，控制萃取釜中压力为20-30mpa；将浸泡后的超微粉在分离釜中进行分离，控制分离釜中分离压力值为3-9mpa，加温至20-60℃，保持2.5-7.5小时，co2的流量维持在20-40kg/h；分离后的提取物进行干燥即得提取物d；将浸膏a、浸膏b、提取物d用高速搅拌机进行搅拌均匀，再加昆布、积雪草、橘红、天南星和黑蚂蚁超微细粉搅拌均匀，最后再加入5∶1的羧甲基淀粉钠和磷酸氢钙12-36重量份混合搅拌均匀，制成颗粒剂、片剂或胶囊剂。本发明组合物的制备方法为：分别取1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星及全部黑蚂蚁超微粉碎得超微细粉，在超微粉碎过程中喷入40重量份干冰作为冷却剂；在超微粉碎中至少85％以上的微粉粒径不超过6微米；将余下1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星洗净，加8倍量的水浸泡30分钟，然后进行煎煮，第一次煎煮2小时，过滤得滤液；药渣再用4倍量的水煎煮1.5小时，过滤，得滤液，合并两次滤液，过滤，滤液离心分离，3000rpm离心，离心4分钟，分离上清液，水浴蒸干浓缩至1.25-1.30的浸膏a；将玉米须、牡丹皮和鸦胆子加8倍量水浸泡30分钟，加入30重量份的复合酶，所述复合酶为4∶1的木瓜蛋白酶和纤维素酶，先进行40℃30分钟的酶解，然后煎煮两次，每次1小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至50℃测相对密度为1.35～1.40的浸膏b；将余下的半边莲、葶苈子、地骨皮、鸡血藤、人参、红花、三七和沉香8味原料药超微粉碎至40目，将超微粉放在co2萃取釜中浸泡3小时，控制萃取釜中压力为25mpa；将浸泡后的超微粉在分离釜中进行分离，控制分离釜中分离压力值为6mpa，加温至40℃，保持5小时，co2的流量维持在30kg/h；分离后的提取物进行干燥即得提取物d；将浸膏a、浸膏b、提取物d用高速搅拌机进行搅拌均匀，再加昆布、积雪草、橘红、天南星和黑蚂蚁超微细粉搅拌均匀，最后再加入5∶1的羧甲基淀粉钠和磷酸氢钙24重量份混合搅拌均匀，制成片剂、颗粒剂或胶囊剂。本发明组合物按照常规工艺加入常规辅料制成临床接受的片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或口服液。本发明组合物中的原料药按君臣佐使进行配伍，其中昆布、积雪草、玉米须、橘红、天南星、黑蚂蚁、牡丹皮和鸦胆子8味原料药为君药，在本发明治疗肝硬化、肝腹水及肝肿瘤中起到主要的治疗作用，另半边莲、葶苈子、地骨皮和鸡血藤4味原料药为臣药，在本发明中辅助君药加强治疗肝硬化、肝腹水及肝肿瘤的辅药，其他人参、红花、三七和沉香4味原料药为佐药和使药，在本发明组合物中起到兼证的作用。本发明组合物的核心是原料药之间的配比关系，相同的原料药在组合物中进行不同的分配和配比，所产生的效果也是完全不一样的。中药组合物最讲究的是各原料药配比的协同作用，有的原料药组合会相生，有的原料药组合会相克，不同的原料药组合，不同的配比，会带来不同的治疗效果，且有的还会带来毒副作用。本发明组合物的优点在于，可清除脏器淤血，增强肝主质血流和微循环，增强机体免疫力，提高肝细胞膜对毒素的抵制作用，修复肝细胞，软化肝脏等功效，对治疗肝硬化、肝腹水及肝肿瘤效果显著，可以有效的延长肝癌患者寿生命，提高肝癌患者的生存质量。本发明组合物所选原料药配伍适宜，符合中医药学和现代医药学理论。本发明是通过对各原料药进行最优的分配和配比，使得各原料药在本发明中达到最佳的治疗效果，并同时能够起到相辅相佐的作用。本发明的另一优点在于，随着临床上对药品质量、效果要求的不断提高及制药工艺的不断发展，传统工艺已不能满足当前需求，急需一种有效成分提取更完全、含量更高的制剂工艺，以更好地发挥本发明的药用价值。本发明将1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星及全部黑蚂蚁分别超微粉碎，在粉碎前经冷冻预处理，并在超微粉碎中喷入干冰作为冷却剂，研磨体在极短时间内可以获得有效冷却，使被粉碎的中药材在极短时间内达到超微粉碎的效果并保持极高生物活性。且超微粉碎的微粉粒径小，由于超微粉碎过程物料温度低于-18℃；经超微粉碎后的中药材超微粉，无污染，无铬、镍、镉、钛、铁、铜、锌、铅、砷等重金属粉屑微粒剥落释出。另将玉米须、牡丹皮和鸦胆子用复合酶进行提取，使得其有效成分提取更完全、含量更高、稳定性更好，该方法对提取物进行了纯化，疗效同传统工艺比较也有了显著提高，还大大降低了生产成本；将余下1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星进行煎煮进行离心。其余原料药料再超微粉碎后进行提取。本发明改进后的工艺还添加了适量辅料，添加辅料后所制成的片剂崩解时间短，稳定性更好。近年来不断有人研究酶在中药提取中的应用，并取得了不错的效果。本发明采纳该先进技术，根据原料药有效成分的性质特点对传统煎煮工艺进行了优化和改进。对于酶种类及用量的选择做了大量实验研究。最终得到上述制备方法及该法制得的片剂。该方法对提取物进行了纯化，在减少了大量杂质的情况下，得到的提取物(浸膏)比传统方法提高显著，且有效成分也较原传统工艺稳定，疗效同传统工艺的比较也有显著提高，还大大降低了生产成本。不同的原料药，所适用的酶及用量是不尽相同的。酶的用量偏低时酶解的效果差，随着酶的浓度升高，与底物的接触面积增大，酶解反应速率增大，但并非越高越好，当酶达到某一浓度时则会产生抑制作用，酶得不到充分利用，造成浪费。因此，发明人对酶的种类及用量进行了考察，发现效果差异明显。其中以4∶1的木瓜蛋白酶和纤维素酶比例组合的复合酶效果最佳，使玉米须、牡丹皮和鸦胆子的有效成分提取更完全、含量更高、稳定性更好，该方法对提取物进行了纯化，疗效同传统工艺比较也有了显著提高。以中药提取物为主要组成部分的片剂，由于提取物成分多且复杂自身粘度较高，一般崩解时间都偏长，特别是长期放置后，崩解时间继续延长的趋势明显。因此，本发明添加了羧甲基淀粉钠和磷酸氢钙后所制成的片剂崩解时间短，有效避免了崩解过缓对疗效造成的不利影响。本发明组合物中昆布来源为海带科植物海带或翅藻科植物昆布(鹅掌菜)的干燥叶状体。夏、秋二季采捞，晒干。昆布气腥，味咸。归肝、胃、肾经。有软坚散结，消痰，利水之功能。用于痰饮水肿。软坚散结，消痰，利水。瘿瘤、瘰疬、睾丸肿痛、痰饮水肿。积雪草(学名：centellaasiatica(l.)urban)多年生草本，茎匍匐，细长，节上生根。积雪草具有清热利湿、消肿解毒，治痧氙腹痛、暑泻、痢疾、湿热黄疸、砂淋、血淋，吐血、咳血、目赤、喉肿、风疹、疥癣、疔痈肿毒、跌打损伤等。玉米须为禾本科植物玉蜀黍zeamaysl.的花柱和柱头。全国大部分地均产。夏、秋果实成孰时收集，除去杂质。鲜用或晒干生用。玉米须具有利尿，泄热，平肝，利胆功效。治肾炎水肿，脚气，黄疸肝炎，高血压，胆囊炎，胆结石，糖尿病，吐血衄血，鼻渊，乳痈。橘红为芸香科植物福橘或朱橘等多种橘类的果皮的外层红色部分。植物形态详″橘″条。橘红具有消痰，利气，宽中，散结。治风寒痰嗽，恶心，吐水，胸痛胀闷。天南星(英文名：rhizomaarisaematis)中国药典收录的草药，为植物天南星科，天南星(arisaemaerubescens(wall.)schott.)、异叶天南星(arisaemaheterophyllumblume)或东北天南星(arisaemaamurensemaxim.)的干燥块茎。秋、冬二季茎叶枯萎时采挖，除去须根及外皮，干燥。天南星有祛风止痉、化痰散结之功能。主中风痰壅、口眼歪斜、半身不遂、手足麻痹、风痰眩晕、癫痫、惊风、破伤风、咳嗽多痰、痈肿、瘰疬、跌打麻痹、毒蛇咬伤。黑蚂蚁性味甘平无毒，有酸、咸感，是一种温和滋补佳品，具有扶正固本、延年益寿、补肾壮阳、养血安神、强壮筋骨、祛风湿、养颜、护肝、生发黑发、提高勉疫力、抗疲劳、益气力、增强性功能、助睡眠等作用。牡丹皮为毛茛科植物牡丹干燥根皮。产于安徽、四川、河南、山东等地。苦、辛，微寒，归心、肝、肾经，具有清热凉血、活血化淤、退虚热等功效。牡丹皮和牡丹酚的毒性小。鸦胆子为苦木科植物鸦胆子bruceajavanica(l.)merr.的果实。鸦胆子具有清热，燥湿，杀虫，解毒功交效。治痢疾，久泻，疟疾，痔疮，疔毒，赘疣，鸡眼。半边莲(学名：lobeliachinensislour.)，桔梗科半边莲属多年生草本。茎细弱，匍匐，节上生根，分枝直立。叶互生，无柄或近无柄，椭圆状披针形至条形。半边莲有清热解毒、利尿消肿之效，治毒蛇咬伤、肝硬化腹水、晚期血吸虫病腹水、阑尾炎等功效。葶苈子为十字花科葶苈属植物葶苈drabanemorosal.、独行菜属琴叶葶苈lepidiumvirginicuml.和播娘蒿属植物播娘蒿descurainiasophia(l.)webb.exprantl的种子。葶苈子具有泻肺降气，祛痰平喘，利水消肿，泄热逐邪之功效。主治痰涎壅肺之喘咳痰多，肺痈，水肿，胸腹积水，小便不利，慢性肺源性心脏病，心力衰竭之喘肿。亦治痈疽恶疮，瘰疬结核。地骨皮别名枸杞皮，为茄科、枸杞属植物，是枸杞lyciumchinensemill.的根皮。可入药，具有退热除蒸之效，凉血除蒸、清肺降火等功效。鸡血藤为五味子科、大血藤科、菟丝子科、被子植物门，双子叶植物纲，蝶形花科等多种植物的别称。常绿木质藤本，无毛，新枝暗绿色，基部宿存有数枚三角状芽鳞。鸡血藤具有补血，活血，通络功效。用于月经不调，血虚萎黄，麻木瘫痪，风湿痹痛。人参(panaxginsengc.a.mey)为多年生草本植物，喜阴凉，叶片无气孔和栅栏组织，无法保留水分，温度高于32度叶片会灼伤，郁闭度0.7-0.8。人参有补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明目开心益智的功效。红花(拉丁学名：carthamustinctoriusl.)，别名：红蓝花、刺红花，菊科、红花属植物，干燥的管状花，橙红色，花管狭细，先端5裂，裂片狭线形，花药黄色，联合成管，高出裂片之外，其中央有柱头露出。具特异香气，味微苦。以花片长、色鲜红、质柔软者为佳。红花具有活血通经，散瘀止痛，有助于治经闭、痛经、恶露不行、胸痹心痛、瘀滞腹痛、胸胁刺痛、跌打损伤、疮疡肿痛疗效。三七产于云南文山州，故名文山三七，又名文州三七，为五加科植物三七panaxnotoginseng(burk.)f.h.chen的干燥根和根茎。三七用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。沉香是一种药材名，属药瑞香科植物；也指白木香的含有树脂的木材。降气温中，暖肾纳气。沉香主治气逆喘息，呕吐呃逆，脘腹胀痛，腰膝虚冷，大肠虚秘，小便气淋，男子精冷。本发明诸药合并可清除脏器淤血，增强肝主质血流和微循环，增强机体免疫力，提高肝细胞膜对毒素的抵制作用，修复肝细胞，软化肝脏等功效，对治疗肝硬化、肝腹水及肝肿瘤效果显著，可以有效的延长肝癌患者寿命，提高肝癌患者的生存质量。下面实验例用于进一步说明本发明，但不限于本发明。实验例一、组合物配比的筛选1、原料药的配比处方1：处方2：处方3：处方4：处方5：处方6：对照组1：申请号200610128238.8，按照说明书实施例1方法制备成胶囊。对照组2：申请号201410078240.3，按照说明书实施例1方法制备成汤剂。对照组3：申请号200510007731.x，按照说明书实施例1方法制备成丸剂。对照组4：申请号200810230917.5，按照说明书实施例1方法制备成丸剂。2、制备方法(上述处方1-处方6均按照下述方法制备)分别取1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星及全部黑蚂蚁超微粉碎得超微细粉，在超微粉碎过程中喷入40重量份干冰作为冷却剂；在超微粉碎中至少85％以上的微粉粒径不超过6微米；将余下1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星洗净，加8倍量的水浸泡30分钟，然后进行煎煮，第一次煎煮2小时，过滤得滤液；药渣再用4倍量的水煎煮1.5小时，过滤，得滤液，合并两次滤液，过滤，滤液离心分离，3000rpm离心，离心4分钟，分离上清液，水浴蒸干浓缩至1.25-1.30的浸膏a；将玉米须、牡丹皮和鸦胆子加8倍量水浸泡30分钟，加入30重量份的复合酶，所述复合酶为4∶1的木瓜蛋白酶和纤维素酶，先进行40℃30分钟的酶解，然后煎煮两次，每次1小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至50℃测相对密度为1.35～1.40的浸膏b；将余下的半边莲、葶苈子、地骨皮、鸡血藤、人参、红花、三七和沉香8味原料药超微粉碎至40目，将超微粉放在co2萃取釜中浸泡3小时，控制萃取釜中压力为25mpa；将浸泡后的超微粉在分离釜中进行分离，控制分离釜中分离压力值为6mpa，加温至40℃，保持5小时，co2的流量维持在30kg/h；分离后的提取物进行干燥即得提取物d；将浸膏a、浸膏b、提取物d用高速搅拌机进行搅拌均匀，再加昆布、积雪草、橘红、天南星和黑蚂蚁超微细粉搅拌均匀，最后再加入5∶1的羧甲基淀粉钠和磷酸氢钙24重量份混合搅拌均匀，制成片剂，每片0.25g。3.试验用药分别取处方1-处方6的片剂各100片，加蒸馏水分别配制成1g/10ml的溶液。取对照组1的胶囊剂100粒，去掉胶囊外壳，加蒸馏水配制成1g/10ml的溶液。取对照组2的汤剂300ml备用。取对照组3的丸剂100粒，加蒸馏水配制成1g/10ml的溶液。取对照组4的丸剂100粒，加蒸馏水配制成1g/10ml的溶液。4.对d-氨基半乳糖(d-galn)致小鼠急性肝损伤的影响本试验选用110只昆明种小鼠，雌雄各半。随机分成11组，模型组、处方1-6组，对照组1-4组，每组10只。处方1-6组和对照组1-4组分别灌胃相对应的药液，1次/d，给药体积20ml/kg，模型组灌胃1次/d，20ml/kg的蒸馏水，连续10天。于末次给药1小时后，各组均腹腔注射d-galn800mg/kg，禁食不禁水，24小时后小鼠摘眼球取血，离心，分离血清，按试剂盒方法检测丙氨酸氨基转移酶(alt)和天门冬氨酸氨基转移酶(ast)活性。采血后剖取肝左叶相同部位的一小块肝组织于10％福尔马林液中固定，进行常规切片，he染色，镜下观察病理改变。结果见表1表1d-galn)致小鼠急性肝损伤小鼠血清alt、ast的影响(x±s)组别给药剂量alt/u.l-1ast/u.l-1模型组-328.75±125.61301.83±115.65处方120ml/kg123.62±32.48151.23±35.68处方220ml/kg188.43±46.78197.42±43.56处方320ml/kg181.71±41.66191.03±38.79处方420ml/kg235.45±51.63243.08±45.71处方520ml/kg216.75±41.66223.45±41.39处方620ml/kg231.57±45.72201.03±38.79对照组120ml/kg205.17±42.42198.01±33.69对照组220ml/kg187.45±45.72179.32±36.79对照组320ml/kg194.37±48.22187.05±38.64对照组420ml/kg209.13±49.33202.47±42.38结果表明，处方1与处方2-6比较，处方1可明显降低小鼠血清alt和ast的水平，与处方2-6比较有显著差异。说明相同的原料药不同的配比，所带来效果是明显不同的。处方1与对照组1-4比较，处方1可明显降低小鼠血清alt和ast的水平，与对照组1-4比较有显著差异。5、四氯化碳(cc14)致大鼠肝纤维的影响本试验选用110只昆明种小鼠，雌雄各半。随机分成11组，模型组、处方1-6组，对照组1-4组，每组10只。各组小鼠均腹腔注射40％cc14植物油溶液，每周两次，连续8周。造模同时给药组开始给药，处方1-6组和对照组1-4组分别灌胃相对应的药液，1次/d，给药体积20ml/kg，模型组灌胃1次/d，20ml/kg的蒸馏水，连续给药8周。于末次给药后禁食20小时后，腹主动脉取血后处死，离心，分离血清，检测alt、ast、总胆红素(tbil)。结果见表2表2四氯化碳(cc14)致肝纤维大鼠血清生化指标的影响上述表2结果可以看出，处方1组对cc14致肝纤维化大鼠血清的生化指标alt、ast、tbil效果最好，对急性肝损伤有很好的保护作用，与其他9组比较，有显著差异。5、小鼠肝癌的抑制作用5.1受试药物本试验选用110只昆明种小鼠，雌雄各半。随机分成11组，模型组、处方1-6组，对照组1-4组，每组10只。处方1-6组和对照组1-4组分别灌胃相对应的药液，1次/d，给药体积20ml/kg，模型组灌胃1次/d，20ml/kg的蒸馏水。5.2、瘤株：小鼠肝癌：由中国医科院药物所癌症室提供。5.3仪器：紫外分光光度计：日本岛津uv-1601pc离心机：lxj-ii型，编号6260，上海医用分析仪器厂精密电子分析天平：eb-280m-22型，日本kyoto公司酶标仪：dg-3022a型华东电子仪器厂5.4动物模型的建立小鼠腹腔内传代7天肝癌瘤株，无菌取出后，用生理盐水洗涤2次，计数并调细胞到1×107个/ml，并接种到小鼠腹腔内，每只鼠接种上述细胞悬液为0.2ml。5.5对小鼠肝癌的抑制作用取上述小鼠模型，每日给药一次，连续10日。于停药后24小时脱臼处死，称取体重、瘤重、胸腺、脾脏重量(计算胸腺和脾脏指数)。计算癌症生长抑制率＝(c-t)/c×100％t：实验组平均体重c：对照组平均瘤重。结果显示，见表3表3小鼠肝癌的抑制组别给药剂量肝癌抑制率(％)模型组-5.78％处方120ml/kg55.38％处方220ml/kg32.65％处方320ml/kg28.42％处方420ml/kg15.69％处方520ml/kg17.21％处方620ml/kg11.95％对照组120ml/kg9.43％对照组220ml/kg12.01％对照组320ml/kg8.78％对照组420ml/kg14.03％上述结果可知，处方1对抑制肝癌有显著作用，抑制率能达到55.38％，说明处方1对小鼠移植性癌症具有明显的抑制癌症生长的作用，与其他9组比较有显著差异。6、小鼠生存期影响本试验选用110只昆明种小鼠，雌雄各半。随机分成11组，模型组、处方1-6组，对照组1-4组，每组10只。处方1-6组和对照组1-4组分别灌胃相对应的药液，1次/d，给药体积20ml/kg，模型组灌胃1次/d，20ml/kg的蒸馏水，连续10日。第11天停药，以后每天观察记录小鼠死亡情况并记录，结果计算小鼠生命延长率。表4小鼠生命延长率结果显示，处方1对小鼠肝癌的生命有显著的延长，生命延长率为68.64，与其他9组比较有显著差异7、小鼠的镇痛作用本试验选用110只昆明种小鼠，雌雄各半。随机分成11组，模型组、处方1-6组，对照组1-4组，每组10只。处方1-6组和对照组1-4组分别灌胃相对应的药液，1次/d，给药体积20ml/kg，模型组灌胃1次/d，20ml/kg的蒸馏水，给药1小鼠后，各鼠均腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只。观察15分钟内各鼠出现的扭体反应次数。表5、对醋酸扭体反应的镇痛作用(x±s)结果显示：处方1具有明显的镇痛作用，并有明显的量效关系，处方1与其他9组比较有显著差异。实验例二、原料药玉米须、牡丹皮和鸦胆子在酶种类及用量的筛选实验1.原料玉米须、牡丹皮和鸦胆子在选择酶种类的筛选实验酶或复合酶(酶种类见表6)与玉米须、牡丹皮和鸦胆子(其中玉米须100g、牡丹皮100g、鸦胆子100g)的配比为：酶或复合酶30g，玉米须、牡丹皮和鸦胆子共计300g；将玉米须、牡丹皮和鸦胆子加8倍量水浸泡30分钟，加入30重量份的复合酶，所述复合酶为4∶1的木瓜蛋白酶和纤维素酶，先进行40℃30分钟的酶解，然后煎煮两次，每次1小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至50℃测相对密度为1.35～1.40的浸膏；用表7中的9种酶或复合酶按照上述配比及提取方法提取玉米须、牡丹皮和鸦胆子，不同酶种间提取的得率差异明显，其中以木瓜蛋白酶和纤维素酶(4∶1)配合的复合酶效果最为显著，与其他种类的酶进行比较，得率提高有显著差异。详见表7。表7酶种类的筛选试验结果(玉米须、牡丹皮和鸦胆子)根据表7酶种类的筛选试验结果显示，组号7木瓜蛋白酶和纤维素酶(4∶1)在提取玉米须、牡丹皮和鸦胆子的得率最高，与其他酶比较有显著差异，因此复合酶优选木瓜蛋白酶和纤维素酶(4∶1)。2、木瓜蛋白酶和纤维素酶的比例筛选表8木瓜蛋白酶和纤维素酶的比例筛选试验结果根据表8木瓜蛋白酶和纤维素酶的比例筛选试验结果显示，组号1木瓜蛋白酶和纤维素酶(4∶1)的比例在提取玉米须、牡丹皮和鸦胆子时得到的得率为最高，与其他比例比较有显著差异。因此木瓜蛋白酶和纤维素酶的比例优选4∶1。3、复合酶(木瓜蛋白酶和纤维素酶)用于提取玉米须、牡丹皮和鸦胆子的用量筛选表9复合酶用于提取玉米须、牡丹皮和鸦胆子的用量筛选试验结果根据表9试验结果得出，复合酶选择高剂量时，原料药玉米须、牡丹皮和鸦胆子的得率不仅没有提高还有下降，复合酶在低剂量时原料药玉米须、牡丹皮和鸦胆子的得率明显下降，只有选择适中的量(即在30g)时原料药玉米须、牡丹皮和鸦胆子的得率为最高。因此并非是复合酶的剂量越高，原料药的提取得率就高，只有复合酶量在30g时提取得率最高。因此复合酶的量优选为30g。下述实施例均能实现上述实验例的效果。具体实施方式实施例1片剂分别取1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星及全部黑蚂蚁超微粉碎得超微细粉，在超微粉碎过程中喷入40g干冰作为冷却剂；在超微粉碎中至少85％以上的微粉粒径不超过6微米；将余下1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星洗净，加8倍量的水浸泡30分钟，然后进行煎煮，第一次煎煮2小时，过滤得滤液；药渣再用4倍量的水煎煮1.5小时，过滤，得滤液，合并两次滤液，过滤，滤液离心分离，3000rpm离心，离心4分钟，分离上清液，水浴蒸干浓缩至1.25-1.30的浸膏a；将玉米须、牡丹皮和鸦胆子加8倍量水浸泡30分钟，加入30g的复合酶，所述复合酶为4∶1的木瓜蛋白酶和纤维素酶，先进行40℃30分钟的酶解，然后煎煮两次，每次1小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至50℃测相对密度为1.35～1.40的浸膏b；将余下的半边莲、葶苈子、地骨皮、鸡血藤、人参、红花、三七和沉香8味原料药超微粉碎至40目，将超微粉放在co2萃取釜中浸泡3小时，控制萃取釜中压力为25mpa；将浸泡后的超微粉在分离釜中进行分离，控制分离釜中分离压力值为6mpa，加温至40℃，保持5小时，co2的流量维持在30kg/h；分离后的提取物进行干燥即得提取物d；将浸膏a、浸膏b、提取物d用高速搅拌机进行搅拌均匀，再加昆布、积雪草、橘红、天南星和黑蚂蚁超微细粉搅拌均匀，最后再加入5∶1的羧甲基淀粉钠和磷酸氢钙24g混合搅拌均匀，制成片剂，每片0.25g，每日两次，每次2片。实施例2胶囊剂分别取1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星及全部黑蚂蚁超微粉碎得超微细粉，在超微粉碎过程中喷入40g干冰作为冷却剂；在超微粉碎中至少85％以上的微粉粒径不超过6微米；将余下1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星洗净，加8倍量的水浸泡30分钟，然后进行煎煮，第一次煎煮2小时，过滤得滤液；药渣再用4倍量的水煎煮1.5小时，过滤，得滤液，合并两次滤液，过滤，滤液离心分离，3000rpm离心，离心4分钟，分离上清液，水浴蒸干浓缩至1.25-1.30的浸膏a；将玉米须、牡丹皮和鸦胆子加8倍量水浸泡30分钟，加入30g的复合酶，所述复合酶为4∶1的木瓜蛋白酶和纤维素酶，先进行40℃30分钟的酶解，然后煎煮两次，每次1小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至50℃测相对密度为1.35～1.40的浸膏b；将余下的半边莲、葶苈子、地骨皮、鸡血藤、人参、红花、三七和沉香8味原料药超微粉碎至40目，将超微粉放在co2萃取釜中浸泡3小时，控制萃取釜中压力为25mpa；将浸泡后的超微粉在分离釜中进行分离，控制分离釜中分离压力值为6mpa，加温至40℃，保持5小时，co2的流量维持在30kg/h；分离后的提取物进行干燥即得提取物d；将浸膏a、浸膏b、提取物d用高速搅拌机进行搅拌均匀，再加昆布、积雪草、橘红、天南星和黑蚂蚁超微细粉搅拌均匀，最后再加入5∶1的羧甲基淀粉钠和磷酸氢钙24g混合搅拌均匀，制成胶囊剂。每粒0.25g，每日二次，每次2粒。实施例3颗粒剂分别取1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星及全部黑蚂蚁超微粉碎得超微细粉，在超微粉碎过程中喷入40g干冰作为冷却剂；在超微粉碎中至少85％以上的微粉粒径不超过6微米；将余下1/2的昆布、1/2的积雪草、1/2的橘红、1/2的天南星洗净，加8倍量的水浸泡30分钟，然后进行煎煮，第一次煎煮2小时，过滤得滤液；药渣再用4倍量的水煎煮1.5小时，过滤，得滤液，合并两次滤液，过滤，滤液离心分离，3000rpm离心，离心4分钟，分离上清液，水浴蒸干浓缩至1.25-1.30的浸膏a；将玉米须、牡丹皮和鸦胆子加8倍量水浸泡30分钟，加入30g的复合酶，所述复合酶为4∶1的木瓜蛋白酶和纤维素酶，先进行40℃30分钟的酶解，然后煎煮两次，每次1小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至50℃测相对密度为1.35～1.40的浸膏b；将余下的半边莲、葶苈子、地骨皮、鸡血藤、人参、红花、三七和沉香8味原料药超微粉碎至40目，将超微粉放在co2萃取釜中浸泡3小时，控制萃取釜中压力为25mpa；将浸泡后的超微粉在分离釜中进行分离，控制分离釜中分离压力值为6mpa，加温至40℃，保持5小时，co2的流量维持在30kg/h；分离后的提取物进行干燥即得提取物d；将浸膏a、浸膏b、提取物d用高速搅拌机进行搅拌均匀，再加昆布、积雪草、橘红、天南星和黑蚂蚁超微细粉搅拌均匀，最后再加入5∶1的羧甲基淀粉钠和磷酸氢钙24g混合搅拌均匀，制成颗粒剂。每袋10g，每日二次，每次1袋。实施例4丸剂将上述药物按照常规工艺加入常规辅料制成丸剂。实施例5口服液将上述药物按照常规工艺加入常规辅料制成口服液。实施例6片剂将上述药物按照常规工艺加入常规辅料制成片剂。当前第1页12