包括转移抑制剂的共疗法的制作方法
本技术总体地涉及用于治疗或预防癌症的化合物、组合物和方法。
背景技术：
肿瘤转移是癌症患者死亡的主要原因。抑制肿瘤转移将显著提高癌症患者的存活率。转移是一个多步过程，其中原发性肿瘤从其初始位点扩散到次生组织/器官。weiss,l.metastasisofcancer:aconceptualhistoryfromantiquitytothe1990s.cancermetastasisrev19,i-xi,193-383(2000)；fidler,i.j.thepathogenesisofcancermetastasis:the'seedandsoil'hypothesisrevisited.natrevcancer3,453-458(2003)；valastyan,s.&weinberg,r.a.tumormetastasis:molecularinsightsandevolvingparadigms.cell147,275-292,(2011)。肿瘤细胞迁移和器官侵犯是转移中的关键步骤。ndeelis,j.,singer,r.h.&segall,j.e.thegreatescape:whencancercellshijackthegenesforchemotaxisandmotility.annurevcelldevbiol21,695-718(2005)。迁移向肿瘤细胞提供了离开原发性肿瘤床(局部侵犯)、进入血管、然后离开循环并渗入远处的组织/器官的能力。对局部肿瘤生长的生物学有着重要的新见解，并且这些见解正被用作治疗的新目标。但是，了解和中断肿瘤转移的过程也至关重要，因为这最终是导致癌症死亡的终点事件。
为了进行细胞迁移和侵犯，肌动蛋白细胞骨架必须通过形成聚合物和束来重组以引起细胞形状的动态变化。同上；mogilner,a.&rubinstein,b.thephysicsoffilopodialprotrusion.biophysj89,782-795(2005)；pollard,t.d.&cooper,j.a.actin,acentralplayerincellshapeandmovement.science326,1208-1212,(2009)。在肌动蛋白丝支承的形态结构中，最显著的突出细胞器中的一者是丝状伪足，其是细胞形状和运动性事件的基础。mattila,p.k.&lappalainen,p.filopodia:moleculararchitectureandcellularfunctions.natrevmolcellbiol9,446-454,(2008)。丝状伪足是质膜下方肌动蛋白细胞骨架重塑时形成的手指样质膜突起。可以将它们视为细胞的用于检测和同化信号以及探索并移入周围的微环境的感觉器官。avenport,r.w.,dou,p.,rehder,v.&kater,s.b.asensoryroleforneuronalgrowthconefilopodia.nature361,721-724,doi:10.1038/361721a0(1993)；bentley,d.&toroian-raymond,a.disorientedpathfindingbypioneerneuronegrowthconesdeprivedoffilopodiabycytochalasintreatment.nature323,712-715,doi:10.1038/323712a0(1986)；sanders,t.a.,llagostera,e.&barna,m.specializedfilopodiadirectlong-rangetransportofshhduringvertebratetissuepatterning.nature497,628-632,doi:10.1038/nature12157(2013)。它们含有通过成束蛋白交联成平行束的长肌动蛋白丝。转移性肿瘤细胞富含丝状伪足，并且丝状伪足的数量与其侵犯性相关。丝状伪足样突起也已被证明对于转移性肿瘤细胞与转移性微环境相互作用并在次生组织处生长至关重要。ue,t.,brooks,m.w.,inan,m.f.,reinhardt,f.&weinberg,r.a.theoutgrowthofmicrometastasesisenabledbytheformationoffilopodium-likeprotrusions.cancerdiscovery2,706-721(2012)。
成束蛋白是丝状伪足中主要的肌动蛋白交联剂，并且没有显示出与其他肌动蛋白结合蛋白的氨基酸序列同源性。j.j.,kane,r.e.&bryan,j.formationoffilopodiaincoelomocytes:localizationoffascin,a58,000daltonactincross-linkingprotein.cell17,285-293(1979)；bryan,j.&kane,r.e.separationandinteractionofthemajorcomponentsofseaurchinactingel.jmolbiol125,207-224(1978)；yamashiro-matsumura,s.&matsumura,f.purificationandcharacterizationofanf-actin-bundling55-kilodaltonproteinfromhelacells.jbiolchem260,5087-5097(1985)；vignjevic,d.等人，formationoffilopodia-likebundlesinvitrofromadendriticnetwork.jcellbiol160,951-962(2003)；vignjevic,d.等人，roleoffascininfilopodialprotrusion.jcellbiol174,863-875(2006)；adams,j.c.rolesoffascinincelladhesionandmotility.curropincellbiol16,590-596(2004)。它的分子量约为55kda，并且用作单体。它将10至30条平行的肌动蛋白丝固定在一起为直的、紧凑的和刚性的束，以形成丝状伪足(直径为60nm至200nm)并赋予肌动蛋白束不同的机械刚度。tilney,l.g.,connelly,p.s.,vranich,k.a.,shaw,m.k.&guild,g.m.whyaretwodifferentcross-linkersnecessaryforactinbundleformationinvivoandwhatdoeseachcross-linkcontribute？jcellbiol143,121-133(1998)；claessens,m.m.,bathe,m.,frey,e.&bausch,a.r.actin-bindingproteinssensitivelymediatef-actinbundlestiffness.natmater5,748-753(2006)。当在肿瘤细胞中异位表达时，成束蛋白促进肿瘤细胞迁移、侵犯和转移。himoto,y.,kim,d.j.&adams,j.c.therolesoffascinsinhealthanddisease.thejournalofpathology224,289-300(2011)。已经提出，成束蛋白的上调是上皮-至-间质转化程序的一部分，该程序赋予肿瘤细胞以运动性和侵犯性。machesky,l.m.&li,a.fascin:invasivefilopodiapromotingmetastasis.communintegrbiol3,263-270(2010)。
对来自人癌症患者的样品的研究表明，成束蛋白是转移的生物标志物，并且成束蛋白是良好的治疗靶标。darnel,a.d.等人，fascinregulatesprostatecancercellinvasionandisassociatedwithmetastasisandbiochemicalfailureinprostatecancer.clincancerres15,1376-1383,doi:15/4/1376[pii]10.1158/1078-0432.ccr-08-1789(2009)；pelosi,g等人，independentvalueoffascinimmunoreactivityforpredictinglymphnodemetastasesintypicalandatypicalpulmonarycarcinoids.lungcancer42,203-213(2003)；hashimoto,y.,shimada,y.,kawamura,j.,yamasaki,s.&imamura,m.theprognosticrelevanceoffascinexpressioninhumangastriccarcinoma.oncology67,262-270(2004)；cao,d.,ji,h.&ronnett,b.m.expressionofmesothelin,fascin,andprostatestemcellantigeninprimaryovarianmucinoustumorsandtheirutilityindifferentiatingprimaryovarianmucinoustumorsfrommetastaticpancreaticmucinouscarcinomasintheovary.intjgynecolpathol24,67-72(2005)；rodriguez-pinilla,s.m.等人，prognosticsignificanceofbasal-likephenotypeandfascinexpressioninnode-negativeinvasivebreastcarcinomas.clincancerres12,1533-1539(2006)。在许多类型的转移性肿瘤中都发现成束蛋白的水平升高，并且其与临床上具有侵袭性的表型、预后差和生存期较短有关。tan,v.y.,lewis,s.j.,adams,j.c.&martin,r.m.associationoffascin-1withmortality,diseaseprogressionandmetastasisincarcinomas:asystematicreviewandmeta-analysis.bmcmed11,52(2013)。人成束蛋白的表达在正常的成人上皮细胞中是低的或不存在的，但在转移性肿瘤中高表达。rothey,a.,hashizume,r.,sahin,a.a.&mccrea,p.d.fascin,anactin-bundlingproteinassociatedwithcellmotility,isupregulatedinhormonereceptornegativebreastcancer.brjcancer83,870-873(2000)；hashimoto,y.,skacel,m.&adams,j.c.rolesoffascininhumancarcinomamotilityandsignaling:prospectsforanovelbiomarker？theinternationaljournalofbiochemistry&cellbiology37,1787-1804(2005)。26项免疫组织化学研究(总共约9,000名癌症患者)的系统综述和荟萃分析揭示了，高成束蛋白水平与死亡、淋巴结转移、远处转移和疾病进展的风险增加相关，并且可为早期识别侵袭性和转移性肿瘤提供新型生物标志物。此外，73项免疫组织化学研究(总计约5,000名癌症患者)的另一项系统综述和荟萃分析揭示了多种生物标志物(包括成束蛋白)的预后总存活率。ruys,a.t.等人，prognosticbiomarkersinpatientswithresectedcholangiocarcinoma:asystematicreviewandmeta-analysis.annalsofsurgicaloncology21,487-500,doi:10.1245/s10434-013-3286-x(2014)。此外，来自122名胰腺癌患者的研究表明，较高水平的成束蛋白与不良结果、复发时间和总存活率降低相关。li,a.等人，fascinisregulatedbyslug,promotesprogressionofpancreaticcancerinmice,andisassociatedwithpatientoutcomes.gastroenterology146,1386-1396(2014)。总之，来自人癌症患者的这些数据可表明成束蛋白在癌症进展和转移中的作用。
小鼠遗传学研究显示，成束蛋白基因敲除的小鼠是正常的，这可能是由于在胚胎发育过程中其他肌动蛋白-成束蛋白的功能性补偿所致。yamakita,y.,matsumura,f.&yamashiro,s.fascin1isdispensableformousedevelopmentbutisfavorableforneonatalsurvival.cellmotilcytoskeleton66,524-534(2009)。
用检查点抑制剂进行的癌症免疫疗法已对许多类型的癌症的治疗产生了重大影响。sharma,p.&allison,j.p.thefutureofimmunecheckpointtherapy.science348,56-61(2015)。当成功时，免疫疗法(诸如细胞毒性t-淋巴细胞抗原4(ctla-4)或程序性细胞死亡1(pd-1)的抗体抑制剂)使患者的寿命比化学疗法和放射疗法延长数月或数年。然而，只有约25％至30％的患者从免疫疗法中受益，并且已知免疫疗法对某些患者产生显著的免疫相关副作用。
因此，需要在现有的癌症治疗方法上改进的新型治疗方法。
技术实现要素：
本文公开的实施方式包括增加有需要的患者中对化学治疗剂或免疫治疗剂的响应的方法，包括：向患者施用由式(i)表示的化合物：
在一些实施方式中，患者正在经历或即将经历免疫疗法。在一些实施方式中，免疫疗法选自免疫检查点抑制剂，诸如抗pd-1抗体或抗ctla-4抗体。在一些实施方式中，患者正在经历或即将经历化学疗法。在一些实施方式中，化学疗法选自紫杉醇、环磷酰胺或多柔比星。在一些实施方式中，由式(i)表示的化合物和化学治疗剂或免疫治疗剂在彼此的一年内或至多18个月内施用。在一些实施方式中，由式(i)表示的化合物和化学治疗剂或免疫治疗剂在彼此的一个月内施用。在一些实施方式中，由式(i)表示的化合物和化学治疗剂或免疫治疗剂一起施用(co-administered)。在一些实施方式中，患者患有癌症。在一些实施方式中，癌症选自由以下组成的组：恶性上皮肿瘤(carcinoma)、淋巴瘤、肉瘤、黑素瘤、星形细胞瘤、间皮瘤、结肠癌(coloncarcinoma)、胰腺癌、食管癌、胃癌(stomachcarcinoma)、泌尿系统癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌(gastriccancer)、白血病、肺癌、结肠癌(coloncancer)、中枢神经系统癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌、肝癌、头颈癌、甲状腺癌、脑癌、口腔癌、胆囊癌、壶腹癌、胆管癌和喉癌。在一些实施方式中，在所述式i的化合物中，r2是任选地被1个至4个r4取代的5元杂芳基或6元杂芳基。在一些实施方式中，在所述式i的化合物中，r2任选地被1个至4个r4取代，并且r2选自由以下组成的组：呋喃、苯并呋喃、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、噻吩、噻唑、异噻唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、咪唑、吡咯和吡唑。在一些实施方式中，在式i的化合物中，r2选自由以下组成的组：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，式i的化合物是
其他实施方式包括治疗有需要的患者中的癌症的方法，包括向患者施用化学治疗剂或免疫治疗剂和由式(i)表示的化合物：
在一些实施方式中，患者正在经历或即将经历免疫疗法。在一些实施方式中，免疫疗法选自免疫检查点抑制剂，诸如抗pd-1抗体或抗ctla-4抗体。在一些实施方式中，患者正在经历或即将经历化学疗法。在一些实施方式中，化学疗法选自紫杉醇、环磷酰胺或多柔比星。在一些实施方式中，由式(i)表示的化合物和化学治疗剂或免疫治疗剂在彼此的一年内或至多18个月内施用。在一些实施方式中，由式(i)表示的化合物和化学治疗剂或免疫治疗剂在彼此的一个月内施用。在一些实施方式中，由式(i)表示的化合物和化学治疗剂或免疫治疗剂一起施用。在一些实施方式中，癌症选自由以下组成的组：恶性上皮肿瘤、淋巴瘤、肉瘤、黑素瘤、星形细胞瘤、间皮瘤、结肠癌、胰腺癌、食管癌、胃癌、泌尿系统癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、白血病、肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌、肝癌、头颈癌、甲状腺癌、脑癌、口腔癌、胆囊癌、壶腹癌、胆管癌和喉癌。在一些实施方式中，癌症选自由以下组成的组：神经内分泌前列腺癌、活化的b细胞亚型的弥散性大b细胞淋巴瘤和三阴性乳腺癌。在一些实施方式中，在所述式i的化合物中，r2是任选地被1个至4个r4取代的5元杂芳基或6元杂芳基。在一些实施方式中，在所述式i的化合物中，r2任选地被1个至4个r4取代，并且r2选自由以下组成的组：呋喃、苯并呋喃、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、噻吩、噻唑、异噻唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、咪唑、吡咯和吡唑。在一些实施方式中，在式i的化合物中，r2选自由以下组成的组：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，式i的化合物是
附图说明
图1.小鼠中成束蛋白抑制剂np-g2-044的药代动力学(pk)和药效动力学(pd)研究。(a)np-g2-044的化学结构。(b)小鼠中的np-g2-044的pk曲线。将np-g2-044静脉内(以20mg/kg，左图)或经口(以20mg/kg，中图；以50mg/kg，右图)施用至小鼠中。在不同时间点采集血样。然后提取血浆样品，并通过lc-ms/ms测定np-g2-044的浓度。显示了浓度-时间曲线。(c至f)np-g2-044作为单一剂阻断了肿瘤转移。(c和d)将mda-mb-231人乳腺肿瘤细胞植入乳腺脂肪垫中并定量至肺的转移。qd：每天一次。bid：每天两次，使用不同浓度的np-g2-044治疗。每组有3至4只小鼠。数据显示为平均值±sem。(e)苏木精和曙红染色的代表性图像显示，在处死小鼠后，注射了用对照溶剂处理或用100mg/kgnp-g2-044处理的mda-mb-231细胞的小鼠的肺组织切片。(f和g)将4t1小鼠乳腺肿瘤细胞植入乳腺脂肪垫中，并定量至肺的转移。每组有3至4只小鼠。数据显示为平均值±sem。(h和i)在不同时间点施用时np-g2-044对肿瘤转移的影响。将4t1乳腺肿瘤细胞植入脂肪垫中。在第8天给予使用紫杉醇(20mg/kg，每周两次)的化学疗法。在第15天通过手术切除原发性肿瘤。在第32天对肺中转移性肿瘤定量。100mg/kg的np-g2-044从第4天、第8天或第15天开始每天给予小鼠一次。每组有2至4只小鼠。数据显示为平均值±sem。
图2.成束蛋白抑制剂np-g2-044提高了荷瘤小鼠的总存活率。用成束蛋白抑制剂、化学疗法或成束蛋白抑制剂+化学疗法的组合处理植入了mda-mb-231肿瘤细胞的nsg小鼠。在第29天通过外科手术切除原发性肿瘤。化学疗法处理持续4周(如标记)。np-g2-044从第1天开始。(a和b)成束蛋白抑制剂、化学疗法和组合均提高了荷瘤小鼠的总存活率。(a)针对(b)中所示数据的实验方案。(b)来自四组小鼠的小鼠的总存活率曲线。(c和d)在组合疗法中，np-g2-044的较早治疗(从第1天或第8天开始)的效果好于从第15天开始的晚期治疗。(c)(d)中所示数据的实验方案。(d)来自三个不同组的小鼠的总存活率曲线。从第1天开始的组与(b)中的第四组是相同的组。死亡用作终点。每组有3至5只小鼠。
图3.成束蛋白抑制剂增强了免疫疗法响应。(a)对原发性肿瘤生长的影响。每周测量原发性肿瘤体积，直到对照组中的所有小鼠死亡。数据显示为平均值±sem。(b和c)成束蛋白抑制剂、免疫疗法(抗pd-1抗体和抗ctla-4抗体)和组合均提高了荷瘤小鼠的总存活率。(b)针对(c)中所示数据的实验方案。(c)来自四组小鼠的小鼠的总存活率曲线。(d和e)在组合疗法中，np-g2-044的早期治疗(在第8天开始)和晚期治疗(在第22天开始)均增强了免疫疗法响应。(d)针对(e)中所示数据的实验方案。(e)来自两个不同组的小鼠的总存活率曲线。从第8天开始的组与(c)中的第四组是相同的组。死亡用作终点。每组有7至10只小鼠。
具体实施方式
在下面的详述中，参考了构成其一部分的附图。在附图中，除非上下文另外指出，否则相似的符号通常标识相似的组分。在详述、附图和权利要求中描述的说明性实施方式并不意味着是限制性的。在不脱离本文提出的主题的精神或范围的情况下，可以利用其他实施方式，并且可以进行其他改变。
定义
如整个说明书中所阐述的，本文中使用几种定义来描述技术。
在描述要素的上下文中(尤其在所附权利要求的上下文中)术语“一”、“一个”和“该”以及类似指代物的使用应解释为涵盖单数和复数，除非在本文另外指出或与上下文明显矛盾。
如本文所用，“约”将被本领域普通技术人员理解，并且将在一定程度上根据其使用的上下文而变化。如果存在本领域普通技术人员不清楚的术语的使用，则在给定使用其的上下文的情况下，“约”意指特定术语的至多加或减10％。
不在两个字母或符号之间的破折号(“-”)用于指示取代基的附接点。例如，-conh2通过碳原子附接。
“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形可能发生或可能不发生，并且该描述包括事件或情形发生的情况以及事件或情形不发生的情况。例如，“任选地取代的烷基”涵盖了如本文所定义的“烷基”和“经取代的烷基”。对于含有一个或多个取代基的任何基团，本领域技术人员将理解，这些基团不旨在引入在空间上不切实际、合成上不可行和/或固有地不稳定的任何取代或取代模式。
“烷基”涵盖了具有指定数目的碳原子的直链和支链，通常为1至20个碳原子，例如1至8个碳原子，诸如约1至6个碳原子。例如，c1-c6烷基涵盖了1至6个碳原子的直链和支链烷基。烷基基团的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基、3-甲基戊基等。亚烷基是烷基的另一个子集，是指与烷基相同的残基，但是具有两个附接点。亚烷基基团通常将具有2至20个碳原子，例如2至8个碳原子，诸如2至6个碳原子。例如，c0亚烷基指示共价键并且c1亚烷基是亚甲基基团。当命名具有特定碳数的烷基残基时，旨在涵盖具有此碳数的所有几何异构体；因此，例如，“丁基”意在包括正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基；“丙基”包括正丙基和异丙基。“低级烷基”是指具有1至4个碳的烷基基团。
“烯基”是指具有指定碳原子数(通常为1至8个碳原子，例如2至4个碳原子)并且具有至少1个且优选1至2个乙烯基(>c＝c<)不饱和键位点的直链或支链烃基基团。此类基团例如以乙烯基、烯丙基和丁-3-烯-1-基为例。该术语包括顺式异构体和反式异构体或这些异构体的混合物。“低级烯基”是指具有1至4个碳的烯基基团，其可以由c2-c4烯基指示。
“环烷基”指具有指定碳环原子数(例如3至10个或3至8个或3至6个环碳原子)的非芳族部分饱和或完全饱和的碳环。环烷基基团可以是单环或多环的(例如，双环、三环)。环烷基基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基和环己基，以及桥接和笼形的环基(例如降莰烷、双环[2.2.2]辛烷)。另外，多环环烷基基团的一个环可以是芳族的，条件是该多环环烷基基团经由非芳族碳与母体结构结合。例如，1,2,3,4-四氢萘-1-基基团(其中该部分经由非芳族碳原子结合至母体结构)是环烷基基团，而1,2,3,4-四氢萘-5-基(其中该部分经由芳族碳原子结合至母体结构)不被视为环烷基基团。下面描述由与芳族环稠合的环烷基基团组成的多环环烷基基团的实例。
“芳基”指在环中具有指定碳原子数(例如6至12个或6至10个碳原子)的芳族碳环。芳基可以是单环或多环的(例如，双环、三环)。在一些情况下，多环芳基基团的两个环都是芳族的(例如萘基)。在其他情况下，多环芳基基团可包括稠合至芳族环的非芳族环(例如，环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基)，条件是多环芳基基团经由芳族环中的原子结合至母体结构。因此，1,2,3,4-四氢萘-5-基基团(其中该部分经由芳族碳原子结合至母体结构)被认为是芳基基团，而1,2,3,4-四氢萘-1-基(其中该部分经由非芳族碳原子结合至母体结构)被认为不是芳基基团。类似地，1,2,3,4-四氢喹啉-8-基基团(其中该部分经由芳族碳原子结合至母体结构)被认为是芳基基团，而1,2,3,4-四氢喹啉-1-基基团(其中该部分经由非芳族氮原子结合至母体结构)被认为不是芳基基团。然而，术语“芳基”不涵盖如本文所定义的“杂芳基”或与如本文所定义的“杂芳基”重叠，无论附接点如何(例如，喹啉-5-基和喹啉-2-基均为杂芳基基团)。在一些情况下，芳基是苯基或萘基。在某些情况下，芳基是苯基。包含与非芳族环稠合的芳族碳环的芳基基团的其他实例在下文中描述。
“羧基(carboxy)”或“羧基(carboxyl)”是指-cooh或其盐。
“杂芳基”指含有指定数目的由一个或多个选自n、o和s的杂原子(例如1、2、3或4个杂原子)组成的环原子并且其余的环原子为碳的芳族环(例如，5至12元或5至10元杂芳基)。5元杂芳基是具有5个环原子的杂芳基。6元杂芳基是具有6个环原子的杂芳基。杂芳基基团不含有相邻的s和o原子。在一些实施方式中，杂芳基基团中s和o原子的总数不大于2。在一些实施方式中，杂芳基基团中s和o原子的总数不大于1。除非另有指示，否则在化合价允许的情况下，杂芳基基团可通过碳原子或氮原子结合至母体结构。例如，“吡啶基”包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基基团，并且“吡咯基”包括1-吡咯基、2-吡咯基和3-吡咯基基团。当氮存在于杂芳基环中时，在相邻原子和基团的性质允许的情况下，它可以以氧化态(即，n+-o-)存在。另外，当硫存在于杂芳基环中时，在相邻原子和基团的性质允许的情况下，它可以以氧化态(即，s+-o-或so2)存在。杂芳基基团可以是单环或多环的(例如，双环、三环)。
在一些情况下，杂芳基基团是单环的。实例包括吡咯、吡唑、咪唑、三唑(例如，1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、1,2,4-三唑)、四唑、呋喃、异噁唑、噁唑、噁二唑(例如，1,2,3-噁二唑、1,2,4-噁二唑、1,3,4-噁二唑)、噻吩、异噻唑、噻唑、噻二唑(例如，1,2,3-噻二唑、1,2,4-噻二唑、1,3,4-噻二唑)、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪(例如，1,2,4-三嗪、1,3,5-三嗪)和四嗪。
在一些情况下，多环杂芳基基团的两个环是芳族的。实例包括吲哚、异吲哚、吲唑、苯并咪唑、苯并三唑、苯并呋喃、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噁二唑、苯并噻吩、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并噻二唑、1h-吡咯并[2,3-b]吡啶、1h-吡唑并[3,4-b]吡啶、3h-咪唑并[4,5-b]吡啶、3h-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶、1h-吡咯并[3,2-b]吡啶、1h-吡唑并[4,3-b]吡啶、1h-咪唑并[4,5-b]吡啶、1h-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶、1h-吡咯并[2,3-c]吡啶、1h-吡唑并[3,4-c]吡啶、3h-咪唑并[4,5-c]吡啶、3h-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶、1h-吡咯并[3,2-c]吡啶、1h-吡唑并[4,3-c]吡啶、1h-咪唑并[4,5-c]吡啶、1h-[1,2,3]三唑并[4,5-c]吡啶、呋喃并[2,3-b]吡啶、噁唑并[5,4-b]吡啶、异噁唑并[5,4-b]吡啶、[1,2,3]噁二唑并[5,4-b]吡啶、呋喃并[3,2-b]吡啶、噁唑并[4,5-b]吡啶、异噁唑并[4,5-b]吡啶、[1,2,3]噁二唑并[4,5-b]吡啶、呋喃并[2,3-c]吡啶、噁唑并[5,4-c]吡啶、异噁唑并[5,4-c]吡啶、[1,2,3]噁二唑并[5,4-c]吡啶、呋喃并[3,2-c]吡啶、噁唑并[4,5-c]吡啶、异噁唑并[4,5-c]吡啶、[1,2,3]噁二唑并[4,5-c]吡啶、噻吩并[2,3-b]吡啶、噻唑并[5,4-b]吡啶、异噻唑并[5,4-b]吡啶、[1,2,3]噻二唑并[5,4-b]吡啶、噻吩并[3,2-b]吡啶、噻唑并[4,5-b]吡啶、异噻唑并[4,5-b]吡啶、[1,2,3]噻二唑并[4,5-b]吡啶、噻吩并[2,3-c]吡啶、噻唑并[5,4-c]吡啶、异噻唑并[5,4-c]吡啶、[1,2,3]噻二唑并[5,4-c]吡啶、噻吩并[3,2-c]吡啶、噻唑并[4,5-c]吡啶、异噻唑并[4,5-c]吡啶、[1,2,3]噻二唑并[4,5-c]吡啶、喹啉、异喹啉、噌啉、喹唑啉、喹喔啉、酞嗪、萘啶(例如，1,8-萘啶、1,7-萘啶、1,6-萘啶、1,5-萘啶、2,7-萘啶、2,6-萘啶)、咪唑并[1,2-a]吡啶、1h-吡唑并[3,4-d]噻唑、1h-吡唑并[4,3-d]噻唑和咪唑并[2,1-b]噻唑。
在其他情况下，多环杂芳基基团可包括稠合至杂芳基环的非芳族环(例如，环烷基、环烯基、杂环烷基、杂环烯基)，条件是多环杂芳基基团经由芳环中的原子与母体结构结合。例如，4,5,6,7-四氢苯并[d]噻唑-2-基基团(其中该部分经由芳族碳原子结合至母体结构)被认为是杂芳基基团，而4,5,6,7-四氢苯并[d]噻唑-5-基(其中该部分经由非芳族碳原子结合至母体结构)不被认为是杂芳基基团。由与非芳族环稠合的杂芳基环组成的多环杂芳基基团的实例在下文中描述。
“杂环烷基”指具有指定数目的由一个或多个选自n、o和s的杂原子(例如，1、2、3或4个杂原子)组成的环原子并且其余的环原子是碳的非芳族部分饱和或完全饱和的环(例如，3元至10元杂环烷基或3元至7元杂环烷基)。5元杂环烷基是具有5个环原子的杂环烷基。6元杂环烷基是具有6个环原子的杂环烷基。杂环烷基基团可以是单环的或多环的(例如，双环、三环)。杂环烷基基团的实例包括环氧乙烷基、氮丙啶基、氮杂环丁基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基和硫代吗啉基。当氮存在于杂环烷基环中时，在相邻原子和基团的性质允许的情况下，它可以以氧化态(即n+-o-)存在。实例包括哌啶基n-氧化物和吗啉基-n-氧化物。另外，当硫存在于杂环烷基环中时，在相邻原子和基团的性质允许的情况下，它可以以氧化态(即s+-o-或-so2-)存在。实例包括硫代吗啉s-氧化物和硫代吗啉s,s-二氧化物。另外，多环杂环烷基基团的一个环可以是芳族的(例如，芳基或杂芳基)，条件是该多环杂环烷基基团经由非芳族碳或氮原子结合至母体结构。例如，1,2,3,4-四氢喹啉-1-基基团(其中该部分经由非芳族氮原子结合至母体结构)被认为是杂环烷基基团，而1,2,3,4-四氢喹啉-8-基基团(其中该部分经由芳族碳原子结合至母体结构)被认为不是杂环烷基基团。由稠合至芳族环的杂环烷基基团组成的多环杂环烷基基团的实例在下文中描述。
“烷氧基”意指通过氧桥附接的指定数目的碳原子的烷基基团，诸如例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、2-戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基、3-甲基戊氧基等。烷氧基基团还意指涵盖同样通过氧桥附接的如上定义的环烷基基团。烷氧基基团通常将具有通过氧桥附接的1至6个碳原子。“低级烷氧基”是指具有1至4个碳的烷氧基基团。
术语“卤代”包括氟代、氯代、溴代和碘代，并且术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
如本文所用，术语“取代的”意指指定原子或基团上的任一个或多个氢被指定基团中的选择物所替代，条件是不超过指定原子的正常价。当取代基是氧代基(即，＝o)时，则原子上的2个氢被替代。仅当取代基和/或变量的组合产生稳定的化合物或有用的合成中间体时，才允许使用此类组合。稳定的化合物或稳定的结构意在指代足以稳健幸免于从反应混合物中分离以及随后配制成具有至少实际应用价值的试剂的化合物。除非另有说明，否则将取代基命名为核心结构。例如，应当理解，当将(环烷基)烷基列为可能的取代基时，该取代基与核心结构的附接点在烷基部分中。
“卤代烷基”是指被1至5个、1至3个或1至2个卤代基团取代的烷基基团，其中烷基和卤代如本文所定义。低级卤代烷基是指被1至5个、1至3个或1至2个卤代基团取代的c1-c4烷基。
“低级烷基苯基”是指c1-c4烷基-苯基。
“异构体”是具有相同分子式的不同化合物。“立体异构体”是仅原子在空间中排列方式不同的异构体。“对映异构体”是彼此不可重叠的镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是“外消旋”混合物。适当时，符号“(±)”可用于表示外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子但彼此不是镜像的立体异构体。“内消旋化合物”或“内消旋异构体”是一组立体异构体的非光学活性成员。内消旋异构体含有两个或多个立体中心，但不是手性的(即分子内存在对称平面)。绝对立体化学是根据cahn-ingold-prelogr-s体系指定的。当化合物是纯对映异构体时，每个手性碳处的立体化学都可以由r或s来指定。根据它们在钠d线波长的旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)，可以将其绝对构型未知的已拆分化合物指定为(+)或(-)。本文公开和/或描述的某些化合物含有一个或多个不对称中心，并因此可以产生对映异构体、非对映异构体、内消旋异构体和其他立体异构形式。除非另有说明，否则本文公开和/或描述的化合物包括所有此类可能的对映异构体、非对映异构体、内消旋异构体和其他立体异构形式，包括外消旋混合物、光学纯形式和中间混合物。对映异构体、非对映异构体、内消旋异构体和其他立体异构形式可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。除非另外指定，否则当本文公开和/或描述的化合物含有烯属双键或其他几何不对称中心时，意指该化合物包括e和z异构体两者。
“互变异构体”是通过互变异构化而互变的结构上不同的异构体。互变异构化是一种异构化形式，并且包括质子移变或质子转移互变异构化，它被认为是酸碱化学的子集。质子移变互变异构化或质子转移互变异构化涉及质子的迁移，伴随键顺序的改变，通常是单键与相邻双键的互换。当互变异构化是可能的(例如，在溶液中)时，可以实现互变异构体的化学平衡。互变异构化的实例是酮-烯醇互变异构化。酮-烯醇互变异构化的特定实例是戊烷-2,4-二酮和4-羟基戊-3-烯-2-酮互变异构体的互变。互变异构化的另一个实例是苯酚-酮互变异构化。苯酚-酮互变异构化的特定实例是吡啶-4-醇和吡啶-4(1h)-酮互变异构体的互变。当本文所述的化合物含有能够互变异构化的部分时，并且除非另有说明，否则该化合物意在包括所有可能的互变异构体。
本文记载的化合物的药学上可接受的形式包括药学上可接受的盐及其混合物。
“药学上可接受的盐”包括但不限于与无机酸形成的盐，诸如盐酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、亚磺酸盐、硝酸盐和类似的盐；以及与有机酸形成的盐，诸如苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2-羟乙基磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐，以及烷酸盐，诸如乙酸盐、hooc-(ch2)n-cooh，其中n为0至4，以及类似的盐。类似地，药学上可接受的阳离子包括但不限于钠、钾、钙、铝、锂和铵。
另外，如果获得呈酸加成盐的本文所述的化合物，则可以通过碱化酸式盐的溶液来获得游离碱。相反，如果产物是游离碱，则可以根据常规的从碱化合物制备酸加成盐的程序，通过将游离碱溶解在适合的有机溶剂中并用酸处理溶液来制备加成盐、特别是药学上可接受的加成盐。本领域技术人员将认识到可用于制备无毒的药学上可接受的加成盐的各种合成方法。
本文公开和/或描述的化合物可以是富集的同位素形式，例如，富含2h、3h、11c、13c和/或14c的含量。在一个实施方式中，该化合物含有至少一个氘原子。此类氘化形式可以例如通过美国专利no.5,846,514和美国专利no.6,334,997中描述的程序来制备。此类氘化化合物可以改善本文公开和/或描述的化合物的功效并增加其作用持续时间。氘取代的化合物可以使用多种方法合成，诸如以下中描述的那些：dean,d.,recentadvancesinthesynthesisandapplicationsofradiolabeledcompoundsfordrugdiscoveryanddevelopment,curr.pharm.des.,2000；6(10)；kabalka,g.等人,thesynthesisofradiolabeledcompoundsviaorganometallicintermediates,tetrahedron,1989,45(21),6601-21；和evans,e.,synthesisofradiolabeledcompounds,j.radioanal.chem.,1981,64(1-2),9-32。
如本文所用，术语“基团”、“自由基”或“片段”是同义词，并且旨在指可附接至分子的键或其他片段的分子的官能团或片段。
术语“活性剂”用于表示具有生物活性的物质。在一些实施方式中，“活性剂”是具有药物效用的物质。例如，活性剂可以是抗转移治疗剂。
术语“治疗有效量”或“有效量”意指当施用给人或非人对象时有效提供治疗益处(诸如改善症状、减缓疾病进展或预防疾病)或在体外或体内有效抑制成束蛋白活性的量，例如，治疗有效量可以是足以减轻响应于成束蛋白活性的抑制的疾病的症状的量。
“成束蛋白活性的抑制”是指相对于在不存在本文所述的至少一种化合物或其药学上可接受的盐下的成束蛋白活性，对本文所述的至少一种化合物或其药学上可接受的盐的存在的直接或间接响应的成束蛋白活性的降低。活性的降低可以是由于本文所述的至少一种化合物或其药学上可接受的盐与成束蛋白或与继而影响成束蛋白活性的一种或多种其他因子的直接相互作用导致的。
在一些实施方式中，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的ic50(抑制50％的成束蛋白活性的浓度)值为约500微摩尔、约100微摩尔、约10微摩尔、约1微摩尔、约500纳摩尔、约400纳摩尔、约300纳摩尔、约200纳摩尔、约100纳摩尔、约50纳摩尔、约10纳摩尔、小于约10纳摩尔或这些值中任两个之间和包括这些值中任两个的范围。
“对成束蛋白活性的抑制有响应的疾病”是其中抑制成束蛋白提供治疗益处的疾病，所述治疗益处诸如减轻症状、疾病进展减少、预防或延缓疾病发作、预防或减轻炎性响应、或抑制某些细胞类型(诸如癌细胞)的异常活性和/或死亡。
“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”意指对患者中的疾病的任何治疗，其包括：
a)预防疾病，即引起疾病的临床症状不发展；
b)抑制疾病的进展；
c)减缓或阻止临床症状的发展；和/或
d)减轻疾病，即引起临床症状消退。
“对象”或“患者’是指已经或将要成为治疗、观察或实验对象的动物，诸如哺乳动物。本文所述的方法可用于人疗法和兽医应用中。在一些实施方式中，对象是哺乳动物；并且在一些实施方式中，对象是人。
如本文所用，术语“癌症”包括实体哺乳动物肿瘤以及血液系统恶性肿瘤。术语“肿瘤细胞”和“癌细胞”在本文可互换使用。
“实体哺乳动物肿瘤”包括头颈癌、肺癌、间皮瘤癌、纵隔癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、肝胆系统癌、小肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、直肠癌、肛门癌、肾癌、尿道癌、膀胱癌、前列腺癌、尿道癌、阴茎癌、睾丸癌、妇科器官癌、卵巢癌、乳腺癌、内分泌系统癌、皮肤癌、中枢神经系统癌；软组织和骨骼的肉瘤；以及皮肤和眼内来源的黑素瘤。
术语“血液系统恶性肿瘤”包括儿童白血病和淋巴瘤、霍奇金氏病、淋巴细胞和皮肤来源的淋巴瘤、急性和慢性白血病、浆细胞赘生物和与aids有关的癌症。
此外，在这些实例和其他地方，缩写具有以下含义：
℃＝摄氏度
μl＝微升
μm＝微摩尔
ddt＝二硫苏糖醇
dmso＝二甲亚砜
g＝克
kg＝千克
hr或h＝小时
l＝升
m＝摩尔
nm＝纳摩尔
mg＝毫克
mhz＝兆赫
min＝分钟
ml＝毫升
mm＝毫米
mm＝毫摩尔
mmol＝毫摩尔
mol＝摩尔
pmsf＝苯基甲基磺酰氟
n＝正常
edta＝乙二胺四乙酸
μm＝微米
r.p.m＝每分钟转数
s.d.＝标准偏差
v/v＝体积/体积
wt＝重量
转移抑制剂化合物
本技术提供了用于共治疗的化合物，该化合物包括转移抑制剂(诸如美国专利申请no.13/972,649和14/626,791连同美国专利no.9,573,946中所述的成束蛋白抑制剂，其中的每一者通过引用整体并入)。
在一些实施方式中，转移抑制剂是选自式i、式ia或式ib的化合物：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐；
其中，
a1、a2、a3、a4、a5和a6独立地为ch、cr3或n，条件是a1、a2、a3、a4、a5和a6中的不多于四个是n；
r1是苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基任选地被1个至3个r6取代；
l2选自由以下组成的组：-nr8-、-c(o)nr8-、-nr8c(o)-、-c(o)cr82-、-cr82c(o)-、-nr8cr82-和-cr82nr8-；
r2是氢、低级烷基、6元至10元芳基或5元至10元杂芳基；其中，该6元至10元芳基或5元至10元杂芳基任选地被1个至4个r4取代，其中，每个r4独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、苯基(任选地被低级烷基、卤代、低级卤代烷基或-oh取代)、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor7、-nr10co2r7、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10和-nr10so2r7；
每个r3独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor7、-nr10co2r7、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10和-nr10so2r7；
m是0、1、2或3；
q是1、2或3；
每个r6独立地选自由以下组成的组：氰基、卤代、低级烷基(诸如甲基或乙基)、低级卤代烷基和-ch2oh；
r7是低级烷基(诸如甲基或乙基)或低级卤代烷基；
r8是氢或低级烷基(诸如甲基或乙基)；
每个r10独立地是氢或低级烷基(诸如甲基或乙基)，或两个r10连同与其附接的一个或多个原子一起形成4元至6元环；和
r11是氢或r3；
条件是化合物不是n-(1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吲唑-3-基)呋喃-2-甲酰胺。
在一些实施方式中，转移抑制剂是选自式ii的化合物的化合物：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐；
其中，
r1是苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，其中，该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基任选地被1个至3个r6取代；
l2选自由以下组成的组：-c(o)nh-、-nhc(o)-、-c(o)ch2-、-ch2c(o)-、-nhch2-和-ch2nh-；
r2是6元至10元芳基或5元至10元杂芳基；其中，该6元至10元芳基或5元至10元杂芳基任选地被1个至4个r4取代，其中，每个r4独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、苯基(任选地被低级烷基、卤代或低级卤代烷基或-oh取代)、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor7、-nr10co2r7、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10和-nr10so2r7；
每个r3独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor10、-nr10co2r10、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10和-nr10so2r7；
m是0、1、2或3；
n是0、1、2或3；
q是1、2或3；
每个r6独立地选自由以下组成的组：卤代、氰基、低级烷基(优选甲基或乙基)和低级卤代烷基；
r7是低级烷基(优选甲基或乙基)或低级卤代烷基；和
每个r10独立地是氢或低级烷基(优选甲基或乙基)，或两个r10连同与其附接的一个或多个原子一起形成4元至6元环；
条件是化合物不是n-(1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吲唑-3-基)呋喃-2-甲酰胺。
在一些实施方式中，转移抑制剂是选自式iiia、式iiib、式iiic或式iiid的化合物的化合物
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐；
其中，
r2是6元至10元芳基或5元至10元杂芳基；其中，该6元至10元芳基或5元至10元杂芳基任选地被1个至4个r4取代，其中，每个r4独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、苯基(任选地被低级烷基、卤代或低级卤代烷基或-oh取代)、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor7、-nr10co2r7、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10和-nr10so2r7；
每个r3独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor7、-nr10co2r7、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10和-nr10so2r7；
m是0、1、2或3；
n是0、1、2或3；
每个r6独立地选自由以下组成的组：卤代、氰基、低级烷基(优选甲基或乙基)和低级卤代烷基；
r7是低级烷基(优选甲基或乙基)；和
每个r10独立地是氢或低级烷基(优选甲基或乙基)，或两个r10连同与其附接的一个或多个原子一起形成4元至6元环；
条件是化合物不是n-(1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吲唑-3-基)呋喃-2-甲酰胺。
在一些实施方式中，转移抑制剂是选自式iva、式ivb、式ivc、式ivd、式ive、式ivf、式ivg、式ivh的化合物的化合物：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐；
其中，
r2是6元至10元芳基或5元至10元杂芳基；其中，该6元至10元芳基或5元至10元杂芳基任选地被1个至4个r4取代，其中，每个r4独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor10、-nr10co2r10、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10、苯基(任选地被低级烷基、卤代或低级卤代烷基或-oh取代)和-nr10so2r7；
每个r3独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor10、-nr10co2r10、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10和-nr10so2r7；
m是0、1、2或3；
r7是低级烷基(优选甲基或乙基)；和
每个r10独立地是氢或低级烷基(优选甲基或乙基)，或两个r10连同与其附接的一个或多个原子一起形成4元至6元环；
条件是化合物不是n-(1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吲唑-3-基)呋喃-2-甲酰胺。
在一些实施方式中，转移抑制剂是式viii、式viiia或式viiib的化合物：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐；
其中，
l2选自由以下组成的组：-nr8-、-c(o)nr8-、-nr8c(o)-、-c(o)cr82-、-cr82c(o)-、-nr8cr82-和-cr82nr8-；
r2a是氢或-nhc(o)r2，其中，r2是低级烷基、6元芳基或5元至10元杂芳基；其中，所述6元至10元芳基或5元至10元杂芳基任选地被1个至4个r4取代，其中，每个r4独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、苯基(任选地被低级烷基、卤代、低级卤代烷基或-oh取代)、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor7、-nr10co2r7、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10和-nr10so2r7；和
每个r3独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor7、-nr10co2r7、-sor7、-so2r7、-so2nr10r10和-nr10so2r7。
在一些实施方式中，l2是-c(o)nh-、-c(o)ch2-或-ch2nh-。
在一些实施方式中，a1是n并且a2、a3、a4、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2是n并且a1、a3、a4、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3是n并且a1、a2、a4、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4是n并且a1、a2、a3、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5是n并且a1、a2、a3、a4和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a6是n并且a1、a2、a3、a4和a5独立地为ch或cr3。
在一些实施方式中，a1和a2是n。在一些实施方式中，a3、a4、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3是n并且a4、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4是n并且a3、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5是n并且a3、a4和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a6是n并且a3、a4和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3和a4是n并且a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3和a5是n并且a4和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3和a6是n并且a4和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a5是n并且a3和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a6是n并且a3和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5和a6是n并且a3和a4独立地为ch或cr3。
在一些实施方式中，a1和a3是n。在一些实施方式中，a2、a4、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4是n并且a2、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5是n并且a2、a4和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a6是n并且a2、a4和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a4是n并且a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a5是n并且a4和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a6是n并且a4和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a5是n并且a2和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a6是n并且a2和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5和a6是n并且a2和a4独立地为ch或cr3。
在一些实施方式中，a1和a4是n。在一些实施方式中，a2、a3、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3是n并且a2、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5是n并且a2、a3和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a6是n并且a2、a3和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a3是n并且a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a5是n并且a3和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a6是n并且a3和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3和a5是n并且a2和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3和a6是n并且a2和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5和a6是n并且a2和a3独立地为ch或cr3。
在一些实施方式中，a1和a5是n。在一些实施方式中，a2、a4、a3和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4是n并且a2、a3和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3是n并且a2、a4和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a6是n并且a2、a4和a3独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a4是n并且a3和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a3是n并且a4和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a6是n并且a4和a3独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a3是n并且a2和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a6是n并且a2和a3独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3和a6是n并且a2和a4独立地为ch或cr3。
在一些实施方式中，a1和a6是n。在一些实施方式中，a2、a4、a5和a3独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4是n并且a2、a5和a3独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5是n并且a2、a4和a3独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3是n并且a2、a4和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a4是n并且a5和a3独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a5是n并且a4和a3独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a2和a3是n并且a4和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a5是n并且a2和a3独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a3是n并且a2和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5和a3是n并且a2和a4独立地为ch或cr3。
在一些实施方式中，a2是n。在一些实施方式中，a1是ch或cr3。在一些实施方式中，a3、a4、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3是n并且a4、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4是n并且a3、a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5是n并且a3、a4和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a6是n并且a3、a4和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3和a4是n并且a5和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3和a5是n并且a4和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a3和a6是n并且a4和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a5是n并且a3和a6独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a4和a6是n并且a3和a5独立地为ch或cr3。在一些实施方式中，a5和a6是n并且a3和a4独立地为ch或cr3。
在一些实施方式中，r1是苯基。在一些实施方式中，r1是三氟甲基苯基。在一些实施方式中，r1是4-三氟甲基苯基。在一些实施方式中，r1是4-氟苯基。在一些实施方式中，r1是4-氯苯基。在一些实施方式中，r1是4-甲基苯基。在一些实施方式中，r1是任选地被1个至3个r6取代的吡啶基。
在一些实施方式中，r2是任选地被1个至4个r4取代的苯基。在一些实施方式中，r2是任选地被1个至4个r4取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r2是任选地被1个至4个r4取代的6元杂芳基。在一些实施方式中，r2是被2个r4取代的苯基。在一些实施方式中，r2是被2个r4取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r2是被2个r4取代的6元杂芳基。在一些实施方式中，r2是被1个r4取代的苯基。在一些实施方式中，r2是被1个r4取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r2是被1个r4取代的6元杂芳基。
在一些实施方式中，r2是苯基、氯苯基、甲基呋喃。在一些实施方式中，r2选自由以下组成的组：噻吩、噻唑、异噁唑、噁唑、1,2,5-噁二唑、吡唑、嘧啶和哒嗪，它们任选地被甲基取代。在一些实施方式中，r2是哒嗪、异噁唑或噁唑。
在一些实施方式中，r2是任选地被1个至4个r4取代的5元杂芳基或6元杂芳基，其中，杂芳基包含选自n、o和s的两个杂原子。在一些实施方式中，r2是任选地被1个至4个r4取代的5元杂芳基或6元杂芳基，其中，杂芳基包含选自n和s的两个杂原子。
在一些实施方式中，r2是苯基。
在一些实施方式中，r2选自由以下组成的组：
在一些实施方式中，r2是
在一些实施方式中，r2是
在式viiia、式viiib或式viiic的一些实施方式中，r2是乙基或异丙基。在式viiia、式viiib或式viiic的一些实施方式中，r2是
在一些实施方式中，r2是任选地被1个至4个r4取代的r5，其中，r5选自由以下组成的组：呋喃、苯并呋喃、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、噻吩、噻唑、异噻唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、咪唑、吡咯和吡唑。在一些实施方式中，r2是被1个r4取代的r5。在一些实施方式中，r2是被2个r4取代的r5。在一些实施方式中，r2是被3个r4取代的r5。在一些实施方式中，r2是被4个r4取代的r5。
在一些实施方式中，r4选自由以下组成的组：低级烷基(诸如甲基)、卤代、低级卤代烷基、-oh、-or7、氰基和苯基(任选地被甲基取代)，其中，r7是低级烷基或低级卤代烷基。
在一些实施方式中，m是0。在一些实施方式中，m是1。在一些实施方式中，r3是卤代。在一些实施方式中，r3是低级烷基。
在一些实施方式中，n是1。
在一些实施方式中，r6是三氟甲基。在一些实施方式中，r6是氟代。在一些实施方式中，r6是氯代。在一些实施方式中，r6是甲基。在一些实施方式中，r6是氰基。在一些实施方式中，r6是4-三氟甲基。在一些实施方式中，r6是4-氟代。在一些实施方式中，r6是4-氯代。在一些实施方式中，r6是4-甲基。在一些实施方式中，r6是4-氰基。
在一些实施方式中，转移抑制剂是选自以下的化合物：
或其互变异构体、和/或药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，以上化合物中任一种中的基团
在一些实施方式中，转移抑制剂是选自以下的化合物：
或其互变异构体、和/或药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，以上化合物中任一种中的基团
在一些实施方式中，转移抑制剂是选自表2的化合物或其互变异构体、和/或药学上可接受的盐：
表2
在一个实施方式中，本技术提供了转移抑制剂，其是成束蛋白抑制ic50不大于100μm的成束蛋白抑制剂。在一些实施方式中，成束蛋白抑制剂具有不大于50μm的成束蛋白抑制ic50。在一些实施方式中，成束蛋白抑制剂具有不大于20μm的成束蛋白抑制ic50。在一些实施方式中，成束蛋白抑制剂具有不大于8μm的成束蛋白抑制ic50。
还提供了用于评估用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐治疗癌症(例如，抑制转移)的治疗有效剂量的方法，该方法包括在体外确定药剂的ic50。这种方法允许计算出抑制癌细胞迁移的每体积所需药剂的大致量。可以通过例如标准的微量稀释方法来确定此类量。在一些实施方式中，如本文所述的化合物或组合物可以在延长的时间段内或间歇地以多个剂量施用。
第二药剂
本公开的转移抑制剂可以是与适用于治疗癌症的第二药剂的共疗法的一部分。例如，在一些实施方式中，第二药剂是化学治疗剂或免疫治疗剂。
在一些实施方式中，第二药剂是化学治疗剂。化学治疗剂可以是例如已知的化学治疗剂，诸如fda批准的化学治疗剂。适合的化学治疗剂的实例包括紫杉烷，诸如多西他赛、紫杉醇、白蛋白结合的紫杉醇等；环磷酰胺或蒽环类，诸如多柔比星、道诺霉素、吡柔比星、阿柔比星和米托蒽醌。
在一些实施方式中，第二药剂是免疫治疗剂。免疫治疗剂可以是例如已知的免疫治疗剂，诸如fda批准的免疫治疗剂。适合的免疫治疗剂的实例包括免疫检查点抑制剂，诸如抗pd-1抗体或抗ctla-4抗体。
患者群体
由本文所述的方法治疗的患者可以患有一种或多种癌症。癌症可以选自淋巴瘤、肉瘤、黑素瘤、星形细胞瘤、间皮瘤、结肠癌、胰腺癌、食管癌、胃癌、泌尿系统癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、白血病、肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌、肝癌、头颈癌、甲状腺癌、脑癌、口腔癌、胆囊癌、壶腹癌、胆管癌和喉癌、淋巴瘤、肉瘤、黑素瘤、星形细胞瘤、间皮瘤、结肠癌、胰腺癌、食管癌、胃癌、泌尿系统癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、白血病、肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌、肝癌、头颈癌、甲状腺癌、脑癌、口腔癌、胆囊癌、壶腹癌、胆管癌和喉癌。
在一些实施方式中，癌症可选自一种表现出高成束蛋白水平的癌症。例如，这可以是具有高成束蛋白水平的特定癌症的亚群，例如如下表所述，其每个参考文献通过引用整体并入。
在一些实施方式中，癌症可以是以下中所述的癌症：strongassociationoffascinexpressionwithtriplenegativebreastcancerandbasal-likephenotypeinafrican-americanwomen.journalofclinicalpathology.2014；prognosticsignificanceofbasal-likephenotypeandfascinexpressioninnode-negativeinvasivebreastcarcinomasclinicalcancerresearch,2006；fascinexpressionpredictsanaggressiveclinicalcourseinpatientswithadvancedbreastcanceroncollett.2015年7月；10(1):121-130.epub2015年5月8日；fascinisakeyregulatorofbreastcancerinvasionthatactsviathemodificationofmetastasis-associatedmoleculesplosone.2011；6(11):e27339；fascinisinvolvedinthechemotherapeuticresistanceofbreastcancercellspredominantlyviathepi3k/aktpathwaybritishjournalofcancer(2014)111,1552-1561；fascinisexpressedinbasal-liketypetriplenegativebreastcancerassociatedwithhighmalignantpotentialinjapanesewomenintjcancerclinres2015,2:5；fascinexpressionincolorectalcarcinomasclinics第65卷第2期
在一些实施方式中，癌症是其化学疗法或免疫疗法已显示有效的癌症。一些实施方式包括其中患者正患有以上癌症中的一者的子组，例如神经内分泌前列腺癌、活化的b细胞亚型的弥散性大b细胞淋巴瘤、三阴性乳腺癌。
在一些实施方式中，患者正在经历或即将经历化学疗法。在其他实施方式中，患者已经经历了化学疗法，例如在过去的2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、15个月、18个月或24个月内。在一些实施方式中，患者正在经历或即将经历免疫疗法。在其他实施方式中，患者已经经历了免疫疗法，例如在过去的2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、15个月、18个月或24个月内。
方法
本公开包括治疗有需要的患者中的癌症的方法，其包括向患者施用化学治疗剂或免疫治疗剂和如本公开所述的转移抑制化合物。
在一些实施方式中，第二药剂是化学治疗剂。化学治疗剂可以是例如已知的化学治疗剂，诸如fda批准的化学治疗剂。适合的化学治疗剂的实例包括紫杉烷，诸如多西他赛、紫杉醇、白蛋白结合的紫杉醇等；环磷酰胺；蒽环类，诸如多柔比星、道诺霉素、吡柔比星、阿柔比星和米托蒽醌；基于铂的药物，诸如卡铂或顺铂。化学治疗剂可以是如本领域已知的药剂的组合。例如，临床肿瘤医师组合基于铂的药物(诸如卡铂或顺铂)与紫杉烷(诸如紫杉醇或多西他赛)。另外的化学治疗剂包括卡铂、顺铂、奥沙利铂、紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛、阿那曲唑、卡培他滨、环磷酰胺、多柔比星、依西美坦、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、伊沙匹隆、来曲唑、雌莫司汀、米托蒽醌、依托泊苷、长春瑞滨或培美曲塞。
在一些实施方式中，第二药剂是免疫治疗剂。免疫治疗剂可以是例如已知的免疫治疗剂，诸如fda批准的免疫治疗剂。适合的免疫治疗剂的实例包括免疫检查点抑制剂，诸如抗pd-1抗体、抗pd-l1抗体或抗ctla-4抗体。
在一些实施方式中，由式(i)表示的化合物：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐；其中，
r2是6元至10元芳基或5元至10元杂芳基；其中，该6元至10元芳基或5元至10元杂芳基任选地被1个至4个r4取代，其中，每个r4独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor10、-nr10co2r10、-sor7、-so2r7、so2nr10r10、苯基(任选地被低级烷基、卤代或低级卤代烷基或-oh取代)和-nr10so2r7；
每个r3独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor10、-nr10co2r10、-sor7、-so2r7、so2nr10r10和-nr10so2r7；
m是0、1、2或3；
r7是低级烷基；和
每个r10独立地是氢或低级烷基，或两个r10连同与其附接的一个或多个原子一起形成4元至6元环；
y选自由以下组成的组：cf3、cl、f和me。
在一些实施方式中，在所述式i的化合物中，r2任选地被1个至4个r4取代，并且r2选自由以下组成的组：呋喃、苯并呋喃、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、噻吩、噻唑、异噻唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、咪唑、吡咯和吡唑。在一些实施方式中，在所述式i的化合物中，r2选自由以下组成的组：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，癌症可选自淋巴瘤、肉瘤、黑素瘤、星形细胞瘤、间皮瘤、结肠癌、胰腺癌、食管癌、胃癌、泌尿系统癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、白血病、肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌、肝癌、头颈癌、甲状腺癌、脑癌、口腔癌、胆囊癌、壶腹癌、胆管癌和喉癌、淋巴瘤、肉瘤、黑素瘤、星形细胞瘤、间皮瘤、结肠癌、胰腺癌、食管癌、胃癌、泌尿系统癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、白血病、肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌、肝癌、头颈癌、甲状腺癌、脑癌、口腔癌、胆囊癌、壶腹癌、胆管癌和喉癌。
在一些实施方式中，癌症是其化学疗法或免疫疗法已显示有效的癌症。一些实施方式包括其中患者正患有以上癌症中的一者的子组，例如神经内分泌前列腺癌、活化的b细胞亚型的弥散性大b细胞淋巴瘤、三阴性乳腺癌。
在一些实施方式中，患者正在经历或即将经历化学疗法。在其他实施方式中，患者已经经历了化学疗法，例如在过去的2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、15个月、18个月或24个月中。在一些实施方式中，患者正在经历或即将经历免疫疗法。在其他实施方式中，患者已经经历了免疫疗法，例如在过去的2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、15个月、18个月或24个月中。
其他实施方式包括增加有需要的患者中对化学治疗剂或免疫治疗剂的响应的方法，其包括：向患者施用如本公开所述的转移抑制化合物。
在一些实施方式中，第二药剂是化学治疗剂。化学治疗剂可以是例如已知的化学治疗剂，诸如fda批准的化学治疗剂。适合的化学治疗剂的实例包括紫杉烷，诸如多西他赛、紫杉醇、白蛋白结合的紫杉醇等；环磷酰胺或蒽环类，诸如多柔比星、道诺霉素、吡柔比星、阿柔比星和米托蒽醌。
在一些实施方式中，第二药剂是免疫治疗剂。免疫治疗剂可以是例如已知的免疫治疗剂，诸如fda批准的免疫治疗剂。适合的免疫治疗剂的实例包括免疫检查点抑制剂，诸如抗pd-1抗体或抗ctla-4抗体。
在一些实施方式中，由式(i)表示的化合物：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐；其中，
r2是6元至10元芳基或5元至10元杂芳基；其中，该6元至10元芳基或5元至10元杂芳基任选地被1个至4个r4取代，其中，每个r4独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor10、-nr10co2r10、-sor7、-so2r7、so2nr10r10、苯基(任选地被低级烷基、卤代或低级卤代烷基或-oh取代)和-nr10so2r7；
每个r3独立地选自由以下组成的组：低级烷基、低级卤代烷基、-oh、-or7、-sh、-sr7、-nr10r10、卤代、氰基、硝基、-coh、-cor7、-co2h、-co2r7、-conr10r10、-ocor7、-oco2r7、-oconr10r10、-nr10cor10、-nr10co2r10、-sor7、-so2r7、so2nr10r10和-nr10so2r7；
m是0、1、2或3；
r7是低级烷基；和
每个r10独立地是氢或低级烷基，或两个r10连同与其附接的一个或多个原子一起形成4元至6元环；
y选自由以下组成的组：cf3、cl、f和me。
在一些实施方式中，在所述式i的化合物中，r2任选地被1个至4个r4取代，并且r2选自由以下组成的组：呋喃、苯并呋喃、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、噻吩、噻唑、异噻唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、咪唑、吡咯和吡唑。在一些实施方式中，在所述式i的化合物中，r2选自由以下组成的组：
或其互变异构体、和/或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，增加对化学治疗剂或免疫治疗剂的响应意指与用化学治疗剂或免疫治疗剂且无转移抑制化合物的疗法相比，增加预后存活率、例如患者群体的平均存活率和/或增加患者或患者群体中肿瘤生长或存在的减少。在一些实施方式中，对化学治疗剂或免疫治疗剂的响应增加是协同的，这意味着该作用大于单独施用化学治疗剂或免疫治疗剂，并且大于单独施用转移抑制化合物。可以通过例如测量疾病进展、疾病缓解、症状严重程度、疼痛减轻、生活品质、维持治疗效果所需的药物剂量、疾病标志物的水平或任何其他可测量的适用于正在治疗或靶向预防的给定疾病的参数来评估治疗或预防疾病的功效。通过测量这些参数中的任一者或参数的任何组合来监测治疗或预防的功效完全在本领域技术人员的能力范围内。
本公开的转移抑制化合物的量可以由医学专业人员确定。产品的日剂量可以在每天每成人10mg至2,000mg的宽范围或其中的任何范围内变化。对于经口施用，组合物优选以片剂、胶囊剂或其他可经口施用形式的形式提供，其含有0.01毫克、0.05毫克、0.1毫克、0.5毫克、1.0毫克、2.5毫克、5.0毫克、10.0毫克、15.0毫克、25.0毫克、50.0毫克、100毫克、150毫克、200毫克、250毫克和500毫克活性成分，用于待治疗的患者的症状性剂量调整。药物的有效量通常以每天约0.01mg/kg体重至约100mg/kg体重或其中的任何范围的剂量水平供应。优选地，该范围为每天约0.01mg/kg体重至每天约50.0mg/kg体重或其中的任何范围。更优选地，每天约0.01mg/kg体重至约10.0mg/kg体重或其中的任何范围。更优选地，每天约0.01mg/kg体重至约1.0mg/kg体重或其中的任何范围。转移抑制化合物可以按照每天1次至4次的方案施用。例如，本公开的转移抑制化合物可以以约0.1mg/kg至约100mg/kg的一个或多个剂量施用。例如，所公开的转移抑制化合物可以以以下剂量施用：约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、约1.9mg/kg、约2mg/kg、约2.1mg/kg、约2.2mg/kg、约2.3mg/kg、约2.4mg/kg、约2.5mg/kg、约2.6mg/kg、约2.7mg/kg、约2.8mg/kg、约2.9mg/kg、约3mg/kg、约3.1mg/kg、约3.2mg/kg、约3.3mg/kg、约3.4mg/kg、约3.5mg/kg、约3.6mg/kg、约3.7mg/kg、约3.8mg/kg、约3.9mg/kg、约4mg/kg、约4.1mg/kg、约4.2mg/kg、约4.3mg/kg、约4.4mg/kg、约4.5mg/kg、约4.6mg/kg、约4.7mg/kg、约4.8mg/kg、约4.9mg/kg、约5mg/kg、约5.1mg/kg、约5.2mg/kg、约5.3mg/kg、约5.4mg/kg、约5.5mg/kg、约5.6mg/kg、约5.7mg/kg、约5.8mg/kg、约5.9mg/kg、约6mg/kg、约6.1mg/kg、约6.2mg/kg、约6.3mg/kg、约6.4mg/kg、约6.5mg/kg、约6.6mg/kg、约6.7mg/kg、约6.8mg/kg、约6.9mg/kg、约7mg/kg、约7.1mg/kg、约7.2mg/kg、约7.3mg/kg、约7.4mg/kg、约7.5mg/kg、约7.6mg/kg、约7.7mg/kg、约7.8mg/kg、约7.9mg/kg、约8mg/kg、约8.1mg/kg、约8.2mg/kg、约8.3mg/kg、约8.4mg/kg、约8.5mg/kg、约8.6mg/kg、约8.7mg/kg、约8.8mg/kg、约8.9mg/kg、约9mg/kg、约9.1mg/kg、约9.2mg/kg、约9.3mg/kg、约9.4mg/kg、约9.5mg/kg、约9.6mg/kg、约9.7mg/kg、约9.8mg/kg、约9.9mg/kg、约10mg/kg、约10.5mg/kg、约11mg/kg、约11.5mg/kg、约12mg/kg、约12.5mg/kg、约13mg/kg、约13.5mg/kg、约14mg/kg、约14.5mg/kg、约15mg/kg、约15.5mg/kg、约16mg/kg、约16.5mg/kg、约17mg/kg、约17.5mg/kg、约18mg/kg、约18.5mg/kg、约19mg/kg、约19.5mg/kg、约20mg/kg、约20.5mg/kg、约21mg/kg、约21.5mg/kg、约22mg/kg、约22.5mg/kg、约23mg/kg、约23.5mg/kg、约24mg/kg、约24.5mg/kg、约25mg/kg、约25.5mg/kg、约26mg/kg、约26.5mg/kg、约27mg/kg、约27.5mg/kg、约28mg/kg、约28.5mg/kg、约29mg/kg、约29.5mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg、约32mg/kg、约33mg/kg、约34mg/kg、约34mg/kg、约35mg/kg、约36mg/kg、约37mg/kg、约38mg/kg、约39mg/kg、约40mg/kg、约41mg/kg、约42mg/kg、约43mg/kg、约44mg/kg、约45mg/kg、约46mg/kg、约47mg/kg、约48mg/kg、约49mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg或约100mg/kg。在所列举的值中间的值和范围也旨在成为本公开的一部分。这些值可适用于静脉内输注和/或皮下递送。本文所述的其他递送形式也可以以这些剂量施用。剂量可以根据患者的要求、所治疗的疾患的严重程度和所采用的转移抑制化合物而变化。可以采用每日施用或后定期给药(post-periodicdosing)的使用。
转移抑制化合物可以与化学治疗剂或免疫治疗剂同时施用，或可以在施用化学治疗剂或免疫治疗剂的一年内或至多18个月内施用，例如在1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天内，或在1周、2周、3周、4周内或在1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月内。
组合物
如本文所述的化合物(例如，转移抑制化合物)可以被配制为药物组合物并以适用于所选施用途径的多种形式(即经口或肠胃外，通过静脉内、肌内、局部、透皮、鞘内、经眼、鼻内、腹膜内或皮下途径)施用给哺乳动物宿主(诸如人患者)。
本文所述的化合物(例如，转移抑制化合物)可以与药学上可接受的媒介物(诸如惰性稀释剂或可吸收的可食用载体)组合全身(例如经口)施用。它们可以装入硬壳或软壳明胶胶囊中，可以压制成片剂，或可以直接与患者饮食的食物掺混。对于经口治疗性施用，可以将活性化合物与一种或多种赋形剂组合，并以可摄取的片剂、颊片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、薄片剂(wafer)等形式使用。此类组合物和制剂应含有至少0.1％的活性化合物。组合物和制剂的百分比当然可以变化，并且可以方便地在给定单位剂型重量的约2％至约60％。在此类治疗上有用的组合物中活性化合物的量使得将获得有效剂量水平。
片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂等还可以含有以下：粘合剂，诸如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，诸如磷酸二钙；崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，诸如硬脂酸镁；和甜味剂，诸如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜，或可以添加调味剂，诸如薄荷、冬青油或樱桃调味剂。当单位剂型是胶囊剂时，除上述类型的材料外，它还可含有液体载体，诸如植物油或聚乙二醇。各种其他材料可以作为包衣存在或以其他方式改变固体单位剂型的物理形式。例如，片剂、丸剂或胶囊剂可用明胶、蜡、虫胶或糖等包被。糖浆剂或酏剂可含有活性化合物、蔗糖或果糖作为甜味剂，对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂，染料和调味剂(诸如樱桃香精或橘子香精)。用于制备任何单位剂型的材料应是药学上可接受的，并且在使用量上基本上是无毒的。另外，可以将活性化合物掺入缓释制剂和装置中。
本文所述的活性化合物也可以通过输注或注射静脉内或腹膜内施用。活性化合物或其盐的溶液可以在水中制备，任选地与无毒表面活性剂混合。分散剂也可以在甘油、液体聚乙二醇、三醋精及其混合物中和在油中制备。在常规的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
适于注射或输注的药物剂型可以包括包含活性成分的无菌水溶液或分散剂或无菌粉剂，其适合于临时制备任选地封装在脂质体中的无菌可注射或可输注溶液或分散剂。在所有情况下，最终剂型在制造和储存条件下均应是无菌的、流体的且稳定的。液体载体或媒介物可以是溶剂或液体分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯和其适合的混合物。适当的流动性可以例如通过形成脂质体、通过在分散剂的情况下维持所需的粒径或通过使用表面活性剂来维持。可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等)来预防微生物的作用。在许多情况下，优选包括等渗剂，例如糖、缓冲剂或氯化钠。通过在组合物中使用延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)，可以使可注射组合物的吸收延长。
无菌可注射溶液通过将所需量的活性化合物与上面列举的几种其他成分(根据需要)掺入适当的溶剂中、然后过滤灭菌来制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这产生了活性成分加上在先前无菌过滤的溶液中存在的任何附加期望成分的粉剂。
对于局部施用，本发明的化合物可以以纯的形式(即当它们是液体时)施用。然而，通常期望将它们作为组合物或制剂与皮肤病学上可接受的载体(其可以是固体或液体)组合施用至皮肤。
有用的固体载体包括细分的固体，诸如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等。有用的液体载体包括水、醇或二醇或水-醇/二醇共混物，其中本发明的化合物可以任选在无毒表面活性剂的帮助下以有效水平溶解或分散。可以添加佐剂，诸如香料和其他抗微生物剂，以优化给定用途的性能。所得的液体组合物可以从吸收垫上施加，用于浸渍绷带和其他敷料，或使用泵式或气溶胶喷雾器喷涂到受影响区上。
增稠剂诸如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物材料也可以与液体载体一起使用，以形成可涂抹的糊剂、凝胶剂、软膏剂、肥皂等，以供直接施加至使用者的皮肤。
可以用于将本文所述的化合物或其药学上可接受的盐递送至皮肤的有用的皮肤病学组合物的实例是本领域已知的；例如，参见jacquet等人(美国专利no.4,608,392)、geria(美国专利no.4,992,478)、smith等人(美国专利no.4,559,157)和wortzman(美国专利no.4,820,508)。
通过在动物模型中比较本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的体外活性和体内活性，可以确定它们的有用剂量。将小鼠和其他动物的有效剂量外推到人的方法是本领域已知的；例如，参见美国专利no.4,938,949。
通常，液体组合物(诸如洗剂)中本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的浓度将为约0.01重量％、约0.1重量％、约1.0重量％、约2.0重量％、约3.0重量％、约4.0重量％、约5.0重量％、约10.0重量％、约25.0重量％或这些值中任两个之间和包括这些值中任两个的范围。半固体组合物或固体组合物(诸如凝胶剂或粉剂)中的浓度将是约0.01重量％、约0.1重量％、约1.0重量％、约2.0重量％、约3.0重量％、约4.0重量％、约5.0重量％、约10.0重量％、约25.0重量％或这些值中任两个之间和包括这些值中任两个的范围。
用于治疗所需的化合物或其活性盐或衍生物的量不仅因所选择的特定盐而变化，而且还随施用途径、所治疗疾患的性质以及患者的年龄和情况而变化，并且最终将由主治医师或临床医师决定。通常，然而，适合的剂量将在约1.0mg/kg至约200mg/kg的范围内，例如约1mg/kg体重/天至约100mg/kg体重/天，诸如约2.0mg/kg体重/天至约100mg/kg体重/天，诸如约3.0mg/kg接受者体重/天至约50mg/kg接受者体重/天，或在约5mg/kg/天至20mg/kg/天的范围内。替选地，组合物可以一周连续五天施用五次，其中休息两天，或一周连续四天施用四次，其中休息三天，或者隔天一次。
用于将小鼠和其他动物的有效剂量外推到人的方法是本领域已知的(参见，例如，美国专利no.:4,938,949)。例如，在一些实施方式中，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐(例如，用于治疗结肠癌和/或卵巢癌的那些)可以以以下剂量水平施用：每天对象体重的约0.01mg/kg至约300mg/kg、约0.1mg/kg至约250mg/kg、约1mg/kg至约200mg/kg、约1mg/kg至约150mg/kg、约1mg/kg至约100mg/kg、约1mg/kg至约90mg/kg、约1mg/kg至约80mg/kg、约1mg/kg至约70mg/kg、约1mg/kg至约60mg/kg、约1mg/kg至约50mg/kg、约1mg/kg至约40mg/kg、约1mg/kg至约30mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约5mg/kg至约100mg/kg、约5mg/kg至约90mg/kg、约5mg/kg至约80mg/kg、约5mg/kg至约70mg/kg、约5mg/kg至约60mg/kg、约5mg/kg至约50mg/kg、约5mg/kg至约40mg/kg、约5mg/kg至约30mg/kg、约5mg/kg至约20mg/kg、约10mg/kg至约100mg/kg、约10mg/kg至约90mg/kg、约10mg/kg至约80mg/kg、约10mg/kg至约70mg/kg、约10mg/kg至约60mg/kg、约10mg/kg至约50mg/kg、约10mg/kg至约40mg/kg、约10mg/kg至约30mg/kg、约10mg/kg至约20mg/kg、约20mg/kg至约100mg/kg、约20mg/kg至约90mg/kg、约20mg/kg至约80mg/kg、约20mg/kg至约70mg/kg、约20mg/kg至约60mg/kg、约20mg/kg至约50mg/kg、约20mg/kg至约40mg/kg、约20mg/kg至约30mg/kg，一天一次或多次，以获得所期望的治疗效果。在一些实施方式中，化合物可以以下剂量施用：体重的约1mg/kg或更多、5mg/kg或更多、10mg/kg或更多、15mg/kg或更多、20mg/kg或更多、25mg/kg或更多、30mg/kg或更多、35mg/kg或更多、40mg/kg或更多、45mg/kg或更多、50mg/kg或更多、60mg/kg或更多、70mg/kg或更多。还将理解小于0.01mg/kg或大于70mg/kg(例如70mg/kg至200mg/kg)的剂量可以施用给对象。
在一些实施方式中，本文所述的化合物可用于化学疗法(即，以抑制转移)中，并且可以较高的剂量施用。例如，待用于化学疗法中的化合物可以以下施用：每天对象体重的约100mg/kg至约300mg/kg、约120mg/kg至约280mg/kg、约140mg/kg至约260mg/kg、约150mg/kg至约250mg/kg、约160mg/kg至约240mg/kg，一天一次或多次，以获得所期望的治疗效果。
在某些其他实施方式中，本文所述的化合物可用于支持疗法(例如，在常见类型的肿瘤范围内，作为手术或辐照的佐剂)并且可以以较低的剂量施用。例如，待用于支持疗法中的化合物可以每天对象体重的约1mg/kg至约30mg/kg、约1mg/kg至约25mg/kg、约5mg/kg至约20mg/kg施用，一天一次或多次，以获得所期望的治疗效果。
在某些其他实施方式中，本文所述的化合物可用于治疗转移性癌症(例如，卵巢癌和/或结肠癌)并可以以中间剂量施用。例如，待用于支持疗法中的化合物可以以每天对象体重的约1mg/kg至约100mg/kg、约1mg/kg至约80mg/kg、约5mg/kg至约70mg/kg、约10mg/kg至约70mg/kg、约10mg/kg至约60mg/kg、约20mg/kg至约70mg/kg、约20mg/kg至约60mg/kg施用，一天一次或多次，以获得所期望的治疗效果。
该化合物以单位剂型方便地施用；例如，每单位剂型含有45mg至3000mg，方便地90mg至2250mg，最方便地450mg至1500mg的活性成分。在一些实施方式中，该化合物以约1mg/kg至约100mg/kg的剂量施用。
理想地，应当施用活性成分以使活性化合物的峰值血浆浓度达到约0.5nm至约10μm、或约1nm至1μm、或约10nm至约0.5μm。这可以例如通过静脉内注射0.05％至5％的活性成分溶液(任选地在盐水中)来实现，或者以含有约20mg至2000mg的活性成分的团剂(bolus)经口施用。可以通过连续输注保持所期望的血液水平以提供约0.2mg/kg/h至1.0mg/kg/h的一种或多种活性成分，或通过间歇输注含有约0.4mg/kg至20mg/kg的一种或多种活性成分。所期望的剂量可以方便地以单剂量或以适当间隔施用的分剂量存在，例如每天两次、三次、四次或更多次子剂量。所述子剂量本身可以进一步分为例如多个分开的、松散间隔的施用；诸如从吹入器中多次吸入或通过向眼睛中施加多滴。
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐可用作经施用以用于抑制细胞迁移和治疗转移性癌症的治疗剂。此类癌症包括但不限于例如涉及以下的癌症：动物头部、颈部、肺、间皮瘤、纵隔、食道、胃、胰腺、肝胆系统、小肠、结肠、结肠直肠、直肠、肛门、肾、输尿管、膀胱、前列腺、尿道、阴茎、睾丸、妇科器官、卵巢、乳腺、内分泌系统、皮肤或中枢神经系统。因此，例如，癌症可以是乳腺癌、白血病、肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、黑素瘤、卵巢癌、肾癌或前列腺癌。
另外，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐(诸如本文所述的示例性盐)可用作进一步研究抑制细胞迁移的药理学工具。
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐还可以与有效治疗或控制癌细胞或肿瘤细胞扩散的其他治疗剂组合施用。
此外，可以在适当的动物模型中测试本文所述的化合物或其药学上可接受的盐。例如，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐可以在患有已知肿瘤的动物中进行测试，或者可以在已经将肿瘤细胞注射到局部区域内的动物中进行测试。随时间形成的继发性肿瘤的程度或数量是转移的量度，并且可以相对于具有原发性肿瘤但未接受测试化合物的对照动物来评价化合物抑制此类转移的能力。
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐还将用于治疗脑部病变(kraft等人,j.neurosci.2006年8月23日；26(34):8734-47)；霍奇金氏病(hodgkin’sdisease)(pinkus等人,amjpathol.1997年2月；150(2):543-62)；病毒感染(mosialos等人,amjpathol.1996年2月；148(2):593-600)；神经元变性(fulga等人,natcellbiol.2007年2月:9(2):139-48)；淋巴样增生(said等人,modpathol.1997年5月；10(5):421-7)；和局部缺血(meller等人,jneurosci.2008年1月2日；28(l):50-9)。
一般合成方法
本文所述的转移抑制化合物是可商购获得的，或者可以使用以下一般方法和程序由容易获得的原料制备。应当理解，在给出典型的或优选的工艺条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)的情况下，除非另有说明，否则也可以使用其他工艺条件。最佳反应条件可以随所使用的特定反应物或溶剂而变化，但是这些条件可以由本领域技术人员通过常规优化程序来确定。
另外，对于本领域技术人员明显的是，常规的保护基团对于防止某些官能团进行不希望的反应可能是必需的。适用于各种官能团的保护基团以及适用于对特定官能团进行保护和脱保护的条件是本领域众所周知的。例如，多种保护基团描述于t.w.greene和g.m.wuts,protectinggroupsinorganicsynthesis,第三版,wiley,纽约,1999和其中引用的参考文献中。
此外，本文所述的转移抑制化合物可含有一个或多个手性中心。因此，如果期望，可以将此类化合物制备或分离为纯的立体异构体(即单独的对映异构体或非对映异构体)，或为富含立体异构体的混合物。除非另外指定，否则所有这些此类立体异构体(和富集的混合物)都包括在本发明的范围内。可以使用例如本领域众所周知的光学活性原料或立体选择试剂制备纯的立体异构体(或富集的混合物)。替选地，可以使用例如手性柱色谱、手性拆分剂等分离此类化合物的外消旋混合物。
用于以下反应的原料是通常已知的化合物，或者可以通过已知的程序或其明显的变型来制备。例如，许多原料可从商业供应商、诸如aldrichchemicalco.(美国威斯康星州密尔沃基)、bachem(美国加利福利亚州托伦斯)、emka-chemce或sigma(美国密苏里州圣路易斯)获得。其他可以通过在以下标准参考文本中所述的程序或其明显的变型来制备：诸如fieserandfieser'sreagentsfororganicsynthesis,第1-15卷(johnwileyandsons,1991)，rodd'schemistryofcarboncompounds,第1-5卷和增刊(elseviersciencepublishers,1989)，organicreactions,第1-40卷(johnwileyandsons,1991)，march'sadvancedorganicchemistry,(johnwileyandsons,第4版)，和larock'scomprehensiveorganictransformations(vchpublishersinc.,1989)。
在适当的情况下，可以使用常规技术(诸如沉淀、过滤、结晶、蒸发、蒸馏和色谱)分离和纯化本文所述的各种原料、中间体和化合物。可以使用常规方法(诸如通过熔点、质谱、核磁共振和各种其他光谱分析)对这些化合物进行表征。
酰胺偶联试剂是本领域已知的并且可以包括但不限于基于铵和基于鏻的试剂。铵盐包括六氟磷酸n-[(二甲基氨基)-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶-1-基亚甲基]-n-甲基甲铵n-氧化物(hatu)、六氟磷酸n-[(1h-苯并三唑-1-基)(二甲基氨基)亚甲基]-n-甲基甲铵n-氧化物(hbtu)、六氟磷酸n-[(1h-6-氯苯并三唑-1-基)(二甲基氨基)亚甲基]-n-甲基甲铵n-氧化物(hctu)、四氟硼酸n-[(1h-苯并三唑-1-基)(二甲基氨基)亚甲基]-n-甲基甲铵n-氧化物(tbtu)和四氟硼酸n-[(1h-6-氯苯并三唑-1-基)(二甲基氨基)亚甲基]-n-甲基甲铵n-氧化物(tctu)。鏻盐包括六氟磷酸7-氮杂苯并三唑-1-基-n-氧基-三(吡咯烷并)鏻(pyaop)和六氟磷酸苯并三唑-1-基-n-氧基-三(吡咯烷并)鏻(pybop)。酰胺形成步骤可在极性溶剂、诸如二甲基甲酰胺(dmf)中进行，并且还可包括有机碱、诸如二异丙基乙胺(diea)或二甲基氨基吡啶(dmap)。
交叉偶联反应在本领域中是众所周知的，并且例如报道于annaroglans,等人，diazoniumsaltsassubstratesinpalladium-catalyzedcross-couplingreactions,chem.rev.,2006,106(11):4622–4643；bradm.rosen,等人,nickel-catalyzedcross-couplingsinvolvingcarbon-oxygenbonds,percecchem.rev.,2011,111(3):1346–1416；jean-pierrecorbet,等人,selectedpatentedcross-couplingreactiontechnologies,chem.rev.,2006,106(7):2651-2710；gwilhermevano等人,copper-mediatedcouplingreactionsandtheirapplicationsinnaturalproductsanddesignedbiomoleculessynthesis,chem.rev.,2008,108(8):3054-3131；bennybogoslavsky,等人,formationofacarbon-carbontriplebondbycouplingreactionsinaqueoussolution,science308(5719):234-235(2005)；和m.lafrance,等人,catalyticintermoleculardirectarylationofperfluorobenzenes,j.am.chem.soc.128(27):8754-8756(2006)；noriomiyaura,等人,“anewstereospecificcross-couplingbythepalladium-catalyzedreactionof1-alkenylboraneswith1-alkenylor1-alkynylhalides,”tetrahedronletters,1979,20(36):3437-3440；p.e.fanta,“theullmannsynthesisofbiaryls”,synthesis,1974,1974:9-21；m.gomberg和w.e.bachmann,j.am.chem.soc.,1924,42(10):2339-2343；r.j.p.corriu和masse,j.p.“activationofgrignardreagentsbytransition-metalcomplexes.anewandsimplesynthesisoftrans-stilbenesandpolyphenyls,”journalofthechemicalsociety,chemicalcommunications,1972,(3):144a。
在一些方面，式i的化合物可以根据方案1或本文所述的其他方法制备。
方案1
在一些方面，式iiia的化合物(其中r3是氢(化合物2-3))可以从1h-吲唑-3-胺(化合物2-1，可获自例如enaminellc)根据方案2或本文所述的其他方法制备。
方案2
在一些方面，式viiia的化合物(其中r3是来自4-氯-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-胺(化合物3-1，可获自例如novasynorganicspvt.ltd.)的4-氯(化合物3-2或化合物3-3))可以根据方案3或本文所述的其他方法制备。式2-4的化合物通常获自商业来源或可以通过本领域已知的方法制备。例如，4-(溴甲基)苯甲腈、3-(溴甲基)苯甲腈、2-氟苄基溴、3-氟苄基溴、3-氯苄基溴、4-氯苄基溴、4-氟苄基溴、4-甲基苄基溴、3,4-二氟苄基溴和2,3-二氟-4-甲基苄基溴等可获自sigma-aldrichco.llc。
方案3
本说明书中提及的所有出版物、专利申请、授权专利和其他文件均通过引用并入本文，如每个单独的出版物、专利申请、授权专利或其他文件均被明确地并单独地指出通过引用整体并入。通过引用并入的文本中包含的定义在与本公开中的定义相抵触的程度上被排除在外。
通过参考以下实施例，将更容易地理解如此总体上描述的本技术，这些实施例是通过举例的方式提供的并且不旨在限制本技术。其他化合物或可以类似地或通过本领域已知的方法制备。
实施例
小鼠群体
雌性balb/c小鼠(雌性6周龄至8周龄)购自商业来源。nsg免疫缺陷小鼠(雌性6周龄至10周龄)购自商业来源。
细胞培养
小鼠4t1乳腺肿瘤细胞和人mda-mb-231乳腺癌细胞获自美国典型培养物保藏中心(americantypeculturecollection)。将4t1细胞和mda-mb-231细胞培养在补充有10％fbs的dmem中，如前所述。chen,l.,yang,s.,jakoncic,j.,zhang,j.j.和huang,x.y.migrastatinanaloguestargetfascintoblocktumourmetastasis.nature464,1062-1066(2010)；huang,f.k.等人，targetedinhibitionoffascinfunctionblockstumourinvasionandmetastaticcolonization.natcommun6,7465(2015)；han,s.等人，improvingfascininhibitorstoblocktumorcellmigrationandmetastasis.moloncol10,966-980(2016)。
小鼠中化合物a的药代动力学研究
使用高效液相色谱-串联质谱(lcms/ms)测定血浆中化合物a的浓度。将所有血液样品转移到含有edta钾(k2)的商购管中，并进行处理以获得血浆。在收集的一小时内将样品离心(在2℃至8℃下3000xg离心10分钟)。该测定使用sciexapi4000检测器和硝苯地平作为内标。化合物a的校准范围为5.00ng/ml至5000ng/ml。通过使用phoenixwinnonlin软件(6.3版，pharsight，加利福利亚州山景城)，对小鼠中化合物a的血浆浓度进行非隔室药代动力学分析。标称剂量水平和标称采样时间用于所有药代动力学参数的计算。线性/对数梯形法应用于获得pk参数。观察到化合物a在冻融后以及在储存、加工和分析期间是稳定的。
小鼠中的4t1乳腺肿瘤转移
雌性balb/c小鼠(6周龄至8周龄)购自charlesriver。在第0天，使用0.1ml在pbs中的单细胞悬浮液，将4t1肿瘤细胞(1×105个)皮下注射至小鼠的腹部乳腺区域中，如前所述。chen,l.,yang,s.,jakoncic,j.,zhang,j.j.和huang,x.y.migrastatinanaloguestargetfascintoblocktumormetastasis.nature464,1062-1066(2010)；huang,f.k.等人，targetedinhibitionoffascinfunctionblockstumorinvasionandmetastaticcolonization.natcommun6,7465(2015)；han,s.等人，improvingfascininhibitorstoblocktumorcellmigrationandmetastasis.moloncol10,966-980(2016)。在第8天开始，当肿瘤平均直径约为4mm至5mm时，每天每只小鼠以10mg/kg、30mg/kg、100mg/kg或300mg/kg通过经口灌胃给予化合物a或对照溶剂一次或两次，直到第27天。在第28天，处死小鼠。该剂量方案耐受性好，没有明显的毒性迹象。通过克隆形成测定确定肺中转移性4t1细胞的数目。简而言之，将肺从每只小鼠移除，切碎，并在5ml含1xpbs和1mg/mliv型胶原酶的酶混合物中于37℃在平台摇床上消化2小时。温育后，将样品通过70-μm尼龙细胞滤网过滤，并用pbs洗涤两次。使得到的细胞悬浮，用一系列稀释液涂铺在10cm组织培养皿中的含有60μm硫鸟嘌呤的dmem培养基内，用于克隆形成生长。由于4t1肿瘤细胞对6-硫鸟嘌呤具有抗性，因此转移的肿瘤细胞在14天后形成病灶，此时将它们用4％多聚甲醛固定并用结晶紫染色液染色用于计数。
对于图1h中的实验，在第1天将悬浮在pbs中的4t1肿瘤细胞(1×105个)皮下注射到小鼠的腹部乳腺区域中。从第4天、第8天或第15天开始，每天一次将化合物a以100mgkg-1/小鼠通过经口灌胃给予小鼠。每天一次通过灌胃向对照组小鼠给予媒介物溶剂。在第8天开始，每周两次将紫杉醇以20mgkg-1/小鼠通过腹膜内注射给予小鼠，持续两周。在第15天移除原发性肿瘤。在第35天，杀死所有小鼠用于克隆形成测定。
小鼠中的mda-mb-231人乳腺肿瘤转移
在第1天，将悬浮于pbs中的mda-mb-231细胞(亚克隆lm2)(1×105个)皮下注射至小鼠的腹部乳腺区域中，如前所述。chen,l.,yang,s.,jakoncic,j.,zhang,j.j.和huang,x.y.migrastatinanaloguestargetfascintoblocktumormetastasis.nature464,1062-1066(2010)；huang,f.k.等人，targetedinhibitionoffascinfunctionblockstumorinvasionandmetastaticcolonization.natcommun6,7465(2015)；han,s.等人，improvingfascininhibitorstoblocktumorcellmigrationandmetastasis.moloncol10,966-980(2016)。从第8天开始，每周6天每天一次或两次，通过灌胃给予化合物a或对照溶剂，直到第八周。在第九周的第一天，将小鼠杀死。该剂量方案耐受性好，没有明显的毒性迹象。肺中的转移性mda-mb-231细胞的数目通过克隆形成测定来确定。简而言之，一旦处死，将肺从每只小鼠移除，切碎，并在5ml含1xpbs和1mg/mliv型胶原酶的酶混合物中于37℃在平台摇床上消化2小时。温育后，将样品通过70-μm尼龙细胞滤网过滤，并用pbs洗涤两次。使得到的细胞悬浮，用一系列稀释液涂铺在10cm组织培养皿中的含有2.0μg/ml嘌呤霉素的培养基内，用于克隆形成生长。由于这些mba-mb-231肿瘤细胞用载体psuper-puro稳定转染，因此转移的肿瘤细胞在14天后形成病灶，此时将它们用4％多聚甲醛固定并用结晶紫染色液染色用于计数。
对于与化学疗法的组合治疗，在第1天将悬浮在pbs中的mda-mb-231肿瘤细胞(1×105个)皮下注射到小鼠的腹部乳腺区域中。从第1天、第8天、第15天开始，每周6天每天一次将化合物a以300mg/kg/小鼠通过经口灌胃给予小鼠。每周6天每天一次将媒介物溶剂给予对照小鼠。从第15天开始，每周一次将多柔比星盐酸盐(sigma)(2mg/kg)和环磷酰胺一水合物(sigma)(60mg/kg)给予小鼠，持续四周。在第29天去除原发性肿瘤。将小鼠的死亡用作终点。
使用化合物a和免疫疗法的组合治疗
雌性balb/c小鼠(6周龄至8周龄)购自charlesriverlaboratories。在第0天，将悬浮于pbs中的4t1乳腺肿瘤细胞(1×105个)皮下注射至小鼠的腹部乳腺区域中，如前所述。chen,l.,yang,s.,jakoncic,j.,zhang,j.j.和huang,x.y.migrastatinanaloguestargetfascintoblocktumormetastasis.nature464,1062-1066(2010)；huang,f.k.等人，targetedinhibitionoffascinfunctionblockstumorinvasionandmetastaticcolonization.natcommun6,7465(2015)；han,s.等人，improvingfascininhibitorstoblocktumorcellmigrationandmetastasis.moloncol10,966-980(2016)。从第8天或第22天开始，每周5天每天一次将化合物a以100mg/kg/小鼠通过经口灌胃给予小鼠。在第11天、第13天、第15天和第17天向荷瘤小鼠i.p.给予10mg/kg抗pd-1抗体和10mg/kg抗ctla-4抗体，如前所述。kim,k.等人，eradicationofmetastaticmousecancersresistanttoimmunecheckpointblockadebysuppressionofmyeloid-derivedcells.procnatlacadsciusa111,11774-11779(2014)。同时向对照组小鼠给予对照小鼠igg。原发性肿瘤体积被计算为长×宽2×π/6。
等效方案
本文示例性地描述的实施方式可以在没有本文未具体公开的任何一个或多个要素、一个或多个限制的情况下适当地实践。因此，例如，术语“包含”、“包括”、“含有”等应被广泛且无限制地理解。另外，本文所采用的术语和表达已被用作描述性而非限制性的术语，并且不旨在使用此类术语和表达来排除所示出和描述的特征或其部分的任何等同形式，但是认识到在要求保护的技术的范围内可以进行各种修改。另外，短语“基本上由...组成”将被理解为包括具体记载的那些要素和不实质性影响所要求保护的技术的基本和新颖特征的那些附加要素。短语“由...组成”排除了未指定的任何要素。
本公开不限于本申请中描述的特定实施方式，其旨在作为各个方面的说明。如对本领域技术人员来说是明显的，可以在不脱离其精神和范围的情况下进行许多修改和变化。从前述中，除了本文列举的那些之外，在本公开范围内的在功能上等效的组合物、装置和方法对于本领域技术人员而言将是明显的。此类修改和变化旨在落入所附权利要求的范围内。本公开仅受随附权利要求的条款以及此类权利要求所授权的等效物的完整范围所限制。应理解，本公开不限于特定的方法、试剂、化合物、组合物或生物体系，它们当然可以变化。还应当理解，本文所使用的术语仅出于描述特定实施方式的目的，而并非旨在进行限制。
另外，在根据马库什组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，由此也根据马库什组的任何单个成员或成员亚组描述本公开。
如本领域技术人员将理解的，出于任何目的和所有目的，特别是在提供书面描述方面，本文公开的所有范围也涵盖任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。任何列出的范围都可以容易地识别为充分描述，并且可以将相同范围分解为至少相等的二分之一、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性实例，可以将本文讨论的每个范围容易地分解为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本领域的技术人员将理解的，诸如“至多”、“至少”、“大于”、“小于”等的所有用语包括所记载的数字，并且是指可以随后分解为如上讨论的子范围的范围。最后，如本领域技术人员将理解的，范围包括每个单独的成员。
尽管已经示出和描述了某些实施方式，但是应当理解，根据本领域的普通技术人员可以在其中进行改变和修改，而不会在如所附权利要求书中所限定的更广泛方面偏离本技术。
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