泮托拉唑在制备防治肝纤维化的药物中的应用的制作方法

本发明属于药物新用途技术领域，尤其涉及泮托拉唑在制备防治肝纤维化的药物中的应用。

背景技术：

肝纤维化是肝硬化的前体，是各种慢性肝病发展到肝硬化的必经病理学过程。根据现有的研究结果，普遍认为肝硬化是不可逆转的慢性进行性肝病，而肝纤维化是可逆性的病理改变。因此，抑制肝纤维化的发生发展是防止慢性肝病发展为肝硬化的关键，对肝纤维化治疗的研究具有重要的临床意义。

肝纤维化表现为肝内细胞外基质成分过度异常地沉积，各种原因导致的慢性肝脏损害都可导致肝纤维化的发生发展，进而发展成肝硬化。肝纤维化常见的原因主要是病毒性肝炎、酒精性或非酒精性脂肪肝、自身免疫性肝炎等。理论上讲，最好的防止肝纤维化形成的方法是去除损害肝脏的有害因素。的确，有效的抗病毒治疗能够防止肝纤维化的形成和进展，但对大多数进展期酒精性和非酒精性脂肪肝以及遗传性和自身免疫性肝病病人，去除损害因数是困难的。近年来人们一直在致力于研究肝纤维化发生的细胞分子机制，希望能够发现预防、阻止或逆转肝纤维化进展，改善肝功能的方法。尽管，已经发现很多化合物在体外实验和动物模型中具有抗肝纤维化作用，但这些化合物在临床上很少有作用。目前在临床上有用激素、熊去氧胆酸、他丁类药物等治疗肝纤维化，但尚无满意的防止肝纤维化形成和进展的效果。因此，寻找其有效的抑制肝纤维化发生发展的药物仍然是迫切需要的。肝纤维化是肝脏损害因素长期作用的结果，其发生发展是一个有多种细胞、多种细胞信号分子参与的复杂的过程，涉及多种细胞分子机制的作用。以肝内纤维细胞的异常积聚、细胞外间质成分过度沉积以及炎症病变和结构紊乱为特征。肝脏星状细胞(hepaticstellatecells,hsc)活化被认为在肝纤维化的起始、进展等方面起着关键的作用。许多因素包括炎症细胞因子和趋化因子、转化生长因子β、血管衍生生长因子、氧化应激等都参与了肝纤维化的发生发展。

质子泵抑制剂泮托拉唑因其抑制胃粘膜壁细胞h⁺-k⁺-atpase从而抑制胃酸分泌的作用，目前临床上已经广泛用于胃酸相关性疾病(如消化性溃疡)的治疗。

但迄今为止，未发现质子泵抑制剂泮托拉唑在预防和治疗肝纤维化药物中的应用。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供泮托拉唑在制备防治肝纤维化的药物中的应用，提供了泮托拉唑的新用途。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了泮托拉唑在制备防治肝纤维化的药物中的应用。

本发明还提供了泮托拉唑在制备抑制肝星状细胞活化的药物中的应用。

本发明还提供了泮托拉唑在制备防治肝损伤的药物中的应用。

优选的，所述肝损伤由四氯化碳导致。

本发明还提供了泮托拉唑在制备抑制肝组织胶原纤维增加的药物中的应用。

本发明还提供了泮托拉唑在制备抑制细胞外基质蛋白的表达的药物中的应用。

优选的，所述细胞外基质蛋白包括α-平滑肌动蛋白、col1a1蛋白和纤维连接蛋白中的一种或几种。

本发明还提供了泮托拉唑在制备增加上皮表型蛋白的表达的药物中的应用。

本发明还提供了含泮托拉唑的组合物在制备防治肝纤维化的药物中的应用。

优选的，所述药物的剂型包括胶囊、丸剂、片剂、颗粒剂或注射剂。

本发明提供了泮托拉唑在制备防治肝纤维化的药物中的应用，所述泮托拉唑抑制了促纤维化细胞因子tgfβ的受体tgfβr1的表达，抑制了肝脏星状细胞的活化，抑制肝细胞上皮间质的转化，从而抑制肝纤维化的发生。

附图说明

图1为质子泵抑制剂泮托拉唑对四氯化碳导致的小鼠肝纤维化模型中肝脏损伤的组织学改变的影响，肝脏组织学通过he染色检查，图显示的是肝组织he染色检查的代表性图像，正常小鼠的肝脏具有正常的有中央静脉的小叶结构，肝细胞呈条索状，没有再生，在给予四氯化碳后，肝脏见炎症细胞浸润，肝细胞坏死，肝小叶结构紊乱，肝细胞索紊乱，有再生的肝细胞。泮托拉唑(ppz)各组小鼠肝脏损害见不同程度的减轻，尤其是泮托拉唑5mg/kg和10mg/kg组，可见正常的肝细胞索和肝小叶；

图2为masson染色检测质子泵抑制剂泮托拉唑对四氯化碳导致的小鼠肝纤维化模型中肝组织胶原纤维沉积的影响，上面部分为masson染色的代表性的图像，下面部分为各组masson染色阳性区域(即胶原纤维量)的比较，在给予四氯化碳后(control组)肝组织的胶原纤维沉积明显增加，泮托拉唑(ppz)呈剂量依赖地抑制了四氯化碳导致的胶原纤维的沉积，与正常组比较，^$$p<0.01；与对照组比较，^#p>0.05，*p<0.05，**p<0.01；

图3为siriusred染色检测质子泵抑制剂泮托拉唑对四氯化碳导致的小鼠肝纤维化模型中肝组织胶原纤维沉积的影响，上面部分为siriusred染色的代表性的图像，下面部分为各组siriusred染色阳性区域(即胶原纤维量)的比较，在给予四氯化碳后(control组)肝组织的胶原纤维沉积明显增加，泮托拉唑(ppz)呈剂量依赖地抑制了四氯化碳导致的胶原纤维的沉积，与正常组比较，^$$p<0.01；与对照组比较，^#p>0.05，*p<0.05，**p<0.01；

图4为质子泵抑制剂泮托拉唑对四氯化碳导致的小鼠肝纤维化模型中肝组织中tgfβ受体tgfβr1、细胞外基质蛋白α-sma、col1a1和fibronectin以及肝细胞上皮表型e-cadherin表达的影响，通过westernblot分析检测蛋白质的表达，图4中的a为代表性的蛋白印迹图像，图4中的b-f为各组的蛋白质表达的比较，在给予四氯化碳后(control组)肝组织的tgfβr1、α-sma、col1a1和fibronectin的表达明显增加，e-cadherin的表达明显减少，泮托拉唑(ppz)呈剂量依赖地抑制了tgfβr1、α-sma、col1a1和fibronectin的表达，而增加了e-cadherin的表达，与正常组比较，^$$p<0.01；与对照组比较，*p<0.05，**p<0.01；

图5为tgfβ对肝星状细胞lx2细胞活化以及泮托拉唑对tgfβ导致的肝星状细胞基质蛋白表达的影响，先用tgfβ处理lx2细胞48小时，再用不同剂量的泮托拉唑(ppz)作用细胞24小时，通过westernblot分析检测蛋白质的表达，图5中的a为代表性的蛋白印迹图像，图5中的b-d为各组的蛋白质表达的比较，tgfβ处理明显的导致了lx2细胞的α-sma、col1a1和fibronectin表达增加，泮托拉唑(ppz)呈剂量依赖地减少了tgfβ导致的α-sma、col1a1和fibronectin表达增加，与无tgfβ组比较，^$$p<0.01；与tgfβ加对照组比较，^#p>0.05，*p<0.05，**p<0.01；

图6为质子泵抑制剂泮托拉唑对tgfβ导致lx2细胞活化及细胞基质蛋白表达的影响，先用不同剂量的泮托拉唑(ppz)处理lx2细胞30分钟，再用tgfβ处理lx2细胞24小时，通过westernblot分析检测蛋白质的表达，图6中的a为代表性的蛋白印迹图像，图6中的b-d为各组的蛋白质表达的比较，泮托拉唑(ppz)呈剂量依赖地抑制了tgfβ导致的α-sma、col1a1和fibronectin表达增加，与无tgfβ组比较，^$$p<0.01；与对照加tgfβ组比较，^#p>0.05，*p<0.05，**p<0.01。

具体实施方式

本发明提供了泮托拉唑在制备防治肝纤维化的药物中的应用。在本发明中，所述药物的剂型优选包括胶囊、丸剂、片剂、颗粒剂或注射剂。本发明对所述药物中泮托拉唑的含量以及采用的辅料及辅料含量没有特殊限定，采用常规制备各种剂型使用的辅料种类和辅料用量即可，采用各种剂型中常规含有活性物质的含量即可。本发明对所述药物的制备方法没有特殊限定，采用常规剂型的常规制备方法即可。

本发明还提供了泮托拉唑在制备抑制肝星状细胞活化的药物中的应用。在本发明中，所述药物的剂型优选包括胶囊、丸剂、片剂、颗粒剂或注射剂。本发明对所述药物中泮托拉唑的含量以及采用的辅料及辅料含量没有特殊限定，采用常规制备各种剂型使用的辅料种类和辅料用量即可，采用各种剂型中常规含有活性物质的含量即可。本发明对所述药物的制备方法没有特殊限定，采用常规剂型的常规制备方法即可。

本发明还提供了泮托拉唑在制备防治肝损伤的药物中的应用。在本发明中，所述肝损伤优选由四氯化碳导致。在本发明中，所述药物的剂型优选包括胶囊、丸剂、片剂、颗粒剂或注射剂。本发明对所述药物中泮托拉唑的含量以及采用的辅料及辅料含量没有特殊限定，采用常规制备各种剂型使用的辅料种类和辅料用量即可，采用各种剂型中常规含有活性物质的含量即可。本发明对所述药物的制备方法没有特殊限定，采用常规剂型的常规制备方法即可。

本发明还提供了泮托拉唑在制备抑制肝组织胶原纤维增加的药物中的应用。在本发明中，所述药物的剂型优选包括胶囊、丸剂、片剂、颗粒剂或注射剂。本发明对所述药物中泮托拉唑的含量以及采用的辅料及辅料含量没有特殊限定，采用常规制备各种剂型使用的辅料种类和辅料用量即可，采用各种剂型中常规含有活性物质的含量即可。本发明对所述药物的制备方法没有特殊限定，采用常规剂型的常规制备方法即可。

本发明还提供了泮托拉唑在制备抑制细胞外基质蛋白的表达的药物中的应用。在本发明中，所述细胞外基质蛋白优选包括α-平滑肌动蛋白、col1a1蛋白和纤维连接蛋白中的一种或几种。在本发明中，所述药物的剂型优选包括胶囊、丸剂、片剂、颗粒剂或注射剂。本发明对所述药物中泮托拉唑的含量以及采用的辅料及辅料含量没有特殊限定，采用常规制备各种剂型使用的辅料种类和辅料用量即可，采用各种剂型中常规含有活性物质的含量即可。本发明对所述药物的制备方法没有特殊限定，采用常规剂型的常规制备方法即可。

本发明还提供了泮托拉唑在制备增加上皮表型蛋白的表达的药物中的应用。在本发明中，所述细胞外基质蛋白优选包括α-平滑肌动蛋白、col1a1蛋白和纤维连接蛋白中的一种或几种。在本发明中，所述药物的剂型优选包括胶囊、丸剂、片剂、颗粒剂或注射剂。本发明对所述药物中泮托拉唑的含量以及采用的辅料及辅料含量没有特殊限定，采用常规制备各种剂型使用的辅料种类和辅料用量即可，采用各种剂型中常规含有活性物质的含量即可。本发明对所述药物的制备方法没有特殊限定，采用常规剂型的常规制备方法即可。

本发明还提供了含泮托拉唑的组合物在制备防治肝纤维化的药物中的应用。在本发明中，所述组合物优选以泮托拉唑为唯一活性物质。在本发明中，所述药物的剂型优选包括胶囊、丸剂、片剂、颗粒剂或注射剂。本发明对所述药物中泮托拉唑的含量以及采用的辅料及辅料含量没有特殊限定，采用常规制备各种剂型使用的辅料种类和辅料用量即可，采用各种剂型中常规含有活性物质的含量即可。本发明对所述药物的制备方法没有特殊限定，采用常规剂型的常规制备方法即可。

本发明对所述药物的使用方法没有特殊限定，按照医嘱即可。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

质子泵抑制剂泮托拉唑对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的影响

四氯化碳诱导的肝纤维化是实验研究中常用的肝纤维化动物模型。为了研究质子泵抑制剂泮托拉唑对肝纤维化发生的影响，我们选用5-6周龄c57bl6雄性小鼠进行实验，建立四氯化碳诱导的肝纤维化模型，观察不同剂量泮托拉唑对小鼠肝纤维化发生的影响。四氯化碳按阶梯递增剂量给予6周。将四氯化碳溶于橄榄油中，首次剂量按0.875ml/kg胃内灌入，然后1-3周，按1.75ml/kg，每周3次胃内灌入。4-6周，按2.5ml/kg，每周3次胃内灌入。在首次给予四氯化碳后，小鼠被分为对照组以及质子泵抑制剂泮托拉唑1mg/kg、2mg/kg、5mg/kg和10mg/kg组，每组系列12只小鼠。将泮托拉唑按1mg/kg、2mg/kg、5mg/kg和10mg/kg或对照媒剂，小鼠腹腔内给予，每12小时一次。于给药后6周，处死小鼠，检查小鼠肝脏损伤的发生、胶原纤维在小鼠肝脏的沉积情况及肝纤维化的分子标记物。

小鼠肝脏损伤情况通过肝脏组织学he染色进行。结果显示，正常小鼠(未给予四氯化碳)肝脏具有正常的具有中央静脉的小叶结构，肝细胞呈条索状，没有再生。在给予四氯化碳6周后，肝脏见炎症细胞浸润，肝细胞坏死，肝小叶结构紊乱，肝细胞索紊乱，有再生的肝细胞。泮托拉唑各组小鼠肝脏损害见不同程度的减轻，尤其是泮托拉唑5mg/kg和10mg/kg组，可见正常的肝细胞索和肝小叶(图1)。表明泮托拉唑能明显减轻四氯化碳导致的肝损伤。

masson和siriusred染色主要用于检测组织中的胶原纤维，是反映组织纤维化的重要指标。所以肝脏组织胶原纤维的沉积量通过masson和siriusred染色检测。其结果显示，与正常小鼠相比，在给予四氯化碳后，肝组织中的胶原纤维明显增加，泮托拉唑呈剂量依赖地抑制了肝组织胶原纤维的增加(图2和图3)。

肝脏的星状细胞是肌成纤维细胞的主要来源，在肝纤维化的发生中起着重要的作用。促纤维细胞因子通过激活肝星状细胞，产生过量的细胞外基质，导致肝纤维化的发生。转化生长因子β(tgfβ)是重要的促纤维化细胞因子，α-平滑肌动蛋白(α-sma)、i型胶原(col1)和纤维连接蛋白(fibronectin)是主要的细胞外基质蛋白，是肝纤维化重要的分子标记物。e-cadherin是上皮间质转化的重要的上皮表型标志。我们进一步检查了在四氯化碳诱导的肝纤维化模型中泮托拉唑对肝脏组织中这些分子标志物的影响。这些分子蛋白质的表达水平通过westernblot方法分析。结果显示，与正常小鼠相比，在给予四氯化碳后，肝脏组织中细胞因子tgfβ的受体tgfβr1的表达明显增加，细胞外基质蛋白α-sma、col1a1和fibronectin的表达明显增加，上皮表型蛋白e-cadherin的表达明显减少，泮托拉唑呈剂量依赖地抑制了tgfβr1、α-sma、col1a1和fibronectin的表达，增加了e-cadherin的表达(图4)

结果表明质子泵抑制剂泮托拉唑抑制了四氯化碳导致的促纤维化细胞因子tgfβ的受体tgfβr1的表达，抑制了肝脏星状细胞的活化，抑制肝细胞上皮间质的转化，从而抑制肝纤维化的发生。质子泵抑制剂泮托拉唑制备出能有效预防和治疗肝纤维化的药物是可行的。

实施例2

质子泵抑制剂泮托拉唑对人的肝星状细胞活化和肝纤维化相关蛋白表达的影响

lx2细胞是人的肝星状细胞。选择lx2细胞进行实验。首先，用tgfβ处理lx2细胞48小时，再分别用泮托拉唑10μm、20μm、40μm、80μm、160μm、320μm和对照(control)媒介(生理盐水)处理细胞24小时，观察tgfβ是否激活了肝星状细胞以及泮托拉唑的影响。结果显示在tgfβ处理后，α-sma、col1a1和fibronectin的表达明显增加，泮托拉唑呈剂量依赖地减少了这些细胞外基质蛋白的表达(图5)。进一步实验，先用分别用泮托拉唑10μm、20μm、40μm、80μm、160μm、320μm和对照(control)媒介(生理盐水)预处理lx2细胞30分钟，再加tgfβ处理细胞24小时，结果显示泮托拉唑呈剂量依赖地抑制了tgfβ导致的α-sma、col1a1和fibronectin的表达增加(图6)。

结果表明质子泵抑制剂泮托拉唑抑制了tgfβ导致的肝星状细胞活化，抑制了细胞外基质蛋白的表达。

以上结果表明质子泵抑制剂泮托拉唑能有效地抑制肝星状细胞的活化及肝纤维化相关蛋白的表达，减轻四氯化碳导致的小鼠肝脏损害，抑制胶原纤维在小鼠肝脏的沉积，抑制肝细胞上皮间质的转化，抑制肝纤维化的发生。质子泵抑制剂泮托拉唑制备出能有效预防和治疗肝纤维化的药物是可行的。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。