治疗肺部损伤，止咳、化痰合并改善皮肤水分的中药组合物、制备和应用的制作方法

本发明属于生物医药领域，涉及一种治疗肺部损伤，止咳、化痰合并改善皮肤水分的中药组合物、制备和应用，具体涉及一种能够治疗因大气pm2.5污染而导致肺部损伤，止咳、化痰合并改善皮肤水分的中药组合物及其制备方法。
背景技术：
：空气污染与人类疾病之间的关联已广为人们所了解。其中，颗粒物是一种重要的空气污染物，它对人群健康的影响与其粒径大小、化学组成密切相关。颗粒物各组分中对人体健康危害最大的是细颗粒物(fineparticulatematter，pm2.5)。大气pm2.5表面吸附大量的有毒有害物质，并可以通过呼吸沉积在肺泡，甚至可经过肺到达其它器官，最终造成肺损伤及其它系统的功能损害。流行病学研究结果显示，pm2.5浓度上升与呼吸系统疾病病死率、入院率的升高呈正相关。急性下呼吸道感染、慢性阻塞性肺疾病、肺癌等呼吸系统疾病均与pm2.5暴露有关。肺中的pm2.5还可引发炎症反应、氧化损伤、降低肺功能、破坏肺发育，增加哮喘的发病率和病死率。[严思远，李新鸣，肖纯凌.pm2.5对呼吸系统损伤的流行病学和机制研究进展[j].沈阳医学院学报,2016,18(5):388-391.]西医认为pm2.5会对呼吸系统造成氧化和炎症的损伤。而中医认为雾霾之邪集毒、燥、湿三气于一体。雾霾侵袭人体，会在体内产生毒、火、痰、瘀四大病理产物，从而进一步影响包括肺脏在内的全身脏腑机能。[马重阳，王庆国，张纾难，等.雾霾致病的中医病机与治法[j].环球中医药,2015(9):1097-1098.]《黄帝内经》中说“恬淡虚无，真气从之，病安从来”，首次提出了“治未病”的概念。对于雾霾对人体呼吸系统的影响，要以预防为先。目前，采用合理中医药配伍预防和治疗雾霾对呼吸道伤害的产品和专利较少，而且现有的这些专利产品大多数配伍成分复杂，功效成分不明确。并且，多使用罗汉果、薄荷脑等寒凉药材，不适合寒性阴虚体质人群长期使用。中医理论上，皮肤水分属于津液范畴，与气、血、脏腑功能相关。辩证的分为：气血不足、肺肾阴虚、胃阴不足、肺气不固等症型。对于肺胃阴虚、肾阴不足者，通过滋养肺肾，可达到补充津液，起到改善皮肤水分的作用。[刘子君，邓燕，周振婷，等.中药治疗改善皮肤水分之机理[j].新中医，2015,47(6):328-329.]现代科学理论认为皮肤水分减少是皮肤老化的表现之一。导致皮肤老化的一个主要原因是机体清除自由基、抗氧化能力的下降，使得自由基对机体的损伤不断积累。从而使表皮、真皮水分大量丢失，含水量减少，出现皮肤干燥、萎瘪。目前，纯中药组方改善皮肤水分产品不多，主要还是中药复配本身就具有较好的改善皮肤效果的功效成分的透明质酸或者胶原蛋白肽等来达到改善水分的目的。技术实现要素：为了克服现有技术中的上述缺陷，本发明提供了一种中药组合物及其制备方法，所述中药组合物尤其能够预防并治疗因大气pm2.5污染而导致肺部损伤，能显著延长咳嗽潜伏期、减少咳嗽反应次数，具有良好的化痰作用，改善皮肤水分。本发明还能起到润肺作用，主要表现为止咳、化痰。本发明提供的中药组合物包括以下组分：蒲公英、鱼腥草、桔梗、百合、甘草、蛹虫草。其中，所述中药组合物包括以下重量份数的组分：蒲公英5-12份、鱼腥草5-12份、桔梗3-10份、百合3-10份、甘草3-10份、蛹虫草1-5份。优选地，所述中药组合物包括以下重量份数的组分：蒲公英9份、鱼腥草9份、桔梗6份、百合6份、甘草6份、蛹虫草1份。或，优选地，所述中药组合物包括以下重量份数的组分：蒲公英5份、鱼腥草5份、桔梗3份、百合3份、甘草3份、蛹虫草1份。或，优选地，所述中药组合物包括以下重量份数的组分：蒲公英12份、鱼腥草12份、桔梗10份、百合10份、甘草10份、蛹虫草5份。或，优选地，所述中药组合物包括以下重量份数的组分：蒲公英10份、鱼腥草9份、桔梗7份、百合6份、甘草8份、蛹虫草2份。根据中医理论肺司呼吸，预防呼吸道疾病首先就要保护中医上说的肺。应使用有润肺清肺，清热解毒，止咳祛痰等功效的中草药来防御雾霾对呼吸系统的侵害。同时结合现代西医研究，所选的药材也应具有抗炎、抑菌、提高免疫力等功效成分。蒲公英味苦、甘、性寒，归肝、胃经；清热解毒，消肿散结，利尿通淋；用于疗疮肿毒，咽痛，肺痈，肠痈等。绿原酸是其主要抗菌成分，黄酮类是其主要抗氧化活性成分。现代药理实验表明，蒲公英有抑菌、抑病毒、抗炎、抗氧化、免疫促进等作用。蒲公英全草中绿原酸、总黄酮含量较常见药用植物高，sod活性和总抗氧化能力均呈较高水平。[蒋喜巧，苗明三.蒲公英现代研究特点及分析[j].中医学报，2015(7):1024-1026]、[张卫明，吴国荣，马世宏，等.蒲公英护肤作用研究[j].中国野生植物资源，2001(03):15-17.]鱼腥草味辛，性微寒，归肺经；清热解毒，消痈排脓，利尿通淋；用于肺痈吐脓，痰热咳喘，热痢，热淋，痈肿疮毒。现代药理学研究表明，鱼腥草有抑菌、抗炎、抗病毒、平喘镇咳等作用。此外，鱼腥草中还富含花青素、原花青素、总酚等高抗氧化物质。[许贵军，李志军，王琦，等.鱼腥草的抗炎活性成分[j].中国药科大学学报，2016,47(3):294-298.]、[李君，赵福涛.鱼腥草抗炎作用的新进展[j].医学综述，2014,20(16):3006-3007.]、[赵子凯，李丽芬，石扣兰，等.“复方养阴清肺汤”镇咳、祛痰、抗炎及抑菌作用的实验研究[j].中西医结合心脑血管病杂志，1999(2):39-41.]、[刘泽静，薛生玲，夏雪，等.鱼腥草不同部位生物活性物质和抗氧化能力分析[j].浙江农业学报，2016，28(6):992-998.]桔梗味苦、辛，性平。归肺经。宣肺，利咽，祛痰，排脓。用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛音哑，肺痈吐脓。桔梗含有三萜皂苷、多糖、黄酮、甾醇、脂肪酸以及微量元素等，具有祛痰、镇咳、抗炎等作用。桔梗多糖跟其他植物多糖相比也表现出很强的清除羟基自由基的能力，说明桔梗多糖具有明显的抗氧化活性,可以有效防止羟基自由基对人体造成伤害。[金欣，陈勤.桔梗的药理作用研究新进展[j].现代中药研究与实践，2015,29(2):79-82.]、[张莲姬，南昌希，张丽霞.桔梗多糖的提取及其抗氧化作用研究[j].食品与机械，2008(03):60-63.]甘草甘，平。归心、肺、脾、胃经。补脾益气，淸热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。现代药理学研究表明，甘草具有镇咳、祛痰、平喘以及抗呼吸道病原体等作用。此外，甘草总黄酮和甘草多糖成分具有较好的抗氧化作用。[wangmy,zhangm,tangqy,etal.influenceofhoney-roastingonthemainpharmacologicalactivitiesandthewater-solubleactiveglycosidesoflicorice[j].afrjtraditcomplementalternmed,2012,9(2):189-196.]、[刘朝旭，王玮，马东来.甘草总黄酮的不同提取方法比较及其抗氧化活性研究[j].精细与专用化学品，2018，12:27-30.]、[乌兰其其格，宋学军，段雪琴，等.甘草多糖的提取及其抗氧化活性研究[j].赤峰学院学报(自然科学版)，2019，06:36-38.]百合甘、微寒。归肺、心，胃经。养阴润肺，清心安神。常用于阴虚燥咳，劳嗽咳血，虚烦惊悸，失眠多梦，精神恍惚。百合的化学成分含酚酸甘油脂、酚酸甘油脂糖苷、甾体糖苷、甾体生物碱、微量元素、蛋白脂、脂肪等成分。现代药理学研究表明，百合有镇咳祛痰，滋阴润肺等作用。另外，百合还具有抗氧化作用，可作为还原剂或自由基清除剂而终止自由基反应。[李卫民，孟宪纾，俞腾飞，等.百合的药理作用研究[j].中药材，1990,13(6):31-35.]、[何纯莲，陈腊生，任凤莲.药用百合提取液对羟自由基清除作用的研究[j].理化检验(化学分册)，2005(08):558-560.]蛹虫草甘、平，入肺、肾经。保肺益肾，止血化痰，治劳嗽。蛹虫草含有虫草多糖和sod等多种生物活性物质，现代医学发现蛹虫草有提高免疫功能、抗菌、抗肿瘤、抗氧化等功能。另外，蛹虫草能够修复紫外辐射对果蝇造成的中轻度损伤，并能通过抗氧化的途径来减轻紫外线给机体带来的氧化损伤。虫草多糖对皮肤的光老化的保护作用可能是通过影响tgf-β/smad信号来实现的。[蒋志涛，戴国梁，潘金火，等.蛹虫草化学成分及药理作用研究进展[j].现代中药研究与实践，2015(5):80-83.]、[左锦辉，贡晓燕，董银卯，等.蛹虫草的活性成分和药理作用及其应用研究进展[j].食品科学，2018，39(21):330-339.]配伍方面：(1)蒲公英、鱼腥草。方剂蓟菜汤由鸭跖草60克，小蓟30克，虎杖30克，蒲公英30克，平地木30克，黄芩24克，鱼腥草30克，败酱草30克组成。清热解毒，活血化瘀，祛痰止咳。主风温犯肺，瘀热内蕴，肺失宣降。杨帮平使用此方治疗肺炎，取得显著疗效。同时抑菌试验表明，此方对肺炎的致病菌有较强的抗菌作用。方中蒲公英，鱼腥草主要是利用其清热解毒之功效。[蒋喜巧，苗明三.蒲公英现代研究特点及分析[j].中医学报，2015(7):1024-1026.](2)鱼腥草、桔梗。复方鲜竹沥液清热化痰，止咳。主治痰热咳嗽，痰黄黏稠。方中鱼腥草辛散微寒，善清热解毒、化痰止咳；桔梗苦泄辛散性平，善宣肺利咽、祛痰止咳；全方配伍，苦寒清热降泄，共奏清热化痰、止咳之功，故善治痰热咳嗽、痰黄黏稠者。(3)甘草、桔梗。“桔梗-甘草”药对来源于汉代医圣张仲景的名方桔梗汤。桔梗汤于《伤寒论》及《金匮要略·肺痿肺痈咳嗽》都有论述，其分别论治咽痛及肺痈，方仅由桔梗、甘草二味药共同组成。《金匮要略·肺痿肺痈咳嗽》云：“喘而胸满，振寒脉数，咽干不渴，时出浊唾腥臭，久久吐脓如米粥者，为肺痈，桔梗汤主之。”桔梗与甘草配伍可清热解毒，宣肺利咽，适合于咽喉肿痛以及风热郁肺所致的肺痈咳嗽等。本发明中，蒲公英、鱼腥草清热解毒，消痈散结，同为君药；桔梗、甘草宣肺止咳，祛痰利咽，共为臣药；蛹虫草补肺平喘，百合滋阴润肺，止咳化痰，共为佐使药。全方具有清热解毒，祛痰止咳，补肺润肺的功效，用于预防雾霾所引的肺部感染及咳嗽。蒲公英归胃经，鱼腥草、桔梗归肺经，甘草、百合归肺、胃经，蛹虫草归肺、肾经。本发明还能滋养肺肾之阴，补充体内之阴精以充津液，具有增液润燥之功，对于由于缺水引起的皮肤干燥有对症之疗效。从现代医学观点来看，本发明全方配伍，具有抗菌、抗炎、抗病毒、止咳祛痰、抗氧化、调节人体免疫，预防雾霾所引发的肺部感染和咳嗽。本发明中单个原料均有良好的抗氧化效果，搭配使用对皮肤可以起到清除自由基、抗氧化的作用，减少自由基对皮肤的损害，从而起到改善皮肤水分的作用。本发明还提供了该中药组合物的制备方法。将上述组合物粉碎，加入药材(即，蒲公英、鱼腥草、桔梗、百合、甘草、蛹虫草的总和)质量8～12倍的水，浸泡30min后，加热至微沸，进行第一次提取60min，过滤；再加入药材质量6～8倍的水，加热至微沸，进行第二次提取30min～60min，过滤，合并两次的过滤液。本发明中，所述过滤液经冷凝换热器降至40℃以下，过管式离心机，离心机转速14000rpm。离心上清液在70℃，真空度＜0.08mpa的条件下，浓缩至固含量25％左右，出液时过200目筛网，得到浓缩液。所述浓缩液在90℃下，保温30min，做杀菌处理。杀菌后进行喷雾干燥，得到所述中药组合物。本发明中，所述中药组合物还可以通过加入不同的辅料，采用不同的制剂工艺，从而制成速溶颗粒剂、膏剂、液体饮料、片剂、胶囊等剂型。优选的剂型为速溶颗粒剂和膏剂。本发明还提供了所述中药组合物在制备预防和/或治疗肺损伤的药物中的应用。优选地，所述中药组合物用于预防和/或治疗因大气pm2.5污染而导致的肺部损伤。本发明还提供了所述中药组合物在制备止咳和/或化痰的药物中的应用。本发明还提供了所述中药组合物在制备延长咳嗽潜伏期、减少咳嗽反应次数的药物中的应用。本发明还提供了所述中药组合物在制备改善皮肤水分、保湿的药物或化妆品中的应用。本发明还提供了一种化妆品，所述化妆品为保湿化妆品，所述化妆品包括所述的中药组合物。本发明的有益效果在于，本发明提供的中药组合物能够治疗和预防因大气pm2.5污染而导致肺部损伤合并止咳、化痰，能显著延长咳嗽潜伏期、减少咳嗽反应次数，减少痰液生成，改善皮肤水分。附图说明图1为空白对照组的肺组织纤维图像(x200)。图2为预防组模型对照组的肺组织纤维图像(x200)。图3为预防组实施例1组的肺组织纤维图像(x200)。图4为预防组实施例2组的肺组织纤维图像(x200)。图5为预防组实施例3组的肺组织纤维图像(x200)。图6为预防组实施例4组的肺组织纤维图像(x200)。图7为治疗组模型对照组的肺组织纤维图像(x200)。图8为治疗组实施例1组的肺组织纤维图像(x200)。图9为治疗组实施例2组的肺组织纤维图像(x200)。图10为治疗组实施例3组的肺组织纤维图像(x200)。图11为治疗组实施例4组的肺组织纤维图像(x200)。图12为对d半乳糖至衰模型小鼠皮肤含水量的影响(n＝10，x±s)，注：△与空白对照组相比较，p<0.05；*与模型组比较，p<0.05。具体实施方式结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。实施例1取蒲公英5份、鱼腥草5份、桔梗3份、百合3份、甘草3份、蛹虫草1份，混合，粉碎，加入药材质量8倍的水，浸泡30min后，加热至微沸，进行第一次提取60min，过滤；再加入药材质量8倍的水，加热至微沸，进行第二次提取30min，过滤，合同两次的滤液。提取液经冷凝换热器降至40℃以下，过管式离心机，离心机转速14000rpm。离心液在70℃，真空度＜0.08mpa的条件下，浓缩至固含量25％左右，出液时过200目筛网。浓缩液在90℃下，保温30min，做杀菌处理。杀菌后进行喷雾干燥，得到提取物。实施例2取蒲公英12份、鱼腥草12份、桔梗10份、百合10份、甘草10份、蛹虫草5份，混合，粉碎，加入药材质量12倍的水，浸泡30min后，加热至微沸，进行第一次提取60min，过滤；再加入药材质量6倍的水，加热至微沸，进行第二次提取60min，过滤，合并两次的滤液。其余步骤同实施例1。实施例3蒲公英10份、鱼腥草9份、桔梗7份、百合6份、甘草8份、蛹虫草2份。将上述组合物粉碎，加入药材质量10倍的水，浸泡30min后，加热至微沸，进行第一次提取60min，过滤；再加入药材质量8倍的水，加热至微沸，进行第二次提取45min，过滤，合并两次的滤液。其余步骤同实施例1。实施例4蒲公英9份、鱼腥草9份、桔梗6份、百合6份、甘草6份、蛹虫草1份。将上述组合物粉碎，加入药材质量8.5倍的水，浸泡30min后，加热至微沸，进行第一次提取60min，过滤；再加入药材质量6倍的水，加热至微沸，进行第二次提取30min，过滤，合并两次的滤液。其余步骤同实施例1。其他实施例各药材组分见表1表1对比例1-4对比例1配方组成：蒲公英9份、鱼腥草9份。对比例2配方组成：蒲公英9份、鱼腥草9份、桔梗6份、甘草6份。对比例3配方组成：蒲公英9份、鱼腥草9份、百合6份、蛹虫草1份。对比例4配方组成：桔梗6份、甘草6份、百合6份、蛹虫草1份。上述4个对比例的制备方法同实施例1。应用实施例1对pm2.5致大鼠肺损伤的预防和治疗作用大气pm2.5的采集及其悬液的制备：2018年2-12月，于上海市某居住区附近设置采样点，其附近无工业企业，周围人口较密集，采样高度为16米。用thermoandersen大容量采样器采集pm2.5于玻璃纤维滤膜上。将吸附pm2.5的滤膜剪成2cm*3cm大小浸入超纯水中，低温震荡20min，纱布过滤洗脱，收集洗脱的pm2.5悬浮液，超声震荡10min，使之混匀，4℃下离心，收集沉淀液，置于冷冻干燥机，低温真空冷冻干燥，待干燥后用生理盐水制成悬浮液，4℃低温保存。1.1受试动物：spf级sd大鼠，购自上海杰思捷实验动物有限公司，雄性，体重180-200g，合格证号：311620400018120。1.2试验剂量：受试样品剂量设计是根据临床人体用量(8.81g生药量/天)进行换算得出大鼠等效剂量。大鼠购入后，在spf饲养室内适应性饲养两天，饲养温度18-22℃，相对湿度为45％-55％。昼夜节律设计为12h昼夜交替。随机分为19组，每组8只。大鼠饲养时间共计2周。大鼠气管滴注pm2.5悬浮液，染毒剂量为40mg/kg.b.w.。隔天染毒一次，共3次。复方蒲公英鱼腥草提取物每天同一时间段进行灌胃给药，连续给药1周。复方蒲公英鱼腥草提取物用生理盐水溶解。1.3试验分组：表21.4试验方法：每组取8只大鼠，用10％的水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉抽血处死。结扎一侧肺的支气管，该侧肺用于肺病理检查取样，另一侧肺行肺灌洗。每次用37℃预温的生理盐水3ml灌洗该侧肺叶，共灌洗3-4次，收集(肺泡灌洗液)(balf)8ml，3000r/min离心20min，留取上清液，分装后于-80℃冰箱保存。用试剂盒检测肺泡灌洗液中的酸性磷酸酶(acp)、碱性磷酸酶(akp)、乳酸脱氢酶(ldh)、白蛋白(alb)、c反应蛋白(crp)和总蛋白(tp)水平，elisa方法检测细胞因子白介素-1β(il-1β)、白介素-6(il-6)、肿瘤坏死因子α(tnf-α)水平。通过对肺灌洗液中acp、akp和ldh水平指标的测定，观察了解各组大鼠的肺损伤情况。通过对肺泡灌洗液中il-6、il-1β、tnf-α和crp等炎性因子的测定，观察各组动物的机体炎性损伤情况。1.5试验结果：表3各组大鼠肺泡灌洗液中acp、akp、ldh水平(n＝8，)注：△与空白对照组进行比较，p<0.05；*与治疗组模型组比较，p<0.05；#与预防组模型组比较，p<0.05。表4各组大鼠肺泡灌洗液中il-6、il-1β、tnf-α和crp浓度(n＝8，)注：△与空白对照组进行比较，p<0.05；*与治疗组模型组比较，p<0.05；#与预防组模型组比较，p<0.05。与空白对照组相比较，治疗组模型组和预防组模型组肺泡灌洗液中acp、akp、ldh、il-6、il-1β、tnf-α和crp浓度均升高，且差异有统计学意义(p<0.05)，说明大鼠肺部损伤模型造模成功。治疗组中，实施例1～4组，与治疗组模型组相比，除了实施例1组的il-1β、tnf-α和crp浓度下降不显著外，acp、akp、ldh、il-6、il-1β、tnf-α和crp浓度均有下降，且差异有统计学意义(p<0.05)。而对比例1～4组，对acp、akp、ldh、il-6、il-1β、tnf-α和crp指标的差异没有统计学意义(p＞0.05)。预防组中，实施例1～4组，与预防组模型组相比，除了实施例1组的il-1β、tnf-α和crp和实施例3组的il-1β浓度下降不显著外，acp、akp、ldh、il-6、il-1β、tnf-α和crp浓度均有下降，且差异有统计学意义(p<0.05)。对比例1～4组，对acp、akp、ldh、il-6、il-1β、tnf-α和crp指标的差异没有统计学意义(p＞0.05)。结论：本发明实施例1～4组的中药组合物对气管滴注染毒pm2.5导致的肺损伤，有较好的预防和治疗作用。肺组织病理切片：空白对照组(图1)仅见部分肺泡间隔增厚，肺泡腔内少量炎性细胞浸润，未见颗粒物聚积。预防组模型对照组(图2)和治疗组模型对照组(图7)的肺内，可见pm2.5颗粒聚积，肺泡间隔增厚，肺泡腔缩小，肺间质和肺泡腔内炎性细胞浸润。预防组实施例1～4组(图3～图6)大鼠肺部损伤情况不同，但均较pm2.5对照组损伤情况轻。预防组实施例1组肺内可见少量颗粒物聚积，肺泡间隔增厚，肺泡腔缩小，肺间质炎性细胞浸润；预防组实施例2组可见部分肺间隔增厚，部分肺泡缩小，肺泡腔见部分炎性细胞和红细胞浸润；预防组实施例3组，肺泡间隔稍微增厚，肺泡腔略微缩小，肺泡腔少量炎性细胞浸润；预防组实施例4组，肺泡间隔稍微增厚，肺泡腔略微缩小，肺泡腔少量炎性细胞浸润。治疗组实施例1～4组(图8～图11)大鼠肺部损伤情况不同，但均较pm2.5对照组损伤情况轻。治疗组实施例1组可见肺间隔增厚，肺泡腔缩小，肺泡腔见炎性细胞和红细胞浸润；治疗组实施例2组可见部分肺间隔增厚，部分肺泡腔缩小，肺泡腔见部分炎性细胞和红细胞浸润；治疗组实施例3组中可见小部分肺泡间隔增厚，少量肺泡腔缩小，肺间质少量炎性细胞浸润；治疗组实施例4组可见部分肺泡间隔增厚，肺泡腔缩小，肺间质少量炎性细胞浸润。应用实施例2小鼠氨水引咳实验2.1受试动物：spf级icr小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，体重21.0g～28.2g，合格证号：20130016005440。2.2试验剂量：受试样品剂量设计是根据临床人体用量(8.81g生药量/天)进行换算得出小鼠等效剂量。2.3试验分组：共10组，每组10只，雌雄各半。分别为空白对照组、模型对照组、供试样品组：实施例1～4所得到的样品组和对比例1～4所得到的样品组。2.4试验方法：各组小鼠每日灌胃药物(即样品)1次，连续7d，模型对照组和正常对照组以等体积生理盐水灌胃。在末次给药30min后，将小鼠放入玻璃罩内(除空白对照组)，加入25％浓氨水均匀雾化致咳，观察小鼠咳嗽潜伏期及2min内咳嗽次数，计数方法以腹肌收缩或缩胸，张开大口计咳嗽1次。2.5试验结果：表5小鼠氨水引咳(n＝10，)注：*与模型对照组比较，p<0.05；**p＜0.01，***p＜0.001。与模型对照组相比，实施例1～4组均能显著延长小鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽反应次数，其中实施例2组、实施例3组和实施例4组有极其显著的统计学差异(p＜0.001)。与模型对照组相比，对比例1组、2组和4组也能延长小鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽反应次数，但是效果显著差于实施例1～4组；对比例3组与模型对照组的差异没有统计学意义。结论：本发明实施例1～4组能显著延长氨水引咳试验中小鼠咳嗽潜伏期、减少咳嗽反应次数，具有良好的止咳作用。应用实施例3小鼠气管酚红排痰量实验3.1受试动物：spf级icr小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，体重21.0g～28.2g，合格证号：20130016005440。3.2试验剂量：受试样品剂量设计是根据临床人体用量(8.81g生药量/天)进行换算得出的小鼠等效剂量。3.3试验分组：共10组，每组10只，雌雄各半。分别为空白对照组、模型对照组、供试样品组：实施例1～4所得到的样品组和对比例1～4所得到的样品组。3.4试验方法：各组小鼠每天灌胃给药1次，连续3天，模型对照组和空白对照组以等体积生理盐水灌胃。末次给药后30分钟，按10ml/kg体重的剂量给模型组、各给药组的每只小鼠腹腔注射50mg/ml酚红生理盐水溶液，注射后30分钟，以后颈椎脱臼处死小鼠；分离气管，剪下自甲状软骨下缘至气管分叉处的一段气管，将各气管段放入预先盛有2ml生理盐水的试管中，旋涡震荡器震荡5分钟，再以超声波清洗20分钟，加入50mg/mlnahco3溶液1ml，以1500转/分钟离心10分钟；取上清液于546nm处测od值。空白对照组小鼠相应气管段经同样处理后为对照。按酚红测定标准曲线回归方程计算酚红排泄量。3.5试验结果：表6.小鼠气管酚红排泄量(n＝10，)注：△△与空白对照组比较，p＜0.01；*与模型组比较，p<0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。与模型对照组相比，本发明实施例1～4组均能显著减少小鼠支气管酚红排泄量，其中实施例4组有极其显著的统计学差异(p＜0.001)。与模型对照组相比，对比例1组和4组也能减少小鼠支气管酚红排泄量，但是效果显著差于本发明实施例1～4组；对比例2组和对比例3组与模型对照组的差异没有统计学意义。结论：本发明实施例1～4组能显著减少小鼠气管酚红排泄量，有良好的化痰作用。应用实施例4小鼠皮肤水分改善试验4.1受试动物：检疫合格的雌性balb/c-nu/nu裸小鼠。4.2试验剂量：受试样品剂量设计是根据临床人体用量(8.81g生药量/天)进行换算得出的小鼠等效剂量。4.3试验分组：共10组，每组10只，雌雄各半。分别为空白对照组、模型对照组、供试样品组：实施例1～4所得到的样品组和对比例1～4所得到的样品组。4.4试验方法：除空白对照组外，其余各组小鼠每天上午皮下注射d-半乳糖1000mg/kg，空白对照组小鼠每天皮下注射等量生理盐水，连续4周。各组造模同时开始灌服相应的受试样品(空白对照组组与模型对照组灌服等量的蒸馏水)，每天1次，连续4周。末次给药1h后，各组小鼠处死后取皮肤组织，用干燥称重法测定皮肤含水量。4.5试验结果：连续给药4周后，模型对照组皮肤含水最比正常组明显减少(p<0.05)；与模型对照组相比，实施例1～4组皮肤含水量明显增加(p<0.05)；而对比例1～4组皮肤含水量均没有显著变化。结论：本发明实施例1～4组能显著增加d半乳糖至衰模型小鼠皮肤含水量。应用实施例5改善皮肤水分人体试食试验5.1受试者选择：选择年龄在30～50岁，身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患，无长期服药史，志愿受试保证配合的人群。妊娠或哺乳期妇女不在选择范围之内。5.2试食样品及剂量：实施例1～4样品，按照8.81g生药量/天服用。5.3试食分组：本实验采用双盲随机分组，组间和自身两种对照设计。按上述标准选择100例受试者，按皮肤水分情况随机分为4个试食组和对照组各20例，并对年龄等进行均衡性检验，以保证组间的可比性。试验结束后计算因故终止试验的病例数(包括中途停服受试物、未参加复检等)，计算脱离率。5.4试验方法：4个试食组分别服用实施例1～4样品，按剂量服用，每天1次。连续观察35天。对照组服安慰剂，剂量与试食组相同。两组受试者在试验期间不得服用其它保待皮肤水分的物品及影响结果判定的化妆品。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。5.5仪器：油脂水分测试仪：德国cksd275.6功效指标测试：测试前额眉间皮肤的水分。测定环境：在宽敞、通风条件良好，温度、湿度等空间环境稳定的检查室进行。安静状态下用洁净棉球醮蒸馏水清洁被测部位，擦干后15分钟进行水分的测定，试食前后测定工作由一台仪器、同一人操作。结果用均值±标准差表示，数据试食前后自身比较用配对t检验，组间比较用成组t检验。对试食前后皮肤水分变化进行统计。5.7试验结果：试食结束后，最终确定每组18例。试食前两组受试者一般资料比较见表7，试验前两组受试者年龄、皮肤水分均无明显差异(p>0.05)，具有可比性。表7.试验前皮肤水分比较项目对照组实施例1组实施例2组实施例3组实施例4组例数1818181818年龄(岁)39.46±6.6840.16±7.1340.22±6.4339.84±7.2440.11±6.83皮肤水分(％)10.88±0.6810.91±0.6810.97±0.6610.92±0.6710.93±0.66试食前后两组皮肤水分变化情况结果见表8，对照组试食后皮肤水分为10.92±0.72％，与试食前(10.88±0.68％)比较，无显著性差异(p＞0.05)。实施例1～4组，试食后皮肤水分与试食前比较，均有显著性差异(p<0.05)；与对照组比较，也有显著性差异(p<0.05)；实施例1～4组试食后皮肤水分与试食前相比，增加幅度分别为0.34±0.25％、0.30±0.27％、0.41±0.30％、0.46±0.26％，与对照组(0.04±0.31％)比较，均有非常显著性差异(p<0.01)。说明本发明实施例1～4样品具有改善皮肤水分作用。表8.试验前后皮肤水分变化比较(％，)组别例数(n)试验前试验后增加幅度对照组1810.88±0.6810.92±0.720.04±0.31实施例1组1810.91±0.6811.25±0.63*#0.34±0.25##实施例2组1810.97±0.6611.27±0.72*#0.30±0.27##实施例3组1810.92±0.6711.33±0.66*#0.41±0.30##实施例4组1810.93±0.6611.39±0.73*#0.46±0.26##注：*与试验前比较，p<0.05；#与对照组比较，p<0.05，##与对照组比较，p<0.01本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离本发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。当前第1页1 2 3