本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种抗终末糖基化预防和/或治疗老年退行性病变的食品或药物。
背景技术:
糖基化本身就是新陈代谢的一部分,在机体新陈代谢过程中相随而生,无法避免。在生命体中蛋白糖基化是蛋白质翻译后修饰中最重要的修饰之一,起着非常重要的作用。有超过50%以上的蛋白质都发生了糖基化修饰,包括染色质蛋白、核孔蛋白、rna聚合酶
核转录因子(nuclearfactorkappa-b,nf-κb)蛋白在细胞的炎症反应、免疫应答等过程中起到关键性作用。nf-κb的错误调节会引发自身免疫病、慢性炎症以及很多癌症。nf-κb也与突触的可塑性、记忆有关。nf-κb的c端结构域(ctd)上有一个核定位区域(nls),负责与dna结合(nf-κb-dna复合物:最常见的nf-κb二聚体是rela(p65)与p50组成的异二聚体)、二聚体化和核易位。nf-κb通路激活因子有很多,包括:tnf-α、il-1β、il-2、il-6、il-8、il-12、inos、cox2、趋化因子、粘附分子、集落刺激因子等。此外,锌指蛋白a20、血红素加氧酶-1(ho-1)等一些抗炎和与细胞凋亡有关的分子如:肿瘤坏死因子受体相关因子-1(tumour-necrosisfactorreceptorassociatedfactor-1,traf-1),抗细胞凋亡的蛋白-1和-2(inhibitorofapoptosis1/2,iap1/iap2),tnf受体相关因子(receptor–associatedfactors,traf1/traf2),bcl-2同源体a1/bfl-1和iex-il也都受nf-κb的调控。晚期糖基化终末产物受体(receptorforadvancedglycationendproducts,rage)属于免疫球蛋白超家族成员之一的多配体受体,广泛分布于各种细胞膜表面,主要通过激活nf-κb介导慢性炎症过程,参与多种慢性疾病的发生发展。低氧可能通过激活rage/nf-κb信号通路导致脂肪细胞胰岛素抵抗。
目前,安全高效可靠的抗epag、抗衰老药物尚属空白,使多种与epag、衰老密切相关的老年性疾病难以得到有效控制。
衰老以及由衰老引起的老年性疾病已成为严重的医学和社会问题,探索衰老的原因与机制,开发抗衰老和防治老年退行性病变是国际研究的热点,不但解决科学问题,还能创造新的技术和应用,帮助人类社会健康发展。
技术实现要素:
为了解决上述技术问题,本发明的目的在于提供一种抗终末糖基化预防和/或治疗老年退行性病变的食品或药物,用于防治老年性糖尿病、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化、老年性肿瘤、老年性白内障及肾小球硬化(尿毒症)和延缓衰老。
本发明所采用的技术方案是:一种抗终末糖基化预防和/或治疗老年退行性病变的食品或药物,为仙鹤草糖化物。
进一步地,所述的仙鹤草糖化物的制备过程为:将鲜仙鹤草打浆→糖基化制备仙鹤草糖化物。
进一步地,所述的仙鹤草糖化物的制备过程为:鲜仙鹤草打浆→加葡萄糖(或红糖或果糖)→糖基化反应制成的仙鹤草糖化物。
进一步地,所述的仙鹤草糖化物,按照常规的配方和制备技术制成习惯上可以接受的食品类型,包括不限于饮料、口服液。
进一步地,所述仙鹤草糖化物物进行干燥后,按照常规的配方和制备技术制成习惯上可以接受的食品类型,包括不限于糕点、含片。
进一步地,所述仙鹤草糖化物,按照药品的常规制备技术制成药学上可以接受的药物剂型,包括不限于滴剂、颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊、口服液、注射剂。
进一步地,所述的一种抗终末糖基化预防和/或治疗老年退行性病变的食品或药物,应用于预防或/和治疗老年退行性病变:包括老年性糖尿病、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化、老年性肿瘤。
进一步地,所述的一种抗终末糖基化预防和/或治疗老年退行性病变的食品或药物,通过阻断age与rage交联→延缓衰老→预防和/或治疗老年退行性病变。
本发明的有益效果:
本发明仙鹤草糖基化物含抗终末糖基化(anti-epag,anti-endproductsadvancedglycation)有效成份在10.00-30.00%,与常规用干仙鹤草制剂比:生物利用度提高60.00-200.00%,抗糖基化终末化的效价提高200.00-300.00%,防治老年退行性病变:老年性糖尿病、阿尔茨海默病(老年性痴呆)、动脉粥样硬化、老年性肿瘤的疗效提高50.00-300.00%。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,下面结合具体实施例对本发明做出进一步详细说明。本领域的技术人员应当理解的是,所述实施例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均在本发明的保护范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明,均为常规方法;所使用的材料、试剂等,如无特殊说明,为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1:仙鹤草糖化汁的制备
将鲜仙鹤草100kg打浆→加葡萄糖(或红糖或果糖)1-5kg→糖基化→100~200目筛过滤,制得仙鹤草糖化汁60-80kg。
实施例2:仙鹤草糖化物的制备
将鲜仙鹤草100kg打浆→加葡萄糖(或红糖或果糖)1-5kg→糖基化→100~200目筛过滤→干燥→粉碎→过60~100目筛,即得本发明的仙鹤草糖化物15-20kg。仙鹤草糖化物中酚类糖基化物含量在10.00-30.00%。
实施例3:仙鹤草糖化汁的毒性试验
取体重18-27g健康小鼠200只,雄雌各半,均分1-4组,每组50只,每组小鼠按常规进行急性毒性实验。第1-3组均用实施例1制得的仙鹤草糖化汁灌胃,4组(对照)用生理盐水灌胃。观察3天,按改进karber法求出半数致死量、标准误和显着性。仙鹤草糖化汁小鼠口服给药ld50为1226.3mg/kg。可以认为仙鹤草糖化汁无毒,所以临床运用剂量较大,一般在100克以上,多至每剂500克。所以说仙鹤草是没有副作用的,除非你对仙鹤草过敏。
仙鹤草过敏反应表现为胸闷、气短、心悸、烦躁、头晕眼花、大汗淋漓、面色苍白、四肢冰冷、寒战、血压下降。重者尚有头晕、面色潮红、大汗淋漓。中毒性球后视神经炎失明,腹痛腹泻、呕吐、面红、血压下降。
但有资料记载:对小鼠鹤草酚灌胃的ld50为435±88mg/kg,连续腹腔注射10天的ld50为67.7±4.1mg/kg。
实施例4:仙鹤草糖化物颗粒的制备
将按实施例2得到的仙鹤草糖化物加山梨醇,在流化沸腾制粒机中使物料粉末在自上而下的热空气流作用下保持悬浮的流化状态,喷入黏合剂液体使粉末聚结成颗粒;
/或在高速搅拌制粒机中,与黏合剂溶液混合后粉碎成大小适宜的类球形颗粒;
/或在喷雾干燥制粒机中,与辅料混合成浆状物,通过高压喷嘴喷入喷雾干燥器中,在热空气流中雾化成大小适宜的液滴并瞬间干燥成类球形颗粒。
实施例5:仙鹤草糖化物口含片的制备
将按实施例2得到的仙鹤草糖化物1份,及必要辅料0.2份,混匀后用单冲压片机/或多冲旋转压片机压片即得。
实施例6:仙鹤草糖化糕点制备。
取面粉10kg在热锅中炒熟,加按实施例2得到的仙鹤草糖化物10kg混合,搅拌均匀,制得混合粉;然后加2-3kg的火麻仁油搅拌均匀,在紫外线灯下照射40min进行杀菌,杀菌后按要求模型压制成糕点。
实施例7:仙鹤草饮料的制备
⒈原料选择选用7-8成熟的新鲜仙鹤草,除去病虫株及杂草、泥土等。
⒉清洗、烫漂龙芽草放在洗涤槽中,用流动清水充分漂洗干净。然后将其放入80℃的热水中,烫漂2分钟。为保持色泽效果,在烫漂时加入0.2%亚硫酸钠处理2分钟,杀菌后汁液保绿久。
⒊破碎用锯齿式破碎机破碎后加热至95-100℃,保温处理20-30秒钟。
⒋打浆、榨汁趁热将破碎的龙芽草送入打浆机中打浆,筛孔选用0.8mm,然后压榨机榨取龙芽草汁,过滤后用。
⒌调配按配方:仙鹤草汁40%、白砂糖9%、蜂蜜3%、琼脂1%、柠檬酸0.1%、清水46.9%,混匀并加热至60-65℃。
⒍均质用高压均质机在19.6mpa压力下进行均质,使各物料粒度细碎均匀分布。
⒎杀菌杀菌温度以90-95℃,时间30秒钟效果较好。杀菌后汁液基本保持原色,无沉淀产生,久置不变色,并保持原有风味。
⒏灌装、封口趁热进行灌装,用封口机封口,冷却至38℃以下即成。
实施例8:仙鹤草糖化物降糖活性测量
取小白鼠20只,随机分成纯化水对照组、仙鹤草糖化物(3.0g/kg)组,每组10只。每天分别灌胃纯化水、服用仙鹤草糖化物分剂量各1次,给药体积均为0.2ml/10g,连续7d。分别于首次给药,末次给药后禁食2h,眼眶取血,每次取血0.2ml,邻甲苯胺法测定血糖。结果表明,一次灌胃给药,无显著改变;连续给药7d,则可显著降低正常小白鼠血糖,与纯化水对照组比较,血糖降低显著(表1降糖活性测量表)。
表1降糖活性测量表
实施例9:仙鹤草糖化物治疗ⅱ型糖尿病
经医院确诊为ⅱ型糖尿例30例;分为治疗组15例和对照组15例。治疗组男10例,女5例;年龄50~65岁;病程6个月~3年;ii型糖尿病15例(100%),记忆减退15例(100%),判断能力下降12例(80%),情感淡漠、反应迟钝5例(33%)。对照组男10例,女5例;年龄50~65岁;病程6个月~3年;ii型糖尿病15例(100%),记忆减退15例(100%),判断能力下降10例(70%),情感淡漠、反应迟钝3例(20%)。
方法:治疗组:仙鹤草糖化物组开水冲服实施例2的仙鹤草糖化物,用量30-50g/次(3次/天),服用3个月;对照组:口服阿瑞斯(盐酸多奈哌齐片),治疗用量5mg/次(一日1次),加二甲双胍口服一日3次,一次0.5g,餐中或餐中即刻服用。服用3个月。
治疗结束后2周内复查。疗效判断标准:(1)显效:治疗后空腹血糖<7.0mmol/l,或餐后2h血糖<7.8mmol/l,或降糖幅度较治疗前下降30%以上;记忆力明显增强,能够对事件进行分析、思考、判断,对外界刺激有相应的情感反应,开始关注周围发生时事,反应敏捷;(2)有效:治疗后空腹血糖<8.3mmol/l,或餐后2h血糖<11.0mmol/l,或降糖幅度较治疗前下降10%~30%;记忆力、判断能力、情感和行动反应都有了明显改善;(3)无效:治疗后血糖下降未达上述标准;记忆严重受损,丧失判断能力,情感由淡漠变为急躁不安,常走动不停,可见尿失禁。显效率+有效率=总有效率。
结果附表2:两组疗效比较
表2:两组疗效比较
仙鹤草糖化物降血糖活性主要体现在改善胰岛素抵抗,促进胰岛β细胞再生,提高胰岛素的分泌等,从而发挥降血糖的活性。显著降低空腹血糖、甘油三酯、胰岛素抵抗指数、空腹血清胰岛素、血清中炎性因子及c反应蛋白,而升高高密度脂蛋白;仙鹤草发挥降血糖活性可能与降低血清炎性因子的含量相关。仙鹤草促进胰岛素的分泌,同时对胰岛β细胞具有保护及修复作用,还可以促进其再生,从而发挥降血糖作用。仙鹤草黄酮类及三萜类成分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及对dpph,abts,羟基自由基等清除的降血糖机制。仙鹤草黄酮类化合物含有大量的槲皮素和金丝桃苷,对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制作用,ic50为8.72μg.ml-1;对3种自由基也有较强的清除能力,其ec50值分别为7.73μg.ml-1,3.64μg.ml-1,5.90μg.ml-1,三萜类成分作用弱于黄酮类成分。仙鹤草糖化物适合治疗ⅱ型糖尿病,降低并发症的发病率,且没有发现副作用。
实施例10:水溶性仙鹤草糖化物抑制癌细胞生长
a、材料
肿瘤细胞株:人宫颈癌hela细胞株,人胃癌bgc-308细胞株,正常胃和宫颈上皮细胞株匀购白北京中国药品生物制品检定所;水溶性仙鹤草糖化物:自制;盐酸阿霉素(adriamycin):产自pharmacia&upjohn公司。
、方法
1、细胞培养:宫颈癌hela细胞株和胃癌bgc-308细胞株均属于上皮细胞型,培养中为单层贴壁生长,培养的步骤基本相同。在普通倒置显微镜下,bgc-308细胞株体积比hela细胞株略大。
①.将细胞株从冻存管中转移到50ml培养瓶中,加入3—4ml含20%小牛血清的rpmi—l640培养基(含链霉素100mg/ml、青霉素100unit/ml),于37℃、5%c02:恒温培养箱中温浴1小时左右,使细胞贴壁;然后换液,根据细胞生长速度培养2—4天,在这期间要随时观察,给细胞换液。②.细胞传代:当细胞长成单层,铺满瓶底时,弃去培养基,加入适量0.25%胰酶,消化30秒左右,弃去胰酶,加入适量培养基终止反应,然后用滴管把细胞吹打下来,酌情分于2—3个培养瓶中。③.细胞计数:用1×pbs将台盼蓝配制成0.1%的溶液,染色时用1份细胞悬液加1份染色液,着色3分钟,在低倍镜下,死细胞染成蓝色,活细胞仍透明。用血球计数板计数活细胞。④.微孔板上细胞培养:细胞计数后,制成1×104细胞悬液,随机按种子12孔培养板中,用细胞维持液(含5%小牛血清的prmi一1640)根据实验方案培养,同时加入药物攻击。
2.水溶性仙鹤草糖化物的制备:由实施例1的仙鹤草糖化汁加5倍量水,过滤,残渣加1倍量水过滤,滤液合并,浓缩至1:1(生药:水),静置过夜,抽滤,离心(3000rpm/min)除去沉淀,以甲醇定容,配制100mg/ml的样品。
3.流式细胞仪检测:
①药物攻击细胞后,用0.25%的胰酶消化30秒,用1×pbs吹起。②40000离心5min,去掉1×pbs,加入预冷的70%的乙醇固定,-20℃过夜。③离心去掉70%的乙醇,加入1mll×pbs(含0.1%的tritonx100和5mg/mlbsa),室温作用1—2min。④离心去掉上清,加入0.5ml1×pbs((含5g/ml的pi和250g的dnaase-free的ranasea)染色。⑤室温、避光染色30min,送检。
实验方案:
1、药物浓度作用筛选实验
药物按以下浓度做梯度稀释,以阿霉素作对照:药物浓度梯度:1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、1000μg/m1、5000μg/m1。阿霉素浓度梯度:0.1μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、100μg/ml药物攻击细胞为104/ml孔,同一浓度药物反复做三次,48小时后作细胞死活率鉴定和电镜检测。2、药物作用细胞周期实验组
以生理盐水作空白对照,以200μg/ml药物浓度作攻击指标,药物攻击细胞为105/ml/孔。
设立作用时间梯度:2小时、4小时、8小时、24小时、48小时,分别收获细胞作流式细胞检测。
3、药物作用细胞因子检测组
以生理盐水作空白对照,以200μg/ml药物浓度作攻击指标,药物攻击细胞为105/孔设立作用时间梯度:2小时、4小时、8小时、24小时、48小时,分别收获细胞上清作转化生长因子b(tgf-b)和白细胞介素l2(il-12)的elisa检测,定量分析。
结果
1、水溶性仙鹤草糖化物对肿瘤细胞的生长抑制
胃癌bgc-803实验组:本组实验中以稀释药液的生理盐水作阴性对照组,并作空白对照,细胞在维持液(含5%血清的rpmi-1640)中48小时后光镜下状态良好,死细胞率分别为0.3%和0%,可以完全忽略不计。
2、宫颈癌hela实验组:本组实验中以稀释药液的生理盐水作阴性对照,并作空白对照,细胞在维持液(含5%l向清的rpmi-1640)中48小时后光镜下状态良好,死细胞率分别为0.5%和0.3%,可以完全忽略不计。
结果附表3水溶性仙鹤草糖化物对肿瘤细胞的生长抑制效果
表3水溶性仙鹤草糖化物对肿瘤细胞的生长抑制效果
实验中我们分别对胃癌bgc-803和宫颈癌hela进行了药物有效作用浓度的筛选,水溶性仙鹤草糖化物无论是对胃癌bgc-803还是对宫颈癌hela都呈现一定程度的生长抑制,但整体上同对照组阿霉素相比,在作用浓度差一个数量级的情况下(实验中我们考虑阿霉素为纯品,而水溶性仙鹤草糖化物为混合物,所以在设计浓度梯度对比时阿霉素在相对对比浓度都高一个数量级),对肿瘤细胞的抑制率也低于阿霉素对照组,如水溶性仙鹤草糖化物在作用浓度为1μg/ml时,对胃癌bgc-803和宫颈癌hela的抑制率仅分别为10.7%、12.68%,而对照组阿霉素在作用浓度为0.1μg/ml时,对胃癌bgc-803和宫颈癌hela的抑制率却分别为55.6%、52.2%,很明显远大于水溶性仙鹤草糖化物实验组;但水溶性仙鹤草糖化物随着作用浓度的增加,对肿瘤细胞的抑制率迅速增加,如水溶性仙鹤草糖化物在作用浓度为1000μg/ml时,对胃癌bgc-803和宫颈癌heal的抑制率分别为86.2%、89.7%,而对照组阿霉素在作用浓度为100μg/ml时,对胃癌bgc-803和宫颈癌hela的抑制率却分别为98.1%、98.7%,对正常胃和宫颈上皮细胞株抑制率高达96.3%;水溶性仙鹤草糖化物在作用浓度为5000μg/ml时,对胃癌bgc-803和宫颈癌heal的抑制率分别为100%、100%,且对正常胃和宫颈上皮细胞株抑制率却为0.0%。提示5000μg/ml水溶性仙鹤草糖化物对癌细胞抑制率为100%,而对正常细胞则完全没有抑制,有独特的神奇效果。这种既杀癌细胞,又有利于正常细胞生长的药物,实属少见。
实施例11:仙鹤草糖化物治疗“阿尔茨海默病+ⅱ型糖尿病”
经医院确诊为“阿尔茨海默病”30例;分为治疗组15例和对照组15例。治疗组男10例,女5例;年龄50~65岁;病程6个月—3年;阿尔茨海默病15例(100%):记忆减退15例(100%),判断能力下降14例(93%),情感淡漠、反应迟钝13例(87%)。对照组男10例,女5例;年龄50~65岁;病程6个月-3年;阿尔茨海默病15例(100%):记忆减退15例(100%),判断能力下降14例(93%),情感淡漠、反应迟钝14例(93%)。
方法:治疗组口服仙鹤草糖化物,疗用量30-50g/次(1次/3小时),服用3个月。对照组每天口服阿瑞斯(盐酸多奈哌齐片),治疗用量5mg/次(一日1次),每晚睡前口服,服用3个月。
治疗结束后2周内复查。疗效判断标准:(1)显效:记忆力明显增强,能够对事件进行分析、思考、判断,对外界刺激有相应的情感反应,开始关注周围发生时事,反应敏捷;(2)有效:记忆力、判断能力、情感和行动反应都有了明显改善;(3)无效:记忆严重受损,丧失判断能力,情感由淡漠变为急躁不安,常走动不停,可见尿失禁。显效率+有效率=总有效率。
结果附表4:两组疗效比较。
实施例12:仙鹤草糖化物治疗动脉粥样硬化
经医院确诊为动脉粥样硬化(atherosclerosis,as)+轻度老年痴呆病例30例;分为治疗组15例和对照组15例。治疗组男10例,女5例;年龄50~65岁;病程6个月~3年;动脉粥样硬化(atherosclerosis,as)15例(100%),记忆减退15例(100%),判断能力下降12例(80%),情感淡漠、反应迟钝5例(33%)。对照组男10例,女5例;年龄50~65岁;病程6个月~3年;动脉粥样硬化(atherosclerosis,as)15例(100%),记忆减退15例(100%),判断能力下降10例(70%),情感淡漠、反应迟钝3例(20%)。
方法:治疗组:仙鹤草糖化物组开水冲服实施例2的仙鹤草糖化物,用量30-50g/次(3次/天),服用3个月;对照组:口服洛伐他汀,用量80mg/次(一日1次),加阿瑞斯(盐酸多奈哌齐片),用量5mg/次(一日1次),服用3个月。
治疗结束后2周内到医院进行复查。疗效判断标准:(1)显效:治疗后舒张压下降10mmhg并下降到正常或下降20mmhg以上,收缩压降到正常;记忆力明显增强,能够对事件进行分析、思考、判断,对外界刺激有相应的情感反应,开始关注周围发生时事,反应敏捷;(2)有效:治疗后舒张压下降未达到10mmhg,但己降到正常范围,或下降10-19mmhg,如为收缩期高血压,收缩压下降30mmhg;记忆力、判断能力、情感和行动反应都有了明显改善;(3)无效:治疗后血压下降未达到有效标准;记忆严重受损,丧失判断能力,情感由淡漠变为急躁不安,常走动不停,可见尿失禁。显效率+有效率=总有效率。
结果附表5:两组疗效比较。
表5:两组疗效比较
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,只要这些变形和改进与上述技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围,也将属本发明权利要求的保护范围。