1.本发明涉及包含诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄的一种或多种化合物和/或提取物的组合物，以及使用组合物治疗眼睛的方法。
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：：[0002]“干眼是眼部表面的多因素疾病，其特征在于泪膜内稳态丧失，并且伴有眼部症状，其中泪膜不稳定性和高渗透压、眼部表面炎症和损伤以及感觉神经异常起到病因作用。”craig,j.p.等人，“tfosdewsii定义和分类报告”，oculsurf.2017；第15卷第276–283页。干眼可由泪液形成异常或不足以及粘蛋白分泌不足(即，干燥角膜结膜炎)引起。干眼状可表现为各种潜在疾病的结果，诸如损害泪腺(即，产生泪液)的自身免疫疾病，诸如类风湿性关节炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮以及系统性硬化症和结节病。在眼睛手术(诸如手术)之后也可引发干眼。据估计干眼在美国影响超过一千三百万人。[0003]无论下面的病理如何，干眼通常涉及眼前泪膜的快速分解，从而导致暴露的外表面脱水。需要正常的泪液形成以保持角膜和结膜湿润，并且这继而有助于防止两者的溃疡，以及保持角膜透明性。此外，泪液有利于眼睑在眼睛表面上的运动(例如，眨眼)以及外来将物质从眼睛移除。泪液通常还包含可用于预防眼睛感染的溶菌酶。干眼可与眼睛中的轻微不适至严重疼痛相关联。当干眼症长时间出现时，其可引起视力模糊、砂砾感和/或灼热感以及瘙痒。如果允许病症持续而不进行治疗，则其可进一步导致角膜溃疡和/或疤痕形成。[0004]干眼状包括眼睛疼痛或疲劳、眨眼频率增加以及眼部充血。此外，细菌可通过刮痕进入并引起感染，并且如果刮痕足够深，则其甚至可影响人的视力。除了眼睛疲劳，干眼的原因还包括干燥综合征、史蒂文斯‑约翰逊综合征、烧伤和眼睛损伤，以及降压药物、镇定剂、用于治疗青光眼的滴眼液和其他此类药物的副作用。[0005]滴眼液是治疗干眼的有效方法。此类滴眼液通常包括干眼症治疗活性物质‑此类滴眼液中的常见活性物质为透明质酸。透明质酸是生物衍生的大分子物质，具有极高的保水率和特性，诸如高粘弹性、良好的增稠特性和良好的成线能力，并且已在用于治疗各种皮肤问题等的局部用试剂中用作湿润剂。在干眼由干燥综合征引起的情况下，其中在整个身体上观察到干燥，施用包含透明质酸的滴眼液是有效的。然而，当作为滴眼液滴注时，透明质酸在角膜上具有相对短的停留时间，因此透明质酸的影响仅持续约2或3小时，这意味着患者必须更频繁地施用滴眼液(例如每天5至10次)。[0006]透明质酸(ha)由眼中的角膜上皮细胞产生。值得注意的是，研究发现较年轻人群的角膜中的透明质酸浓度比较老人群显著更高。(参见pacella，e.、pascella，f.、depaolis，g.等人，人角膜中的糖胺聚糖：年龄相关的变化，ophthalmol.eyedis.7:1‑5,2015)。[0007]透明质酸也可用于一般伤口愈合，并且对于整体眼睛健康维护是必不可少的。[0008]因此，需要将会促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生和/或释放的眼科药物组合物。[0009]本发明人已发现在足够的角膜积液水平下，可诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄的毕赤酵母(pichia)属的提取物或提取物来源。[0010]因此，本发明的方面涉及用于诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄的方法，该方法包括施用眼科组合物的步骤，该眼科组合物包含安全且有效量的一种或多种毕赤酵母属提取物或提取物来源。[0011]本发明的另一方面涉及用于诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄的方法，该方法包括施用眼科组合物的步骤，该眼科组合物包含安全且有效量的毕赤酵母属的一种或多种提取物或提取物来源以诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄，该组合物可施用给泪液中透明质酸浓度低于10(或约10)纳克/毫克蛋白质、任选地低于15(或约15)纳克/毫克蛋白质、任选地低于20(或约20)纳克/毫克蛋白质或任选地低于25(或约25)纳克/毫克蛋白质的患者，使得透明质酸在其泪液中的浓度升至(或，使其达到)等于或大于10(或约10)纳克/毫克蛋白质、任选地等于或大于15(或约15)纳克/毫克蛋白质、任选地等于或大于20(或约20)纳克/毫克蛋白质、任选地等于或大于25(或约25)纳克/毫克蛋白质、任选地等于或大于30(或约30)/毫克蛋白质、任选地等于或大于35(或约35)纳克/毫克蛋白质、任选地等于或大于40(或约40)纳克/毫克蛋白质或任选地等于或大于45(或约45)纳克/毫克蛋白质至100(或约100)纳克/毫克蛋白质、任选地90(或约90)纳克/毫克蛋白质、任选地80(或约80)纳克/毫克蛋白质、任选地70(或约70)纳克/毫克蛋白质或任选地60(或约60)纳克/毫克蛋白质。[0012]在某些实施方案中，将由本发明的化合物和/或提取物产生的患者泪液中的透明质酸的上述浓度保持至多至少约2小时，任选地约4小时、任选地约6小时、任选地约8小时、任选地约10小时、任选地约12小时或任选地约12至约24小时。[0013]使用dreyfuss方法(下文定义中所述)来测定上文详述的透明质酸浓度。[0014]本发明的方面涉及用于诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄以用于治疗(例如减少)和/或防止干眼或与干眼相关联的症状的方法，该方法包括施用眼科组合物的步骤，该眼科组合物包含安全且有效量的一种或多种毕赤酵母属提取物或提取物来源。[0015]本发明的另一方面涉及通过以下方式预防和/或治疗由透明质酸从角膜中和/或在角膜中的减少的或低水平的产生/释放/递送/排泄引起的眼睛症状的方法：施用包含安全且有效量的毕赤酵母属的一种或多种提取物或提取物来源以诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄，使得透明质酸在角膜中和/或在角膜的表面上的浓度。[0016]本发明的另一方面涉及通过以下方式促进患者的眼睛中和/或眼睛上的伤口(例如，非干眼相关联的伤口、眼睛创伤伤口、术后外科伤口或非特异性伤口)：施用包含安全且有效量的毕赤酵母属的一种或多种提取物或提取物来源的组合物，以增加透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄。在某些实施方案中，上述方法增加透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄超过通常由此类患者产生的透明质酸的浓度水平，而无需施用包含安全且有效量的一种或多种毕赤酵母属提取物或提取物来源的组合物。技术实现要素：[0017]本发明涉及用于治疗患有透明质酸从角膜中和/或在角膜中的减少的或低水平的产生/释放/递送/排泄症状的患者的方法，该方法包括向患者的眼睛(任选地，在需要增加此类透明质酸的产生/释放/递送/排泄的患者中)局部施用组合物的步骤，该组合物包含：[0018]i)安全且有效量的毕赤酵母属的一种或多种提取物或提取物来源，以实现在眼睛的角膜组织中的角膜积液中至少约0.3mg/ml的毕赤酵母属提取物浓度；[0019]ii)任选地，安全且有效量的渗透促进剂；和[0020]iii)任选地，眼科上可接受的载体。[0021]本发明涉及用于促进眼睛中和/或眼睛上的伤口愈合或增加伤口愈合速率(任选地，在需要此类促进眼睛伤口愈合或增加愈合速率的患者体内)的方法，该方法包括向此类患者局部施用组合物的步骤(即，增加透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄，在某些实施方案中，超过在未施用(或缺少)包含安全且有效量的毕赤酵母属的一种或多种提取物或提取物来源的组合物的情况下由此类患者产生的透明质酸的浓度水平)，该组合物包含：[0022]i)安全且有效量的毕赤酵母属的一种或多种提取物或提取物来源，以实现在眼睛的角膜组织中的角膜积液中至少约0.3mg/ml的毕赤酵母属提取物浓度；[0023]ii)任选地，安全且有效量的渗透促进剂；和[0024]iii)任选地，眼科上可接受的载体。附图说明[0025]图1描绘了示出在24小时和48小时局部施用异常毕赤酵母提取物后角膜上皮细胞中增加的ha产生的柱形图。[0026]图2描绘了示出在将角膜上皮细胞置于包含异常毕赤酵母提取物的生长培养基中后48小时，角膜上皮细胞中ha产生的统计学显著增加的柱形图。具体实施方式[0027]据信，本领域的技术人员可基于本文说明书充分利用本发明。下面的具体实施方案可理解为仅为示例性的，并且无论如何都不会以任何方式限制本公开内容的其余部分。[0028]本发明的组合物可包含本文所述的要素、步骤及限制，或由本文所述的要素、步骤及限制组成或基本上由本文所述的要素、步骤及限制组成，以及任何本文所述的附加的或任选的成分、组分或限制。[0029]如本文所用，术语“包含(及其语法上的变型)”以“具有”或“包括”的涵括意义而非以“仅包含”的排它意义使用。如本文所用，术语“一种(个)”和“所述(该)”应该理解为涵盖复数形式以及单数形式。[0030]除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。另外，本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献均以与本说明书不矛盾的程度全文以引用方式并入本文。如本文所用，所有百分比均按总体组合物的重量计，除非另外指明。[0031]如本文所用，术语“角膜”或“角膜的”是、包括和/或涉及覆盖虹膜、瞳孔和前房的眼睛的透明前部，其透明前部的各层包括角膜上皮层(包括角膜上皮细胞)、鲍曼层(也称为前界膜)、角膜基质(也是固有质)、后弹力层(也是后界膜)和角膜内皮(富含线粒体的细胞的简单鳞状或低立方体单层，约5μm厚)。[0032]各层的功能如下：[0033]上皮提供：[0034]·提供对化学品和水的屏障；[0035]·提供对微生物的屏障；[0036]·提供平滑的光学表面作为泪膜‑角膜界面的内部部分，从而有助于眼睛的屈光力；并且[0037]·容纳执行重要免疫功能的朗格汉斯细胞。[0038]布曼层：[0039]·有助于保持角膜形状。[0040]角膜基质：[0041]·为角膜提供机械强度；[0042]·提供角膜的透明性；并且[0043]·用作折射透镜。[0044]德斯密氏膜：[0045]·用作内皮细胞的静息层。[0046]角膜内皮：[0047]·通过从角膜基质中移除水来保持角膜清晰度。[0048]角膜上皮层由5至7层细胞相当均匀地构成。角膜上皮厚度为约50μ。上皮是均匀的以提供平滑的规则表面，并且由非角质化分层的鳞状上皮构成。不受理论的限制，据信角膜上皮层还包含紧密连接结构(即，通常抑制化学渗透到组织中的那些结构[例如，膜或膜屏障])，该紧密连接结构可阻碍或用作对毕赤酵母属的一种或多种提取物或提取物来源的扩散的屏障，减少毕赤酵母属的一种或多种提取物或提取物来源扩散穿过角膜上皮并进入角膜组织，从而降低提取物的浓度水平，该提取物可积聚在角膜组织内并接触负责产生透明质酸的此类组织的细胞部分。[0049]如本文所用，短语“透明质酸从角膜中和/或在角膜中的减少的或低水平的产生/释放/递送/排泄”是指透明质酸浓度小于正常人(即，非患病)泪液中的透明质酸浓度，或在某些实施方案中小于25(或约25)纳克/毫克蛋白质，如使用dreyfussjl、regatiericv、coelhob等人中描述的方法所测定。腺病毒结膜炎患者泪液中改变的透明质酸含量。anacadbrascienc.2015；87(1):455–462。该方法(dreyfuss方法)重现如下：[0050]·样品收集[0051]为了收集泪液，在不使用任何局部麻醉剂的情况下，在每只眼睛的颞侧眼睑下方放置schirmer试纸条，持续5分钟。将试纸条在室温下干燥并保存在‑20℃下直至分析。[0052]·泪液样品制备[0053]用100μl蒸馏水从schirmer试纸条上洗脱泪液化合物，并执行透明质酸和蛋白质含量分析。[0054]·透明质酸测量[0055]通过非同位素荧光分析法测定泪液中的透明质酸含量(参见martinsjr，passerotticc，macielrm，sampaiolo，dietrichcp和naderhb.2003)。一种新的非竞争性荧光法测定正常人和肝硬化患者血清中透明质酸的实用确定方法。(analbiochem319:65‑72.)将洗脱的泪液和标准浓度的透明质酸(sigma,st.louis,mo)加入96多孔板(fluoronuncmaxisorp‑microtiterplates,roskilde,denmark)中，该多孔板先前涂覆有透明质酸结合蛋白。然后将该板依次与生物素酰化透明质酸结合蛋白和铕标记的链霉抗生物素蛋白(amershan,piscataway,nj)一起温育。之后，通过增强溶液释放残留在固相中的铕，并使用时间分辨荧光计(perkin‑elmerlifesciences‑wallacoy,turku,finland)测量荧光。使用multicalc软件程序(perkin‑elmerlifesciencies‑wallacoy)自动处理数据(计数/秒)，值表示为ng/mg蛋白质。[0056]·蛋白质分析[0057]根据制造商说明书使用比色测定试剂盒(来自bio‑rad,hercules,ca的蛋白质测定试剂盒)测定总泪液蛋白浓度。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds‑page)分析蛋白质谱。如前所述(参见laemmliuk.1970，在噬菌体t4的头部组装期间结构蛋白质的裂解，nature227:680‑685.)。简而言之，在还原条件下，将来自泪液样本的10μg蛋白质施加到3％‑20％的线性梯度聚丙烯酰胺凝胶上。电泳之后，用考马斯亮蓝(bio‑rad,hercules,ca)对凝胶染色。使用mac的软件imagej版本10.2(u.s.nationalinstitutesofhealth,bethesda,maryland,usa)通过密度测定法对每个蛋白带进行定量。结果用任意光密度单位(adu)表示。[0058]如本文所用，“基本上不含”某一成分的组合物是指具有约2重量％或更少的该成分的组合物(按该组合物的总重量计)。优选地，基本上不含某一成分的组合物具有约1重量％或更少，更优选约0.5重量％或更少，更优选约0.1重量％或更少，更优选约0.05重量％或更少，更优选约0.01重量％或更少的该成分(按该组合物的总重量计)。在某些更优选的实施方案中，基本上不含某一成分的组合物不含该成分，也就是说组合物中完全不含该成分。[0059]如本文所用，“眼科上可接受的”意指该术语描述的成分适于与组织(例如，眼睛软组织或眶周皮肤组织)接触使用而不会引起不适当的毒性、不相容性、不稳定性、剌激性、变应性应答等。如本领域的技术人员将认识到的，美容上/皮肤病学可接受的盐为酸性/阴离子或碱性/阳离子盐。[0060]如本文所用，术语“安全且有效量”是指多至足以诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄但少至足以避免严重副作用的所公开的提取物、化合物或组合物的量。化合物、提取物或组合物的安全且有效量将随着例如最终使用者的年龄、健康和环境暴露状况，治疗的持续时间和性质，采用的特定提取物、成分或组合物，以及所用的特定眼科上可接受的载体等因素而变化。[0061]在某些实施方案中，如本文所公开的本发明可在不存在本文未具体公开的任何化合物或元素(或者化合物或元素的组)的情况下实施。[0062]一般来讲，iupac命名规则用于本文中并根据以下术语定义。[0063]术语“c1‑8烷基”无论是单独使用还是作为取代基的一部分使用，均是指具有1至8个碳原子的饱和脂族支链或直链一价烃基。例如，“c1‑8烷基”具体地包括基团甲基、乙基、1‑丙基、2‑丙基、1‑丁基、2‑丁基、叔丁基、1‑丁基、1‑戊基、2‑戊基、3‑戊基、1‑己基、2‑己基、3‑己基、1‑庚基、2‑庚基、3‑庚基、1‑辛基、2‑辛基、3‑辛基等。所述术语也可指对应的烷二基。烷基和烷二基可经由末端碳原子或经由链中的碳原子连接至核心分子。类似地，任意数量的取代基变量在可用化合价允许时可连接至烷基或烷二基。[0064]术语“c1‑4烷基”无论是单独使用还是作为取代基的一部分使用，均是指具有指定数量碳原子的饱和脂族支链或直链一价烃基或烷二基连接基团，其中基团通过从碳原子中除去一个氢原子而衍生得到，并且烷二基连接基团通过从链中的两个碳原子中的每一个移除一个氢原子而衍生得到。术语“c1‑4烷基”是指具有1至4个碳原子的直链或支链排列的基团。例如，“c1‑4烷基”具体地包括基团甲基、乙基、1‑丙基、2‑丙基、1‑丁基、2‑丁基、叔丁基、1‑丁基等。烷基和烷二基可经由末端碳原子或经由链中的碳原子连接至核心分子。类似地，任意数量的取代基变量在可用化合价允许时可连接至烷基或烷二基。[0065]术语“c2‑4烯基”是指具有2至4个碳原子的烯基。例如，具体地包括基团乙烯基、丙烯基、烯丙基(2‑丙烯基)、丁烯基等。如上所述，烯基可类似地连接至核心分子并且在所指示处进一步被取代。[0066]术语“卤素”本身或与其它术语的组合是指卤素原子，诸如氟、氯、溴或碘。[0067]术语“取代的”是指核心分子上的一个或多个氢原子已被可用化合价允许的量的取代基所替代。取代并不限于核心分子，也可以在取代基上进行，这样该基团变成了连接基团。[0068]术语“独立地选择的”是指可选自取代基变量组的两个或更多个取代基，其中所选择的取代基可以相同或不同。[0069]术语“依赖性地选择的”是指以指示的组合指定用于在核心分子中取代的一个或多个取代基变量(例如，涉及出现在化合物的表格列表中的取代基的组的变量)。[0070]来自无机碱的可接受盐包括，例如钠或钾盐等。来自有机碱的可接受盐包括，例如与伯、仲、叔胺等形成的盐。[0071]诱导、促进和/或改善透明质酸在角膜中的产生/释放/递送/排泄的化合物和/或提取物。[0072]本发明包括诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄的一种或多种化合物和/或提取物。[0073]在某些实施方案中，诱导、促进和/或改善透明质酸从角膜中和/或在角膜中的产生/释放/递送/排泄的化合物和/或提取物是或包括毕赤酵母属的提取物或提取物来源。[0074]毕赤酵母是酵母科中的酵母属。该属中超过100个菌种是已知的。适用于本发明组合物的合适菌种包括(选自或选自由以下项组成的组)：异常毕赤酵母(pichiaanomala)、季也蒙毕赤酵母(pichiaguilliermondii)、挪威毕赤酵母(pichianorvegensis)、奥默毕赤酵母(pichiaohmeri)。异常毕赤酵母(之前名为异常汉逊酵母)可存在于原料乳和奶酪中。毕赤酵母属的酵母的提取物富含甘露聚糖(由甘露糖单体构成的多糖)。毕赤酵母属的提取物或提取物来源可从植物的果实或其他地上部分中分离出来。可使用毕赤酵母属的任何眼科上可接受的提取物。也可使用来自毕赤酵母属的上述菌种的提取物或提取物来源的混合物。[0075]在某些实施方案中，用于本发明的来自毕赤酵母属的提取物或提取物来源为异常毕赤酵母的提取物。在某些实施方案中，合适的异常毕赤酵母提取物由存在于猕猴桃植物的果实或叶上的异常毕赤酵母菌株产生。在另一个实施方案中，异常毕赤酵母提取物可以pro‑lipiskin或从silab‑france商购获得，其中提取物由存在于甘蔗上的异常毕赤酵母菌株产生。[0076]在一个实施方案中，异常毕赤酵母提取物根据如在fr2897266和fr2938768中所述的以下过程获得，这两个专利均以引用方式并入本文。[0077]在某些实施方案中，下文所述的提取方法从毕赤酵母提取物中除去了大部分蛋白质，并以甘露聚糖形式浓缩了活性物质。该方法包括蛋白质的至少一个酶促水解步骤，以获得肽和小蛋白质，并且在某些实施方案中，还包括基于对此类分子的大小的选择通过过滤除去这些小肽和蛋白质的另一步骤。[0078]在某些实施方案中，毕赤酵母属的提取物，包括异常毕赤酵母提取物，通过涉及一种或多种水解酶来依次或同时水解毕赤酵母属中的蛋白质的提取方法获得。[0079]在某些实施方案中，使用酶促水解将毕赤酵母属的提取物中的蛋白质分解成重均分子量小于5000da的蛋白质级分。合适的水解酶包括但不限于至少一种肽酶，在某些实施方案中，选自木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、链霉蛋白酶、锌金属内切肽酶(flavastacine)、肠激酶、因子xa蛋白酶、turin、菠萝蛋白酶、蛋白酶k、基因酶i、嗜热菌蛋白酶、羧肽酶a、羧肽酶b、胶原酶或它们的混合物。[0080]在某些实施方案中，用于获得毕赤酵母属提取物的酶在分离所得的可溶相和不溶相之前失活。[0081]在一个实施方案中，异常毕赤酵母提取物的特征在于具有：[0082]‑在5g/l和300g/l之间的固体含量，[0083]‑在4和9之间的ph，[0084]‑在2g/l和170g/l之间的蛋白含量，以及[0085]‑范围在1g/l和100g/l之间的糖含量[0086]在某些实施方案中，毕赤酵母属的提取物包含大于或等于干燥的毕赤酵母属提取物总重量的30％的甘露聚糖含量，或任选地包含按干燥的毕赤酵母属提取物总重量计至少50％的甘露聚糖含量。[0087]在某些实施方案中，通过使含有毕赤酵母属提取物的相在存在砂的情况下通过105℃(或约105℃)的烘箱加热直到获得/观察到恒重，干燥毕赤酵母属提取物的相(并测量固体含量)。[0088]在某些实施方案中，干燥的毕赤酵母属提取物的固体含量在10g/l和200g/l之间，或任选地在26g/l和40g/l之间。[0089]在某些实施方案中，在室温(25℃)下通过电位法测量的ph导致值在4.5和8.5之间，任选地在6.0和7.0之间。[0090]测定总糖含量时，可使用dubois方法。在浓硫酸和苯酚的存在下，还原糖生成橙黄色化合物。根据标准范围，可确定样品的总糖含量。在某些实施方案中，干燥的毕赤酵母属提取物的总糖含量在7g/l和145g/l之间，或任选地在18g/l和29g/l之间。在某些实施方案中，干燥的毕赤酵母属提取物包含与干燥的毕赤酵母属提取物的总固体重量相比至少30重量％的总糖，任选地，占干燥的毕赤酵母属提取物的至少50重量％。[0091]在某些实施方案中，干燥的毕赤酵母属提取物的碳水化合物级分由低聚糖和多糖的形式(或基本上以其形式)的甘露糖和葡萄糖组成，低聚糖和多糖的重均分子量为约180da至约800,000da，任选地为约5000da至约515,000da，任选地为约6000da至约270,000da。在某些实施方案中，干燥的毕赤酵母属提取物中至少70％(或约70％)、任选地至少75％(或约75％)、至少80％(或约80％)、任选地至少85％(或约85％)、至少90％(或约90％)、任选地至少95％(或约95％)或100％(或约100％)的低聚糖和多糖落在上述重均分子量范围内。[0092]通过凯氏定氮法获得对蛋白含量的确定。在某些实施方案中，干燥的毕赤酵母属提取物的蛋白含量在4g/l和90g/l之间，或任选地在12g/l和18g/l之间。干燥的毕赤酵母属提取物包含少于45％的蛋白质，或任选地少于30％的干燥的毕赤酵母属提取物中的总固体。[0093]在某些实施方案中，干燥的毕赤酵母属提取物包含以低聚糖和多糖的形式聚合的甘露聚糖、甘露糖，低聚糖和多糖的重均分子量为约180da至约800,000da，任选地为约5000da至约515,000da，任选地为约6000da至约270,000da。在某些实施方案中，干燥的毕赤酵母属提取物中至少70％(或约70％)、任选地至少75％(或约75％)、至少80％(或约80％)、任选地至少85％(或约85％)、至少90％(或约90％)、任选地至少95％(或约95％)或100％(或约100％)的低聚糖和多糖落在上述重均分子量范围内。[0094]在某些实施方案中，提取方法包括在蛋白质的酶促水解步骤之后除去(例如，通过过滤)重均分子量小于5000da的蛋白质的步骤。因此，毕赤酵母属提取物不含或基本上不含重均分子量小于5000da的蛋白质和/或肽。[0095]在某些实施方案中，上述提取方法可包括在过滤之前对毕赤酵母属提取物进行除臭、漂白和/或稳定的步骤。过滤可以如下：‑加压过滤和‑灭菌过滤。[0096]在某些实施方案中，所用的提取物属于多种异常毕赤酵母。下文描述了生产方法的特定非限制性示例。[0097]‑将异常毕赤酵母的提取物(或酵母)在适合其发育的培养基中培养，然后离心回收生物质，[0098]‑然后在球磨机中研磨生物质。然后将经研磨的材料以50克/升的浓度重悬于水中，之后在碱性介质中于30℃下酶促水解6小时，[0099]‑水解后，将产物在灭菌前进行离心和过滤，[0100]‑通过在不同尺寸的过滤器上连续过滤，获得了包含相对于固体的总重量计至少30％的甘露聚糖的水解产物和/或获得了特定重均分子量的蛋白质。(所获得的水解产物为浅黄色澄清液体水溶液形式。)[0101]在某些实施方案中，根据以下制造实施例获得异常毕赤酵母提取物：[0102]1.异常毕赤酵母提取物a：[0103]i.异常毕赤酵母提取物a的提取：[0104]异常毕赤酵母提取物a的制备包括以下步骤：[0105]‑将酵母属异常毕赤酵母在适合其发育的培养基中培养，[0106]‑离心回收生物质，[0107]‑生物质的溶解，[0108]‑碱性ph下的酶促水解，[0109]‑可溶相和不溶相的分离，[0110]‑热处理，[0111]‑过滤，以及[0112]‑无菌过滤。[0113]ii.异常毕赤酵母提取物a的表征：[0114]上文获得的异常毕赤酵母提取物a的特征在于：[0115]‑‑在48g/l和84g/l之间的固体含量，[0116]‑‑在4和9之间的ph，[0117]‑‑在19g/l和48g/l之间的蛋白含量，以及[0118]‑‑在10g/l和42g/l之间的总糖含量。[0119]2.异常毕赤酵母提取物b[0120]i.异常毕赤酵母提取物b的提取：[0121]异常毕赤酵母提取物b的制备包括以下步骤：[0122]‑将酵母属异常毕赤酵母在适合其发育的培养基中培养，[0123]‑离心回收生物质，[0124]‑生物质的溶解，[0125]‑酸性ph下的酶促水解，[0126]‑可溶相和不溶相的分离，[0127]‑热处理，[0128]‑过滤，以及[0129]‑无菌过滤。[0130]ii.异常毕赤酵母提取物b的表征：[0131]上文获得的异常毕赤酵母提取物b的特征在于：[0132]‑‑在58g/l和95g/l之间的固体含量，[0133]‑‑在4和9之间的ph，[0134]‑‑在23g/l和54g/l之间的蛋白含量，以及[0135]‑‑在12g/l和32g/l之间的总糖含量。[0136]3.异常毕赤酵母提取物c[0137]i.异常毕赤酵母提取物c的提取：[0138]异常毕赤酵母提取物c的制备包括以下步骤：[0139]‑将酵母属异常毕赤酵母在适合其发育的培养基中培养，[0140]‑离心回收生物质，[0141]‑生物质的溶解，[0142]‑在碱性介质中连续酶促水解，[0143]‑可溶相和不溶相的分离，[0144]‑热处理，[0145]‑过滤，以及[0146]‑无菌过滤。[0147]ii.异常毕赤酵母提取物c的表征：[0148]上文获得的异常毕赤酵母提取物c的特征在于：[0149]‑‑在91g/l和195g/l之间的固体含量，[0150]‑‑在4和9之间的ph，[0151]‑‑在36g/l和111g/l之间的蛋白含量，以及[0152]‑‑在18g/l和65g/l之间的总糖含量。[0153]4.异常毕赤酵母提取物d[0154]i.异常毕赤酵母提取物d的提取：[0155]异常毕赤酵母提取物d的制备包括以下步骤：[0156]‑将酵母属异常毕赤酵母在适合其发育的培养基中培养，[0157]‑离心回收生物质，[0158]‑生物质的溶解，[0159]‑在酸性ph下与至少两种酶同时水解，[0160]‑可溶相和不溶相的分离，[0161]‑热处理，[0162]‑过滤，以及[0163]‑无菌过滤。[0164]ii.异常毕赤酵母提取物d的表征：[0165]上文获得的异常毕赤酵母提取物d的特征在于：[0166]‑在5g/l和53g/l之间的固体含量，[0167]‑‑在4和9之间的ph，[0168]‑‑在2g/l和30g/l之间的蛋白含量，以及[0169]‑‑在1g/l和18g/l之间的总糖含量。[0170]5.异常毕赤酵母提取物e[0171]i.异常毕赤酵母提取物e的提取：[0172]异常毕赤酵母提取物e的制备包括以下步骤：[0173]‑将酵母属异常毕赤酵母在适合其发育的培养基中培养，[0174]‑离心回收生物质，[0175]‑生物质在含水二醇(hydroglycolique)环境中的溶解，[0176]‑在酸性ph下与至少两种酶同时水解，[0177]‑可溶相和不溶相的分离，[0178]‑热处理，[0179]‑过滤，以及[0180]‑无菌过滤。[0181]ii.异常毕赤酵母提取物e的表征：[0182]上文获得的异常毕赤酵母提取物e的特征在于：[0183]‑在172g/l和300g/l之间的固体含量，[0184]‑‑在4和9之间的ph，[0185]‑‑在69g/l和170g/l之间的蛋白含量，以及[0186]‑‑在34g/l和100g/l之间的总糖含量。[0187]在某些实施方案中，毕赤酵母属提取物或提取物来源包含平均聚合度为dp1至dp4444，任选地dp30至dp2860，任选地dp35至dp1500的低聚糖和多糖。在某些实施方案中，干燥的毕赤酵母属提取物中至少70％(或约70％)、任选地至少75％(或约75％)、至少80％(或约80％)、任选地至少85％(或约85％)、至少90％(或约90％)、任选地至少95％(或约95％)或100％(或约100％)的低聚糖和多糖落在上述平均聚合度范围内。[0188]在某些实施方案中，毕赤酵母属的提取物或提取物来源存在于本发明的组合物中，以便在局部施用后，在使用者的角膜组织细胞(即，角膜内积液层(internalcornealfluidlevel))中或接触角膜组织细胞(即，角膜内积液层)时，提供至少0.3mg/ml(或约0.3mg/ml)，任选地至少0.5mg/ml(或约0.5mg/ml)，任选地至少1mg/ml(或约1mg/ml)，任选地至少1.5mg/ml(或约1.5mg/ml)，任选地至少2mg/ml(或约2mg/ml)，任选地至少2.5mg/ml(或约2.5mg/ml)，任选地至少3mg/ml(或约3mg/ml)，任选地至少3.5mg/ml(或约3.5mg/ml)，任选地至少4mg/ml(或约4mg/ml)，任选地至少4.5mg/ml(或约4.5mg/ml)，任选地至少5mg/ml(或约5mg/ml)，或至少5.5mg/ml(或约5.5mg/ml)，任选地至少6mg/ml(或约6mg/ml)，或任选地至少6.5mg/ml(或约6.5mg/ml)，任选地至少7mg/ml(或约7mg/ml)，任选地至少7.5mg/ml(或约7.5mg/ml)，任选地至少8mg/ml(或约8mg/ml)，任选地至少8.5mg/ml(或约8.5mg/ml)，任选地至少9mg/ml(或约9mg/ml)，任选地至少8.5mg/ml(或约8.5mg/ml)，任选地至少9mg/ml(或约9mg/ml)，任选地至少9.5mg/ml(或约9.5mg/ml)，或任选地至少10mg/ml(或约10mg/ml)至100mg/ml(或约100mg/ml)，任选地至95mg/ml(或约95mg/ml)，任选地至90mg/ml(或约90mg/ml)，任选地至85mg/ml(或约85mg/ml)，任选地至80mg/ml(或约80mg/ml)，任选地至75mg/ml(或约75mg/ml)，任选地至70mg/ml(或约70mg/ml)，任选地至65mg/ml(或约65mg/ml)，任选地至60mg/ml(或约60mg/ml)，任选地至55mg/ml(或约55mg/ml)，任选地至50mg/ml(或约50mg/ml)，任选地至45mg/ml(或约45mg/ml)，任选地至40mg/ml(或约40mg/ml)，任选地至35mg/ml(或约35mg/ml)，任选地至30mg/ml(或约30mg/ml)，任选地至25mg/ml(或约25mg/ml)，任选地至20mg/ml(或约20mg/ml)，或任选地至15mg/ml(或约15mg/ml)的毕赤酵母提取物浓度。[0189]在某些实施方案中，毕赤酵母属的提取物或提取物来源以按总组合物的重量计以从0.01％(或约0.01％)，任选地从0.05％(或约0.05％)，任选地从0.1％(或约0.1％)，任选地从0.5％(或约0.5％)，任选地从1％(或约1％)，任选地从1.5％(或约1.5％)，任选地从2％(或约2％)，任选地从2.5％(或约2.5％)，任选地从3％(或约3％)，任选地从3.5％,(或约3.5％)，任选地从4％(或约4％)，任选地从4.5％(或约4.5％)，任选地从5％(或约5％)，任选地从5.5％(或约5.5％)，任选地从6％(或约6％)，任选地从6.5％(或约6.5％)，任选地从7％(或约7％)，任选地从7.5％(或约7.5％)，任选地从8％(或约8％)，任选地从8.5％(或约8.5％)，任选地从9％(或约9％)，任选地从9.5％(或约9.5％)，任选地从10％(或约10％)，任选地从10.5％(或约10.5％)，任选地从11％(或约11％)，任选地从11.5％(或约11.5％)，任选地从12％(或约12％)，任选地从12.5％(或约12.5％)，任选地从13％(或约13％)，任选地从13.5％(或约13.5％)，任选地从14％(或约14％)，任选地从14.5％(或约14.5％)，任选地从15％(或约15％)，任选地从15.5％(或约15.5％)，任选地从16％(或约16％)，任选地从16.5％(或约16.5％)，任选地从17％(或约17％)，任选地从17.5％(或约17.5％)，任选地从18％(或约18％)，任选地从18.5％(或约18.5％)，任选地从19％(或约19％)，任选地从19.5％(或约19.5％)，任选地从20％(或约20％)，任选地从20.5％(或约20.5％)至30％(或约30％)，任选地至35％(或约35％)，任选地至40％(或约40％)，任选地至45％(或约45％)，任选地至50％(或约50％)，任选地至55％(或约55％)，任选地至60％(或约60％)，任选地至65％(或约65％)，任选地至70％(或约70％)，任选地至75％(或约75％)，任选地至80％(或约80％)，任选地至85％(或约85％)，任选地至90％(或约90％)，任选地至95％(或约95％)，或任选地至100％(或约100％)的浓度存在于本发明的组合物中。[0190]渗透促进剂[0191]在某些实施方案中，本发明的组合物任选地包含渗透促进剂。[0192]合适的渗透促进剂包括(选自或选自由以下项组成的组)单独或组合的以下物质：表面活性剂，诸如皂苷、聚氧乙烯、脂肪酸的聚氧乙烯醚(诸如聚氧乙烯4‑、9‑、10‑和23‑月桂基醚、聚氧乙烯10‑和20‑鲸蜡基醚、聚氧乙烯10‑和20‑硬脂基醚)、脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇(诸如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯)、十烃季铵、溴化十烃季胺和十二烷基三甲基溴化铵；螯合剂，诸如天然多元酸(例如柠檬酸)、磷酸盐(例如焦磷酸二钠)、膦酸酯、双膦酸酯(例如羟基乙叉二膦酸)、氨基羧酸(例如乙二胺四乙酸(edta)和乙二胺四乙酸二钠)和乙二胺‑n,n'‑二琥珀酸(edds))；胆汁盐和酸，诸如胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺脱氧胆酸、胆酸钠、甘氨胆酸钠、甘氨胆酸盐、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸；梭链孢酸衍生物、甘草酸和甘草酸铵，与皂苷edta、梭链孢酸、聚氧乙烯9‑月桂基醚、聚氧乙烯20‑硬脂基醚、甘氨胆酸盐或上述物质中的任一种的混合物。[0193]所施用的渗透促进剂的浓度应为足以增加化合物和/或提取物通过眼睛的粘液或其他屏障膜的吸收所需的最小量。一般来讲，范围从0.01％(或约0.01％)，任选地从0.05％(或约0.05％)，任选地从0.1％(或约0.1％)，任选地从0.15％(或约0.15％)，任选地从0.2％(或约0.2％)，任选地从0.25％(或约0.25％)至2％(或约2％)，任选地至2.5％(或约2.5％)，任选地至3％(或约3％)，任选地至3.5％,(或约3.5％)，任选地至4％(或约4％)，任选地至4.5％(或约4.5％)，任选地至5％(或约5％)，任选地至5.5％(或约5.5％)，任选地至6％(或约6％)，任选地至6.5％(或约6.5％)，任选地至7％(或约7％)，任选地至7.5％(或约7.5％)，任选地至8％(或约8％)，任选地至8.5％(或约8.5％)，任选地至9％(或约9％)，任选地至9.5％(或约9.5％)，任选地至10％(或约10％)，任选地至10.5％(或约10.5％)，任选地至11％(或约11％)，任选地至11.5％(或约11.5％)，任选地至12％(或约12％)，任选地至12.5％(或约12.5％)，任选地至13％(或约13％)，任选地至13.5％(或约13.5％)，任选地至14％(或约14％)，任选地至14.5％(或约14.5％)，任选地至15％(或约15％)，任选地至15.5％(或约15.5％)，任选地至16％(或约16％)，任选地至16.5％(或约16.5％)，任选地至17％(或约17％)，任选地至17.5％(或约17.5％)，任选地至18％(或约18％)，任选地至18.5％(或约18.5％)，任选地至19％(或约19％)，任选地至19.5％(或约19.5％)，任选地至20％(或约20％)的占总组合物的浓度(w/v)可用于本发明的组合物中。[0194]眼科上可接受的载体[0195]本发明的组合物还包含水溶液、水包油乳液或油包水乳液载体。载体是眼科上可接受的。可用的水包油载体和油包水载体可见于美国专利公布20030165545a1和美国专利9480645、8828412和8496976中，这些专利文献中的每一者均全文以引用方式并入本文。[0196]眼科上可接受的载体(或本发明的组合物)可任选地包含一种或多种附加的赋形剂和/或一种或多种附加的活性成分。下文描述了此类任选组分的示例。[0197]眼科组合物中通常使用的赋形剂包括但不限于缓和剂、张度剂、防腐剂、螯合剂、缓冲剂(不是本发明的有机酸且除其以外)和表面活性剂。其它赋形剂包括增溶剂，稳定剂、舒适增强剂、聚合物、润肤剂、ph调节剂(不是本发明的有机酸且除其以外)和/或润滑剂。多种赋形剂中的任何一种都可以用于本发明的组合物中，包括水、水和水混溶性溶剂的混合物，诸如包含0.5％至5％的无毒水溶性聚合物的植物油或矿物油、天然产物诸如琼脂和阿拉伯树胶、淀粉衍生物诸如淀粉乙酸酯和羟丙基淀粉，以及其它合成产物诸如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯基甲醚、聚环氧乙烷，以及优选地交联聚丙烯酸以及它们的混合物。[0198]与本发明的实施方案一起使用的缓和剂或抚慰剂包括但不限于纤维素衍生物(诸如羟乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙甲纤维素或它们的混合物)、透明质酸、罗望子籽提取物、甘油、聚乙烯吡咯烷酮、聚环氧乙烷、聚乙二醇、丙二醇和聚丙烯酸以及它们的混合物。在某些实施方案中，透明质酸、丙二醇、罗望子籽提取物、甘油和/或聚乙二醇400中的一种或多种是缓和剂或抚慰剂。在某些实施方案中，缓和剂或抚慰剂选自透明质酸、罗望子籽提取物或它们的混合物。[0199]本发明的组合物在眼科上适合施用于受试者的眼睛。术语“水性”通常表示水性制剂，其中赋形剂按重量计大于约50％，更优选大于约75％，具体地讲大于约90％的水。在某些实施方案中，本发明的组合物基本上不含刺激眼睛的化合物。在某些实施方案中，本发明的组合物基本上不含游离脂肪酸和c1至c4醇。在某些实施方案中，本发明的组合物包含按总组合物的重量计小于40％(或约40％)，任选地小于35％(或约35％)，任选地小于30％(或约30％)，任选地小于25％(或约25％)，任选地小于20％(或约20％)，任选地小于15％(或约15％)，任选地小于10％(或约10％)或任选地小于5％(或约5％)的非醇、有机赋形剂或溶剂。这些滴剂可以用优选为无菌的单剂量安瓿输送，因此制剂中无需抑菌组分。或者，滴剂可以用多剂量瓶递送，该多剂量瓶可以优选地包括在组合物递送时从组合物中提取任何防腐剂的装置，这样的装置为本领域已知。[0200]在某些实施方案中，为了对抗由蒸发和/或疾病引起的眼泪的高渗性，本发明的组合物是等渗的或略微低渗的。这可能需要张度剂使制剂的渗透度达到或接近210‑320毫摩尔每千克(mosm/kg)的水平。本发明的组合物通常具有220‑320mosm/kg范围内的渗透度，或者任选地具有235‑300mosm/kg范围内的渗透度。眼科组合物通常将配制成无菌水溶液。[0201]本发明的组合物的渗透度可用张度剂调节至与组合物的预期用途相容的值。例如，可调节组合物的渗透度以接近正常泪液的渗透度，这相当于水中约0.9w/v％的氯化钠。合适的张度调节剂的示例包括但不限于氯化钠、氯化钾、氯化钙和氯化镁；右旋糖；甘油；丙二醇；甘露糖醇；山梨醇等以及它们的混合物。在一个实施方案中，使用氯化钠和氯化钾的组合来调节组合物的张度。[0202]本发明的组合物也可用于施用药物活性化合物。此类化合物包括但不限于青光眼治疗剂、止痛剂、抗炎和抗过敏药物以及抗微生物剂。药物活性化合物的更具体的示例包括倍他洛尔、噻吗洛尔、毛果芸香碱、碳酸酐酶抑制剂和前列腺素；多巴胺能拮抗剂；手术后抗高血压剂，诸如对氨基可乐定(阿拉可乐定)；抗感染剂，诸如环丙沙星、莫西沙星和妥布霉素；非甾体和甾体抗炎剂，诸如萘普生、双氯芬酸、奈帕芬胺、舒洛芬、酮咯酸、四氢皮质醇和地塞米松；干眼治疗剂，例如，pde4抑制剂；以及抗过敏药物，诸如h1/h4抑制剂、h4抑制剂、奥洛他定或它们的混合物。[0203]还设想包含本发明制剂的成分的浓度可以改变。本领域普通技术人员将理解，浓度可以根据给定配方中成分的添加、替换和/或减少而变化。[0204]在某些实施方案中，本发明的组合物可具有与预期用途相容的ph，并且通常在4(或约4)至10(或约10)的范围内，任选地在6(或约6)至8(至约8)之间，任选地在6.5(或约6.5)至7.5(或约7.5)之间，或任选地在6.8(或约6.8)至7.2(或约7.2)之间。[0205]在某些实施方案中，可采用各种常规缓冲剂，诸如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、组氨酸、tris、bis‑tris等以及它们的混合物。硼酸盐缓冲剂包括硼酸及其盐，诸如硼酸钠或硼酸钾。也可采用四硼酸钾或偏硼酸钾，四硼酸钾或偏硼酸钾在溶液中产生硼酸或硼酸盐。还可使用水合盐，诸如硼酸钠十水合物。磷酸盐缓冲剂包括磷酸及其盐；例如，m2hpo4和mh2po4，其中m为碱金属诸如钠和钾。也可使用水合盐。在本发明的一个实施方案中，使用na2hpo4.7h2o和nah2po2.h2o作为缓冲剂。术语磷酸盐还包括在溶液中产生磷酸或磷酸盐的化合物。另外，还可使用上述缓冲剂的有机抗衡离子。缓冲剂的浓度通常在约0.01w/v％至2.5w/v％之间变化，更优选地在约0.05w/v％至约0.5w/v％之间变化。[0206]在某些实施方案中，当使用tainstrumentar2000流变仪测量时，本发明组合物的粘度范围为约1cps至约500cps，任选地为约10cps至约200cps，或任选地为约10cps至约100cps。tainstrumentar2000流变仪应当与tarheologicaladvantage软件的ar2000流量测试方法一起使用，所述流变仪具有40mm钢板的几何形状；应当通过测量稳态流量来获得粘度范围，所述稳态流量控制剪切速率为0secˉ1至200secˉ1。[0207]在某些实施方案中，本发明的组合物可用作滴眼剂溶液、眼部清洗溶液、接触镜片润滑和/或再润湿溶液、喷雾、薄雾或任何其他将组合物施用于眼睛的形式。[0208]本发明的组合物还可用作接触镜片的润湿溶液的形式。在某些实施方案中，作为润湿溶液，本发明的组合物可密封在泡罩包装中，并且还适于经历灭菌过程。[0209]泡罩包装件和灭菌技术的示例公开于以下参考文献中，这些参考文献全文以引用方式并入本文：美国专利d435,966；4,691,820；5,467,868；5,704,468；5,823,327；6,050,398、5,696,686；6,018,931；5,577,367；和5,488,815。该部分制造过程提供了使用抗过敏剂处理眼科装置的另一种方法，即在密封包装之前向溶液中加入抗过敏剂，随后对包装进行灭菌。这是使用抗过敏剂处理眼科装置的优选方法。[0210]可在不同的温度和时间段下进行灭菌。优选的灭菌条件的范围在处于约100℃约8小时至处于约150℃约0.5分钟。更优选的灭菌条件的范围在处于约115℃约2.5小时至处于约130℃约5.0分钟。最优选的灭菌条件为处于约124℃约18分钟。[0211]当用作润湿溶液时，本发明的组合物可以是水基溶液。典型的润湿溶液包括但不限于盐水溶液、其他缓冲液和去离子水。在某些实施方案中，润湿溶液为去离子水的水溶液或含盐的盐水溶液，所述盐包括但不限于氯化钠、硼酸钠、磷酸钠、磷酸氢钠、磷酸二氢钠或它们的对应钾盐。这些成分通常组合形成包含酸及其共轭碱的缓冲溶液，使得添加酸和碱仅引起ph值发生相对较小的变化。在某些实施方案中，润湿溶液的ph如上所述。缓冲液可另外包含2‑(n‑吗啉基)乙磺酸(mes)、氢氧化钠、2,2‑双(羟基甲基)‑2,2',2"‑次氮基三乙醇、n‑三(羟甲基)甲基‑2‑氨基乙磺酸、柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠、乙酸、乙酸钠、乙二胺四乙酸等以及它们的组合。优选地，溶液为硼酸盐缓冲盐水溶液或磷酸盐缓冲盐水溶液或去离子水。尤其优选的溶液包含约500ppm至约18,500ppm的硼酸钠，最尤其优选约1000ppm的硼酸钠。[0212]如果掺入到润湿溶液中的任何成分发生氧化降解，则可添加试剂使包含此类成分的润湿溶液稳定。此类“氧化稳定剂”包括但不限于螯合剂(诸如edta、dequest、desferal、二氧化硅)、甲壳质衍生物(诸如脱乙酰壳多糖、纤维素及其衍生物和n,n,n',n',n",n"‑六(2‑吡啶基)‑1,3,5‑三(氨甲基)苯)以及某些大环配体(诸如冠醚、包含结和链的配体)。参见，davida.leigh等人，angew.chemint.编辑，2001年，第40卷，第8期，第1538‑1542页，以及jean‑claudechambron等人，pure&appl.chem.，1990年，第62卷，第6期，第1027‑1034页。氧化稳定剂可包括抑制氧化的其他化合物，诸如选自由以下项组成的组：2,2',2",6,6',6"‑六(1,1‑二甲基乙基)4,4',4"‑[(2,4,6‑三甲基‑1,3,5‑苯三基)‑三亚甲基]‑三苯酚(irganox1330)、1,3,5‑三[3,5‑二(1,1‑二甲基乙基)4‑羟基苄基]‑1h,3h,5h‑1,3,5‑三嗪‑2,4,6‑三酮、季戊四醇四[3‑[3,5‑二(1,1‑二甲基乙基)‑4‑羟基苯基]‑丙酸酯]、十八烷基‑3‑[3,5‑二(1,1‑二甲基乙基)‑4‑羟基苯基]‑丙酸酯、三[2,4‑二(1,1‑二甲基乙基)‑苯基]‑亚磷酸酯、2,2'‑二(十八烷氧基)‑5,5'‑螺环二(1,3,2‑二氧磷环戊烷)、二(十八烷基)二硫化物、二(十二烷基)‑3,3'‑硫代双丙酸酯、二(十八烷基)‑3,3'‑硫代双丙酸酯、丁基羟基甲苯、乙烯双[3,3‑二[3‑(1,1‑二甲基乙基)‑4‑羟基苯基]丁酸酯]以及它们的混合物。优选的氧化稳定剂是二亚乙基三胺五乙酸(“dtpa”)，或dtpa的盐诸如cana3dtpa、znna3dtpa和ca2dtpa。参见2006年3月17日提交的名称为“methodsforstabilizingoxidativelyunstablepharmaceuticalcompositions”的美国专利申请60/783,557及其对应的非临时性提交申请，这些专利申请的全部内容均以引用方式并入本文。在某些实施方案中，氧化稳定剂在溶液中的浓度为约2.5微摩尔/升至约5000微摩尔/升，任选地约20微摩尔/升至约1000微摩尔/升，任选地约100微摩尔/升至约1000微摩尔/升，或任选地约100微摩尔/升至约500微摩尔/升。[0213]在具体实施方案中，本发明的组合物被配制为以任何施用频率施用，包括每周一次、每五天一次、每三天一次、每两天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次、每天六次、每天八次、每小时或更高的频率。根据用户的治疗需要，也在可变的持续时间维持这种给药频率。特定治疗方案的持续时间可在单次给药到持续数月或数年的方案之间变化。本领域普通技术人员将会熟知确定具体指示的治疗方案。[0214]包含本发明的此类组合物的组合物和产品可使用本领域的普通技术人员熟知的方法来制备。[0215]实施例[0216]下列实施例中描述的本发明的任何组合物示出了本发明的组合物的具体实施方案，但非意图对其进行限制。在不背离本发明实质和范围的情况下，技术人员可进行其它修改。[0217]实施例中采用了以下测试方法：[0218]实施例1[0219]异常毕赤酵母发酵提取物(hyalurodine)在局部施用于角膜组织细胞时在人角膜上皮3d组织中诱导透明质酸分泌。在不受理论限制的情况下，据信此类局部施用需要异常毕赤酵母发酵提取物扩散通过人角膜上皮组织的紧密连接结构(即，通常抑制化学渗透进入组织的那些结构[例如，膜或膜屏障])到达角膜上皮组织内部。[0220]人角膜上皮3d组织购自mattek公司(ashland,ma,usa)。在接收到人角膜上皮3d组织之后，按照制造商的说明书，将组织在mattek测定培养基中温育过夜。将人角膜上皮3d组织分成五个处理组，每组三个组织。将溶于磷酸盐缓冲溶液(pbs)溶媒的1.95mg/ml、7.8mg/ml、19.5mg/ml和39mg/ml四种浓度的异常毕赤酵母发酵提取物(hyalurodine)分别局部施用于四个处理组的角膜上皮表面(使得异常毕赤酵母发酵提取物递送穿过上述紧密连接结构)。将所有五个处理组中的角膜上皮组织温育两天。异常毕赤酵母发酵提取物由silab(st.viance,france)提供。两天后，按照制造商规程，使用ha酶联免疫吸附测定(elisa)试剂盒(k‑1200,echelon,saltlakecity,ut,usa)收集培养基以用于测定透明质酸(ha)分泌。为评估活性，使用微板读数器(spectramaxm2e,moleculardevices,sunnyvale,ca,usa)测量比色变化。该测定采用竞争性酶联免疫吸附测定技术，因此样品中ha浓度与比色变化之间存在逆相关性。生成标准曲线，以ha浓度为x轴，吸光度为y轴，从而指示对应的ha浓度。结果示于图1中。[0221]虽然结果表明，在测试浓度下的局部施用定向地指示在角膜细胞中诱导ha产生，但诸如紧密连接结构(或其他表面膜或膜层屏障)等因素可降低到达内部角膜组织的异常毕赤酵母的浓度。在此类情况下，结合有渗透增强剂的本发明的实施方案可能有用。[0222]实施例2[0223]为了减少可能由上述紧密连接结构(或膜或膜屏障)引起的阻塞，通过用含有异常毕赤酵母发酵提取物(hyalurodine)的生长培养基(即“处理过的”培养基)接触角膜组织，使得角膜组织的底部细胞层(即，不具有抑制化学渗透进入组织的紧密连接结构的细胞层)浸入生长培养基中，从而观察到在人角膜上皮外膜3d组织中诱导透明质酸分泌。通过用含有异常毕赤酵母发酵提取物的生长培养基接触角膜组织的底部细胞层，提取物可直接接触角膜内组织并向上移动进入角膜内组织，而不必首先穿过任何紧密连接结构或其他表面屏障，从而改善了进入角膜组织细胞的异常毕赤酵母的生物利用率。[0224]人角膜上皮3d组织购自mattek公司(ashland,ma,usa)。在接收人角膜上皮3d组织时，按照制造商的说明书，将这些组织在mattek测定培养基中温育过夜。将人角膜上皮3d组织分成五个处理组，每组三个组织。将异常毕赤酵母发酵提取物(hyalurodine)分别添加到其中四个处理组的培养基中，以分别产生0.39mg/ml、0.78mg/ml、1.56mg/ml和1.95mg/ml的培养基浓度，以接触人角膜上皮组织的底部细胞层。将所有五个处理组中的角膜上皮组织温育两天。异常毕赤酵母发酵提取物由silab(st.viance,france)提供。两天后，按照制造商规程，使用ha酶联免疫吸附测定(elisa)试剂盒(k‑1200,echelon,saltlakecity,ut,usa)收集培养基以用于测定透明质酸(ha)分泌。为评估活性，使用微板读数器(spectramaxm2e,moleculardevices,sunnyvale,ca,usa)测量比色变化。该测定采用竞争性酶联免疫吸附测定技术，因此样品中ha浓度与比色变化之间存在逆相关性。生成标准曲线，以ha浓度为x轴，吸光度为y轴，从而指示对应的ha浓度。结果示于图2中。[0225]结果显示，在异常毕赤酵母的此类组织环境浓度为至少0.3mg/ml(即，接触此类内部角膜组织细胞的异常毕赤酵母提取物的浓度[例如，角膜流体水平浓度])下，观察到角膜组织细胞中ha产量在统计意义上显著增加。[0226]可制备包含如实施例3‑4中所示的一种或多种本发明的化合物和/或提取物的溶液。[0227]实施例3[0228]表1示出了此类制剂的组分(如制剂3a至3b中所示)，这些组分可使用常规混合技术如下所述掺入。[0229]表1[0230][0231][0232]*调节至渗透压为280mosm/kg‑290mosm/kg[0233]**调节至ph7.2[0234]***适量至100％w/w[0235]对于实施例3a‑3b：透明质酸钠可以由contiproa.s.(dolni,dobrouc,czechrepublic)提供。[0236]对于实施例3a和3b：异常毕赤酵母提取物可以由silab(saintviance,france)提供。[0237]对于实施例3a‑3b：聚山梨酸酯20可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0238]对于实施例3a‑3b：聚山梨酸酯80可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0239]对于实施例3a：聚乙二醇400可以由clariantprodukte(burgkirchen,germany)提供。[0240]对于实施例3a‑3b：硼酸可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0241]对于实施例3a‑3b：硼酸钠可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0242]对于实施例3a‑3b：氯化钠可以由caldic(dusseldorf,germany)提供。[0243]对于实施例3a‑3b：氯化钾可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0244]对于实施例3a‑3b：二水氯化钙可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0245]对于实施例3a‑3b：氯化镁可以由kgaa(darmstadt,germany)提供。[0246]对于实施例3a‑3b：聚季铵盐‑42(33％水溶液)可以由dsmbiomedical(berkeley,ca,usa)提供。[0247]对于实施例3a‑3b：二水亚氯酸钠可以由oxychem(wichita,ks,usa)提供。[0248]对于实施例3a‑3b：1n氢氧化钠可以由vwr(radner,pa,usa)提供。[0249]对于实施例3a‑3b：1n盐酸可以由vwr(radner,pa,usa)提供。[0250]溶液3a可如下制备：[0251]1.向1500ml烧杯中添加800克纯化水usp。[0252]2.向上述物质中添加10g聚山梨酸酯80和50g聚山梨酸酯20。混合溶液直至两者完全混合并溶解。[0253]3.向上述物质中添加20.0g异常毕赤酵母提取物。混合溶液直至异常毕赤酵母提取物溶解。[0254]4.通过0.45微米过滤器过滤溶液并倒回1500ml烧杯中。[0255]5.向步骤4所得的溶液中添加2.0克透明质酸钠。混合溶液以完全溶解透明质酸钠。[0256]6.接下来依次添加以下成分，使各成分溶解然后再添加后一成分：2.5克聚乙二醇400、6.0克硼酸、0.05克硼酸钠、1.0克氯化钾、0.06克二水氯化钙、0.06克氯化镁和0.0015克聚季铵盐‑42(水溶液)。[0257]7.在继续混合的同时，添加0.14克二水亚氯酸钠并混合至溶解。[0258]8.测定制剂的渗透压并用氯化钠调节至280mosm/kg。[0259]9.使用1n氢氧化钠和/或1n盐酸将制剂的ph调节至ph为7.2。[0260]10.使用纯化水usp将溶液调至1000.0克，并混合10分钟使其完全均匀。[0261]11.使用0.22微米的过滤器过滤溶液。[0262]溶液3b可如下制备：[0263]1.向1500ml烧杯中添加800克纯化水usp。[0264]2.向上述物质中添加20g聚山梨酸酯10和100g聚山梨酸酯20。混合溶液直至两者完全混合并溶解。[0265]3.向上述物质中添加50g异常毕赤酵母提取物。混合溶液直至异常毕赤酵母提取物溶解。[0266]4.通过0.45微米过滤器过滤溶液并倒回1500ml烧杯中。[0267]5.向步骤4的溶液中添加1.5克透明质酸钠。混合溶液以完全溶解透明质酸钠。[0268]6.接下来依次添加以下成分，使各成分溶解然后再添加后一成分：6.0克硼酸、0.05克硼酸钠、1.0克氯化钾、0.06克二水氯化钙、0.06克氯化镁和0.0015克聚季铵盐‑42(水溶液)。[0269]7.在继续混合的同时，添加0.14克二水亚氯酸钠并混合至溶解。[0270]8.测定制剂的渗透压并用氯化钠调节至280mosm/kg。[0271]9.使用1n氢氧化钠和/或1n盐酸将制剂的ph调节至ph为7.2。[0272]10.使用纯化水usp将溶液调至1000.0克，并混合10分钟使其完全均匀。[0273]11.使用0.22微米的过滤器过滤溶液。[0274]实施例4[0275]表2示出了本发明的制剂的组分(如制剂4a至4b中所示)，这些组分可使用常规混合技术如下所述掺入。[0276]表2[0277][0278][0279]*调节至渗透压为280mosm/kg‑290mosm/kg[0280]**调节至ph7.2[0281]***适量至100.00％体积[0282]对于实施例4a和4b：异常毕赤酵母提取物可以由silab(saintviance,france)提供。[0283]对于实施例4a‑4b：聚山梨酸酯20可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0284]对于实施例4a‑4b：聚山梨酸酯80可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0285]对于实施例4a‑4b：硼酸可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0286]对于实施例4a‑4b：硼酸钠可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0287]对于实施例4a‑4b：氯化钠可以由caldic(dusseldorf,germany)提供。[0288]对于实施例4a‑4b：氯化钾可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0289]对于实施例4a‑4b：羟丙甲纤维素e32910可以由dowchemical(plaquemine,louisiana,usa)提供。[0290]对于实施例4a‑4b：甘油可以由emeryoleochemicalsgmbh(dusseldorf,germany)提供。[0291]对于实施例4a‑4b：磷酸二钠可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0292]对于实施例4a‑4b：柠檬酸钠可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0293]对于实施例4a‑4b：乳酸钠可以由merckkgaa(darmstadt,germany)以乳酸钠(50％水溶液)提供。[0294]对于实施例4a‑4b：葡萄糖可以由roquettefreres(lastrem,france)提供。[0295]对于实施例4a‑4b：甘氨酸可以由merckkgaa(darmstadt,germany)提供。[0296]对于实施例4a‑4b：抗坏血酸可以由dsmnutritionalproducts(drakemyre,scotland,uk)。[0297]对于实施例4a‑4b：聚季铵盐42可以由dsmbiomedical(berkeley,ca)以聚季铵盐42(33％水溶液)提供。[0298]对于实施例4a‑4b：依地酸二钠可以由mercknv/sa(overijse,belgium)提供。[0299]对于实施例4a‑4b：1n氢氧化钠可以由vwr(radner,pa,usa)提供。[0300]对于实施例4a‑4b：1n盐酸可以由vwr(radner,pa,usa)提供。对于实施例4a‑4b：二水亚氯酸钠可以由oxychem(wichita,ks,usa)提供。[0301]溶液4a可如下制备：[0302]1.向1500ml烧杯中添加800克纯化水usp。[0303]2.向上述物质中添加10g聚山梨酸酯80和30g聚山梨酸酯20。混合溶液直至两者完全混合并溶解。[0304]3.向上述物质中添加10.0g异常毕赤酵母提取物。混合溶液直至异常毕赤酵母提取物溶解。[0305]4.通过0.45微米过滤器过滤溶液并倒回1500ml烧杯中。[0306]5.向上述溶液中添加1.98克羟丙甲纤维素e3premium。混合溶液直至羟丙甲纤维素e3premium溶解。[0307]6.接下来依次添加以下成分，使各成分溶解然后再添加后一成分：2.50克甘油、4.0克硼酸、0.22克硼酸钠、0.27克磷酸二钠、4.00克柠檬酸钠二水合物、1克氯化钾、0.57克乳酸钠(50％水溶液)、0.13克氯化镁、0.036克葡萄糖、0.0002克甘氨酸、0.0001克抗坏血酸、0.10克依地酸二钠、0.030克聚季铵盐‑42(33％水溶液)和0.14克亚氯酸钠。[0308]7.测定溶液的渗透压并用氯化钠调节至280mosm。[0309]8.测量溶液的ph并用1n氢氧化钠和/或1n盐酸调节至7.2。[0310]9.使用纯化水将溶液定容至1,000.00克，并混合10分钟。[0311]10.使用0.22微米的过滤器过滤溶液。[0312]溶液4b可如下制备：[0313]1.向1500ml烧杯中添加800克纯化水usp。[0314]2.向上述物质中添加10g聚山梨酸酯80和50g聚山梨酸酯20。混合溶液直至两者完全混合并溶解。[0315]3.向上述物质中添加20.0g异常毕赤酵母提取物。混合溶液直至异常毕赤酵母提取物溶解。[0316]4.通过0.45微米过滤器过滤溶液并倒回1500ml烧杯中。[0317]5.向上述溶液中添加1.98克羟丙甲纤维素e3premium。混合溶液直至羟丙甲纤维素e3premium溶解。[0318]6.接下来依次添加以下成分，使各成分溶解然后再添加后一成分：2.50克甘油、4.0克硼酸、0.22克硼酸钠、0.27克磷酸二钠、4.00克柠檬酸钠二水合物、1克氯化钾、0.57克乳酸钠(50％水溶液)、0.13克氯化镁、0.036克葡萄糖、0.0002克甘氨酸、0.0001克抗坏血酸、0.05克依地酸二钠、0.015克聚季铵盐‑42(33％水溶液)和0.14克亚氯酸钠。[0319]7.测定溶液的渗透压并用氯化钠调节至280mosm。[0320]8.测量溶液的ph并用1n氢氧化钠和/或1n盐酸调节至7.2。[0321]9.使用纯化水将溶液定容至1,000.00克，并混合10分钟。[0322]10.使用0.22微米的过滤器过滤溶液。[0323]本发明的实施方案：[0324]1.一种用于治疗患有透明质酸从角膜中和/或在角膜中的减少的或低水平的产生/释放/递送/排泄症状的患者的方法，包括向所述患者的眼睛局部施用组合物的步骤，所述组合物包含：[0325]i)安全且有效量的毕赤酵母属的一种或多种提取物或提取物来源，以实现在眼睛的角膜组织中的角膜积液中至少约0.3mg/ml的毕赤酵母属提取物浓度；[0326]ii)任选地，安全且有效量的渗透促进剂；和[0327]iii)任选地，眼科上可接受的载体。[0328]2.根据实施方案1(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中[0329]所述组合物中的所述毕赤酵母属提取物包含重均分子量为约180da至约800,000da的低聚糖和多糖。[0330]3.根据实施方案1和/或2(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中所述组合物中的所述毕赤酵母属提取物包含平均聚合度为dp1至dp4444的低聚糖和多糖。[0331]4.根据实施方案1至3中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中所述组合物包含渗透促进剂。[0332]5.根据实施方案1至4中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中所述渗透促进剂以所述总体组合物的约0.01％至约20％(w/v)的浓度存在。[0333]6.根据实施方案1至5中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中所述渗透促进剂以所述总体组合物的约0.1％至10％(w/v)的浓度存在。[0334]7.根据实施方案1至6中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中所述渗透促进剂以所述总体组合物的约0.25％至5％(w/v)的浓度存在。[0335]8.根据实施方案1至7中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中所述渗透促进剂选自聚氧乙烯、脂肪酸的聚氧乙烯醚、脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、梭链孢酸及其衍生物、edta、乙二胺四乙酸二钠、胆酸、脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺脱氧胆酸、胆酸钠、甘氨胆酸钠、甘氨胆酸盐、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、皂苷、甘草酸、甘草酸铵、十烃季铵、溴化十烃季胺和十二烷基三甲基溴化铵、或上述物质中的任一种的混合物。[0336]9.根据实施方案1至8中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中当所述患者的泪液中透明质酸浓度低于约10纳克/毫克蛋白质时施用所述组合物。[0337]10.根据实施方案1至9中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中当所述患者的泪液中透明质酸浓度低于约15纳克/毫克蛋白质时施用所述组合物。[0338]11.根据实施方案1至10中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中当所述患者的泪液中透明质酸浓度低于约20纳克/毫克蛋白质时施用所述组合物。[0339]12.根据实施方案1至11中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中当所述患者的泪液中透明质酸浓度低于约25纳克/毫克蛋白质时施用所述组合物。[0340]13.根据实施方案1至12中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中向所述患者的眼睛施用所述组合物以使所述患者的泪液中透明质酸的浓度升高至等于或大于约10纳克/毫克蛋白质。[0341]14.根据实施方案1至13中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中向所述患者的眼睛施用所述组合物以使所述患者的泪液中透明质酸的浓度升高至等于或大于约15纳克/毫克蛋白质。[0342]15.根据实施方案1至14中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中向所述患者的眼睛施用所述组合物以使所述患者的泪液中透明质酸的浓度升高至等于或大于约20纳克/毫克蛋白质。[0343]16.根据实施方案1至15中任一项或组合(或以下实施方案中的任一项)所述的方法，其中向所述患者的眼睛施用所述组合物以使所述患者的泪液中透明质酸的浓度升高至等于或大于约25纳克/毫克蛋白质。当前第1页1 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