用于治疗癌症的NUPR1抑制

本发明涉及nupr1抑制剂及其作为药物，特别是作为抗癌药物的用途。本发明特别涉及这些化合物在治疗选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌，更特别是胰腺癌的肿瘤中的用途。
背景技术：
：癌症是全世界疾病的主要负担。每年，全世界有数千万人被诊断患有癌症，并且超过一半的患者最终死于癌症。在全球范围内，六分之一的死亡是由于癌症。在许多国家，癌症是仅次于心血管疾病的第二大常见死因。随着治疗和预防心血管疾病的显著改善，癌症已经或将很快成为世界许多地方的头号杀手。由于老年人最易患癌症，而且许多国家的人口老龄化仍在继续，癌症仍将是全球主要的健康问题。这种意识促使世界卫生大会于2017年通过了《通过综合方法预防和控制癌症的决议》以敦促政府和who加快行动以实现《全球行动计划》和《2030年联合国可持续发展议程》中规定的目标，以减少癌症死亡率。尽管有最近的进展，但是在本领域中仍然需要新型抗癌药物，以作为已存在药物的简单替代品或具有比已存在药物更好的性能。这些更好的特性可以具有更有效的抗肿瘤活性和/或较小或无发展不良副作用的风险。因此，仍然存在用于治疗癌症的化合物的需求。特别地，仍然存在能够治疗多种癌症，尤其是选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌，更特别是胰腺癌的癌症的新型化合物的需求。当用于有需要的患者时，仍然需要在有效剂量下没有副作用的抗癌化合物。特别地，当用于有需要的患者时，仍然需要在有效剂量下没有神经系统副作用的抗癌化合物。本文描述的本发明的目的满足上述需求。发明概述本发明涉及对于nupr1具有抑制活性的化合物及其在癌症治疗中的用途。因此，本发明的目的是式(i)化合物：其中：r1代表直链或支链(c2-c5)烷基，其任选被-nr3r4基团替代；r2代表非键对或-(ch2)1-5nr3r4基团，其中当r2不代表非键对时，则与r2连接的氮原子带正电；并且r3和r4独立代表：-氢原子；--oh基；-直链或支链(c1-c6)烷基，所述烷基任选被一个或多个选自卤素原子、-oh基和-sh基的取代基取代；-直链或支链(c1-c6)烷氧基，所述烷氧基任选被一个或多个选自卤素原子、-oh基和-sh基团的取代基取代；或--cooh基；或r3和r4与和它们连接的氮原子一起形成饱和或不饱和的(3至6元)杂环，除了与r3和r4连接的氮原子外，该杂环还包含0、1或2个选自氮原子和氧原子的其他杂原子；所述杂环任选被一个或多个选自卤素原子、-oh基、(＝o)基和直链或支链(c1-c6)烷基的取代基取代；所述式(i)化合物为所有可能的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映体和非对映异构体，以及式(i)化合物与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐；用于治疗选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤，骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌的肿瘤的用途。在一个特定的实施方案中，r1代表：--c2h5基团；或--(c2h4)nr3r4基团，其中r3和r4如上所定义。在另一个实施方案中，根据本发明用于用途的化合物为式(ii)：其中：n是1-4的整数；并且r2、r3和r4如先前定义。在本发明的一个实施方案中，式(ii)中存在的n代表1或2，特别代表1。在另一个实施方案中，r3和r4独立代表直链或支链(c1-c6)烷基或r3和r4与和它们连接的氮原子一起形成饱和或不饱和(3至6元)杂环，除与r3和r4连接的氮原子外，该杂环还包含0、1或2个选自氮原子和氧原子的其他杂原子；所述杂环任选被一个或多个选自卤素原子、-oh基、(＝o)基和直链或支链(c1-c6)烷基的取代基取代。在一个特定的实施方案中，r3和r4独立代表：--(ch3)基团；或--(c2h5)基团；或与和它们连接的氮原子一起形成饱和的(5元或6元)杂环，除了与r3和r4连接的氮原子外，该杂环还包含0或1个氧原子；所述杂环未被取代或被(＝o)基团取代。更具体地说，r3和r4可以独立代表：--(ch3)基团；或--(c2h5)基团；或与和它们连接的氮原子一起形成选自以下的杂环：在一个特定的实施方案中，根据本发明用于其用途的化合物是式(ii)，其中：n为1或2；r2代表非键对；并且r3和r4独立代表：--(ch3)基团；或--(c2h5)基团；或与和它们连接的氮原子一起形成选自以下的杂环：在一个具体的实施方案中，根据本发明用于其用途的化合物选自以下化合物：以及它们的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映异构和非对映异构体，和它们与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐。在一个具体的实施方案中，根据本发明用于其用途的化合物选自以下化合物：以及它们的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映异构和非对映异构体，和它们与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐。在一个具体的实施方案中，根据本发明用于其用途的化合物选自以下化合物：以及它们的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映异构和非对映异构体，和它们与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐。在本发明的一个实施方案中，目的肿瘤是胰腺癌。本发明的另一个目的是用于治疗个体的选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌的肿瘤的药物组合物，其中所述组合物在药学上可接受的介质中包含至少一种式(i)化合物。在一个特定的实施方案中，根据本发明的用于其用途的药物组合物还包含一种或几种不同于如上所定义的化合物的抗癌药物。本发明的另一个目的是如上所定义的式(i)化合物。在一个特定的实施方案中，所述化合物选自以下化合物：以及它们的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映异构和非对映异构体，和它们与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐。在另一个特定的实施方案中，所述化合物选自以下化合物：更特别地，本发明的化合物可以选自以下化合物：以及它们的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映异构和非对映异构体，和它们与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐。特别地，本发明的另一个目的是选自以下化合物的式(i)化合物：以及它们的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映异构和非对映异构体，和它们与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐。附图说明图1：用不同浓度的对照化合物(三氟啦嗪)和三种根据本发明化合物(化合物a、b和c)处理后，四种特征明确的原发性胰腺癌衍生细胞02.063和lipc(基础亚型)、foie8b(源自肝转移)和hn14(经典亚型)的活力百分比变化。纵坐标：细胞活力的％。横坐标：测试化合物的浓度(μm)。图2：在不存在任何处理(对照-施用与处理小鼠相同的处理体积的介质溶液体积)或用本发明化合物c处理(每天用5mg/kg的该化合物处理30天)的情况下，异种移植了02.063细胞的小鼠肿瘤大小的变化。该图上的第0天对应于肿瘤达到200mm3的天数(因此，注射15x106个细胞后约1周)。纵坐标：肿瘤体积(mm3)。横坐标：天数。图3：随着化合物c浓度的增加，来自不同肿瘤的11种细胞系的活力百分比变化：hepg2(肝细胞癌)、b16(小家鼠黑色素瘤)、a-375(黑色素瘤)、ht-29(结肠腺癌)、sk-co-1(结肠腺癌)、u87(似胶质母细胞瘤)、u-2os(骨肉瘤)、pc3(前列腺癌)、saos-2(骨肉瘤)、ls174t(结肠腺癌)和mda-mb-231(乳腺癌)。纵坐标：细胞活力的％。横坐标：化合物c的浓度(μm)。图4：本发明的不同化合物对源自特征明确的原发性胰腺癌衍生细胞的10种细胞系的效率(ic50值)的量度：miapaca-2(经典亚型)、anor(经典亚型)、aoipc(基础亚型)、02-136(基础亚型)、01-046(经典亚型)、nh01(经典亚型)、lipc(基础亚型)、hn14(经典亚型)、01-008(基础亚型)和foie8b(源自肝脏转移)。横坐标：从左至右的测试化合物：化合物c、i、f、k、l、m、n、d、g和j。纵坐标：ic50值(μm)发明详述nupr1，也称为p8或com1，是应力诱导型82个氨基酸长的染色质蛋白at钩家族的内在无序成员。nupr1以与其他染色质蛋白相似的方式与dna结合(encinaretal.,2001,thejournalofbiologicalchemistry276,2742-2751；grassoetal.,2014,celldeathanddifferentiation21,1633-1641)来调控基因靶标的表达(hamidietal.,2012,thejournalofclinicalinvestigation122,2092-2103)。在细胞水平，nupr1参与许多与癌症相关的过程，包括细胞周期调控、细胞凋亡(malicetetal.,2006a,cellcycle5,829-830；malicetetal.,2006b,proceedingsofthenationalacademyofsciencesoftheunitedstatesofamerica103,2671-2676)、细胞迁移和侵袭(sandietal.,2011,journalofcellularphysiology226,3442-3451)、转移形成(reeetal.,2000,clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheamericanassociationforcancerresearch6,1778-1783)和dna修复反应(gironellaetal.,2009,journalofcellularphysiology221,594-602)。实际上，由于nupr1在促进胰腺癌的形成和进展中的作用，它最近已引起了广泛的关注(canoetal.,2014,gut63,984-995；hamidietal.,2012,thejournalofclinicalinvestigation122,2092-2103)。值得注意的是，nupr1依赖性作用还介导了对抗癌药物的耐药性(girouxetal.,2006,clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheamericanassociationforcancerresearch12,235-241；palametal.,2015,celldeath&disease6,e1913；tangetal.,2011,oncologyreports25,963-970)。此外，先前已经表明nupr1的基因失活拮抗胰腺癌的生长(sandietal.,2011,journalofcellularphysiology226,3442-3451；vasseuretal.,2002,emboreports3,165-170)，并且nupr1的基因失活阻止肝癌(emmaetal.,2016,celldeath&disease7,e2269)、非小肺癌(guoetal.,2012,anatrec(hoboken)295,2114-2121)、胆管癌(kimetal.,2012)、胶质母细胞瘤(lietal.,2017,jneurooncol132,15-26)和多发性骨髓瘤的生长(zengetal.,2017,chinesejournalofcellularandmolecularimmunology33,1240-1246)，从而支持该蛋白作为发展癌症疗法的有希望的治疗靶标的作用。然而，nupr1的表达被敲低时，其发挥抗癌作用的机制仍然不清楚。按照自下而上的方法，最近已将一种众所周知的抗精神病药三氟拉嗪确定为与对照样品(不添加化合物的nupr1)相比，能在nupr1中诱导明显不同的温度变性特征的配体(neiraetal.,2017,scientificreports7,39732)。特别地，已经发现nupr1和三氟拉嗪之间的解离常数在低微摩尔范围内。此外，已经证明三氟拉嗪能使nupr1失活，导致细胞衰老。因此，三氟拉嗪似乎是一种令人感兴趣的抗癌化合物。然而，如本申请的实施例所示，体内测试的逐渐增加的高剂量三氟拉嗪对移植了人胰腺癌细胞源异种移植物的免疫缺陷小鼠产生神经系统的影响。因此，尽管三氟拉嗪似乎相对有效地用作抗癌剂，但在小鼠中发现的神经系统的影响使其在临床上无法使用。这就是为什么仍然需要表现出至少与三氟哌嗪同等的抗癌活性，但具有较少或优选没有副作用，特别是具有较少或优选没有神经系统副作用的替代化合物。令人惊讶地，发明人确定了一组具有至少与三氟拉嗪相同的抗癌特性但没有任何神经系统副作用的化合物。测试的一些化合物甚至比三氟拉嗪更有效。考虑到本文提供的体外和体内实验证据，发明人认为肿瘤，尤其是选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌的癌症，尤其是胰腺癌，可以通过使用至少本发明的式(i)化合物来治疗。有利地，所述化合物可以单独施用或与其他抗癌活性剂联合施用。就本发明而言：-烷基是包含1至6个碳原子的直链或支链的基于饱和烃的脂族基团(并且可以表示为直链或支链(c1-c6)烷基)。因此，直链或支链(c1-c6)烷基是包含1至6个碳原子的直链或支链的基于饱和烃的脂族基团。可以提及的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基和己基。-非键对是不与另一个原子共享的一对价电子，也可以称为孤对。-卤素原子可以选自氟、氯、溴和碘原子。-烷氧基是-o-烷基，其中烷基如前所定义。-个体优选是哺乳动物，并且特别是人。更特别地，根据本发明的个体患有癌症，特别是选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌的癌症，更特别是胰腺癌。根据本发明的用于用途的化合物本发明的化合物具有式(i)：其中：r1代表直链或支链(c2-c5)烷基，任选地被-nr3r4基团替代；r2代表非键对或-(ch2)1-5nr3r4基团，其中当r2不代表非键对时，则与r2连接的氮原子带正电；并且r3和r4独立代表：-氢原子；--oh基；-直链或支链(c1-c6)烷基，所述烷基任选被一个或多个选自卤素原子、-oh基和-sh基的取代基取代；-直链或支链(c1-c6)烷氧基，所述烷氧基任选被一个或多个选自卤素原子、-oh基和-sh基团的取代基取代；或--cooh基团；或r3和r4与和它们连接的氮原子一起形成饱和或不饱和的(3至6元)杂环，除了与r3和r4连接的氮原子外，该杂环还包含0、1或2个选自氮原子和氧原子的其他杂原子；所述杂环任选被一个或多个选自卤素原子、-oh基、(＝o)基和直链或支链(c1-c6)烷基的取代基取代；所述式(i)化合物为所有可能的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映体和非对映异构体，以及式(i)化合物与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐；用于治疗选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤，骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌的肿瘤的用途。在一个实施方案中，r1代表直链或支链(c2-c5)烷基，优选直链(c2-c5)烷基，特别是直链(c2-c4)烷基，更特别是-c2h5基团。在另一个实施方案中，r1代表被一个-nr3r4基团取代的直链或支链(c2-c5)烷基，优选被一个-nr3r4基团取代的直链(c2-c5)烷基，特别是被一个-nr3r4基团取代的直链(c2-c4)烷基，并且优选代表-(c2h4)nr3r4的基团。在一个特定的实施方案中，r1代表：--c2h5基团；或--(c2h4)nr3r4基团，其中r3和r4如先前所定义或在下文中进一步定义。在一个特定的实施方案中，本发明的化合物具有式(ii)：其中：n是1-4的整数；并且r2、r3和r4如先前定义或下文定义。在本发明的一个实施方案中，n为1或2。在本发明的一个实施方案中，n为1。在一个实施方案中，根据式(i)或(ii)，r2代表非键对。在另一个实施方案中，根据式(i)或(ii)，r2代表-(ch2)1-5nr3r4基团，特别是-(ch2)2nr3r4基团，r3和r4如上所定义。在一个特定的实施方案中，根据式(i)或(ii)，r2代表-(ch2)1-5nr3r4基团，其中r3和r4独立代表直链或支链(c1-c6)烷基，优选直链的(c1-c6)烷基，尤其是直链(c1-c3)烷基。在一个具体的实施方案中，根据式(i)或(ii)，r2代表-(ch2)1-5nr3r4基团，其中r3和r4均代表-ch3基团。在本发明的一个实施方案中，r2代表非键对或-(ch2)2n(ch3)2基团。在本发明的每个实施例中，当r2不同于非键对时，r2连接的氮原子带正电。在一个特定的实施方案中，r3和r4是相同的。在本发明的一个实施方案中，式(i)或(ii)中的r3和r4独立代表直链或支链(c1-c6)烷基，或r3和r4与和它们连接的氮原子一起形成饱和或不饱和(3至6元)杂环，除了与r3和r4连接的氮原子外，该杂环还包含0、1或2个选自氮原子和氧原子的其他杂原子；所述杂环任选被一个或多个选自卤素原子、-oh基、(＝o)基和直链和支链(c1-c6)烷基的取代基取代。在本发明的一个实施方案中，r3和r4独立代表直链或支链(c1-c6)烷基，优选直链(c1-c6)烷基，特别是直链(c1-c3)烷基。更特别地，r3和r4均可代表-ch3基团或-c2h5基团，并且它们优选均代表-ch3基团。在本发明的另一个实施方案中，r3和r4与和它们连接的氮原子一起形成饱和或不饱和的(3至6元)杂环，除了与r3和r4连接的氮原子外，该杂环还包含0、1或2个选自氮原子和氧原子的其他杂原子；所述杂环任选被一个或多个选自卤素原子、-oh基、(＝o)基和直链或支链(c1-c6)烷基的取代基取代；在一个特定的实施方案中，所述(3至6元)杂环是饱和的。在一个特定的实施方案中，所述杂环是5或6元杂环。在本发明的一个实施方案中，除了与r3和r4连接的氮原子外，所述杂环还包含0或1个选自氮原子和氧原子的其他杂原子。如果存在的话，所述其他杂原子可以特别地是氧原子。特别地，r3和r4可以与和它们连接的氮原子一起形成选自以下的杂环：在一个特定的实施方案中，所述杂环未被取代或被(＝o)基取代。在一个特定的实施方案中，r3和r4独立代表：--(ch3)基团；或--(c2h5)基团；或与和它们连接的氮原子一起形成饱和的(5元或6元)杂环，除了与r3和r4连接的氮原子外，所述杂环还包含0或1个氧原子；所述杂环未被取代或被(＝o)基团取代。在一个特定的实施方案中，r3和r4独立代表：--(ch3)基团；或--(c2h5)基团；或与和它们连接的氮原子一起形成选自以下的杂环：在一个特定的实施方案中，r3和r4独立代表：--(ch3)基团；或-(c2h5)基团；或与和它们连接的氮原子一起形成选自以下的杂环：在一个特定的实施方案中，本发明的式(i)化合物为式(ii)，其中：n为1或2；r2代表非键对；并且r3和r4独立代表：--(ch3)基团；或--(c2h5)基团；或与和它们连接的氮原子一起形成选自以下的杂环：在一个特定的实施方案中，本发明的式(i)化合物为式(ii)，其中：n为1或2；r2代表非键对；并且r3和r4独立代表：--(ch3)基团；或--(c2h5)基团；或与和它们所连接的氮原子一起形成选自以下的杂环：本发明的化合物尤其可以选自以下化合物：以及它们的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映异构和非对映异构体，以及它们与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐。在一个特定的实施方案中，根据本发明的用于用途的化合物选自化合物a、b、c、d、f、g、i、j、k、l、m和n，特别选自c、d、f、g、i、j、k、l、m和n，尤其选自c、i、f、k、l、m、n和d，和它们的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映异构和非对映异构形式，以及它们与无机和有机酸或与无机和有机碱的加成盐。更特别地，根据本发明的用于用途的化合物选自化合物c、k、l、m和d，以及它们的互变异构和同分异构形式：外消旋、对映异构和非对映异构形式，以及它们与无机和有机酸或具有无机和有机碱。在一个特定的实施方案中，根据本发明的用于用途的化合物优选为化合物c：根据本发明的用于用途的组合物本发明还涉及用于治疗个体的肿瘤的药物组合物，所述肿瘤选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌，所述组合物在药学上可接受的介质中包含一种或多种如上定义的式(i)化合物作为活性剂。这样的组合物包含有效剂量的至少一种根据本发明的化合物或药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的介质或赋形剂。本领域技术人员可以根据例如所靶向的癌症的性质、待治疗的个体的体重、年龄和病症等来使用和调整宽范围的允许剂量。向个体施用的剂量可以例如为1μg/kg至1g/kg的范围内。剂量可以是单一的或分开的，并且可以根据多种方案来施用，包括每天一次、每天两次、一天三次、或甚至隔天一次、每周一次或每月一次。在这些情况的每一种中，应理解，本文所述的治疗有效量对应于由给药方案确定的式(i)化合物作为活性剂的施用情况或对应于每日、每周、每月或每季度的总剂量。根据所需的药物形式和施用方式，可以从本领域技术人员已知的常规赋形剂中选择药学上可接受的介质或赋形剂。药学上可接受的介质或赋形剂由被认为是安全，并且可以向个体施用而不引起不良的生物学副作用或不良的相互作用的材料组成。药学上可接受的介质及其制剂是本领域技术人员已知的，并且例如描述于remington'spharmaceuticalsciences,(20thedition),ed.a.gennaro,2003,lippincottwilliams&wilkins。本发明的组合物可以在有或没有递送介质的帮助下施用于受试者。用于化合物的合适的递送载体是本领域已知的，并且可以被选择以满足特定的活性剂。例如，在一些实施方案中，可以将本发明的化合物掺入或包封入纳米颗粒、微粒、胶束、合成脂蛋白颗粒或碳纳米管中，或与其结合。合适的单位施用形式包括口服形式如片剂、软或硬凝胶胶囊、粉末、颗粒和口服溶液或混悬液；舌下、颊、气管内、眼内和鼻内施用形式；吸入形式；透皮、皮下、肌内或静脉施用形式；直肠施用形式和植入物。优选将本发明的组合物口服或肠道外向个体施用。在根据本发明的药物组合物中，式(i)化合物可以相同或可以是式(i)的不同化合物的混合物。在本发明的一个实施方案中，组合物还包含一种或几种不同于式(i)化合物的抗癌药物。所述抗癌药物可以选自本领域技术人员已知的任何抗癌药物。说明性地，所述另外的抗癌药可以是对生长因子受体或肿瘤特异性抗原具有特异性的抗体或其抗原结合片段。这样的生长因子受体包括但不限于表皮生长因子受体(egfr；her1)；c-erbb2(her2)；c-erbb3(her3)；c-erbb4(her4)；胰岛素受体；胰岛素样生长因子受体1(igf-1r)；胰岛素样生长因子受体2/甘露糖6-磷酸受体(igf-iir/m-6-p受体)；胰岛素受体相关激酶(irrk)；血小板源性生长因子受体(pdgfr)；集落刺激因子-1受体(csf-1r)(c-fms)；钢受体(c-kit)；flk2/flt3；成纤维细胞生长因子受体1(flg/cekl)；成纤维细胞生长因子受体2(bek/cek3/k-sam)；成纤维细胞生长因子受体3；成纤维细胞生长因子受体4；神经生长因子受体(ngfr)(trka)；bdnf受体(trkb)；nt-3-受体(trkc)；血管内皮生长因子受体1(flt1)；血管内皮生长因子受体2/flk1/kdr；肝细胞生长因子受体(hgf-r/met)；eph；eck；eek；cek4/mek4/hek；cek5；elk/cek6；cek7；sek/cek8；cek9；cek10；hek11；9ror1；ror2；ret；axl；ryk；ddr；和tie。额外的抗癌药还可以被提及为常规的癌症治疗剂，例如化疗剂、免疫治疗剂、趋化因子、冷冻疗法、激素疗法和放射疗法。代表性的化疗剂包括但不限于顺铂、卡铂、奥沙利铂、甲氯乙胺、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、长春新碱、长春碱、长春瑞滨、长春地辛、紫杉醇及其衍生物、伊立替康、托泊替康、氨茶碱、依托泊苷、依托泊苷、依托泊苷、依托泊甙、依托泊苷、曲妥珠单抗西妥昔单抗和利妥昔单抗(或)，贝伐单抗及其组合。在一些实施方案中，根据本发明的组合物还包含不同于根据本发明的式(i)化合物的免疫治疗剂。如本文所用，术语“免疫治疗剂”是指间接或直接增强、刺激或增加机体对癌细胞的免疫反应和/或降低其他抗癌疗法的副作用的化合物、组合物或治疗剂。因此，免疫疗法是直接或间接刺激或增强免疫系统对癌细胞的反应和/或减轻可能由其他抗癌药引起的副作用的疗法。免疫疗法在本领域中也称为免疫治疗、生物治疗、生物反应调节剂疗法和生物疗法。本领域已知的常见免疫治疗剂的实例包括但不限于细胞因子、癌症疫苗、单克隆抗体和非细胞因子佐剂。或者，免疫治疗可包括向受试者施用一定数量的免疫细胞(t细胞、nk、细胞、树突状细胞、b细胞等)。免疫治疗剂可以是非特异性的，即通常增强免疫系统从而使人体在对抗癌细胞的生长和/或扩散方面变得更加有效，或者它们可以是特异性的，即针对癌细胞本身的免疫疗法可结合使用非特异性和特异性免疫治疗剂。非特异性免疫治疗剂是刺激或间接改进免疫系统的物质。非特异性免疫治疗剂已单独被用作为治疗癌症的主要疗法，并且在用作主要疗法外，非特异性免疫治疗剂可作为佐剂发挥作用，以增强其他疗法(例如癌症疫苗)的有效性。非特异性免疫治疗剂也可以在后一种情况下起作用，以减少其他疗法的副作用，例如某些化学治疗剂诱导的骨髓抑制。非特异性免疫治疗剂可以作用于关键的免疫系统细胞并引起继发性反应，例如细胞因子和免疫球蛋白的产生增加。或者，这些试剂本身可以包含细胞因子。非特异性免疫治疗剂通常分类为细胞因子或非细胞因子佐剂。已经发现许多细胞因子作为设计用于增强免疫系统的一般非特异性免疫疗法或作为其他疗法所提供的佐剂用于治疗癌症。合适的细胞因子包括但不限于干扰素、白介素和集落刺激因子。本发明预期的干扰素(ifns)包括常见类型的ifn、ifn-alpha(ifn-α)、ifn-beta(ifn-β)和ifn-gamma(ifn-γ)。ifn可以直接作用于癌细胞，例如，通过减缓其生长、促进其发育为具有更正常行为的细胞和/或增加其抗原产生，从而使癌细胞更易于被免疫系统识别和破坏。ifn还可以例如通过减缓血管生成、增强免疫系统和/或刺激自然杀伤(nk)细胞、t细胞和巨噬细胞而间接作用于癌细胞。重组ifn-alpha可作为罗扰素(rochepharmaceuticals)和内含子a(scheringcorporation)商购获得。本发明预期的白介素包括il-2、il-4、il-11和il-12。可商购获得的重组白介素的实例包括(il-2；chironcorporation)和(il-12；wyethpharmaceuticals)。zymogenetics,inc.(seattle,wash.)目前正在测试il-21的重组形式，其也被预期用于本发明的组合中。本发明预期的集落刺激因子(csf)包括粒细胞集落刺激因子(g-csf或非格司亭)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf或沙格司亭)和促红细胞生成素(阿法依泊汀、达贝泊汀)。用一种或多种生长因子治疗可以帮助刺激经历传统化学疗法的受试者中新血细胞的生成。因此，用csf治疗可有助于减少与化学疗法有关的副作用，并可允许使用更高剂量的化疗剂。多种重组菌落刺激因子可商购获得，例如，(g-csf；amgen)、neulasta(培非格司亭；amgen)、leukine(gm-csf；berlex)、procrit(红细胞生成素；orthobiotech)，epogen(红细胞生成素；amgen)，arnesp(红细胞生成素)。除了具有特异性或非特异性靶标外，免疫治疗剂还可以是活性的，即刺激机体自身的免疫反应，或者可以是被动的，即包含在体外产生的免疫系统组分。被动特异性免疫疗法通常涉及作为癌细胞表面发现的特定抗原或作为特定细胞生长因子的一种或多种单克隆抗体的使用。单克隆抗体可以以多种方式用于治疗癌症，例如，增强受试者对特定类型癌症的免疫反应、通过靶向特定的细胞生长因子(例如与血管生成有关的因子)来干扰癌细胞的生长、或当与试剂(诸如化疗剂、放射性颗粒或毒素)连接或缀合时，通过增强其他抗癌药物向癌细胞的递送来实现。适合包含在本发明组合中的目前用作癌症免疫治疗剂的单克隆抗体包括但不限于利妥昔单抗曲妥珠单抗替伊莫单抗托西妥单抗西妥昔单抗(c-225，)、贝伐单抗吉妥单抗阿仑单抗和bl22。其他实例包括抗ctla4抗体(例如ipilimumab)、抗pd1抗体、抗pdl1抗体、抗timp3抗体、抗lag3抗体、抗b7h3抗体、抗b7h4抗体或抗b7h6抗体。在一些实施方案中，抗体包括消耗b细胞的抗体。典型的消耗b细胞的抗体包括但不限于抗cd20单克隆抗体[例如，利妥昔单抗(roche)、替伊莫单抗(bayerschering)、托西妥单抗(glaxosmithkline)、ame-133v(应用分子进化)、奥瑞珠单抗ocrevus(roche)、奥法木单抗(humax-cd20，gemnab)、tru-015(trubion)和immu-106(immunomedics)]，抗cd22抗体[例如epratuzumab,leonardetal.,clinicalcancerresearch(z004)10:53z7-5334]、抗cd79a抗体、抗cd27抗体或抗cd19抗体(例如u.s.pat.no.7,109,304)、抗baff-r抗体(例如belimumab，glaxosmithkline)、抗april抗体(例如抗人april抗体，prosciinc.)和抗il-6抗体[例如之前由debenedettietal.,jimmunol(2001)166:4334-4340andbysuzukietal.,europjofimmunol(1992)22(8)1989-1993描述]。也可以提及尼古拉单抗(bristol-myerssquibb)、派姆单抗(msdfrance)和伊匹木单抗(bristolmyerssquibbeeig)。免疫治疗可以包括同种异体移植，特别是造血干细胞hsc同种异体移植。免疫治疗还可以在于过继免疫疗法，如nicholasp.restifo，marke.dudley和stevena.rosenberg所描述的adoptiveimmunotherapyforcancer:harnessingthetcellresponse,naturereviewsimmunology,volume12,april2012所描述。在过继免疫疗法中，受试者的循环淋巴细胞、nk细胞在体外被扩增并重新施用于受试者。活化的淋巴细胞或nk细胞最优选是受试者自己的细胞，这些细胞较早从血液或肿瘤样品中分离并在体外活化(或“扩增”)。本发明还涉及一种治疗癌症的方法，包括向有需要的个体施用至少一种如上所述的式(i)化合物，所述癌症特别地选自胰腺癌、肝癌、黑色素瘤、结肠癌、胶质母细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌。本发明还涉及一种治疗癌症的方法，包括向有需要的个体施用至少如上所述的组合物，所述癌症特别地选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、胶质母细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌。本发明还涉及至少一种如上所述的式(i)化合物或如上所述的组合物在治疗个体癌症中的用途，所述癌症特别地选自下组包括胰腺癌、肝癌、黑色素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌。本发明还涉及至少一种如上所述的式(i)化合物或如上所述的组合物在制备用于治疗个体癌症的药物中的用途，所述癌症为特别地选自胰腺癌、肝癌、黑素瘤、结肠癌、成胶质细胞瘤、骨肉瘤、前列腺癌和乳腺癌。具体实施方式根据本发明化合物的合成将2-(三氟甲基)-10h-吩噻嗪(上图中的化合物1,204mg)、1,3-二溴丙烷(0.4ml)和cs2co3(150mg)溶于二甲基甲酰胺(dmf)(1.6ml)中并在65℃下搅拌12小时。反应完成后，除去溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯，并用盐水洗涤。合并的有机层经na2so4干燥，过滤并减压浓缩以得到粗产物，其通过柱色谱法进一步纯化以得到化合物2(96mg，31.8％)。然后，将化合物2和哌嗪(或其他哌嗪类似物)溶于dmf中并在25℃下搅拌过夜。反应完成后，除去溶剂，将残余物通过柱色谱法纯化以得到三氟哌嗪衍生的化合物。化合物a和c的产率分别例如为77％和64％。为了获得本发明化合物的盐，然后将化合物在25℃下完全溶于ch2cl2中。将无水hcl鼓泡通过溶液5分钟。然后除去溶剂，并通过柱色谱法纯化残余物，以99％的收率得到本发明化合物的盐酸盐。本发明化合物的生物物理和生化特性使用三部分方法：(a)荧光研究：遵循两部分策略：i/在不存在和存在化合物的情况下获得nupr1(仅包含两个tyr残基)的固有荧光光谱；和ii/当在溶液中和存在化合物的情况下分离nupr1时，获取探针ans(8-苯胺基萘-1-磺酸)的荧光光谱。在这两种策略中，都监测了nupr1中两个tyr残基附近的环境是否发生了变化，或者在存在任何药物的情况下，分配ans的nupr1囊袋附近的环境是否发生了变化。结果表明：i/在任何化合物存在下，nupr1的tyr30和tyr36附近区域发生变化；并且ii/在化合物存在下，ans荧光也发生变化。因此，可以得出结论，nupr1与任何化合物都存在结合，并且结合发生在序列的30s区域附近，并改变了nupr1的溶剂暴露的疏水性囊袋。实验在25℃和ph7.4下进行。(b)nmr研究：一旦通过光谱确定nupr1和本发明化合物之间存在结合，我们的目标是确定nupr1结合区域是否对于它们都相同。用15n标记的nupr1进行2d1h-15n-hsqcnmr实验，所有化合物的交叉峰化学位移没有变化，但结合后其强度发生变化。所有化合物都影响一组相似残基的信号：那些在20s附近的残基和在蛋白c末端区域的残基。在ph4.5和25℃下进行实验，以减少酰胺质子的溶剂交换。(c)itc研究：通过等温滴定热量法(结合亲和力测定中的金标准技术)评估了不同化合物的靶标结合，从而允许nupr1化合物的相互作用的热力学表征。用等温滴定热法研究了本发明化合物与nupr1之间的相互作用，并在25℃下测定了结合的亲和力、焓和化学计量。在autoitc200(microcal，malverninstruments)中进行滴定。用位于注射器中的相应化合物的溶液(20μm，在20mmph7.0的磷酸钠中，1％dmso)滴定量热池中的nupr1溶液(20μm，在20mmph7.0的磷酸钠中，1％dmso)。由于化合物最初作为浓缩母液(约10mm)溶于纯dmso中，因此最终溶液中会残留dmso的残余百分比。已经证明，通常低百分比(1-3％)的dmso不会干扰蛋白质-配体相互作用。使用标准方案：以150s的间隔、750rpm的搅拌速度和10μcal/s的参考功率对19个2μl的滴定液注射剂进行编程。通过结合与每个配体注射剂相关的单个热效应，从热谱图(热功率作为时间的函数)中获得结合等温线(与摩尔比有关的配体归一化的热量)。采用考虑了nupr1中单个结合位点的模型的非线性最小二乘回归分析允许估算结合参数：解离常数、结合焓和化学计量。所有化合物均显示出低微摩尔范围内的解离常数(化合物a的kd：11μm；化合物b的kd：7.1μm)。但是，化合物c是更强的结合剂，其解离常数接近2μm(kd为2.1μm)。本发明化合物的生物学表征然后研究化合物a、b和c对四种特征明确的原发性胰腺癌衍生细胞02.063和lipc(基础亚型)、foie8b(源自肝转移)和hn14(经典亚型)的体外生物学效应。在96孔板中，随着从0到100μm的化合物浓度的增加，筛选细胞对这些化合物的化学敏感性72小时。将三氟拉嗪用作参考化合物。每个实验一式三份进行并且重复至少三次。添加prestoblue细胞活力试剂(lifetechnologies)3小时后，估计细胞活力。用所有这些化合物处理02.063、lipc、foie8b和hn14细胞显示，化合物a和化合物b诱导的细胞死亡接近三氟拉嗪诱导的细胞死亡；而使用化合物c的处理效率比使用三氟拉嗪的效率高约10倍(见图1)。总之，这些数据强烈表明：i/这些化合物的作用似乎与胰腺癌细胞的亚型无关；ii/化合物c是杀死胰腺癌细胞的最有效化合物；和iii/化合物a和b与三氟拉嗪具有相似的亲和力。因为化合物c是体外最有效的，所以选择该化合物来处理异种移植了02.063细胞的小鼠。在nmri-nude8周龄小鼠中皮下接种02.063细胞(15×106个细胞)。当肿瘤达到200mm3时(注射后1周左右)，用5mg/kg的化合物c开始每日处理30天，并且对照组接受等体积的介质溶液(对照组中有6只小鼠，用化合物c处理6只小鼠)。如所预期，对照小鼠中肿瘤体积以指数方式增加。相反，当用化合物c处理小鼠时，肿瘤几乎立即停止生长，并且令人惊讶的是，在处理20天后，肿瘤尺寸逐渐减小直至几乎消失(见图2)。用三氟拉嗪进行类似的实验(数据未显示)。与同期对照相比，使用三氟拉嗪的最低剂量，肿瘤体积仅增加50％，而在较高剂量下，肿瘤的生长快速停止且几乎完全停止。然而，渐增的三氟拉嗪的剂量对治疗小鼠产生神经系统作用比如昏睡。尽管作为抗癌剂相对有效，但在小鼠中发现的神经系统影响使三氟拉嗪在临床上无法使用。相反，用化合物c处理没有表现出任何明显的神经系统作用，包括在10mg/kg的慢性处理中。化合物c在其他肿瘤中起抗肿瘤剂的作用还通过用递增浓度的该化合物处理源自不同肿瘤的细胞系来评估化合物c的作用。所应用的方案与上述针对细胞系02-063、hn14、lipc和foie8b的方案相同。对细胞如u87(胶质母细胞瘤)、a375和b16(黑素瘤)、u2os和saos(骨肉瘤)、ht29、sk-co-1和ls174t(结肠癌)、hepg2(肝癌)、pc3(前列腺)和mda-mb-231(乳腺癌)的评估证明化合物c有效杀死肿瘤细胞，其中ic50范围从0.25μm(hepg2细胞)到14.12μm(mda-mb-231)，如图3所示。下表2列出了获得的ic50值。肿瘤类型ic50值(μm)u874,877a-3752,137u-2os5,173ht-293,063b161,452hepg20,254pc36,667saos-27,745sk-co-14,466mda-mb-23114,120ls174t10,910本发明化合物的其他生物学表征研究了化合物c、i、f、k、l、m、n、d、g和j对十种特征明确的原发性胰腺癌衍生细胞的体外生物学效应：miapaca-2(经典亚型)、anor(经典子类型)、aoipc(基本子类型)、02-136(基本子类型)、01-046(经典子类型)、nh01(经典子类型)、lipc(基本子类型)、hn14(经典子类型)、01-008(基本子类型)和foie8b(源自肝转移)。适用的方案与先前指出的方案相同，即：在96孔板中，随着从0到100μm的化合物浓度的增加，筛选细胞对这些化合物的化学敏感性72小时。每个实验一式三份进行并且重复至少三遍。添加prestoblue细胞活力试剂(lifetechnologies)3小时后，估计细胞活力。获得的结果如图4所示。用所有这些化合物处理miapaca-2、anor、aoipc、02-136、01-046、nh01、lipc、hn14、01-008和foie8b细胞表明它们都能够诱导细胞死亡。化合物c、i、f、k、l、m、n和d，特别是化合物c、k、l、m和d，对于诱导不同癌细胞系中的细胞死亡特别有效(低ic50)。当前第1页12