治疗炎症性疾病的蛋白质的制作方法

该申请对2018年9月16日提交的第201821009667号印度临时专利申请的权益进行了声明，其全部内容通过引用包含在本文中。

【技术领域】

本发明是关于一种凝集素蛋白，特别是一种使用凝集素蛋白预防、治疗和治愈炎症，包括炎症性疾病。

背景技术：

炎症通过触发多因子化学信号网络来保护受伤组织免受进一步感染，从而启动愈合过程。这一个过程涉及到重要血细胞(中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞)的激活和向受损部位迁移。细胞(巨噬细胞、肥大细胞、内皮细胞和许旺细胞)会分泌细胞因子和特异生长因子，促进神经再生,最终重建正常微环境。

与伤口愈合相关的炎症(正常炎症)通常是自限性炎症；但任何汇聚因子调节失调都可能引发异常，最终导致出现以急性或慢性炎症为特征的病机。慢性炎症是一种长期炎症，可持续数月，甚至数年，而急性炎症则是发病快并且在短时间内会变得严重的炎症。慢性炎症包括牛皮癣/牛皮癣性关节炎、类风湿性关节炎(ra)、活动性肝炎、哮喘、炎症性肠病等，需要及时做好管理和治疗。慢性炎症引起的损伤是不可逆的，并且非常痛苦。

目前用于治疗某些炎症性疾病的药物因疾病类型而异。常用药物包括：

镇痛药可帮助减轻疼痛，但对炎症没有疗效。例如：对乙酰氨基酚(泰诺，其他)、曲马多(盐酸曲马多片剂、ultracet、其他)和含有羟考酮(percocet、oxycontin、其他)或氢考酮(norco、vicoprofen、其他)的麻醉剂。非甾体类抗炎药(nsaid)可减轻疼痛和炎症。非甾体类抗炎药包括布洛芬(艾德维尔、motrinib、其他)和萘普生钠(aleve)。一些抗刺激的乳膏和软膏含有薄荷醇或辣椒碱。缓解疾病的抗风湿类药物(dmard)常用于治疗类风湿性关节炎。dmard可减缓或阻止免疫系统攻击关节。例子包括甲氨蝶呤(trexall)和羟氯喹(plaquenil)。一种dmard新亚类-“iak抑制剂”-可阻断与机体免疫反应有关的lanus激酶或iak通路。托法替尼就属于此类药物。与生物类药物不同的是，它可以通过口服吸收。生物反应调节剂通常与dmard联合使用，是针对参与免疫反应的各种蛋白质分子的基因工程药物。这类药物属于b/t细胞抑制剂，选择性共刺激调节剂。例子包括依那西普(enbrel)、赛妥珠单抗(cimzia)、利妥昔单抗(rituxan)和英夫利昔单抗(remicade)。皮质类固醇，如强的松和可的松，可减轻炎症和抑制免疫系统。

服用药物的同时，可以进行治疗(物理、冷热治疗)、减肥、使用护具、运动、tens和进行手术。但上述每种药物都有其自身的副作用。因此，可选择生物药物。这些药物是dmard的一个子集。生物药物可能比传统的dmard起效快，并且通过注射或输液给药。原因是其针对的是炎症过程中的特定阶段，它不会像其他一些炎症疾病治疗那样消除整个免疫反应。在许多炎症性疾病患者中，生物制剂可以减缓、改变或阻止疾病的发生--甚至在其他治疗没有多大帮助时。今天，批准用于治疗炎症性疾病的生物药物非常少。原因是其价格高，并且由于产量较低、需求大，因此很难买得到。因此，存在这样一种未被满足的需求，即提供一种炎症性疾病治疗方案-该方案针对其作用具有高特异性、价格低廉、并能有效地满足市场需求。

技术实现要素：

因此，本发明的目的是提供具有高特异性且有效的生物制剂，用于治疗炎症性疾病。

本发明的另一目的是提供一种经济、有效的方法治疗炎症性疾病。

本发明的另一目的是提供用于治疗炎症性疾病的重组蛋白。

本发明的另一目的是提供一种采用重组蛋白治疗炎症性疾病的方法。

本发明的另一个目的是提供一种在患有炎症性疾病的受试者中治愈或降低炎症性疾病影响的方法。

根据本发明的第一方面，提供了一种用于治疗或预防受试者炎症的凝集素蛋白。

凝集素是一种高特异性糖结合蛋白，是对其他分子的糖基具有高特异性的高分子。凝集素在细胞和分子水平上进行识别，并在涉及细胞、碳水化合物和蛋白质的生物识别现象中发挥许多不同的作用。凝集素为二价或多价糖结合蛋白，能够结合和沉淀糖蛋白并凝集红细胞。在动物体内发现的凝集素通常有助于细胞相互作用，而植物凝集素则能够抵御潜在捕食者或病原体。

纯化凝集素在临床上具有重要作用，它可用于血型鉴定。个体红细胞上的一些糖脂和糖蛋白可以通过凝集素来识别。许多凝集素被用作早期检测恶性赘生物的生物标记或自噬诱导剂，而其他凝集素也显示出通过凋亡抑制癌细胞扩散的能力。由于细胞增殖不受调节，一些碳水化合物部分在癌细胞上以抗原的形式表达。凝集素在癌症治疗中用作药物载体，因为它们能够与恶性肿瘤特异性结合。此外，由于凝集素还能够调节癌症相关通路，因此它们可以用作癌症诊断和治疗药物。

凝集素能够与多种抗原结合，抗原已在癌细胞表面进行表征；大多数抗原某种癌症具有特异性，凝集素与这些抗原结合可以通过诱导癌细胞凋亡来抑制癌细胞扩散。目前，大多数市场上可买到的凝集素来自植物和其他真核生物。

齐整小核菌凝集素(srl)是从土生植物病原真菌齐整小核菌的菌核体中分离出来的。srl已被证实可与人结肠癌、卵巢癌和白血病细胞结合。

令人惊奇的是，本发明人现已发现凝集素在治疗炎症中有一定作用。

根据本发明的第二方面，提供了一种由凝集素蛋白和药用稀释剂或辅料组成的药物组合物。

根据本发明的第三方面，提供了一种治疗或预防受试者炎症的方法，该方法包括给受试者施用凝集素或本发明第二方面所述的药物组合物。

凝集素可能包含与seqidno：1具有至少60％同源性的氨基酸序列。凝集素可能包含与seqidno：2、3或4具有至少60％同源性的氨基酸序列。在一个实施例中，凝集素包含与seqidno.1具有至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源性的氨基酸序列。在一些实施例中，凝集素包含seqidno：1、2、3或4氨基酸序列。凝集素可以是重组凝集素。

另一方面，本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白治疗炎症性疾病的方法。

本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白治疗受试者炎症性疾病。

另一方面，本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白预防受试者炎症性疾病，或控制其发病或发展的方法。

本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白治愈或降低受试者炎症性疾病影响的方法。

本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白治愈受试者炎症性疾病、防止其发展或降低其影响。

另一方面，本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白治疗受试者关节炎的方法。

本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白治疗受试者关节炎。

另一方面，本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白预防受试者关节炎，或控制其发病或发展的方法。

本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白治愈或降低受试者关节炎影响的方法。

本发明还涉及使用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白治愈受试者关节炎、防止其发展或降低其影响。

本发明还涉及治疗炎症性疾病的方法。方法包括施用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白。凝集素蛋白施用量为受试者每千克体重施用约1mg至50mg。凝集素蛋白也可按药学上可接受的方式施用。

具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素蛋白或与seqidno：1具有至少60％同源性的凝集素蛋白可通过静脉注射、肌肉注射、腹膜内注射、皮下注射、皮内注射、积存注射、鞘内注射、透皮注射熔液或悬浮液、舌下给药或口服、局部或通过吸入法进行给药。

【附图说明】

图1：采用eps诱导细胞因子释放小鼠模型体内研究重组凝集素对炎性细胞因子的抑制作用；

图2：采用佐剂性关节炎(aia)大鼠模型研究重组凝集素对足肿胀的作用；

图3：采用佐剂性关节炎(aia)大鼠模型研究重组凝集素对骨破坏的作用；

图4：采用佐剂性关节炎(aia)大鼠模型研究重组凝集素对crp水平和il-6的抑制作用；

表1：24小时后重组凝集素对人体滑膜细胞系(w982)中细胞因子分泌的作用；

表2：48小时后重组凝集素对小鼠脾细胞中细胞因子分泌的作用；

表3：24小时后seqidno：2对小鼠巨噬细胞系(raw264.7)中细胞因子分泌的作用；以及

表4：5天后seqidno：2对成骨细胞系(mg-63)中alp活性和胶原水平的作用。

【具体实施方式】

本文所用术语“凝集素”是指糖结合蛋白。

本文所用术语“蛋白质”是指氨基酸残基聚合物。

本文所用术语“氨基酸”是指天然的和合成的氨基酸，以及具有类似于天然氨基酸功能的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然氨基酸系指由遗传密码编码的氨基酸，包括蛋白氨基酸(即在细胞内翻译过程中通过生物合成结合到蛋白质中的氨基酸)。天然氨基酸也包括那些在细胞中转译后改性的氨基酸。合成氨基酸包括非经典氨基酸，如硒代半胱氨酸和吡咯赖氨酸。通常，合成氨基酸并非蛋白氨基酸。

据了解，氨基酸可以按不同的生化特性进行分组。例如：极性氨基酸、非极性氨基酸、酸性氨基酸和碱性氨基酸。在一个实施例中，用于氨基酸修饰的氨基酸选自但不限于以下组的至少一种：极性、非极性、酸性、碱性、硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸和非经典氨基酸。

本文所用术语“同源性”或“同源”是指在指定区域或部分上共享至少部分一致性的两个或多个参照实体。同源或一致性的区域或领域是指共享同源或相同的两个或多个参照实体的一部分。因此，当两个序列在一个或多个序列区域上完全相同时，它们在这些区域中共享一致性。实质同源性是指在结构或功能上保守的分子，其具有或预测具有标准分子的一个或多个结构或功能(例如，生物功能或活性)的至少部分结构或功能，或与之同源的标准分子的相关/对应区域或部分。

在一个实施例中，通过blastp算法，使用默认参数确定两个序列之间的“同源性”百分比(altschul等人，《核酸研究杂志》，1997年9月1日；25(17)：3389-402)可以通过以下网址查看blast算法：https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi.另一个实施例中，根据embossneedle算法，采用默认参数来确定两个序列之间的同源性百分比，以便开展序列全局比对。可以通过以下网址查看emboss算法：https://www.ebi.ac.uk/tools/psa/emboss_needle/。

除非另有说明，否则术语“同源性”可与本说明书中的术语“序列一致性”互换使用。

发炎的典型症状包括身体上出现肿胀、发红、发热斑块。但也可以在没有任何明显症状的情况下出现炎症。可通过测量高敏c-反应蛋白和白细胞计数来检测炎症。这些指标可以通过血液测试来测量。

c-反应蛋白(crp)是血液中的一种蛋白质，是检测炎症的最佳指标之一，随着炎症的加重，c-反应蛋白的水平也随之升高。在一些实施例中，“炎症”一词系指受试者血液中内的c-反应蛋白浓度至少为1.0mg/l、至少3.0mg/l、或至少10.0mg/l。

白细胞计数高也可表明出现了感染、应激、炎症、创伤、过敏、或某些疾病。

成人白细胞计数的正常范围一般为每毫升血液4,000-10,500个细胞。高于10,500一般认为是数量较高。在一些实施例中，“炎症”一词系指受试者的白细胞计数为每毫升有至少10,500个细胞。

胰岛素是一种由胰腺产生并储存在胰腺中的激素，可帮助调节血糖水平。胰岛素抵抗系指对胰岛素作用的反应能力下降。因此，身体中产生额外数量的胰岛素，会加快体内的炎症过程。临床范围为2.6-24.9μiu/ml；最佳范围为1.0-5.0μiu/ml。

在一些实施例中，“炎症”一词系指受试者的胰岛素水平至少为5.0μiu/ml或至少24.9μiu/ml。

血红蛋白a1c(hbalc)指的是过去3个月(红细胞寿命为3个月)血液中葡萄糖(或血糖)的平均量。血红蛋白ale(或糖化血红蛋白)是在葡萄糖附着于血红蛋白(红细胞中携带氧气的蛋白质)上时在血液中形成的。血液中的葡萄糖水平越高，所形成的糖化血红蛋白越多。血糖水平居高不下，与酶和其他蛋白质分子发生反应，产生晚期糖基化终产物(age)。晚期糖基化终产物具有较高的炎症性，会损害全身的组织。最终会出现糖尿病常见的神经和心血管并发症。临床范围为4.8％-5.6％；最佳范围为4.5％-5.2％。血红蛋白a1c水平通常以糖化血红蛋白相对于未糖化血红蛋白的比例或作为无量纲单位来测量。

在一些实施例中，“炎症”一词系指受试者的血红蛋白a1c水平至少为5.2％或至少5.6％。

铁蛋白是一种储存铁的血细胞蛋白。铁蛋白水平较低说明铁缺乏，铁缺乏会导致贫血，即红细胞数量减少。与c-反应蛋白一样，铁蛋白也是急性期反应蛋白。这使得铁蛋白检测在检测慢性疾病过程方面很有用。铁蛋白水平升高说明出现炎症。临床范围：30-400ng/ml；最适范围为女性10-300ng/ml和男性23-336ng/ml。

在一些实施例中，“炎症”一词系指受试者的铁蛋白水平至少为200ng/ml、至少300ng/ml或至少336ng/ml。

红细胞分布宽度(rdw)是检测体内炎症的极佳方法。红细胞分布宽度是确定各种原因和血流感染引起的死亡风险的“可靠预测指标”。红细胞分布宽度反映了整体的炎症和氧化应激情况。红细胞分布宽度是构成个体红细胞总数的红细胞大小变化的一种表达。血管的大小与血细胞的成熟有很大关系，取决于甲基化剂，如叶酸和b12。临床范围为12.3-15.4％；最佳范围为11.6-15％。

在一些实施例中，“炎症”一词系指受试者的红细胞分布宽度至少为15％或至少15.1％。

类风湿因子是一种抗体，对血液成分丙种球蛋白起作用。临床范围为20iu/ml或更高；最佳范围为0-20iu/ml。

在一些实施例中，“炎症”一词系指受试者的类风湿因子水平至少为20iu/ml。

作为炎症反应的一部分，t细胞和巨噬细胞均分泌il-6，因此受试者体内il-6升高说明出现全身炎症。

伴生序列简要说明

·seqidno：1：表示天然齐整小核菌凝集素氨基酸序列。

·seqidno：2：表示齐整小核菌凝集素氨基酸序列的变体(在wo2010/095143中报告称为rec-2)。

·seqidno：3：表示齐整小核菌凝集素氨基酸序列的变体(在wo2010/095143中报告称为rec-3)。

·seqidno：4：表示齐整小核菌凝集素氨基酸序列的变体(在wo2014/203261中报告)。

seqidno：1序列如下：

tykitvrvyqtnpnaffhpvektvwkyanggtwtitddqhvltmggsgtsgtlrfhadngesftatfgvhnykrwcdivtnlaadetgmvinqqyysqknreearerqlsnyevknakgrnfeivyteaegndlhanliig

seqidno：2序列如下：

tykitvrvyqtnpdaffhpvektvwkyanggtwtitddqhvltmggsgtsgtlrfhadngesftatfgvhnykrwcdivtnlaadetgmvinqqyysqknreearerqlsnyqvknakgrnfqivyteaegndfhanliig

seqidno：3序列如下：

vykitvrvyqtnpdaffhpvektvwkyanggtwsitddqhvltmggsgtsgtlrfhadngesftatfgvhnykrwcdivtnlaadetgmvinqqyysqknreearerqlsnyqvknakgrnfqivyteaegndlhanliig

seqidno：4序列如下：

vykitvrvyqtnpdaffhpvektvwkyadggtwsitddqhvftmggsgtsgtlrfhadngesftatfgvhdykrwcdivtdlaadetgmvenqeyysekdreearerqnsnyevkdakgrnfeivyteafgndfhadliig

seqidno：2-4序列与seqidno：1序列之间的差异已用下划线标注。

本发明介绍了一种用于对需要用药的受试者炎症进行治疗或预防的凝集素。

凝集素可以是天然凝集素。在本发明的一个实施例中，凝集素来源于(但不限于)真菌和植物。在一些实施例中，凝集素来源于土生植物病原真菌，如齐整小核菌。从“来源于”一词可以看出，凝集素可能是从其天然环境中分离出来的，或者包含与天然序列相同或相似的氨基酸序列。凝集素可能包含与其天然序列具有至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源性的氨基酸序列。凝集素可以从齐整小核菌中分离出来。

凝集素可能包含与seqidno：1具有至少60％同源性的氨基酸序列。在一些实施例中，凝集素可能包含与seqidno：2、3或4具有至少60％同源性的氨基酸序列。在一些实施例中，氨基酸序列与seqidno：1具有至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源性。在一些实施例中，氨基酸序列与seqidno：2、3或4具有至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源性。

seqidno：2与seqidno：1具有98％同源性。seqidno：3与seqidno：1具有96％同源性。seqidno：4与seqidno：1具有91％同源性。

在一些实施例中，凝集素包含从seqidno：2、seqidno：3或seqidno：4中选择的氨基酸序列。

凝集素可以是重组凝集素，或者可以从头合成。在本说明书中，术语“重组”是指将凝集素基因转入宿主细胞(如细菌或酵母)，然后表达该基因产生凝集素。重组蛋白的制备方法对于技术熟练的人来说比较熟悉。例如，可以提供包含编码凝集素核酸序列的重组dna分子，如质粒或病毒载体。该核酸序列可以有效连接能够在合适的宿主细胞中控制凝集素表达的启动子。重组dna分子可以采用现有技术中已知的方法插入合适的宿主细胞中，例如通过转化插入。合适的宿主细胞包括原核细胞(如大肠杆菌)以及低等真核细胞(如酵母细胞)和高等真核细胞。宿主细胞可以在重组凝集素进行表达的适当条件下培养。然后可以从宿主细胞中通过分离获得重组凝集素作为表达产物。重组蛋白可以采用现有技术中已知的传统技术(特别是传统色谱法)进行纯化。

凝集素可以具有至少一种抗炎活性。

在一些实施例中，凝集素能够抑制或减少炎性细胞因子的分泌。

在现有技术中已知的是，细胞因子是参与细胞信号传导的小分子蛋白质。细胞因子包括趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子和肿瘤坏死因子(tnf)。本文所使用的“白介素”(il)包括il-1、il-2、il-6、il-8、il-10、il-12、il-13、il-15、il-17、il-18、il-1β、il-17a、il-17f、il-22、il-26、il-23、il-20和il-15。

凝集素可以抑制或减少从il-8、il-6、tnf-α、il-l-β、ifn-γ和gm-csf中选择的一种或多种炎性细胞因子的分泌。

凝集素抑制或减少炎性细胞因子分泌的能力可以采用标准技术来测定，包括本文所述的方法。例如，可以确定有凝集素的情况下在炎症刺激(如由ifn-γ或lps引起)后分泌的炎性细胞因子水平，并与无凝集素的情况下在炎症刺激后分泌的炎性细胞因子水平进行比较。细胞培养上清液(用于体外研究)或血清样本(用于体内研究)等样本中的细胞因子水平可以采用elisa等标准技术来测定。

在一些实施例中，凝集素能够将炎性细胞因子的分泌减少5-50％、10-40％、15-35％或20-30％。

在一些实施例中，凝集素能够降低血液中的c-反应蛋白(crp)水平。血液中的crp水平可以采用本文所述的标准技术来测定。例如，与未施用凝集素的对照组受试者相比，凝集素可以使受试者(每千克体重施用10mg凝集素)血液中的crp水平降低至少2％、至少5％或至少10％。

在一些实施例中，凝集素能够刺激(即增加)碱性磷酸酶(alp)活性和/或胶原水平。alp水平(例如细胞裂解物中)可以通过已知的测定法来测定，如对硝基苯磷酸盐(pnpp)法。胶原水平(例如细胞裂解物中)也可以通过已知的测定法来测定，如sircoll染色法。与未使用凝集素处理的适当对照组相比，凝集素可以使alp活性水平增加5-50％或10-40％。与未使用凝集素处理的适当对照组相比，凝集素可以使胶原水平增加2-50％或3-40％。

本文所使用的“炎症”一词是指受试者任何类型的炎症免疫反应。炎症可能与慢性炎症性疾病有关，也可能是急性炎症。

慢性炎症是一种长期炎症，可持续数月，甚至数年，而急性炎症则是发病快并且在短时间内会变得严重的炎症。慢性炎症包括牛皮癣/牛皮癣性关节炎、类风湿性关节炎(ra)、活动性肝炎、哮喘、炎症性肠病等，需要及时做好管理和治疗。慢性炎症引起的损伤是不可逆的，并且非常痛苦。

术语“慢性炎症”和“慢性炎症性疾病”在本文中可互换使用。

在一些实施例中，受试者患有慢性炎症性疾病。凝集素蛋白有利于受试者慢性炎症性疾病的治疗或预防。

慢性炎症性疾病可以是牛皮癣、牛皮癣性关节炎、类风湿性关节炎(ra)、肝炎、哮喘、炎症性肠病(包括克罗恩氏病、结肠炎和肠易激综合征(ibs))、颞动脉炎、特应性皮炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化或结节病。

在一些实施例中，慢性炎症性疾病是类风湿性关节炎(ra)。

类风湿性关节炎可以通过以下因子来测量或诊断。

抗核抗体(ana)-ana(抗细胞核的异常抗体)常见于红斑狼疮患者的血液中，也可以表明有多肌炎、硬皮病、干燥综合征、混合性结缔组织病或类风湿性关节炎。可通过检测这些抗体特定亚群的试验确认对特定疾病或关节炎类型的诊断。

在一些实施例中，如果受试者的抗核抗体水平达到了可检出的程度，则认为其患有类风湿性关节炎。

类风湿因子(rf)-该试验设计用于检测和测量抗血液成分丙种球蛋白的抗体水平，通常对类风湿性关节炎患者有积极作用。如果类风湿因子水平达到20iu/ml或更高，则认为患有类风湿性关节炎。

在一些实施例中，如果受试者的类风湿因子水平达到了至少20iu/ml，则认为其患有类风湿性关节炎。

抗环瓜氨酸肽(抗ccp)-也被称为抗瓜氨酸蛋白抗体(agfa)，该试验(类似于类风湿因子试验)检测是否存在一种特定的自身抗体，这种抗体存在于约60-80％的类风湿性关节炎患者中。虽然大多数具有抗ccp抗体的患者对类风湿因子也有积极作用，但rf抗体可以存在于许多其他情况(包括感染)的患者中。抗ccp对类风湿性关节炎具有更高的特异性，因此目前正成为首选试验。

在一些实施例中，如果受试者的抗瓜氨酸蛋白抗体可检出水平高于每毫升20单位(u/ml)，则认为其患有类风湿性关节炎。

尿酸-通过测量血液中的尿酸水平，该试验有助于痛风诊断，痛风是指过量尿酸结晶并在关节和其他组织形成沉积物，导致炎症和严重疼痛。女性和男性正常尿酸水平分别为2.4-6.0mg/dl和3.4-7.0mg/dl。

在一些实施例中，如果受试者的尿酸水平达到了至少6.0mg/dl或至少7.0mg/dl，则认为其患有类风湿性关节炎。

hla组织配型-该试验检测血液中是否存在某些遗传标记，通常可以确诊强直性脊柱炎(一种涉及脊柱和骶髂关节炎症的疾病)或反应性关节炎(一种涉及尿道、眼睛和关节炎症的疾病)。遗传标记hla-b27往往存在于患有这类疾病的患者中。

在一些实施例中，如果受试者有遗传标记hla-b27，则认为其患有类风湿性关节炎。

红细胞沉降率-也称为esr或“血沉”，该试验测量红细胞在一小时内于玻璃管底部附着在一起、下落和沉降(类似于沉淀物)的速率。血沉越高，炎症越严重。通过红细胞在一小时内从试管下落的距离测量血沉。女性和男性的血沉正常范围分别为0-29mm/h和0-20mm/h。有很多情况会导致esr升高，包括感染或贫血。

在一些实施例中，如果受试者的红细胞沉降率达到了至少20mm/h，则认为其患有类风湿性关节炎。

c-反应蛋白-该试验也称为crp，是测量全身炎症的另一项血液检查指标。该试验测量肝脏产生的一种物质，这种物质在有炎症时会增加。

在一些实施例中，如果受试者血液中的c-反应蛋白浓度达到了至少1.0mg/l、至少3.0mg/l、或至少10.0mg/l，则认为其患有类风湿性关节炎。

莱姆病血清学诊断-通过该试验可检测对引起莱姆病的感染因子的免疫反应，因此可用于莱姆病确诊。

在一些实施例中，受试者患有急性炎症。凝集素蛋白有利于受试者急性炎症的治疗或预防。

急性炎症可能是由过敏反应、暴露于化学物质或辐射、感染或创伤引起的。感染可能是细菌性、病毒性、真菌性或寄生虫感染。

可以理解为“治疗”一词包括实质上治愈(即消除)炎症或潜在慢性炎症性疾病，或减轻(永久或暂时)与炎症有关的症状。这些症状可能包括肿胀、疼痛、瘙痒、发热、发红(如皮肤)、功能丧失(如关节或四肢)和呼吸困难。

可以理解为“预防”一词可能包括预防炎症的发生，或预防或减缓炎症或潜在慢性炎症性疾病的发展。

治疗或预防可能包括将治疗上有效剂量的凝集素施用于受试者。在一些实施例中，按照0.1-1,000mg/kg、0.5-100mg/kg或1-50mg/kg的剂量施用凝集素。根据所治疗的疾病和受试者的情况，技术人员需能够确定凝集素的施用剂量。

本发明还提供了一种由凝集素蛋白和药用稀释剂或辅料组成的药物组合物。示例性稀释剂和辅料包括无菌水、生理盐水和/或药用缓冲液。

本发明进一步提供了一种治疗或预防受试者炎症的方法，该方法包括给受试者施用凝集素或本文所述的药物组合物。

可通过任何合适的方式施用凝集素或组合物，包括但不限于注射(包括静脉注射(大剂量注射或输液)、动脉注射、腹腔注射、皮下注射(大剂量注射或输液)、心室注射、肌肉注射或蛛网膜下注射)、口服(如片剂、凝胶、糖锭或口服液)、吸入、通过黏膜局部注射(如口腔黏膜、鼻黏膜或直肠黏膜)、以喷雾剂、片剂、皮肤药贴、皮下植入或栓剂的形式给药。

在一些实施例中，凝集素(如具有seqidno：1、2、3或4氨基酸序列的凝集素)或本文所述的药物组合物通过肠道内、肠道外或局部注射的方式向受试者施用。凝集素或药物组合物可以固体(如片剂或胶囊)、冻干粉、液体(如溶液或悬浮液)、半固体或技术熟练人员所知的任何其他形式的剂型施用。凝集素或药物组合物可通过静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射或皮内注射溶液或悬浊液，积存注射，或鞘内注射、经皮注射、舌下给药，或通过口服、局部注射或吸入的方式向受试者施用。

受试者可以是哺乳动物。在一些实施例中，受试者是人类。尤其是患有或寻求预防炎症或炎症性疾病的人类受试者。

炎症性疾病是由免疫系统损害引起的疾病。炎症性疾病可能是慢性炎症性疾病或急性炎症性疾病。炎症性疾病包括关节炎、牛皮癣、颞动脉炎、皮炎、炎症性肠病(ibs)、系统性红斑狼疮、肝炎、哮喘、过敏反应、结节病以及该领域技术人员所了解的类似疾病。

在炎症发病机制中发挥重要作用的主要信号传导途径有mapk/egfr/ras/raf、大麻素受体2(cnr2)、il-4/stat、pi3k/akt/foxo3、tnf-α/jnk、nlrp3和nlrp1、ptpn22、padi4、stat4、traf1-c5和tnfaip3、myd88、iraks和traf6。

本发明涉及利用凝集素(如具有seqidno：1、2、3或4氨基酸序列的凝集素)治疗炎症性疾病。本发明还涉及利用凝集素(如具有seqidno：1、2、3或4氨基酸序列的凝集素)预防受试者炎症性疾病，控制其发病或发展的方法。本发明进一步涉及利用凝集素(如具有seqidno：1、2、3或4氨基酸序列的凝集素)治愈受试者炎症性疾病或减轻受试者炎症性疾病影响的方法。

本发明涉及利用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素或其同系物治疗关节炎的方法。本发明进一步涉及治疗受试者关节炎使用的具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素或其同系物。本发明还介绍了利用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素或其同系物预防受试者关节炎的发生或进展的方法。本发明进一步涉及利用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素或其同系物治愈受试者关节炎或减轻受试者关节炎影响的方法。

申请人先前的专利申请(350/mum/2009)公开了一种具有seqidno：1氨基酸序列的重组凝集素，该凝集素对糖类抗原(galβ1-3galnac-α-o-ser/thr)具有较高的结合特异性。众所周知，凝集素会引起炎症。然而，出乎意料的是，本发明人发现了具有seqidno：1、2、3或4氨基酸序列的凝集素具有抗炎作用。通过详细研究证实了具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对关节炎的疗效。本发明的新颖性和发明性方面是将凝集素(如具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素)用于预防、治愈引起关节炎等的炎症或减少此类炎症扩散。

通过细胞水平测定评估了具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对在炎症发病机制中发挥重要作用的主要信号传导途径的调控作用。具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对属于关节炎相关炎症发病机制关键通路的信号传导途径具有抑制作用。这些结果(下文详述)表明凝集素(如具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素)可能在关节炎相关炎症中发挥有效作用。

对具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素的体外研究表明，该重组凝集素通过抑制促炎性细胞因子以及在炎症发病机制中发挥重要作用的信号传导途径，具有较强的抗炎活性。该重组凝集素还刺激有助于增加抗炎潜力的alp活性和人体成骨细胞胶原水平。

滑膜成纤维细胞产生过量的炎性细胞因子，破坏关节炎患者发炎关节的软骨和骨骼。人体滑膜细胞系的特征是炎性细胞因子的表达。利用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素进行人体滑膜细胞系体外细胞水平测定，以评估其对炎性细胞因子(如白介素、白介素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、pi3kδ/γ和tnf-α/ifn-γ刺激)分泌的作用。同时也评估了在体外细胞eps诱导测定中使用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对免疫细胞小鼠脾细胞的作用以及在体外细胞ifn-γ刺激测定中使用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对小鼠巨噬细胞系raw264.7的作用。具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素能够显著抑制炎性细胞因子的分泌。在滑膜细胞/干扰素γ(ifn-γ)刺激(表1)的情况下，il-8和il-6的分泌分别被抑制10％-30％和20％-50％。类似地，在用lps刺激的脾细胞中，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对tnf-α和il-1-β分泌的抑制作用分别为15-35％和20-32％(表2)。对用ifn-γ刺激的小鼠巨噬细胞(raw264.7)系中tnf-α分泌的抑制作用为5-30％(表3)。结果表明，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素能够抑制滑膜细胞系以及免疫细胞中的关键炎性细胞因子。

同时还评估了具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对人体成骨细胞系中碱性磷酸酶(alp)活性和胶原水平等骨代谢指标刺激的作用。与对照组相比，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对成骨细胞中的alp活性刺激作用为10％-45％。与对照组相比，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对胶原水平的刺激作用为3％-50％(表4)。

同时还利用lps诱导的细胞因子释放小鼠模型在体内研究中测试具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对炎性细胞因子的抑制作用。小鼠分别单独用脂多糖(lps)(50μg/只)以及lps(50μg/只)和具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素(5-50mg/kg体重)进行处理。在注射lps前1小时对具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素进行给药。正常对照组动物注射tbs(缓血酸胺缓冲液)，剂量为5ml/kg。所有剂量均采用腹腔注射。单独注射lps时，血清中的tnf-α(675.7±76.6pg/ml)和il-6(3256.0±203.1pg/ml)过量分泌。具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素能够显著抑制细胞因子分泌(图1)。特别地，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素在约20mg/kg体重的浓度下对tnf-α的抑制作用可达30％(471.8±48.3pg/ml)。类似地，其在约20mg/kg体重的浓度下对il-6的抑制作用可达43％(1866.2±139.3pg/ml)。

利用大鼠佐剂性关节炎(aia)模型对具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素作用进行了进一步测试。动物通过腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素，浓度20mg/kg体重，持续时间21天(自佐剂注射后第8-28天起)。与辅料治疗的佐剂性关节炎动物组相比，利用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素治疗能够显著减少足部和踝部厚度。与正常对照组动物相比，辅料治疗的佐剂性关节炎动物的踝关节x光照片显示严重的骨破坏。利用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素治疗的动物骨破坏有明显的改善(图3)。与正常对照组相比，辅料治疗的佐剂性关节炎组的关节角度明显减小。利用浓度约20mg/kg的具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素(剂量视情况而定)治疗的动物关节活动性提高了34.2％。这一作用与剂量有关，重组凝集素的剂量越低，对关节活动性的改善作用越低。此外，与辅料治疗的佐剂性关节炎动物相比，利用重组凝集素治疗能够使血清尿酸水平减少达22％。c-反应蛋白(crp)由肝脏产生，并存在于血液中。一般来说，和细胞因子一样，血液中的crp水平也会随炎症而升高。辅料治疗的佐剂性关节炎动物血清crp和il-6水平升高。利用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素治疗的动物crp水平显著降低(图4)。本发明证明，在fca(弗氏完全佐剂)诱导的关节炎大鼠模型中，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素以剂量依赖的方式显著降低关节炎的进展和严重程度。因此，本发明提供了利用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素或其同系物治疗炎症性疾病的方法。其可用于预防受试者炎症性疾病的发生或进展，或治愈受试者炎症性疾病，减轻受试者炎症性疾病影响的方法。

方法包括施用具有seqidno：1氨基酸序列的凝集素或其同系物，用量为受试者每千克体重施用约1毫克至50毫克，其中也可按该用量或药学上可接受的方式施用具有seqidno：1氨基酸序列的重组凝集素。

具有seqidno：1氨基酸序列的重组凝集素或其同系物的最佳用量范围为受试者每千克体重施用约5毫克至30毫克。具有seqidno：1氨基酸序列的重组凝集素或其同系物的最佳用量范围为受试者每千克体重施用约5毫克至20毫克。

具有seqid2氨基酸序列的重组凝集素的抗关节炎疗效至少为10％至100％。

示例

通过以下示例来证明本发明的最佳效果模式。示例并不以任何方式限制本发明。

示例1：

开展研究，评估具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对人滑膜细胞系(sw982)炎性细胞因子(il-8和il-6)分泌的作用。重组凝集素具有抑制细胞系炎性细胞因子分泌的作用。

首先培养人滑膜细胞(sw982)24小时，血清饥饿6小时，然后按细胞无毒性浓度(1ng/ml-1,000ng/ml)使用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素和炎症刺激物(100ng/mlifn-γ)治疗细胞24小时。用elisa法测定上清液中的细胞因子(il-6和il-8)水平。重组凝集素对细胞因子分泌的抑制作用计算如下：

抑制细胞因子百分比＝[(a-b)/a]*100

式中：

a＝对照细胞中细胞因子的浓度(仅ifn-γ)

b＝治疗细胞中细胞因子的浓度(重组凝集素+ifn-γ)

由此可见，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素抑制了ifn-γ刺激下滑膜细胞(sw982)il-8的分泌(11.2％-27.9％)和ifn-γ刺激下滑膜细胞(sw982)il-6的分泌(23.7％-49.4％)。

示例2：

开展另一项研究，确定具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对免疫细胞(小鼠脾细胞和小鼠巨噬细胞系(raw264.7))分泌炎性细胞因子(tnf-α和il-l-β)的作用。

从c57bl/6小鼠中分离脾细胞，按细胞无毒性浓度(1ng/ml-1,000ng/ml)使用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素和25ng/ml的脂多糖(lps)治疗48小时。

raw264.7细胞培养24小时，血清饥饿24小时，然后按细胞无毒性浓度(1ng/ml-1,000ng/ml)使用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素和炎症刺激物ifn-γ(100ng/ml)联合治疗细胞24小时。用elisa法测定上清液中的细胞因子(tnf-α和il-l-β)水平。

重组凝集素对细胞因子分泌的抑制作用计算如下：

抑制细胞因子百分比＝[(a-b)/a]*100

式中：

a＝对照细胞中细胞因子的浓度(仅lps或ifn-γ)

b＝治疗细胞中细胞因子的浓度(重组凝集素+lps或ifn-γ)

据观察，在小鼠脾细胞中，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对lps刺激下脾细胞分泌细胞因子有抑制作用(tnf-α抑制17.2％-32.9％，il-l-β抑制23.5％-30.4％)。

在小鼠巨噬细胞(raw264.7)中，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素抑制lps刺激下巨噬细胞(raw264.7)分泌tnf-α(6.1％-26.5％)。

示例3：

开展另一项研究，确定具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对人成骨细胞系(mg-63)的骨转换指标(碱性磷酸酶(alp)和胶原蛋白)的影响。mg-63细胞培养24小时，血清饥饿24小时，然后按细胞无毒性浓度(1ng/ml-1,000ng/ml)使用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素治疗细胞5天。用pnpp(对硝基苯磷酸酯)法测定细胞裂解物中的alp活性。用sircoll染色法测定细胞裂解物中的胶原蛋白水平。具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素可提高人成骨细胞系(mg-63)中的alp活性(11％-42.8％)和胶原蛋白水平(3.2％-45.3％)。

示例4：

开展另一项研究，确定具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对类风湿性关节炎发病机制中起重要作用的主要信号传导途径的影响。

利用genebzer和tango技术，通过细胞水平测定，测定具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对主要信号传导途径的调控作用。

由此可见，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素抑制以下传导途径：mapk/egfr/ras/raf、大麻素受体2(cnr2)、il-4/stat、pi3k/akt/f0x03和tnf-a/jnk，进一步强化了具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素或其同系物在类风湿性关节炎中的作用。

体内实验

示例5：

开展另一项研究，在lps诱导的小鼠细胞因子释放模型中，检测具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对炎性细胞因子(tnf-α和il6)的影响。

将30只雌性c56bl6小鼠按体重随机分为5组(n＝6)。接受lps(g2)的小鼠组腹腔内注射lps，单次剂量为每千克动物体重注射50微克。对于接受具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素(按10和20mg/kg的剂量)和lps的小鼠组(g3和g4)，在注射lps前1小时，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素，单次剂量为10和20mg/kg。对于接受地塞米松(按lmg/kg剂量)和和lps的小鼠组(g5)，在注射lps前至少1小时，腹腔注射地塞米松，单次剂量为1mg/kg。正常对照组(g1)腹腔注射tbs，剂量为5ml/kg。

经lps治疗后90分钟采血，离心分离出血清。在-80℃温度条件下储存血清样本。使用elisa试剂盒检测血清tnf-α和il-6。

血清细胞因子水平

tbs组小鼠的血清tnf-α水平为102.3±9.2pg/ml，而tbs组小鼠的血清il-6水平为204.0±14.3pg/ml。

lps组在90分钟时血清tnf-α水平显著升高，平均为675.7±76.6pg/ml。在10mg/kg和20mg/kg剂量条件下，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素将其水平分别抑制到566.2±52.3和471.8±48.3pg/ml，分别降低了16.2％和30.2％。

lps组在90分钟时血清il-6水平显著升高，平均为3256.0±203.1pg/ml。在10mg/kg和20mg/kg剂量条件下，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素将其水平分别抑制到2601.3±268.2和1866.2±139.3pg/ml，分别降低了20.1％和42.7％。

简言之，试验证明具有seqidno：1氨基酸序列的重组凝集素具有良好的抗炎活性，因为在lps诱导小鼠炎症模型中，它能够抑制促炎性细胞因子tnf-α和il-6。

示例6：

开展另一项研究，观察具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对佐剂性大鼠关节炎模型的影响。

将0.5mg干燥的乳酪分枝杆菌-弗氏完全佐剂(chondrex)注射到34只大鼠的左后爪(第0天)中，造成佐剂性关节炎。试验第0天，选取24只动物随机分为4组，每组6只。

分组如下：

g1：正常对照组

g2：佐剂性关节炎(aia)+tbs

g3：aia+10mg/kg重组凝集素

g4：aia+20mg/kg重组凝集素

g5：aia+0.5mg/kg地塞米松

在佐剂注射后第8天至28天施用具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素，共治疗21天。对照组按以下方法给药。正常对照组(g1，n＝6)于第0天左后爪注射100μl石蜡油，第8至28天腹腔注射tris缓冲盐溶液，剂量为5ml/kg。另一对照组(g2)于第0天接受弗氏完全佐剂(cfa)，第8至28天腹腔注射tris缓冲盐溶液。对于接受具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素的试验组，每天腹腔注射药物，剂量10和20mg/kg(分别为g3和g4)，持续21天(第8至28天)。地塞米松组(g5)于第0天cfa后，每天腹腔注射地塞米松，剂量0.5mg/kg，持续21天(第8至28天)。

用数显千分尺(日本三丰)测量足爪厚。同时记录踝关节角度。佐剂注射后第28天和治疗后第21天采集动物全血，并离心分离出血清。血清样本储存于-80℃。使用下述试剂盒测定血清尿酸、c-反应蛋白(crp)和il-6。

关节破坏评估(射线照相评估)：

结束当日(第28天)，将后肢切至髋关节下方。对后肢拍了x光照片。通过骨膜炎和骨破坏的分级来评估x光照片上骨损伤的严重程度。

溶媒治疗的佐剂性关节炎组(g2)的后肢x光照片显示，远端胫骨、跗骨、跖骨和跟骨出现严重的骨组织紊乱(骨膜炎和破坏)。按20mg/kg的剂量，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素21天，适度缓解了骨膜炎和骨质破坏(g4)，而按10mg/kg的剂量，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素后，呈现出明显的效果(g3)。腹腔注射地塞米松(按0.5mg/kg剂量)后，呈现出明显的改观。

具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对佐剂性大鼠关节炎模型中踝骨x光照片的影响

与正常对照组(g1)相比，溶媒治疗的佐剂性关节炎组(g2)的踝关节x光照片显示严重的骨破坏。按10mg/kg和20mg/kg剂量(g3和g4)，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素21天，这种骨破坏得到了轻度到中度的改善。腹腔注射地塞米松(按0.5mg/kg剂量)后，呈现出明显的改观(g5)。

具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对佐剂性大鼠关节炎模型中关节角度(关节灵活性)的影响

与正常对照组(g1)相比，溶媒治疗的佐剂性关节炎组(g2)的关节角度明显减小。按10mg/kg和20mg/kg剂量(g3和g4)，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素21天，关节灵活性提高呈剂量依赖性，分别提高7.9％和34.2％。腹腔注射地塞米松(按0.5mg/kg剂量)后，呈现出明显的改观，提高61.8％。

具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对佐剂性大鼠关节炎模型的爪厚度和踝关节厚度的抑制作用

溶媒治疗的佐剂性关节炎组(g2)的爪厚度和踝关节厚度显著增加。按20mg/kg的剂量，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素21天，爪部和踝关节肿胀(g4)明显减轻，而10mg/kg剂量的效果较差(g3)。腹腔注射地塞米松(按0.5mg/kg剂量)后，呈现出明显的改观(g5)。

具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对佐剂性大鼠关节炎模型的血清尿酸水平的影响

地塞米松可显著降低患佐剂性关节炎的大鼠的血清尿酸水平(g5)。按10mg/kg和20mg/kg剂量(g3和g4)，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素21天，尿酸水平降低呈剂量依赖性，分别降低11.0％和22.0％。

具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素对佐剂性大鼠关节炎模型的血清il-6和crp水平的影响

tris缓冲盐溶液(tbs)治疗组(g1)大鼠的血清c-反应蛋白(crp)水平为290.6±15.5pg/ml，而tbs组大鼠的血清il-6水平为265.8±22.7pg/ml。关节炎组(g2)血清il-6水平显著升高，平均为6989.2±475.2pg/ml。具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素将10mg/kg和20mg/kg剂量时的水平分别抑制到6219.8±359.8和5393.6±420.4pg/ml(g3和g4)，分别降低了11.0％和22.8％。

关节炎组(g2)血清crp水平显著升高，平均为748.2±21.8pg/ml。在10mg/kg和20mg/kg剂量条件下，具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素将其水平分别抑制到726.4±36.6和523.3±110.5pg/ml(g3和g4)，分别降低了2.9％和30.1％。

具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素和地塞米松对佐剂性大鼠关节炎模型的胸腺和脾脏重量的影响

与正常对照组(g1)相比，溶媒治疗的佐剂性关节炎组(g2)的胸腺重量明显减轻。按10mg/kg和20mg/kg剂量(g3和g4)，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素21天，分别比g2组增加14.48％，减少3.98％。与g2组相比，腹腔注射地塞米松(按0.5mg/kg剂量)后，胸腺重量显著减轻(即19.33％)。

与正常对照组(g1)相比，溶媒治疗的佐剂性关节炎组(g2)的脾脏重量呈轻微增长。按10mg/kg和20mg/kg剂量(g3和g4)，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素21天，分别比g2组增加40.55％和12.17％。与g2组相比，腹腔注射地塞米松(按0.5mg/kg剂量)后，脾脏重量显著减轻(即51.57％)。

具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素和地塞米松对佐剂性大鼠关节炎模型的血液病的影响

与正常对照组(g1)相比，溶媒治疗的佐剂性关节炎组(g2)的所有被测血液指标均出现中度至显著变化。按10mg/kg和20mg/kg剂量(g3和g4)，腹腔注射具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素21天，并没有改变关节炎引起的变化。但是，与g2组相比，腹腔注射地塞米松(按0.5mg/kg剂量)后，血液学显示中度至显著变化(白血球-减少60.3％，红血球-增加23.4％，血红蛋白-增加25.2％，血细胞比容-增加22.4％)。

具有seqidno：2氨基酸序列的重组凝集素和地塞米松对佐剂性大鼠关节炎模型的体重的影响

重组凝集素治疗组(g3&g4)和溶媒治疗的佐剂诱导关节炎组(g2)的体重增加趋势与正常对照组(g1)相似。但是，腹腔注射地塞米松(按0.5mg/kg剂量)组(g5)在整个治疗期间体重没有增加。

表1

表2

表3

表4

sequencelisting

<110>unichemlaboratoriesltd

<120>proteinfortreatmentofinflammatorydiseases

<130>in201821009667

<160>4

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>141

<212>prt

<213>sclerotiumrolfsii

<400>1

thrtyrlysilethrvalargvaltyrglnthrasnproasnalaphe

151015

phehisprovalglulysthrvaltrplystyralaasnglyglythr

202530

trpthrilethraspaspglnhisvalleuthrmetglyglysergly

354045

thrserglythrleuargphehisalaaspasnglygluserphethr

505560

alathrpheglyvalhisasntyrlysargtrpcysaspilevalthr

65707580

asnleualaalaaspgluthrglymetvalileasnglnglntyrtyr

859095

serglnlysasnarggluglualaarggluargglnleuserasntyr

100105110

gluvallysasnalalysglyargasnphegluilevaltyrthrglu

115120125

alagluglyasnaspleuhisalaasnleuileilegly

130135140

<210>2

<211>141

<212>prt

<213>artificialsequence

<220>

<223>invitrosynthesis

<400>2

thrtyrlysilethrvalargvaltyrglnthrasnproaspalaphe

151015

phehisprovalglulysthrvaltrplystyralaasnglyglythr

202530

trpthrilethraspaspglnhisvalleuthrmetglyglysergly

354045

thrserglythrleuargphehisalaaspasnglygluserphethr

505560

alathrpheglyvalhisasntyrlysargtrpcysaspilevalthr

65707580

asnleualaalaaspgluthrglymetvalileasnglnglntyrtyr

859095

serglnlysasnarggluglualaarggluargglnleuserasntyr

100105110

glnvallysasnalalysglyargasnpheglnilevaltyrthrglu

115120125

alagluglyasnaspleuhisalaasnleuileilegly

130135140

<210>3

<211>141

<212>prt

<213>artificialsequence

<220>

<223>invitrosynthesis

<400>3

valtyrlysilethrvalargvaltyrglnthrasnproaspalaphe

151015

phehisprovalglulysthrvaltrplystyralaasnglyglythr

202530

trpserilethraspaspglnhisvalleuthrmetglyglysergly

354045

thrserglythrleuargphehisalaaspasnglygluserphethr

505560

alathrpheglyvalhisasntyrlysargtrpcysaspilevalthr

65707580

asnleualaalaaspgluthrglymetvalileasnglnglntyrtyr

859095

serglnlysasnarggluglualaarggluargglnleuserasntyr

100105110

glnvallysasnalalysglyargasnpheglnilevaltyrthrglu

115120125

alagluglyasnaspleuhisalaasnleuileilegly

130135140

<210>4

<211>141

<212>prt

<213>artificialsequence

<220>

<223>invitrosynthesis

<400>4

valtyrlysilethrvalargvaltyrglnthrasnproaspalaphe

151015

phehisprovalglulysthrvaltrplystyralaaspglyglythr

202530

trpserilethraspaspglnhisvalleuthrmetglyglysergly

354045

thrserglythrleuargphehisalaaspasnglygluserphethr

505560

alathrpheglyvalhisasptyrlysargtrpcysaspilevalthr

65707580

aspleualaalaaspgluthrglymetvalileasnglnglutyrtyr

859095

serglulysasparggluglualaarggluargglnasnserasntyr

100105110

gluvallysaspalalysglyargasnphegluilevaltyrthrglu

115120125

alagluglyasnaspleuhisalaaspleuileilegly

130135140