用于治疗眼部疾病的方法，组合物，和试剂盒与流程

用于治疗眼部疾病的方法，组合物，和试剂盒
1.优先权声明
2.本技术要求于2018年11月29日提交的美国临时申请号62/773,131，于2018年12月21日提交的美国临时申请号62/783,852，于2019年4月25日提交的美国临时申请号62/838,905，以及于2019年7月24日提交的美国临时申请号62/878,260的优先权，全部通过引用整体并入本文。


背景技术：

3.许多眼部疾病与导致基因表达提前终止的无义突变相关联。例如，视网膜色素变性(rp)导致视力丧失，美国和欧洲每3,500人中约有1人受到影响。所有发生的rp中有15％由无义突变引起。
4.rp是造成usher综合征视力丧失部分的因素，这是世界范围内最常见的聋盲形式。usher综合征影响每100,000万人中3.2
‑
6.2人，美国约有16,300例。usher综合征有三种临床类型(ush1，ush2，ush3)，并已经描述了12个遗传基因座：ush1b
‑
h；ush2a，c，d；和ush3a。ush2与ush1的比率约为3∶2。无义突变大约占所有usher综合征病例的20％。
5.无虹膜症是眼睛发育的基本障碍，患病率大约为每100,000人中1.8人，美国约有5,900人受到影响。无义突变约占所有无虹膜症病例的40％。
6.无脉络膜症是一种缓慢进展的视力丧失，每100,000人中约有1
‑
2人受到影响，美国约有6,500人受到影响。无义突变约占遗传变化的40％。
7.stickler综合征的患病率约为每100,000人中1
‑
3人，美国约有66,000人受到影响。无义突变约占所有stickler综合征病例的20％。
8.leber先天性黑蒙(lca)的患病率约为每100,000人中1
‑
9人，大约占所有视网膜营养不良的5％。
9.目前没有针对与遗传性视网膜疾病相关联的无义突变的药物获得批准或处于后期开发阶段。因此，本领域对于治疗usher综合征，rp，无虹膜症，无脉络膜症，stickler综合征，lca，和其他与无义突变相关联的眼部疾病的改进方法存在显著未满足的需求。


技术实现要素：

10.本文在某些实施例中提供了治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的方法，包括向所述受试者施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物。在这些实施例的某些中，将一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物作为包含该一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物以及任选的一种或多种药学上可接受的载体的药学制剂的一部分施用。
11.本文在某些实施例中提供了增加视网膜细胞中的基因表达或基因读出(read
‑
through)的方法，包括向所述受试者施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物。在这些实施例的某些中，表达或读出增加的基因包含一种或多种无义突变。在某些实施例中，将一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物作为包含该一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物以及任选的一种或多种药学上可接受的载体的药学制剂的一部分施用。
12.本文在某些实施例中提供了施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物诱导读出活性而不超过该一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的安全暴露阈值。
13.本文在某些实施例中提供了一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂，以治疗与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病。
14.本文在某些实施例中提供了一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂，以增加眼部细胞中的基因表达或基因读出。
15.本文在某些实施例中提供了一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂在治疗与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病中的用途。
16.本文在某些实施例中提供了一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或包含一种或多种氨基糖苷或其衍生物的药学制剂在增加视网膜细胞中的基因表达或基因读出的用途。
17.本文在某些实施例中提供了一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物在配制用于治疗与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的药物中的用途。
18.本文在某些实施例中提供了一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物在配制用于增加视网膜细胞中的基因表达或基因读出的药物中的用途。
19.本文在某些实施例中提供了包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物或包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂的试剂盒，用于治疗与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病。在这些实施例的某些中，该试剂盒还包含使用说明。
20.本文在某些实施例中提供了包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物或包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂的试剂盒，用于增加视网膜细胞中的基因表达或基因读出。在这些实施例的某些中，该试剂盒还包含使用说明。
21.在本文提供的方法和用途的某些实施例中，体外或体内施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或其药学制剂。在某些实施例中，经由外用或玻璃体内施用将一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或其药学制剂施用于受试者。
22.在本文提供的方法，用途，制剂，和试剂盒的某些实施例中，与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病选自usher综合征，rp，stickler综合征，无虹膜症，lca，或无脉络膜症。在其中眼部疾病是usher综合征的某些实施例中，无义突变可能在ush1b
‑
g，ush2a，或c
‑
d，或ush3a的一个或多个中。
23.在本文提供的方法，用途，制剂，和试剂盒的某些实施例中，一种或多种无义突变选自r3x(pcdh11)，r155x(ush1c)，r245x(pcdh15)，和r626x(ush2a)。
24.在本文提供的方法，用途，药学制剂，和试剂盒的某些实施例中，一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物选自下述i
‑
iv类化合物。在这些实施例的某些中，该一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物选自nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157。
25.在本文提供的方法的某些实施例中，该方法还包括与一种或多种氨基糖苷或其衍生物，或其药学制剂组合施用一种或多种另外的治疗剂。这些另外的治疗剂可用相同或不同的制剂施用。在本文提供的方法的某些实施例中，向受试者施用0.3mg/kg至约2.5mg/kg的一种或多种氨基糖苷。
26.附图简要说明
27.图1示出了usher综合征变异型。
28.图2示出了在对兔施用nb118前和后9天所测量的暗适应振荡电位和明视b波振幅的图。
29.图3示出了用庆大霉素和nb118治疗的兔的h&e染色切片。
30.图4示出了nb122的药代动力学特征(profile)图。
31.图5a
‑
b示出了在存在nb84和nb127的情况下ush1无义突变的无细胞读出。
32.图6a
‑
b示出了在存在nb84和nb127的情况下ush1无义突变的体外读出。
33.图7示出了nb122，nb84，nb127，nb118，nb128，nb124
‑
mes，和nb157针对r626xush2a突变的读出活性。
34.图8示出了nb122，nb84，nb127，nb118，nb128，nb124
‑
mes，和nb157针对r3xush1f突变的读出活性。
35.图9示出了nb122，nb84，nb127，nb118，nb128，nb124
‑
mes，和nb157针对r626xush2a和r3xush1f突变的比较读出活性。
36.图10示出了nb122，nb125，和nb84针对r626x ush2a突变的读出活性。
37.图11示出了nb122，nb125，和nb84针对r3xush1f突变的读出活性。
38.图12示出了评估氨基糖苷对人tp53的r213x无义突变的读出活性的方案。
39.图13示出了在施用nb84和nb128之后用于检测全长p53的代表性western印迹。
40.图14示出了与laminb1相比在施用nb84和nb128之后量化p53的图。
41.图15示出了测量处于细胞核的p53和nb84的剂量依赖性的高通量免疫荧光试验的图像。
42.图16示出了与庆大霉素和媒介物对照相比的nb122，nb124，nb84，nb118，和nb128的全剂量反应曲线。
43.图17示出了在存在nb84，nb122，nb124，和nb127的情况下usher蛋白质的产生。
44.图18示出了玻璃体内注射sjl/小鼠的示意图。
45.图19示出了庆大霉素体内读出的初步研究结果。
46.图20示出了施用nb122，nb124，nb84，nb118，和nb128之后眼中黑色素产生的剂量依赖性增加。
47.图21示出了小鼠模型中玻璃体内给药nb122，nb84，nb127，nb118，nb128，nb124
‑
mes，和nb157之后的黑色素产生。
具体实施方式
48.本发明的以下描述仅旨在说明本发明的多种实施例。因此，所讨论的具体修改不应被解释为对本发明范围的限制。对本领域技术人员而言将显而易见的是，在不脱离本发明范围的情况下可以做出多种等同，改变，和修改，并且应当理解，此类等同实施例将被包括在本文中。
49.定义
50.如本文所用，关于与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的术语“治疗(treat)”，“治疗(treating)”，和“治疗(treatment)”可指消除此疾病；预防，延迟，或降低
此疾病或与此疾病相关联的一种或多种症状的发展或进展的可能性；减少或消除与此疾病相关联的一种或多种症状；降低与此疾病相关联的一种或多种症状的严重程度或发生率；或其一些组合。
51.如本文所用，“受试者”是指哺乳动物受试者，优选人，其已被诊断患有，被怀疑患有，处于发展的风险中，或正在表现出或已经表现出同与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病相关联的一种或多种症状。在某些实施例中，受试者患有或有风险患有usher综合征，rp，stickler综合征，无虹膜症，lca，或无脉络膜症。
52.如本文所用，氨基糖苷或其衍生物的“治疗有效量”是在受试者中产生想要的治疗效果的氨基糖苷或其衍生物的量。在某些实施例中，治疗有效量是产出最大治疗效果的量。在其他实施例中，治疗有效量产出小于最大治疗效果的治疗效果。例如，治疗有效量可以是产生治疗效果同时避免与产出最大治疗效果的剂量相关联的一种或多种副作用的量。特定氨基糖苷或其衍生物的精确治疗有效量将根据多种因素而变化，包括但不限于氨基糖苷或其衍生物的特性(例如，活性，药代动力学，药效动力学，和生物利用度)，受试者的生理状况(例如，年龄，体重，性别，疾病类型和阶段，病史，一般身体状况，对给定剂量的反应度，和其他现有药物)，氨基糖苷组合物中存在的任何药学上可接受的载体的性质，和施用途径。临床和药理学领域的技术人员将能够通过常规实验确定治疗有效量，即通过监测受试者对施用氨基糖苷或其衍生物的反应并相应地调整剂量。有关其他指导，参见，例如，雷明顿：药学的科学与实践，第22版，药学出版社，伦敦，2012，和古德曼&吉尔曼的治疗学的药理学基础，第12版，麦格劳希尔，纽约，ny，2011，其全部公开通过引用并入本文。
53.如本文所用和本领域熟知，术语“单糖”是指由不能通过水解进一步分解的单个糖分子组成的糖的简单形式。单糖最常见的示例包括葡萄糖(右旋糖)，果糖，半乳糖，和核糖。单糖可以根据碳水化合物的碳原子数进行分类，即，丙糖，具有3个碳原子，如甘油醛和二羟基丙酮；丁糖，具有4个碳原子，如赤藓糖，苏糖，和赤藓酮糖；戊糖，具有5个碳原子，如阿拉伯糖，来苏糖，核糖，木糖，核酮糖，和木酮糖；己糖，具有6个碳原子，如阿洛糖，阿卓糖，半乳糖，葡萄糖，古洛糖，艾杜糖，甘露糖，塔罗糖，果糖，阿洛酮糖，山梨糖，和塔格糖；庚糖，具有7个碳原子，如甘露庚酮糖，景天庚酮糖；辛糖，具有8个碳原子，如2
‑
酮
‑3‑
脱氧
‑
甘露
‑
辛酸酯/盐；壬糖，具有9个碳原子，如唾液糖(sialose)；和癸糖，具有10个碳原子。单糖是寡糖(如蔗糖(常见糖))和其他多糖(如纤维素和淀粉)的构筑块。
54.如本文所用，术语“寡糖”是指包含两个或更多个单糖单元的化合物，如本文所定义，经由糖基键(
‑
o
‑
)彼此连接。优选地，寡糖包含2
‑
6个单糖，更优选地，寡糖包含2
‑
4个单糖，最优选地，寡糖是具有两个单糖单元的二糖部分。
55.如本文所用，短语“药学上可接受的载体”是指涉及将感兴趣的化合物或分子从一个组织，器官，或身体的一部分携带或转运至另一个组织，器官，或身体的一部分的药学上可接受的材料，组合物，或媒介物。药学上可接受的载体可包含多种组分，包括但不限于液体或固体填充剂，稀释剂，赋形剂，溶剂，缓冲剂，封装材料，表面活性剂，稳定剂，粘合剂，或颜料，或其一些组合。载体的每个组分必须是“药学上可接受的”，因为它必须与组合物的其他成分相容，并且必须适合与它可能遇到的任何组织，器官，或身体的一部分接触，这意味着它必须不携带毒性，刺激性，过敏反应，免疫原性，或任何其他过度超过其治疗益处的并发症的风险。
56.术语“化合物(compound)”或“化合物(compounds)”是指常规化学化合物(例如，小分子有机物)。如本文所用，短语“小分子”与术语“化合物”可互换使用。
57.如本文所用，术语“约”是指在所表述值或值范围的10％以内。
58.如本文所用，短语“治疗有效量”是在受试者中产生想要的治疗效果的药剂的量。
59.如本文所用，术语“烷基”是指包括直链和支链基团的脂肪烃。烷基可具有1至20个碳原子，或1
‑
10个碳原子，并且可以是支链或非支链的。根据本发明的一些实施例，该烷基为具有1
‑
4个碳原子的低级(或较低级)烷基(即甲基，乙基，丙基，和丁基)。
60.术语被取代的“烷基”，“环烷基”，“芳基”，“烷芳基”，“杂芳基”，“杂脂环族”，“酰基”，包括但不限于羟基，烷氧基，硫代羟基，硫代烷氧基，芳氧基，硫代芳氧基，烷芳基，烯基，炔基，磺酸酯/盐，亚砜，硫代硫酸酯/盐，硫酸酯/盐，亚硫酸盐，硫代亚硫酸酯/盐，膦酸酯/盐，氰基，硝基，偶氮，磺酰胺，羰基，硫代羰基，c
‑
羧酸酯/盐，o
‑
羧酸酯/盐，n
‑
硫代氨基甲酸酯/盐，o
‑
硫代氨基甲酸酯/盐，氧代，硫代羰基，肟，酰基，酰卤，偶氮，叠氮化物，脲，硫脲，n
‑
氨基甲酸酯/盐，o
‑
氨基甲酸酯/盐，c
‑
酰胺，n
‑
酰胺，鸟苷基(guanyl)，胍基，肼，和酰肼。
61.如本文所用，术语“溶剂化物”是指由溶质(本发明的化合物)和溶剂形成的可变化学计量(例如，二，三，四，五，六等)的配合物，其中溶剂不会干扰溶质的生物活性。合适的溶剂包括例如，乙醇，乙酸等。
62.如本文所用，术语“羟基(hydroxyl)”或“羟基(hydroxy)”是指
‑
oh基团。
63.如本文所用，术语“胺”是指
‑
nr’r”基团，其中r’和r”各自独立地为氢，烷基，烯基，炔基，环烷基，杂脂环族，芳基，杂芳基，烷芳基，烷杂芳基，或酰基，如这些术语在本文的定义。可替代地，r’和r”之一或两者可为例如，羟基，烷氧基，羟烷基，三卤代烷基，环烷基，烯基，炔基，芳基，杂芳基，杂脂环族，胺，卤化物，磺酸酯/盐，亚砜，膦酸酯/盐，羟基，烷氧基，芳氧基，硫代羟基，硫代烷氧基，硫代芳氧基，氰基，硝基，偶氮，磺酰胺，羰基，c
‑
羧酸酯/盐，o
‑
羧酸酯/盐，n
‑
硫代氨基甲酸酯/盐，o
‑
硫代氨基甲酸酯/盐，脲，硫脲，n
‑
氨基甲酸酯/盐，o
‑
氨基甲酸酯/盐，c
‑
酰胺，n
‑
酰胺，鸟苷基，胍，和肼。
64.数值范围；例如，如本文所用，“1
‑
10”表示该基团，例如，烷基，可包含1个碳原子，2个碳原子，3个碳原子等，最多至包括40个碳原子或更多。
65.如本文所用，短语“被取代的烷基”或“取代基烷基”是指烷基(例如，形成支链烷基)，烯基，炔基，环烷基，芳基，杂芳基，杂脂环族，卤素，三卤代烷基，羟基，烷氧基，和羟烷基中的一个或多个，如这些术语在下文中的定义。被芳基取代的烷基在本文也称为“烷芳基”，其示例为苄基。
66.如本文所用，术语“烯基”是指例如，具有至少两个碳原子和至少一个碳
‑
碳双键的不饱和烷基，例如，烯丙基，乙烯基，3
‑
丁烯基，2
‑
丁烯基，2
‑
己烯基，和异丙烯基。烯基可被一个或多个取代基取代或未被取代。
67.如本文所用，术语“炔基”是指例如，具有至少两个碳原子和至少一个碳
‑
碳三键的不饱和烷基。炔基可被一个或多个取代基取代或未被取代。
68.如本文所用，术语“环烷基”是指全碳单环或稠环(即，共享相邻碳原子对的环)，包含3个或更多个碳原子的支链或非支链基团，其中一个或多个环不具有完全共轭的π电子体系，并且可进一步被取代或未被取代。示例性的环烷基包括，例如，环丙基，环丁基，环戊基，
环己基，或环十二烷基。环烷基可被取代或未被取代。当被取代时，取代基可以是例如，烷基，烯基，炔基，环烷基，芳基，杂芳基，杂脂环族，卤素，三卤代烷基，羟基，烷氧基，和羟烷基中的一个或多个。
69.如本文所用，术语“芳基”是指具有完全共轭的π电子体系的全碳单环或稠环多环(即，共享相邻碳原子对的环)基团。芳基可未被取代或被一个或多个取代基取代。当被取代时，取代基可以是例如，烷基，烯基，炔基，环烷基，芳基，杂芳基，杂脂环族，卤素，三卤代烷基，羟基，烷氧基，和羟烷基中的一个或多个。
70.如本文所用，术语“杂芳基”是指在一个或多个环中具有一个或多个原子(例如，氮，氧，和硫)且具有完全共轭的π电子体系的单环或稠环(即，共享相邻原子对的环)基团。
71.所用术语“杂脂环族”是指在一个或多个环中具有一个或多个原子(例如，氮，氧，和硫)的单环或稠环基团。环也可具有一个或多个双键。然而，环不具有完全共轭的π电子体系。
72.如本文所用，术语“氧代”描述(＝o)基团，其中氧原子通过双键连接至所表示位置处的原子(例如，碳原子)。
73.如本文所用，术语“羟烷基”是指如本文所定义的烷基，被一个或多个羟基取代，例如，羟甲基，2
‑
羟乙基，和4
‑
羟戊基。
74.眼部疾病的治疗
75.无义突变导致提前的翻译终止，从而导致通常不稳定的截短蛋白质产物。在本文所治疗的眼部疾病的情境中，这些无义突变导致多种有害作用，包括进行性光感受器丧失。本文公开的氨基糖苷及其衍生物可被用作小分子药物以促进提前终止密码子的读出，延长mrna半衰期，和恢复全长功能蛋自质。
76.如本文所公开，包括nb30/化合物3，nb54/化合物37，nb84/elx
‑
03，nb118/elx
‑
05，nb122/elx
‑
01，nb124/elx
‑
02，nb124
‑
mes，nb127/elx
‑
04，nb128，和nb157/elx
‑
06的氨基糖苷已被发现在视网膜，相关眼病突变的读出，和/或无义突变导致的缺失蛋白质的产生方面展现出良好的安全特征。基于这些发现，提供了使用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物治疗与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的方法，用途，制剂，和试剂盒。
77.可使用本文提供的方法，用途，制剂，和试剂盒治疗的与无义突变相关联的眼部疾病包括但不限于，usher综合征，视网膜色素变性，stickler综合征，斯特格氏病，无虹膜症，lca，全色盲，和无脉络膜症。眼部疾病可为另一种遗传性视网膜疾病。
78.usher综合征有多种变异型，其中一些在图1示出。无义突变在所有亚型中都比较常见，总体患病率约为20％。因此，在本文公开的方法，用途，制剂，和试剂盒的某些实施例中，与无义突变相关联的眼部疾病是usher综合征。在这些实施例中，无义突变可位于usher 1(ush1)，usher 2(ush2)，或usher 3(ush3)亚型中的一个或多个。在某些实施例中，无义突变选自r3x(pcdh11)，r155x(ush1c)，r245x(pcdh15)，和r626x(ush2a)。在其他实施例中，无义突变是ush2a突变r626x。
79.如本文所公开，氨基糖苷nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157被证明为促进与usher综合征相关联的多个常见无义突变的读出。例如，与g418和庆大霉素相比，nb84和nb127在pcdh11基因的无义突变r3x和r245x的无细胞和体外试验中均诱导了显著的读出。nb84，nb127，nb118，nb128，nb124
‑
mes，和nb157在基于分
别位于ush1和ush2亚型的无义突变r3x和r626x的体外基于细胞的试验中也诱导了显著的读出。
80.如本文所公开，氨基糖苷被证明为通过增加的蛋白质表达促进与usher综合征相关联的多个无义突变的读出。例如，nb84，nb122，nb124，和nb127被证明为增加蛋白质表达，这会受到位于ush1c亚型上的无义突变r155x的不利影响。
81.如本文所公开，氨基糖苷被证明为通过玻璃体内注射在允许浓度下诱导读出。在体内研究中，与庆大霉素相比，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb84，nb118，nb127，nb128，和nb147在注射入后段(即，眼后)后示出了显著的读出。对于ush1f突变r3x，nb122的读出与天然读出相比增加了2.5倍，这表示r3x的读出率为2.7％。与庆大霉素相比，临床前模型的玻璃体内注射nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb84，nb118，nb127，nb128，和nb147在肉眼(gross)眼科检查和视网膜电图上也被发现耐受性良好。此外，玻璃体内注射足以在视网膜内nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb84，nb118，nb127，nb128，和nb147的允许浓度下诱导读出。
82.因此，本文在某些实施例中提供了通过施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂来治疗与无义突变相关联的眼部病症(包括usher综合征)的方法。
83.本文在某些实施例中提供了治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关的眼部疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，该一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物选自nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157。在一些实施例中，一种或多种无义突变选自r3x，r155x，r245x，和r626x。在一些实施例中，玻璃体内施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物。
84.本文在某些实施例中提供了治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷，其中所述一种或多种无义突变选自r3x，r155x，r245x，和r626x。在一些实施例中，一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物选自nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157。在一些实施例中，玻璃体内施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物。
85.本文在某些实施例中提供了增加视网膜细胞中的基因表达或基因读出的方法，包括使视网膜细胞与一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂接触，其中基因表达或基因读出受到一种或多种无义突变的不利影响。在某些实施例中，增加基因表达或基因读出增加了受usher综合征，视网膜色素变性，stickler综合征，斯特格氏病，无虹膜症，lca，全色盲，和无脉络膜症不利影响的蛋白质的产生。
86.在本文提供的方法的某些实施例中，一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的施用使基因表达或基因读出增加至少约0.5％，至少约1％，至少约1.5％，至少约2％，至少约2.5％，至少约3％，至少约3.5％，至少约4％，至少约5％，至少约5.5％，至少约6％，至少约6.5％，至少约7％，至少约7.5％，至少约8％，至少约8.5％，至少约9％，至少约9.5％，至少约10％，或更多。例如，在一些实施例中，基因表达或基因读出增加约1％至约5％，约1％至约10％，约1％至约3％，约3％至约6％，约6％至约10％，约2.5％至约3.5％，约2％至约10％，约2.5％至约6％，或约3％至约8％。
87.在本文提供的方法的某些实施例中，一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的施用
增加受一种或多种无义突变不利影响的蛋白质的产生。在一些实施例中，蛋白质产生增加至少约0.5％，至少约1％，至少约1.5％，至少约2％，至少约2.5％，至少约3％，至少约3.5％，至少约4％，至少约5％，至少约5.5％，至少约6％，至少约6.5％，至少约7％，至少约7.5％，至少约8％，至少约8.5％，至少约9％，至少约9.5％，至少约10％，或更多。例如，在一些实施例中，基因表达或基因读出增加约1％至约5％，约1％至约10％，约1％至约3％，约3％至约6％，约6％至约10％，约2.5％至约3.5％，约2％至约10％，约2.5％至约6％，或约3％至约8％。
88.在本文提供的方法的某些实施例中，玻璃体内施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物以治疗与无义突变相关联的眼部病症。在一些实施例中，将一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物或包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂配制成注射入受试者眼睛的后段(例如，眼后)。在一些实施例中，玻璃体内注射包括施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物以治疗与无义突变相关联的眼部病症。
89.在某些实施例中，治疗与无义突变相关联的眼部病症的方法包括以不超过一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的安全暴露阈值的量施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物。在一些实施例中，一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的安全暴露阈值大于或等于一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的读出阈值。在一些实施例中，一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的施用诱导读出而不超过暴露安全阈值。
90.在某些实施例中，治疗与无义突变相关联的眼部病症的方法包括向有需要的受试者玻璃体内施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，其中受试者没有表现出严重的不可逆的眼睛损伤和/或并发症。在一些实施例中，在玻璃体内注射一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物后，受试者的眼睛没有表现出不利的结构变化。
91.在本文提供的方法的某些实施例中，施用单一氨基糖苷或其衍生物，或包含单一氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂。在其他实施例中，施用两种或更多种氨基糖苷和/或其衍生物，或包含两种或更多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂。在某些实施例中，除了一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物之外，还施用一种或多种另外的治疗剂。一种或多种另外的治疗剂可作为一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的同一制剂的一部分施用，或者它们可以分开施用。
92.在本文提供的方法的某些实施例中，可在预先确定的特定时间过程中施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物。例如，一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物可以在2周，4周，6周，8周，12周，16周，20周，24周，36周，48周，1年，18个月，2年，或2年以上的时间过程中施用。在其他实施例中，一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物可以无限期地施用，或直到达到特定的治疗基准。例如，可以施用一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，直到眼部疾病的一种或多种症状已经消除或降低到想要的水平。
93.本文在某些实施例中提供了一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物在配制用于治疗与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的药物中的用途。
94.本文在某些实施例中提供了一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物的药学制剂，用于治疗与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病。
95.氨基糖苷及其衍生物
96.在本文提供的方法，用途，组合物，和试剂盒的某些实施例中，一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物选自如下所述的i类化合物，ii类化合物，iii类化合物，iv类化合物，和vi类化合物。在某些实施例中，氨基糖苷或其衍生物选自nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157。在其他实施例中，氨基糖苷和/或其衍生物是庆大霉素x2。在某些实施例中，本文公开的氨基糖苷及其衍生物对原核生物核糖体的亲和力降低并优先结合真核生物核糖体。
97.i类化合物
98.i类化合物包括要求于2006年4月3日提交的美国临时申请号60/788,070，和/或于2007年4月10日提交的pct申请号pct/il2007/000463(pct公开号wo07/113841)的优先权的任何申请或专利中公开或要求保护的所有氨基糖苷。这些包括但不限于，美国专利号9,073,958和9,821,001；加拿大专利号2,646,407；和欧洲专利号2007783和2390255。
99.i类化合物的示例包括但不限于式i化合物：
[0100][0101]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0102]
r1，r2，和r3各自独立地为单糖部分，卤化物，羟基，胺，或寡糖部分；
[0103]
x是氧或硫；
[0104]
r4是氢或(s)
‑4‑
氨基
‑2‑
羟基丁酰基(ahb)；
[0105]
r5是羟基；
[0106]
y是氢或烷基；和
[0107]
虚线表示r构型或s构型，
[0108]
条件是该化合物不选自
[0109][0110]
阿米卡星，安普霉素，阿贝卡星，布替罗星，地贝卡星，福替霉素，g
‑
418，庆大霉素，潮霉素，哈贝卡星，地贝卡星，奈替米星，依他霉素，异帕霉素，卡那霉素，利维霉素，新霉胺，新霉素，巴龙霉素，核糖霉素，西索米星，大观霉素，链霉素，和妥布霉素。
[0111]
在某些实施例中，具有式i的i类化合物选自：
[0112]
[0113]
[0114]
[0115]
[0116][0117]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0118]
在其中r1，r2，和r3中的一个或多个是单糖部分的某些实施例中，单糖部分具有式ii所示的结构：
[0119]
[0120]
其中：
[0121]
虚线表示r构型或s构型；和
[0122]
r6，r7，和r8各自独立地选自羟基和胺。
[0123]
在一些实施例中，胺是取代或未取代的胺。在一些实施例中，胺是被烷基取代的胺(例如，n(ch3)2，nh(c
12
h
25
)，nh(c6h
13
)，或nh(ch2ch3))。
[0124]
i类化合物的其他示例包括但不限于式ia*化合物：
[0125][0126]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0127]
虚线表示r构型或s构型；
[0128]
r*1，r*2，和r*3各自独立地为卤化物，羟基，胺，或连接至具有式i的化合物，其中r*1，r*2，和r*3中的至少一个连接至具有式i的化合物；
[0129]
x*是氧或硫；
[0130]
r*4是氢或ahb部分；
[0131]
r*5是羟基或胺；和
[0132]
y*是氢，烷基，或芳基。
[0133]
在某些实施例中，i类化合物是包含经由其相应的r1，r*1，r2，r*2，r3，或r*3位置以其任意组合连接的两个式ia*单元的二聚体，例如，r1‑
r*2或r2‑
r*1连接的二聚体，r1‑
r*3或r3‑
r*1连接的二聚体，r3‑
r*2或r2‑
r*3连接的二聚体，r1‑
r*1连接的二聚体，r2‑
r*2连接的二聚体，或r3‑
r*3连接的二聚体。在一些实施例中，二聚体是r1‑
r*1连接的二聚体。
[0134]
在某些实施例中，式ia*二聚体的两个单元经由接头或连接部分连接(即，连接)。如本文所用，术语“接头”是指连接至至少两个其他化学部分并由此连接(“连接”)那些部分的化学部分。在某些实施例中，接头优选为具有1
‑
6个碳原子的低级烷基，更优选为亚甲基。
[0135]
在某些实施例中，式ia*的i类化合物是：
[0136][0137]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0138]
ii类化合物
[0139]
ii类化合物包括要求于2010年11月18日提交的美国临时申请号61/414,956，和/或于2011年11月17日提交的pct申请号pct/il2011/000889(pct公开号wo12/66546)的优先权的任何申请或专利中公开或要求保护的所有氨基糖苷。这些包括但不限于，美国专利号8,895,519，9,175,029，9,616,079，和9,943,533；和欧洲专利号2640734。
[0140]
ii类化合物的示例包括但不限于式iii化合物：
[0141][0142]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0143]
r1选自烷基，环烷基，和芳基，优选为烷基；
[0144]
r2是氢或ahb；
[0145]
r3选自氢，烷基，环烷基，和芳基，优选为氢或烷基；和
[0146]6’
位和5”位的立体构型各自独立地为r构型或s构型。
[0147]
在一些实施例中，环烷基包括例如，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，或环十二烷基。
[0148]
在某些实施例中，具有式iii的ii类化合物选自：
[0149]
[0150]
[0151][0152]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0153]
iii类化合物
[0154]
iii类化合物包括要求于2015年9月2日提交的美国临时申请号62/213,143；于2015年9月2日提交的美国临时申请号62/213,187；和于2016年1月5日提交的美国临时申请号62/274,915；于2016年9月2日提交的pct申请号pct/il16/50965(pct公开号wo17/37717)；于2016年9月2日提交的pct申请号pct/il/16/50966(pct公开号wo17/37718)；于2016年9月2日提交的pct申请号pct/il/16/50968(公开为wo2017/037719)；和于2016年9月2日提交的pct申请号pct/il/16/50969(pct公开号wo17/118698)中的一个或多个的优先权的任何申请或专利中公开或要求保护的所有氨基糖苷。
[0155]
iii类化合物的示例包括但不限于式iv化合物：
[0156][0157]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0158]
虚线表示6’位的立体构型为r构型或s构型；
[0159]
r1是烷基，环烷基，烷芳基，或芳基；
[0160]
r2选自取代或未取代的烷基，or’，和nr’r”，其中r’和r”各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；
[0161]
r4选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和可渗透细胞的基团；以及
[0162]
r3是氢，酰基，或由式v表示的单糖部分：
[0163][0164]
其中：
[0165]
曲线表示连接位置；和
[0166]
r5和r6各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，取代或未取代的杂芳基，酰基，和可渗透细胞的基团，或者，替代地，r5和r6一起形成杂环；
[0167]
其中当r2是羟基时，r4不是氢，ahb，或(r/s)
‑3‑
氨基
‑2‑
羟基丙酸酯/盐(ahp)，和/或r5和/或r6中的至少一个(如果存在)不是氢。
[0168]
如本文所用，“可渗透细胞的基团”是指可增加化合物的细胞渗透性的基团。在一些实施例中，可渗透细胞的基团可包括但不限于选自鸟嘌呤，胍基，胍，肼基，酰肼，硫酰肼，脲，和硫脲的一个或多个基团。
[0169]
在某些实施例中，具有式iv的iii类化合物选自：
[0170]
[0171][0172]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0173]
在某些实施例中，式iv化合物在r3处具有单糖部分，由式iva表示：
[0174][0175]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0176]
其中：
[0177]
虚线表示6’位的立体构型为r构型或s构型；
[0178]
r1是烷基，环烷基，烷芳基，或芳基；
[0179]
r2选自取代或未取代的烷基，or’，和nr’r”，其中r’和r”各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；
[0180]
r4选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和可渗透细胞的基团；
[0181]
曲线表示连接位置；和
[0182]
r5和r6各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，取代或未取代的杂芳基，酰基，和可渗透细胞的基团，或者，替代地，r5和r6一起形成杂环；
[0183]
其中当r2是羟基时，r4不是氢，ahb，或(r/s)
‑3‑
氨基
‑2‑
羟基丙酸酯/盐(ahp)，和/或r5和/或r6中的至少一个(如果存在)不是氢。
[0184]
在某些实施例中，其中式iv化合物在r3处具有单糖部分，由式ivb表示：
[0185][0186]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0187]
虚线表示6’位和/或5”位的立体构型为r构型或s构型；
[0188]
r1选自氢，烷基，环烷基，或芳基；
[0189]
r2选自取代或未取代的烷基，or’，和nr’r”，其中r’和r”各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；
[0190]
r4选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和可渗透细胞的基团；
[0191]
r5和r6各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，取代或未取代的杂芳基，酰基，和可渗透细胞的基团，或者，替代地，r5和r6一起形成杂环；和
[0192]
r7是烷基，环烷基，或芳基，条件是：
[0193]
当r2是羟基时，r4不是氢，ahb，或ahp，和/或r5和/或r6中的至少一个(如果存在)不是氢。
[0194]
在某些实施例中，具有式ivb的iii类化合物选自：
[0195]
[0196][0197]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0198]
iii类化合物的其他示例包括但不限于具有式via的化合物：
[0199][0200]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0201]
虚线表示6’位的立体构型为r构型或s构型；
[0202]
x1是o或s；
[0203]
环i中c4’和c5’之间的虚线键表示单键或双键；
[0204]
环i中c4’和c3’之间的虚线键表示单键或双键；
[0205]
rx，ry1，和rz各自独立地为氢，烷基，环烷基，或不存在，其中当c4’和c5’之间的虚线键是双键时至少rz不存在，且其中当c4’和c3’之间的虚线键是双键时至少ry1不存在；
[0206]
r7‑
r9各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，羧酸酯/盐，磺酰基(包括烷基磺酰基和芳基磺酰基)，和可渗透细胞的基团；
[0207]
ry2‑
ry9和rw1‑
rw3各自独立地选自氢，烷基，烯基，炔基，芳基，杂芳基，和环烷基，各自被取代或未被取代；或者，替代地，各自可以为氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，羧酸酯/盐，磺酰基(包括烷基磺酰基和芳基磺酰基)，或可渗透细胞的基团；
[0208]
r1选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，取代或未取代的胺，取代或未取代的酰胺，酰基，羧酸酯/盐，取代或未取代的饱和羟基烷基(例如，
‑
ch2‑
oh)，和取代或未取代的不饱和羟基烷基(例如，
‑
ch2‑
oh)；
[0209]
r2选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；
[0210]
r3和r4各自独立地选自氢，烷基，烯基，炔基，环烷基，杂脂环族，芳基，杂芳基，胺，和or
16
，其中r
16
独立地选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基，或不存在，其中当c4’和c5’之间的虚线键是双键时，r3任选地不存在，当c4’和c3’之间的虚线键是双键时，r4任选地不存在；和
[0211]
r5和r6各自独立地选自氢，烷基，烯基，炔基，环烷基，杂脂环族，芳基，杂芳基，胺，和or
16
，其中r
16
独立地选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的
烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基。
[0212]
在某些实施例中，式via化合物包含单糖部分，该单糖部分包含式vii所示的结构：
[0213][0214]
其中：
[0215]
曲线表示连接位置；
[0216]
虚线表示5”位的立体构型为r构型或s构型；
[0217]
x2是or
13
或nr
14
r
15
；
[0218]
r
10
，r
11
，和r
13
各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；
[0219]
r
12
选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，取代或未取代的胺，取代或未取代的酰胺，酰基，羧酸酯/盐，和饱和或不饱和的被取代的羟烷基，或饱和或不饱和的未被取代的羟烷基；
[0220]
r
14
和r
15
各自独立地是氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，酰基，或可渗透细胞的基团，或者，替代地，r
14
和r
15
(当存在时)一起形成杂环。
[0221]
式vii中未在如6’位，1”位，2”位，3”位，4”位，和5”位示出的取代基独立地是氢或取代基，例如但不限于，如对ry2‑
ry9所定义的取代基。
[0222]
在某些实施例中，具有式iva的iii类化合物选自：
[0223]
[0224]
[0225][0226]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0227]
在某些实施例中，包含式vii的单糖部分的式via化合物具有式vib所示的结构：
[0228][0229]
iii类化合物的其他示例包括但不限于式vic化合物：
[0230][0231]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0232]
虚线表示6’位的立体构型为r构型或s构型；
[0233]
x1是o或s；
[0234]
rx，ry1，和rz各自独立地为氢，烷基，或环烷基；
[0235]
r7‑
r9各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，羧酸酯/盐，磺酰基(包括烷基磺酰基和芳基磺酰基)，和可渗透细胞的基团；
[0236]
ry2‑
ry9和rw1‑
rw3各自独立地选自氢，烷基，烯基，炔基，芳基，杂芳基，和环烷基，各自被取代或未被取代，或者，替代地，各自可以独立地是氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，羧酸酯/盐，磺酰基(包括烷基磺酰基和芳基磺酰基)，或可渗透细胞的基团；
[0237]
r1是取代或未取代的羟烷基(例如，
‑
ch2‑
oh)；
[0238]
r2选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；和
[0239]
r3和r4各自独立地选自氢，烷基，烯基，炔基，环烷基，杂脂环族，芳基，杂芳基，胺，
和or
16
，其中r
16
独立地选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基，如本文对于式via的任何相应实施例所述。
[0240]
由式vic表示的化合物在本文也称为“含二醇”化合物。在某些实施例中，含二醇化合物选自：
[0241]
[0242][0243]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0244]
iii类化合物的其他示例包括但不限于式vid化合物：
[0245][0246]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0247]
虚线表示6’位的立体构型为r构型或s构型；
[0248]
x1是o或s；
[0249]
r7‑
r9各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取
代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，羧酸酯/盐，磺酰基(包括烷基磺酰基和芳基磺酰基)，和可渗透细胞的基团；
[0250]
rx，ry1‑
ry9，和rw1‑
rw3各自独立地选自氢，烷基，烯基，炔基，芳基，杂芳基，和环烷基，各自被取代或未被取代，或者，替代地，各自可以如本文对于r7‑
r9所定义；
[0251]
r1选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，取代或未取代的胺，取代或未取代的酰胺，酰基，羧酸酯/盐，取代或未取代的饱和羟烷基(例如，
‑
ch2‑
oh)，或取代或未取代的不饱和和/或取代的羟烷基，如本文在式via或vib的任何相应实施例中所述；
[0252]
r2选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基，如本文在式via或vib的任何相应实施例中所述；
[0253]
r4‑
r6各自独立地选自氢，烷基，烯基，炔基，环烷基，杂脂环族，芳基，杂芳基，胺，和or
16
，其中r
16
独立地选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基，如本文在式via或vib的任何相应实施例中所述；和
[0254]
由式vid表示的化合物在本文也称为“含不饱和葡萄糖胺(环i)”化合物。在某些实施例中，含不饱和葡萄糖胺(环i)化合物选自：
[0255][0256]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0257]
iii类化合物的其他示例包括但不限于式vie化合物：
[0258][0259]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0260]
虚线表示6’位的立体构型为r构型或s构型；
[0261]
x1是o或s；
[0262]
rx，ry1，和rz各自独立地为氢，烷基，或环烷基；
[0263]
r7‑
r9各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，羧酸酯/盐，磺酰基(包括烷基磺酰基和芳基磺酰基)，和可渗透细胞的基团，如本文对于式via或vib的任何相应实施例所述；
[0264]
ry2‑
ry9和rw1‑
rw3各自独立地选自氢，烷基，烯基，炔基，芳基，杂芳基，和环烷基，各自被取代或未被取代，或者，替代地，各自可以如本文对于r7‑
r9所定义；
[0265]
r1选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，取代或未取代的胺，取代或未取代的酰胺，酰基，羧酸酯/盐，取代或未取代的饱和羟烷基(例如，
‑
ch2‑
oh)，或取代或未取代的不饱和羟烷基，如本文在式via或vib的任何相应实施例中所述；
[0266]
r2选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基，如本文对于式via所述；
[0267]
r3和r4各自独立地选自氢，烷基，烯基，炔基，环烷基，杂脂环族，芳基，杂芳基，胺，和or
16
，其中r
16
独立地选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，或酰基，如本文对式via的任何相应实施例所述；
[0268]
其中r3‑
r6中的至少一个是or
16
，取代基r2和r3‑
r6中的至少两个是or
16
，并且or
16
是酰基。
[0269]
iii类化合物的其他示例包括但不限于式viii化合物：
[0270][0271]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0272]
虚线表示6’位的立体构型为r构型或s构型；
[0273]
r1选自羟基取代的烷基，羟基取代的烯基，羟基取代的环烷基，和羟基取代的芳基；
[0274]
r2选自氢，取代或未取代的烷基，和or’，其中r’选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；
[0275]
r3‑
r6各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，和or’，其中r’选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；和
[0276]
r7‑
r9各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和可渗透细胞的基团。
[0277]
在某些实施例中，式viii化合物选自nb153和nb155。
[0278]
在某些实施例中，式viii化合物包含单糖部分，该单糖部分具有式ix所示的结构：
[0279][0280]
其中：
[0281]
曲线表示连接位置；
[0282]
虚线表示5”位的立体构型为r构型或s构型；
[0283]
r
10
和r
11
各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；
[0284]
r
12
是氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，或取代或未取代的芳基；
[0285]
r
14
和r
15
各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和可渗透细胞的基
团，或者，替代地，r
14
和r
15
一起形成杂环。
[0286]
在某些实施例中，包含式ix的单糖部分的式viii化合物具有式viiia所示的结构：
[0287][0288]
其中：
[0289]
变量如本文对于式viii和式ix所述，包括其任何组合。
[0290]
在某些实施例中，式viii化合物选自nb156和nb157。
[0291]
iii类化合物的其他示例包括但不限于式x化合物：
[0292][0293]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0294]
虚线表示6’位的任选立体构型为r构型或s构型；
[0295]
r1选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，和取代或未取代的芳基；
[0296]
r2选自氢，取代或未取代的烷基，和or’，其中r’选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；
[0297]
r4‑
r6各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，和or’，其中r’选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；和
[0298]
r7‑
r9各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和可渗透细胞的基团。
[0299]
由式x表示的化合物在本文也称为“含不饱和葡萄糖胺(环i)”化合物。
[0300]
在某些实施例中，其中式x化合物包含单糖部分，该单糖部分是如上定义的式ix的单糖部分。在这些实施例的某些中，式x化合物具有式xa所示的结构：
[0301][0302]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0303]
变量各自独立地如本文在任何相应实施例及其任何组合中所定义。
[0304]
在一些实施例中，r
14
和/或r
15
是被羰基或氧代(即，c＝o)基团取代的烷基(例如，
‑
co(c
15
h
31
))。在一些实施例中，r
14
和r
15
一起形成含氮杂环，例如但不限于，吗啉，哌啶，和哌嗪。在一些实施例中，r
15
和/或r
14
是胍基(胍(guanidinyl)；胍基)。在一些实施例中，r
15
和r
14
独立地为烷基，可渗透细胞的基团，如本文所述，或酰基，例如，α
‑
羟基酰基或氨基取代的α
‑
羟基酰基，如本文所述。r
14
和r
15
(如果存在)包括但不限于氢，(r/s)
‑4‑
氨基
‑2‑
羟基丁酰基(ahb)，(r/s)
‑3‑
氨基
‑2‑
羟基丙酰基(ahp)，5
‑
氨基戊酰基，5
‑
羟基戊酰基，甲酰基，
‑
c(＝o)
‑
o
‑
甲基，
‑
c(＝o)
‑
o
‑
乙基，
‑
c(＝o)
‑
o
‑
苄基，
‑
β
‑
氨基
‑
α
‑
羟基丙酰基，
‑
δ
‑
氨基
‑
α
‑
羟基戊酰基，
‑
β
‑
苄氧基羰基氨基
‑
α
‑
羟基丙酰基，
‑
δ
‑
苄氧基羰基氨基
‑
α
‑
羟基戊酰基，甲基磺酰基，苯磺酰基，苯甲酰基，丙基，异丙基，
‑
(ch2)2nh2，
‑
(ch)3nh2，
‑
ch2ch(nh2)ch3，
‑
(ch4nh2，
‑
(ch2)5nh2，
‑
(ch2)2nh
‑
乙基，
‑
(ch2)2nh(ch2)2nh2，
‑
(ch2)3nh(ch2)3nh2，
‑
(ch2)3nh(ch2)4nh(ch2)3nh2，
‑
ch(
‑
nh2)ch2(oh)，
‑
ch(
‑
oh)ch2(nh2)，
‑
ch(
‑
oh)
‑
(ch2)2(nh2)，
‑
ch(
‑
nh2)
‑
(ch2)2(oh)，
‑
ch(
‑
ch2nh2)
‑
(ch2oh)，
‑
(ch2)4nh(ch2)3nh2，
‑
(ch2)2nh(ch2)2nh(ch2)2nh2，
‑
(ch2)2n(ch2ch2nh2)2，
‑
ch2‑
c(＝o)nh2，
‑
ch(ch3)
‑
c(＝o)nh2，
‑
ch2‑
苯基，
‑
ch(异丙基)
‑
c(＝o)nh2，
‑
ch(苄基)
‑
c(＝o)nh2，
‑
(ch2)2oh，
‑
(ch2)3oh，和
‑
ch(ch2oh)2。
[0305]
在一些实施例中，r7选自氢，(r/s)
‑4‑
氨基
‑2‑
羟基丁酰基(ahb)，(r/s)
‑3‑
氨基
‑2‑
羟基丙酸酯/盐(ahp)，和(r/s)
‑3‑
氨基
‑2‑
羟基丙酰基，5
‑
氨基戊酰基，5
‑
羟基戊酰基，甲酰基，
‑
c(＝o)
‑
o
‑
甲基，
‑
c(＝o)
‑
o
‑
乙基，
‑
c(＝o)
‑
o
‑
苄基，
‑
β
‑
氨基
‑
α
‑
羟基丙酰基，
‑
δ
‑
氨基
‑
α
‑
羟基戊酰基，
‑
β
‑
苄氧基羰基氨基
‑
α
‑
羟基丙酰基，
‑
δ
‑
苄氧基羰基氨基
‑
α
‑
羟基戊酰基，甲基磺酰基，苯磺酰基，苯甲酰基，丙基，异丙基，
‑
(ch2)2nh2，
‑
(ch)3nh2，
‑
ch2ch(nh2)ch3，
‑
(ch)4nh2，
‑
(ch2)5nh2，
‑
(ch2)2nh
‑
乙基，
‑
(ch2)2nh(ch2)2nh2，
‑
(ch2)3nh(ch2)3nh2，
‑
(ch2)3nh(ch2)4nh(ch2)3nh2，
‑
ch(
‑
nh2)ch2(oh)，
‑
ch(
‑
oh)ch2(nh2)，
‑
ch(
‑
oh)
‑
(ch2)2(nh2)，
‑
ch(
‑
nh2)
‑
(ch2)2(oh)，
‑
ch(
‑
ch2nh2)
‑
(ch2oh)，
‑
(ch2)4nh(ch2)3nh2，
‑
(ch2)2nh(ch2)2nh(ch2)2nh2，
‑
(ch2)2n(ch2ch2nh2)2，
‑
ch2‑
c(＝o)nh2，
‑
ch(ch3)
‑
c(＝o)nh2，
‑
ch2‑
苯基，
‑
ch(异丙基)
‑
c(＝o)nh2，
‑
ch(苄基)
‑
c(＝o)nh2，
‑
(ch2)2oh，
‑
(ch2)3oh，和
‑
ch(ch2oh)2。在一些实施例
中，r7是烷基，环烷基，或芳基。在一些实施例中，r7是选自乙基，丙基，异丙基，异丁基，叔丁基，和苄基的烷基。在一些实施例中，r7是氢，酰基，或氨基取代的α
‑
羟基
‑
酰基。在一些实施例中，r7是取代和/或未取代的甲基或乙基。在这些实施例的一些中，甲基或乙基被例如环烷基或芳基取代。在一些实施例中，r7是环烷基，并且环烷基可以是例如，环丙基，环丁基，环戊基，和环己基。在一些实施例中，r7是芳基，并且该芳基可以是例如，取代或未取代的苯基。非限制性示例包括未取代的苯基和甲苯。在一些实施例中，r7是芳基酰基(例如，
‑
c(＝o)
‑
r’，其中r’是芳基，例如，苯)。
[0306]
iv类化合物
[0307]
iv类化合物包括要求于2017年6月5日提交的美国临时申请号62/515,021；和/或于2018年6月5日提交的pct申请号pct/il18/50612的优先权的申请或专利中公开的所有氨基糖苷。
[0308]
iv类化合物的示例包括但不限于式xi化合物：
[0309][0310]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0311]
虚线表示6’位的立体构型为r构型或s构型；
[0312]
r1选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，和取代或未取代的芳基；
[0313]
r2选自氢，取代或未取代的烷基，和orx，其中rx选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，或酰基，或者，替代地，r2是orx并与r3一起形成二恶烷；
[0314]
r3选自氢，取代或未取代的烷基，和ory，其中ry选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基，或者，替代地，r3是ory并与r2一起形成二恶烷；
[0315]
r4‑
r6各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，和orz，其中rz选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；和
[0316]
r7‑
r9各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和磺酰基，
[0317]
条件是r7‑
r9中至少一个是磺酰基。
[0318]
在某些实施例中，其中r7是磺酰基的式xi化合物具有式xia的结构：
[0319][0320]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0321]
r6，r8，和r9如对式xi所定义；和
[0322]
r’选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷芳基，和取代或未取代的芳基；
[0323]
在某些实施例中，式xi化合物是式xi*化合物：
[0324][0325]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0326]
虚线表示6’位的立体构型为r构型或s构型；
[0327]
r1选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，和取代或未取代的芳基；
[0328]
r2是orx，其中rx选自取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，和取代或未取代的烷芳基；
[0329]
r3是ory，其中ry选自取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，和取代或未取代的烷芳基；
[0330]
r4‑
r6各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，和orz，其中rz选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；和
[0331]
r7‑
r9各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和磺酰基，并且其中orx和ory彼此连接使得r2和r3一起形成二恶烷。
[0332]
在某些实施例中，式xi化合物是式xi*a化合物：
[0333][0334]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0335]
r1，r4‑
r6，和r7‑
r9如对式xi*所定义；和
[0336]
rw选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷芳基，和取代或未取代的芳基。
[0337]
在某些实施例中，式xi化合物是式xi*b化合物：
[0338][0339]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0340]
rw，r1，r4‑
r6，r8，和r9如对式xi*所定义；和
[0341]
r’选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷芳基，和取代或未取代的芳基。
[0342]
在某些实施例中，其中式xi化合物包含单糖部分，该单糖部分具有式ix所示的结构。在这些实施例的某些中，化合物具有式xii的结构：
[0343][0344]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0345]
r1‑
r4和r6‑
r9各自如对式x或式xa所定义；和
[0346]
r
10
，r
11
，r
12
，r
14
，和r
15
各自如对式ix所定义。
[0347]
在其中r7是磺酰基的式xii化合物的某些实施例中，该化合物具有式xiia的结构：
[0348][0349]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0350]
r1‑
r4，r6，r8，和r9如对式x或式xa所定义；
[0351]
r
10
，r
11
，r
12
，r
14
，和r
15
如对式ix所定义；和
[0352]
r’选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷芳基，和取代或未取代的芳基。
[0353]
在某些实施例中，式xiia化合物选自：
[0354]
[0355][0356]
及其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0357]
在其中r5是orz并且rz是由式ix表示的单糖部分的式xii化合物的某些实施例中，该化合物具有式xii*的结构：
[0358][0359]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0360]
r1‑
r4和r6‑
r9各自如对式x*或x*a或x*b所定义；和
[0361]
r
10
，r
11
，r
12
，r
14
，和r
15
各自如对式xi所定义。
[0362]
在式xii化合物的某些实施例中，其中该化合物包含二恶烷并且二恶烷是取代或未取代的1，3
‑
二恶烷，该化合物具有式xii*a的结构：
[0363][0364]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0365]
r1，r4，r6，和r7‑
r9如对式x*或x*a或x*b所定义；
[0366]
r
10
，r
11
，r
12
，r
14
，和r
15
各自如对式xi所定义；和
[0367]
rw选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷芳基，和取代或未取代的芳基。
[0368]
在其中式xii化合物包含二恶烷并且二恶烷是取代或未取代的1，3
‑
二恶烷的其他实施例中，该化合物具有式xii*b的结构：
[0369][0370]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0371]
rw，r1，r4，r6，r8，和r9如对式x*b所定义；
[0372]
r
10
，r
11
，r
12
，r
14
，和r
15
如对式ix所定义；和
[0373]
r’选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷芳基，和取代或未取代的芳基。
[0374]
iv类化合物的其他示例包括但不限于式xiii化合物：
[0375][0376]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0377]
y是氧或硫；
[0378]
r
16
选自氢，胺，和orq；
[0379]
rq选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，和取代或未取代的烷芳基；
[0380]
r3‑
r6各自独立地选自氢，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷基，和orz，其中rz选自氢，单糖部分，寡糖部分，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；和
[0381]
r7‑
r9各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和磺酰基。
[0382]
在某些实施例中，式xiii化合物选自：
[0383][0384]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0385]
在式xiii化合物的某些实施例中，其中r5是orz，并且rz是由式xi表示的单糖部分，该化合物具有式xiiia的结构：
[0386][0387]
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
[0388]
虚线表示5”位的立体构型各自独立地为r构型或s构型；
[0389]
y，r3，r4，和r6‑
r9各自如对式xiii所定义；
[0390]
r
10
和r
11
各自独立地选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，和酰基；
[0391]
r
12
选自氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，和取代或未取代的芳基；和
[0392]
r
14
和r
15
各自独立地选自氢，酰基，氨基取代的α
‑
羟基酰基，取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的烷芳基，磺酰基，和可渗透细胞的基团，或者，替代地，r
14
和r
15
一起形成杂环。
[0393]
在某些实施例中，式xiiia化合物选自：
[0394]
[0395][0396]
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
[0397]
施用途径
[0398]
一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或其药学制剂，可通过本领域已知的任何合适的施用路径递送给受试者，包括但不限于玻璃体内注射(ivi)施用和外用。
[0399]
玻璃体内注射是一种经批准的视网膜药物(例如，庆大霉素)施用方式。人的玻璃体内药代动力学数据显示庆大霉素的半衰期约为40
‑
60小时。玻璃体内施用的不同氨基糖苷的耐受性有限。在全身给药后，氨基糖苷和/或其衍生物被视网膜组织吸收受限。眼部递送可以避免与全身暴露相关联的安全问题。本文公开的氨基糖苷和/或其衍生物的读出活性和物理性质可以经由眼部注射达到治疗效果。在某些实施例中，usher综合征可以通过玻璃体内注射进行治疗。
[0400]
外用是将药剂施用至眼睛的另一种常见途径。氨基糖苷(如妥布霉素)通过这种途径给药。可以使用任何合适的制剂，如在室温下稳定的溶液或软膏。在某些实施例中，无虹膜症可以通过外用进行治疗。
[0401]
试剂盒
[0402]
本文在某些实施例中提供了用于实施本文公开的方法的试剂盒。在某些实施例中，该试剂盒包含一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物，或包含此类氨基糖苷和/或其衍生物的一种或多种药学制剂。在某些实施例中，该试剂盒还包含一种或多种另外的治疗剂或其药学制剂。在其中该试剂盒包含两种或更多种化合物，例如，两种或更多种氨基糖苷和/或其衍生物或氨基糖苷或其衍生物和另外的治疗剂的那些实施例中，该两种或更多种化合
物可以用单一组合物或分开的组合物存在于该试剂盒中。在某些实施例中，该试剂盒包含有形介质中的说明。
[0403]
前述和以下工作示例仅旨在说明本发明的多种实施例。上面讨论的具体修改不应被解释为对本发明范围的限制。对本领域技术人员而言将显而易见的是，在不脱离本发明范围的情况下可以做出多种等同，改变，和修改，并且应当理解，此类等同实施例将被包括在本文中。本文引用的所有参考文献均通过引用并入，如同在本文完全阐述。
[0404]
示例
[0405]
示例1：生物相容性和药代动力学/药效动力学分析
[0406]
评估了氨基糖苷nb30，nb54/化合物37，nb84/elx
‑
03，nb122/elx
‑
01，nb124/elx
‑
02，nb127/elx
‑
04，nb118/elx
‑
05，和nb128/elx
‑
06在源自患者的细胞系和啮齿动物模型中的生物相容性和药代动力学/药效动力学特征。总体而言，这些研究表明，与庆大霉素和g418相比，所测试的氨基糖苷中的每一个均具有增加的耐受性特征。庆大霉素和g418已被报道具有剂量限制性视网膜毒性，而玻璃体内注射所测试的氨基糖苷产生等于或优于读出阈值的视网膜暴露没有在使用庆大霉素和g418时观察到的对染色和视网膜结构的影响。
[0407]
为了确定眼部安全参数，进行了内毒素(eu)测试，并建立了≤0.2eu/ml的视网膜暴露阈值。
[0408]
在视网膜培养物中评估了nb30，nb54，nb84，nb122，nb124，和nb127的细胞毒性。nb30和nb54的染色特征与未处理的视网膜培养物相比没有显著差异，表明nb30和nb54具有良好的细胞毒性特征。
[0409]
在进一步的细胞毒性研究中，如通过erg和组织病理学测量，对nb84，nb118，和nb122玻璃体内剂量高达600μg/ml的体内眼部耐受性进行了测试，该值远优于庆大霉素。
[0410]
然后评估了玻璃体内注射nb118与庆大霉素相比的生物相容性和药代动力学/药效动力学特征。在健康的新西兰白兔中筛选单剂量耐受性，并根据erg和组织学进行评估。在单次注射300μg或600μg氨基糖苷前和后9天测量暗适应振荡电位和明视b波振幅，如图2所示。注射庆大霉素导致振荡电位峰消融和b波电位中度降低，而注射nb118显示被保留的erg(数据代表组平均值)。如图2所示，对振幅或隐含期(implicit times)的影响最小，甚至没有，表明玻璃体内施用nb118后视网膜没有不利的功能变化。
[0411]
图3描绘了兔视网膜组织的苏木精和伊红(h&e)染色切片，表明玻璃体内施用nb118不会在兔视网膜中产生不利的解剖学变化，并且视网膜结构保持完整。结果由兽医病理学家证实。
[0412]
nb124的药代动力学特征使用健康的荷兰束带(dutch
‑
belted)兔进行评估。给兔注射100μg nb124并跟踪192小时。如图4所示，在3小时观察到峰值视网膜暴露，并发现覆盖化合物半数最大抑制浓度(ic50)超过48小时。总体而言，结果支持玻璃体内施用任何nb124的有利治疗指标。
[0413]
当通过玻璃体内注射施用时，与庆大霉素相比，nb122在肉眼眼科检查和erg中具有良好的耐受性。
[0414]
示例2：与usher综合征相关联的无义突变的读出活性
[0415]
评估了nb122/elx
‑
01，nb84/elx
‑
03，nb127/elx
‑
04，nb118/elx
‑
05，nb128/elx
‑
06，nb124
‑
mes/elx
‑
07，和nb157/elx
‑
10诱导与usher综合征相关联的无义突变的读出的能
力。总体而言，这些研究表明，所测试的氨基糖苷在无细胞试验和体外细胞模型中均能抑制与usher综合征相关联的无义突变，并且这些影响扩展到不同的usher相关联基因突变。
[0416]
usher综合征与许多无义突变相关联，包括但不限于与适应症ush1和ush2相关联的突变。
[0417]
表1.与usher综合征相关联的无义突变
[0418]
适应症基因基因频率ns频率ush1bmyo7a～60％～35％ush1dcdh23～15％～15％ush1fpcdh15～10％～40％ush2aush2a～80％～35％ush2cgpr98～5％～35％
[0419]
无细胞读出试验。在无细胞试验中评估了nb84和nb127诱导ush1f无义突变r3x和r245x读出的能力。如图5a
‑
b所示，与g418和庆大霉素相比，两种化合物均诱导了显著的读出。
[0420]
体外基于细胞的试验。接下来使用hek293细胞在体外试验中测试了nb84和nb127，以确定是否可以在细胞环境中实现类似的读出活性。体外试验显示两种化合物在细胞中诱导了显著的读出，在较高浓度下具有更大程度的读出(图6a
‑
b)。
[0421]
然后进行体外试验以确定使用其他氨基糖苷是否可以实现相同的剂量依赖性抑制。这种体外试验使用基于质粒的双荧光素酶方法。包括usher综合征无义突变的短序列被克隆到renilla和firefly荧光素酶报告基因之间的接头区域，并将质粒瞬时转染至hela细胞以评估化合物读出。该模型允许对疾病特异性突变的读出潜力进行早期评估。使用ush2a和ush1f突变评估读出活性。
[0422]
评估了nb122，nb124，nb84，nb127，nb118，nb128，nb124
‑
mes，和nb157诱导ush2a突变r626x和ush1f pcdh15突变r3x读出的能力。nb84，nb127，nb118，nb128，nb124
‑
mes，和nb157各自诱导了ush2a和ush1f突变的显著读出(分别为图7和图8)。比较研究表明，每种氨基糖苷的读出百分比显著高于庆大霉素(图9和表2)。此外，nb122，nb124，nb84，nb118，和nb128的读出诱导表现出剂量依赖性(分别为图10和11)。nb122的施用导致比天然读出增加了2.5倍，这表示r3x的读出率为2.7％。
[0423]
表2.usher突变ush2a和ush1f的读出活性比较
[0424][0425]
基于蛋白质的读出试验。评估了nb122，nb124，nb84，nb118，和nb128在dms114细胞中基于蛋白质的读出潜力，其在人tp53中具有天然r213x无义突变，如图12中方案所示。图13示出了在施用nb128和nb84之后用于检测全长p53的代表性western印迹。与通过光密度测定法的laminb1上样对照相比，对检测进行量化，如图14所示。测量处于细胞核的p53的高通量免疫荧光试验如图15所示，并对nb84进行了剂量依赖性研究。最后，图16提供了nb122，nb124，nb84，nb118，和nb128的全剂量反应曲线，其中误差线代表标准偏差(sd)。总之，这些数据通过蛋白质表达测量证实nb122，nb124，nb84，nb118，和nb128诱导剂量依赖性无义突变读出。
[0426]
使用ush1c无义突变评估了这些化合物诱导与usher综合征相关联的无义突变的蛋白质表达的能力。评估了nb84，nb122，nb124，和nb127对ush1c无义突变r155x的读出，如图17所示，与庆大霉素和媒介物对照相比，所有四种化合物都增加了蛋白质表达。
[0427]
示例3：玻璃体内施用后的读出活性
[0428]
在动物模型中评估了玻璃体内注射氨基糖苷后的读出活性。发现玻璃体内注射入小鼠模型的后段(即，眼后)诱导与usher综合征相关联的无义突变的显著读出活性。因此，与传统氨基糖苷(如庆大霉素)相比，所测试的氨基糖苷不仅表现出优异的耐受性特征，而且还表现出显著提高的读出活性。
[0429]
白化小鼠(sjl/j小鼠)在oca2基因中含有无义突变r262x，导致黑素细胞中缺乏黑色素的产生。当通过玻璃体内注射施用时，该模型提供了对眼后化合物有效性的初步评估
‑
黑色素浓度越高，读出活性越大。图18示出了sjl/j小鼠玻璃体内注射的示意图。用庆大霉素确定参考对照条件的初步研究(如图19所示)表明了0.2μg庆大霉素显著(即，t检验相对媒介物对照)增加黑色素，在0.5μg时观察到毒性。
[0430]
在玻璃体内注射入sjl/j小鼠后，评估了nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb84，nb118，nb127，nb128，和nb157的读出活性。图20
‑
21示出了每种化合物相对于庆大霉素的玻璃体内读出。这些数据表明，在施用nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb84，nb118，nb127，nb128，和nb157后，眼睛中黑色素的产生呈剂量依赖性增加，表明这些化合物能够诱导玻璃体内施用后眼睛中的读出活性。
[0431]
从前述可以理解，本发明的特定实施例已经在本文出于说明的目的进行了描述，但是在不偏离本发明的范围的情况下可以进行多种修改。因此，除所附权利要求外，本发明不受限制。
[0432]
段落a。一种治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷，该一种或多种氨基糖苷选自nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157。
[0433]
段落b。一种治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷，其中所述一种或多种无义突变选自r3x(pcdh11)，r155x(ush1c)，r245x(pcdh15)，和r626x(ush2a)。
[0434]
段落c。一种治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的方法，包括向所述受试者玻璃体内施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷。
[0435]
段落d。一种治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的方法，包括向所述受试者玻璃体内施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷，其中该一种或多种氨基糖苷诱导读出活性而不超过该一种或多种氨基糖苷的安全暴露阈值。
[0436]
段落e。一种治疗有需要的受试者的usher综合征的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷。
[0437]
段落f。根据段落a和c
‑
e中任一项所述的方法，其中所述受试者在pcdh11基因中具有r3x，r245x，或在ush1c基因中具有r155x无义突变。
[0438]
段落g。根据段落a和c
‑
f中任一项所述的方法，其中所述受试者具有ush2a基因的r626x无义突变。
[0439]
段落h。根据段落a
‑
g中任一项所述的方法，其中向所述受试者施用约0.3mg/kg至约2.5mg/kg的所述一种或多种氨基糖苷。
[0440]
段落i。根据段落a，b，或e中任一项所述的方法，其中一种或多种氨基糖苷通过玻璃体内注射施用。
[0441]
段落j。根据段落a
‑
i中任一项所述的方法，其中将一种或多种氨基糖苷配制成药学组合物。
[0442]
段落k。根据段落j所述的方法，其中药学组合物还包含一种或多种药学上可接受的载体。
[0443]
段落l。根据段落a
‑
d中任一项所述的方法，其中与一种或多种无义突变相关联的眼部疾病包括遗传性视网膜疾病，视网膜色素变性，usher综合征，stickler综合征，无虹膜症，leber先天性黑蒙，和无脉络膜症。
[0444]
段落m。一种增加视网膜细胞中的基因表达或基因读出的方法，包括使视网膜细胞与一种或多种氨基糖苷，或包含一种或多种氨基糖苷的药学制剂接触，其中基因表达或基因读出受到一种或多种无义突变的不利影响。
[0445]
段落n。根据段落m所述的方法，其中细胞离体接触。
[0446]
段落o。根据段落m所述的方法，其中细胞在体内接触。
[0447]
段落p。根据段落m
‑
o中任一项所述的方法，其中一种或多种氨基糖苷选自i类化合物，ii类化合物，iii类化合物，iv类化合物，和vi类化合物。
[0448]
段落q。根据段落m
‑
p中任一项所述的方法，其中一种或多种氨基糖苷包括nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128.和nb157。
[0449]
段落r。一种包含一种或多种氨基糖苷的制剂，用于治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病。
[0450]
段落s。一种包含一种或多种氨基糖苷的制剂，用于治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病，其中所述制剂用于玻璃体内施用。
[0451]
段落t。根据段落r或s所述的制剂，其中所述制剂是药学制剂。
[0452]
段落u。根据段落t所述的制剂，还包含一种或多种药学上可接受的载体。
[0453]
段落v。根据段落r
‑
u中任一项所述的制剂，其中所述一种或多种氨基糖苷选自i类化合物，ii类化合物，iii类化合物，iv类化合物，和vi类化合物。
[0454]
段落w。根据段落r
‑
v中任一项所述的制剂，其中其一种或多种氨基糖苷包括nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157。
[0455]
段落x。一种包含一种或多种氨基糖苷的试剂盒，用于治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病或用于增加细胞中的基因表达。
[0456]
段落y。根据段落x所述的试剂盒，还包含使用说明。
[0457]
段落z。根据段落x或y所述的试剂盒，其中所述一种或多种氨基糖苷选自i类化合物，ii类化合物，iii类化合物，iv类化合物，和vi类化合物。
[0458]
段落ab。根据段落x
‑
z所述的试剂盒，其中一种或多种氨基糖苷包括nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157。
[0459]
段落ac。一种或多种氨基糖苷，用于配制用于治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的药物。
[0460]
段落ad。根据段落ac所述的一种或多种氨基糖苷，其中一种或多种氨基糖苷和/或其衍生物选自i类化合物，ii类化合物，iii类化合物，iv类化合物，和vi类化合物。
[0461]
段落ae。根据段落ac或ad所述的一种或多种氨基糖苷，包括nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157。
[0462]
段落af。一种治疗与受试者中的一种或多种无义突变相关联的眼部疾病的方法，包括向所述受试者玻璃体内施用治疗有效量的一种或多种氨基糖苷，该一种或多种氨基糖苷选自nb30，nb54，nb84，nb118，nb122，nb124，nb124
‑
mes，nb127，nb128，和nb157，其中所述一种或多种无义突变选自r3x(pcdh11)，r155x(ush1c)，r245x(pcdh15)，和r626x(ush2a)。
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