使用编码阿柏西普的aav2变体治疗眼新血管疾病的方法1.相关申请的交叉引用2.本技术要求2019年9月11日提交的美国临时专利申请号62/899,070和2019年10月10日提交的美国临时专利申请号62/913,648的权益，将其各自的公开内容通过通过引用整体并入本文。3.ascii文本文件的序列表的提交4.将以下提交的ascii文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读形式(crf)(文件名称：627002001240seqlist.txt，记录日期：2019年11月18日，大小：29kb)。
技术领域：
：5.本公开内容涉及治疗个体中的眼新血管疾病和病症的方法，其包括向个体的眼部施用单一单位剂量的编码抗-vegf试剂(例如，阿柏西普(flibercept))重组腺相关病毒(raav)颗粒。
背景技术：
：：6.年龄相关性黄斑变性(amd)是一种影响黄斑的退化性眼病，黄斑是视网膜中心负责阅读和精细视力的光敏小区域。影响黄斑的病症降低中心视力，同时保持周边视力不变。在严重的情况下，该疾病可以导致中心失明。amd是美国65岁及以上人群中视力丧失的主要原因，并且在40岁以上人群中任何amd的估计患病率为约6.5％(kleinetal.,(2011)archophthalmol,129(1):75-80)。新血管或渗出性或湿性amd(namd、wamd或namd)是amd的晚期形式。wamd的标志是脉络膜新生血管(cnv)，其是视网膜中来自下脉络膜层的异常血管浸润，导致视网膜细胞损伤和中心失明。这种异常的血管生成过程由生长因子，特别是血管内皮生长因子(vegf)调节。7.wamd的标准护理是一类结合并螯合vegf的分子，例如雷珠单抗(lucentis)和阿柏西普(eylea)。例如，阿柏西普是一种重组融合蛋白，其充当血管内皮生长因子亚型a和b(vegf-a和vegf-b)和胎盘生长因子(pgf)的诱饵受体。通过结合这些配体，阿柏西普能够阻止它们与血管内皮生长因子受体(vegfr)、vegfr-1和vegfr-2结合，从而抑制新血管形成和降低血管通透性。阿柏西普由与igg1的fc片段融合的vegfr-1的结构域2和vegfr-2的结构域3组成。8.目前标准的标准护理抗vegf试剂需要每4至8周经由玻璃体内注射(ivt)重新施用，以实现最佳的治疗结果并保持视力。依从这样的方案对于患者、其护理者和保健系统来说是繁重的，并且大多数患者随时间推移不能依从最佳疗法，这与视力丧失相关(khananiam,etal.)。此外，还存在并发症，包括眼内炎、视网膜脱离、外伤性白内障和眼内压(iop)升高；这些并发症的风险可能随着重复ivt注射而增加(falavarjanietal.,(2013)eye(lond),27(7):787-794)。9.因此，本领域需要有效、降低副作用的风险并适合高长期患者依从性的眼新生血管疾病如wamd的疗法。10.发明简述11.在一个方面，本文提供一种用于治疗个体中的眼新血管疾病的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的约6×1011个载体基因组(vg)或更少的重组腺相关病毒(raav)颗粒，其中所述个体是人，并且其中所述raav颗粒包含：(a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列，和(b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno：14)，其中所述氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，所述方法包括减少个体的眼睛中的视网膜液体。12.在另一个方面，本文提供一种用于减少患有眼新血管疾病的个体眼睛中的视网膜液体的方法，所述方法包括向所述个体的一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒，其中所述个体是人，并且其中所述raav颗粒包含：(a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列，和(b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno：14)，其中所述氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，所述个体在施用单位剂量的raav颗粒之前约最后12周已接受至少一种抗vegf试剂的治疗。在一些实施方案中，所述个体的一只眼睛中的视网膜液体的量或存在对使用抗vegf试剂的先前治疗是难治性的。在一些实施方案中，所述抗vegf试剂是阿柏西普。在一些实施方案中，一只眼睛中的视网膜流体减少至少约60％。在一些实施方案中，与将raav施用至个体之前个体的一只眼睛中的视网膜液体水平相比，一只眼睛中的视网膜液体减少约80％。在一些实施方案中，视网膜流体是视网膜下流体(srf)或视网膜内流体(irf)。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为每只眼睛约6×1011个载体基因组(vg/眼睛)或更少。13.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为每只眼睛约6×1010至约2×1011个载体基因组(vg/眼睛)。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为每只眼睛约2×1011或约6×1010个载体基因组(vg/眼)。14.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，本文提供的方法进一步包括向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至多约2周。在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒包含与向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒相同或更少的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至少约2周。在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒包含比向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒更多的载体基因组/眼睛(vg/眼睛)。15.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，多肽包含seqidno：35的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽是阿柏西普。16.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，核酸进一步包含第一增强子区、启动子区、5'utr区、第二增强子区和聚腺苷酸化位点。在一些实施方案中，核酸以5'至3'顺序包含：(a)第一增强子区；(b)启动子区；(c)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列；(d)5'utr区；(e)第二增强子区；和(f)聚腺苷酸化位点。在一些实施方案中，第一增强子区包含含有seqidno：22的序列或与其具有至少85％同一性的序列的cmv序列。在一些实施方案中，启动子区包含含有seqidno：23的序列或与其具有至少85％同一性的序列的cmv序列。在一些实施方案中，多肽包含seqidno：35的氨基酸序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，多肽是阿柏西普。在一些实施方案中，5'utr区以5'至3'顺序包含tpl序列和emlp序列，所述tpl序列包含seqidno：24的序列或与其具有至少85％同一性的序列，所述emlp序列包含seqidno：25的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，第二增强子区包含完整ees序列，所述完整ees序列包含seqidno：26的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，聚腺苷酸化位点包含含有seqidno：27的序列或与其具有至少85％同一性的序列的hgh聚腺苷酸化位点。在一些实施方案中，所述核酸进一步包含(a)第一增强子区，其包含含有seqidno：22的序列或与其具有至少85％同一性的序列的cmv序列；(b)启动子区，其包含含有seqidno：23的序列或与其具有至少85％一致性的序列的cmv序列；(c)5'utr区，其以5'至3'顺序包含tpl序列和emlp序列，所述tpl序列包含seqidno:24的序列或与其具有85％同一性的序列，所述emlp序列包含seqidno:25的序列或与其具有85％同一性的序列；(d)第二增强子区，其包含完整ees序列，所述完整ees序列包含seqidno：26的序列或与其具有至少85％同一性的序列；和(e)hgh聚腺苷酸化位点，其包含seqidno：27的序列或与其具有至少85％同一性的序列。在一些实施方案中，所述核酸包含侧接所述元件的aavitr。17.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，aav2衣壳蛋白包含插入在包含seqidno：13的序列的aav2vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno：14)。在一些实施方案中，aav2衣壳蛋白包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，aav2衣壳蛋白包含插入在包含seqidno：13序列的aav2vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)。18.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是通过玻璃体内施用。19.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为药物制剂形式。在一些实施方案中，药物制剂包含raav颗粒、氯化钠、磷酸钠和表面活性剂。在一些实施方案中，药物制剂包含每ml(vg/ml)raav的颗粒约150至约200mm的氯化钠、约1至约10mm的磷酸二氢钠、约1至约10mm的磷酸氢二钠、约0.0005％(w/v)至约0.005％(w/v)的泊洛沙姆188和约6×1013至约6×1010个载体基因组/ml(vg/ml)，其中所述药物制剂具有约7.0至约7.5的ph。在一些实施方案中，所述药物制剂包含约180mm的氯化钠、约5mm的磷酸二氢钠、约5mm的磷酸氢二钠、约6×1012vg/ml的所述raav颗粒和约0.001％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.3的ph。在一些实施方案中，所述药物制剂包含约180mm的氯化钠、约5mm的磷酸二氢钠、约5mm的磷酸氢二钠、约6×1011vg/ml的raav颗粒和约0.001％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.3的ph。20.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约25μl至约250μl的体积。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约100μl的体积。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约30μl的体积。21.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，所述个体接受了使用抗vegf试剂对眼新血管疾病的先前治疗。在一些实施方案中，抗vegf试剂是阿柏西普。22.在可以与前述实施方案中的任一个组合的一些实施方案中，眼新生血管疾病是湿性年龄相关性黄斑变性(amd)、视网膜新生血管形成、脉络膜新血管形成糖尿病性视网膜病变、增殖性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、中央视网膜静脉阻塞、分支视网膜静脉阻塞、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、缺血性视网膜病、糖尿病性视网膜水肿或其任意组合。23.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，将单位剂量的raav颗粒与类固醇治疗组合施用。在一些实施方案中，类固醇治疗是皮质类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗是全身性类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗是口服类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗是泼尼松治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗是局部类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗是二氟泼尼酯治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用类固醇。24.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，类固醇治疗是局部类固醇治疗，并且局部类固醇治疗是从施用单位剂量的raav颗粒起持续至多约4周、至多约6周或至多约8周的每日类固醇治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括在约第1周约四次施用局部类固醇，在约第2周约三次施用局部类固醇，在约第3周约两次施用局部类固醇，和在约第4周约一次施用局部类固醇；从施用单位剂量的raav颗粒开始和之后计时。在一些实施方案中，所述局部类固醇包含约1μg至约3μg剂量的二氟泼尼酯0.05％。在一些实施方案中，所述局部类固醇包含约2.5μg剂量的二氟泼尼酯0.05％。25.在可以与任一项前述实施方案组合的实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛引起视网膜厚度的维持或减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起视网膜厚度的减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，视网膜厚度的减少是至少约10％。在一些实施方案中，视网膜厚度为中央亚视场厚度(cst)或中心视网膜厚度(crt)。26.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛引起黄斑体积的维持或减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛导致黄斑体积的减小。在一些实施方案中，与施用单位剂量raav颗粒之前的黄斑体积相比，黄斑体积的减少是至少约10％。27.在可以与任一项前述实施方案组合的一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视力相比，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛引起视力的维持或改善。在一些实施方案中，其中与施用单位剂量的raav颗粒之前的视力相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起视力的维持或改善。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视力相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起视力的改善。在一些实施方案中，视力是最佳矫正视力(bcva)。28.通过参考并入29.本文引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物，均以其整体引入作为参考并入。30.附图简述31.本发明的新颖特征在所附权利要求中具体阐述。通过参考以下详细描述和附图，将获得对本发明的特征和优点的更好理解，以下详细描述阐述了利用本发明的原理的说明性实施例，附图中：32.图1a-1b提供实施例1和2中描述的研究性医药产品和i期研究的示意图。图1a是aav2.7m8-阿柏西普的示意图。aav2.7m8-阿柏西普是一种重组的复制缺陷型腺相关病毒(raav)载体，其含有aav2.7m8蛋白衣壳和载体基因组，所述载体基因组含有在遍在性嵌合启动子(c11)控制下的密码子优化形式的阿柏西普cdna的表达盒。aav2.7m8-阿柏西普载体基因组还含有侧接阿柏西普cdna表达盒的两个aav2反向末端重复序列(itr)。图1b是概述实施例1和2中描述的i期研究的研究设计的图。33.图2a-2l显示光学相干断层扫描(oct)图像和视网膜厚度图，其来源于从实施例1所述研究的群组1中受试者采集的oct图像。oct图像是在施用aav2.7m8-阿柏西普(第1天)之前和之后的指定时间采集的。对所有受试者都指明了抗vegf-ivt治疗间隔。图2a提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射之前指定的时间在五次诊所就诊(officevisits)时从受试者1采集的。oct图像是在用阿柏西普标准护理治疗之前立即采集的。受试者1每5-7周需要阿柏西普ivt，并显示难治性视网膜下流体和色素上皮脱离(ped)，尽管阿柏西普是护理治疗的标准。图2b提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射(第7天)、在aav2.7m8-阿柏西普注射(第1天)和在所指定时间的随访就诊时从受试者1采集的。受试者1在注射aav2.7m8-阿柏西普之后不需要任何救援注射。受试者1在第4周开始时显示出视网膜下流体消退，保持不含视网膜下和视网膜内流体(保持干燥)。图2c提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射之前指定的时间在五次诊所就诊时从受试者2采集的。oct图像是在用阿柏西普标准护理治疗之前立即采集的。受试者2在aav2.7m8-阿柏西普治疗之前的8个月中需要六次阿柏西普ivt治疗以保持视网膜解剖学。图2d提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射(第-7天)、在aav2.7m8-阿柏西普注射(第1天)和在指定时间的随访就诊时从受试者2采集的。受试者2在注射aav2.7m8-阿柏西普之后不需要任何救援注射。受试者2显示出没有视网膜下或视网膜内流体的稳定的视网膜解剖学直至第24周。图2e提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射之前指定的时间在四次诊所就诊时从受试者3采集的。在第-27周采集的oct图像未显示。oct图像是在用阿柏西普标准护理治疗之前立即采集的。受试者3显示视网膜下流体，该液体当阿柏西普ivt之间的间隔从5周增加至7周时增加。图2f提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射(第-7天)、在aav3.7m8-阿柏西普注射(第1天)和在指定时间的随访就诊时从受试者3采集的。受试者3在注射aav2.7m8-阿柏西普之后不需要任何救援注射。受试者3在第8周显示出难治性视网膜下流体的消退，以及稳定的视网膜解剖学直至第24周。图2g提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射之前指定的时间在五次就诊时从受试者4采集的。oct图像是在用雷珠单抗0.5mgivt标准护理治疗之前立即采集的。受试者4显示出雷珠单抗ivt注射剂难治性的视网膜下流体。图2h提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射(第-14天)、在aav2.7m8-阿柏西普注射(第1天)和在指定时间的随访就诊时从受试者4采集的。受试者4在注射aav2.7m8-阿柏西普之后不需要任何救援注射。受试者4在第8周显示出难治性视网膜下流体的消退，以及稳定的视网膜解剖学直至第24周。图2i提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射之前指定的时间在五次就诊时从受试者5采集的。oct图像是在用阿柏西普标准护理治疗之前立即采集的。图2j提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射(第-14天)、在aav2.7m8-阿柏西普注射(第1天)和在指定时间的随访就诊时从受试者5采集的。受试者5在注射aav2.7m8-阿柏西普之后不需要任何救援注射。在aav2.7m8-阿柏西普治疗时存在的视网膜下流体和ped随时间消退，并且视网膜解剖学保持稳定并且不含视网膜下或视网膜内流体直至第24周。图2k提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射之前指定的时间在五次就诊时从受试者6获得的。oct图像是在用贝伐单抗1.5mgivt标准护理或雷珠单抗0.5mgivt标准护理(如指出的)治疗之前立即采集的。受试者6的视网膜的外观与息肉状脉络膜血管病变(pcv)一致。图2l提供oct图像和从oct图像获得的视网膜厚度图，所述oct图像是在筛选阿柏西普注射(第-10天)、在aav2.7m8-阿柏西普注射(第1天)和在指定时间的随访就诊时从受试者6采集的。受试者6在注射aav2.7m8-阿柏西普之后不需要任何救援注射。受试者6未显示出视网膜下流体的任何增加，且实现一些解剖学改善直至第24周。受试者6的对侧眼睛在试验过程中每4周接受标准护理阿柏西普注射，并显示出与aav2.7m8-阿柏西普治疗的眼睛类似的视网膜形态。34.图3显示在指定时间点，实施例1中所述研究的群组1中受试者的平均中心视网膜厚度(cst)的变化。误差条表示使用t分布计算的90％置信区间。基线(bl)表示在第1天aav2.7m8-阿柏西普治疗之前7-15天(例如7-14天)筛选阿柏西普注射之前进行的测量。在aav2.7m8-阿柏西普治疗之后24周，受试者平均显示crt变化-52.7μm(90％ci-86.5，-18.8)。bl＝基线；d＝天；w＝周。第1天的就诊发生在基线就诊之后7-14天。35.图4显示在指定时间点，对于实施例1中所述研究的群组1中的受试者基于早期治疗糖尿病性视网膜病研究(etdrs)字母评估的平均最佳矫正视力(bcva)测量。误差条表示使用t-分布计算的90％置信区间。基线(bl)表示在第1天aaav2.7m8-阿柏西普治疗之前7-15天(例如7-14天)筛选阿柏西普注射之前进行的测量。在aav2.7m8-阿柏西普治疗之后24周，受试者平均显示出-2个字母的bcva变化(90％ci-9.1，5.1)。bl＝基线；d＝天；w＝周。第1天的就诊发生在基线就诊之后7-14天。36.图5提供阿柏西普的核酸序列(seqidno：36)。37.图6显示了实施例1中描述的研究的受试者1-6用aav2.7m8-阿柏西普治疗之后前房细胞和玻璃体细胞计数的图。在每个图下指示对每个患者施用的类固醇治疗。房水细胞计数类别是基于葡萄膜炎命名标准(sun)的标准化(jabs,daetal.,jophthalmol.2005；140:509–516)。玻璃体细胞计数类别是基于国家卫生研究所(nih)指南。对于水性细胞，0.5+的细胞计数值表示1-5个细胞；细胞计数值1+表示6-15个细胞；细胞计数值2+表示16-25个细胞；细胞计数值3+表示26-50个细胞；而4+的细胞计数值指示＞50个细胞。对于玻璃体细胞，0.5+的细胞计数值表示1-10个细胞；细胞计数值1+表示11-20个细胞；细胞计数值2+表示21-30个细胞；细胞计数值3+表示31-100个细胞；和细胞计数值4+表示＞100个细胞。捕获0.5+的稀有细胞用于显示在该图中的分析。38.图7a-7b显示光学相干断层扫描(oct)图像和视网膜厚度图，所述oct图像示在34周的中位随访时间时从实施例1中所述研究的群组1中的受试者1-6采集的。此外，还提供每名受试者1-6的bcva相对于基线的变化、在施用aav2.7m8-阿柏西普之前的8个月内的抗vegfivt注射次数、以及在研究期间施用的救援抗vegf-ivt注射的次数。指示在其期间获得每个受试者的oct图像和视网膜厚度图的实际周数(受试者1＝第44周；受试者2＝第40周；受试者3＝第36周；受试者4＝第32周；受试者5＝第28周；和受试者6＝第28周)。在研究期间没有受试者需要救援抗vegf-ivt注射，并且在直至第44周的随访期期间的任何时间点都没有满足再治疗标准。没有受试者在oct成像上显示出疾病再激活的迹象。39.详细说明40.下面参考实施例应用描述几个方面以进行说明。应当理解，阐述了许多具体细节、关系和方法以提供对本文所述特征的充分理解。然而，相关领域的普通技术人员将容易认识到，可以在没有一个或多个特定细节的情况下或利用其他方法来实践本文描述的特征。本文所述的特征不受所说明的动作或事件的顺序的限制，因为一些动作可以以不同顺序发生和/或与其它动作或事件同时发生。此外，并不要求所有说明的动作或事件实现根据本文所述特征的方法。41.定义42.除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。43.本文使用的术语仅是为了描述特定实施例的目的，而不是旨在限制。如本文使用的单数形式“一个(种)”和“所述的”旨在也包括复数形式，除非上下文另有明确指示。此外，在详细说明和/或权利要求书中使用的术语“包含(including)”、“包括(include)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变体的程度上，这样的术语类似于术语“包括(comprising)”的方式是包含性的。如本文使用的术语“包含”与“包括”或“含有”是同义，并且是包含性的或开放式的。44.除非另有说明，否则本文中任何对“或”的提及均旨在涵盖“和/或”。如本文使用的术语“约”一个数字指该数字加上或减去该数字的10％。术语“约”一个范围指该范围减去其最低值的10％并加上其最大值的10％。45.术语“受试者”、“患者”或“个体”指灵长类动物，例如人和非人灵长类动物，例如非洲绿猴(africangreenmonkeys)和恒河猴(rhesusmonkeys)。在一些实施方案中，受试者是人类。46.如本文使用的术语“治疗”、“处理”、“改善”和其它语法等效物指减轻、缓和或改善眼新血管疾病或病症或眼新血管疾病或病症的症状，防止眼部新血管疾病或病症的其它症状，改善或预防症状的潜在代谢原因，抑制眼新血管疾病或病症，例如阻止眼新血管疾病或病症的发展，减轻眼新血管疾病或病症，引起眼部新血管疾病或病症的消退，或停止眼新血管疾病或病症的症状，并且旨在包括预防。该术语进一步包括实现治疗益处和/或预防益处。术语“治疗益处”指根除或改善所治疗的眼新血管疾病或病症。此外，通过根除或改善与眼新生血管疾病或病症相关的一种或多种生理学症状使得在受试者中观察到改善实现治疗益处，尽管在一些实施方案中，受试者仍然罹患眼新生血管疾病或病症。对于预防性益处，将药物组合物施用于即使尚未做出疾病或病症的诊断，但处于发展眼新血管疾病或病症的风险中的受试者，或施用于报告眼新血管疾病或病症的一种或多种生理症状的受试者。47.如本文使用的术语“施用”、“给药”等可以指用于能够将治疗剂或药物组合物递送至期望的生物作用部位的方法。这些方法包括玻璃体内或视网膜下注射至眼睛。48.如本文使用的术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”可以指足够量的至少一种所施用的药物组合物或化合物，其将在一定程度上缓解治疗的眼部疾病或病症的一种或多种症状。药物组合物的“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”可以作为单位剂量施用于需要其的受试者(如本文在别处进一步详细描述的)。49.如本文使用的术语“可药用的”可以指不会消除本文公开的化合物的生物活性或性质并且相对无毒(即，当将该物质施用于个体时，其不会引起不希望的生物效应，也不会以有害的方式与含有的组合物的任何组分相互作用)的物质，例如载体或稀释剂。50.如本文使用的术语“药物组合物”或简而言之“组合物”可以指任选地与至少一种可药用化学组分混合的生物活性化合物，所述化学组分例如但不限于载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、增稠剂、赋形剂等。51.如本文使用的“aav载体”或“raav载体”指腺相关病毒(aav)载体或重组aav(raav)载体，其包含用于转导至靶细胞或靶组织中的非aav来源的多核苷酸序列(例如，与aav异源的多核苷酸，如编码治疗性转基因(例如阿柏西普)的核酸序列)。通常，异源多核苷酸侧接至少一个，通常为两个aav反向末端重复序列(itr)。术语raav载体包括raav载体颗粒和raav载体质粒。raav载体可以是单链(ssaav)或自身互补的(scaav)。[0052]“aav病毒”或“aav病毒颗粒”或“raav载体颗粒”或“raav颗粒”指包含至少一种aav衣壳蛋白和多核苷酸raav载体的病毒颗粒。在一些情况下，所述至少一种aav衣壳蛋白来自野生型aav或是变体aav衣壳蛋白(例如，具有插入，例如，如下所述的7m8氨基序列的插入的aav衣壳蛋白)。如果颗粒包含异源多核苷酸(例如，除野生型aav基因组之外的多核苷酸，比如待递送至靶细胞或靶组织的转基因)，则其被称为“raav颗粒”、“raav载体颗粒”或“raav载体”。因此，raav颗粒的制备必然包括raav载体(比如，包含在raav颗粒之内的载体)的制备。[0053]如本文使用的术语“包装”可以指一系列细胞内事件，其可以导致raav颗粒的装配和衣壳化。[0054]aav“rep”和“cap”基因指编码腺相关病毒的复制和衣壳化蛋白的多核苷酸序列。aavrep和cap在本文中称为aav“包装基因”。[0055]术语“多肽”可以涵盖天然存在和非天然存在的蛋白质(例如，融合蛋白)、肽、其片段、突变体、衍生物和类似物。多肽可以是单体、二聚体、三聚体或多聚体。进一步，多肽可以包含许多不同的结构域，其中每个结构域具有一种或多种不同的活性。为了避免疑义，“多肽”可以是大于两个氨基酸的任何长度。[0056]如本文使用的“多肽变体”或简而言之“变体”指其序列含有氨基酸修饰的多肽。在一些实施方案中，所述修饰是与参考蛋白或多肽，例如天然或野生型蛋白的氨基酸序列相比，一个或多个氨基酸的插入、复制、缺失、重排或取代。变体可以具有一个或多个氨基酸点取代(其中在一个位置的单个氨基酸已经改变为另一个氨基酸)，一个或多个插入和/或缺失(其中在参考蛋白的序列中分别插入或缺失一个或多个氨基酸)，和/或在氨基或羧基末端之一或两者处氨基酸序列的截短。与参考蛋白或未修饰的蛋白相比，变体可以具有相同或不同的生物活性。[0057]在一些实施方案中，变体可以与其对应的参考蛋白具有例如至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的总体序列同源性。在一些实施方案中，变体可以与野生型蛋白具有至少约90％的总体序列同源性。在一些实施方案中，变体显示出至少约95％、至少约98％、至少约99％、至少约99.5％或至少约99.9％的总体序列同一性。[0058]如本文使用的“重组”可以指生物分子，例如基因或蛋白，其(1)已经从其天然存在的环境中移出，(2)不与自然界中发现该基因的多核苷酸的全部或一部分结合，(3)可操作地连接自然界中未连接的多核苷酸，或(4)不存在于自然界中。术语“重组”可用于指克隆的dna分离物、化学合成的多核苷酸类似物或通过异源系统生物合成的多核苷酸类似物，以及由这样的核酸编码的蛋白质和/或mrna。因此，例如，如果由存在于细胞中的重组基因合成的mrna合成由微生物合成的蛋白，则该蛋白是重组的。[0059]术语“抗vegf试剂”包括任何治疗剂，包括蛋白质、多肽、肽、融合蛋白、多聚体蛋白、基因产物、抗体、人单克隆抗体、抗体片段、适体、小分子、激酶抑制剂、受体或受体片段或核酸分子，其可减少、干扰、破坏、阻断和/或抑制内源性vegf和/或内源性vegf受体(vegfr)的活性或功能，或体内vegf-vegfr相互作用或途径。抗-vegf试剂可以是当其在体内被递送到细胞、组织或受试者中时，可以减少新血管生长或形成和/或水肿(oedem)或肿胀的任何一种已知的治疗剂，例如雷珠单抗(ranibizumab)、布鲁单抗(brolucizumab)或贝伐单抗(bevacizumab)。在一些实施方案中，抗vegf试剂可以是天然存在的、非天然存在的或合成的。在一些实施方案中，抗vegf试剂可以来源于天然存在的分子，其随后被修饰或突变以赋予抗vegf活性。在一些实施方案中，抗vegf试剂是融合蛋白或嵌合蛋白。在这样的蛋白质中，功能结构域或多肽被人工融合到部分或多肽上，以制备可以在体内螯合vegf或作为vegfr诱饵起作用融合蛋白或嵌合蛋白。在一些实施方案中，抗vegf试剂是阻断内源性vegfr与其配体相互作用的融合蛋白或嵌合蛋白。[0060]如本文使用的“vegf”可以指vegf的任何同种型，除非另有要求，否则包括但不限于vegf-a、vegf-b、vegf-c、vegf-d、vegf-e、vegf-f或其任何组合或任何功能片段或变体。除非另有要求，否则“vegf”可以指vegf家族的任何成员，包括成员：vegf-a、胎盘生长因子(pgf)、vegf-b、vegf-c和vegf-d，或其任何组合、功能片段或变体。如本文使用的“vegf受体”或“vegfr”或“vegf-r”用于指vegf受体中的任一种，包括但不限于vegfr-1(或flt-1)、vegfr-2(或flk-1/kdr)和vegfr-3(或flt-4)。vegfr可以是膜结合或可溶形式，或受体的功能片段或截短形式。抗vegf试剂的实例包括，但不限于雷珠单抗、贝伐单抗、布鲁单抗或其任何组合、变体或功能片段。[0061]“可操作地连接”或“偶联”可以指遗传元件的并置(juxtaposition)，其中所述元件处于允许它们以预期方式操作的关系。例如，如果启动子有助于启动编码序列的转录，则启动子可以可操作地连接至编码区。在启动子和编码区之间可以存在插入残基，只要保持这种功能关系。[0062]术语“表达载体”或“表达构建体”或“盒”或“质粒”或简而言之“载体”可包括任何类型的基因构建体，包括aav或raav载体，其含有编码基因产物的核酸或多核苷酸，其中部分或全部核酸编码序列能够被转录且适于基因治疗。转录物可以翻译成蛋白。在一些实施方案中，转录物是部分翻译的或未翻译的。在某些方面，表达包括基因的转录和mrna翻译成基因产物。在其它方面，表达仅包括编码目标基因的核酸的转录。表达载体还可以包含与编码区可操作连接的控制元件，以促进蛋白在靶细胞中的表达。控制元件和与它们可操作地连接用于表达的一个或多个基因的组合有时可被称为“表达盒”，其中许多是本领域已知和可获得的，或者可容易地由本领域可获得的组分构建。[0063]术语“异源的”可以指在基因型上不同于与其比较的实体的其余部分的实体。例如，通过基因工程技术引入源自不同物种的质粒或载体的多核苷酸可以是异源多核苷酸。从其天然编码序列中移除并与天然未发现连接的编码序列可操作连接的启动子可以是异源启动子。[0064]如本文使用的“7m8”指氨基酸序列lalgettrpa(seqidno:1)。[0065]“7m8变体”指raav，其可以具有任何血清型，具有插入衣壳蛋白的暴露于溶剂的gh环中的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)。[0066]当7m8插入raav2中(也称为aav2.7m8)时，氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)被插入aav2衣壳蛋白的氨基酸570-611内的gh环中，例如在aav2衣壳蛋白vp1的位置587和588之间。在一些情况下，当7m8插入raav2中(也称为aav2.7m8)时，将氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)插入aav2衣壳蛋白的gh环中，例如在包含seqidno：13序列的aav2vp1的位置587和588之间。当7m8插入raav1中(也称为aav1.7m8)时，将氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)插入aav1衣壳蛋白的aav1的氨基酸571-612内，例如在aav1衣壳蛋白的氨基酸590与591之间的gh环中。当7m8插入raav5中(也称为aav5.7m8)时，将氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)插入aav5衣壳蛋白的aav5的氨基酸560-601内，例如在aav5衣壳蛋白的氨基酸575和576之间的gh环中。当7m8插入raav6中(也称为aav6.7m8)时，将氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)插入aav6衣壳蛋白的氨基酸571至612内的gh环中，例如在aav6衣壳蛋白的氨基酸590与591之间。当7m8插入raav7中(也称为aav7.7m8)时，氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)插入aav7衣壳蛋白的氨基酸572至613内，例如在aav7衣壳蛋白的氨基酸589和590之间的gh环中。当7m8插入raav8中(也称为aav8.7m8)时，将氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)插入aav8衣壳蛋白的氨基酸573至614内，例如在aav8衣壳蛋白的氨基酸590与591之间的gh环中。当7m8插入raav9中(也称为aav9.7m8)时，将氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)插入aav9衣壳蛋白的gh环中，例如在aav9衣壳蛋白的氨基酸588与589之间。当7m8插入raav10中(也称为aav10.7m8)时，将氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)插入aav10衣壳蛋白的氨基酸573至614内，例如在aav10衣壳蛋白的氨基酸589和590之间的gh环中。[0067]概述[0068]用于眼新血管疾病如wamd的目前疗法(例如阿柏西普)需要约每4-8周施用终生ivt。这会增加一些患者中炎症、感染和其他副作用的风险。进一步，由于重复和/或频繁去医疗机构进行治疗，目前疗法产生了顺应性挑战，尤其是在最受wamd影响的老年患者中。施用频率的降低与视力丧失和眼病或眼病症的恶化相关。aav载体在ivt注射后有效转导目标视网膜细胞的能力已被用于成功地将治疗基因转移到光感受器、视网膜色素上皮和内视网膜中以治疗多种视网膜疾病。因此，施用编码抗vegf试剂(例如阿柏西普)的raav颗粒可提供抗vegf试剂在体内的延长和/或持续释放。[0069]令人惊讶地，向患有眼新血管疾病的个体的眼睛施用单一低单位剂量的6×1011个载体基因组(vg)/眼睛的编码阿柏西普的raav颗粒在所有治疗的个体中引起疾病的稳定化和的强解剖学响应(参见实施例1)。另外，在所有治疗的个体中视力稳定，并且在施用单一单位剂量的6×1011vg/眼睛编码阿柏西普的raav颗粒之后，个体均不需要救援抗vegf治疗(例如阿柏西普ivt注射)。此外，向患有眼新血管疾病的个体施用单一单位剂量的编码阿柏西普的raav颗粒出人意料地引起症状的减轻(例如消退)，所述症状包括对先前的抗vegf治疗(例如阿柏西普、雷珠单抗或贝伐单抗的长期ivt注射)难治性的视网膜内和视网膜下流体。[0070]因此，本公开内容提供通过施用单一单位剂量的6×1011vg/眼睛或更少的编码抗vegf试剂(例如阿柏西普)的raav颗粒治疗个体中眼新血管疾病的方法。另外，此外，本公开内容提供通过施用单一单位剂量的编码抗vegf试剂(例如阿柏西普)的raav颗粒减少患有眼新血管疾病的个体的眼睛中的视网膜流体的方法。本文公开的方法减少或消除了对重复ivt注射的需要，同时提供长期功效，从而解决非顺从性和非依从性的问题。此外，本文提供的方法减少了与多次ivt注射相关的副作用。[0071]治疗方法[0072]本文提供一种用于治疗个体中的眼新血管疾病的方法，所述方法包括向所述个体的眼睛施用单位剂量的重组腺相关病毒(raav)颗粒。[0073]本文还提供用于减少患有眼新血管疾病的个体的眼睛中的视网膜流体的方法，所述方法包括向个体的眼睛施用单位剂量的raav颗粒。[0074]在一些实施方案中，眼新生血管疾病是湿性年龄相关性黄斑变性(wamd)、视网膜新生血管形成、脉络膜新血管形成糖尿病性视网膜病变、增殖性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、中央视网膜静脉阻塞、分支视网膜静脉阻塞、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、缺血性视网膜病、糖尿病性视网膜水肿或其任意组合。[0075]在一些实施方案中，个体是人类。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前的约最后8周、约最后9周、约最后10周、约最后11周、约最后12周、约最后13周、约最后14周、约最后15周或约最后16周，个体接受使用抗vegf试剂(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗(faricimab)、阿比斯帕培果(abiciparpegol)和/或阿柏西普)对眼新血管疾病的至少一种先前治疗(例如至少一次、至少两次、至少三次、至少四次、至少5次或更多次治疗)。在一些实施方案中，所述个体对使用抗vegf试剂(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的先前治疗表现出有意义的响应。在一些实施方案中，抗vegf试剂是阿柏西普、其功能变体或其功能片段。在一些实施方案中，抗vegf试剂包含含有与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，个体的眼睛中的视网膜流体是视网膜内流体(irf)和/或视网膜下流体(srf)。在一些实施方案中，个体的眼睛中视网膜流体的量或存在对于用抗vegf剂(例如贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的先前治疗是难治的。在一些实施方案中，抗vegf试剂是阿柏西普、其功能变体或其功能片段。在一些实施方案中，抗vegf试剂包含含有与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列的多肽。[0076]在一些实施方案中，单位剂量表示为载体基因组的数量(vg)。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1011个载体基因组(vg)或更少的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量表示为每只眼睛的载体基因组(vg)的数量(vg/眼睛)。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1011vg/眼睛或更少的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010至约2×1011vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约2×1011或约6×1010vg/眼睛。[0077]在一些实施方案中，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是右眼或左眼。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是右眼。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是左眼。在一些实施方案中，本文提供的方法进一步包括向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是右眼，且对侧眼睛是左眼。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是左眼，且对侧眼睛是右眼。[0078]在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至多约2周(例如，约0天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天)。在一些实施方案中，施用至个体的对侧眼睛的单位剂量的raav颗粒与施用至个体的一只眼睛的单位剂量的raav颗粒几乎相同(例如高或低小于1％、高或低小于5％、高或低小于10％、高或低小于20％)或更低(例如高或低约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％)。[0079]在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至少约2周(例如，至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、至少约12个月、至少约1年、至少约2年、至少约3年、至少约4年、至少约5年或更长)。在一些实施方案中，施用至个体的对侧眼睛的单位剂量的raav颗粒高于(例如，高于约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约125％、约150％、约175％、约200％、约225％、约250％、约275％、约300％或更多中的任何一个)施用至个体的一只眼睛的单位剂量的raav颗粒。[0080]在一些实施方案中，raav颗粒包含a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.99％或100％同一性的氨基酸序列，和b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno：14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。seqidno：35的序列提供如下：[0081]sdtgrpfvemyseipeiihmtegrelvipcrvtspnitvtlkkfpldtlipdgkriiwdsrkgfiisnatykeiglltceatvnghlyktnylthrqtntiidvvlspshgielsvgeklvlnctartelnvgidfnweypsskhqhkklvnrdlktqsgsemkkflstltidgvtrsdqglytcaassglmtkknstfvrvhekdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seqidno:35)。[0082]在一些实施方案中，raav颗粒包含a)编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列，和b)aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno：14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。[0083]在一些实施方案中，raav颗粒包含编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，raav颗粒包含编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽包含seqidno：35的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽是阿柏西普或其功能变体或其功能片段。[0084]在一些实施方案中，raav颗粒包含含有密码子优化的序列且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述密码子优化的序列编码与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，raav颗粒包含含有密码子优化的序列且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述密码子优化的序列编码与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，raav颗粒包含含有密码子优化的序列且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述密码子优化的序列编码与seqidno：35的氨基酸序列具有100％同一性的氨基酸序列。[0085]在一些实施方案中，raav颗粒包含含有阿柏西普或其功能变体或其功能片段的cdna序列，且侧接aav2反向末端重复序列(itr)。在一些实施方案中，raav颗粒包含含有阿柏西普或其功能变体或其功能片段的密码子优化的cdna序列，且侧接aav2反向末端重复序列(itr)。在一些实施方案中，raav颗粒包含含有seqidno：36的核酸序列的核酸。[0086]在一些实施方案中，核酸进一步包含(a)包含cmv序列的第一增强子区；(b)包含cmv序列的启动子区；(c)5'utr区，其以5'至3'的顺序包含tpl序列和emlp序列；(d)包含完整ees序列的第二增强子区；和(e)hgh聚腺苷酸化位点。在一些实施方案中，包含cmv序列的增强子区包含seqidno：22的序列。在一些实施方案中，包含cmv序列的启动子区包含seqidno：23的序列，在一些实施方案中，tpl序列包含seqidno：24的序列，在一些实施方案中，emlp序列包含seqidno：25的序列，在一些实施方案中，包含完整ees序列的第二增强子区包含seqidno：26的序列。在一些实施方案中，hgh腺苷酸化位点包含seqidno：27的序列。[0087]在一些实施方案中，raav颗粒包含aav2衣壳蛋白，其包含插入在包含seqidno：13的序列的aav2vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno：14)。seqidno：13的序列提供如下：[0088]maadgylpdwledtlsegirqwwklkpgppppkpaerhkddsrglvlpgykylgpfngldkgepvneadaaalehdkaydrqldsgdnpylkynhadaefqerlkedtsfggnlgravfqakkrvleplglveepvktapgkkrpvehspvepdsssgtgkagqqparkrlnfgqtgdadsvpdpqplgqppaapsglgtntmatgsgapmadnnegadgvgnssgnwhcdstwmgdrvittstrtwalptynnhlykqissqsgasndnhyfgystpwgyfdfnrfhchfsprdwqrlinnnwgfrpkrlnfklfniqvkevtqndgtttiannltstvqvftdseyqlpyvlgsahqgclppfpadvfmvpqygyltlnngsqavgrssfycleyfpsqmlrtgnnftfsytfedvpfhssyahsqsldrlmnplidqylyylsrtntpsgtttqsrlqfsqagasdirdqsrnwlpgpcyrqqrvsktsadnnnseyswtgatkyhlngrdslvnpgpamashkddeekffpqsgvlifgkqgsektnvdiekvmitdeeeirttnpvateqygsvstnlqrgnrqaatadvntqgvlpgmvwqdrdvylqgpiwakiphtdghfhpsplmggfglkhpppqilikntpvpanpsttfsaakfasfitqystgqvsveiewelqkenskrwnpeiqytsnynksvnvdftvdtngvyseprpigtryltrnl(seqidno:13)。[0089]在一些实施方案中，raav颗粒包含aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)，其中所述氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，raav颗粒包含aav2衣壳蛋白，其包含插入在包含seqidno：13的序列的aav2vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)。[0090]在一些实施方案中，raav颗粒包含aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的任何下述氨基酸序列，其中所述氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白：lalgettrpa(seqidno:1)；lanetitrpa(seqidno:2)、lakagqanna(seqidno:3)、lakdpkttna(seqidno:4)、kdtdttr(seqidno:5)、raggsvg(seqidno:6)、avdttkf(seqidno:7)、stgkvpn(seqidno:8)、lakdtdttra(seqidno:9)、laraggsvga(seqidno:10)、laavdttkfa(seqidno:11)、lastgkvpna(seqidno:12)、lgettrp(seqidno:14)、netitrp(seqidno:15)、kagqann(seqidno:16)、kdpkttn(seqidno:17)、kdtdttr(seqidno:18)、raggsvg(seqidno:19)、avdttkf(seqidno:20)和stgkvpn(seqidno:21)。在一些实施方案中，raav颗粒包含aav2衣壳蛋白，其包含插入在包含seqidno：13的序列的aav2vp1的位置587和588之间的任何下述氨基酸序列：lalgettrpa(seqidno:1)；lanetitrpa(seqidno:2)、lakagqanna(seqidno:3)、lakdpkttna(seqidno:4)、kdtdttr(seqidno:5)、raggsvg(seqidno:6)、avdttkf(seqidno:7)、stgkvpn(seqidno:8)、lakdtdttra(seqidno:9)、laraggsvga(seqidno:10)、laavdttkfa(seqidno:11)、lastgkvpna(seqidno:12)、lgettrp(seqidno:14)、netitrp(seqidno:15)、kagqann(seqidno:16)、kdpkttn(seqidno:17)、kdtdttr(seqidno:18)、raggsvg(seqidno:19)、avdttkf(seqidno:20)和stgkvpn(seqidno:21)。[0091]在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是通过玻璃体内(ivt)注射、眼内施用或视网膜内注射。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是通过玻璃体内(ivt)注射。[0092]在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为药物制剂形式。在一些实施方案中，药物制剂包含raav颗粒、一种或多种渗透或离子强度剂、一种或多种缓冲剂、一种或多种表面活性剂和一种或多种溶剂。在一些实施方案中，渗透或离子强度剂是氯化钠。在一些实施方案中，一种或多种缓冲剂为磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠。在一些实施方案中，表面活性剂为泊洛沙姆188。在一些实施方案中，溶剂为水。在一些实施方案中，药物制剂包含raav颗粒、氯化钠、磷酸钠和表面活性剂。在一些实施方案中，药物制剂包含约1×1010vg/ml至约1×1013vg/ml的raav颗粒。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1011vg/ml至约6×1012vg/ml的raav颗粒。在一些实施方案中，药物制剂包含约150mm至约200mm的氯化钠(例如，约150mm、约160mm、约170mm、约180mm、约190mm或约200mm中的任一种)。在一些实施方案中，药物制剂包含约1mm到约10mm的磷酸二氢钠(例如，约1mm、约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm或约10mm)。在一些实施方案中，药物制剂包含约1mm至约10mm的磷酸氢二钠(例如，约1mm、约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm或约10mm)。在一些实施方案中，药物制剂包含约0.0005％(w/v)至约0.005％(w/v)的泊洛沙姆188(例如，约0.0005％(w/v)、0.0006％(w/v)、0.0007％(w/v)、0.0008％(w/v)、0.0009％(w/v)、0.001％(w/v)、0.002％(w/v)、0.003％(w/v)、0.004％(w/v)或约0.005％(w/v)中的任一种)。在一些实施方案中，药物制剂具有约7.0至约7.5(例如，约7.0、约7.1、约7.2、约7.3、约7.4或约7.5中的任一个)的ph。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1012vg/ml的raav颗粒、约180mm的氯化钠、约5mm的磷酸二氢钠、约5mm的磷酸氢二钠和约0.001％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.3的ph。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1011vg/ml的raav颗粒、约180mm的氯化钠、约5mm的磷酸二氢钠、约5mm的磷酸氢二钠和约0.001％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.3的ph。[0093]在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含在约25μl至约250μl之间的体积(例如，约25μl、约30μl、约40μl、约50μl、约60μl、约70μl、约80μl、约90μl、约100μl、约110μl、约120μl、约130μl、约140μl、约150μl、约160μl、约170μl、约180μl、约190μl、约200μl、约210μl、约220μl、约230μl、约240μl或约250μl中的任一个)。在一些实施方案中，调节药物制剂中raav颗粒的浓度以使施用至个体眼睛的单位剂量raav颗粒的体积在约25μl至约250μl之间。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约100μl的体积。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约30μl的体积。[0094]在一些实施方案中，将单位剂量的raav颗粒与类固醇治疗组合施用。在一些实施方案中，类固醇治疗是皮质类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗是全身性类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗是口服类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗是泼尼松治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为眼用类固醇治疗。在一些实施方案中，眼用类固醇治疗为局部类固醇治疗(例如滴剂)、眼周类固醇治疗(例如眼筋膜囊内、结膜下)、玻璃体内类固醇治疗或脉络膜上(superchoroidal)类固醇治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗、甲羟松治疗、氯替泼诺治疗、泼尼松龙治疗、氟轻松治疗、曲安西龙治疗、利美索龙治疗、地塞米松治疗、氟米龙治疗、氟轻松治疗、利美索龙治疗或泼尼松治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒期间施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之后施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前和期间施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前和之后施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒期间和之后施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和之后施用类固醇治疗。[0095]在一些实施方案中，类固醇治疗为眼用类固醇治疗(例如二氟泼尼酯)。在一些实施方案中，眼用类固醇治疗(例如二氟泼尼酯)为从施用单位剂量的raav颗粒起持续至多约4周、约6周或约8周的每日类固醇治疗。在一些实施方案中，眼用固醇治疗包括在约第1周约四次施用眼用类固醇，在约第2周约三次施用眼用类固醇，在约第3周约两次施用眼用类固醇，以及在约第4周约一次施用眼用类固醇；从施用单位剂量的raav颗粒开始和之后计时。在一些实施方案中，眼用类固醇为约0.005％至约0.5％的二氟泼尼酯。在一些实施方案中，眼用类固醇为约0.005％、约0.006％、约0.007％、约0.008％、约0.009％、约0.01％、约0.02％、约0.03％、约0.4％、约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％或约0.1％的二氟泼尼酯中的任一种。在一些实施方案中，眼用类固醇为二氟泼尼酯0.05％。在一些实施方案中，0.05％的二氟泼尼酯的剂量为一滴眼用溶液。在一些实施方案中，一滴为约50μl(例如，约25μl至约50μl，约50μl至约100μl)。在一些实施方案中，二氟泼尼酯的剂量包含约1μg至约5μg，或约2μg至约3μg，或约2.5μg的二氟泼尼酯。在一些实施方案中，二氟泼尼酯的剂量包含约2.5μg的二氟泼尼酯。[0096]在一些实施方案中，类固醇治疗为眼用类固醇治疗(例如二氟泼尼酯)。在一些实施方案中，眼用类固醇治疗(例如二氟泼尼酯)为从施用单位剂量的raav颗粒起持续至多约4周、约6周或约8周的每日局部类固醇治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括在约第1周约四次施用局部类固醇，在约第2周约三次施用局部类固醇，在约第3周约两次施用局部类固醇，以及在约第4周约一次施用局部类固醇；从施用单位剂量的raav颗粒开始和之后计时。在一些实施方案中，局部类固醇包含约1μg至约3μg剂量的二氟泼尼酯0.05％。在一些实施方案中，局部类固醇包含约2.5μg剂量的二氟泼尼酯0.05％。在一些实施方案中，局部类固醇为约0.005％至约0.5％的二氟泼尼酯。在一些实施方案中，局部类固醇为约0.005％、约0.006％、约0.007％、约0.008％、约0.009％、约0.01％、约0.02％、约0.03％、约0.4％、约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％或约0.1％的二氟泼尼酯中的任一种。在一些实施方案中，局部类固醇为二氟泼尼酯0.05％。在一些实施方案中，0.05％的二氟泼尼酯的剂量为一滴眼用溶液。在一些实施方案中，一滴为约50μl(例如，约25μl至约50μl，约50μl至约100μl)。在一些实施方案中，二氟泼尼酯的剂量包含约1μg至约5μg，或约2μg至约3μg，或约2.5μg的二氟泼尼酯。在一些实施方案中，二氟泼尼酯的剂量包含约2.5μg的二氟泼尼酯。[0097]在一些实施方案中，在将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛之后，个体的眼睛中的视网膜流体(例如srf和/或irf)减少超过约5％、约10％、约15％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约100％中的任一个。在一些实施方案中，与在施用单位剂量的raav颗粒之前个体的眼睛中的视网膜流体的水平相比，在将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛之后，个体的眼睛中的视网膜流体(例如srf和/或irf)减少超过约5％、约10％、约15％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约100％中的任一个。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前个体的眼睛中的视网膜液体水平相比，在将单位剂量的raav颗粒施用至所述个体的一只眼睛和/或对侧眼睛之后，个体的眼睛中的视网膜流体(例如srf和/或irf)减少约100％。[0098]在一些实施方案中，本文提供的方法进一步包括在施用单位剂量的raav颗粒之后，监测个体的一只眼睛和/或对侧眼睛中的视网膜流体(例如srf和/或irf)的水平。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之后约1天、约3天、约8天、约2周、约4周、约6周、约8周、约12周、约16周、约20周、约24周、约28周、约32周、约36周、约40周、约44周、约48周、约52周、约56周、约60周、约64周、约68周、约72周、约76周、约80周、约84周、约88周、约92周、约96周、约100周、约104周或更长的任何时间，首次观察到到眼睛中视网膜液(例如srf和/或irf)的减少。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之后，眼内视网膜流体(例如srf和/或irf)的减少持续或维持至少1周、至少2周、至少4周、至少6周、至少8周、至少12周、至少16周、至少20周、至少24周、至少28周、至少32周、至少36周、至少40周、至少44周、至少48周、至少52周、至少56周、至少60周、至少64周、至少68周、至少72周、至少76周、至少80周、至少84周、至少88周、至少92周、至少96周、至少100周、至少104周或更长时间。[0099]在一些实施方案中，通过本领域已知的任何方法测定眼睛中视网膜流体(例如srf和/或irf)的减少。在一些实施方案中，通过光学相干断层扫描(oct)、谱域oct(sd-oct)、oct血管造影术、荧光素血管造影术或通过直接视网膜观察来测定眼睛中的视网膜流体(例如srf和/或irf)的减少。在一些实施方案中，通过光学相干断层扫描(oct)测定眼睛中视网膜流体(例如，srf和/或irf)的减少。在一些实施方案中，通过谱域oct(sd-oct)测定眼睛中视网膜流体(例如，srf和/或irf)的减少。在一些实施方案中，通过oct血管造影术测定眼睛中视网膜流体(例如srf和/或irf)的减少。在一些实施方案中，通过荧光素血管造影术测定眼睛中视网膜流体(例如srf和/或irf)的减少。在一些实施方案中，通过直接视网膜观察测定眼睛中视网膜流体(例如srf和/或irf)的减少。[0100]在一些实施方案中，基于视网膜流体(例如，视网膜内流体(irf)和/或视网膜下流体(srf))的水平，与将单位剂量的raav颗粒施用至一只眼睛和/或对侧眼睛(例如，如上所述)之前的视网膜流体(例如，srf和/或irf)的水平的比较来评估在将单位剂量的raav颗粒施用至一只眼睛和/或对侧眼睛之后对个体中的眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，视网膜流体是视网膜下流体(srf)或视网膜内流体(irf)。在一些实施方案中，视网膜流体是视网膜下液体(srf)。在一些实施方案中，视网膜流体是视网膜内流体(irf)。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒(例如如上所述)之前的视网膜流体(例如irf和/或srf)的水平相比，观察到在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后观察到视网膜流体(例如irf和/或srf)的减少，则确定在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼部新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，眼新血管疾病是wamd。[0101]在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起视网膜厚度的维持或减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起视网膜厚度的减少。在一些实施方案中，视网膜厚度是中央亚视场厚度(cst)或中心视网膜厚度(crt)。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起视网膜厚度的减少超过约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或约100％中的任一个。在一些实施方案中，通过oct或sd-oct测定视网膜厚度(例如，cst或crt)。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)的减少是约10μm至约100μm(例如超过约10μm、约15μm、约20μm、约25μm、约30μm、约35μm、约40μm、约45μm、约50μm、约55μm、约60μm、约65μm、约70μm、约75μm、约80μm、约85μm、约90μm、约95μm、约100μm或更多中的任一个)。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)的减少超过约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或约100％中的任一个。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)的减少是至少约10％。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)的减少是至少约15％或更多。[0102]在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛引起黄斑体积的保持或减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛引起黄斑体积的减少。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛引起黄斑体积的减少超过约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％中的任一个。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起黄斑体积的减少是至少约10％。在一些实施方案中，通过oct或sd-oct测定黄斑体积。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛引起黄斑体积的减少是至少约10％。在一些实施方案中，通过oct或sd-oct测定黄斑体积。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛引起黄斑体积的减少是约15％或更多。在一些实施方案中，通过oct或sd-oct测定黄斑体积。[0103]在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视力相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起视力的维持或改善。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视力相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起视力的改善。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的视力相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起视力的改善超过约5％、约10％、约15％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约125％、约150％、约175％、约200％、约225％、约250％、约275％、约300％或更多中的任一个。在一些实施方案中，视力是最佳矫正视力(bcva)。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的bcva相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起bcva的改善。在一些实施方案中，bcva表示为etdrs评分，其对应于正确读取的字母的数量(vitaleetal.,(2016)jamaopthalmol134(9):1041:1047)。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的bcva相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起bcva的改善是至少15个etdrs字母(vitaleetal.,(2016)jamaopthalmol134(9):1041:1047)(例如至少约15、至少约20、至少约30、至少约40、至少约50、至少约60或约70个字母)。在一些实施方案中，与施用单位剂量的raav颗粒之前的bcva相比，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起bcva的改善是约5个etdrs字母。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起bcva的维持，其中与施用单位剂量的raav颗粒之前的bcva相比，个体损失少于15个etdrs字母(vitaleetal.,(2016)jamaopthalmol134(9):1041:1047)(例如，15个或更少、14个或更少、13个或更少、12个或更少、11个或更少、10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、2个或更少、1个或0个字母中的任一个)。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起bcva的维持，其中与施用单位剂量的raav颗粒之前的bcva相比，个体损失约2个字母。[0104]在一些实施方案中，基于一只眼睛和/或对侧眼睛中的最佳矫正视力(bcva)来评估在向一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，bcva表示为etdrs评分，其对应于正确读取的字母的数量(vitaleetal.,(2016)jamaopthalmol134(9):1041:1047)。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前相比，个体在etdrs评分中损失少于15个字母(例如，15个或更少、14个或更少、13个或更少、12个或更少、11个或更少、10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、2个或更少、1个或0个字母中的任一个)，则确定个体的视觉和/或视力得到维持。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前相比，个体获得至少15个字母(例如至少约15、至少约20、至少约30、至少约40、至少约50、至少约60或约70个字母中的任一个)，则确定个体的视觉和/或视力得到改善。[0105]在一些实施例中，基于一只眼睛和/或对侧眼睛中的中央亚视场厚度(cst)或中心视网膜厚度(crt)来评估在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，通过sd-oct测定cst或crt。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前相比，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后通过sd-oct评估的cst或crt减少，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前相比，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后通过sd-oct评估的cst或crt得到保持，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。[0106]在一些实施方案中，基于一只眼睛和/或对侧眼睛中的黄斑体积来评估在向一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，通过sd-oct测定黄斑体积。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前相比，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后通过sd-oct评估的黄斑体积减少，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前相比，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后通过sd-oct评估的黄斑体积得到保持，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。[0107]在一些实施方案中，基于一只眼睛和/和对侧眼睛中的视网膜厚度(例如，中央视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst))和黄斑体积来评估个体中的眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，通过sd-oct测定cst和黄斑体积。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前相比，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后通过sd-oct评估的黄斑体积减少，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前相比，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后通过sd-oct评估的黄斑体积得到保持，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。[0108]在一些实施方案中，基于在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后个体需要的救援疗法治疗(例如，阿柏西普注射)的次数评估个体中在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后眼部新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，如果在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后，个体在每4周、每5周、每6周、每7周、每8周、每9周、每10周或更长时间的任一个需要少于一次救援疗法治疗(例如阿柏西普注射)，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。[0109]在一些实施方案中，如果在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周、至少15周、至少20周、至少30周、至少40周、至少50周、至少60周、至少70周、至少80周、至少90周、至少100周、至少110周或更长的任一时间，个体不需要任何救援疗法治疗(例如阿柏西普注射)，则确定在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。[0110]在一些实施方案中，基于视网膜流体的水平与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前视网膜流体的水平的比较来评估在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前视网膜流体的水平相比，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后观察到视网膜流体的减少，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，眼新血管疾病为wamd。[0111]在一些实施方案中，基于与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前的ped相比色素上皮脱离(ped)的消退，评估在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前的ped相比，观察到在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后ped的消退，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，眼新血管疾病为wamd。[0112]在一些实施方案中，基于如通过荧光素血管造影术确定的脉络膜新生血管(cnv)病变生长来评估在一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前存在的cnv病变相比，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后cnv病变缩小(例如，超过约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或100％中的任一个)，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前存在的cnv病变相比，在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后cnv病变没有生长(例如，生长小于约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约15％或约20％中的任一个)，则确定在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，眼新血管疾病为wamd。[0113]在一些实施方案中，根据本领域已知的任何方法(例如，sd-oct、oct、荧光素血管造影术、数码彩色眼底照相等)，基于一只眼睛和/或对侧眼睛的解剖学特征，评估在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后观察到一只眼睛和/或对侧眼睛的解剖学特征的改善，则确定在一只眼睛和/对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，眼新血管疾病为wamd。[0114]在一些实施方案中，基于眼科检查、眼内压(例如，使用goldmann压平眼压计或tono-pen)、间接检眼镜检查、一只眼睛和/或对侧眼睛及附件的检查、眼睑和/或瞳孔反应性、眼睑下垂、异常瞳孔形状、瞳孔不相等、对光的异常反应、传入性瞳孔缺陷、裂隙灯检查(包括眼睑、结膜、角膜、晶状体、虹膜和前房)、玻璃体后段异常、视神经、外周视网膜和视网膜血管、sd-oct、荧光素血管造影术、数码彩色眼底照相(包括视网膜、视神经盘和/或黄斑的图像)、房水采样、玻璃体液采样、oct-血管造影(oct-a)、折射和/或视力(bcva)，评估在一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后对个体中眼新血管疾病的治疗。在一些实施方案中，进行sd-oct以评价视网膜厚度(例如，中心视网膜厚度或中央亚视场厚度)、黄斑体积和/或流体(例如，视网膜下流体或视网膜内流体)的存在。在一些实施方案中，眼新血管疾病是wamd。[0115]可以通过本领域已知的任何方法向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。例如，可以经眼内或通过玻璃体内注射向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是经眼内。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是通过玻璃体内(ivt)或视网膜下注射。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是通过ivt注射。在一些实施方案中，采用无菌技术通过玻璃体内注射施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，使用聚维酮-碘的无菌技术通过玻璃体内注射施用单位剂量的raav颗粒。[0116]在一些实施方案中，个体没有接受眼新血管疾病的先前治疗。在一些实施方案中，个体没有接受在一只眼睛和/或对侧眼睛中用于眼新血管疾病的先前治疗。在一些实施方案中，个体没有接受过使用抗vegf试剂(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的先前治疗。在一些实施方案中，个体在一只眼睛和/或对侧眼睛中没有接受过使用抗vegf试剂(例如贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的先前治疗。在一些实施方案中，个体未接受过先前阿柏西普治疗。在一些实施方案中，个体在一只眼睛和/或对侧眼睛中没有接受过先前的阿柏西普治疗。[0117]类固醇治疗[0118]在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒与类固醇治疗组合施用。在一些实施方案中，类固醇治疗为皮质类固醇治疗。示例性的皮质类固醇包括但不限于阿氯米松、安西米特(amcinomide)、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、环索奈德、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龙、氯泼尼醇、可的伐唑、地夫可特、脱氧皮质酮、地奈德去羟米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龙、二氟泼尼酯、氟氯龙、氟氢可的松、氟氢缩松、氟米松、氟尼缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、氟西奈德(fluocinonide)、氟可龙、氟米龙、氟培龙、氟替卡松、氟泼尼定(fuprednidene)、福莫可他(formocortal)、哈西奈德、卤米松、醋丙酸氢化可的松、丙丁酸氢化可的松、丁酸氢化可的松、氯替泼诺、甲羟松、甲泼尼松、甲泼尼龙、醋丙泼尼龙、糠酸莫米松、帕拉米松、泼尼卡酯、泼尼龙、泼尼松龙、泼尼立定、利美索龙(remexolone)、替可的松(tixocortol)、曲安西龙和乌倍他索。在一些实施方案中，类固醇治疗是全身性类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为口服类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为眼用类固醇治疗。在一些实施方案中，眼用类固醇治疗为局部类固醇治疗(例如滴剂)、眼周类固醇治疗(例如眼筋膜囊内、结膜下)、玻璃体内类固醇治疗或脉络膜上(superchoroidal)类固醇治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗、甲羟松治疗、氯替泼诺治疗、泼尼松龙治疗、氟轻松治疗、曲安西龙治疗、利美索龙治疗、地塞米松治疗、氟米龙治疗、氟轻松治疗、利美索龙治疗或泼尼松治疗。在一些实施方案中，眼用局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为泼尼松治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。[0119]在一些实施方案中，类固醇治疗包括全身类固醇治疗和局部类固醇治疗。在一些实施方案中，全身性类固醇治疗为口服类固醇治疗。在一些实施方案中，全身类固醇治疗为泼尼松治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。在一些实施方案中，全身类固醇治疗和局部类固醇治疗同时施用(例如，在同一天)。在一些实施方案中，全身类固醇治疗和局部类固醇治疗分开施用(例如，在不同天)。[0120]在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和之后施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒期间和/或之后施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒期间施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前和期间施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之后施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒期间和之后施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前和/或之后施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前和之后施用类固醇。[0121]在一些实施方案中，类固醇治疗为全身类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为口服类固醇治疗。在一些实施方案中，类固醇治疗为口服泼尼松治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前开始口服泼尼松治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前约7天、约6天、约5天、约4天、约3天、约2天、约1天或0天中的任一个，以每天约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg或约70mg的泼尼松中的任一种剂量施用初始口服泼尼松治疗，并持续约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天或约10天或更长时间中的任一个。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav之前约3天，以每天约60mg的泼尼松的剂量施用初始口服泼尼松治疗，并持续约3天。[0122]在一些实施方案中，初始口服泼尼松治疗之后逐渐减少口服泼尼松治疗剂量。在一些实施方案中，按以下剂量施用逐渐减少的口服泼尼松治疗剂量：每天约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg或约50mg泼尼松中的任一个，持续约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天中的任一个，随后每天约10mg、约15mg、约20mg或约25mg泼尼松的剂量持续约1天、约2天、约3天或约4天中的任一个，随后每天约5mg、约10mg或约15mg泼尼松的剂量持续约1天、约2天、约3天或约4天。在一些实施方案中，按以下剂量施用逐渐减少的泼尼松剂量：每天约40mg的泼尼松中任一个持续3天，随后每天约20mg的泼尼松持续2天，随后每天约10mg的泼尼松持续2天。[0123]在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前3天，按以下剂量开始初始口服泼尼松治疗：每天60mg的泼尼松的剂量持续共6天，随后每天40mg的泼尼松的剂量持续共3天，随后每天20mg的泼尼松的剂量持续2天，随后每天10mg的泼尼松的剂量持续2天。[0124]在一些实施方案中，类固醇治疗为眼用类固醇治疗。在一些实施方案中，眼用类固醇治疗为二氟泼尼酯治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒期间施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之后施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之之前和期间施用类固醇治疗。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前和之后施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒期间和之后施用类固醇。在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前、期间和/或之后施用类固醇。[0125]在一些实施方案中，类固醇治疗为眼用类固醇治疗。在一些实施方案中，眼用类固醇治疗是在施用单位剂量的raav颗粒之后持续至多4周、至多6周或至多8周的每日类固醇治疗。在一些实施方案中，局部类固醇治疗包括在约第1周约四次施用局部类固醇，在约第2周约三次施用局部类固醇，在约第3周约两次施用局部类固醇，以及在约第4周约一次施用局部类固醇；从施用单位剂量的raav颗粒开始和之后计时。在一些实施方案中，按照治疗医师的判断延长眼用类固醇治疗。[0126]在一些实施方案中，眼用类固醇为约0.005％至约0.5％的二氟泼尼酯。在一些实施方案中，眼用类固醇为约0.005％、约0.006％、约0.007％、约0.008％、约0.009％、约0.01％、约0.02％、约0.03％、约0.4％、约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％或约0.1％的二氟泼尼酯中的任一种。在一些实施方案中，眼用类固醇为二氟泼尼酯0.05％。在一些实施方案中，二氟泼尼酯0.05％的剂量为一滴眼用溶液。在一些实施方案中，一滴为约50μl(例如，约25μl至约50μl，约50μl至约100μl)。在一些实施方案中，二氟泼尼酯的剂量包含约1μg至约5μg，或约2μg至约3μg，或约2.5μg的二氟泼尼酯。在一些实施方案中，二氟泼尼酯的剂量包含约2.5μg的二氟泼尼酯。[0127]用于向靶细胞递送转基因的载体[0128]在一些实施方案中，重组腺相关病毒(raav)颗粒包含来源于腺相关病毒(aav)的重组病毒载体，所述重组病毒载体已经被改变，使得其在受试者(例如，人或非人灵长类动物)中是复制缺陷型的。在一些实施方案中，腺相关病毒(aav)为重组aav(raav)。[0129]aav或raav为小的无包膜单链dna病毒。raav为非致病性人细小病毒，并且可以使其依赖于辅助病毒(包括腺病毒、单纯疱疹病毒、痘苗病毒和cmv)进行复制。[0130]暴露于野生型(wt)aav不与任何人类病理相关或已知不会引起任何人类病理且常见于一般人群中，使得aav或raav成为用于基因疗法的合适递送系统。用于递送抗vegf试剂(例如阿柏西普)的基因治疗的aav和raav可以具有任何血清型。在一些实施方案中，本发明的方法提供任何合适的aav血清型的用途，所述aav血清型包括aav1、aav2、aav2.5、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11、aav12、rh10、aav-dj和其任何杂交或嵌合aav。在一些实施方案中，使用的血清型是基于病毒的向性或目标靶细胞的感染性。在一些实施方案中，可以产生几种aav载体以允许选择最佳血清型，用于与抗vegf试剂转基因(例如阿柏西普转基因)一起使用。[0131]在一些实施方案中，本公开内容的方法提供假型(pseudotyped)aav的用途。假型aav颗粒包含被另一种aav血清型的aav衣壳壳体化(encapsidated)的一种aav血清型的aav基因组反向末端重复序列(itr)。典型地，假型aav被称为“aav#/#”，其中第一个“#”表示aavitr血清型，第二个“#”表示衣壳血清型。例如，包含aav2itr和aav1衣壳的aav颗粒将被称为“aav2/1”。[0132]在一些实施方案中，raav颗粒包含核酸，例如异源核酸。在一些实施方案中，核酸编码转基因，例如抗vegf试剂(例如阿柏西普)。在一些实施方案中，编码的转基因，例如抗vegf试剂，处于启动所述核酸转录的启动子的转录控制下。在一些实施方案中，启动子为“遍在”启动子。在一些实施方案中，启动子为“强的”或组成型活性启动子，例如巨细胞病毒(cmv)启动子、延伸因子1α(efla)启动子、甘油醛3-磷酸脱氢酶(gapdh)启动子或连接蛋白36(或“cx36”)启动子。在一些实施方案中，启动子是在特定组织或细胞如视网膜细胞中活化的组织特异性启动子，以降低对非靶细胞的潜在毒性或不期望的作用。在一些方面，可以产生几种aav载体以允许选择用于抗vegf试剂转基因(例如阿柏西普转基因)的最佳血清型和启动子。在一些实施方案中，核酸侧接aav反向末端重复序列(itr)。在一些实施方案中，核酸侧接aav2itr。[0133]在一些实施方案中，aav载体包含用于靶细胞(例如视网膜细胞)中转基因(例如抗vegf试剂，如阿柏西普)的增强表达的多核苷酸盒。在一些实施方案中，多核苷酸盒包含以5'至3'顺序的：(a)包含cmv序列(seqidno:22)的第一增强子区；(b)包含cmv序列(seqidno：23)的启动子区；(c)5'utr区，其以5'至3'的顺序包含tpl序列和emlp序列(分别为seqidno：24和seqidno：25)；(d)编码肽或多肽(例如，抗-vegf试剂，比如阿柏西普)的编码序列；(e)包含完整ees序列(seqidno：26)的第二增强子区；和(f)hgh聚腺苷酸化位点(seqidno：27)。在这些实施方案的某些中，多核苷酸盒包含选自seqidno：28-32的一个或多个序列或与其具有至少85％同一性的序列。在这些实施方案的某些中，多核苷酸盒的5'臂包含seqidno：33或与其具有至少85％同一性的序列或由其组成。在这些实施方案的某些中，多核苷酸盒的3'臂包含seqidno：34或与其具有至少85％同一性的序列或由其组成。seqidno：22-34的核酸序列提供如下：[0134][0135][0136][0137]ttgatattcacctggcccgatctggccatacacttg(seqodno:30)[0138]cccaggtccaagtttaaacgcc(seqidno:31)[0139][0140][0141][0142]用于靶细胞(比如视网膜细胞)中转基因(例如编码抗vegf试剂，比如阿柏西普的转基因)的增强表达的另外的多核苷酸盒公开在wo2018/170473中，将其与用于靶细胞中转基因的增强表达的多核苷酸盒相关的内容通过引用并入本文。[0143]在一些实施方案中，raav颗粒包含对靶细胞(例如视网膜细胞)具有增加的感染性的变体衣壳蛋白，其用于在个体中增加视网膜细胞的转导或增加基因递送至视网膜细胞的靶向。在一些实施方案中，raav颗粒包含在aav衣壳蛋白的衣壳蛋白gh环/环iv中的氨基酸修饰。在一些实施方案中，修饰位点是aav衣壳蛋白的gh环/环iv的溶剂可接近部分。关于aav衣壳的gh环/环iv的描述，参见例如vanvlietetal.(2006)mol.ther.14:809；padronetal.(2005)j.virol.79:5047；andshenetal.(2007)mol.ther.15:1955。已知几种aav衣壳变体，包括7m8变体。在一些实施方案中，raav颗粒包含变体aav衣壳蛋白，相对于相应的亲本aav衣壳蛋白，所述变体aav衣壳蛋白包含在衣壳蛋白的gh环中5个氨基酸至11个氨基酸(例如7个氨基酸序列)的插入，并且其中与包含相应的亲本或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒对视网膜细胞的感染性相比，所述变体衣壳蛋白赋予视网膜细胞增加的感染性。在一些实施方案中，可以将以下氨基酸序列中的任一种插入衣壳蛋白的gh环中：lalgettrpa(seqidno:1)；lanetitrpa(seqidno:2)、lakagqanna(seqidno:3)、lakdpkttna(seqidno:4)、kdtdttr(seqidno:5)、raggsvg(seqidno:6)、avdttkf(seqidno:7)、stgkvpn(seqidno:8)、lakdtdttra(seqidno:9)、laraggsvga(seqidno:10)、laavdttkfa(seqidno:11)、andlastgkvpna(seqidno:12)、lgettrp(seqidno:14)、netitrp(seqidno:15)、kagqann(seqidno:16)、kdpkttn(seqidno:17)、kdtdttr(seqidno:18)、raggsvg(seqidno:19)、avdttkf(seqidno:20)和stgkvpn(seqidno:21)。在一些实施方案中，将seqidno：1-12和14-21中阐述的氨基酸序列的任一个插入raav中vp1衣壳蛋白的溶剂暴露的gh环中。关于可插入衣壳蛋白gh环(例如，以促进ivt注射后目标核酸转导至视网膜细胞)中的氨基酸序列的其它细节提供在wo2012145601、us9587282、us10202657和us10214785中，将其涉及可插入衣壳蛋白gh环中的氨基酸序列的内容通过引用并入本文。[0144]在一些实施方案中，raav颗粒包含aav衣壳蛋白，例如aav2衣壳蛋白，其包括下列氨基酸序列中的任一种：lalgettrpa(seqidno:1)；lanetitrpa(seqidno:2)、lakagqanna(seqidno:3)、lakdpkttna(seqidno:4)、kdtdttr(seqidno:5)、raggsvg(seqidno:6)、avdttkf(seqidno:7)、stgkvpn(seqidno:8)、lakdtdttra(seqidno:9)、laraggsvga(seqidno:10)、laavdttkfa(seqidno:11)和lastgkvpna(seqidno:12)、lgettrp(seqidno:14)、netitrp(seqidno:15)、kagqann(seqidno:16)、kdpkttn(seqidno:17)、kdtdttr(seqidno:18)、raggsvg(seqidno:19)、avdttkf(seqidno:20)和stgkvpn(seqidno:21)其插入到以下位置：在aav2衣壳蛋白的位置587和588之间；在aav1衣壳蛋白的氨基酸590和591之间；在aav5衣壳蛋白的575和576之间；在aav6衣壳蛋白的氨基酸590和591之间；在aav7衣壳蛋白的氨基酸589和590之间；在aav8衣壳蛋白的氨基酸590和591之间；在aav9衣壳蛋白的氨基酸588和589之间；或在aav10衣壳蛋白的氨基酸589和590之间。在一些实施方案中，raav颗粒包含aav2衣壳蛋白，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，raav颗粒包含aav2衣壳蛋白，其包含插入在包含seqidno：13的序列的aav2vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)。[0145]在一些实施方案中，raav颗粒包含来自aav2的7m8变体衣壳蛋白，其包含插入在aav2vp1的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)。来自aav2的包含氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)的7m8变体衣壳蛋白的序列插入aav2vp1的位置587和588之间，提供如下：[0146]ihslpivsdwledtlsegirqwwklkpgppppkpaerhkddsrglvlpgykylgpfngldkgepvneadaaalehdkaydrqldsgdnpylkynhadaefqerlkedtsfggnlgravfqakkrvleplglveepvktapgkkrpvehspvepdsssgtgkagqqparkrlnfgqtgdadsvpdpqplgqppaapsglgtntmatgsgapmadnnegadgvgnssgnwhcdstwmgdrvittstrtwalptynnhlykqissqsgasndnhyfgystpwgyfdfnrfhchfsprdwqrlinnnwgfrpkrlnfklfniqvkevtqndgtttiannltstvqvftdseyqlpyvlgsahqgclppfpadvfmvpqygyltlnngsqavgrssfycleyfpsqmlrtgnnftfsytfedvpfhssyahsqsldrlmnplidqylyylsrtntpsgtttqsrlqfsqagasdirdqsrnwlpgpcyrqqrvsktsadnnnseyswtgatkyhlngrdslvnpgpamashkddeekffpqsgvlifgkqgsektnvdiekvmitdeeeirttnpvateqygsvstnlqrgnlalgettrparqaatadvntqgvlpgmvwqdrdvylqgpiwakiphtdghfhpsplmggfglkhpppqilikntpvpanpsttfsaakfasfitqystgqvsveiewelqkenskrwnpeiqytsnynksvnvdftvdtngvyseprpigtryltrnl(seqidno:37)。[0147]在一些实施方案中，raav颗粒包含衣壳蛋白vp1，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno.14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，raav颗粒包含衣壳蛋白vp2，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno.14)，其中所述氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，raav颗粒包含衣壳蛋白vp3，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno.14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，raav颗粒包含衣壳蛋白vp1、vp2和vp3，其中vp1、vp2和vp3各自包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lgettrp(seqidno.14)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。[0148]在一些实施方案中，raav颗粒包含衣壳蛋白vp1，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，raav颗粒包含衣壳蛋白vp2，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，raav颗粒包含衣壳蛋白vp3，其包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。在一些实施方案中，raav颗粒包含衣壳蛋白vp1、vp2和vp3，其中vp1、vp2和vp3各自包含插入在衣壳蛋白的位置587和588之间的氨基酸序列lalgettrpa(seqidno：1)，其中氨基酸残基编号对应于aav2vp1衣壳蛋白。[0149]在一些实施方案中，用于产生raav病毒的重组病毒和/或质粒包含其它转录或调节元件，例如polya(聚腺苷酸化)序列、非翻译区(utr)、3'utr或终止序列。在一些实施方案中，使用内部核糖体进入位点(ires)或类似元件从载体或质粒表达多于一种基因，其允许两种或更多种蛋白共表达或产生多基因或多顺反子mrna。[0150]在一些实施方案中，用于产生raav的raav和/或质粒包含一个或多个下列核酸元件：第一itr序列；启动子序列；内含子序列；第一utr序列；编码抗vegf试剂(例如阿柏西普)的异源核酸；第二utr序列；polya序列；和第二itr序列。在一些实施方案中，接头序列插入两个或更多个核酸元件之间。在一些实施方案中，异源核酸编码治疗性多肽，编码阿柏西普(或其功能片段或功能变体)。[0151]在一些实施方案中，载体是靶向载体，尤其是靶向raav(例如aav2.7m8)，其显示对特定细胞例如视网膜细胞(例如光感受器、视网膜神经节细胞、米勒细胞、双极细胞、无长突细胞、水平细胞或视网膜色素上皮细胞)的感染性更高。用于本公开内容的病毒载体可以包括在个体中显示低毒性和/或低免疫原性，并且在个体(例如人)中表达治疗有效量的抗vegf试剂(例如阿柏西普)的那些。本领域已知的任何合适的方法都可用于重组病毒(例如raav)的生化纯化，例如用于制备本文别处所述的药物组合物。重组aav病毒可以直接从细胞或从含有细胞的培养基中收获。病毒可以使用各种生化方法，如凝胶过滤、过滤、层析、亲和纯化、梯度超速离心或尺寸排阻方法进行纯化。在一些实施方案中，病毒是冻干的。[0152]在一些实施方案中，raav颗粒包含7m8变体衣壳蛋白，例如raav2.7m8，和编码抗vegf试剂(例如阿柏西普，或其功能片段或功能变体)的核酸序列。在一些实施方案中，与包含相应的亲本或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，raav颗粒(例如7m8变体)使视网膜细胞感染性的增加为至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％中的任一个。在一些实施方案中，与包含相应的亲代或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，视网膜细胞的感染性的增加是增加5％至100％、5％至95％、5％至90％、5％至85％、5％至80％、5％至75％、5％至70％、5％至65％、5％至60％、5％至55％、5％至50％、5％至45％、5％至40％、5％至35％、5％至30％、5％至25％、5％至20％、5％至15％、5％至10％中的任一个。[0153]在一些实施方案中，与包含相应的亲本或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，raav变体(例如raav2.7m8)的视网膜细胞感染性的增加为至少1倍、至少1.1倍、至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍或至少2倍中的任一个。在一些实施方案中，与包含相应的亲代aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，感染性的增加是至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍中的任一个。在一些实施方案中，与包含相应的亲代或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，感染性的增加是至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少55倍、至少60倍、至少65倍、至少70倍、至少75倍、至少80倍、至少85倍、至少90倍或至少100倍中的任一个。[0154]在一些实施方案中，与包含相应亲本或未修饰的aav颗粒的aav颗粒相比，raav变体(例如raav2.7m8)的视网膜细胞感染性的增加为10倍至100倍、10倍至95倍、10倍至90倍、10倍至85倍、10倍至80倍、10倍至75倍、10倍至70倍、10倍至65倍、10倍至60倍、10倍至55倍、10倍至50倍、10倍至45倍、10倍至40倍、10倍至35倍、10倍至30倍、10倍至25倍、10倍至20倍或10倍至15倍。[0155]在一些实施方案中，与包含相应亲代或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，视网膜细胞感染性的增加为2倍至20倍、2倍至19倍、2倍至18倍、2倍至17倍、2倍至16倍、2倍至15倍、2倍至14倍、2倍至13倍、2倍至12倍、2倍至11倍、2倍至10倍、2倍至9倍、2倍至8倍、2倍至7倍、2倍至6倍、2倍至5倍、2倍至4倍或2倍至3倍。[0156]在一些实施方案中，与包含相应的亲代或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒穿过受试者的眼睛中内界膜(ilm)的能力相比，本文描述的衣壳蛋白的氨基酸修饰可赋予穿过个体(例如人)眼睛中内界膜(ilm)的能力提高。在一些实施方案中，与包含相应的亲本或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，杂交raav变体(例如raav2.7m8)穿过ilm的能力的提高是提高至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％中的任一个。在一些实施方案中，与亲代或未修饰的aav衣壳蛋白相比，穿过ilm的能力的提高是提高5％至100％、5％至95％、5％至90％、5％至85％、5％至80％、5％至75％、5％至70％、5％至65％、5％至60％、5％至55％、5％至50％、5％至45％、5％至40％、5％至35％、5％至30％、5％至25％、5％至20％、5％至15％或5％至10％。[0157]在一些实施方案中，与包含相应亲本aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，raav变体(例如raav2.7m8)穿过ilm的能力的提高是至少1倍、至少1.1倍、至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍或至少2倍中的任一个。在一些实施方案中，与包含相应亲代的aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，穿过ilm的能力的提高是至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍中的任一个。在一些实施方案中，与包含相应的亲代或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，穿过ilm的能力的提高是至少15倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少35倍、至少40倍、至少45倍、至少50倍、至少55倍、至少60倍、至少65倍、至少70倍、至少75倍、至少80倍、至少85倍、至少90倍或至少100倍中的任一个。[0158]在一些实施方案中，与包含相应的亲代或未修饰的aav衣壳蛋白的aav颗粒相比，raav变体(例如raav2.7m8)穿过ilm的能力提高是10倍至100倍、10倍至95倍、10倍至90倍、10倍至85倍、10倍至80倍、10倍至75倍、10倍至70倍、10倍至65倍、10倍至60倍、10倍至55倍、10倍至50倍、10倍至45倍、10倍至40倍、10倍至35倍、10倍至30倍、10倍至25倍、10倍至20倍或10倍至15倍。[0159]在一些实施方案中，与包含相应的亲代或未修饰的aav蛋白的衣壳颗粒相比，raav变体(例如raav2.7m8)穿过ilm的能力的提高是2倍至20倍、2倍至19倍、2倍至18倍、2倍至17倍、2倍至16倍、2倍至15倍、2倍至14倍、2倍至13倍、2倍至12倍、2倍至11倍、2倍至10倍、2倍至9倍、2倍至8倍、2倍至7倍、2倍至6倍、2倍至5倍、2倍至4倍或2倍至3倍。[0160]在一些实施方案中，包含编码阿柏西普的核酸的raav.7m8用于基因疗法。在一些实施方案中，使用aav2或raav2经由玻璃体内或视网膜下注射将编码抗vegf试剂(例如阿柏西普)的核酸序列递送至受试者的眼睛或视网膜细胞中。在一些实施方案中，使用aav2或raav2经由玻璃体内注射将编码抗vegf试剂(例如阿柏西普)的核酸序列递送至受试者的眼睛或视网膜细胞中。在一些实施方案中，使用raav2.7m8将抗vegf试剂(例如阿柏西普)的核酸序列递送至受试者的视网膜细胞中。在一些实施方案中，异源核酸(例如，编码抗vegf试剂如阿柏西普的核酸)整合入靶细胞基因组(例如，视网膜细胞基因组)，引起例如抗vegf试剂(如阿柏西普)在靶细胞中的长期表达。在一些实施方案中，病毒载体将包含异源核酸(例如，编码抗vegf试剂如阿柏西普的核酸)的质粒或其它染色体外遗传元件递送至靶细胞(例如，视网膜细胞)。[0161]在一些实施方案中，raav颗粒包含编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.99％或100％同一性中任一个的氨基酸序列。在一些实施方案中，raav颗粒包含编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，raav颗粒包含编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含seqidno：35的氨基酸序列。在一些实施方案中，raav颗粒包含编码多肽的核酸，所述多肽包含seqidno：35的氨基酸序列。在一些实施方案中，raav颗粒包含编码阿柏西普的核酸，且侧接aav2反向末端重复(itr)。seqidno：35的序列提供如下：[0162]sdtgrpfvemyseipeiihmtegrelvipcrvtspnitvtlkkfpldtlipdgkriiwdsrkgfiisnatykeiglltceatvnghlyktnylthrqtntiidvvlspshgielsvgeklvlnctartelnvgidfnweypsskhqhkklvnrdlktqsgsemkkflstltidgvtrsdqglytcaassglmtkknstfvrvhekdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seqidno:35)。[0163]在一些实施方案中，raav颗粒包含与seqidno：36的核酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.9％或至少约100％序列同源性中任一个的核酸，且其中所述核酸侧接aav2反向末端重复序列(itr)。seqidno：36的序列提供在图5中。在一些实施方案中，raav颗粒包含与阿柏西普的核酸序列(例如seqidno：36)具有至少约75％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.9％或至少约100％序列同源性中任一个的核酸，且其中所述核酸侧接aav2反向末端重复序列(itr)。在一些实施方案中，阿柏西普的核酸序列来源于其氨基酸序列。在一些实施方案中，阿柏西普的核酸序列经密码子优化以改善其在受试者中的表达。[0164]在一些实施方案中，阿柏西普的核酸序列是密码子优化的，用于在灵长类动物或人类受试者中表达。对应于阿柏西普氨基酸序列的合成基因的构建已描述在文献中，例如kandaa,nodak,saitow,ishidas.aflibercepttrapsgalectin-1,anangiogenicfactorassociatedwithdiabeticretinopathy.scientificreports5:17946(2015)(描述“通过idt(coralville，ia)产生呈合成基因的vegf-trapr1r2(对应于阿柏西普)cdna”)。考虑到阿柏西普的可用氨基酸序列，可使用本领域已知的任何方法产生阿柏西普的cdna，用于基因治疗或本文所述的raav中。[0165]可以用本领域已知的任何方法实现密码子优化。密码子优化是指修饰核酸序列以增强基因在目标靶或宿主细胞(例如，人视网膜细胞)中的表达的方法，其通过用在宿主细胞中更频繁使用或最频繁使用的密码子替代天然序列的至少一个密码子(例如，约或超过1、2、3、4、5、10、15、20、25、50、100或更多个密码子)同时保持天然氨基酸序列。密码子使用表是容易获得的，包括例如，genscriptcodonusagefrequencytabletool在www(dot)genscript(dot)com/tools/codon-frequency-table；codonusagedatabase在www(dot)kazusa(dot)or(dot)jp/codon/；以及nakamura,y.,etal.“codonusagetabulatedfromtheinternationaldnasequencedatabases:statusfortheyear2000”nucl.acidsres.28:292(2000)。[0166]同源性是指两个序列之间比对的残基的保守百分比，所述序列包括但不限于功能片段，包含插入、缺失、取代的序列，假片段，假基因，剪接变体或人工优化的序列。[0167]在一些实施方案中，raav颗粒包含编码阿柏西普的核酸。在一些实施方案中，多肽是阿柏西普。[0168]如本文使用的“阿柏西普”指与上文鉴定的阿柏西普氨基酸序列(seqidno：35)具有至少75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高或100％同源性中的任一个的多肽或蛋白质序列、或其功能片段或变体或突变体。同源性是指两个序列之间比对的残基的保守百分比，所述序列包括但不限于功能片段，包含插入、缺失、取代的序列，假片段，假基因，剪接变体或人工优化的序列。[0169]在一些实施方案中，阿柏西普的氨基酸序列与seqidno：35的阿柏西普氨基酸序列具有至少75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％同源性中的任一个。在一些实施方案中，将本文公开的编码阿柏西普的核酸序列与上文鉴定的阿柏西普氨基酸序列的相应cdna序列进行比较，并显示阿柏西普核酸序列(例如seqidno：36)之间至少75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％的序列同源性中的任一个。在一些实施方案中，阿柏西普与阿柏西普具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％的空间同源性(例如，在其二级、三级和四级结构或构象方面)中的任一个。在一些实施方案中，阿柏西普与标准护理中使用的阿柏西普具有至多80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％的空间同源性的任一个(例如，二级、三级和四级结构或构象)。[0170]在一些实施方案中，阿柏西普基因产物或阿柏西普转基因(如包括在基于raav的基因治疗中)包含本文公开的衣壳变体(例如，7m8变体)，编码与上述seqidno:35的氨基酸序列，或者在阿柏西普的相应cdna序列(例如，与seqidno：36相比的基因疗法中使用的阿柏西普序列的cdna)之间具有至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％同源性中的任一个的蛋白、融合蛋白或多肽。在一些实施方案中，本文公开的方法、组合物包含阿柏西普的功能片段或其变体或突变体。在一些实施方案中，阿柏西普的核酸序列经修饰或密码子优化以增强其体内活性、表达、稳定性和/或溶解性。[0171]阿柏西普为一种115kda融合蛋白，其可以被糖基化。阿柏西普包含与人vegfr-1和vegfr-2的细胞外vegf受体序列融合的igg主链，并且通过以比其天然或内源性受体更大的亲和力结合vegf-a起可溶性诱饵受体的作用。参见，例如，stewartmw.aflibercept(vegftrap-eye):thenewestanti-vegfdrug.br.j.ophthalmol.2012sep；96(9):1157-8。阿柏西普对vegf的高亲和力干扰或破坏了天然或内源性vegf受体的随后结合和活化。降低的vegf活性可以导致血管生成和血管通透性降低。阿柏西普对胎盘生长因子plgf和vegf-b的抑制也可有助于治疗以异常(例如过度)血管生成和/或新血管形成为特征的眼部疾病或障碍。plgf已经与血管生成有关，并且某些眼部疾病或病症，如湿性amd，可能与plgf水平升高相关。vegf-b过表达可能与血液-视网膜屏障的破坏和视网膜血管生成相关。因此，vegf-a、vegf-b和plgf的抑制都可以促进阿柏西普的功效。[0172]用于制备向靶细胞递送转基因的载体的方法[0173]在一些实施方案中，使用本领域已知的任何方法制备raav颗粒。在一些实施方案中，在sf9细胞中使用杆状病毒表达载体系统制备raav颗粒。sf9细胞是一种通常用于使用杆状病毒生产重组蛋白的昆虫细胞培养细胞系。在一些实施方案中，在sf9细胞中使用两种杆状病毒制备raav颗粒。在一些实施方案中，在sf9细胞中使用两种杆状病毒制备raav颗粒，其中第一杆状病毒编码aav2rep和aav2.7m8cap蛋白的基因，第二杆状病毒编码抗vegf试剂。在一些实施方案中，在sf9细胞中使用两种杆状病毒制备raav颗粒，其中第一杆状病毒编码aav2rep和aav2.7m8cap蛋白的基因，并且第二杆状病毒编码阿柏西普(例如，人阿柏西普)cdna表述盒。在一些实施方案中，在sf9细胞中使用两种杆状病毒制备raav颗粒，其中第一杆状病毒编码aav2rep和aav2.7m8cap蛋白的基因，并且第二杆状病毒包含编码多肽且侧接aav2反向末端重复序列(itr)的核酸，所述多肽包含与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽包含seqidno：35的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽是阿柏西普。[0174]剂量[0175]在一些实施方案中，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是右眼或左眼。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是右眼。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是左眼。在一些实施方案中，本文提供的方法进一步包括向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是右眼，且对侧眼睛是左眼。在一些实施方案中，个体的一只眼睛是左眼，且对侧眼睛是右眼。[0176]在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至少约2周(例如，至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、至少约12个月、至少约1年、至少约2年、至少约3年、至少约4年、至少约5年或更长)。在一些实施方案中，向对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至少约2周，并且向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒比向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒更高(例如，超过约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约125％、约150％、约175％、约200％、约225％、约250％、约275％、约300％或更多中的任一个)。[0177]在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至多约1周、至多约2周、至多约3周或至多约4周。在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至多约2周(例如，约0天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天)。在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至多约2周(例如约0天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天)，并且向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒与向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒大致相同(例如，高或低小于1％、高或低小于5％、高或低小于10％、或高或低小于20％)或更低(例如，更低约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％)。在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至多约2周，并且向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒与向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒大致相同(例如，高或低小于1％、高或低小于5％、高或低小于10％、或高或低小于20％)。在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是在向一只眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后至多约2周，并且向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒比向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒更低(例如，低约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％)。[0178]在一些实施方案中，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒表示为载体基因组的数目(vg)。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1011个载体基因组(vg)或更少的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约1×1010至约2×1010、约2×1010至约3×1010、约3×1010至约4×1010、约4×1010至约5×1010、约5×1010至约6×1010、约6×1010至约7×1010、约7×1010至约8×1010、约8×1010至约9×1010、约9×1010至约10×1010、约1×1011至约2×1011、约2×1011至约3×1011、约3×1011至约4×1011、约4×1011至约5×1011或约5×1011至约6×1011vg的raav颗粒，包括这些范围内的任何值的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010个载体基因组(vg)至约2×1011vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg至约2×1011vg、约7×1010vg至约2×1011vg、约8×1010vg至约2×1011vg、约9×1010vg至约2×1011vg、约10×1010vg至约2×1011vg或约1×1011vg至约2×1011vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg至约2×1011vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg至约7×1010vg、约7×1010vg至约8×1010vg、约8×1010vg至约9×1010vg、约9×1010vg至约10×1010vg、约10×1010vg至约1×1011vg、或约1×1011vg至约2×1011vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg、约7×1010vg、约8×1010vg、约9×1010vg、约10×1010vg、约1×1011vg或约2×1011vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg或约2×1011vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg、约2×1011vg或约6×1011vg。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg。在一些实施方案中，单位剂量为约2×1011vg。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1011vg。[0179]在一些实施方案中，将单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛。在一些实施方案中，单位剂量表示为载体基因组的数目(vg)/眼睛(vg/眼睛)。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1011vg/眼睛或更少的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约1×1010至约2×1010、约2×1010至约3×1010、约3×1010至约4×1010、约4×1010至约5×1010、约5×1010至约6×1010、约6×1010至约7×1010、约7×1010至约8×1010、约8×1010至约9×1010、约9×1010至约10×1010、约1×1011至约2×1011、约2×1011至约3×1011、约3×1011至约4×1011、约4×1011至约5×1011或约5×1011至约6×1011vg/眼睛的raav颗粒，包括这些范围内的任何值的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为6×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛、约7×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛、约8×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛、约9×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛、约10×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛或约1×1011vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg/眼睛至约7×1010vg/眼睛、约7×1010vg/眼睛至约8×1010vg/眼睛、约8×1010vg/眼睛至约9×1010vg/眼睛、约9×1010vg/眼睛至约10×1010vg/眼睛、约10×1010vg/眼睛至约1×1011vg/眼睛或约1×1011vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg/眼睛、约7×1010vg/眼睛、约8×1010vg/眼睛、约9×1010vg/眼睛、约10×1010vg/眼睛、约1×1011vg/眼睛或约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg/眼睛或约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg/眼睛、约2×1011vg/眼睛或约6×1011vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1010vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量为约2×1011vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1011vg/眼睛。[0180]在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，e为以10为底取幂的简写，并且xey指x乘以底10的y次方/幂。在一些实施方案中，单位剂量表示为载体基因组的数目(vg)。在一些实施方案中，单位剂量为约6e11个载体基因组(vg)或更少的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约1e10至约2e10、约2e10至约3e10、约3e10至约4e10、约4e10至约5e10、约5e10至约6e10、约6e10至约7e10、约7e10至约8e10、约8e10至约9e10、约9e10至约10e10、约1e11至约2e11、约2e11至约3e11、约3e11至约4e11、约4e11至约5e11或约5e11至约6e11vg的raav颗粒，包括在这些范围内的任何值的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10个载体基因组(vg)至约2e11vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg至约2e11vg、约7e10vg至约2e11vg、约8e10vg至约2e11vg、约9e10vg至约2e11vg、约10e10vg至约2e11vg、或约1e11vg至约2e11vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg至约2e11vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg至约7e10vg、约7e10vg至约8e10vg、约8e10vg至约9e10vg、约9e10vg至约10e10vg、约10e10vg至约1e11vg、或约1e11vg至约2e11vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg、约7e10vg、约8e10vg、约9e10vg、约10e10vg、约1e11vg或约2e11vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg或约2e11vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg、约2e11vg或约6×1011vg。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg。在一些实施方案中，单位剂量为约2e11vg。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1011vg。[0181]在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量表示为载体基因组(vg)的数量/眼睛(vg/眼睛)。在一些实施方案中，单位剂量为约6e11vg/眼睛或更少的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约1e10至约2e10、约2e10至约3e10、约3e10至约4e10、约4e10至约5e10、约5e10至约6e10、约6e10至约7e10、约7e10至约8e10、约8e10至约9e10、约9e10至约10e10、约1e11至约2e11、约2e11至约3e11、约3e11至约4e11、约4e11至约5e11、或约5e11至约6e11vg/眼睛的raav颗粒，包括在这些范围内的任何值的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg/眼睛至约2e11vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg/眼睛至约2e11vg/眼睛、约7e10vg/眼睛至约2e11vg/眼睛、约8e10vg/眼睛至约2e11vg/眼睛、约9e10vg/眼睛至约2e11vg/眼睛、约10e10vg/眼睛至约2e11vg/眼睛、或约1e11vg/眼睛至约2e11vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg/眼睛至约2e11vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg/眼睛至约7e10vg/眼睛、约7e10vg/眼睛至约8e10vg/眼睛、约8e10vg/眼睛至约9e10vg/眼睛、约9e10vg/眼睛至约10e10vg/眼睛、约10e10vg/眼睛至约1e11vg/眼睛、或约1e11vg/眼睛至约2e11vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg/眼睛、约7e10vg/眼睛、约8e10vg/眼睛、约9e10vg/眼睛、约10e10vg/眼睛、约1e11vg/眼睛、或约2e11vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg/眼睛或约2e11vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg/眼睛、约2e11vg/眼睛、或约6×1011vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量为约6e10vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量为约2e11vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量为约6×1011vg/眼睛。[0182]在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以引起玻璃体液中治疗性蛋白(例如，抗vegf试剂，如阿柏西普)表达的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以在玻璃体液中实现约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10μg/ml或更高(包括这些值之间的任何范围)中任一个的治疗性蛋白(例如抗vegf试剂，如阿柏西普)浓度的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以引起玻璃体液中阿柏西普表达的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以在玻璃体液中实现约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10μg/ml或更高(包括这些值之间的任何范围)中任一个的阿柏西普浓度的单位剂量。[0183]在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒是足以引起治疗性蛋白(例如抗vegf试剂，如阿柏西普)在房水液(aqueousfluid)中表达的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以在房水液中实现至少约0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1.0μg/ml或更高(包括这些值之间的任何范围)的治疗性蛋白质(例如抗vegf试剂，如阿柏西普)浓度的的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以引起房水液中阿柏西普表达的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以在房水液中实现至少约0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1.0μg/ml或更高(包括这些值之间的任何范围)的阿柏西普浓度的单位剂量。[0184]在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以引起治疗性蛋白(例如抗vegf试剂，如阿柏西普)在视网膜中表达的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以在视网膜中实现至少约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10μg/g或更高(包括这些值之间的任何范围)的治疗性蛋白(例如，抗vegf试剂，如阿柏西普)浓度的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以引起阿柏西普在视网膜中表达的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以在视网膜中实现至少约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10μg/g或更高(包括这些值之间的任何范围)的阿柏西普浓度的单位剂量。[0185]在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以引起治疗性蛋白(例如抗vegf试剂，如阿柏西普)在脉络膜中表达的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以在脉络膜中实现约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10μg/g或更高(包括这些值之间的任何范围)中任一个的治疗性蛋白(例如，抗vegf试剂，如阿柏西普)浓度的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以引起阿柏西普在脉络膜中表达的单位剂量。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒是足以在视网膜中实现约3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10μg/g或更高(包括这些值之间的任何范围)中任一个的阿柏西普浓度的单位剂量。[0186]在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。[0187]在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，单位剂量的raav颗粒足以引起视网膜厚度的维持或降低，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，单位剂量的raav颗粒足以引起视网膜厚度的降低，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，视网膜厚度是中央亚视场厚度(cst)或中心视网膜厚度(crt)。在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜厚度相比，单位剂量的raav颗粒足以引起视网膜厚度的降低超过约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或约100％中的任一个，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，通过oct或sd-oct测定视网膜厚度(例如，cst或crt)。[0188]在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，单位剂量的raav颗粒足以引起黄斑体积的维持或降低，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，单位剂量的raav颗粒足以引起黄斑体积的降低，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的黄斑体积相比，单位剂量的raav颗粒足以引起皇帝体积的降低超过约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或约100％中的任一个，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，通过oct或sd-oct测定黄斑体积。[0189]在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的视力相比，单位剂量的raav颗粒足以引起视力的维持或改善，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的视力相比，单位剂量的raav颗粒足以引起视力的改善，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的视力相比，单位剂量的raav颗粒足以引起视力的改善超过约5％、约10％、约15％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约125％、约150％、约175％、约200％、约225％、约250％、约275％、约300％或更多中的任一个，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的bcva相比，单位剂量的raav颗粒足以引起bcva的改善，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，bcva表示为etdrs评分，其对应于正确阅读的字母的数量(vitaleetal.,(2016)jamaopthalmol134(9):1041:1047)。在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的bcva相比，单位剂量的raav颗粒足以引起bcva改善至少15个etdrs字母(vitale等人，(2016)jamaopthalmol134(9)：1041:1047)(例如至少约15、至少约20、至少约30、至少约40、至少约50、至少约60或约70个字母)的，则该单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果与施用单位剂量的raav颗粒之前的bcva相比，单位剂量的raav颗粒足以引起bcva的改善，其中个体损失少于15个etdrs字母(vitale等人，(2016)jamaopthalmol134(9)：1041:1047)(例如15个或更少、14个或更少、13个或更少、12个或更少、11个或更少、10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少、2个或更少、1或0个字母)，则该单位剂量为治疗有效剂量。[0190]在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，确定个体的视力得到维持，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，确定个体的视力得到改善，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与施用单位剂量的raav颗粒之前相比，通过sd-oct评估的cst或crt降低，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与施用单位剂量的raav颗粒之前，通过sd-oct评估的cst或crt得到保持，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。[0191]在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与施用单位剂量的raav颗粒之前相比，黄斑体积得到减少，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与施用单位剂量的raav颗粒之前相比，黄斑体积得到保持，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。[0192]在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与施用单位剂量的raav颗粒之前相比，视网膜厚度(例如，中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst))和黄斑体积得到降低，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与施用单位剂量的raav颗粒之前相比，视网膜厚度(例如，中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst))和黄斑体积得到保持，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。[0193]在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，个体在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之后约每4周、每5周、每6周、每7周、每8周、每9周、每10周或更长的任一时间，需要少于一次的救援疗法治疗(例如，阿柏西普注射)，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，个体不需要任何救援疗法治疗(例如，阿柏西普注射)持续至少约1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周、至少15周、至少20周、至少30周、至少40周、至少50周、至少60周、至少70周、至少80周、至少90周、至少100周、至少110周或更长时间，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。[0194]在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜液体水平相比，确定个体的视网膜液体得到减少，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前的视网膜液体水平相比，确定个体的视网膜液体得到维持，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前的irf和/或srf的水平相比，确定个体的irf和/或srf减少，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。[0195]在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前的ped相比，确定个体的色素上皮脱离(ped)得到消退，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。[0196]在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前存在的cnv病变相比，cnv病变缩小，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前存在的cnv病变相比，cnv病变缩小超过约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任一个，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前存在的cnv病变相比，cnv病变没有生长，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前存在的cnv病变相比，cnv病变不会生长超过约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％中的任一个，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。[0197]在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前的解剖学特征相比，确定个体的解剖学特征得到改善，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。在一些实施方案中，如果在施用单位剂量的raav颗粒之后，与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用单位剂量的raav颗粒之前的解剖学特征相比，确定个体的解剖学特征稳定和/或得到保持，则该单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。[0198]在一些实施方案中，如果在向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用的剂量减少、停止或预防眼新血管疾病或病症的至少一种症状，则该单位剂量的raav颗粒是治疗有效的。在以异常(例如过度)血管生成为特征的眼新血管疾病或病症的情况下，这样的症状包括但不限于例如视觉畸变(例如色觉受损、视力模糊、中心视觉退化)和视力丧失。在一些实施方案中，如果向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起眼新血管疾病的一种或多种临床特征的维持、部分消退或完全消退，则向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。例如，如果向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起眼新血管疾病的完全消退、部分消退或维持(如通过本领域已知的任何方法测量)，则向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒为治疗有效剂量。i在一些实施方案中，如果向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起眼新血管疾病的完全消退、部分消退或维持，则向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒是治疗有效的，如通过最佳矫正视力(bcva)(例如，基于etdrs评分；vitale等人，(2016)jamaopthalmol134(9)：1041:1047)、通过sd-oct测定中心视网膜厚度、在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之后个体需要的救援疗法治疗(例如，阿柏西普注射)的次数、视网膜内流体(irf)和/或视网膜下流体(srf)的存在、色素上皮脱离(ped)的消退、脉络膜新生血管(cnv)病变生长、基于本领域已知的任何方法(例如，sd-oct、oct、荧光素血管造影术、数码彩色眼底摄影等)的解剖学特征进行评估。在一些实施方案中，如果向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒引起眼新血管疾病的完全消退、部分消退或维持，则向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒是治疗有效的，如基于眼科检查、眼内压(例如，使用goldmann压平眼压计或tono-pen)、间接检眼镜检查、一只眼睛和/或对侧眼睛及附件的检查、眼睑和/或瞳孔反应性、眼睑下垂、异常瞳孔形状、瞳孔不相等、对光的异常反应、传入性瞳孔缺陷、裂隙灯检查(包括眼睑、结膜、角膜、晶状体、虹膜和前房)、玻璃体后段异常、视神经、外周视网膜和视网膜血管、sd-oct、荧光素血管造影术、数码彩色眼底照相(包括视网膜、视神经盘和/或黄斑的图像)、房水采样、玻璃体液采样、oct-血管造影(oct-a)、折射和/或视力(bcva)进行评估。[0199]在一些实施方案中，向个体一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒与向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒相同。在一些实施方案中，向个体一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒与向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒不同。在一些实施方案中，向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒比向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒更高，例如高约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约125％、约150％、约175％、约200％、约225％、约250％、约275％、约300％或更多中的任一个。在一些实施方案中，向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒比向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒更高，例如高约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约125％、约150％、约175％、约200％、约225％、约250％、约275％、约300％或更多中的任一个。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒表示为每只眼睛载体基因组(vg)的数量(vg/眼睛)。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1011vg/眼睛或更少的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约1×1010至约2×1010、约2×1010至约3×1010、约3×1010至约4×1010、约4×1010至约5×1010、约5×1010至约6×1010、约6×1010至约7×1010、约7×1010至约8×1010、约8×1010至约9×1010、约9×1010至约10×1010、约1×1011至约2×1011、约2×1011至约3×1011、约3×1011至约4×1011、约4×1011至约5×1011或约5×1011至约6×1011vg/眼睛的raav颗粒，包括在这些范围内的任何值的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛、约7×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛、约8×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛、约9×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛、约10×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛、或约1×1011vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010vg/眼睛至约7×1010vg/眼睛、约7×1010vg/眼睛至约8×1010vg/眼睛、约8×1010vg/眼睛至约9×1010vg/眼睛、约9×1010vg/眼睛至约10×1010vg/眼睛、约10×1010vg/眼睛至约1×1011vg/眼睛、或约1×1011vg/眼睛至约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010vg/眼睛、约7×1010vg/眼睛、约8×1010vg/眼睛、约9×1010vg/眼睛、约10×1010vg/眼睛、约1×1011vg/眼睛、或约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010vg/眼睛或约2×1011vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010vg/眼睛的raav颗粒。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010vg/眼睛、约2×1011vg/眼睛、或约6×1011vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1010vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约2×1011vg/眼睛。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为约6×1011vg/眼睛。[0200]在一些实施方案中，同时施用向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒和向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，在不同时间施用向个体的一只眼睛施用的单位剂量的raav颗粒和向个体的对侧眼睛施用的单位剂量的raav颗粒。在一些实施方案中，在向一只眼睛施用单位剂量之后至少约1小时、至少约2小时、至少约4小时、至少约8小时、至少约12小时、至少约24小时、至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约1周、至少2周、至少约3周、至少约4周或更长时间中的任一时间向对侧眼睛施用施用单位剂量。在一些实施方案中，向对侧眼睛施用的单位剂量是在向一只眼睛施用单位剂量滞后至少约2周施用。[0201]在一些实施方案中，将单个单位剂量的raav颗粒施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛。在一些实施方案中，向一只眼睛和/或对侧眼睛施用的raav颗粒的单个单位剂量为治疗有效剂量。在一些实施方案中，将超过一个剂量的raav颗粒(例如，超过约2、3、4、5或更多个单位剂量中的任一个)施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛。在一些实施方案中，施用于一只眼睛和/或对侧眼睛的raav颗粒的超过一个剂量为治疗有效剂量。[0202]药物制剂[0203]在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒为药物制剂形式。在一些实施方案中，药物制剂包含raav颗粒、一种或多种渗透或离子强度剂、一种或多种缓冲剂、一种或多种表面活性剂和一种或多种溶剂。在一些实施方案中，渗透或离子强度剂为氯化钠。在一些实施方案中，一种或多种缓冲剂为磷酸二氢钠和/或磷酸氢二钠。在一些实施方案中，表面活性剂为泊洛沙姆188。在一些实施方案中，溶剂为水。在一些实施方案中，药物制剂包含raav颗粒、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和表面活性剂。[0204]在一些实施方案中，药物制剂包含约1×1010vg/ml至约1×1013vg/ml的raav颗粒、约150mm至约200mm的氯化钠、约1mm至约10mm的磷酸二氢钠、约1mm至约10mm的磷酸氢二钠和约0.0005％(w/v)至约0.005％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.0至约7.5的ph。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1011vg/ml至约6×1012vg/ml的raav颗粒、约150mm至约200mm的氯化钠、约1mm至约10mm的磷酸二氢钠、约1mm至约10mm的磷酸氢二钠和约0.0005％(w/v)至约0.005％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.0至约7.5的ph。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1011vg/ml的raav颗粒、约150mm至约200mm的氯化钠、约1mm至约10mm的磷酸二氢钠、约1mm至约10mm的磷酸氢二钠和约0.0005％(w/v)至约0.005％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.0至约7.5的ph。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1012vg/ml的raav颗粒、约150mm至约200mm的氯化钠、约1mm至约10mm的磷酸二氢钠、约1mm至约10mm的磷酸氢二钠和约0.0005％(w/v)至约0.005％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.0至约7.5的ph。[0205]在一些实施方案中，药物制剂中的raav颗粒以约1×1010vg/ml至约1×1013vg/ml的浓度存在。在一些实施方案中，药物制剂中的raav颗粒以约1×1009vg/ml至约6×1014vg/ml的浓度存在。在某些实施方案中，药物制剂中的raav颗粒以下述浓度存在：1×1009vg/ml至约2×1009vg/ml、约2×1009vg/ml至约3×1009、约3×1009vg/ml至约4×1009、约4×1009vg/ml至约5×1009、约5×1009vg/ml至约6×1009、约6×1009vg/ml至约7×1009、约7×1009vg/ml至约8×1009、约8×1009vg/ml至约9×1009、约9×1009vg/ml至约10×1009、约10×1009vg/ml至约1×1010、约1×1010vg/ml至约2×1010、约2×1010vg/ml至约3×1010、约3×1010vg/ml至约4×1010、约4×1010vg/ml至约5×1010、约5×1010vg/ml至约6×1010、约6×1010vg/ml至约7×1010、约7×1010vg/ml至约8×1010、约8×1010vg/ml至约9×1010、约9×1010vg/ml至约10×1010、约10×1010vg/ml至约1×1011、约1×1011vg/ml至约2×1011、约2×1011vg/ml至约3×1011、约3×1011vg/ml至约4×1011、约4×1011vg/ml至约5×1011、约5×1011vg/ml至约6×1011、约6×1011vg/ml至约7×1011、约7×1011vg/ml至约8×1011、约8×1011vg/ml至约9×1011、约9×1011vg/ml至约10×1011、约1×1012vg/ml至约2×1012、约2×1012vg/ml至约3×1012、约3×1012vg/ml至约4×1012、约4×1012vg/ml至约5×1012、约5×1012vg/ml至约6×1012、约6×1012vg/ml至约7×1012、约7×1012vg/ml至约8×1012、约8×1012vg/ml至约9×1012、约9×1012vg/ml至约10×1012、约1×1013vg/ml至约2×1013、约2×1013vg/ml至约3×1013、约3×1013vg/ml至约4×1013、约4×1013vg/ml至约5×1013、约5×1013vg/ml至约6×1013、约6×1013vg/ml至约7×1013、约7×1013vg/ml至约8×1013、约8×1013vg/ml至约9×1013、约9×1013vg/ml至约10×1013、约1×1014vg/ml至约2×1014、约2×1014vg/ml至约3×1014、约3×1014vg/ml至约4×1014、约4×1014vg/ml至约5×1014、或约5×1014vg/ml至约6×1014vg/ml。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1011vg/ml至约6×1012vg/ml的raav颗粒。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1012vg/ml的raav颗粒。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1011vg/ml的raav颗粒。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1011vg/ml至约6×1012vg/ml的raav颗粒。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1012vg/ml的raav颗粒。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1011vg/ml的raav颗粒。[0206]在一些实施方案中，药物制剂中的氯化钠以约150mm至约200mm的浓度存在。在某些实施方案中，药物制剂中的氯化钠以约150mm、约160mm、约170mm、约180mm、约190mm或约200mm的浓度存在。在某些实施方案中，药物制剂中的氯化钠以约180mm的浓度存在。[0207]在一些实施方案中，磷酸二氢钠以约1mm至约10mm的浓度存在于药物制剂中。在一些实施方案中，磷酸二氢钠以约1mm、约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm或约10mm中的任一种浓度存在于药物制剂中。在某些实施方案中，磷酸二氢钠以约5mm的浓度存在于药物制剂中。[0208]在一些实施方案中，磷酸氢二钠以约1mm至约10mm的浓度存在于药物制剂中。在一些实施方案中，磷酸氢二钠以约1mm、约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm或约10mm中的任一种浓度存在于药物制剂中。在某些实施方案中，磷酸氢二钠以约5mm的浓度存在于药物制剂中。[0209]在一些实施方案中，泊洛沙姆188以约0.0005％(w/v)至约0.005％(w/v)的浓度存在于药物制剂中。在一些实施方案中，泊洛沙姆188以约0.0005％(w/v)、约0.0006％(w/v)、约0.0007％(w/v)、约0.0008％(w/v)、约0.0009％(w/v)、约0.001％(w/v)、约0.002％(w/v)、约0.003％(w/v)、约0.004％(w/v)或约0.005％(w/v)中任一个的浓度存在于药物制剂中。在某些实施方案中，泊洛沙姆188以约0.001％(w/v)的浓度存在于药物制剂中。[0210]在一些实施方案中，药物制剂具有约7.0至约7.5的ph。在一些实施方案中，药物制剂具有约7.0、约7.1、约7.2、约7.3、约7.4或约7.5的ph。在某些实施方案中，药物制剂具有约7.3的ph。在一些实施方案中，使用盐酸和氢氧化钠来调节药物制剂的ph。[0211]在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1012vg/ml的raav颗粒、约180mm的氯化钠、约5mm的磷酸二氢钠、约5mm的磷酸氢二钠和约0.001％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.3的ph。在一些实施方案中，药物制剂包含约6×1011vg/ml的raav颗粒、约180mm的氯化钠、约5mm的磷酸二氢钠、约5mm的磷酸氢二钠和约0.001％(w/v)的泊洛沙姆188，其中所述药物制剂具有约7.3的ph。[0212]在一些实施方案中，药物制剂适于经由玻璃体内(ivt)注射施用至个体(例如人类患者)的一只眼睛和/或对侧眼睛以实现期望的治疗或预防作用。在一些实施方案中，药物制剂作为重构的均质溶液提供。在一些实施方案中，溶液是悬浮液。在一些实施方案中，药物制剂作为冷冻悬浮液提供，并且在施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛之前解冻。在一些实施方案中，溶液是等渗的。[0213]在其它实施方案中，包含例如aav2.7m8载体的药物组合物以冻干形式提供，所述载体包含编码抗vegf试剂(例如，其功能片段或变体)的核酸序列，并在施用于个体的一只眼睛和/或对侧眼睛之前重构。在一些实施方案中，本文提供的方法进一步包括在施用于受试者之前在缓冲液中重构、溶解或增溶包含raav(例如，aav2.7m8)和编码抗vegf试剂(例如，阿柏西普或其功能片段或变体)的冻干药物组合物的步骤。在一些实施方案中，这样的冻干药物组合物包含以下的一种或多种：冷冻保护剂、表面活性剂、盐、稳定剂或其任何组合。[0214]在一些实施方案中，药物制剂是均质溶液。在一些实施方案中，均质溶液在预填充注射器中提供。在一些实施方案中，药物制剂作为悬浮液提供。在一些实施方案中，悬浮液为溶液。在一些实施方案中，将悬浮液冷藏。在一些实施方案中，将悬浮液冷冻。在一些实施方案中，本文提供的方法还包括将冷冻的混悬液加热至室温和/或搅拌该悬浮液以确保活性成分在施用于个体的一只眼睛和/或对侧眼睛(例如，经由ivt注射)之前溶解和/或均匀分布在溶液中的步骤。在一些实施方案中，本文提供的方法进一步包括将冷冻的悬浮液解冻和升温至室温和/或搅拌该悬浮液，以确保活性成分在施用于个体的一只眼睛和/或对侧眼睛(例如，经由ivt注射)之前溶解和/或均匀分布在溶液中的步骤。在一些实施方案中，在施用于受试者之前(例如，经由ivt注射)稀释悬浮液。在一些实施方案中，悬浮液作为预填充注射器提供。[0215]在一些实施方案中，药物制剂作为冷冻悬浮液提供。在一些实施方案中，悬浮液包含可药用赋形剂，例如表面活性剂、甘油、非离子表面活性剂、缓冲剂、二醇、盐及其任意组合。[0216]在一些实施方案中，悬浮液是溶液。在一些实施方案中，悬浮液包含胶束。[0217]在一些实施方案中，为了储存稳定性和操作的便利性，将包含raav(例如，aav2.7m8)和编码抗vegf试剂(例如，阿柏西普或其功能片段或变体)的核酸序列的药物制剂配制成冻干的、冷冻干燥的或真空干燥的粉末，其在施用至个体的一只眼睛和/或对侧眼睛之前用盐水、缓冲液或水重构。可替代地，药物制剂配制成水溶液，例如悬浮液或均匀溶液。药物制剂可含有raav颗粒，其包含编码阿柏西普的核酸序列。各种赋形剂，例如磷酸盐、pbs或tris缓冲液、二醇、甘油、盐水、表面活性剂(例如，普流尼克或聚山梨酯)或其任何组合，可用于稳定药物制剂。另外，冷冻保护剂，例如醇，可以在冷冻或干燥条件下用作稳定剂。在一些实施方案中，基因疗法呈悬浮液、冷藏悬浮液或冷冻悬浮液提供。[0218]在一些实施方案中，如本文公开的药物制剂的悬浮液具有约20μl、30μl、40μl、50μl、60μl、70μl、80μl、90μl、100μl、200μl、300μl、400μl、500μl、600μl、700μl、800μl、900μl或1000μl中的任一个的体积。在一些实施方案中，如本文公开的药物制剂的悬浮液具有约250μl的体积。在一些实施方案中，如本文公开的药物制剂的具有0.1至0.5ml、0.1至0.2ml、0.3至0.5ml、0.5-1.0ml、0.5-0.7ml、0.6至0.8ml、0.8至1ml、0.9至1.1ml、1.0至1.2ml或1.0至1.5ml的体积。在其它实施方案中，所述体积不超过0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml、0.9ml、1.0ml、1.1ml、1.2ml、1.3ml、1.4ml或1.5ml。在一些实施方案中，如本文公开的药物制剂的悬浮液具有约0.25ml的体积。[0219]在一些实施方案中，如本文公开的药物制剂的悬浮液呈无菌过滤的冷冻悬浮液提供在具有即用塞子(例如，由氯丁基制成的塞子)的无菌即用小瓶(例如，0.5ml小瓶；例如crystal小瓶)中，并密封(例如，用无菌铝可撕开密封件(tear-offseal))。在一些实施方案中，如本文公开的药物制剂的悬浮液呈无菌过滤的冷冻悬浮液提供在无菌的即用小瓶(例如，0.5ml小瓶；例如crystal小瓶)中，所述小瓶具有即用塞子(例如，由氯丁基制成的塞子)，并密封(例如，用无菌铝可撕开密封件)，其中所述小瓶含有0.1至0.5ml、0.1至0.2ml、0.2至0.3ml、0.3至0.4ml或0.4ml至0.5ml体积的药物制剂的悬浮液。在一些实施方案中，如本文公开的药物制剂的悬浮液呈无菌过滤的冷冻悬浮液提供在具有即用塞子(例如，由氯丁基制成的塞子)的无菌即用小瓶(例如，0.5ml小瓶；例如crystal小瓶)中，并密封(例如，用无菌铝可撕开密封件)，其中所述小瓶含有约0.25ml体积的药物制剂的悬浮液。[0220]在一些实施方案中，本文公开的药物制剂被设计、工程化或改造为经由玻璃体内或视网膜下注射来施用于灵长类动物(例如，非人灵长类动物和人类受试者)。在一些实施方案中，配制包含raav颗粒的药物制剂用于玻璃体内注射至个体的眼睛中，所述raav颗粒包含编码抗vegf试剂(例如，阿柏西普)的核酸序列。在一些实施方案中，将药物组合物配制或重构成允许玻璃体内注射不超过约或不超过25μl、30μl、35μl、40μl、45μl、50μl、55μl、60μl、65μl、70μl、75μl、80μl、85μl、90μl、95μl、100μl、110μl、120μl、130μl、140μl、150μl、160μl、170μl、180μl、190μl、200μl、210μl、220μl、230μl、240μl或250μl中任一个的体积的浓度。在一些实施方案中，单位剂量的药物制剂包含不超过约或不超过25μl、30μl、35μl、40μl、45μl、50μl、55μl、60μl、65μl、70μl、75μl、80μl、85μl、90μl、95μl、100μl、110μl、120μl、130μl、140μl、150μl、160μl、170μl、180μl、190μl、200μl、210μl、220μl、230μl、240μl或250μl中的任一个体积。在一些实施方案中，本文公开的方法包括玻璃体内注射约25μl、30μl、35μl、40μl、45μl、50μl、55μl、60μl、65μl、70μl、75μl、80μl、85μl、90μl、95μl、100μl、110μl、120μl、130μl、140μl、150μl、160μl、170μl、180μl、190μl、200μl、210μl、220μl、230μl、240μl或250μl中的任一个体积的编码抗vegf试剂(例如，aav2.7m8)的药物制剂的溶液或悬浮液，所述药物制剂包含raav(例如，aav2.7m8)和编码抗-vegf试剂(例如，阿柏西普)的核酸序列。在一些实施方案中，本文公开的方法包括玻璃体内注射约30μl或约100μl体积的药物制剂的溶液或悬浮液，所述药物制剂包含raav(例如aav2.7m8)和编码抗vegf试剂(例如，阿柏西普)的核酸序列。在一些实施方案中，本文公开的方法包括玻璃体内注射约30μl体积的药物制剂的溶液或悬浮液，所述药物制剂包含raav(例如，aav2.7m8)和编码抗vegf试剂(例如，阿柏西普)的核酸序列。在一些实施方案中，本文公开的方法包括玻璃体内注射约100μl体积的药物制剂的溶液或悬浮液，所述药物制剂包含raav(例如，aav2.7m8)和编码抗vegf试剂(例如，阿柏西普)的核酸序列。[0221]在一些实施方案中，包含本文描述的抗vegf试剂(例如，阿柏西普)转基因的核酸序列的aav2.7m8颗粒是基因治疗药物制剂的组分。在一些实施方案中，使用如本文所述的包含7m8变体衣壳蛋白的任何血清型的raav颗粒制备冷冻悬浮液或冷冻干燥的或冻干的制剂组合物。在一些实施方案中，基因疗法配制为冷藏或冷冻的悬浮液。在一些实施方案中，raav颗粒为raav2。在一些实施方案中，药物制剂的冻干悬浮液包含raav2，其包含7m8变体衣壳蛋白和编码抗vegf试剂(例如，阿柏西普)的dna序列。在一些实施方案中，悬浮液是冷藏的或冷冻的。[0222]在一些实施方案中，向个体的一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒是通过玻璃体内(ivt)注射。对于ivt注射，raav颗粒可以以药物制剂(例如，如本文所述)的悬浮液形式递送。首先，将局部麻醉剂施用到眼睛表面，随后施用眼用抗菌溶液。在有或没有仪器的情况下，保持眼睛张开，并且在直接观察下，用短、窄针(例如30号针)将raav颗粒通过巩膜注射到个体的一只眼睛和/或对侧眼睛的玻璃体腔中。通常，可以通过ivt注射将约25μl至约250μl(例如，约25μl、约30μl、约40μl、约50μl、约60μl、约70μl、约80μl、约90μl、约100μl、约110μl、约120μl、约130μl、约140μl、约150μl、约160μl、约170μl、约180μl、约190μl、约200μl、约210μl、约220μl、约230μl、约240μl或约250μl中的任一个)的raav颗粒混悬液递送至眼睛。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约100μl的体积。在一些实施方案中，单位剂量的raav颗粒包含约30μl的体积。在一些实施方案中，ivt注射与玻璃体液移除组合执行。在一些实施方案中，可以执行玻璃体切除术，并且通过输注raav颗粒悬浮液(例如，约4ml的raav颗粒悬浮液)来代替全部体积的玻璃体凝胶。使用合适孔径(例如20号至27号)的套管进行玻璃体切除术，其中通过从输注套管输注液体(例如盐水、等渗溶液、raav颗粒悬浮液)来代替所除去体积的玻璃体凝胶。ivt施用通常耐受良好。在手术结束时，有时在注射部位有轻微的发红。偶尔存在触痛，但大多数患者没有报告任何疼痛。在该过程之后不需要眼贴或眼罩，并且活动不受限制。有时，开处方抗生素滴眼剂几天以帮助预防感染。[0223]在一些实施方案中，药物制剂是单位剂量(例如，治疗有效剂量)，其经由ivt注射施用至个体(例如，人类或非人灵长类动物)的一只眼睛和/或对侧眼睛，用于治疗特征在于异常(例如过度)血管生成或新血管形成的眼部疾病或病症。在一些实施方案中，药物制剂包含如本文别处进一步详细描述的单位剂量(例如，治疗有效剂量)。在一些实施方案中，向受试者施用的单位剂量(例如，治疗有效剂量)的病毒载体(例如，本文公开的raav载体)的体积不超过约25μl、30μl、35μl、40μl、45μl、50μl、55μl、60μl、65μl、70μl、75μl、80μl、85μl、90μl、95μl、100μl、110μl、120μl、130μl、140μl、150μl、160μl、170μl、180μl、190μl、200μl、210μl、220μl、230μl、240μl或250μl中的任一个，包括这些值之间的任何范围。最小化施用于受试者的单位剂量的体积可以避免或减轻眼压的变化和与ivt注射相关的其他副作用(例如，眼内压升高、炎症、刺激或疼痛)。[0224]适合眼部使用的药物制剂包括无菌水溶液或分散液和用于即时制备无菌注射溶液、悬浮液或分散液的无菌粉末。对于玻璃体内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、磷酸盐缓冲盐水(pbs)和/或等渗剂，例如甘油。在某些实施方案中，药物制剂是无菌的且流动性达到可存在容易注射性或注射能力的程度。在某些实施方案中，药物制剂在制造和储存条件下是稳定的，并且被保存以抵抗微生物(如细菌和真菌)的污染作用。在一些实施方案中，药物组合物可以包括等渗剂，例如盐或甘油。在一些实施方案中，将表面活性剂或稳定剂加入药物组合物中以防止聚集。[0225]在一些实施方案中，药物制剂含有赋形剂或载体。载体是溶剂或分散介质，其含有例如水、盐水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其任意组合。例如，通过使用涂层如卵磷脂，通过在分散的情况下维持需要的粒度，以及通过使用表面活性剂如聚山梨酯(例如tweentm、聚山梨酯20、聚山梨酯80)、十二烷基硫酸钠(月桂基硫酸钠)、月桂基二甲基氧化胺、十六烷基三甲基溴化铵(ctab)、聚乙氧基化醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇、辛苯聚醇(tritonx100tm)、n,n-二甲基月桂基胺-n-氧化物、十六烷基三甲基溴化铵(htab)、聚氧乙烯10月桂基醚、brij721tm、胆汁盐(脱氧胆酸钠、胆酸钠)、普流尼克酸(pluronicacids)(f-68，f-127)、聚氧乙烯蓖麻油(cremophortm)、壬基苯酚乙氧基化物(tergitoltm)、环糊精和乙基苄索氯铵(hyaminetm)可以保持合适的流动性。通过各种抗细菌和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、甲酚、硫柳汞等，可以实现防止微生物的作用。在许多实施方案中，药物制剂中包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇和/或氯化钠。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现内部组合物的延长吸收。在一些实施方案中，药物载体包括磷酸钠、氯化钠、聚山梨醇酯和蔗糖。在一些实施方案中，药物制剂包含表面活性剂，例如非离子表面活性剂，如聚山梨酯、泊洛沙姆或普流尼克。在一些实施方案中，加入非离子表面活性剂减少了药物组合物中的聚集。[0226]本文还提供包含至少一种本文所述的药物制剂的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒包含药物制剂的冷冻悬浮液(例如，小瓶中的一个单位剂量)。在一些实施方案中，试剂盒包含本文公开的冻干或冷冻干燥的药物制剂(例如，小瓶中一个单位剂量)和用于溶解、稀释和/或重构冻干的药物组合物的溶液。在一些实施方案中，用于重构或稀释的溶液呈预填充注射器提供。在一些实施方案中，试剂盒包含含有raav(例如，aav2.7m8)的冷冻干燥或冻干的药物组合物和用于将药物组合物重构至所需浓度或体积的溶液。在一些实施方案中，试剂盒包括缓冲液，其有助于防止在重构本文公开的药物组合物时聚集。在一些实施方案中，药物组合物在预填充注射器中提供。在一些实施方案中，试剂盒包括双室注射器或容器，其中一个室含有用于溶解或稀释药物组合物的缓冲液。在一些实施方案中，试剂盒包括用于注射的注射器。在一些实施方案中，在施用之前过滤重构的溶液。在一些实施方案中，试剂盒包括用于在施用于患者之前过滤重构的药物组合物的过滤器或过滤器注射器。在一些实施方案中，试剂盒包含药物制剂的悬浮液，所述药物制剂包含如本文公开的raav颗粒，以无菌过滤的冷冻悬浮液提供在具有即用塞子(例如，由氯丁基制成的塞子)的无菌即用小瓶(例如，0.5ml小瓶；例如crystal小瓶)中，并密封(例如，用无菌铝可撕密封件)。在一些实施方案中，试剂盒包含药物制剂的悬浮液，所述药物制剂包含如本文公开的raav颗粒，以无菌过滤的冷冻悬浮液提供在具有即用塞子(例如，由氯丁基制成的塞子)的无菌即用小瓶(例如0.5ml小瓶；例如crystal小瓶)中，并密封(例如，用无菌铝可撕密封件)，其中小瓶含有0.1至0.5ml、0.1至0.2ml、0.2至0.3ml、0.3至0.4ml或0.4ml至0.5ml体积的药物制剂的悬浮液。在一些实施方案中，试剂盒包含药物制剂的悬浮液，所述药物制剂包含如本文公开的raav颗粒，以无菌过滤的冷冻悬浮液提供在具有即用塞子(例如，由氯丁基制成的塞子)的无菌即用小瓶(例如0.5ml小瓶；例如crystal小瓶)中，并密封(例如，用无菌铝可撕密封件)，其中小瓶含有约0.25ml体积的药物制剂的悬浮液。在一些实施方案中，试剂盒进一步包含使用说明书；例如，用本文公开的raav颗粒治疗眼新血管疾病的说明书。[0227]眼新血管疾病[0228]在一个方面，本公开内容提供用于治疗个体中的眼新血管疾病的方法。在另一方面，本公开内容提供用于减少患有眼新血管疾病的个体的眼中的视网膜流体的方法。[0229]在一些实施方案中，眼新生血管疾病是年龄相关性黄斑变性(amd)、湿性amd、视网膜新生血管形成、脉络膜新生血管形成糖尿病性视网膜病、增殖性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、中央视网膜静脉阻塞、分支视网膜静脉阻塞、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、缺血性视网膜病、糖尿病性视网膜水肿或其任意组合。在一些实施方案中，眼新生血管疾病是年龄相关性黄斑变性(amd)继发的活动性脉络膜新血管形成(cnv)。在一些实施方案中，眼新血管疾病是复发性和/或持续性wamd。在一些实施方案中，眼新血管疾病是amd继发的活动性中央凹下cnv。在一些实施方案中，amd继发的活动性凹下cnv占总病变大小的≥50％。在一些实施方案中，amd继发的活动性中央凹下cnv占总病变尺寸的≥50％，具有在荧光血管造影(fa)上渗漏、在光谱域光学相干断层扫描(sd-oct)上流体、和/或在彩色眼底照相上视网膜下出血的证据。在一些实施方案中，amd继发的活动性中央凹下cnv占总病变尺寸的≥50％，具有在荧光血管造影(fa)上渗漏、在光谱域光学相干断层扫描(sd-oct)上流体、和/或在彩色眼底照相上视网膜下出血的证据，并且整个病变的尺寸不超过12个黄斑光凝研究视盘区。在一些实施方案中，在施用单位剂量的本公开内容的raav颗粒之前，基于etdrs字母评估，个体的一只眼睛和/或对侧眼睛显示78-25(例如，小于约78、约75、约70、约65、约60、约55、约50、约45、约40、约35、约30或约25中的任一个)的最佳矫正视力(bcva)。在一些实施方案中，在施用单位剂量的本公开内容的raav颗粒之前，基于etdrs字母评估，个体的一只眼睛和/或对侧眼睛显示出超过约5、约10、约15、约20、约25、约30、约35、约40、约45、约50、约55、约60、约65、约70、约75、约80、约85、约90、约95或约100中的任一个的最佳矫正视力(bcva)。[0230]在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前，个体在一只眼睛和/或对侧眼睛中具有息肉状脉络膜血管病变(pcv)。[0231]在一些实施方案中，etdrs字母评估在约0.5米、约1米、约2米、约3米或约4米进行。在一些实施方案中，etdrs字母评估在约4米进行。[0232]在一些实施方案中，在施用单位剂量的raav颗粒之前约最后12周(例如，约4个月)内，个体接受至少一种使用抗vegf试剂(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的先前治疗(例如，至少一次、至少两次、至少三次、至少四次、至少5次或更多次治疗)。在一些实施方案中，在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之前约最近12周(例如，约4个月)内，个体的一只眼睛和/或对侧眼睛中接受2或3次使用抗vegf试剂(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的先前治疗。在一些实施方案中，个体的一只眼睛和/或对侧眼睛中接受至少约1、至少约5、至少约10、至少约20、至少约30、至少约40、至少约50、至少约60、至少约70、至少约80、至少约90、至少约100、至少约110、至少约120或更多次使用抗vegf试剂(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的先前治疗。在一些实施方案中，个体的一只眼睛和/或对侧眼睛中接受用抗-vegf试剂(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的注射间隔为约2周、约3周、4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周或更长。在一些实施方案中，个体的一只眼睛和/或对侧眼睛中计算的抗vegf(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗和/或阿柏西普)的注射间隔为约5-7周、约4-10周、约4-7周或约4-6周。在一些实施方案中，在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的av颗粒之前至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、至少约17天、至少约18天、至少约19天或至少约20天，个体的一只眼睛和/或对侧眼眼睛中接受使用抗vegf试剂(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的先前治疗。在一些实施方案中，在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之前约7天、约10天或约14天，个体的一只眼睛和/或对侧眼睛接受使用抗vegf试剂(例如，贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普)的先前治疗。在一些实施方案中，先前治疗包括使用抗vegf试剂的眼内、视网膜下或玻璃体内注射。在一些实施方案中，抗vegf试剂是贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普。在一些实施方案中，抗vegf试剂是阿柏西普。[0233]在一些实施方案中，个体对使用抗vegf试剂的先前治疗表现出有意义的响应。在一些实施方案中，抗vegf试剂是阿柏西普、其功能变体或其功能片段。在一些实施方案中，抗vegf试剂包含含有与seqidno：35的氨基酸序列具有至少约95％同一性的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之前，个体的一只眼睛和/或对侧眼睛中表现出对先前抗vegf治疗(例如，阿柏西普、其功能变体或其功能片段)的有意义的响应。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中在初始诊断时观察到中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)相比，在抗-vegf治疗之后至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、至少约17天或更多天中的任一时间观察到中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)减少≥30％(例如，至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％中的任一个)，则确定个体对先前抗vegf治疗(例如，阿柏西普、其功能变体或其功能片段)具有有意义的响应。在一些实施方案中，如果与在一只眼睛和/或对侧眼睛中施用先前的抗-vegf治疗之前的中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)相比，在抗-vegf治疗之后约7天、约10天或约14天中的任一时间观察到中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)减少≥30％(例如，至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％中的任一个)，则确定个体对先前抗vegf治疗(例如，阿柏西普、其功能变体或其功能片段)具有有意义的响应。[0234]在一些实施方案中，通过sd-oct在一只眼睛和/或对侧眼睛中测定中央亚视场厚度和/或中心视网膜厚度。中央亚视场厚度是跨越etdrs格栅的中心亚视场(以凹处为中心的1mm直径圆形)的视网膜的平均厚度。[0235]在一些实施方案中，如果与施用抗vegf试剂的先前治疗之前的中央亚视场厚度和/或中心视网膜厚度相比，观察到中央亚视场厚度和/或中心视网膜厚度的减少≥20％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％中的任一个)，则确定个体对用于眼新血管疾病的抗vegf试剂(例如，阿柏西普、其功能变体或其功能片段)的先前治疗具有有意义的响应。在一些实施方案中，如果与施用抗vegf试剂的先前治疗之前的视网膜前的中央亚视场厚度和/或中心视膜厚度相比，施用抗vegf试剂的先前治疗之后至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、至少约17天或更多天的任一时间观察到中央亚视场厚度和/或中心视膜厚度的减少≥20％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％的任一个)，则确定个体对抗vegf试剂(例如，阿柏西普、其功能变体或其功能片段)的先前治疗具有有意义的响应。在一些实施方案中，如果与施用抗vegf试剂的先前治疗之前的中央亚视场厚度和/或中心视网膜厚度相比，在施用使用抗vegf试剂的先前治疗之后约7天、约10天或约14天观察到中央亚视场厚度和/或中心视网膜厚度的减少≥20％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％中的任一个)，则确定个体对用于眼新血管疾病的抗vegf试剂的先前治疗具有有意义的响应。在一些实施方案中，通过sd-oct在一只眼睛和/或对侧眼睛中测定中央亚视场厚度和/或中心视网膜厚度。在一些实施方案中如果在一只眼睛和/或对侧眼睛中抗-vegf治疗之后观察到cst正常化且没有观察到血管渗出物，则确定个体对用于眼新血管疾病的抗-vegf试剂(例如，阿柏西普、其功能变体或其功能片段)的先前治疗具有有意义的响应。标准化指对于该类患者正常的cst值(例如，基于年龄、性别等)。[0236]在一些实施方案中，如通过sd-oct在一只眼睛和/或对侧眼睛中测定的，如果与施用抗-vegf治疗(例如，阿柏西普)之前的中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)相比，在抗-vegf治疗之后至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、至少约17天或更多天中的任一时间观察到中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)的减少≥20％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％中的任一个)，则确定个体对用于眼新血管疾病的先前抗vegf治疗(例如，阿柏西普、其功能变体或其功能片段)具有有意义的响应。在一些实施方案中，如通过sd-oct在一只眼睛和/或对侧眼睛中测定的，如果与施用抗-vegf治疗(例如，阿柏西普)之前的中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)相比，在抗-vegf治疗之后约7天、约10天或约14天观察到中心视网膜厚度(crt)或中央亚视场厚度(cst)的减少≥20％(例如，至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％中的任一个)，则确定个体对用于眼新血管疾病的先前抗vegf治疗(例如，阿柏西普、其功能变体或其功能片段)具有有意义的响应。[0237]在一些实施方案中，个体没有接受用于眼新血管疾病的先前治疗。在一些实施方案中，个体没有接受在一只眼睛和/或对侧眼睛中用于眼新血管疾病的先前治疗。在一些实施方案中，个体没有接受过先前的抗vegf治疗。在一些实施方案中，个体没有接受在一只眼睛和/或对侧眼睛中先前的抗vegf治疗。在一些实施方案中，个体没有接受先前的阿柏西普治疗。在一些实施方案中，个体没有接受在一只眼睛和/或对侧眼睛中先前的阿柏西普治疗。[0238]在一些实施方案中，根据本文描述的方法治疗的眼部疾病或病症是糖尿病性黄斑水肿。糖尿病性黄斑水肿(dme)是由于流体从黄斑内的血管渗漏引起的糖尿病中的视网膜肿胀。黄斑是视网膜的中心部分，其是富含视锥的小区域，视锥是检测色彩并且白天视觉所依赖的专门的神经末梢。随着黄斑水肿的发展，中心视野的中部或仅在中心视野的侧面发生模糊。由糖尿病性黄斑水肿的视力丧失可在数月的时间内发展，并使其不可能清楚地聚焦。dme的常见症状是视力模糊、飞蚊症、双视，如果不治疗，最终会失明。在一些实施方案中，本文公开的方法和药物组合物用于治疗dme。[0239]在一些实施方案中，根据本文所述方法治疗的眼部疾病或障碍是视网膜静脉阻塞。视网膜静脉阻塞是将血液从视网膜运走的小静脉的阻塞。视网膜是内眼后部的组织层，其将光图像转换成神经信号并将其传送到脑部。视网膜静脉阻塞最常由动脉硬化(动脉粥样硬化)和血块形成引起。视网膜中较小静脉(分支静脉或brvo)的阻塞通常发生在其中已经由于动脉粥样硬化而增厚或硬化的视网膜动脉跨越并在视网膜静脉上施加压力的位置。视网膜静脉阻塞的症状可以包括一只眼睛的全部或部分中的突然模糊或视力丧失。[0240]在一些实施方案中，根据本文所述方法治疗的眼部疾病或眼障碍是脉络膜新血管形成(cnv)，也称为湿性年龄相关性黄斑变性(wamd)。脉络膜新生血管可涉及来源于脉络膜的新血管的生长破坏布鲁赫膜(bruchmembrane)进入视网膜下色素上皮(rpe下)或视网膜下腔，这可能是视力丧失的主要原因。cnv可造成中心视觉的突然恶化，在几周内可引人注意到。其它症状可包括色彩障碍和视物变形症(其中直线呈现波浪状的变形)。新血管出血可加速cnv症状的发作。cnv也可以包括感觉到眼后的压力。[0241]amd的晚期“湿”形式(新血管或渗出性)经常可引起患者中心视力快速且经常显著的丧失。在amd的湿性形式中，脉络膜新生血管形成并发展为血管网络，其可在视网膜色素上皮下生长且穿过视网膜色素上皮。由于这伴随有血浆渗漏和/或出血进入视网膜下腔，如果这发生在黄斑中，则可能存在严重的中心视觉突然丧失。本公开内容涵盖amd、湿性amd的治疗或预防。在一些实施方案中，如本文公开的方法和药物组合物用于治疗amd。[0242]在一些实施方案中，本文描述的方法用于预防或治疗受试者的眼部疾病或病症，所述受试者已经接受用贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗、法瑞昔单抗、阿比斯帕培果和/或阿柏西普的先前治疗。在一些实施方案中，本文描述的方法用于预防或治疗对用贝伐单抗、布鲁单抗、雷珠单抗和/或阿柏西普的治疗有响应的眼部疾病或病症。[0243]在一些实施方案中，在向一只眼睛和/或对侧眼睛施用单位剂量的raav颗粒之前至少1天、至少1周、至少1个月、至少2个月、至少4个月、至少6个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月、至少30个月、至少36个月、至少42个月、至少48个月、至少54个月、至少60个月、至少66个月、至少72个月、至少78个月、至少84个月、至少90个月、96个月、至少102个月、至少108个月、至少114个月、至少120个月、至少126个月、至少132个月或更长时间，个体被诊断为患有眼新血管疾病。[0244]呈现以下描述以使本领域普通技术人员能够制造和使用各种实施例。特定装置、技术和应用的描述仅作为实例来提供。对本文所述的实例的各种修饰对于本领域的普通技术人员将是显而易见的，并且本文所定义的一般原理可以在不背离各种实施方案的精神和范围下应用于其它实施例和应用。因此，各种实施例不意欲限于本文描述和显示的实例，而是应符合与权利要求书一致的范围。实施例[0245]实施例1：在6×1011vg/眼睛剂量下，新血管性(湿性)年龄相关性黄斑变性中aav2.7m8-阿柏西普的开放标记1期研究[0246]该实施例描述aav2.7m8-阿柏西普(一种含有vegf抑制剂阿柏西普和aav2.7m8蛋白衣壳的raav载体)用于治疗具有脉络膜新血管形成的年龄相关性黄斑变性(amd)(湿性amd；wamd)的开放标记1期研究。[0247]i.研究目的[0248]a.主要目的[0249]本研究的主要目的是评估在患有wamd的受试者中，aav2.7m8-阿柏西普的单一玻璃体内(ivt)注射的安全性和耐受性。[0250]主要终点[0251]该研究的主要终点是眼睛和全身性不良事件(ae)的类型、严重程度和发生率。[0252]b.次要目的[0253]这些研究的次要目的是：[0254]·评价aav2.7m8-阿柏西普对最佳矫正视力(bcva)的影响。[0255]·评价aav2.7m8-阿柏西普对中央亚视场厚度(cst)(也称为中心视网膜厚度(crt))的影响。[0256]·评估从第4周至第104周对救援疗法的需要。[0257]·评价aav2.7m8-阿柏西普对视网膜内流体(irf)和视网膜下流体(srf)的存在的影响。[0258]·评价在基线时患有色素上皮脱离(ped)的患者中，aav2.7m8-阿柏西普对ped消退的影响。[0259]次要终点[0260]该研究的次要终点是：[0261]·与基线相比，bcva随时间推移从基线的平均变化，通过etdrs字母随时间推移从第8天至第104周评估的。[0262]·与基线相比，随时间推移具有从基线≥15个etdrs字母的bcva增加的的受试者的百分比，从第8天到第104周评估的。[0263]·与基线相比，随时间推移具有从基线≤15个etdrs字母的bcva降低的的受试者的百分比，从第8天到第104周评估的。[0264]·与基线相比，cst和黄斑体积随时间推移从基线的平均变化，从第8天至第104周评估的。[0265]·随时间推移阿柏西普注射的平均次数，从第4-104周评估的。[0266]·随时间推移需要阿柏西普注射的受试者的百分比，从第4-104周评估的。[0267]·随时间推移不具有irf的受试者的百分比，从第8天至第104周评估的。[0268]·随时间推移不具有srf的受试者的百分比，从第8天至第104周评估的。[0269]·在基线时患有ped的受试者中，随时间推移不具有ped的受试者的百分比，从第8天至第104周评估的。[0270]ii.研究对象[0271]本研究中的受试者被诊断为患有继发年龄相关性黄斑变性(amd)的活动性脉络膜新血管形成(cnv)，这是最近对抗vegf治疗起反应的历史，并且需要频繁注射抗vegf疗法。[0272]仅选择一只眼睛作为研究期间的研究眼睛。如果两只眼睛都满足所有的纳入和排除标准，则选择筛选时具有最差评估的bcva的眼睛作为研究眼睛。如果两只眼睛都满足所有的纳入和排除标准，并且两只眼睛bcva值相同，则受试者选择他/她的非主视眼睛进行治疗，或者默认选择右眼作为研究眼睛。[0273]a.纳入标准[0274]符合以下纳入标准的受试者参与该研究：[0275]·男性或女性受试者，年龄≥50岁。[0276]·研究眼睛具有占总病变尺寸≥50％的amd继发的活动性视网膜中央凹下cnv的先前或当前证据：[0277]o荧光素血管造影(fa)渗漏，光谱域光学相干断层扫描[0278](sd-oct)上的流体，或彩色眼底照片上视网膜下出血；以及[0279]o病变的整个尺寸不超过12个黄斑光凝研究视盘区域。[0280]·受试者处于用于wamd的活性抗vegf治疗，在筛选前4个月内最少注射2次。[0281]·筛选就诊时(阿柏西普注射之前)研究眼睛的视力：[0282]obcvaetdrs为78-25。[0283]·非研究眼睛的视力：[0284]obcvaetdrs为≥35，[0285]·研究者证实了有意义的抗vegf响应，并定义为：[0286]o中央亚场厚度从初始诊断减少≥30％，如使用sd-oct评估的；或[0287]o中央亚场厚度从筛选时减少≥20％，如使用sd-oct评估的；或[0288]ocst的正常化，且没有可观察到的血管渗出。[0289]为了证实抗vegf响应的目的，在用aav2.7m8-阿柏西普给药之前的第1天就诊时，由研究者确认vegf响应性。确定没有有意义的抗vegf响应的受试者筛选失败，并且不参与该研究。[0290]b.排除标准[0291]满足以下排除标准的受试者不参与本研究：[0292]中和抗体[0293]·尽管在血清和玻璃体液中的针对aav的中和抗体(nab)的水平之间没有确定的相关性(lukasonetal.,(2011)molther19(2):260-265)，但是作为预防措施，针对aav2.7m8载体的nab筛选受试者。在用aav2.7m8-阿柏西普给药前6个月内具有文献记载的抗aav2.7m8中和抗体滴度水平＞1:125的受试者被排除在本研究之外。[0294]cnv病变[0295]·以下cnv病变特征的已知历史或证据：:[0296]o研究眼睛的中央凹中心的纤维化或萎缩、视网膜上皮撕裂或任何阻止视力改善的病症。[0297]o瘢痕形成或纤维化占总病变区域的＞50％。[0298]o病变尺寸＞12个黄斑光凝研究视盘面积(30.5mm2)，包括血液、瘢痕和新血管形成，如通过荧光素血管造影术[0299](fa)评估的。[0300]o视网膜出血占总病变区域的≥50％，或者在研究眼睛中央中凹下存在尺寸大于≥1个视盘面积(如果血液在视网膜中央凹下，则视网膜中央凹被可见的cnv以270度包围)的血液。[0301]眼部病症(视网膜/后眼)[0302]·在施用aav2.7m8-阿柏西普时在研究眼睛中的显著视网膜前膜或玻璃体黄斑牵引(vmt)综合征或在研究眼睛中的全厚度黄斑孔病史(gass2期及以上)。[0303]·研究眼睛中非wamd的视网膜疾病的历史，包括糖尿病性视网膜病(在任一只眼睛中)、视网膜静脉阻塞、葡萄膜炎、疑似视网膜血管瘤增生、息肉状脉络膜病变或由于其他原因(例如眼组织胞浆菌病、创伤或病理性近视)引起的cnv，或眼睛中的任何其他血管疾病(不排除玻璃体或外周视网膜的良性病症)。[0304]·研究眼睛中视网膜脱离(修复或未修复)的历史。[0305]其它病症(非视网膜)[0306]·研究眼睛中的显著非视网膜疾病或介质不透明的已知病史或证据，其可在研究过程中损伤视力，需要手术和/或妨碍视网膜的正确观测或成像(例如，中心角膜瘢痕形成、显著白内障、角膜营养不良、巩膜软化)。[0307]·在给药aav2.7m8-阿柏西普时研究眼睛中不受控制的高眼压或青光眼(定义为尽管用抗青光眼药物治疗，但眼内压[iop]＞22mmhg)或在筛选时使用＞2种降iop药物。[0308]·在给药aav2.7m8-阿柏西之前4周内任一眼睛的眼部或眼周感染活动或病史。[0309]眼科手术/程序[0310]·在给药aav2.7m8-阿柏西普的6个月内对研究眼睛的任何先前的眼内或眼周手术，或在给药aav2.7m8-阿柏西普的6个月内任何计划的重大手术操作。在给药aav2.7m8-阿柏西普之前的＞1个月的眼睑手术不是排除标准。n.[0311]·研究眼睛中玻璃体切除术、小梁切除术或其它过滤性手术的历史。[0312]·在给药aav2.7m8-阿柏西普之前3个月内的钇铝石榴石(yag)后囊切开术。[0313]·用光动力疗法或视网膜激光用于治疗wamd的任何先前治疗和研究眼睛的区域中的任何先前治疗性辐射。[0314]一般/全身性病症[0315]·除非指定，否则给药6个月内以下心血管疾病中的任一种的历史或证据：[0316]o稳定型心绞痛的严重心脏病(例如，纽约心脏协会[newyorkheartassociation，nyha]功能性iii或iv类)历史或不临床证据。[0317]o急性冠状动脉综合征，心肌梗塞或冠状动脉血管再形成。[0318]o需要持续性治疗的室性快速性心律失常，或不受控制的心律失常。[0319]o尽管在给药之前的筛选期内使用降bp–药物，但仍不受控制的高血压，定义为平均收缩压(sbp)≥160mmhg或平均舒张压(dbp)≥100mmhg。[0320]o脑血管意外或短暂性局部缺血发作的历史。[0321]·任何持续性出血障碍或国际标准化比值(inr)＞3.0的历史。使用阿司匹林或其它抗凝血剂(例如，因子xa抑制剂)不是排除标准。在筛选周期期间重复inr以确认满足合格标准。[0322]·在给药aav2.7m8-阿柏西普之前的筛选周期内，不受控制的糖尿病(hba1c＞7.0％)的证据。[0323]·在过去5年之内除了以下(如果充分治疗)之外的恶性肿瘤历史：[0324]o皮肤的局部基底细胞癌或鳞状细胞癌。[0325]o子宫颈或乳房的原位癌。[0326]o乳头状、非侵袭性膀胱癌[0327]o1期和2期的前列腺癌，其观察结果在临床上由持续6个月的稳定的前列腺-特异性抗原(psa)的指示。[0328]o完全缓解至少2年或认为外科手术治愈的任何其它癌症。[0329]·阳性hiv、乙型肝炎或丙型肝炎(除非用文献记载的治愈方法进行治疗)。[0330]·在给药aav2.7m8-阿柏西普之前36小时内，基于临床检查和/或温度＞38.5℃，任何类型的全身性活性侵袭的证据或怀疑都被研究者认为具有临床显著的。[0331]·对以下疾病已知的严重过敏：[0332]o在血管造影中使用的荧光素染料或荧光素钠(可允许能够治疗的轻度过敏性)；或[0333]o阿柏西普[0334]·在研究期间怀孕、哺乳或打算怀孕的女性。[0335]·在研究者看来损害受者的安全性的其他显著的实验室异常或医学病症。[0336]药物[0337]·在给药aav2.7m8-阿柏西普之前5个半衰期内使用全身性抗炎类固醇或免疫抑制剂药物(除了方案规定的泼尼松之外)。允许吸入或局部用类固醇和非类固醇抗炎药(nsaid)。[0338]·接受以下中的任一个：[0339]o在给药aav2.7m8-阿柏西普之前的30天内或5个半衰期(以较长的为准)内的研究用药品。[0340]o先前基因疗法。[0341]iii.研究用药品[0342]研究用药品(imp)，aav2.7m8-阿柏西普，是一种重组的复制缺陷型腺相关病毒(raav)载体，其含有由aav2衣壳上的体内定向进化演化而衍生的aav2.7m8蛋白衣壳(dalkaraetal.,(2013)scitranslmed5(189):189ra76；us2014/0364338)。aav2.7m8-阿柏西普携带在遍在嵌合启动子控制下的阿柏西普cdna的密码子-最优化版本的表达盒(图1a)(参见wo2018170473a1)。在sf9细胞中使用杆状病毒表达载体系统制备aav2.7m8-阿柏西普，其中使用两种不同的杆状病毒，一种编码aav2rep和aav2.7m8cap蛋白的基因，另一种编码人阿柏西普cdna表达盒。[0343]aav2.7m8-阿柏西普以无菌过滤、冷冻悬浮液形式提供在含有0.25mlimp的无菌即用型0.5mlcrystalzenith小瓶中，如表1所示配制。[0344]表1:用于群组1的aav2.7m8-阿柏西普研究药品的制剂。[0345][0346]iv.研究设计[0347]a.剂量和施用方法[0348]群组1[0349]以100μl的注射体积，以6×1011vg/眼睛的剂量向群组1中的受试者施用单一ivt注射的aav2.7m8-阿柏西普。[0350]将aav2.7m8-阿柏西普小瓶从≤60℃的冷冻储存器中取出并在室温下解冻。经由ivt注射施用aav2.7m8-阿柏西普。使用聚维酮碘的无菌技术，以及局部或结膜下麻醉。基于机构标准护理给出注射后护理和药物方案。[0351]b.研究就诊[0352]筛选(第-15天至-7天)[0353]如图1b所示，根据标准护理，受试者在第-15至-7天(例如第-14至-7天)的筛选期间，接受2mg阿柏西普的单一ivt注射。受试者接受常规机构标准注射后护理。[0354]研究第1天[0355]在研究第1天(在ivt注射阿柏西普之后7至15天，例如7至14天)，在施用aav2.7m8-阿柏西普之前，研究对象经历sd-oct研究以证实它们对抗vegf疗法有响应。由研究者确认抗vegf响应性。如上所述(参见纳入标准)，只有确认具有有意义的抗vegf响应的受试者有资格入选本研究。[0356]对抗vegf疗法有响应的受试者依次入选研究组，并在研究眼睛中接受单次aav2.7m8-阿柏西普ivt注射。如上所述，在研究期间仅选择一只眼睛作为研究眼睛。[0357]aav2.7m8-阿柏西普后施用[0358]受试者在第3和8天，在第2、4、6和8周期间，以及此后每4周(即第12、16、20和24周)返回，进行临床评价和治疗(如果需要)。在第24周进行群组1的安全性和功效分析。[0359]从第4周开始，如果根据再治疗标准有疾病活性增加的证据(参见下文)，则受试者有资格接受阿柏西普2mgivt的救援注射。以下中的任一个的存在可确保恢复2mgivt阿柏西普进行的标准抗vegf治疗：[0360]·通过sd-oct观察到的来自基线和视网膜内或视网膜下流体的bcva(使用etdrs方案)损失≥10个字母并且由研究者判断为bcva损失的原因。[0361]·中央亚视场厚度从基线的增加＞75μm，如通过sd-oct评估的。[0362]·存在黄斑变性引起的威胁视力的出血。[0363]在施用aav2.7m8-阿柏西普之后第52周再次评价受试者的安全性和功效。随访期持续至施用aav2.7m8-阿柏西普之后第104周。[0364]c.皮质类固醇方案[0365]为了降低注射后眼部炎症的可能风险，向受试者施用预防性皮质类固醇方案(例如，泼尼松)，并且密切监测载体的眼部和全身耐受性。[0366]向群组1中的受试者施用预防性13天口服皮质类固醇方案，从60mg/天的泼尼松开始，从aav2.7m8-阿柏西普治疗之前3天(第-3天)至该治疗之后3天，持续共6天。随后，使用7天逐渐减少的泼尼松。口服泼尼松方案的概述提供在表2中。[0367]表2:口服泼尼松方案[0368]研究天数总天数每天的泼尼松剂量第-3至+3天660mg第4-6天340mg第7-8天220mg第9-10天210mg第11天0stop[0369]设计在aav2.7m8-阿柏西普ivt注射之前开始免疫抑制(即，泼尼松)，以限制暴露于衣壳抗原时的免疫响应。受试者根据13天方案自行施用泼尼松。[0370]在研究的第2-24周期间，受试者根据需要接受局部或口服皮质类固醇(泼尼松)。[0371]d.禁止药物和治疗[0372]在研究期间，禁止以下药物：[0373]·任何全身性抗vegf试剂，包括贝伐单抗。[0374]·根据该研究中的救援抗-vegf注射标准，除了研究药物或阿柏西普注射剂2mg之外研究眼睛中的任何抗-vegf试剂。[0375]·研究眼睛中的ivt类固醇。[0376]·免疫抑制药物。允许全身性、吸入或局部类固醇和nsaid。[0377]·使用及参与任何其它研究性研究。[0378]·如果临床指示且计划在ivt施用之后＞90天和/或在最后一次注射阿柏西普之后＞7天进行，则可以进行在研究眼睛中的白内障手术。[0379]·在非研究眼睛中发展amd的受试者可以接受在非研究眼睛中的标准护理疗法。[0380]e.用于群组1的研究设计的概述[0381]六名受试者入选到群组1中。[0382]以6×1011vg/眼睛的剂量向群组1中的受试者施用aav2.7m8-阿柏西普的单一ivt注射。在向群组内随后5名受试者(受试者2-6)给药之前，入选群组1中的第一名(哨兵)受试者接受aav2.7m8-阿柏西普的ivt注射，并且评价29天。[0383]用于群组1的研究设计的概述提供在表3中。[0384]表3：用于群组1的研究设计的概述[0385]群组aav2.7m8-阿柏西普的剂量皮质类固醇方案群组16×1011vg/眼睛预防性口服泼尼松方案[0386]f.研究持续时间[0387]对于每名受试者，受试者参与研究的持续时间108周。这包括4周的筛选期和另外的104周研究期。[0388]在研究完成或中止时，如果适合，向受试者提供参与长期随访研究的机会以进一步评估该基因疗法的安全性。[0389]v.研究评估[0390]a.一般身体检查和生命体征[0391]收集并记录每个受试者的相关病史和眼科史。一般的身体检查包括身高(仅在筛选时)、体重和生命体征。[0392]生命体征由血压、脉搏率测量结果、体温和呼吸率组成。获得每个受试者的12导联心电图(ecg)。进行以下临床实验室和抗体测试：化学、全血计数(cbc)、凝血研究、尿分析、hiv或肝炎的血清学证据、及妊娠测试。[0393]在第104周、研究结束(eos)和/或早期中止随访时，身体检查评估自从过筛检查开始受试者的身体条件是否发生变化。[0394]b.免疫响应和阿柏西普表达[0395]测量总的抗aav2.7m8抗体。使用通过割点评估的基于报道基因的转导干扰分析来测定受试者血清中的中和抗-aav2.7m8抗体。[0396]使用基于elisa的割点抗体分析，测量血清中针对抗阿柏西普抗体的体液免疫响应。[0397]收集血清，以测定阿柏西普蛋白的存在。[0398]使用elispot分析测量针对aav2.7m8衣壳蛋白和阿柏西普蛋白的细胞免疫。[0399]c.全面眼科检查和其它评估方法[0400]研究评估包括眼科检查、眼内压(iop)和间接检眼镜检查。[0401]眼科检查由眼睛和附件的外部检查、眼睑/瞳孔反应性的常规筛选(包括，但不限于眼睑下垂、异常瞳孔形状、瞳孔不相等、对光的反应异常和传入瞳孔缺陷)和裂隙灯检查(眼睑、结膜、角膜、晶状体、虹膜、前房)组成。裂隙灯检查是检查前眼结构，并且用于对任何发现进行分级。如果在任一次就诊时，在裂隙灯检查期间注意到任何发现，则由研究者对严重程度分级，并且将发现描述为临床显著或临床上不显著。[0402]使用goldmann压平眼压计或tono-pentm进行iop的测量。在任何ivt注射之前以及在眼睛散瞳之前，进行iop测量。第1天就诊需要注射前和注射后(在注射之后30分钟)iop测量。[0403]散瞳间接检眼镜检查法检查包括评估玻璃体、视神经、外周视网膜和视网膜血管的后段异常。如果在检眼底检查法期间注意到任何发现，则在任何就诊时，由研究者对严重性分级，并且将发现描述为临床显著的或非临床显著的。第1天的就诊需要注射前和注射后间接检眼镜检查法评估。[0404]光谱域光学相干断层扫描(sd-oct)[0405]使用sd-oct，通过干涉条纹图案的光谱分析获得以反向散射光的量度和延迟编码的深度解析组织结构信息。[0406]荧光素血管造影术[0407]使用荧光素血管造影术确认研究入选的患者合格性，用于评估cnv病变生长的功效，以及用于评价与基线相比的渗漏。[0408]数码彩色眼底摄影[0409]获取视网膜、视神经盘和黄斑的彩色眼底图像。[0410]光学相干断层扫描血管造影(oct-a)[0411]使用oct-a成像(扫频光源或光谱域)来获得视网膜和脉络膜的体积、三维图以及关于血流的信息。[0412]屈光和视力[0413]在研究点，由培训且认证的视力检查员测量屈光和bcva。在眼睛散瞳之前，在4米的起始距离处测量视力。[0414]d.安全评估[0415]为了减少与ivt施用aav2.7m8-阿柏西普相关的风险，在ivtaav2.7m8-阿柏西普施用当天和之后的后处理密切监测受试者。[0416]通过收集ae、生命体征、身体和眼睛检查、ecg、妊娠测试和实验室评价来评估aav2.7m8-阿柏西普的安全性。[0417]在研究的前8周进行受试者的密切监测，随后进行安全性常规安全性评估，此后进行功效评估。所有受试者在每次研究就诊时通过早期治疗糖尿病性视网膜病研究(etdrs)字母评估测试其视力，并使用标准护理阿柏西普ivt注射作为救援治疗。[0418]根据以下量表对ae的严重程度或强度进行评级：[0419]·轻度：ae是明显的，但不会显著地妨碍受试者的日常活动。[0420]·中度：ae降低或妨碍正常的日常活动，但不使人丧失能力。[0421]·重度：ae使人丧失能力并导致不能进行正常的日常活动。[0422]经施用研究治疗后104周评估安全性。在研究结束(eos)就诊完成时，提议受试者参与长期扩展研究以进一步评估转基因表达的安全性和持久性。[0423]e.功效评估[0424]通过以下测量方法评价aav2.7m8-阿柏西普在治疗wamd中的功效。关键的评估时间点是在24周。bcva和sd-oct的基线值是指在阿柏西普注射前，在第-15至-7天(例如第-14至-7天)筛选就诊期间获得的值。使用基线值进行比较分析。[0425]主要通过表示为etdrs评分(正确读取的字母数)的bcva评估视力(vitaleetal.,(2016)jamaophtalmol134(9):1041-1047)。如果与基线相比，受试者在etdrs评分中损失少于15个字母，则分类为视力维持。计算的终点包括从基线的平均变化、与基线相比增加至少15个字母的百分比、以及与基线相比损失15个或更多个字母的百分比。[0426]使用标准技术进行fa以评估cnv病变，从而评价与基线相比的渗漏。[0427]使用经认可的设备和标准技术进行sd-oct，以评价与基线值相比的视网膜厚度(例如，中心视网膜厚度或中央亚视场厚度)、黄斑体积和流体(例如，视网膜下流体和视网膜内流体)的存在。[0428]测定从第4周至第104周，随时间推移每个受试者在aav2.7m8-阿柏西普治疗后给予的阿柏西普注射次数。此外，测定在用aav2.7m8-阿柏西普治疗后进行第一次阿柏西普注射的时间和不需要阿柏西普救援治疗的受试者的比例。[0429]测定从第4周至第104周，随时间推移不具有irf的受试者的比例。[0430]测定从第4周至第104周，随时间推移不具有srf的受试者的比例。[0431]测定在基线具有ped的受试者中，从第4周至第104周随时间推移不具有ped的受试者的比例。[0432]f.统计学[0433]安全性群体包括接受aav2.7m8-阿柏西普并根据接受的剂量分析的所有受试者。[0434]按照群组概述所有其它安全性参数。使用监管活动医学词典(medicaldictionaryforregulatoryactivities，meddra，第21版)分类编码ae，得到每个事件的优选术语(pt)和系统器官类别(soc)。分别列出导致研究退出的sae和ae。[0435]功效分析包括所有受试者。评价功效分析终点，并且将按照群组来计算描述统计学。关键评估时间点是在24周。根据接受的剂量和总体剂量评估功效。[0436]vi.结果[0437]a.受试者特征[0438]入选到群组1中的全部六名受试者均诊断患有wamd。在入选时，受试者具有对抗vegf治疗的高需求(例如，需要频繁的抗vegf治疗)、约20/50的功能性视力、一些过量的中央亚视场厚度(通过oct)，并且正在接受抗vegf治疗的常规ivt注射并对治疗有响应。所有受试者的疾病特征和治疗历史提供在表4-5中。[0439]如表4所示，在施用aav2.7m8-阿柏西普之前约一年(受试者5)至约十年或更长时间(受试者4)之间，群组1中的受试者被诊断患有wamd。研究对象在研究眼睛中接受广泛范围的先前抗vegfivt注射，从7次(对象5)到109次(对象4)先前注射。计算的在本研究之前的平均抗vegfivt注射间隔范围为每4周至每10周。在筛选入选本研究中之前的四个月内，所有受试者接受2或3次抗vegf注射。在开始研究前，在筛选抗vegf注射之后7天(受试者1-3)或14天(受试者4-6)，向受试者施用aav2.7m8-阿柏西普。[0440]表4:群组1中受试者的基线特征[0441][0442][0443]表5：群组1中研究对象的疾病特征和治疗历史[0444][0445]b.安全性[0446]在施用aav2.7m8-阿柏西普之后的24周期间，没有发生sae，也没有任何满足剂量限制性毒性(dlt)标准的ae。没有观察到药物相关的非眼睛ae。在所有受试者中观察到眼部炎症，并且可用局部类固醇控制。此外，没有观察到血管炎、视网膜炎或脉络膜炎。观察到十九只眼睛ae，认为其可能与aav2.7m8-阿柏西普潜在相关，14个是轻度的，5个是中度的(2个ae是中间葡萄膜炎，1个ae是玻璃体细胞，2个ae是前房细胞)。一名患者具有两个前房细胞事件(一个轻度事件和一个中度事件)。在早期随访期间，经常观察到对局部皮质类固醇或口服皮质类固醇有响应的轻度至中度眼内炎症。oct图像显示在大多数受试者中持久性液体的消退，没有恶化的迹象。视力通常是稳定的。直至第24周与aav2.7m8-阿柏西普相关的所有安全性事件的概述提供在表6中。[0447]表6：所有与aav2.7m8-阿柏西普相关的安全性事件[0448][0449]所有受试者从第-3天开始接受60mg的口服泼尼松以6天，随后是泼尼松的7天递减过程。眼细胞炎症的临床评估显示在aav2.7m8-阿柏西普后的早期没有发生临床上显著的炎症。此外，如图6所示，当受试者接受类固醇滴眼剂时，没有观察到恶化或新的炎症。到第24周，前房细胞炎症消退或改善。观察到的细胞炎症通常是轻度的。图6中显示的房水细胞计数类别是基于葡萄膜炎命名标准(sun)准则(jabs,daetal.,jophthalmol.2005；140:509–516)，而玻璃体细胞计数类别是基于国家卫生研究所(nih)指南。[0450]总体而言，安全性评估表明aav2.7m8-阿柏西普耐受良好，未报道dlt或sae。所有安全性事件都是轻度至中度的，并且大多数是炎症相关的。对ae的继续随访显示平均视力保持稳定，并且不需要抗vegf救援注射。因此，结果表明，先前需要频繁抗vegf注射的wamd患者中以6×1011vg/眼睛的剂量作为单一ivt注射施用的aav2.7m8-阿柏西普具有可接受的安全性特征。[0451]c.功效[0452]在aav2.7m8-阿柏西普施用之后，基于oct评估，所有六名受试者都显示疾病活性的稳定化。如图2a-2l所示，在用aav2.7m8-阿柏西普治疗之前和之后采集的oct图像表明，强解剖学响应在群组1中的所有六名受试者中都是明显的。例如，在受试者1(例如，比较图2a和2b)、受试者2(例如，比较图2b和2c)、受试者3(例如，比较图2d和2e)、受试者4(例如，比较图2f和2g)和受试者5(例如，比较图2h和2i)中，视网膜下流体用标准护理抗vegf治疗仍持续存在，但是在施用aav2.7m8-阿柏西普之后消退且保持消退。受试者6表现出与息肉状脉络膜血管病变(pcv)一致的视网膜形态(图2k)，并且尽管在用aav2.7m8-阿柏西普治疗后仍持续存在一些流体，但没有疾病进展的迹象(图2l)。此外，如图3所示，没有一名受试者显示中央亚视场厚度(cst)增加，并且观察到平均降低-52.7μm(90％ci-86.5，-18.8)。cst的增加指示wamd的疾病进展。重要的是，没有一名受试者被施用或需要任何标准护理阿柏西普救援注射(“救援注射”)。[0453]在整个研究中，基于etdrs字母评估测量所有受试者中的最佳矫正视力(bcva)。如图4所示，群组1中的所有受试者都是稳定的，其中平均减少-2个字母(90％ci-9.1，5.1)。[0454]在施用aav2.7m8-阿柏西普之后34周的中值随访时间，oct成像中没有受试者显示疾病再活化的迹象(图7a-7b)。此外，在至多44周的随访期期间的任何时间点，没有受试者需要任何救援抗vegfivt注射，并且没有受试者符合再治疗标准。最后，在超过24周的额外随访期期间，bcva得以保持(即，没有患者损失或增加超过10个etdrs字母)，在第24周观察到的解剖学改善(即，视网膜下和视网膜内流体的消退，以及cst的降低)得以维持，并且没有出现安全性问题。[0455]将在34周的中值随访时间评估的安全性和功效结果的概述提供在表7中。[0456]表7：在34周的中值随访时间的安全性和功效结果的概述[0457]值中值随访，周34.0随访(最小，最大)，周28,443级不良事件，n0严重不良事件，n0剂量-限制性毒性，n0从基线的平均bcva变化，etdrs字母-1.5从基线的bcva变化(最小，最大)，etdrs字母-9,+5救援注射的总数量，n0[0458]d.结论[0459]用于wamd的当前标准护理疗法是抗-vegfivt注射，其通常需要长期进行，约每4-8周。对于患者、护理者和健康护理系统，采用该方案的顺应性很困难，导致次优给药和由于治疗不足而导致的视力丧失。[0460]本实施例中呈现的结果显示aav2.7m8-阿柏西普提供改善视网膜解剖学和稳定视力的明显益处，同时显示可接受的安全性特征。特别地，患者在研究期间保持视力，并且aav2.7m8-阿柏西普显示是安全的和良好耐受的，其中观察到的炎症通常是轻度的并且对类固醇滴眼剂有响应。[0461]注意到本研究的群组1中的受试者先前需要频繁的抗vegf注射(表4)以减缓或预防其疾病的进展，然而，在施用aav2.7m8-阿柏西普之后，在本研究期间不需要抗vegf救援注射。[0462]注意到在经历标准护理抗vegf治疗的受试者的oct扫描中存在视网膜下流体超过20周，并且在筛选阿柏西普ivt注射之后持续1-2周。即使受试者已经接受反复治疗，但该流体仍然存在，并且因此对抗-vegf蛋白的标准护理ivt推注是难治性的。出乎意料地，这种难治性srf在用aav2.7m8-阿柏西普治疗之后消退，这是临床前研究无法预测的结果。[0463]以6×1011vg/眼睛的剂量给予aav2.7m8-阿柏西普观察到的安全性和功效引起该1期研究的继续，以评价以较低剂量和与局部皮质类固醇一起给予aav2.7m8-阿柏西普的安全性和功效，如实施例2中描述的。[0464]实施例2：在新血管(湿性)年龄相关性黄斑变性中在低于6×1011vg/眼睛的剂量和与局部皮质类固醇一起使用的aav2.7m8-阿柏西普的开放标记1期研究[0465]下列实施例描述了实施例1中描述的1期研究的继续，以评价以低于6×1011vg/眼的剂量和与局部皮质类固醇一起施用的aav2.7m8-阿柏西普在患有wamd的受试者中的安全性和功效。[0466]i.研究目的和终点[0467]主要目的、次要目的以及主要和次要终点如实施例1的第i部分中描述的。[0468]ii.研究对象[0469]本研究的研究对象如实施例1的第ii部分中描述的。iii.研究用药品[0470]研究用药品是aav2.7m8-阿柏西普，如实施例1的第iii部分中详细描述的和如图1a中描绘的，不同在于改变aav2.7m8-阿柏西普的浓度以便保持合适的注射体积，如下表8中描述的。[0471]表8：用于群组2-4的aav2.7m8-阿柏西普研究用药品的制剂.[0472][0473][0474]iv.研究设计[0475]a.剂量和施用方法[0476]如实施例1的第iv部分中描述的施用如下所述剂量的aav2.7m8-阿柏西普。[0477]研究群组2-4[0478]群组2:六名诊断患有wamd的受试者入选群组2。在预防性口服泼尼松方案下，以2×1011vg/眼睛的剂量2向群组2中的受试者施用aav2.7m8-阿柏西普的单一ivt注射。[0479]群组3:九名诊断患有wamd的受试者入选群组3。在预防性局部皮质类固醇方案下，以2×1011vg/眼睛的剂量2向群组3中的受试者施用aav2.7m8-阿柏西普的单一ivt注射。[0480]群组4:九名诊断患有wamd的受试者入选群组4。如果群组2和3中的大多数受试者中观察到需要救援疗法的脉络膜新血管渗出的迹象，则在局部皮质类固醇方案，以6×1010vg/眼睛的剂量3向群组4的受试者施用aav2.7m8-阿柏西普的单一ivt注射(群组4b)。如果群组2和3中的大多数受试者中没有观察到需要救援疗法的脉络膜新血管渗出的迹象，则在局部皮质类固醇方案下，以6×1011vg/眼睛的剂量1向群组4的受试者施用aav2.7m8-阿柏西普的单一ivt注射(群组4a)。[0481]b.研究就诊[0482]研究就诊是如实施例1的第iv部分和图1b中描述的。[0483]c.皮质类固醇方案[0484]向群组2中的受试者施用如实施例1中对于群组1详细描述的预防性13天口服皮质类固醇方案：[0485]群组2:在预防性13天口服皮质类固醇方案下，以2×1011vg/眼睛的剂量2向群组2中的受试者施用aav2.7m8-阿柏西普的单一ivt注射，在aav2.7m8-阿柏西普治疗之前3天和之后3天开始60mg泼尼松，共6天。随后是7天泼尼松逐渐减少。用于群组2的口服泼尼松方案的概述提供在实施例1的表2中。[0486]如下所述，向群组3和4中的受试者施用逐渐减少的局部皮质类固醇(二氟泼尼酯0.05％滴剂)的预防性方案：[0487]群组3:在预防性局部4周逐渐减少的皮质类固醇方案下，以2×1011vg/眼睛的剂量2向群组3中的受试者施用aav2.7m8-阿柏西普的单一ivt注射。[0488]群组4:在可以由治疗医师决定延长的预防性局部4周逐渐减少的皮质类固醇方案下，以6×1010vg/眼睛的剂量3向群组4中的受试者施用aav2.7m8-阿柏西普的单一ivt注射。在可以由治疗医师决定延长的预防性局部4周逐渐减少的二氟泼尼酯方案下，以6×1011vg/眼睛的剂量3向群组4中的受试者施用aav2.7m8-阿柏西普的单一ivt注射。[0489]局部二氟泼尼酯方案的概述提供在下表9中。[0490]表9:局部二氟泼尼酯方案的概述[0491][0492]设计在暴露于aav2.7m8-阿柏西普ivt注射之后立即引发免疫抑制以限制暴露于衣壳抗原时的免疫响应。在注射aav2.7m8-阿柏西普的当天(第1天，注射后)开始，受试者在1周内每天4次向治疗的眼睛的结膜囊自行施用一滴二氟泼尼酯0.05％溶液(2.5μg二氟泼尼酯)。随后是第二周每天3次，第三周每天2次，和第四周每天1次。可以由治疗医师决定延长逐渐减少的皮质类固醇方案。[0493]d.禁止药物和治疗[0494]本研究的禁止药物和治疗如实施例1的第iv部分中描述的。[0495]e.用于群组2-4的研究设计的概述[0496]用于群组2-4的研究设计的概述提供在表10中。[0497]表10：用于群组2-4的研究设计的概述[0498]群组aav2.7m8-阿柏西普的剂量皮质类固醇方案群组22×1011vg/眼睛预防性口服泼尼松方案群组32×1011vg/眼睛预防性局部皮质类固醇群组4a6×1011vg/眼睛预防性局部皮质类固醇al.,(2016)jamaophtalmol134(9):1041-1047)。如果与基线相比，受试者在etdrs评分中损失少于15个字母，则分类为视力维持。计算的终点包括从基线的平均变化、与基线相比增加至少15个字母的百分比、以及与基线相比损失15个或更多个字母的百分比。[0524]使用标准技术进行fa以评估cnv病变，从而评价与基线相比的渗漏。[0525]使用经认可的设备和标准技术执行sd-oct，以评价与基线值相比的视网膜厚度(例如，中心视网膜厚度或中央亚视场厚度)、黄斑体积和流体(例如，视网膜下流体和视网膜内流体)的存在。[0526]测定从第4周至第104周，随时间推移每个受试者在aav2.7m8-阿柏西普治疗后给予的阿柏西普注射次数。此外，测定在用aav2.7m8-阿柏西普治疗后进行第一次阿柏西普注射的时间和不需要阿柏西普再治疗的受试者的比例。[0527]测定从第4周至第104周，随时间推移不具有irf的受试者的比例。[0528]测定从第4周至第104周，随时间推移不具有srf的受试者的比例。[0529]测定在基线具有ped的受试者中，从第4周至第104周随时间推移不具有ped的受试者的比例。[0530]尽管为了清楚理解的目的，已经通过说明和实施例详细地描述了本公开内容，但是说明书和实施例不应当被解释为限制本公开内容的范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容明确地通过引用整体并入。当前第1页12当前第1页12