用于治疗发炎性病症的方法与流程

本发明涉及一种治疗方法，更确切地说，本发明提供一种用具有至少一个(经取代苯基)-丙烯醛部分的化合物治疗发炎性病症的方法。

背景技术：

众所周知，某些天然产物可具有治疗作用，这使得许多文化中使用其来治疗和预防人类疾病(例如中国草药和许多其它民间医药)。所述治疗的有效性使得制药业从这些天然产物寻求和分离活性化合物，并且开发活性成分，以作为治疗和预防多种疾病或医学病状的治疗性或预防性药物。因此，已经从天然产物研发出或产生许多常用药品。然而，已知从天然产物中分离的化合物在其天然宿主中发挥某些生理功能；而其针对人类疾病的治疗作用不容易显而易见。历史上，所述治疗性治疗仅通过累积经历或人体中的“试错法”来推导。此外，因为所述化合物最初不是为供人类使用而产生的，所以呈其原生形式的化合物对于治疗人类疾病，在结构上以及功效上常常不呈最理想形式。然而，如今，包含分析和合成化学方法的现代化学技术，以及药物生物学中的进步已经使得有可能解剖化学结构，且定位化合物(如从天然产物分离的一种化合物)内的“药效团(pharmacophore)”(对于治疗活性至关重要的核心结构)；此外，这些新颖技术允许基于药效团的结构合成具有最优或甚至更好的治疗功效的新颖化合物。

化合物姜黄素(作为姜黄植物中的主要色素存在)和其许多类似物据报告在活体外具有许多生物活性，如抗氧化、消炎、抗肿瘤和抗血管生成活性；但姜黄素或其类似物都尚未被开发成治疗人类疾病的治疗性药物。这表明呈其原生形式的姜黄素可能不是用于开发成治疗性药物的最优分子。

牛皮癣为影响2％到3％全球人口的生活质量的免疫相关慢性发炎性皮肤病。牛皮癣典型地与发红、鳞片状、凸起斑，和由发炎以及增强角质细胞增殖诱导的表皮的明显增厚，表皮和真皮中的白细胞浸润有关。这种疾病可以由各种外部和内在因素引起，所述因素包含微生物感染、皮肤损伤、环境、天气、压力、免疫病症和遗传。牛皮癣性病变中的白细胞浸润主要含有树突状细胞、巨噬细胞、嗜中性白细胞和t细胞。树突状细胞产生促进牛皮癣的发展的多种促炎性细胞因子，包含tnf-α、il-1β、il-6和il-23。tnf-α为活化dc中的il-23产生的强力促炎性刺激物。il-1β可促进来自th17细胞的il-17分泌。il-6保护皮肤t细胞免于treg抑制并且促进th17参与发炎。这些免疫细胞和细胞因子一起促进牛皮癣性病变的发展潜在的发炎性反应。牛皮癣的主要机制主要通过用th1/th17免疫反应来异常诱导t细胞和树突状细胞(dc)来介导。树突状细胞在感测引起自身免疫病症中的病原性发炎性反应的自体衍生核酸中起作用。因此，dc被视为许多自身免疫病症(包含牛皮癣)的治疗中的目标。需要有效治疗。

技术实现要素：

本发明提供一种用于治疗需要此类治疗的个体的与发炎性细胞因子过度表达相关的发炎性病症的方法，其包括向所述个体投与包括有效量的根据式v或viii的化合物和任选地药学上可接受的载剂或赋形剂的药物组合物；

其中在式v中：

每一“n5”独立地是1、2或3；

r35、r45、r35'和r45'独立地选自由以下组成的群组：-h、-oh和-och3；

l5-z5不存在；或

l5-z5存在，并且当z5不存在时，l5选自由以下组成的群组：c0-c8亚烷基、不饱和亚烯基和炔基；

z5选自由以下组成的群组：-h、-oh、芳香环、环烷基、-cor15、-co2r15、-conr15r25、-nr15r25、-c(x5)3；

r15和r25独立地选自由以下组成的群组：-h、-ch3和-c2h5；并且

x5是选自由-f、-cl和-br组成的群组的卤素原子；

r18和r28是单或二取代基团并且独立地选自由以下组成的群组：甲氧基、羟基和烷基磺酰基；

r38选自由以下组成的群组：

(ch2)3ch3、并且

r48选自由以下组成的群组：ch3、h、f和cl；并且

n8为1或2；

其中所述发炎性细胞因子选自由以下组成的群组：inf-α、il-1β、il-17a、il-22和il-31。

在以下部分中详细描述本发明。本发明的其它特征、目的和优点可见于具体实施方式和权利要求书中。

附图说明

图1展示小鼠树突状细胞和巨噬细胞上asc-j9(j9)和asc-jm17(jm17)的细胞毒性的结果。用不同浓度的asc-j9和asc-jm17处理细胞24小时。通过mts分析法测量细胞的存活性。*：p<0.05。

图2展示asc-j9(j9)和asc-jm17(jm17)对树突状细胞中的发炎性细胞因子诱导的细胞因子表达的影响。用不同浓度的asc-j9和asc-jm17预处理树突状细胞1小时，并且然后添加发炎性细胞因子tnf-α或il-1β24小时。通过rt-qpcr测量小鼠细胞因子基因的表达。*：p<0.05；ns：不显著。

图3展示asc-j9(j9)和asc-jm17(jm17)对小鼠脾细胞中r848诱导的细胞因子表达的影响。用1μmasc-j9或asc-jm17预处理小鼠脾细胞1小时，且接着添加tlr配体，r8486小时。通过rt-qpcr测量小鼠细胞因子基因的表达。*：p<0.01。

图4展示asc-j9(j9)和asc-jm17(jm17)对小鼠骨髓衍生巨噬细胞中r848诱导的细胞因子表达的影响。用1μmasc-j9或asc-jm17预处理巨噬细胞1小时，且接着添加tlr配体，r8486小时。通过rt-qpcr测量小鼠细胞因子基因的表达。*：p<0.01；ns：不显著。

图5a到5d展示对活体内asc-j9(j9)对imq诱导的牛皮癣性发炎的消炎作用的评价。用咪喹莫特(imiquimod，imq)并且用对照组乳膏、asc-j9或氯倍他索(clobetasol)局部处理balb/c小鼠持续连续10天。(a)示出了示意性时间表。展示在第0天(b)、第5天(c)和第10天(d)每组中的照相观测结果。

图6a到6d展示对活体内asc-j9(j9)对imq诱导的牛皮癣性发炎的消炎作用的评价。用咪喹莫特(imq)并且用对照组乳膏、asc-j9或氯倍他索局部处理balb/c小鼠持续连续10天。(a)基于牛皮癣面积严重程度指数(psoriasisareaseverityindex)评估皮肤上的发炎性反应的严重程度。(b)处理后第十天，处死小鼠并且用游标测径规测量其皮肤厚度以评估牛皮癣性反应的严重程度。(c)在10天处理之后通过rt-qpcr测量的小鼠皮肤中的细胞因子基因的表达。(f)在10天处理之后的病变性皮肤的h&e染色。*：p<0.05；**：p<0.05；ns：不显著。

图7a到7c展示对活体内asc-j9(j9)对imq诱导的牛皮癣性发炎的消炎作用的评价。用咪喹莫特(imq)并且用对照组乳膏、不同剂量的asc-j9局部处理balb/c小鼠持续连续5天。(a)示出了示意性时间表。展示在第0天(b)、第5天(c)每组中的照相观测结果。

图8a到8c展示对活体内asc-j9(j9)对imq诱导的牛皮癣性发炎的消炎作用的评价。用咪喹莫特(imq)并且用对照组乳膏、不同剂量的asc-j9局部处理balb/c小鼠持续连续5天。(a)基于牛皮癣面积严重程度指数评估皮肤上的发炎性反应的严重程度。(b)处理后第五天，处死小鼠并且用游标测径规测量其皮肤厚度以评估牛皮癣性反应的严重程度。(c)在10天处理之后通过rt-qpcr测量的小鼠皮肤中的细胞因子基因的表达。*：p<0.05；**：p<0.05；ns：不显著。

图9展示asc-j9抑制瘢痕瘤患者衍生的成纤维细胞中的瘙痒标记物。

具体实施方式

通过参考本发明的各种实施例、实例的以下详细描述和具有其相关描述的化学图式和表格，可以更容易地理解本发明。应理解，除非另外由权利要求书特别指示，否则本发明不限于特定制备方法、载剂或配方，或将本发明化合物配制为打算用于局部、经口或肠胃外投与的产物或组合物的特定模式，因为如相关领域的普通技术人员充分了解，所述事物当然可变化。还应理解，本文中所使用的术语仅出于描述特定实施例的目的，且并不打算为限制性的。

本发明提供一种用于治疗需要此类治疗的个体的与发炎性细胞因子过度表达相关的发炎性病症的方法，其包括向所述个体投与包括有效量的根据式v或viii的化合物和任选地药学上可接受的载剂或赋形剂的药物组合物；

其中在式v中：

每一“n5”独立地是1、2或3；

r35、r45、r35'和r45'独立地选自由以下组成的群组：-h、-oh和-och3；

l5-z5不存在；或

l5-z5存在，并且当z5不存在时，l5选自由以下组成的群组：c0-c8亚烷基、不饱和亚烯基和炔基；

z5选自由以下组成的群组：-h、-oh、芳香环、环烷基、-cor15、-co2r15、-conr15r25、-nr15r25、-c(x5)3；

r15和r25独立地选自由以下组成的群组：-h、-ch3和-c2h5；并且

x5是选自由-f、-cl和-br组成的群组的卤素原子；

r18和r28是单或二取代基团并且独立地选自由以下组成的群组：甲氧基、羟基和烷基磺酰基；

r38选自由以下组成的群组：

(ch2)3ch3、并且

r48选自由以下组成的群组：ch3、h、f和cl；并且

n8为1或2；

其中所述发炎性细胞因子选自由以下组成的群组：inf-α、il-1β、il-17a、il-22和il-31。

如本文所用，术语“(经取代苯基)-丙烯醛部分”是指包含上面附接有丙烯醛部分(当m等于1时)和烷氧基或羟基部分，或烷基或经取代的烷基部分的苯基的组合物。取代可以相对于如本文所用的丙烯醛部分定位于间位或对位或邻位，并且是指通式其中q可以是1、2、3或4中的任何数字；并且m可以是1、2、3、4或更大中的任何数字。

如本文所用，术语“烷基”是指仅由碳和氢原子组成、不含有不饱和基团、具有一到十个碳原子，并且通过单键附接到分子的其余部分的直链或支链烃链基团，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)等。

如本文所用，术语“烯基”是指仅由碳和氢原子组成、含有至少一个双键、具有两到十个碳原子，并且通过单键或双键附接到分子的其余部分的直链或支链烃链基团，例如乙烯基、丙-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。

如本文所用，术语“亚烯基”是指含有碳-碳双键并且由式cph2p-2表示的直链或支链烃链，其中氢可以由额外碳-碳双键或单价取代基(例如亚乙烯基、亚丙-1-烯基等)置换。

如本文所用，术语“烷氧基”是指具有式-or的基团，其中r是烷基、卤烷基或环烷基。“任选经取代的烷氧基”是指具有式-or'的基团，其中r'是如本文所描述的任选经取代的烷基。

如本文所用，术语“炔基”是指仅由碳和氢原子组成、含有至少一个三键、具有两到十个碳原子，并且通过单键或三键附接到分子的其余部分的直链或支链烃链基团，例如乙炔基、丙-1-炔基、丁-1-炔基、戊-1-炔基、戊-3-炔基等。

如本文所用，术语“芳基”是指其中环中的至少一个为芳香族的碳环系统的基团。芳基可以是完全芳香族的或可以含有芳香环与非芳香环的组合。“联芳基系统”是包含至少两个芳基的化合物。

如本文所用，术语“环烷基”是指仅由碳和氢原子组成、具有三到十个碳原子，并且为饱和的并通过单键附接到分子的其余部分的稳定单价单环或双环烃基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。

如本文所用，术语“二酮桥”或“酮-烯醇桥”分别是指包含两个酮或位置极为接近酮的烯醇的直链或支链烃链。“二酮桥”或“酮-烯醇桥”位于至少两个芳基部分之间。

如本文所用，术语“羟烷基”是指具有一到十个碳原子的直链或支链羟基取代烃链基团，例如-ch2oh、-(ch2)2oh等。

在一些实施例中，根据式v-1或v-2提供根据式v的化合物：

在本发明的一个优选实施例中，根据式viii的化合物包含4,4-二取代1,7-双-(3,4-二甲氧基苯基)-庚-1,6-二烯-3,5-二酮和6,6-二取代1,11-双(经取代苯基)-十一-1,3,8,10-四烯-5,7-二酮架构，如表1中所示。

表1：

在本发明的另一个优选实施例中，化合物为式v，且“n5”为1；r35、r45、r35'和r45'为-och3；且l5-z5侧链不存在，称为asc-j9。

在本发明的另一个优选实施例中，化合物为式viii，r18和r28为二取代甲氧基，r38为r48为h，且n8为1，称为asc-jm17。

本发明还提供一种组合物，其包括具有(经取代苯基)-丙烯醛部分的化合物。根据本发明的组合物优选为药物组合物、食品组合物或化妆品组合物。

优选地，药物组合物包括具有(经取代苯基)-丙烯醛部分的化合物和任选地药学上可接受的载剂或赋形剂。

优选地，药物组合物包括有效量的化合物。

通常，范围在本文中表达为“约”一个特定值，和/或到“约”另一特定值。当表达所述范围时，实施例包含一个特定值和/或到另一特定值的范围。类似地，当通过使用字“约”将值表达为近似值时，应理解，特定值形成另一实施例。应进一步理解，范围中的每一个的端点在相对于和独立于另一端点的情况下都是有效的。

“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形可或可不出现，且所述描述包含其中所述事件或情形存在的个例和其中所述事件或情形不存在的个例。举例来说，短语“任选地包括试剂”意指试剂可或可不存在。

必须注意，除非上下文另外明确规定，否则如说明书和所附权利要求书中所使用，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“所述”包含多个指示物。因此，除非上下文另外需要，否则单数术语应包含复数且复数术语应包含单数。

如本文所用，术语“个体”表示任何动物，优选地哺乳动物，并且更优选地人类。个体的实例包含人类、非人类灵长类动物、啮齿动物、豚鼠、兔、绵羊、猪、山羊、牛、马、犬和猫。

如本文所提供的活性成分的术语“有效量”意指提供所要功能的所要调节的成分的足够量。如下文将指出，所需的确切量将取决于个体的疾病状态、身体条件、年龄、性别、物种和重量、组合物的特定特征和配方等，在个体之间变化。可以调节给药方案以诱导最优治疗反应。举例来说，可以每日投与若干分次剂量，或可以如由治疗情况的紧急状态所指示按比例减少剂量。因此，不可能指定精确的“有效量”。然而，适当的有效量可以由所属领域的普通技术人员仅使用常规实验来确定。

如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”表示逆转、缓解、抑制以下的发展，或改进以下：所述术语所适用的病症、疾病或病状，或所述病症、疾病或病状的一或多种症状。

如本文所用，术语“载剂”或“赋形剂”是指自身非治疗剂的任何物质，其用作载剂和/或稀释剂和/或佐剂的，或媒剂，其用于将治疗剂递送到个体或添加到配制物以改进其处理或存储特性，或准许或促进组合物的剂量单位形成为适合于经口投与的离散制品，如胶囊或片剂。适合载剂或赋形剂为制造药物配制物或食品产物的领域的普通技术人员熟知的。载剂或赋形剂可以包含(借助于说明而非限制)缓冲剂、稀释剂、崩解剂、粘合剂、粘连剂、湿润剂、聚合物、润滑剂、助流剂、添加以掩蔽或抵消不愉快的口味或气味的物质、调味剂、染料、芳香剂和添加以改进组合物的外观的物质。可接受的载剂或赋形剂包含柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、碳酸氢盐缓冲液、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、碳酸镁、滑石、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、果胶、糊精、甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、淀粉、明胶、纤维素材料(例如烷醇酸的纤维素酯和纤维素烷基酯)、低熔点蜡可可脂、氨基酸、尿素、醇、抗坏血酸、磷脂、蛋白质(例如血清白蛋白)、乙二胺四乙酸(edta)、二甲亚砜(dmso)、氯化钠或其它盐、脂质体、甘露醇、山梨醇、甘油或粉末、聚合物(如聚乙烯-吡咯啶酮、聚乙烯醇和聚乙二醇)和其它药学上可接受的材料。载剂应该不破坏治疗剂的药理学活性，并且当以足以递送治疗量的试剂的剂量投与时应为无毒的。

根据本发明的药物组合物优选地通过所属领域中已知的任何方法，包含(但不限于)肌肉内、皮内、静脉内、皮下、腹膜内、鼻内、经口、粘膜或外部途径，局部或全身性投与。适当途径、配方和投药时间表可由所属领域的技术人员确定。在本发明中，药物组合物可根据相应投药途径以各种方式配制，如液体溶液、悬浮液、乳液、糖浆、片剂、丸剂、胶囊、持续释放配制物、散剂、粒剂、安瓿、注射剂、输注剂、试剂盒、软膏、乳液、擦剂、乳膏或其组合。必要时，其可经除菌或与任何药学上可接受的载剂或赋形剂(其中许多为所属领域的普通技术人员已知的)混合。

如本文所用，外部途径也被称为局部投药，包含(但不限于)通过吹入和吸入投药。用于局部投药的各种类型的制剂的实例包含软膏、乳剂、乳膏、凝胶、泡沫、用于通过经皮贴片递送的制剂、散剂、喷雾剂、气雾剂、用于吸入器或吹入器或滴剂(例如滴眼剂或滴鼻液)的胶囊或药筒、用于雾化的溶液/悬浮液、栓剂、阴道栓剂、滞留灌肠剂和可咀嚼或可吮吸片剂或团粒或脂质体或微封装制剂。

软膏、乳膏和凝胶可以例如用水性或油性基质配制，其中添加适合的增稠剂和/或胶凝剂和/或溶剂。所述基质可因此例如包含水和/或油，如液体石蜡或植物油，如花生油或蓖麻油，或溶剂，如聚乙二醇。可根据基质的性质使用的增稠剂和胶凝剂包含软质石蜡、硬脂酸铝、鲸蜡硬脂醇、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、羧基聚亚甲基和纤维素衍生物和/或单硬脂酸甘油酯和/或非离子乳化剂。

乳剂可以用水性或油性基质配制，并且一般来说还将含有一或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂或增稠剂。

用于外部应用的散剂可借助于任何适合的粉末基质(例如滑石、乳糖或淀粉)形成。可以用还包括一或多种分散剂、增溶剂、悬浮剂或防腐剂的水性或非水性基质配制滴剂。

喷雾组合物可以例如使用适合液化推进剂，配制为水性溶液或悬浮液，或配制为从加压包装(例如定量给药吸入器)递送的气雾剂。适合于吸入的气雾组合物可以是悬浮液或溶液。气雾组合物可任选地含有所属领域中熟知的额外配制物赋形剂，如表面活性剂，例如油酸或卵磷脂，和共溶剂，例如乙醇。

可通过每天一或多次施用向受影响区域投与局部制剂；在皮肤区域上可有利地使用封闭敷料。连续或长期递送可通过粘合储集器系统实现。

根据本发明的化妆品组合物可为基本上由水组成的水相配制物；其还可包括水和可与水混溶(在25℃下，在水中的混溶性大于50重量％)的溶剂的混合物，举例来说，含有1到5个碳原子的低碳单醇，如乙醇或异丙醇；含有2到8个碳原子的二醇，如丙二醇、乙二醇、1,3-丁二醇或二丙二醇、c3-c4酮和c2-c4醛；以及丙三醇。所述水性配制物优选地呈水性凝胶或水凝胶配制物的形式。水凝胶配制物包括增稠液体溶液的增稠剂。增稠剂的实例包含(但不限于)卡波姆(carbomer)、纤维素基质材料、树胶、海藻胶、琼脂、果胶、角叉菜胶、明胶、矿物质或经改性矿物质增稠剂、聚乙二醇和多元醇、聚丙烯酰胺和其它聚合增稠剂。优选地使用提供组合物的稳定性和最优流动特征的增稠剂。

根据本发明的化妆品组合物可呈乳液或乳膏配制物的形式。其可含有乳化表面活性剂。这些表面活性剂可以选自阴离子和非离子表面活性剂。关于表面活性剂的特性和功能(乳化)的定义，可以参考文献《化学物技术百科全书，柯克-奥思默(encyclopediaofchemicaltechnology,kirk-othmer)》第22卷，第333-432页，第3版，1979，威立(wiley)，尤其所述参考文献的第347-377页是关于阴离子和非离子表面活性剂。

优选地用于根据本发明的化妆品组合物的表面活性剂选自：非离子表面活性剂：脂肪酸、脂肪醇、聚乙氧基化或聚甘油化脂肪醇(如聚乙氧基化硬脂醇或鲸蜡基硬脂醇)、蔗糖的脂肪酸酯、烷基葡萄糖酯(确切地说，c1-c6烷基葡萄糖的聚氧乙烯化脂肪酯)，和其混合物；阴离子表面活性剂：用胺中和的c16-c30脂肪酸、氨水或碱性盐，和其混合物。优选地使用使得有可能获得水包油或水包蜡乳液的表面活性剂。

根据本发明的化妆品组合物可进一步包括有效量的生理学上可接受的抗氧化剂，其选自由以下组成的群组：丁基化对甲酚、丁基化氢醌单甲醚和生育酚。

根据本发明的化妆品组合物可进一步包括天然或经改性的氨基酸、天然或经改性的固醇化合物、天然或经改性的胶原蛋白、丝蛋白或大豆蛋白。

根据本发明的化妆品组合物优选经配制以用于局部施用到角蛋白材料，如皮肤、毛发、睫毛或指甲。其可呈通常用于此类型施用的任何呈现形式，尤其呈水性或油性溶液、水包油或油包水乳液、硅酮乳液、微乳液或纳米乳液、水性或油性凝胶或液体、糊状或固体无水产物的形式。

根据本发明的化妆品组合物可以近乎流体，并且可以具有白色或彩色乳膏、软膏、乳汁、乳液、精华液、糊状物、摩丝或凝胶的外观。其可以气雾剂、贴剂或散剂的形式任选地局部施用到皮肤上。其还可以呈固体形式，例如呈棒状物的形式。其可用作护肤产品和/或用作皮肤的化妆产品。或者，其可调配成洗发剂或护发素。

以已知方式，根据本发明的化妆品组合物还可含有化妆品中常见的添加剂和佐剂，如亲水性或亲脂性胶凝剂、防腐剂、抗氧化剂、溶剂、芳香剂、填充剂、色素、气味吸收剂和染料。

在食品组合物的制造过程中，可以将化合物添加到常规食品组合物(即，可食用食品或饮料或其前驱体)中。几乎所有食品组合物均可补充有本发明的化合物。可补充有本发明化合物的食品组合物包含(但不限于)糖果、烘焙商品、冰淇淋、乳制品、甜味和调味点心、点心棒、膳食替代产品、快速食品、汤、意大利面、面条、罐装食品、冷冻食品、干制食品、冷藏食品、油和脂肪、婴儿食品，或涂在面包上的软质食品，或其混合物。

在本发明的一个优选实施例中，药物组合物是局部药物组合物。

在本发明的一个优选实施例中，药物组合物进一步包括润肤剂、皮肤渗透剂、乳化剂、中和剂、胶凝剂、防腐剂或螯合剂。

本发明还提供一种用于治疗需要此类治疗的个体的与发炎性细胞因子过度表达相关的发炎性病症的方法，其包括向所述个体投与如上文所提及的药物组合物。

尽管不希望受理论限制，但申请人认为根据本发明的方法是通过抑制由活化树突状细胞、巨噬细胞或t细胞合成的发炎性细胞因子来治疗病症。

优选地，发炎性细胞因子含有(但不限于)inf-α、il-1β、il-17a、il-22和il-31。

在本发明的一个优选实施例中，病症为表皮病症。

在本发明的另一个优选实施例中，病症为真皮病症。

在另一个方面，病症优选地为发炎性皮肤病症。

优选地，发炎性皮肤病症含有(但不限于)光化性角化症、异位性皮肤炎、水痘、唇疱疹、接触性皮炎、湿疹、荨麻疹、脓疱病、毛囊角化症、乳胶过敏、麻疹、牛皮癣、癣、红斑痤疮、瘢痕瘤、增生性瘢痕、瘙痒或脂溢性湿疹。

本发明还提供一种用于治疗需要此类治疗的个体的自身免疫疾病的方法，其包括向所述个体投与如上文所提及的药物组合物。

在本发明的一个优选实施例中，自身免疫疾病含有(但不限于)爱迪生氏病(addison'sdisease)、乳糜泻、移植物抗宿主疾病(gvhd)、格雷夫斯病(graves'disease)、桥本甲状腺炎(hashimoto'sthyroiditis)、发炎性肠病、多发性硬化、重症肌无力、恶性贫血、牛皮癣性关节炎、类风湿性关节炎(ra)、斯耶格伦氏综合征(syndrome)、全身性红斑性狼疮症(狼疮)、1型糖尿病或血管炎。

优选地，发炎性肠病含有(但不限于)溃疡性结肠炎或克隆氏病(crohn'sdisease)。

在本发明的一个实施例中，我们已确立咪喹莫特(imq)诱导的牛皮癣性模型，其中咪喹莫特诱导小鼠皮肤上类似于人类牛皮癣性反应的牛皮癣性发炎。我们使用包含树突状细胞和巨噬细胞的免疫细胞以及此imq诱导的牛皮癣性小鼠模型来评价asc-j9和相关化合物对牛皮癣发炎的治疗的作用。在活体外研究中，我们发现asc-j9和asc-jm17可以抑制小鼠脾细胞、小鼠骨髓衍生树突状细胞和骨髓衍生巨噬细胞中的发炎性细胞因子或tlr配体诱导的细胞因子表达。另外，我们还观察到活体内asc-j9乳膏减轻了imq诱导的牛皮癣性发炎。此外，j9减轻imq诱导的牛皮癣性发炎动物模型，其包含减少红斑、减少病变性皮肤的鳞片化和厚度，以及抑制牛皮癣性皮肤中的发炎性基因表达。将这些结果综合在一起，asc-j9和asc-jm17发挥消炎活性以抑制牛皮癣性发炎。

在本发明的一个优选实施例中，asc-j9抑制瘢痕瘤患者衍生的成纤维细胞中的瘙痒标记物。尽管不希望受理论限制，但申请人认为asc-j9通过下调患者衍生的瘢痕瘤成纤维细胞中的阿他民因子(artemin，artn)表达和瞬时受体电位(trp)通道来抑制瘙痒。artn的过度表达经展示增强引起瘙痒的皮肤感觉神经元中的trpv1和trpa1的表达(分子疼痛(molpain)。2015年3月8日；11:8；制药(巴塞尔)(pharmaceuticals(basel))。2018年12月；11(4):100)。

提供以下实例以辅助所属领域的技术人员实践本发明。

实例

实例1：牛皮癣

材料和方法

测试物的储存条件

将用于活体外研究的asc-j9(j9)和asc-jm17(jm17)粉末溶解于dmso中并且储存在-20℃下。

在室温下储存j9对照组乳膏和j9乳膏，其包含0.05％j9、0.1％j9和0.5％j9。

剂量制备

将j9和jm17粉末在dmso中作为储备液溶解成10mg/ml，且接着将其连续稀释成各种浓度以用于研究。

测试系统：

细胞存活性的mts分析法：通过mts分析法测量测试物的细胞毒性。mts分析法是基于通过活细胞还原mts四唑化合物以产生可溶于细胞培养基中的彩色甲臜染料。这种转化被认为是由nad(p)h依赖性脱氢酶在代谢活性细胞中进行。通过测量在490-500nm下的吸光度来定量甲臜染料。将施用无毒剂量以用于进一步分析法。

细胞培养：小鼠骨髓衍生树突状细胞(bmdc)和骨髓衍生巨噬细胞(bmdm)由小鼠骨髓细胞产生。简单来说，树突状细胞可以通过两个诱导程序产生。可用gm-csf和il-4持续10天将骨髓细胞诱导成称为gmdc的骨髓dc，同时可以通过用fit3-配体诱导10天来产生称为fit3dc的包含骨髓和浆细胞dc的混合类型的dc。为了产生bmdm，使用30％l929改良性培养基7天将骨髓细胞诱导成bmdm。

基因表达的分析：根据制造商的方案，使用isol-rna溶解试剂(德国希尔登5prime公司(5primegmbh,hilden,germany))从细胞纯化总rna。使用反转录试剂盒(qiagen^tm)和oligo-dt引物进行反转录，以用于第一股cdna合成。使用lightcycler480检测系统(德国潘茨堡罗氏诊断公司(rochediagnosticsgmbh,penzberg,germany))和sybrgreenrt-pcr试剂盒，用基因特异性引物(参见附录)进行定量pcr，以用于基因表达分析。将mrna表达水平标准化到gapdh的表达水平。

牛皮癣性发炎的动物模型：每天将30或40mg5％imq凝胶(aldara^tm)涂抹于balb/c小鼠的刮毛背部上，持续5天或10天。基于如所描述的牛皮癣面积严重程度指数(pasi)评估皮肤的发炎性反应的严重程度。简单来说，按以下0到4的等级，对牛皮癣反应的三个参数(红斑、鳞片化和皮肤厚度)进行独立评分：0：无；1：轻微；2：适中；3：明显；以及4：极明显。通过将来自这三个参数的评分相加，使用0到12的累积评分测量反应的严重程度。在实验结束时，将小鼠处死以用游标测径规测量皮肤厚度。动物研究的分组和剂量描述如下：在表2和3中列出两个动物实验：

表2：1号动物实验：

表3：2号动物实验：

统计分析：所有数据呈现为平均值±sd。使用斯图登氏t检验(student'st-test)对来自三个独立实验的数据进行统计分析。p值<0.05被认为是实验组中统计学上显著的差异。

数据分析

j9和jm17对巨噬细胞和树突状细胞的活体外消炎活性

通过mts分析法进行活体外毒性测试。

通过定量pcr(rt-qpcr)分析j9和jm17在各种免疫细胞(包含小鼠脾细胞、小鼠骨髓衍生树突状细胞和骨髓衍生巨噬细胞)中，对于由tlr配体诱导的，包含tnf-α、il-1β、il-17a、il-22、il-23和il-31的发炎性细胞因子的消炎作用。

j9和jm17在患有咪喹莫特(imq)诱导的牛皮癣性发炎的动物模型上的抑制作用。

小鼠经(1)照相，以用于评价，及分析(2)牛皮癣面积严重程度指数(pasi)；(3)皮肤厚度测量。我们通过获取以下，在实验中选择具有更好的抑制作用的样品以用于进一步分析：(1)h&e染色，和(2)通过定量pcr(rt-qpcr)测量的在病变性组织中包含tnf-α、il-1β、il-17a、il-22、il-23和il-31的发炎性基因表达。

结果

j9和jm17对巨噬细胞和树突状细胞的活体外消炎活性

此实例的目标为评价活体外和活体内j9和jm17对牛皮癣性发炎的消炎能力。为了找到用于活体外研究的j9和jm17的安全剂量，通过mts分析法测量j9和jm17的细胞毒性。鉴于树突状细胞和巨噬细胞是引发牛皮癣性发炎的重要细胞，选择这两种细胞用于细胞毒性测试。用从0μm到10μm的不同浓度的j9和jm17处理这些细胞。如图1中所示，gmdc、fit3dc和bmdm对j9(无毒剂量)的抗性分别至多到10μm、10μm和1μm。此外，gmdc、fit3dc和bmdm对jm17(无毒剂量)的抗性分别至多到5μm、3μm和1μm。

为了评价j9和jm17活体外的消炎作用，用j9和jm17预处理gmdc1小时并且用发炎性细胞因子，tnf-α或il-1β刺激24小时。通过rt-qpcr测量包含tnf-α、il-1β、il-17a、il-22、il-23和il-31的细胞因子的表达。在图2中，j9和jm17显著抑制gmdc中的tnf-α或il-1β诱导的tnf-α和il-1β表达，但j9和jm17不减弱gmdc中的tnf-α或il-1β诱导的il-22表达。il-17a的表达不由tnf-α或il-1β诱导。此外，il-23和il-31的表达在实验组当中的树突状细胞中是不可检测的。

我们还评价了j9和jm17对小鼠脾细胞和骨髓衍生巨噬细胞的消炎作用。用j9和jm17预处理小鼠脾细胞1小时，且接着添加tlr配体r8486小时。rt-qpcr分析揭露j9和jm17显著抑制小鼠脾细胞中的r848诱导的tnf-α、il-1β、il-17a和il-22表达，但小鼠脾细胞中的il-23和il-31的表达不可检测(图3)。在bmdm中，我们发现r848诱导的tnf-α、il-1β、il-17a、il-22和il-31的表达由j9抑制，且r848诱导的tnf-α、il-1β和il-17a的表达由jm17抑制(图4)。

j9和jm17在患有咪喹莫特(imq)诱导的牛皮癣性发炎的动物模型上的抑制作用。

我们进一步评价j9对牛皮癣性发炎的活体内消炎作用。首先，我们比较了j9对照组乳膏、j9乳膏和氯倍他索在10天实验时间表中对抑制imq诱导的牛皮癣性发炎的作用(图5a)。在第0天、第5天和第10天对每组小鼠照相以用于评价(图5b、5c和5d)。5天处理后，观察到imq处理组的病变性皮肤具有严重红斑、鳞片化和皮肤厚度增加(图5b)。在对照乳膏组中，未观测到抑制作用(图5b)。j9(2mg/cm²和10mg/cm²)处理显著减少病变性皮肤的红斑、鳞片化和厚度(图5b)。此外，用皮质类固醇药物氯倍他索处理显著抑制了病变性皮肤中的imq诱导的红斑、鳞片化和皮肤厚度增加(图5b)。然而，氯倍他索处理明显地减少了皮肤厚度(图5b和6b)。在此实验中，我们发现相比于第5天的红斑、鳞片化和皮肤厚度增加的严重程度，在第10天这些参数并不增加。这些现象在第5天达到最严重(图5和6a)。比较这些组的牛皮癣面积严重程度指数(pasi)评分，且我们发现，在第3天到第10天，经2mg/cm²j9处理的小鼠组的pasi评分显著降低。在第4天到第6天，经10mg/cm²j9处理的小鼠组显著降低(图6a)。在第10天测量皮肤厚度。j9(2mg/cm²和10mg/cm²)处理显著抑制imq诱导的厚度增加(图6b)。我们还发现与假处理对照组相比，氯倍他索处理减小了皮肤厚度(图6b)。还分析了在病变性皮肤中细胞因子基因(包含tnf-α、il-1β、il-17a、il-22、il-23和il-31)的表达。在这些细胞因子中，我们观察到j9在第10天减弱了imq诱导的il-1β表达(图6c)。h&e染色结果揭露，j9处理减少表皮和真皮的厚度，和表皮中的角质细胞增殖和发炎(图6d)。

为了进一步理解不同浓度的j9乳膏的治疗作用，使用0.5％j9(2mg/cm²和6mg/cm²)、0.1％j9(10mg/cm²)和0.05％j9乳膏(2mg/cm²)在五天实验时间表中评价对imq诱导的牛皮癣性发炎的治疗作用(图7a)。在第0天和第5天对每组小鼠照相以用于评价(图7b和7c)。5天处理后，我们发现用0.5％j9(2mg/cm²和6mg/cm²)和0.1％j9(10mg/cm²)处理的小鼠中，imq诱导的发炎受到抑制，但在用0.05％j9乳膏(2mg/cm²)处理的小鼠未受到抑制(图7c)。还测量了病变性皮肤的pasi评分、皮肤厚度和基因表达。用0.5％j9(2mg/cm²和6mg/cm²)和0.1％j9(10mg/cm²)处理的小鼠的pasi评分在第4天到第5天明显降低(图8a)。在皮肤厚度中也观察类似结果(图8b)。在用0.5％j9(2mg/cm²和6mg/cm²)和0.1％j9(10mg/cm²)处理的小鼠中，病变性皮肤中的tnf-α和il-1β的imq诱导的表达也受到抑制(图8c)。我们还在此实验中分析了通过imq和j9的病变性皮肤中il-17a、il-22、il-23和il-31的诱导和抑制，但由于这些细胞因子的表达水平较低而没有获得显著结果。

实例2：瘙痒

用asc-j9处理被命名为256k和268k的两种瘢痕瘤患者衍生的成纤维细胞24小时。然后收集细胞并且通过qpcr测定artn和gapdh的mrna表达。

如图9中所示，asc-j9抑制瘢痕瘤患者衍生的成纤维细胞中的瘙痒标记物。asc-j9通过下调患者衍生的瘢痕瘤成纤维细胞中的阿他民因子(artn)表达来抑制瘙痒。

尽管已结合上文阐述的特定实施例描述本发明，但对于其的许多替代方案和其修饰和变化将对所属领域的普通技术人员显而易见。所有所述替代方案、修改和变化被视为属于本发明的范围。