本发明涉及对羟基苯丙酸新的药物用途，尤其是在制备防治呼吸道感染药物中的应用。
背景技术：
：呼吸道感染是常见疾病，分为上呼吸道感染和下呼吸道感染。病情严重时会导致肺损伤，尤其是急性肺损伤，是一类急性呼吸窘迫综合征,是临床常见的急危重症。急性肺损伤的病理改变主要包括肺部广泛的炎症反应、中性粒细胞招募、肺间隙水肿、上皮细胞完整性破坏、微血管渗透性增加及气体交换障碍等方面。据统计，急性肺损伤致死率可占医院死亡总人数的34.9％。目前尚无被fda和cfda批准针对性治疗急性肺损伤的药物。因此，研发针对预防和治疗急性肺损伤的药物，从而降低急性肺损伤的临床死亡率，具有迫切的必要性和广大的市场需求。对羟基苯丙酸(hppa)是一种化合物合成
技术领域：
中的中间体，其结构式为：对羟基苯丙酸可用作杀虫剂。有药理实验表明，对羟基苯丙酸对小鼠的眼镜蛇中毒有明显的保护作用。对羟基苯丙酸与乙醇、丙醇、丁醇等醇类反应生成的各种酯类，可抑制霉菌的生长，是优良的防腐剂。但没有任何文献公开对羟基苯丙酸在防治呼吸道感染方面的相关作用。技术实现要素：本发明经试验证明：在脂多糖诱导的小鼠肺损伤模型中，对羟基苯丙酸可显著抑制肺损伤中的肺水肿、炎性细胞浸润及细胞凋亡的病理特征，具有显著疗效。在慢性烟熏模型中，对羟基苯丙酸可显著延缓小鼠肺功能的退化，显著降低小鼠肺泡灌洗液中中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的浸润，并显著抑制小鼠肺组织中各炎症因子水平的升高，达到抑制肺部炎症的目的。在体外抑菌作用中，对羟基苯丙酸对肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌具有显著的抑制作用。由此本发明首次公开对羟基苯丙酸在制备防治呼吸道感染，特别是肺损伤中肺炎、肺水肿及肺上皮和内皮细胞坏死药物中的新用途。并进一步公开对羟基苯丙酸在制备抑制肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌药物中的应用。具体实施方式实例1：hppa对肺损伤的药效作用评价实验材料：脂多糖o55:b5、戊巴比妥钠、memmertufe400烘箱、mettlertoledoms205du十万分之一电子天平。实验动物：spf级别雄性balb/c小鼠42只，8-9周龄，体重18-20g，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司(动物许可证编号scxk(鲁)20190003,使用许可证编号syxk(粤)2016-0112)。实验方法：小鼠购买后在恒温恒湿spf级动物房适应72小时。将小鼠随机分成4组，分别为空白对照组(n＝10)、模型对照组(n＝10)、阳性对照药物柚皮苷组(n＝11)、对羟基苯丙酸组(n＝11)。其中柚皮苷组(180mg/kg)和对羟基苯丙酸组(51.6mg/kg)分别连续灌胃给药三天，每天一次，空白和模型对照组灌胃等体积生理盐水。于最后一次灌胃给药后3小时，采用0.5ml戊巴比妥钠(65mg/kg)腹腔注射对小鼠进行麻醉。对于模型组、柚皮苷组和对羟基苯丙酸组小鼠，将50μl脂多糖055:b5溶液(0.8mg/ml)缓慢滴注入小鼠鼻腔至完全吸收，建立小鼠急性肺损伤模型。空白对照组小鼠接受同等体积生理盐水滴鼻处理。脂多糖造模24小时后，采用脱颈法将小鼠处死，采集小鼠全肺组织放入灭菌离心管中，于30秒内置于液氮中保存。将保存在液氮中的肺组织放至室温30分钟后称量湿重。将干燥皿于80℃干燥24小时后取出，放至室温后称重。随后于80℃恒重1小时后取出，放至室温后称重。干燥皿恒重后，将肺组织置于干燥皿中，于80℃干燥48小时取出，放至室温后称重。随后于80℃恒重1小时后取出，放至室温后称重。连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下即达到恒重标准。脂多糖造模24小时后，将小鼠处死并采集肺组织约400mg。向肺组织中加入1mlpbs-10％triton作为裂解液，匀浆。采用bca蛋白浓度试剂盒测定蛋白浓度后，调整上样量为50μg总蛋白，100μl总体积，用试剂盒测定肺组织样品中髓过氧化物酶mpo的含量、髓过氧化物酶mpo活力及乳酸脱氢酶ldh活力。表中数据以均值±标准差呈现，多组间差异分析采用单因素方差分析beforroni法，spss22.0软件实现，p值小于0.01认定具有统计学差异。实验结果：结果见表1，与空白对照组小鼠相比，模型对照组肺损伤(ali)小鼠出现显著肺水肿(p<0.01),伴随髓过氧化物酶mpo在肺中表达和活力的上升(p<0.01)以及乳酸脱氢酶ldh活力的升高(p<0.01)，说明脂多糖诱导的ali模型可有效模拟出肺损伤中肺水肿，以中性粒细胞为代表的淋巴细胞的聚集浸润以及肺上皮/内皮细胞坏死这三大病理指证。对羟基苯丙酸、柚皮苷均可有效抑制ali中肺部炎症的进程，减轻肺水肿、局部中性粒细胞浸润及细胞坏死的情况(p<0.01)。对羟基苯丙酸在缓解炎性细胞侵袭和减轻细胞凋亡坏死的方面，对比柚皮苷，具有显著的优效性(p<0.01)。表1对脂多糖诱导的小鼠肺损伤症抑制作用(均值±标准差,n＝6-8)**，与模型对照组比较p<0.01，##，与阳性对照药物柚皮苷组比较p<0.01。实施例2：对烟熏所造成的慢性肺损伤的改善作用实验动物：spf级balb/c小鼠，雄性，体重19-23g，购于广东省医学实验动物中心(广州，中国)。饲养条件：12小时日夜交替，温度21℃，湿度60％，自由采食。实验仪器：烟熏箱(自制不锈钢箱体0.8m×0.8m×1m)；十万分之一分析天平(德国acculab公司，型号：alc-210-4)；5430r高速离心机(德国eppendorf公司)；多孔超微量核酸蛋白分析仪(美国biotek公司，型号：epoch)；超低温冰箱(中国海尔公司，型号：dw-86l486)；涡旋混匀仪(美国si公司，型号：si-0246)；xt-2000iv全自动动物血液分析仪(日本sysmex公司)等。实验分组：动物随机分为空白组、烟熏模型组，hppa低、高剂量组(15、60mg/kg)及罗氟司特组(5mg/kg)，每组8只动物。造模方法及给药：动物适应饲养1周后开始烟熏造模，每天烟熏1次，10支香烟/1h，连续8周。每支烟含焦油量11mg，烟气烟碱量1.0mg，一氧化碳量13mg。正常组不做处理，在无烟环境中饲养。给药组于第3周开始给药，每次烟熏前1h灌胃给药(灌胃体积0.2ml)。于相应时间点腹腔注射4％水合氯醛0.25ml麻醉。剪开小鼠喉颈部皮肤，暴露气管。于甲状软骨下方开口，插入气管导管并用棉线结扎。将插管后的小鼠放进pft小动物肺功能分析系统体描箱，准静态肺顺应性(cchord)，同时也测定50ms内用力呼气量(fev50)及用力肺活量(fvc)，以计算fev50/fvc。于相应时间点每组取8只小鼠，脱颈椎处死后于腹部横开口，剪破胸膈膜，再沿两侧肋骨向上剪开至能前整个前胸揿开，以镊子挑起全肺剪下，用小号封口袋封装，放于-80℃冰箱保存。剪开喉部皮肤和肌肉，小心分离气管，用眼科剪在甲状软骨下方开口，以5ml注射针头行气管插管并扎紧。打开胸腔后从气管插管处注入0.5ml生理盐水对全肺进行灌洗，连续3次，合并3次支气管肺泡灌洗液(balf)，3000rpm离心，细胞沉淀以含2％胎牛血清的pbs缓冲液300μl重悬，以全自动五分类动物血液分析仪进行白细胞分类计数，计算中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞数量。肺组织与组织匀浆液1mg:10μl的比例混合，用玻璃匀浆器匀磨肺组织，制备10％肺组织匀浆液，使用bca法测定肺组织匀浆液的总蛋白含量，使用elisa法测定肺组织匀浆液中tnfα、il-6、ltb4、il-1β、il-18的含量，按试剂盒说明书操作测定，各细胞因子含量表示为pg/mg蛋白。实验结果见表2～表4。1、hppa能显著抑制小鼠cchord、fev50/fvc的降低，延缓小鼠的肺功能的退化。实验结果见表2。表2对慢性烟熏小鼠肺功能的影响组别cchord(ml/cmh2o)fev50/fvc空白组0.034±0.00450.39±0.065模型组0.052±0.0013**0.227±0.048**hppa低剂量组0.0448±0.00410.360±0.039##hppa高剂量组0.041±0.0029##0.333±0.040##罗氟司特0.042±0.0054#0.367±0.042##与空白组对比，*表示p<0.05，**表示p<0.01；与模型组对比，#表示p<0.05，##表示p<0.012、hppa能显著降低慢性烟熏小鼠肺泡灌洗液中中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的浸润。实验结果见表3。表3慢性烟熏小鼠肺泡灌洗液白细胞计数与空白组对比，*表示p<0.05，**表示p<0.01；与模型组对比，#表示p<0.05，##表示p<0.013、hppa能显著抑制慢性烟熏小鼠肺组织中tnfα、il-6、ltb4、il-1β、il-18水平的升高，达到抑制炎症的目的。实验结果见表4。表4对慢性烟熏小鼠肺组织中炎症因子的影响*/**表示与空白组对比，*表示p<0.05，**表示p<0.01#/##表示与模型组对比，#表示p<0.05，##表示p<0.01实施例3：体外抑菌活性研究实验仪器：十万分之一电子分析天平(bp211d，德国satorius公司)，高压高温灭菌锅(gr60da)，超声波震荡清洗器(kq-250de，昆山超声仪器有限公司)，移液枪(法国gilson)，麦氏比浊仪(vitek2densichekplus，27208densitometerdensichekkit220)，麦氏比浊管(法国mérieux公司)，细菌恒温培养箱(hpx-9162mbe电热恒温培养箱，常州诺基仪器有限公司)，无菌96孔板(jetbiofil)，90mm哥伦比亚血琼脂培养基(43041columbia5％sheepbl，法国mérieux公司)。实验菌株：实验用金黄色葡萄球菌10株(编号s1-s10)和肺炎克雷伯菌(编号k1-k12)12株由中山大学附属第一医院检验科提供。实验方法：细菌的复苏与传代：接种环高温灭菌后挑取冻存收集的菌株，以平板划线的形式涂布于血琼脂培养基上，倒置放入细菌培养箱，37℃培养24小时后，挑取单菌落，涂于新的血平板培养基上继续37℃培养24小时。体外抑菌实验：参照美国临床实验室标准化协会(clsi)标准的肉汤微量稀释法设计体外抗菌实验。将hppa用培养基进行倍比稀释，获得一系列药物浓度，后分别加入无菌96孔板中各孔。设置空白对照孔，孔中不加入药液，加入生理盐水。实验组与对照组均每孔50μl。挑取细菌加入生理盐水震荡混匀后调麦氏比浊至0.5，后用培养基稀释100倍，加入无菌96孔板中的各孔，每孔50μl，即最终接种量为1.0*106cfu/ml。混匀后37℃培养20小时后检测各孔培养液的浑浊程度及孔中的沉淀情况，澄清孔所对应的药物浓度即为药物最低抑菌浓度(mic)浓度。结果见表5和表6。表5对肺炎克雷伯菌的体外抑菌试验结果菌株编号mic(μg/ml)k1128k2128k3128k4128k5128k664k7128k864k964k1064k1164k1264表6对金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验结果细菌编号micμg/mls164s264s364s464s564s664s764s864s964s1064当前第1页1 2 3