一种中药组合物在制备gper1受体激动剂药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及一种中药组合的新用途，具体的涉及该中药组合物在制备作为gper1受体激动剂药物中的应用。
背景技术：
2.g蛋白偶联雌激素受体(gper1)是近年来发现并引起广泛关注的雌激素膜受体,不同于经典雌激素核受体,它能介导雌激素快速非基因组效应或间接参与基因转录的调控,继而影响下游信号分子表达而发挥其调控作用。该受体是由375个氨基酸组成的跨膜蛋白，属于g蛋白偶联受体家族。
3.gper1在多个系统的组织细胞中都有广泛分布，如生殖系统、循环系统、神经系统、免疫系统、泌尿系统等。另有研究证实，gper1在多种癌组织中过表达，包括乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、前列腺癌和肺癌等。gper1初是从血管内皮细胞克隆的，它的血管表达和功能在绝经后妇女动脉粥样硬化的发展中起着至关重要的作用。目前关于gper1的亚细胞定位尚无定论，有研究认为gper1定位于细胞膜上；也有人认为gper1定位于细胞质中的内质网以及高尔基体。目前已有大量研究证实，gper1可以通过激活egfr及camp等介导雌激素的快速非基因组效应，调节基因的表达，介导雌激素的生物学功能。大量研究证实，gper1介导雌激素的快速生物学效应需要激动剂g1的参与。给予高选择性的gper1激动剂g1，可显著降低血管炎症，同时减轻动脉粥样硬化斑块的形成。g1具有抑制肿瘤细胞增值的能力，因此可以发展为治疗卵巢癌和乳腺癌的药物。
技术实现要素：
4.本发明提供一种中药组合物在制备作为gper1受体激动剂药物中的应用，通过对照试验证实，本发明中药组合物与阳性药物g1具有同样的性质，同为gper1受体激动剂，因此该中药组合物可以发挥受体激动剂的作用，参与多种癌细胞基因表达，激活多种激素，介导多种生物学功能。该中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子150-350、枸杞子100-200、五味子30-60、蛇床子20-50、金樱子20-50、韭菜子20-50、巴戟天20-50、肉苁蓉20-50、生地黄30-60、川牛膝20-50、淫羊藿40-100、覆盆子20-50、人参15-35、鹿茸10-25、海马15-35、川楝子15-35。
5.本发明优选的中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子150、枸杞子200、五味子30、蛇床子50、金樱子20、韭菜子20、巴戟天50、肉苁蓉20、生地黄30、川牛膝50、淫羊藿40、覆盆子50、人参15、鹿茸25、海马15、川楝子35。
6.本发明优选的中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子350、枸杞子100、五味子60、蛇床子20、金樱子50、韭菜子50、巴戟天20、肉苁蓉50、生地黄60、川牛膝20、淫羊藿100、覆盆子20、人参35、鹿茸10、海马35、川楝子15。
7.本发明优选的中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子250、枸杞子138、五味子46、蛇床子35、金樱子35、韭菜子35、巴戟天35、肉苁蓉35、生地黄46、川牛膝35、淫羊藿
70、覆盆子35、人参25、鹿茸16、海马21、川楝子23。
8.本发明优选的中药组合物由如下重量份的原料药制成：菟丝子250、枸杞子150、五味子45、蛇床子30、金樱子30、韭菜子30、巴戟天30、肉苁蓉30、生地黄45、川牛膝30、淫羊藿70、覆盆子30、人参20、鹿茸19、海马20、川楝子20。
9.本发明所述药物的剂型为汤剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂或丸剂。
10.为了实现本发明的目的，将该中药组合物制成各种药物剂型，理论上本发明中药组合物可以按照制剂一般方法制成任何剂型，根据其适用对象和适应症优选为为汤剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂或丸剂。为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：peg6000，peg4000，虫蜡等。
11.本发明所述胶囊剂的制备方法包括如下步骤：a、按比例称取蛇床子、菟丝子、五味子、淫羊藿，加6-10倍量70%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇提浸膏；b、将步骤a醇提后的药材残渣与比例量的枸杞子、生地黄、覆盆子、金樱子、韭菜子、巴戟天、川楝子合并，加7-12倍量水煎煮1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，与步骤a所得醇提浸膏混合，减压浓缩至在60℃测定相对密度为1.25-1.30，得浸膏；c、按比例称取人参、鹿茸、海马、肉苁蓉、川牛膝，粉碎成细粉与步骤b所得浸膏混合均匀，60-70℃干燥，粉碎，过筛，填充胶囊。
具体实施方式
12.实施例1：胶囊剂的制备组方：菟丝子250g、枸杞子138g、五味子46g、蛇床子35g、金樱子35g、韭菜子35g、巴戟天 35g、肉苁蓉35g、生地黄46g、川牛膝35g、淫羊藿70g、覆盆子35g、人参25g、鹿茸16g、海马 21g、川楝子23g。
13.制备方法： a、按比例称取蛇床子、菟丝子、五味子、淫羊藿，加3208ml70%乙醇，回流提取3次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得醇提浸膏；b、将步骤a醇提后的药材残渣与比例量的枸杞子、生地黄、覆盆子、金樱子、韭菜子、巴戟天、川楝子合并，加6732ml水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，与步骤a所得醇提浸膏混合，减压浓缩至在60℃测定相对密度为1.28，得浸膏；c、按比例称取人参、鹿茸、海马、肉苁蓉、川牛膝，粉碎成细粉与步骤b所得浸膏混合均匀，60-70℃干燥，粉碎，过筛，填充胶囊，得胶囊757粒。
20g、川楝子20g。
21.制备方法：按比例称取组方中药材，混合粉碎成细粉，即得823g散剂。
22.实施例6：汤剂的制备组方：菟丝子250g、枸杞子150g、五味子45g、蛇床子30g、金樱子30g、韭菜子30g、巴戟天 30g、肉苁蓉30g、生地黄45g、川牛膝30g、淫羊藿70g、覆盆子30g、人参20g、鹿茸19g、海马 20g、川楝子20g。
23.制备方法：按比例称取组方中药材，加水至没过药材，浸泡15分钟后，加热至水开，继续小火煎煮30分钟，过滤，药渣再次加水至没过药材，再次煎煮30分钟，滤过，合并滤液，即得4320g 汤剂。
24.附图说明：图1：主动脉内皮gper1免疫组化染色，对照组(control)，模型组(model)，阳性对照药组(g1)，本发明药物组合物高剂量组(hd-bz)，本发明药物组合物低剂量组(ld-bz)；图2：主动脉内皮gper1免疫组化染色定量，对照组(control)，模型组(model)，阳性对照药组(g1)，本发明药物组合物高剂量组(hd-bz)，本发明药物组合物低剂量组(ld-bz)；图3： western blot分析gper1蛋白水平，gapdh作为内部参考对照，对照组(control)，模型组(model)，阳性对照药组(g1)，本发明药物组合物高剂量组(hd-bz)，本发明药物组合物低剂量组(ld-bz)；图4：gper1蛋白水平定量分析，gapdh作为内部参考对照，对照组(control)，模型组(model)，阳性对照药组(g1)，本发明药物组合物高剂量组(hd-bz)，本发明药物组合物低剂量组(ld-bz)。
25.为证实本发明中药组合物的作用，将实施例1所得胶囊剂内容物进行如下试验：1.动物分组和实验设计雌性纯合子apoe-/-小鼠60只和雌性c57bl/6j小鼠15只，均为6-8周龄，购自江苏集萃药康生物技术有限公司。动物饲养条件为温度22℃，12h/12h明暗昼夜节律，不限食和限水。适应性喂养3天后，apoe-/-小鼠接受双侧卵巢切除术（手术绝经模型），c57bl/6j小鼠给予假手术。1周后，apoe-/-小鼠随机分为4组（n=15/组）：模型组（model）（高脂饮食+0.5% sodium carboxymethylcellulose (cmc)灌胃），gper1激动剂g1组（高脂饮食+g1 0.2ug/d皮下注射），本发明药物组合物高剂量组（hd-bz）（高脂饮食+本发明药物组合物 2.8g/kg/d灌胃），本发明药物组合物低剂量组（ld-bz）（高脂饮食+本发明药物组合物1.4g/kg/d灌胃），15只c57bl/6j小鼠为对照组（control）（正常饮食+cmc灌胃）。正常饮食（标准饮食）购自摩尔饲料有限公司 (m10001，成都)，高脂饲料（不含植物雌激素，40%脂肪，1.25%胆固醇，0.5%胆汁酸）购自research diets有限公司(d12109c,美国新泽西州)。
26.2.结果本发明药物组合物对ovx/apoe-/-小鼠主动脉gper1表达的影响免疫组化及western blotting结果显示，与对照组相比，模型组gper1表达水平明显降低。阳性对照药g1处理增加了gper1水平，本发明药物组合物也增加了gper1蛋白水平，且呈剂量依赖性，高剂量本发明药物组合物效果更优。
27.本研究表明，本发明药物组合物是gper1受体激动剂。由此，本发明药物组合物作为gper1受体激动剂，可显著降低血管炎症，同时减轻动脉粥样硬化斑块的形成；具有抑制
肿瘤细胞增值的能力，因此可以发展为治疗卵巢癌和乳腺癌、治疗子宫内膜异位症的药物。