一种使用绿藻提取物作为主要活性成分的化妆品的制作方法

本发明属于化妆品技术领域，尤其涉及一种使用绿藻提取物作为主要活性成分的化妆品。

背景技术：

在化妆品领域中，皮肤保湿是一个基础护理工作，做好皮肤的保湿可延缓皮肤衰老，减少和预防皮肤疾病的发生，因此功效安全的保湿化妆品具有巨大的市场需求。人体主要依靠由水、脂类、天然保湿因子组成的天然保湿系统维持皮肤的健康状态，化妆品中的保湿剂起到模拟该系统，为皮肤提供暂时性的保护、减少损伤并促进修复的作用。

目前，传统保湿剂主要有甘油、丙二醇、丁二醇、山梨醇、吡咯烷酮羧酸钠、聚乙二醇、乳酸钠等，均由化学方法合成，是目前广泛使用的化妆品保湿剂。但上述化学合成的保湿剂均有一定的应用限制，例如甘油吸湿性强，环境干燥时反而从皮肤中吸水，因此甘油的配比决定其保湿功效；而乳酸钠终产物不易乳化；多元醇高浓度引起刺激反应，因此用量小，保湿效果有限。现有的常规保湿剂无法满足人们对高品质、天然安全化妆品的追求。

绿藻提取物是绿藻独有的活性成，绿藻每20h增长4倍，主要就是由绿藻提取物里的活性成分决定的。绿藻提取物主要成分是氨基酸、氨基肽、水溶性蛋白、结合蛋白、糖蛋白、维生素、矿物质、类谷胱甘肽物质、rna/dna、免疫多糖等。绿藻提取物具有促进正常细胞增殖，增强机体免疫，促进人体rna/dna更新修复预防衰老，增强细胞功效、保护细胞、清除毒素抗氧化、抗炎症、抗辐射、抗感染等作用。绿藻提取物在水中的溶解度是100％，易吸收，应用到化妆品中可以增强皮肤细胞新陈代谢，促进皮肤水分循环，保养水分。

但是，目前的提取方法主要包括酶解法、高压热水提法、超声水提法，提取液含有色素等杂质，添加到护肤品中存在皮肤安全隐患，且不利于活性物质有效成分发挥功效。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种活性成分包含绿藻提取物的化妆品，即从绿藻中提取得到的有效成分，经过分离纯化获得的提取液生物相容性好，可增加皮肤水分、减少皱纹，改善使用者肤质。

本发明首先提供一种绿藻提取物，其制备方法如下：

将绿藻粉溶于热水中，进行高温萃取；萃取样品离心后取上清液；上清液进行滤膜过滤后，过滤液冷冻干燥获得提取物干粉；再将干粉溶解后，用无水乙醇进行沉淀；沉淀冷冻干燥后获得绿藻提取物；

本发明所提供的绿藻提取物用于制备保湿抗菌类制品中的应用；所述的制品，优选为化妆品。

本发明再一个方面提供一种保湿抗菌类制品，其制备原料中使用了绿藻提取物与壳寡糖；

所述的化妆品中绿藻提取物与壳寡糖的质量比为1～15:1；优选为1～5:1；

所述的化妆品，还添加有其它的组分；

所述的组分，包含有丙二醇、甘油、角鲨烷、硬脂酸、鲸醋醇、硬脂醇、聚山梨醇脂、山梨坦硬脂酸酯、棕榈酸异丙酯、三乙醇胺中的任一种或几种。

与现有的常规成分化妆品相比，本发明具有以下优势：

1、本发明提供具有保湿和抑菌作用的化妆品，其活性成分包含绿藻提取物，将绿藻提取物活性成分进行纯化，添加到化妆品中，能够激活细胞功能、增强皮肤细胞代谢，促进皮肤水分循环，增加皮肤弹性，改善肤质。

2、本发明提供具有保湿和抑菌作用的化妆品，其成分包含壳寡糖，壳寡糖具有良好的生物安全性、广谱抑菌性和保湿作用，减少化妆品中防腐剂的用量，使产品具有抑菌、抗炎作用。

3、本发明还提供了活性成分包含绿藻提取物的化妆品的制备方法，该方法工艺简单高效、适合化妆品产业制造。

附图说明

图1：实施例1纯化绿藻提取物与未纯化绿藻提取物对细胞增殖率的影响图；

图2：实施例2绿藻提取物与壳寡糖各配比混合物保湿率试验结果图；

图3：实施例2绿藻提取物与壳寡糖各配比混合物抑菌检验结果图；

图4：实施例3皮肤角质层含水量检测图；

图5：实施例4肤质检测相对值图；

图6：实施例4皮肤皱纹、纹理影像变化图。

具体实施方式

本发明采用植物来源的绿藻提取物作为活性物质，并将活性成分纯化，制备护肤品，同时添加动物来源的壳寡糖增加保湿、抑菌功效，为开发亲肤性好、来源广泛、功效明显、天然安全的护肤品提供新思路。

以下将结合具体实施例对本发明及其效果进行进一步说明，但发明的具体实施方式不局限于此。

实施例1：绿藻提取物的制备方法

将1g绿藻粉溶于95℃的热水中，水量为100ml。将混合液置于高压锅，120℃加热40min，进行萃取。取出样品在室温下冷却后进行离心(10000rpm，30min)，离心后弃去沉淀取上清液。将上清液用0.2μm的滤膜进行真空抽滤，抽滤液进行冷冻干燥后制得绿藻提取物干粉。

取绿藻提取物粉末，溶于蒸馏水，配制5％～10％浓度的溶液，再加入2～5倍体积的无水乙醇进行醇沉，1～8℃静置4～8h，静置后离心(9000rpm，30min)，收集沉淀，并将沉淀冷冻干燥，制得纯化的绿藻提取物干粉。

用本发明所制备的纯化的绿藻提取物与绿藻提取物进行细胞增殖培养实验，96孔细胞培养板每孔加入hsf人皮肤成纤维细胞100μl，其中细胞密度为1×10⁵个/ml，置于细胞培养箱中恒温恒湿培养24h。将纯化的绿藻提取物粉和绿藻提取物粉分别用pbs配制浓度梯度溶液，浓度为12.5μg/ml，20μg/ml，50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml，试验1组为纯化绿藻提取物溶液，每个浓度6个复孔，每孔10μl；试验2组为绿藻提取物溶液，每个浓度6个复孔，每孔10μl；空白对照，6个复孔，每孔加pbs10μl。加样后，将96孔板置于37℃，5％co2培养箱中培养16h；培养结束前4h取出培养板，每孔加50μlmtt溶液，放入细胞培养箱继续培养4h；吸出上清液，每孔加入150μldmso混匀，用酶标仪检测每孔吸光度值，检测波长为570nm。

细胞存活率％＝(提取液组平均od值/空白组平均od值)×100％

结果显示，两种绿藻提取物均能促进细胞增殖，纯化后的绿藻提取物对细胞存活率的影响显著高于未经纯化的绿藻提取物(图1)。

实施例2：绿藻提取物与壳寡糖的复配

将壳寡糖与绿藻提取物进行互配。

用本发明制备的绿藻提取物与壳寡糖按0～1：1，1～5：1，5～10：1,10～15：1的质量比例进行互配，配制成a、b、c、d三种混合物，检测混合物的保湿率和抑菌性。称取各配比混合物1g，分别溶于10ml去离子水中。将各组样品放置在装有干微粉硅胶的低湿度的干燥器中，放置时间为12、24、48小时分别取出称量一次。由实验前后样品的质量差，计算出试样的保湿率。保湿率＝(m1－m2)/m1×100％，m1为试样实验前质量；m2为试样实验后质量。

结果显示，随着时间延长，各混合物保湿率均逐渐降低，12小时，绿藻提取物在混合物中比例越高，保湿率降幅越小，24小时后，b混合物的保湿率降幅小于a混合物，c、d混合物保湿率无显著差异(图2)。

参照cb/t7918.1-1987《化妆品微生物标准检验方法总则》要求，对a、b、c、d混合物进行抑菌检测。三种共试菌种分别为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌。将三种混合物溶于去离子水中，配成1％浓度的溶液进行试验，培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，通过平板稀释涂布法，对菌落进行计数。液体培养基和菌种为对照组；设试验a、b、c、d四个试验组，每个处理重复三次。

结果显示，不同样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均有抑菌效果，混合物对大肠杆菌的抑制效果明显，d组配比浓度即可对大肠杆菌产生抑菌效果，随混合物中寡糖比例的减小其抑菌性降低，b组混合物对三种菌均有较好的抑菌效果(图3)。

实施例3：绿藻提取物和壳寡糖复配混合物涂抹皮肤试验

具体步骤如下：

1、将1g绿藻粉溶于95℃的热水中，水量为100ml，将混合液置于高压锅，120℃加热40min，进行萃取。取出样品在室温下冷却后进行离心(10000rpm，30min)，离心后弃去沉淀取上清液，将上清液用0.2μm的滤膜进行真空抽滤，向抽滤液中加入2～5倍体积的无水乙醇进行醇沉，1～8℃静置4～8h，静置后离心(9000rpm，30min)，收集沉淀，并将沉淀冷冻干燥，制得纯化的绿藻提取物干粉。

2、将纯化后绿藻提取物与壳寡糖(分子量为1000da～1500da)按质量比例(1～5)：1进行混合，溶于去离子水中，制成浓度为0.01％～10％的溶液。

3、选择年龄在18～45岁，符合试验要求的志愿者15名作为受试者，在稳定的室温环境下，选取小臂两个对称的区域，分别作为对照组和试验组的测试区域，涂抹该混合物溶液。使用皮肤检测仪courage+khazakaelectronic-mpa10(corneometercm825)进行检测两个区域的水分含量，间隔时间分别为0.5h、1h、2h、3h、6h、12h，记录每次测定值数据。皮肤水分含量(％)＝[(测定值)÷(初始值)]×100％

4、结果显示，涂抹该混合物后，皮肤角质层水分含量增加，在2h左右达到最高值，随后皮肤含水量缓慢降低，至12h仍具有保湿效果(图4)。

实施例4：使用绿藻提取物和壳寡糖混合物的复合化妆品

1、将1g绿藻粉溶于95℃的热水中，水量为100ml，将混合液置于高压锅，120℃加热40min，进行萃取。取出样品在室温下冷却后进行离心(10000rpm，30min)，离心后弃去沉淀取上清液，将上清液用0.2μm的滤膜进行真空抽滤，向抽滤液中加入2～5倍体积的无水乙醇进行醇沉，1～8℃静置4～8h，静置后离心(9000rpm，30min)，收集沉淀，并将沉淀冷冻干燥，制得纯化的绿藻提取物干粉。

2、配制以下a、b、c组分

a、将纯化绿藻提取物与壳寡糖(分子量为1000da～1500da)按质量比例(1～5)：1进行混合，按质量百分比整体组分0.1％～10％溶于水制成活性成分。

b、按质量百分比丙二醇2％～8％、甘油5％～10％溶于去离子水中，作为水溶性组分。

c、按比例将角鲨烷2％～5％、硬脂酸2％～5％、鲸醋醇0.5％～1％、硬脂醇0.1％～1％、聚山梨醇脂0.1％～1％、山梨坦硬脂酸酯0.1％～1％、棕榈酸异丙酯5％～10％、三乙醇胺1％～2％，混合搅匀，适当加热，作为油性组分。

3、将c组分加热至80℃，使其完全溶解并保持在70℃，将b相加热至80°，将b加入c组分中，并不断搅拌，乳化器内充分乳化20min，降温至50℃时，加入a组分，匀质2min降至室温。

复合化妆品的检测

肤质检测，包括角质层含水量检测、经皮水分散失检测、皮肤弹性测试和影像对比。本测试的仪器为德国ck公司courage+khazakaelectronic-mpa10(corneometercm825)检测皮肤角质层水分，courage+khazakaelectronic-mpa10(tewametertm300)进行经皮水分散失检测，courage+khazakaelectronic-mpa10(reviscometerrvm600)进行皮肤弹性检测。canfieldvistacomplexionanalysissystem影像检测皱纹、纹理变化。

检测方法：选择年龄在18～45岁，符合试验要求的志愿者20名作为受试者，试用实施例产品8周，每日早晚一次，期间不得涂抹除受试品之外的任何化妆品。分别在使用实施例产品的0周、2周、4周、6周、8周检测皮肤各项指标。

检测区域：面部

检测指标：数据统计，以平均值标准误差(mean±se，n＝20)表示，用统计数据分析方法进行分析，取相对值进行比较，相对值(％)＝[(各测定值)÷(初始测定值)]×100％。

检测条件：室内稳定环境，温度20℃±2℃，环境湿度40～60％。

检测结果：结果显示，皮肤角质层含水量、皮肤弹性和经皮水分散失量第2周开始有明显的改变，角质层含水量增加了15.2％，到第8周实验结束，角质层含水量增加了19.5％；皮肤弹性由第二周的2.1％到第8周增加了6.6％，皮肤弹性显著增加；经皮水分散失量逐渐降低，这与肤质得到了改善密切相关，第8周经皮水分散失量相对值降低了7.3％(图5)。皮肤成像结果显示，影像对比发现皮肤的纹理变淡，皱纹减少，肤质得到了持续的改善(图6)。