本发明属于一种中草药生物饲料添加剂及生物饲料
技术领域：
，尤其涉及一种用于家禽饲料的中草药饲料生物添加剂、生物饲料及制备方法
背景技术：
：1950年，美国食品与药物管理局(fda)首次批准在饲料中添加广谱抗菌药物(抗生素)，能促进畜禽生长，以后，世界各国相继进行了添加广谱抗菌药物(抗生素)饲喂试验，并用于生产。在众多的广谱抗生素药物中四环素类抗生素(tcs)应用最广泛，四环素类抗生素(tcs)包括四环素，土霉素，金霉素，强力霉素，作为动物保健性抗生素，在较高浓度时其具有良好的杀菌作用，深受养殖户青睐，被广泛应用于可食性动物疾病的治疗和药物添加剂中。我国允许用作饲料添加剂的添加广谱抗菌药物(抗生素)品种有3类30种，对适用动物，最低用量，最高用量，停药期作了严格规定，一般情况下消费者不必对鸡肉，鸡蛋中检出合理范围内的广谱抗菌药物成份过分担心。但是，许多养鸡场及个人，因鸡病较多，为了不影响经济效益，经常大剂量的长期使用广谱抗菌药物，畜禽在长途运输之前往往注射或喂食抗生素药物，以减少运输途中病亡造成的损失，长期超标使用广谱抗菌药物，直接导致环境恶化同时严重影响人的身体健康，如四环素对新生儿骨，牙的生长有极大的影响，并能通过母体过渡给婴儿，久用四环素类可引起畜禽等动物机体的正常菌群减少，导致维生素缺乏症，引起真菌繁殖，或引起二重感染，据医学观察数据显示：抗生素类药物还能导致的骨骼畸形，造成肝脏，肾脏损害，过敏反应，变态反应，耐药性等。因此，禽畜药残问题已经成为食品安全刻不容缓的社会话题。发展优质安全高效饲料产品。推广安全环保型饲料产品。综合运用营养平衡技术和新型饲料添加剂产品，研究开发低氮、低磷、低微量元素排放饲料配方技术，推广环保型饲料产品，促进养殖污染物减排。综合利用微生物制剂、植物提取物等新型安全饲料添加剂产品，减少禽畜抗生素等药物饲料添加剂使用。因此，研发可代替广谱抗生素药物的无药物残留、无耐药性、无副作用且能促生长作用的中草药饲料添加剂受到了国家的重视和饲料界的关注。为了解决饲料添加剂中添加各种广谱抗菌药物(抗生素)对家禽生长造成的各种伤害，本发明提供了一种低毒、绿色、无公害中草药饲料生物添加剂、生物饲料及制备方法。技术实现要素：为实现上述目的，本发明提供了一种中草药饲料生物添加剂，用于禽畜饲料添加剂，包含有藤茶素(俗称：二氢杨梅素)及若干种中草药，该添加剂低毒、绿色、无公害，不含有任何抗生素。本发明还提供了一种包含有中草药饲料生物添加剂、生物饲料的配方及制备方法，将中草药饲料生物添加剂按照配方比例添加到生物饲料中，以达到防病于治，增强畜禽免疫力的同时，代替或部分代替广谱药物(抗生素)的使用，有效解决禽畜药物残留问题。优选地，在所述中草药饲料生物添加剂中，所述中草药包含有艾叶粉，蒲公英，麻黄，黄芩，柴胡，陈皮，鱼腥草，柴胡，夏枯草，青蒿粉，雄黄粉，连翘，甘草，防风，野菊花，陈皮，白花蛇，贝母，白花蛇，牛蒡子，百部中任选一种或多种。优选地，所述中草药饲料生物添加剂中，各组分的重量份为：优选地，在所述中草药饲料生物添加剂中，以下重量份的成分制成：藤茶素50份，艾叶粉20份，蒲公英18份，麻黄12份，黄芩15份，柴胡12份，陈皮8份，鱼腥草15份，柴胡12份，夏枯草12份，青蒿粉15份，雄黄粉8份，连翘16份，甘草10份，防风12份，野菊花12份，白花蛇13份，贝母12份，牛蒡子10份，百部12份。优选地，一种所述生物饲料，包含有：中草药饲料生物添加剂、皇竹草、发酵饲料、玉米粉、麦麸、豆粉、贝壳、鱼骨粉、淫羊藿、麦芽粉、松针粉、大蒜渣等。所述发酵饲料为台湾甜象草绿色发酵饲料。优选地，所述无抗生物剂占饲料添加剂的重量比为：0.5-1.2kg：1000kg。所述饲料添加剂占饲料的重量比范围为：本发明还提供了制备所述藤茶无抗生物剂的方法，其包括以下步骤：步骤s1：将上述原料按配比碾成粉状剂；步骤s2：将s1中的粉状剂和纯净水，按1:20份相混合，加入医用容器中，武火沸腾转文火熬制，形成褐色液状物，冷却置冰箱。步骤s3：将s2中的褐色液状物按1:5份加纯净水稀释过滤，制得水剂；步骤s4：将s3中的水剂降温，装袋置冰箱备用，供雏鸡直接灌服；步骤s5：将s2中的褐色液状物采用高温烘干，制得粉状物，包装置干燥处，以供添加之生物饲料中使用；所述步骤s2中，武火温度为120-150℃。步骤s5中，褐色液状物采用高温烘干，温度为180-200℃。本发明的有益效果在于：本发明提供了一种低毒、绿色、无公害中草药饲料生物添加剂、生物饲料及制备方法，本发明通过利用植物提取技术获得的中草药成分，按配方比例添加进禽畜口粮中使用，以达到防病于治，增强畜禽免疫力的同时，代替或部分代替广谱药物(抗生素)的使用，有效解决禽畜药物残留问题。具体实施方式本发明公开了一种低毒、绿色、无公害中草药饲料生物添加剂，用于禽畜饲料添加剂中，其包含有藤茶素(俗称：二氢杨梅素)及若干种中草药混合配置而成。其中，所述中草药包括艾叶粉，蒲公英，麻黄，黄芩，柴胡，陈皮，鱼腥草，柴胡，夏枯草，青蒿粉，雄黄粉，连翘，甘草，防风，野菊花，陈皮，白花蛇，贝母，白花蛇，牛蒡子，百部中任选一种或多种。所述中草药饲料生物添加剂中，各组分的重量份为：在本发明的无抗生物剂的配方的优选实施例中，藤茶素50份，艾叶粉20份，蒲公英18份，麻黄12份，黄芩15份，柴胡12份，陈皮8份，鱼腥草15份，柴胡12份，夏枯草12份，青蒿粉15份，雄黄粉8份，连翘16份，甘草10份，防风12份，野菊花12份，白花蛇13份，贝母12份，牛蒡子10份，百部12份。一、实验1：《基于中草药饲料添加剂配方效果对比试验》。将藤茶素35份，艾叶粉15份，鱼腥草20份，柴胡15份，夏枯草12份，青蒿粉15份，雄黄粉12份，连翘15份，甘草12份，防风10份，野菊花15份，陈皮15份，白花蛇12份，人参须15份。以上14味中草药混合碾成粉剂按照以下流程制成药剂。1)将14味药充分碾成粉末放入铁锅中，先武火烧沸腾，后文火煎熬，标准1000g的海碗5碗水熬成1碗，颜色橙褐色，放凉装袋置冰箱备用。水剂：1-30天鸡龄10天/剂；31-60天鸡龄5天/剂；粉剂：61-120天(含120天以上)鸡龄粉状拌入饲料，比例1000kg：0.5kg。2)1-10天鸡龄。由人工灌服药剂，连服10天，每只鸡3-5滴，从第11-30天起将药剂按比例拌入禽畜饮用水中，饮用水采用多次添加确保当天饮完的方式。3)31-60天鸡龄。饮用水继续采用多次添加中药确保当天饮完的方式，使用配方成品饲料直到鸡子羽翼初长。自制绿色发酵饲料配方：4)61-120天鸡龄。饮用水源中不需要添加药剂，直接将药剂粉剂拌入饲料中直接喂食。2018年03月11日至2018年7月11日。随机选择2000只1周鸡龄的清远麻鸡，分成对照组1000只和试验组1000只，分别在1-45天鸡龄(雏鸡)，46-90天鸡龄(青年鸡)；91-135天鸡龄(成品鸡)3次连续介入，每次介入为期45天的实验。实验组采用中草药饲料添加剂技术养殖，对照组采用广谱抗菌药技术养殖。公司研发团队黎越总监带领企业科研人员刘华光、李凤枚、吴巧会同广东科贸职业学院12名师生全程承担了检测工作，在同样的饲养管理条件下，各个日龄阶段的国家基础预防疫苗、营养性用药不变，45天为一个阶段，每个阶段在实验组与对照组随机取样2只进行解剖，根据《gb/t20764-2006》，采用hplc检测法，检测工作在广东科贸职业学院白云区石井校区省级动科实验室完成，分别对土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的残留程度进行分析。1、实验准备1.1仪器设备高效液相色谱带紫外检测器(型号为lc2010)；色谱柱(capcellpakc18mgⅲ)；氮吹仪(103199)；旋涡振荡器(ks501)；高速冷冻离心机(cr21g)；分析电子天平(型号为fa2004n)；捣碎机(型号为jj－2b)；固相萃取装置；milli-q型超纯水仪；50ml贮液器；10ml刻度样品管；真空泵；100ml平底烧瓶；ph计。1.2材料与试剂甲醇；乙腈；乙酸乙酯；磷酸氢二钠；柠檬酸(c6h8o7·h2o)；乙二胺四乙酸二钠(na2edta·2h2o)；草酸；磷酸氢二钠溶液；柠檬酸溶液；mcllvaine缓冲溶液；na2edta-mcllvaine缓冲溶液；甲醇+水(1+19)；流动相：乙腈+甲醇+0.01mol/l草酸溶液(2+1+7)。土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质：纯度≥95％，标准储备溶液：分别用甲醇配成0.1mg/ml的标准储备液。储备液于-18℃贮存。土霉素、四环素、金霉素、强力霉素混合标准工作溶液：根据需要用流动相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素稀释成5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml不同浓度的混合标准工作溶液将混合标准工作溶液分别进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的参考保留时间见表。土霉素、四环素、金霉素、强力霉素参考保留时间药物名称保留时间/min土霉素4.87四环素5.52金霉素1.22强力霉素15.25oasishlb固相萃取柱或相当者：500mg，3ml。使用前分别用5ml甲醇和10ml水预处理，保持柱体湿润。阳离子交换柱：羧酸型，500mg，3ml。使用前用5ml乙酸乙酯预处理，保持柱体湿润。2、试验过程及结果2.1标准溶液的配置精密称取四种四环素类抗生素对照品4份，每份约0.01g，配置成10ml量瓶中，加盐酸溶解并稀释至刻度，摇匀的标准储备液，冷冻保存。2.2高效液相色谱及质谱条件色谱分离条件：1)色谱柱：mightsilrp-18gp，3um，150mm×4.6mm或相当者；2)流动相：乙腈+甲醇+0.01mol/l草酸溶液(2+1+7)；3)流速：0.2ml/min；4)柱温：20℃；5)检测波长：350nm；6)进样量：20ul。7)梯度洗脱程序：0.0～1.0min，保持10％b，1.0～4.0min，10％b线性增至75％，4.1min降至10％b并保持至8.0min；质谱条件：电离模式：esi+；毛细管电压：4000v；检测方式：多反应监测(mrm)；雾化温度：200℃；温源：80℃；电喷雾压力：30psi，干燥气流量：9l/min，倍增电压：300emv(+)。磷酸盐溶液(ph＝8.0)2.3样品提取每份样品取10g，经组织捣碎机捣碎(＜5mm)，充分搅碎，混匀，分别装入洁净容器中密封为试样。-20℃冷冻保存2h。称取样品6g±0.01g于50ml具塞离心管中，加入5％高氯酸25ml缓冲溶液。均质1min后冰水浴超声40min。提取液以8000r/min离心10min，上清液倒入另一离心管中。残渣加入20ml缓冲溶液重复提取一次，合并上清液。2.4净化提取上清液加入oasishlb固相萃取柱，上清液以3ml/min的流速通过固相萃取柱，待上清液完全流出后，5ml甲醇+水(1+19)洗柱，在65kpa的负压下，减压抽干3min。用乙腈+甲醇+0.01mol/l草酸溶液(2+1+7)洗脱，收集洗脱液于5ml样品管中。氮气吹至近1ml(温度低于30℃)，定容至4ml。用13mm，0.22μmptfe针头式过滤器过滤，供液相色谱-紫外检测器测定。2.5检测数据分析分别称取1-45天、46-90天、91-135天实验鸡样品(鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡脾)与对照鸡样品(鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡脾)各1份，每份10g，共24份样品，来测定四种抗菌素在鸡肉中的残留并进行定性和定量分析。本实验主要针对鸡肉土霉素、四环素残留测定。欧共体规定的肌肉、肝、脾、肾组织内最高允许残留量为0.5mg/kg的标准。表一，1-45天土霉素、四环素检测含量mg/kg表二，46-90天土霉素、四环素检测含量mg/kg表三，91-135天土霉素、四环素检测含量mg/kg采用hplc检测法，分别对3个阶段鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡脾共24份样品土霉素、四环素的残留程度进行分析。实验组采用中草药饲料添加剂技术养殖，对照组采用广谱抗菌药技术养殖。3、实验分析3.1成活率分析：实验组采用中草药饲料添加剂技术养殖死亡数量113只，成活率88.7％，采用广谱抗菌药技术养殖死亡数量84只，成活率91.6％，两者相差2.9％，差距非常显著，这充分论证农户为何青睐广谱抗菌药技术养殖的原因。中草药饲料添加剂技术养殖成活率88.7％，也说明采用中草药饲料添加剂技术养殖是有效的，假以时日修正配方效果会有上升的空间。3.2抗生素残留分析：采用中草药饲料添加剂养殖技术，土霉素残留最高1.19mg/kg，最低0.58mg/kg；四环素残量最高1.74mg/kg，最低0.83mg/kg；采用广谱抗菌药技术养殖，土霉素残留最高6.32mg/kg，最低1.74mg/kg；四环素残留最高4.32mg/kg，最低2.23mg/kg；很明显，中草药饲料添加剂养殖技术土霉素残留量低于广谱抗菌药技术养殖5.13mg/kg；四环素残量低于广谱抗菌药技术养殖3.49mg/kg；采用中草药保健药代替抗生素能大幅度降低残留的问题。3.3用药成本分析雏鸡1-45天内，在预防鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、法氏囊病、肠道病及呼吸道病的用药上。试验组在45个日龄阶段使用中成药药物成本共开支1297元。对照组在45个日龄阶段使用广谱抗菌药成本共开支1846元。所以，预防用药成本试验组与对照组相比，少开支549元，成本下降29.73％。上述试验说明，在规模化养鸡生产中，用中草药生物保健药剂代替广谱抗菌药(抗生素)是可以推行的。一是解决了鸡体内的药物残留问题，在生产这个环节上就把住了食品安全关。二是实现了2个降低的实验目标，即降低了用药成本、降低了残留率。三是采用中草药饲料添加剂成活率低于90％，要广泛推广是远远不够的，需要进一步实验与配方修正。本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。二、实验2：《中草药饲料添加剂替代广谱抗菌药配方修正试验》。修正后的配方成分如下：藤茶素50份，蒲公英15份，鱼腥草15份，柴胡6份，夏枯草6份，青蒿粉15份，桑白皮15份，雄黄粉12份，连翘20份，杏仁12份，防风10份，野菊花30份，陈皮15份，白花蛇6份，人参须6份。以上14味中草药混合碾成粉剂按照以下流程制成药剂。以上14味药为1方剂，混合碾成粉剂按照第一次实验的方法制成粉状药剂。进行配方修正试验。1、材料与方法1.1试验地点与团队粤凤凰四会江谷镇养殖场(广东科贸职业学院研发团队5人)1.2试验分组将出壳3周的雏鸡(乌鸡)400羽，随机分为试验组、对照组，每组200羽，进行育雏试验。在试验组的基础粮中按1000kg添加0.5公斤中草药饲料添加剂，连续给药5天，后每隔3天给药1次，1个月共4次。对照组按照常规注射或添加广谱药物。1.3实验饲料自制绿色发酵饲料1.4试验时间2018年08月07日至2018年09月23日1.5饲养管理试验期内，2组的基础日粮和饲养环境条件、管理相同，由同一个饲养员饲养，自由饮水。基础日粮营养成分：育雏期粗蛋白21％、蛋氨酸0.48％、赖氨酸1.20％、总磷0.75％、钙1.05％、粗纤维2.00％；免疫程序按《商品代蛋鸡饲养管理手册》推荐的免疫程序进行。2、实验结果试验组发病26只，发病率13％，，死亡19只，死亡率9.5％。保护率90.5％。对照组发病17只，发病率8.5％，，死亡14只，死亡率5.5％。保护率94.5％。试验组的基础粮中按1000kg添加0.5公斤中草药饲料添加剂，连续给药5天，后每隔3天给药1次，1个月共4次。对照组注射或添加常规用广谱药物4次。实验结果组别饲养数增重发病数死亡数成活率实验组200184.5g±6.5a261990.50对照组200169.3g±8.3b171494.50总计400--433391.75同一列标注相同字母表示差异不显著(p＞0.05)；不同小写字母表示差异显著(p＜0.05)，不同大写字母标志差异极显著(p＜0.01)调查所得数据生物统计分析，从表1可以看出，在试验期内，试验组、对照组每羽增重，差异极显著(＜0.01)；死亡数差异极显著(＜0.01)，试验组死亡19羽，死亡率9.5％(19/200)，对照组死亡14羽，死亡率5.5％(14/200)，试验组比对照组的死亡率相差3％，比修正之前的88.7％高出1.8％。3、实验分析1)实验结果表明，试验组的基础粮中按1000kg添加0.5公斤中草药饲料添加剂，连续给药3天，后每隔5天给药1次，1个月共4次，试验组、对照组每羽增重，差异极显著(＜0.01)；死亡数差异极显著(＜0.01)，试验组成活率已经达到90.5％，比修正前的88.7％提升了1.8％，说明修正后的方剂效果较为明显。2)加大了藤茶素成分，由原来的35g提升到50g，说明藤茶素产生的效果是比较明显的，藤茶素有抗菌、抗病毒、抗炎、调节免疫等作用；连翘能清热解毒，轻宣透表、具有抗菌、抗病毒、抗炎、调节免疫、镇痛解热作用；黄连祛风解表、消肿散结，人参须补气安神、止咳平喘，并有多方面的生物活性物质；人参须大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神，提高机体免疫力；共为臣药。共同主要作用是杀灭或抑制病原微生物，促进机体健康。3)修正后的中草药制剂具有无抗药性、无残留、无副作用等特性，同时能增强机体的免疫力，促进免疫器官发育，调节机体非特异性免疫功能，具有抗菌和抗病毒的作用，所以进一步研究其发挥作用的机理，对生态无抗养殖有重要的研究价值。三、实验3：《中草药饲料添加剂替代广谱抗菌药配方优化试验》。最终确定的配方成分如下：藤茶素50份，艾叶粉20份，蒲公英18份，麻黄12份，黄芩15份，柴胡12份，陈皮8份，鱼腥草15份，柴胡12份，夏枯草12份，青蒿粉15份，雄黄粉8份，连翘16份，甘草10份，防风12份，野菊花12份，白花蛇13份，贝母12份，牛蒡子10份，百部12份。1.试验地点与团队广东粤凤凰生态农业有限公司九龙岗藤茶养殖基地，由广东科贸职业学院研发团队5人负责完成。2.试验时间试验期共三个月(90天)，于2019年03月18日至2019年6月18日3.实验饲料自制绿色发酵饲料4.试验分组九龙岗藤茶养殖基地存栏蛋鸡3.5万只，共5个鸡舍，每舍0.7万只，按自然鸡舍分为5个组，其中一个为对比组，使用广谱药抗生素添加剂；四个试验组，每组配备实习生2名跟踪与数据采集，分别在饲料中按0.5％，0.6％，0.7％，0.8％中草药生物添加剂进行添加，数据比较如下：5.试验结果试验结果表明，使用中草药生物添加剂试验组，其产蛋率和对比组之间的差距不是很明显，试验组平均产蛋率为87.15％，对比组平均为87.05％，试验组比对比组高出0.1个百分点，统计检验p>0.05，差异不显著；但是病死鸡数、病死率试验组低于对照组，尤于试验三组最明显，试验组病死鸡61只，病死率0.087％，对照组61只，病死率0.087％，中草药生物添加剂与采用广谱药基本持平。6.实验分析本次试验结论：使用中草药生物添加剂作为蛋鸡饲料添加剂，对比组和试验组其产蛋率间没有大的差异；而试验组的鸡只病死鸡数和病死率首次追平对照组，尤以试验三组表现较好。所以使用中草药生物添加剂作为饲料添加剂具有增强鸡只免疫力和抗病率的作用。中草药生物添加剂具有无抗药性、无残留、无副作用等特性，同时能增强机体的免疫力，促进免疫器官发育，调节机体非特异性免疫功能，具有抗菌和抗病毒的作用，所以进一步研究其发挥作用的机理，对建立“安全、环保、健康”的可持续发展新型模式有重要的现实意义，应大力推广。当前第1页12