本发明属于兽用药物
技术领域：
，具体涉及一种包含右旋糖酐铁和帕托珠利的口服混悬液及其制备方法，适用于同时防治动物球虫病和铁缺乏状态。
背景技术：
：球虫病和缺铁性贫血作为现代畜牧养殖业过程中频繁出现的动物性疾病，在幼龄动物中多发，其发病率高、病情加重迅速，严重影响动物的生长发育，甚至造成死亡。仔猪出生时的铁储存量(40～50mg)以及在哺乳期从母乳中获得的铁(约1mg/d)非常有限，这导致了仔猪在出生后第一周内容易处于缺铁状态。临床上主要多采用肌肉注射补铁或者母猪间接补饲铁剂，由于母猪补饲的补铁量有限，临床多采用肌肉注射的方式对仔猪进行补铁。由于球虫病也多发于幼龄阶段，临床通常在完成补铁后2～3天内再次捕捉仔猪，口服给予市售抗球虫药物。这种单病单治的模式给养殖户带来了巨大工作量，并且增加了药物成本，同时给动物带来巨大压力，影响动物正常生长发育，最终会影响到养殖经济收益。技术实现要素：针对现有技术的不足，本发明提供了一种包含右旋糖酐铁和帕托珠利的口服混悬液及其制备方法，该制剂的稳定性高，治疗效果好。具体地，本发明涉及一种含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物，其中帕托珠利和右旋糖酐铁(以活性铁计)的重量比例为1:2～1:5，例如1:3，1:2.5，1:3，1:3.5，1:4，1:4.5。在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物中还含有艾维素和金属离子络合剂。在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物中所述组合物还含有防腐剂。在某些实施方案中，所述防腐剂选自山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸丁酯、丙酸、醋酸氯己定或其任意组合。在某些实施方案中，所述防腐剂为苯甲酸钠。在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物中还含有水，并且所述组合物为口服混悬剂。本发明中，所述艾维素(avicel)是微晶纤维素和羧甲基纤维素钠进行特殊混合后制成的产品，不溶于有机溶剂和弱酸溶液中，但部分溶于弱碱和水中。在某些实施方案中，本发明所述艾维素为avicelrc-591或avicelcl-611。在某些实施方案中，本发明所述金属离子络合剂为乙二胺四乙酸或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，本发明所述乙二胺四乙酸的药学上可接受的盐选自乙二胺四乙酸二钠(依地酸二钠)、乙二胺四乙酸钙钠、乙二胺四乙酸铁钠或其任意组合。在某些实施方案中，本发明所述金属离子络合剂为乙二胺四乙酸二钠。在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物中，所述艾维素的含量为0.5～3.0w/v％。在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物中，所述艾维素的含量为1.0～1.5w/v％。在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物中，所述金属离子络合剂与右旋糖酐铁(以活性铁计)的重量比例为1:100～1:400，例如1:150～1:300。在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物还含有ph调节剂，例如所述ph调节剂选自乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸钠、柠檬酸钾、柠檬酸或其任意组合，优选为柠檬酸。在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物的ph为3～8，优选为4～5。在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物，其中包含：在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物，其中包含：在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物，其中包含：在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物，其中包含：在某些实施方案中，本发明所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物，其中包含：本发明还涉及所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物在制备用于预防和/或治疗动物(例如猪)球虫病和/或缺铁性贫血和/或铁缺乏状态的药物中的用途。本发明还涉及制备所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物的方法，包括以下操作：分1～5次向适量水中投入右旋糖酐铁，在60～80℃条件下，以3000～6000转/分的转速搅拌，得到初始溶液；将初始溶液冷却至室温，加入防腐剂、金属离子络合剂、艾维素，并使之溶解，得到混悬液i；向混悬液i中加入帕托珠利，以3000～6000转/分的转速搅拌，得到混悬液ii；用ph调节剂调节混悬液ii的ph值至3～8，得到混悬液iii；可选地，在3000～6000转/分的转速下搅拌混悬液iii，使之过筛，储存。在某些实施例方案中，本发明所述制备所述含有右旋糖酐铁和帕托珠利的组合物的方法，其特征在于以下i)至vii)中的一项或多项：i)分1～5次向适量水中投入右旋糖酐铁，在60～80℃条件下，以4000～5000转/分的转速搅拌，得到初始溶液；ii)分2～4次向适量水中投入右旋糖酐铁；iii)分1～5次向适量水中投入右旋糖酐铁，在65～75℃条件下，以3000～6000转/分的转速搅拌，得到初始溶液；iv)用ph调节剂调节混悬液ii的ph值至4～5，得到混悬液iii；v)向混悬液i中加入帕托珠利，以4000～5000转/分的转速搅拌，得到混悬液ii；vi)在3000～6000转/分的转速下搅拌混悬液iii，使之过0.1mm筛网，储存；vii)在4000～5000转/分的转速下搅拌混悬液iii。本发明中单位“w/v％”表示质量体积百分比，指100ml混悬液中所含有的溶质的克数(g)，例如“帕托珠利的含量为8.02w/v％”是指100ml混悬液中含有8.02g帕托珠利。在某些实施方案中，本发明所述的水为纯化水，优选为符合中国兽药典纯化水项下规定的水。本发明中术语“约”应理解为在指定数值的±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.5％、±0.1％、±0.05％或±0.01％以内。本发明中术语“适量”是指适宜的数量，可以为零也可以是除零意外的任何数值，例如混悬液中ph调节剂的含量为适量是指所含ph调节剂的量能够使混悬液的ph值达到目标要求(例如3～8，优选为4～5)，若混悬液的ph值在不加入ph调节剂时已达到目标要求(例如3～8，优选为4～5)，则ph调节剂的含量为零。本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明的优点包括以下一个或多个：1)本发明提供的组合物为帕托珠利与右旋糖酐铁的复方制剂，可同时适用于防治球虫和仔猪缺铁，只需一次给药就可同时防治两种疾病，既减少了给药工作量又降低了药用成本，并且还减少动物的应激反应，改善动物福利。2)本发明提供的组合物采用口服途径进行补铁，与注射补铁相比，动物无应激，不会出现水肿、炎症等影响胴体质量，并在一定程度上防止血液传播疾病因共用注射针头而在动物间相互传播。3)本发明提供的组合物中，帕托珠利与右旋糖酐铁的用量比例在1:2～1:5之间时，该组合物具有较好的黏度与沉降比，且仔猪给药后能同时保证较好的抗球虫与补铁效果。4)本发明提供的组合物中，选用艾维素(avicel)作为助悬剂，以提高制剂的稳定性。本发明研究发现，添加1.0、1.5、3.0％艾维素所产生的稳定性作用相当，在本发明所述的组合物中添加1.0w/v％～1.5w/v％的艾维素，能够减少辅料用量，节约成本。5)本发明提供的组合物中添加乙二胺四乙酸和/或其药学上可接受的盐作为铁离子络合剂，避免动物在服用时因游离铁而造成的安全问题。具体实施方式下面结合本发明的具体实施例来进一步说明本发明的实质性内容，应理解，以下实施例仅用于说明本发明，但并不以此来限定本发明的保护范围。下面实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的进行。所用原料未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。虽然以下实施例中所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，如果未特别说明，下面实施例中所用的材料和操作方法是本领域公知的。下列实施例中：所用艾维素为avicelrc-591或cl-611中的一种，购自fmcbiopolymer公司。所用帕托珠利来自湖北龙翔药业科技股份有限公司，cas：69004-04-2。所用右旋糖酐铁来自湖北龙翔药业科技股份有限公司，cas：9004-66-4。所用纯化水符合中国兽药典制药用水项下规定的纯化水。实施例1包含帕托珠利和右旋糖酐铁的口服混悬液1的制备1、处方组成：2、制备方法：s1、取适量纯化水至配液罐内，分2～4次投入处方量的右旋糖酐铁，全部投入后在65～75℃条件下，用高剪切乳化机以4000～5000转/分的速度搅拌30min，得到初始溶液；s2、将初始溶液冷却至室温后，加入处方量防腐剂苯甲酸钠、依地酸二钠、艾维素，并充分搅拌、溶解，得到混悬液i；s3、向上述混悬液i中加入处方量帕托珠利，分散后用高剪切乳化机在4000～5000转/分的转速下搅拌30min，得到分散均匀的混悬液ii；s4、向上述混悬液ii中投入处方量柠檬酸并搅拌溶解，调节混悬液ph值为4～5，再搅拌20min，得到混悬液iii；s5、将混悬液iii在室温下以高剪切乳化机在4000～5000转/分的转速下搅拌30min，过0.1mm筛网转至储罐中。实施例2包含帕托珠利和右旋糖酐铁的口服混悬液2的制备1、处方组成：2、制备方法同实施例1。实施例3包含帕托珠利和右旋糖酐铁的口服混悬液3的制备1、处方组成：制备方法同实施例1。实施例4包含帕托珠利和右旋糖酐铁的口服混悬液4的制备处方组成：制备方法同实施例1。实施例5包含帕托珠利和右旋糖酐铁的口服混悬液5的制备处方组成：2、制备方法同实施例1。实施例6包含帕托珠利和右旋糖酐铁的口服混悬液6的制备处方组成：2、制备方法同实施例1。实施例7依次设计帕托珠利与右旋糖酐铁(以活性铁计)两者比例为10g:300g、20g:200g、40g:200g、100g:200g、100g:100g、150g:100g的处方，苯甲酸钠、艾维素、柠檬酸、依地酸二钠、纯化水的处方用量与实施例1相同，参考实施例1的制备方法，制备得到对照产品，分别记为1-1、1-2、1-3、1-4、1-5、1-6。实验例1粘度和沉降体积比检测选择实施例1～6中所制备的混悬液进行以下测试：1)粘度检测：使用转子型旋转粘度计(snb-2数字粘度计，上海平轩科学仪器有限公司)室温下测量混悬液粘度，旋转1号转子，转速设为30rpm，平行测量3次计算平均值作为参考；2)沉降体积比检测：参照药典方法，用具塞量筒量取混悬液50ml，密塞，用力振摇1分钟，记下混悬物的开始高度h0，静置3小时，记下混悬物的最终高度h，计算沉降体积比。计算公式为：沉降体积比＝h/h0。3)粒度检测：使用激光粒度分析仪(bettersize2000ld，丹东百特仪器有限公司)检测混悬液的粒度，在搅拌下用适量分散介质(0.1％聚山梨酯80水溶液)对样品溶液进行预分散，调节转速为500-800rpm，开启超声，背景测量通过后，平衡3min后检测d(10)、d(50)和d(90)。根据上述方法测得的制剂参数如表1所示。表1粘度/沉降体积比/粒度检测结果项目实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5实施例6粘度/mpas14286135189125144沉降体积比/％0.990.770.930.990.970.99粒度d(10)/μm1.71.61.81.71.81.8粒度d(50)/μm3.53.23.33.43.13.0粒度d(90)/μm7.16.97.07.27.37.2从上述实验结果看，未添加艾维素的实施例2的制剂粘度较小，在静置期间药物沉降明显，不符合兽药标准要求，制剂稳定性差；实施例1、3、4、5和6中制剂在静置期间内药物沉降比均大于0.9，说明分散性良好，提示使用艾维素明显改善了帕托珠利的沉降，提高了制剂稳定性。实验例2稳定性实验按照《兽药稳定性试验技术规范》的要求，对实施例1～6所制备的混悬液进行稳定性加速试验。试验条件：将上述实施例的制剂样品置于40±2℃/rh75±5％的恒温箱内，于第1、3、6个月分别取样，观察性状并用hplc法测定帕托珠利的含量，试验结果如下表2所示。帕托珠利含量的测定方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸盐缓冲液(v/v＝45:55)为流动相，检测波长为254nm，理论板数按帕托珠利峰计算应不低于3000。测定法：取样品适量，精密称定，加乙腈定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录谱图至主峰保留时间2倍，另取帕托珠利对照品同法测定。另取样品，同时测定其相对密度，将供试品质量换算成毫升数，按照外标法以峰面积计算，即得。表2稳定性实验结果从上述实验结果看，实施例2的产品在稳定性考察期间内，含量和颜色均符合要求，但沉降比均小于0.9，表明所制备实施例产品稳定性较差，进一步证明添加艾维素可改善产品的稳定性。实施例3产品在前三个月的沉降比均大于0.9，但在第6个月沉降比已小于9.0(8.9)，提示0.5w/v％的艾维素可能在一定期限内起到稳定作用，不能在长时间内维持混悬液的温定。实施例1、4、5、6的产品在加速稳定性试验期内，性状均未发生变化，沉降比均大于0.95，说明分散性良好，帕托珠利含量亦未见明显变化，各项指标均符合要求，其中实施例4的产品中艾维素的添加量为3w/v％，实施例6的产品中艾维素的添加量为1.5w/v％，二者相比较，艾维素的添加量为1.5w/v％时，沉降比已经很好，这表明添加1.0～1.5w/v％的艾维素能够起到很好的稳定作用，艾维素的增加没有带来更好的稳定性，反而会增加成本。综合上述结果，优选艾维素的加入量优选为1.0w/v％～1.5w/v％。实验例3游离铁检测参考2015版中国兽药典中“右旋糖酐铁”项下游离铁检查方法。分别取实施例1、2、4、6制备的混悬液0.4ml，实施例3制备的混悬液0.3ml，实施例5制备的混悬液1ml(均约相当于右旋糖酐铁0.1g左右)，置50ml纳氏比色管中，加水10ml振摇使溶解，加标准铁贮备液1.0ml、硫氰酸钾溶液(取硫氰酸钾15g，置100ml量瓶中，加水约50ml溶解后，加丙酮15ml，用水稀释至刻度，摇匀)15ml与丙酮24ml，摇匀，静置，观察上清液的颜色。如显色，与标准铁贮备液3.0ml同法制成的对照液比较，不得更深(0.2％)。根据上述方法观察到颜色变化如表3所示。表3颜色观察结果从上述实验结果看，没添加或仅添加少量的依地酸二钠的实施例5、6的产品中出现血红色，表明游离铁与硫氰酸钾反应，提示游离铁含量较高，添加量较多的实施例1、2、3、4产品游离铁含量明显降低。上述结果表明，在使用过程中添加了依地酸二钠的悬浮剂将具有更高的安全性和顺应性。实验例4帕托珠利与右旋糖酐铁不同比例用量对产品的影响对实施例7制备得到的对照产品的性状进行观察；使用健康仔猪单次口服灌胃1ml后检测体内血红蛋白浓度(hb，g/l)，并在治疗后3天经口灌服5ml约1×105个柔嫩艾美耳球虫卵囊(自然感染中收集的球虫卵囊)进行攻击，攻击后第6天监测仔猪粪便中球虫卵情况及体内血红蛋白浓度(hb，g/l)，检测结果见表4。表4不同比例活性成分的处方产品比对结果表明，1-1产品黏度较大，影响口服给药剂量的准确性，且在满足补铁剂量的同时帕托珠利给药剂量较小，抗球虫效果较差；1-2产品黏度、沉降比合格，但在满足补铁剂量的同时帕托珠利给药剂量较小，抗球虫效果较差；处方1-5和1-6产品黏度、沉降比合格，但在满足帕托珠利用量的情况下，会降低补铁剂量，导致补铁效果减弱；相对而言，实施例1以及1-3和1-4的产品各项指标均良好。故拟定处方中帕托珠利与右旋糖酐铁的用量比例为1:2～1:5。实验例5补铁效果评价实验选择100头刚出生的仔猪，随机分为5组，每组25头，分别命名为给药组1、给药组2、给药组3、空白对照组和对照(阳性，市售铁血龙)药物组，试验仔猪全部在相同饲养环境及饲养方式下进行管理。给药组动物在出生后第3天当天为仔猪分别口服1ml上述实施例1、3、5的混悬液，口服1次；对照药物组注射市售补铁制剂铁血龙(规格10％，丹麦pharmacosmosa/s公司，按说明书要求给药)，观察仔猪有无腹泻，并同时检测仔猪体重。在给药当天及给药后第7、14、21天从仔猪取血，检测红细胞数量(rbc，1012个/l)、血红蛋白浓度(hb，g/l)、红细胞比容(ht，％)，检测结果见表5。表5红细胞检测结果在上述实验中发现，采用市售铁血龙进行注射补铁时，容易在仔猪注射部位出现红肿、发炎等不良反应，而口服给药中仔猪应激较小，无其他不良反应；进一步的，相比于口服游离铁含量更高的实施例3、5制剂的仔猪，观察到服用铁含量较低的实施例1制剂的仔猪顺应性更佳。从血液指标可以看出，口服本发明的复方制剂能够达到与市售铁血龙相当甚至更优的补铁效果；并且在体重增长上，本发明制剂给药后仔猪体重增长相对较多，提示本发明制剂的副作用更少。实验例5球虫感染治疗效果评价实验选择球虫感染的5日龄仔猪为对象，共5组，每组10头。一组动物口服饮用水作为空白组，一组动物口服托曲珠利(baycox5％口服混悬液，拜耳，按20mg/kg体重给药)作为对照组；另外三组分别口服实施例1、3、6中所得制剂进行治疗，每次给药0.7ml，给药一次，观察每组仔猪卵囊排泄情况，采用mann-whitneyu检验对不同组间的卵囊排泄情况进行定量评价，评价结果见表6。给药当天记为第一天，前一天记为给药第0天。表6球虫感染治疗效果评价结果给药后天数空白组托曲珠利组实施例1组实施例3组实施例6组01001001001001001100857180623100604552385100372124197100148105960700011300000由上述结果可以看出，市售托曲珠利与本发明制剂在给药后第11天粪便中已检测不到虫卵，且相比于单用托曲珠利，三个实施例组在第9天就已检测不到虫卵，表明本发明制剂具有更高的给药剂量准确性。尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解，根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。当前第1页12