一种海藻寡糖的制备方法及在抗衰老化妆品的应用与流程

本发明属于化妆品领域，涉及一种含有海藻寡糖的组合物及其制备方法与用途，尤其是涉及一种海藻活性寡糖的制备及其在抗衰老化妆品中的应用。
背景技术：
：现代环境污染的程度、长期受电脑和手机等的面部辐射、生活压力等加剧了皮肤衰老的进程。目前市面上的海藻泥和矿物泥面膜容易吸走肌肤本身的养分，造成肌肤干燥和老化程度增加，且使用完后不易清理干净，效果往往适得其反。目前市面上缺少一种既能够清洁表皮细胞新陈代谢产物，清除过量自由基，又能够提供肌肤所需活性氨基酸和多种微量元素成分，恢复皮肤年轻态等功效，且易清洗不会造成残留的面膜。海藻入药在我国已有久远的历史，南齐陶弘景(公元452～536)所著《神农本草经》上记载了海藻并描述了食疗性质和利用方法。同时还有降血脂、抗血栓以及消除大脑疲劳、促进儿童发育、增进机体免疫力、延缓衰老等功效。中国发明专利cn104814985a公开了一种海藻多糖的应用，本发明属于生物医学
技术领域：
，具体是一种海藻多糖的应用。海藻多糖作为制备抗病毒或免疫的制剂。细胞模型和体内动物实验表明，海藻多糖能够显著提高动物免疫力，同时可促进细胞因子的产生，t淋巴细胞的分型和小鼠脾脏细胞的增殖，从而激活细胞免疫反应。本发明涉及的功能海藻多糖是从大型海藻海带、马尾藻、蜈蚣藻、麒麟菜、孔石莼、浒苔、龙须菜、泡叶藻、萱藻等海藻中提取得到的天然多糖，也可以是经不同制备方法将海藻多糖降解制得的低分子量海藻多糖或海藻寡糖。单种海藻的多糖提取物或多种海藻的多糖提取物混合物可以作为一种新型的抗病毒和免疫增强剂应用到畜禽、鱼虾贝饲料中，具有广泛的应用前景。中国发明专利cn107582422a公开了一种二氧化钛/海藻多糖复合纳米颗粒及其制备方法及应用。本发明方法包括以下步骤：海藻多糖溶于水中，再加入纳米二氧化钛乙醇混悬液，混合均匀后调节体系ph范围为2-7，用紫外灯照射进行反应，反应完成后，分离浆液、干燥，即得二氧化钛/海藻多糖复合纳米颗粒。本发明的制造成本低，纳米颗粒粒径分布集中，颗粒分散性能好，与油相的相容性提高，应用于化妆品，特别是防晒产品中，能显著提高产品抗紫外线的能力，纳米颗粒中的海藻多糖还能与纳米二氧化钛的光化学催化活性产生的高活性自由基反应，消除自由基对皮肤的损害，改善了纳米二氧化钛作为防晒剂本身的不足，提高产品性能。中国发明专利cn108746658a公开了一种具有抗菌活性的海藻多糖纳米金颗粒的制备方法，步骤如下：步骤1，制备浓度为0.01～0.1g/ml的海藻多糖液；步骤2，制备浓度为0.1～10mmol/l的氯金酸溶液；步骤3，将步骤1制备的海藻多糖液与步骤2制备的氯金酸溶液按照体积比为0.5:1～2:1混合均匀，反应一定的时间，得到纳米金溶胶；步骤4，将步骤3制备的纳米金溶胶进行离心，收集离心管底部固体，除去上清液，将收集的底部固体依次用蒸馏水、乙醇、丙酮各清洗2次，然后将所得固体用蒸馏水超声溶解，除去底部残渣，将上清液离心、干燥，即得纳米金固体粉末。本发明的一种具有抗菌活性的海藻多糖纳米金颗粒的制备方法，将海藻多糖和纳米金颗粒结合在一起，提高纯纳米金的抗菌活性。然而，目前对海藻的开发利用主要是海藻多糖，海藻多酚、岩藻黄素等抗氧化物质，利用海藻寡糖作为天然抗衰老化妆品的活性成分尚属空白。海藻寡糖因含有丰富的双键和活泼的-oh，所以具有良好的营养、保湿功效，且其可促进皮肤营养的供给和代谢废物的排泄、扩张末稍血管和改善皮肤细胞代谢的功能，对皮肤起到良好的保健和养护作用。因此，将海藻酸钠通过一定的工艺优化制备一种海藻寡糖，并将其成功应用到抗衰老化妆品中，具有十分重要的经济价值和现实意义。技术实现要素：本发明为了解决现有技术中的问题，提供一种以具有优良抗氧化活性的海藻寡糖等成分作为有效成分在制备抗衰老化妆品中的应用。本发明属于海洋生物资源利用和化妆品领域，本发明采用海藻寡糖和火山岩泥为主要原料，辅以牛奶精华、食用甘油和维生素e等，制备了一种具有强抗氧化和保湿功效的天然抗衰老面膜，实现了资源的综合利用，并可广泛用于化妆品领域。且其生产工艺简单、高效，绿色环保，适于工业化生产；产品的抗氧化能力强，绿色天然，由其制备的抗衰老面膜，可用于手部、面部、颈部等皮肤表面，具有滋润保湿、减轻皱纹、延缓衰老的功效。本发明第一方面提供了一种组合物，所述组合物的组分包括：海藻寡糖，火山泥和辅料。在一些实施方式中，所述组合物的组分按照重量比包括：海藻寡糖10-70份(比如，15份、20份、25份、30份、35份、40份、45份、50份、55份、60份、65份)，火山泥15-60份(20份、25份、30份、35份、40份、45份、50份、55份)和辅料3-50份(比如，5份、10份、15份、20份、25份、30份、35份、40份、45份)。在一些实施方式中，所述组合物的组分按照重量比包括：海藻寡糖15-40份，火山泥20-45份和辅料5-40份。在一些实施方式中，所述组合物的组分按照重量比包括：海藻寡糖15-40份，火山泥20-45份和辅料15-40份。在一些实施方式中，所述组合物的粘稠度为6000-10000mpa·s(比如，6500mpa·s、7000mpa·s、7500mpa·s、8000mpa·s、8500mpa·s、9000mpa·s、9500mpa·s)。在一些实施方式中，所述海藻寡糖聚合度为3-15(比如，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14)。在一些实施方式中，所述海藻寡糖聚合度为4.2-9.7。在一些实施方式中，所述海藻寡糖的制备方法包括如下步骤：s1：用海藻胶裂解酶处理海藻酸钠，得到粗裂解产物；s2：离心所述粗裂解产物，取上清干燥，得到精裂解产物；s3：粉碎并筛分所述精裂解产物，得到所述海藻寡糖。在一些实施方式中，在步骤s1中，在反应体系中，所述海藻酸钠的浓度为0.3-2.0g/100ml(比如，0.5g/100ml、0.8g/100ml、1.0g/100ml、1.2g/100ml、1.4g/100ml、1.6g/100ml、1.8g/100ml)水溶液，所述海藻胶裂解酶在反应体系中的浓度为0.5-5×104u/ml(比如，1×104u/ml、1.5×104u/ml、2.0×104u/ml、2.5×104u/ml、3.0×104u/ml、3.5×104u/ml、4.0×104u/ml、4.5×104u/ml)。在一些实施方式中，在步骤s1中，所述处理的温度为25-40℃(比如，28℃、30℃、32℃、34℃、36℃、38℃)。在一些实施方式中，在步骤s1中，所述处理的ph为6.0-9.0(比如，6.5、7.0、7.5、8.0、8.5)。在一些实施方式中，在步骤s1中，所述处理的时间为1-4h(比如，1.5h、2.0h、2.5h、3.0h、3.5h)。在一些实施方式中，在步骤s2中，所述离心的转速为5000-8000转/分钟(例如，5500转/分钟、6000转/分钟、6500转/分钟、7000转/分钟、7500转/分钟)。在一些实施方式中，在步骤s2中，所述离心的时间为3-10分钟(例如，4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟)。在一些实施方式中，在步骤s2中，所述干燥为膜蒸发处理。在一些实施方式中，在步骤s3中，所述筛分为用100-200目筛筛分，取筛下物。在一些实施方式中，所述火山泥的比表面积为20-25m2/g(比如，21m2/g、22m2/g、23m2/g、24m2/g)。在一些实施方式中，所述火山泥的孔容为0.015-0.025cm3/g(比如，0.016cm3/g、0.017cm3/g、0.018cm3/g、0.019cm3/g、0.020cm3/g、0.021m3/g、0.022cm3/g、0.023cm3/g、0.024cm3/g)。在一些实施方式中，所述火山泥的平均孔径为3-4nm。在一些实施方式中，所述火山泥的粒径为500-800目。在一些实施方式中，所述火山泥的制备方法包括如下步骤：si：用酸处理火山岩，得到粗火山岩泥；sii：将所述粗火山岩泥干燥，得到干燥的粗火山泥；siii：将所述干燥的粗火山泥粉碎、过筛，取筛下物，得到所述火山泥。在一些实施方式中，在步骤si中，所述酸选自盐酸、醋酸或乳酸的一种。在一些实施方式中，在步骤si中，所述酸中h+的浓度为0.3-0.7mol/l。在一些实施方式中，在步骤si中，所述火山岩在所述酸中的用量为20-40g/l。在一些实施方式中，在步骤si中，所述处理的温度为50-85℃(比如，55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃)。在一些实施方式中，在步骤si中，所述处理的时间为8-15h(比如，9h、10h、11h、12h、13h、14h)。在一些实施方式中，在步骤si中，所述处理是在搅拌条件下进行的。在一些实施方式中，在步骤sii中，将所述粗火山岩泥水洗至中性后再进行所述干燥。在一些实施方式中，在步骤sii中，所述干燥为在75-90℃(比如，78℃、80℃、82℃、84℃、86℃、88℃)下烘干。在一些实施方式中，在步骤siii中，所述粉碎为用纳米粉碎机粉碎。在一些实施方式中，在步骤siii中，所述过筛为过500-800目筛。在一些实施方式中，所述辅料在所述组合物中按照重量比包括：营养物质0-20份(比如，2份、4份、6份、8份、10份、12份、14份、16份、18份)，保湿剂5-15份(比如，6份、8份、10份、12份、14份)，维生素0-15份(比如，2份、4份、6份、8份、10份、12份、14份)。在一些实施方式中，所述辅料在所述组合物中按照重量比包括：营养物质5-20份，保湿剂5-15份，维生素5-15份。在一些实施方式中，所述营养物质选自牛奶精华。在一些实施方式中，所述保湿剂选自甘油、玻尿酸、芦荟、蜂蜜中的至少一种。在一些实施方式中，所述维生素选自维生素e。在一些实施方式中，所述辅料还包括氨基酸。在一些实施方式中，所述氨基酸在所述组合物中按照重量比为1-3份。在一些实施方式中，所述氨基酸可以为护肤品领域中常用的任何氨基酸，比如：修护性氨基酸、保湿性氨基酸、促愈合氨基酸、抗氧化氨基酸、协同防晒氨基酸。更具体地，所述修护性氨基酸选自脯氨酸和/或精氨酸；所述抗氧化氨基酸可以是谷胱甘肽和/或组氨酸；所述促愈合氨基酸为精氨酸和/或谷氨酰肽；所述协同防晒氨基酸为组氨酸。本发明第二方面提供了本发明第一方面所述组合物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：将所述海藻寡糖，所述火山泥和所述辅料混合，得到所述组合物。在一些实施方式中，所述制备方法还包括如下步骤：用水把所述组合物的粘稠度调整为6000-10000mpa·s。在一些实施方式中，所述制备方法还包括如下步骤：将所述组合物灭菌，得到灭菌的组合物。在一些实施方式中，所述灭菌为高压灭菌。在一些实施方式中，所述高压灭菌的温度为110-130℃(比如，115℃、120℃、125℃)。在一些实施方式中，所述高压灭菌的压力为0.8-0.15mpa(比如，1.0mpa、1.2mpa、1.4mpa).在一些实施方式中，所述高压灭菌的时间为5-15min(比如，6min、8min、10min、12min、14min)。本发明第三方面提供了本发明第一方面所述组合物或本发明第二方面所述制备方法在制备用于抗衰老的制剂中的用途。在一些实施方式中，所述制剂为护肤品或者药剂。所述护肤品可以是面膜。附图说明图1为火山泥矿物成分的n2吸-脱附曲线。图2为面膜的评价指标结果对照图，其中，针对每个测试组合物的三个柱状中，从左到右依次为该组合物测试的润湿度、黏稠度和保湿效果的数值。具体实施方式为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施方式作进一步地详细描述。本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明保护范围并非限于下列实施例。实施例1(1)海藻寡糖的制备：将质量浓度为0.6g/100ml的海藻酸钠水溶液作为反应体系，并将其加入酶解罐中，同时向反应体系中加入海藻胶裂解酶，使酶的终浓度为1×102u/ml，调节酶解温度为25℃和ph为6.5进行酶解3h；将酶解完成后的酶解液放入离心机中处理，5000rpm离心5min，然后将上清液使用膜蒸发技术进行浓缩，干燥后得到海藻寡糖干粉，将海藻寡糖干粉粉碎过200目筛后取筛下物备用，即得海藻寡糖。经测定，所得海藻寡糖聚合度为5.4。海藻胶裂解酶(1×104u/ml)：青岛百成海洋生物资源有限公司。(2)火山泥矿物成分的制备：选取30g的火山岩，放入盛有1000ml0.5mol/l的醋酸溶液的烧杯中,将烧杯放入80℃的水浴锅中，搅拌12h，形成了火山岩泥，将火山岩泥用去离子水水洗至中性，制得样品放入烘箱中在80℃下烘干，经纳米粉碎机粉碎后过500目筛后取筛下物备用，即得火山泥。蓬松结构，具有广泛的比表面积和良好的孔隙度，利于吸附去除皮肤多余油脂和污垢，可起到更好的清洁功效；抑制皮脂分泌，去除老废角质。本发明所得火山泥矿物成分的n2吸-脱附曲线参见图1。经测试，所制备的火山泥比表面积：23.6296m2/g；孔容：0.021104cm3/g；平均孔径：3.57253nm。所制备的火山泥的其他指标参见表1。表1火山泥矿物成分指标(3)混匀：按照重量份，步骤(1)所制备的海藻寡糖20份，步骤(2)所制备的火山泥40份，牛奶精华15份，食用甘油10份，维生素e10份，加入蒸馏水调节粘稠度为6000-10000mpa·s，使其均匀，可均匀涂抹在肌肤上。(4)杀菌：将产品置于高压灭菌锅中进行杀菌处理，温度：121℃，压力：0.12mpa，处理时间：10分钟，冷却后得成品a1。实施例2(1)海藻寡糖的制备：将质量浓度为1.6g/100ml的海藻酸钠水溶液作为反应体系，并将其加入酶解罐中，同时向反应体系中加入海藻胶裂解酶，使酶的终浓度为1×102u/ml，调节酶解温度为40℃和ph为8.0进行酶解3h；将酶解完成后的藻液放入离心机中处理，8000r离心10min，然后将上清液使用膜蒸发技术进行浓缩，干燥后得到海藻寡糖干粉，将海藻寡糖干粉粉碎过200筛后取筛下物备用，即得海藻寡糖。经测定，所得海藻寡糖聚合度为9.7。(2)火山泥矿物成分的制备：选取30g的火山岩，放入盛有1000ml0.5mol/l的醋酸溶液的烧杯中,将烧杯放入80℃的水浴锅中，搅拌12h，形成了火山岩泥，将火山岩泥用去离子水水洗至中性，制得样品放入烘箱中在80℃下烘干,经纳米粉碎机粉碎后过500目筛后取筛下物备用，即得火山泥。(3)混匀：按照重量份，步骤(1)所制备的海藻寡糖35份，步骤(2)所制备的火山泥30份，牛奶精华15份，食用甘油10份，维生素e10份，加入蒸馏水调节粘稠度为6000-10000mpa·s，使其均匀，可均匀涂抹在肌肤上。(4)杀菌：将产品置于高压灭菌锅中进行杀菌处理，温度：121℃，压力：0.12mpa，处理时间：10分钟，冷却后得成品a2。实施例3(1)海藻寡糖的制备：将质量浓度为0.8g/100ml的海藻酸钠水溶液作为反应体系，并将其加入酶解罐中，同时向反应体系中加入海藻胶裂解酶，使酶的终浓度为1×102u/ml，调节酶解温度为25℃和ph为8.0进行酶解3h；将酶解完成后的藻液放入离心机中处理，5000r离心8min，然后将上清液使用膜蒸发技术进行浓缩，干燥后得到海藻寡糖干粉，将海藻寡糖干粉粉碎过200目筛后取筛下物备用，即得海藻寡糖。经测定，所得海藻寡糖聚合度为4.2。(2)火山泥矿物成分的制备：选取30g的火山岩，放入盛有1000ml0.5mol/l的醋酸溶液的烧杯中,将烧杯放入80℃的水浴锅中，搅拌12h，形成了火山岩泥，将火山岩泥用去离子水水洗至中性，制得样品放入烘箱中在80℃下烘干,经纳米粉碎机粉碎后过500目筛后取筛下物备用，即得火山泥。(3)混匀：按照重量份，步骤(1)所制备的海藻寡糖28份，步骤(2)所制备的火山泥42份，牛奶精华10份，食用甘油10份，维生素e10份，加入蒸馏水调节粘稠度为6000-10000mpa·s，使其均匀，可均匀涂抹在肌肤上。(4)杀菌：将产品置于高压灭菌锅中进行杀菌处理，温度：121℃，压力：0.12mpa，处理时间：10分钟，冷却后得成品a3。对比例1：与实施例2的差别在于，省略了步骤(1)，且在步骤(3)中，以海藻酸钠代替海藻寡糖。得到成品c1。对比例2：与实施例2的差别在于，省略了步骤(2)，且在步骤(3)中，省略了火山泥矿物成分。得到成品c2。对比例3：与实施例2的差别在于，在步骤(3)中，省略了牛奶精华。得到成品c3。对比例4：与实施例2的差别在于，在步骤(3)中，省略了维生素e。得到成品c4。测试例：化妆品测试实验前述成品a1,a2,a3,c1,c2,c3,c4都是涂抹式面膜，用于下面所述的测试。(1)感官测试选取皮肤衰老患者70例,均为女性，年龄30±3.5岁。入选标准:皮肤表现出衰老症状：干燥、细纹、粗糙、面色黄、脱屑、有不规则的色素改变或沉淀斑点斑块；皮肤弹性减弱、敏感性增加等。排除标准：面部出现破损、痘疤、糜烂等情况，脸部过敏患者以及使用除敏药物或者祛斑药物的患者。在清洁面部后，让她们将面膜a1,a2,a3,c1,c2,c3,c4敷于面部，以滋润度、黏稠度和保湿效果作为评分标准，设定每个指标为1～5分，按敷感进行打分，每种面膜10名受试者。评分标准参见表2。评分结果平均值参见图2，其中，每种面膜对应三个指标分别依次是：湿润度、粘稠度、保湿效果(即保湿性)。表2面膜评分标准分评价标准效果差效果一般效果好滋润度1－234-5黏稠度1－234-5保湿性1－234-5(2)组合物的自由基清除实验①dpph·自由基清除率的测定：按照文献1(《鸡源胶原蛋白肽的酶法提取工艺及其自由基清除能力的研究》，胡薇薇等人，食品工业，2014年第35卷第2期，144-119页)所记载的方法，利用分光法进行定量分析，分别取0.3g的海藻寡糖组合物(a1,a2,a3,c1,c2,c3,c4)，置于50ml无水乙醇中，室温搅拌12h,分别取2ml的样品溶液和dpph溶液为ai(样品抑制吸收值)；样品溶液和无水乙醇为ac(样品对照)；dpph溶液和无水乙醇为aj(无抑制吸收值)；无水乙醇为无抑制吸收值对照。分别充分振荡混匀,室温静止30min后用1cm比色皿在517nm波长处测定吸收值(每个值同时测定两管)。按照前述文献记载的方法，计算得到dpph·自由基清除率，结果参见表4。②羟自由基清除率：按照文献2(《分光光度法测定中药对羟自由基的清除率》，陈冠华等人，光谱学与光谱分析，2002,22(4)，634-636页)所记载的方法，分别将样品a1,a2,a3,c1,c2,c3,c4水溶液分别配制一定质量浓度的溶液(浓度分别为：6mg/ml)，各取1.0ml，在一系列10ml带盖比色管中分别加入1.4ml结晶紫溶液(2×10-5mol·l-1)、1.0mlfe2+溶液(5×10-3mol·l-1)、0.4mlh2o2(1％)溶液,1.0mltris-hcl溶液(ph5.5),用二次蒸馏水稀释到10ml并摇匀,放置5min后,在波长588nm处测定吸光度。以不加h2o2的样品溶液作为本底管。以vc作阳性对照品。按照前述文献记载的方法，计算得到羟自由基清除率，结果参见表4。③超氧阴离子自由基(abts+)清除率：按照前述文献1所记载的方法，超氧阴离子自由基清除率的测定采用邻苯三酚法。在325nm波长下测定相应吸光度，结果以vc作阳性对照。按照前述文献记载的方法，计算得到超氧阴离子自由基清除率，结果参见表4。表4各组合物对自由基的清除能力(单位均为％)序号名称dpphohabts+1a17980782a29899983a39293914c14549425c27369706c38990917c4918990由此可见，本发明所制备的组合物能够有效地清除自由基，起到抗氧化作用。由技术常识可知，本发明可以通过其它的不脱离其精神实质或必要特征的实施方案来实现。因此，上述公开的实施方案，就各方面而言，都只是举例说明，并不是仅有的。所有在本发明范围内或在等同于本发明的范围内的改变均被本发明包含。当前第1页12