连翘苷在制备预防或/和治疗二型糖尿病药物中的应用

本发明涉及药物应用技术领域，具体涉及连翘苷在制备预防或/和治疗二型糖尿病药物中的应用。

背景技术：

糖尿病是以持续的高血糖水平为重要指征的一系列代谢紊乱综合症。其症状常表现为多尿、口渴、多食等。若不即使治疗而迁延日久，糖尿病患者可出现多多种并发症。急性并发症可包括高渗性高血糖状态、糖尿病酮酸中毒，甚至引起死亡。严重的远期并发症包含脚部溃疡、中风、慢性肾病、心血管疾病、眼底病变、神经系统病变以及认知障碍。

糖尿病的发生可归结为两种原因：一、胰腺无法分泌充足的胰岛素；二、机体内的细胞对胰岛素的响应性下降。糖尿病可主要分为三类：一型糖尿病、二型糖尿病以及妊娠型糖尿病。二型糖尿病的发生和发展过程中，机体中的细胞，特别是脂肪细胞，无法对胰岛素进行正确的响应，出现胰岛素抵抗现象。随着糖尿病的发展，可能同时出现胰岛素分泌不足。其最常见的原因可能为体重过重及运动不足。

截至2019年，估计全世界8.8％的成年人罹患有糖尿病，这对应的人口数字为4.7亿；而这其中，二型糖尿病患者占到90％。研究表明，二型糖尿病的发病无性别差异，即男性与女性患该病的几率相当。同时，伴随生活水平的提高、饮食结构的改变、居民日常生活运动量的减少，糖尿病的发病率仍然有大幅上升的趋势。单在2019年，据估计糖尿病就直接造成了超过400万人的死亡，使之成为全球第七大致死疾病。而与糖尿病治疗相关的支出，据统计2017年全球花费的金额超过七千亿美元。糖尿病患者的生活水平受到极大影响，同时，也给患者家庭带来沉重的经济负担。

常见的糖尿病治疗药物可分为八类。主要包括胰岛素及拟似物、二甲双胍类化合物、磺酰脲类药物、葡萄糖苷酶抑制剂类、噻唑烷二酮类药物促敏剂、苯茴酸类衍生物、dpp-4酶抑制剂和受体激动剂类等。

当前市售的糖尿病治疗药物品种繁多，但多为生物制品或人工合成的单体化合物。其缺点包括：对贮藏条件要求高、药效作用时间短而需要频繁给药、药品售价高昂、副作用大等。

鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本发明。

技术实现要素：

本发明的目的在于解决当前市售的糖尿病治疗药物品种繁多，对贮藏条件要求高、药效作用时间短而需要频繁给药、药品售价高昂、副作用大等，提供了一种连翘苷在制备预防或/和治疗二型糖尿病药物中的应用。

为了实现上述目的，本发明公开了一种连翘苷在制备预防或/和治疗二型糖尿病药物中的应用，连翘苷的化学结构式如下：

这种连翘苷能够改善二型糖尿病状态下内脏脂肪的慢性炎症状态，并且通过改善二型糖尿病状态下内脏脂肪stat3-socs3通路的异常，从而对糖尿病的治疗产生积极效果。

与现有技术比较本发明的有益效果在于：本发明利用中药连翘中提取的单体化合物连翘苷作为唯一的药效成分，用于治疗小鼠糖尿病，取得了良好的效果；连翘苷通过改善二型糖尿病状态下内脏脂肪stat3-socs3通路的异常，从而对糖尿病的治疗产生积极效果；我国连翘资源丰富，连翘中连翘苷含量高且价格较为低廉；以连翘苷治疗糖尿病，可以明显降低小鼠血糖、提高实验动物生存质量；同时，从经济角度来看，连翘苷及其降糖制品有着极其广泛的应用空间。

附图说明

图1为本发明实施例中各组实验小鼠随机血糖水平比较；

图2为本发明实施例中各组实验小鼠禁食血糖水平比较；

图3为本发明实施例中小鼠口服葡萄糖耐量实验结果。

图4为本发明实施例中连翘苷中剂量组与高剂量组对糖尿病小鼠体重的实验结果；

图5为本发明实施例中连翘苷中剂量组与高剂量组对糖尿病小鼠相关炎症因子表达水平的影响；

图6为本发明实施例中连翘苷中剂量组与高剂量组对糖尿病小鼠相关代谢通路的影响。

具体实施方式

以下结合附图，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。

一、连翘苷对二型糖尿病小鼠的降糖活性

实验动物选用spf级c57bl/6j雄性4周龄，共60只。饲养条件为24℃；12小时光照、12小时黑暗；自由饮食饮水。其中正常对照组10只鼠给予实验用鼠维持饲料；其余50只小鼠(实验组)给予60％脂肪供能的高脂饲料。

步骤1：二型糖尿病小鼠的造模

正常饲养8周后，实验组动物分别进行单次腹腔内注射链脲佐菌素(30mg/kg，柠檬酸盐缓冲液ph4.4)；正常对照组小鼠分别注射柠檬酸盐缓冲液(ph4.4)。所有实验小鼠在注射链脲佐菌素或柠檬酸盐缓冲液18h、42h和90h时分别禁食(自由饮水)6h后自尾静脉采血以罗氏逸智血糖仪检测血糖水平——也即在24h、48h和96h检测所有受试小鼠的禁食血糖水平。以禁食血糖水平高于13.3mmol/l判定为糖尿病小鼠造模成功。

步骤2：连翘苷对二型糖尿病小鼠的降糖活性

将糖尿病造模成功的实验组小鼠(共38只)分为高脂模型组(9只)、连翘苷高剂量组(10只)、连翘苷中剂量组(9只)和连翘苷低剂量组(10只)，各实验组小鼠继续喂食高脂饲料。正常对照组继续喂食实验用鼠维持饲料。

将连翘苷(纯度>98％，由高效液相法确认)混悬于1％的羧甲基纤维素钠(cmc-na)溶液，分别按下述剂量对连翘苷高、中、低剂量组灌胃给药4周：50mg/kg,25mg/kg,12.5mg/kg。正常对照组和高脂模型组以1％的羧甲基纤维素钠(cmc-na)溶液灌胃4周。

灌胃4周后，测定包括正常对照组(n＝8)和各实验组小鼠(高脂模型组n＝7，连翘低剂量组n＝8，连翘中剂量组n＝7，连翘高剂量组n＝8)的随机血糖(图1)。以t检验进行统计学分析，由图1可见，高脂模型组(t2dm)与正常对照组(ctrl)比较，有显著性差异(p<0.0001)；t2dm组与连翘苷中剂量组(med)有显著性差异(p<0.0001)；t2dm组与连翘苷高剂量组(high)有显著性差异(p<0.0001)。由此可见连翘苷在降低糖尿病小鼠随机血糖水平方面功效明显。

同时，测定各组实验动物的禁食血糖吗，以t检验进行统计学分析，如图2所示，高脂模型组(t2dm)与正常对照组(ctrl)比较，有显著性差异(p<0.0001)；t2dm组与连翘苷中剂量组(med)有显著性差异(p<0.001)；t2dm组与连翘苷高剂量组(high)有显著性差异(p<0.0001)。由此可见连翘苷在降低糖尿病小鼠禁食血糖水平方面功效显著。

二、连翘苷对二型糖尿病小鼠的耐糖效果

随后，对各组小鼠进行糖耐量检测，其方法如下：将小鼠禁食过夜(自由饮水)后，以2g/kg体重灌胃葡萄糖溶液，随后尾静脉取血并测定葡萄糖灌胃后0min、15min、30min、60min及120min的血糖水平并计算其曲线下面积(图3)。根据小鼠口服葡萄糖耐量实验结果(图3)，以t检验对曲线下面积进行统计分析，发现高脂模型组(t2dm)与正常对照组(ctrl)比较，有显著性差异(p<0.0001)；t2dm组与连翘苷中剂量组(med)有显著性差异(p<0.01)；t2dm组与连翘苷高剂量组(high)有显著性差异(p<0.001)。由此推断连翘苷的中剂量与高剂量在口服给药时，对提高糖耐量水平效果显著并藉此发挥治疗糖尿病的作用。

三、连翘苷对二型糖尿病小鼠的体重效果

各组小鼠在处死前，称取体重。结果显示，药物中、高剂量可显著降低二型糖尿病小鼠体重。由此推断连翘苷的中剂量与高剂量在口服给药时，能够改善肥胖相关二型糖尿病小鼠的体重(图4)。如图4所示，高脂模型组(t2dm)与正常对照组(ctrl)比较，有显著性差异(p<0.001)；t2dm组与连翘苷中剂量组(med)及连翘苷高剂量组(high)比较均有显著性差异(p<0.001)，由此推断连翘苷的中剂量与高剂量在口服给药时，对降低二型糖尿病小鼠的体重效果显著。

四、连翘苷对二型糖尿病小鼠的内脏脂肪组织炎症效果

小鼠在给药4周后颈椎脱臼处死，随后分离附睾脂肪组织，液氮速冻。trizol提取附睾脂肪组织的rna，反转录后进行qrt-pcr检测相关炎症基因表达水平。通过实验考察tnfα、il6和mcp1的炎症因子水平，结果发现t2md组小鼠内脏脂肪组织炎症水平相比正常对照组显著升高。而连翘苷中剂量和高剂量组小鼠脂肪组织炎症水平，对比于t2dm组显著下降(图5)。由此推断连翘苷的中剂量与高剂量在口服给药时，能够改善二型糖尿病状态下内脏脂肪的慢性炎症状态。

五、连翘苷对二型糖尿病小鼠的内脏脂肪stat3-socs3通路效果

小鼠在给药4周后颈椎脱臼处死，随后分离附睾脂肪组织，液氮速冻。trizol提取附睾脂肪组织的rna，反转录后进行qrt-pcr检测相关炎症基因表达水平。结果如图6所示，连翘苷中剂量与高剂量组可显著逆转二型糖尿病模型小鼠内脏脂肪的socs3基因表达。由此推断连翘苷的中剂量与高剂量在口服给药时，能够改善二型糖尿病状态下内脏脂肪stat3-socs3通路的异常，从而对糖尿病的治疗产生积极效果。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，对本发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。