抗TCR抗体分子及其用途的制作方法

抗tcr抗体分子及其用途
相关申请
1.本技术要求2019年2月21日提交的美国临时申请第62/808,784号和2020年1月3日提交的美国临时申请第62/956,871号的优先权，其各自的全部内容通过引用并入本文。序列表
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背景技术：

3.t细胞介导的抗原识别取决于t细胞受体(tcr)与抗原-主要组织相容性复合体(mhc)的相互作用。异源二聚体tcr由通过大部分t细胞表达的α和β链的组合(αβtcr)或者仅存在于约1-5％的t细胞中的γδ链(γδtcr)组成。高度多样性的tcr组库是有效的免疫系统的基本性质。然而，现在人们了解到免疫组库可随着感染性疾病的发生和进展而发生很大的变化。因此，本领域需要通过利用免疫组库的差异来治疗感染性疾病的改进策略。


技术实现要素：

4.本文特别公开了使用针对tcrβ亚单位(tcrβv)可变链的抗体治疗感染性疾病的方法，所述抗体结合并且例如激活t细胞(例如，t细胞亚群)。一般地，本发明的特征在于扩增包含tcrβv分子(例如，如本文所述)的t细胞群的方法，例如增加其数量的方法，所述方法包括：使t细胞群与抗体分子例如人源化抗体分子接触，所述抗体分子结合(例如，特异性结合)t细胞受体β可变链(tcrβv)区(例如，抗tcrβv抗体分子)，从而扩增t细胞群。在一些实施方案中，t细胞群获自受试者(例如，患有感染性疾病(例如，如本文所述)的受试者)或者包含在其中。在不希望受理论束缚的情况下，在一些实施方案中，抗体分子结合的tcrβv克隆型不一定是特定的tcrβv克隆型，该特定的tcrβv克隆型在患有感染性疾病的受试者中过表达，例如表现出较高的水平或活性。
5.列举的实施方案
6.1.一种扩增包含tcrβv分子(例如，如本文所述)的t细胞群的方法，例如增加其数量的方法，所述方法包括：使所述t细胞群与抗体分子例如，人源化抗体分子接触，所述抗体分子结合例如，特异性结合t细胞受体β可变链(tcrβv)区，从而扩增所述t细胞群，其中所述t细胞群获自患有感染性疾病的受试者或包含在患有感染性疾病的受试者中。
7.2.一种治疗患有感染性疾病的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的抗tcrβv抗体分子(例如，tcrβv激动剂)，从而治疗所述感染性疾病。
8.3.一种评估，例如，鉴定患有感染性疾病的受试者中的tcrβv分子的水平或活性的方法，所述方法包括获取所述受试者中的所述tcrβv分子的状态；
9.其中所述tcrβv分子的水平或活性相对于健康受试者(例如，未患有所述感染性疾病的受试者)中的所述tcrβv分子的水平或活性更高(例如，高至少约1.1、1.2、1.3、1.4、
1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、5000、10,000或100,000倍)。
10.4.一种治疗患有感染性疾病的受试者的方法，所述方法包括：
11.(i)获取所述受试者中的所述tcrβv分子的状态；和
12.(ii)向所述受试者施用有效量的抗tcrβv抗体分子(例如，tcrβv激动剂)，从而治疗所述感染性疾病；
13.其中所述tcrβv分子的水平或活性相对于健康受试者(例如，未患有所述感染性疾病的受试者)中的所述tcrβv分子的水平或活性更高(例如，高至少约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、5000、10,000或100,000倍)。
14.5.一种评估受试者是否存在感染性疾病的方法，所述方法包括：
15.(i)获取来自所述受试者的生物学样品和来自健康受试者(例如，未患有感染性疾病的受试者)的生物学样品中的一种或多种tcrβv分子的状态；和
16.(ii)确定一种或多种所述tcrβv分子在所述受试者中是否表现出相对于所述健康受试者升高的水平或活性；
17.其中所述受试者相对于所述健康受试者的升高的水平或活性表明所述感染性疾病的存在。
18.6.一种治疗患有感染性疾病的受试者的方法，所述方法包括：
19.(i)获取来自所述受试者的生物学样品和来自健康受试者(例如，未患有感染性疾病的受试者)的生物学样品中的一种或多种tcrβv分子的状态；
20.(ii)确定一种或多种所述tcrβv分子在所述受试者中是否表现出相对于所述健康受试者升高的水平或活性；和
21.(iii)如果确定所述受试者相对于所述健康受试者的水平或活性升高，则向所述受试者施用有效量的抗tcrβv抗体分子(例如，tcrβv激动剂)。
22.7.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述状态表示所述受试者患有所述感染性疾病或其症状。
23.8.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述状态表示对疗法例如tcrβv分子的反应性。
24.9.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述状态通过本文所述的测定确定，例如测量。
25.10.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述获取包括：从所述受试者分离生物学样品，使所述生物学样品与抗tcrβv抗体分子(例如，相同的抗tcrβv抗体分子或不同的抗tcrβv抗体分子)接触，并确定所述生物学样品中的t细胞扩增的水平，例如，相对于从健康受试者(例如，未患有所述感染性疾病的受试者)获得的生物学样品中的t细胞扩增水平。
26.11.根据实施方案10所述的方法，还包括将来自所述生物学样品的扩增的t细胞施用于所述受试者。
27.12.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述获取包括：从所述受试者分离生物学样品，使所述生物学样品与抗tcrβv抗体分子(例如，相同的抗tcrβv抗体分子或不
同的抗tcrβv抗体分子)接触，并确定所述生物学样品中的t细胞功能(例如，细胞毒活性)的水平，例如，相对于从健康受试者(例如，未患有所述感染性疾病的受试者)获得的生物学样品中的t细胞扩增水平。
28.13.一种鉴定与疾病相关的一种或多种tcrβv分子的方法，所述方法包括：
29.(i)获得来自患有所述疾病的第一受试者的生物学样品和来自未患有所述疾病的第二受试者的生物学样品中多个tcrβv分子的状态；和
30.(ii)确定一种或多种所述tcrβv分子在所述第一受试者中是否表现出相对于所述第二受试者升高的水平或活性；
31.从而鉴定出与所述疾病相关的一种或多种tcrβv分子。
32.14.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病选自爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、流感、人免疫缺陷病毒(hiv)、猿猴免疫缺陷病毒(siv)、结核病、疟疾或人巨细胞病毒(hcmv)。
33.15.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述tcrβv选自tcrβv v5-6、tcrβv v6-5、tcrβv v7、tcrβv v9、tcrβv v10、tcrβv v12(例如tcrβv v12-4)、tcrβv v13、tcrβv v14、tcrβv v19、tcrβv v23-1或其亚家族成员(例如，如表1或表2中所列)。
34.16.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子诱导包含tcrβv分子(例如，由所述抗tcrβv抗体分子结合的tcrβv)的t细胞群的扩增，例如增加其数量。
35.17.根据实施方案16所述的方法，其中所述t细胞群包括cd4 t细胞、cd8 t细胞或cd3 t细胞。
36.18.根据实施方案16所述的方法，其中所述t细胞群源自外周血。
37.19.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
38.(1)seq id no：3、seq id no：4和/或seq id no：5的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
39.(2)seq id no：6、seq id no：7和/或seq id no：8的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
40.20.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
41.(1)seq id no：45、seq id no：46和/或seq id no：47的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
42.(2)seq id no：51、seq id no：52和/或seq id no：53的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
43.21.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
44.(1)seq id no：48、seq id no：49和/或seq id no：50的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
45.(2)seq id no：54、seq id no：55和/或seq id no：56的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
46.22.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
47.(1)seq id no：17、seq id no：18和/或seq id no：19的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
48.(2)seq id no：20、seq id no：21和/或seq id no：22的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
49.23.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
50.(1)seq id no：57、seq id no：58和/或seq id no：59的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
51.(2)seq id no：63、seq id no：64和/或seq id no：65的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
52.24.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
53.(1)seq id no：60、seq id no：61和/或seq id no：62的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
54.(2)seq id no：66、seq id no：67和/或seq id no：68的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
55.25.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：9具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
56.26.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：10具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
57.27.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：9具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh和与seq id no：10具有至少x％序列同一性的vl。
58.28.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：69具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的重链。
59.29.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：70具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的重链。
60.30.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：71具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的重链。
61.31.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：72具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的轻链。
62.32.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：69具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的重链和与seq id no：72具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的轻链。
63.33.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seo id no：70具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)
序列同一性的重链和与seq id no：72具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的轻链。
64.34.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：71具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的重链和与seq id no：72具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的轻链。
65.35.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子与igj链(例如，与seq id no：76包含至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的igj链)共表达。
66.36.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：69具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的重链和与seq id no：72具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的轻链；并且其中所述抗tcrβv抗体分子与igj链(例如，与seq id no：76包含至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的igj链)共表达。
67.37.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：15具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
68.38.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seo id no：16具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
69.39.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：23具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
70.40.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seo id no：24具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
71.41.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：25具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
72.42.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seo id no：26具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
73.43.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：27具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
74.44.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：28具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
75.45.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：29具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
76.46.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：30具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
77.47.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含如表3或表4中所列的vh氨基酸序列，和/或如表3或表4中所列的vl氨基酸序列。
78.48.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子选择性地或优先地扩增αβt细胞而不是γδt细胞。
79.49.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子不诱导细胞因子释放综合征(crs)。
80.50.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子与所述tcrβv区的结合导致一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个(例如，全部)以下各项：
81.(i)il-1β的水平，例如表达水平和/或活性降低；
82.(ii)il-6的水平，例如表达水平和/或活性降低；
83.(iii)tnfa的水平，例如表达水平和/或活性降低；
84.(iv)il-2的水平，例如表达水平和/或活性增加；
85.(v)il-2的水平，例如表达水平和/或活性的增加的延迟，例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多小时的延迟；
86.(vi)ifng的水平，例如表达水平和/或活性的增加的延迟，例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10小时的延迟；
87.(vii)降低的t细胞增殖动力学；或者
88.(viii)降低的细胞因子风暴，例如细胞因子释放综合征(crs)，例如，如通过实施例3的测定所测量的；
89.(ix)细胞杀伤，例如靶细胞杀伤，
90.(x)il-15的水平，例如表达水平和/或活性增加；或者
91.(xi)自然杀伤(nk)细胞增殖，例如扩增增加，
92.与结合以下的抗体相比：cd3分子，例如cd3ε(cd3e)分子；或tcr阿尔法(tcrα)分子，其中所述抗tcrβv抗体分子：
93.(1)不与tcrβv12、tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合；
94.(2)以小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)鼠mab抗体b的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv12；和/或
95.(3)结合tcrβv5-5*01tcrβv5-1*01或具有小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)鼠抗体c的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性。
96.51.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子与所述
tcrβv区的结合导致记忆t细胞群，例如t效应记忆(t
em
)细胞，例如表达cd45ra的t
em
细胞(t
emra
)细胞的群的扩增，例如至少约1.1-10倍扩增(例如，至少约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍扩增)，其中所述抗tcrβv抗体分子：
97.(1)不与tcrβv12、tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合；
98.(2)以小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)鼠mab抗体b的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv12；和/或
99.(3)结合tcrβv5-5*01 tcrβv5-1*01或具有小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)鼠抗体c的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性。
100.52.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致il-1β的表达水平和或活性降低至少2、5、10、20、50、100或200倍，或至少2-200倍(例如，5-150、10-100、20-50倍)，如通过实施例3的测定所测量的。
101.53.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致il-6的表达水平和或活性降低至少2、5、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000倍，或至少2-1000倍(例如，5-900、10-800、20-700、50-600、100-500或200-400倍)，如通过实施例3的测定所测量的。
102.54.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致tnfα的表达水平和或活性降低至少2、5、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或2000倍，或至少2-2000倍(例如，5-1000、10-900、20-800、50-700、100-600、200-500或300-400倍)，如通过实施例3的测定所测量的。
103.55.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致il-2的表达水平和或活性增加至少2、5、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或2000倍，或至少2-2000倍(例如，5-1000、10-900、20-800、50-700、100-600、200-500或300-400倍)，如通过实施例3的测定所测量的。
104.56.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子结合以下tcrβv亚家族中的一个或多个(例如，全部)：
105.(i)tcrβv6亚家族包括例如tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01；
106.(ii)tcrβv10亚家族，包括例如tcrβv10-1*01、tcrβv10-1*02、tcrβv10-3*01或tcrβv10-2*01；
107.(iii)tcrβv12亚家族，包括例如tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01；
108.(iv)tcrβv5亚家族，包括例如tcrβv5-5*01、tcrβv5-6*01、tcrβv5-4*01、tcrβv5-8*01或tcrβv5-1*01；
109.(v)tcrβv7亚家族，包括例如tcrβv7-7*01、tcrβv7-6*01、tcrβv7-8*02、tcrβv7-4*01、tcrβv7-2*02、tcrβv7-2*03、tcrβv7-2*01、tcrβv7-3*01、tcrβv7-9*03或tcrβv7-9*01；
110.(vi)tcrβv11亚家族，包括例如tcrβv11-1*01、tcrβv11-2*01或tcrβv11-3*01；
111.(vii)tcrβv14亚家族，包括例如tcrβv14*01；
112.(viii)tcrβv16亚家族，包括例如tcrβv16*01；
113.(ix)tcrβv18亚家族，包括例如tcrβv18*01；
114.(x)tcrβv9亚家族，包括例如tcrβv9*01或tcrβv9*02；
115.(xi)tcrβv13亚家族，包括例如tcrβv13*01；
116.(xii)tcrβv4亚家族，包括例如tcrβv4-2*01、tcrβv4-3*01或tcrβv4-1*01；
117.(xiii)tcrβv3亚家族，包括例如tcrβv3-1*01；
118.(xiv)tcrβv2亚家族，包括例如tcrβv2*01；
119.(xv)tcrβv15亚家族，包括例如tcrβv15*01；
120.(xvi)tcrβv30亚家族，包括例如tcrβv30*01或tcrβv30*02：
121.(xvii)tcrβv19亚家族，包括例如tcrβv19*01或tcrβv19*02：
122.(xviii)tcrβv27亚家族，包括例如tcrβv27*01；
123.(xix)tcrβv28亚家族，包括例如tcrβv28*01；
124.(xx)tcrβv24亚家族，包括例如tcrβv24-1*01；
125.(xxi)tcrβv20亚家族，包括例如tcrβv20-1*01或tcrβv20-1*02：
126.(xxii)tcrβv25亚家族，包括例如tcrβv25-1*01；
127.(xxiii)tcrβv29亚家族，包括例如tcrβv29-1*01；或者
128.(xxiv)tcrβv23亚家族，包括例如tcrβv23-1。
129.57.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子结合以下tcrβv亚家族中的一个或多个(例如，全部)：
130.(i)tcrβv6亚家族，包括例如tcrβv6-5*01；
131.(ii)tcrβv10亚家族，包括例如tcrβv10-1*01、tcrβv10-1*02、tcrβv10-3*01或tcrβv10-2*01；
132.(iii)tcrβv12亚家族，包括例如tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01；
133.(iv)tcrβv5亚家族，包括例如tcrβv5-6*01；
134.(v)tcrβv7亚家族，包括例如tcrβv7-7*01、tcrβv7-6*01、tcrβv7-8*02、tcrβv7-4*01、tcrβv7-2*02、tcrβv7-2*03、tcrβv7-2*01、tcrβv7-3*01、tcrβv7-9*03或tcrβv7-9*01；
135.(vi)tcrβv14亚家族，包括例如tcrβv14*01；
136.(vii)tcrβv9亚家族，包括例如tcrβv9*01或tcrβv9*02；
137.(viii)tcrβv13亚家族，包括例如tcrβv13*01；
138.(ix)tcrβv19亚家族，包括例如tcrβv 19*01或tcrβv19*02；或者
139.(x)tcrβv23亚家族，包括例如tcrβv23-1。
140.58.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是siv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv6亚家族，例如包含tcrβv6-5*01的所述tcrβv6亚家族。
141.59.根据实施方案58所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的tcrβv6亚家族例如，包含tcrβv6-5*01的水平或活性。
142.60.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是hcmv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv6亚家族，例如包含tcrβv6-5*01的所述tcrβv6亚家族。
143.61.根据实施方案60所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的tcrβv6亚家族例如，包含tcrβv6-5*01的水平或活性。
144.62.根据实施方案58-61中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
145.(1)seq id no：3、seq id no：4和/或seq id no：5的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
146.(2)seq id no：6、seq id no：7和/或seq id no：8的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
147.63.根据实施方案58-61中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
148.(1)seq id no：45、seq id no：46和/或seq id no：47的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
149.(2)seq id no：51、seq id no：52和/或seq id no：53的轻链互补决定区(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
150.64.根据实施方案58-61中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
151.(1)seq id no：48、seq id no：49和/或seq id no：50的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
152.(2)seq id no：54、seq id no：55和/或seq id no：56的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
153.65.根据实施方案58-64中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：9具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
154.66.根据实施方案58-65中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：10具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
155.67.根据实施方案58-64中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：9具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh和与seq id no：10具有至少x％序列同一性的vl。
156.68.根据实施方案58-67中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：69具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的重链和与seq id no：72具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的轻链。
157.69.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是ebv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv10亚家族，例如包含tcrβv10-1*01、tcrβv10-1*02、tcrβv10-3*01或tcrβv10-2*01的所述tcrβv10亚家族。
158.70.根据实施方案69所述的方法，其中所述抗原是bzlf1(52-64)。
159.71.根据实施方案69或70所述的方法，其中所述mhc限制是hla-b*3508。
160.72.根据实施方案69-71中任一项所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的tcrβv10亚家族，例如包括tcrβv10-1*01、tcrβv10-1*02、tcrβv10-3*01或tcrβv10-2*01的水平或活性。
161.73.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是疟疾并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv12亚家族，例如包含tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01的所述tcrβv12亚家族。
162.74.根据实施方案73所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的tcrβ
v12亚家族，例如包含tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01的水平或活性。
163.75.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是结核病并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv12亚家族，例如包含tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01的所述tcrβv12亚家族。
164.76.根据实施方案75所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的tcrβv12亚家族，例如包含tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01的tcrβv12亚家族的水平或活性。
165.77.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是hcmv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv12亚家族，例如包含tcrβv12-4*01的所述tcrβv12亚家族。
166.78.根据实施方案77所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的，tcrβv12亚家族，例如，包含tcrβv12-4*01的tcrβv12亚家族的水平或活性。
167.79.根据实施方案73-78中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
168.(1)seq id no：17、seq id no：18和/或seq id no：19的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
169.(2)seq id no：20、seq id no：21和/或seq id no：22的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
170.80.根据实施方案73-78中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
171.(1)seq id no：57、seq id no：58和/或seq id no：59的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
172.(2)seq id no：63、seq id no：64和/或seq id no：65的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
173.81.根据实施方案73-78中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含：
174.(1)seq id no：60、seq id no：61和/或seq id no：62的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
175.(2)seq id no：66、seq id no：67和/或seq id no：68的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
176.82.根据实施方案73-81中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：15具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
177.83.根据实施方案73-82中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：16具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl，
178.任选地，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：15具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh和与seq id no：16具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
179.84.根据实施方案73-81中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：23具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
180.85.根据实施方案73-81中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：24具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
181.86.根据实施方案73-81中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：25具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vh。
182.87.根据实施方案73-86中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：26具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
183.88.根据实施方案73-86中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：27具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
184.89.根据实施方案73-86中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：28具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
185.90.根据实施方案73-86中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：29具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
186.91.根据实施方案73-86中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含与seq id no：30具有至少85％(例如，至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的vl。
187.92.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是hiv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv5亚家族，例如包含tcrβv5-6*01的所述tcrβv5亚家族。
188.93.根据实施方案92所述的方法，其中所述抗原是gag p17(77-85)。
189.94.根据实施方案92或93所述的方法，其中所述mhc限制是hla-b*0801。
190.95.根据实施方案92-94中任一项所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的，tcrβv5亚家族，例如，包含tcrβv5-6*01的tcrβv5亚家族的水平或活性。
191.96.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是ebv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv7亚家族，例如包含tcrβv7-7*01、tcrβv7-6*01、tcrβv7-8*02、tcrβv7-4*01、tcrβv7-2*02、tcrβv7-2*03、tcrβv7-2*01、tcrβv7-3*01、tcrβv7-9*03或tcrβv7-9*01的所述tcrβv7亚家族。
192.97.根据实施方案96所述的方法，其中所述抗原是ebna3(339-347)。
193.98.根据实施方案96或97所述的方法，其中所述mhc限制是hla-b*0801。
194.99.根据实施方案96-98中任一项所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的tcrβv7亚家族，例如包含tcrβv7-7*01、tcrβv7-6*01、tcrβv7-8*02、tcrβv7-4*01、tcrβv7-2*02、tcrβv7-2*03、tcrβv7-2*01、tcrβv7-3*01、tcrβv7-9*03或tcrβv7-9*01的tcrβv7亚家族的水平或活性。
195.100.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是siv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv14亚家族，例如包含tcrβv14*01的所述tcrβv14亚家族。
196.101.根据实施方案100所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的，tcrβv14亚家族，例如，包含tcrβv14*01的tcrβv14亚家族的水平或活性。
197.102.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是ebv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv9亚家族，例如包含tcrβv9*01或tcrβv9*02的所述tcrβv9亚家族。
198.103.根据实施方案102所述的方法，其中所述抗原是ebna1(407-417)。
199.104.根据实施方案102或103所述的方法，其中所述mhc限制是hla-b*3508或hla-b*3501。
200.105.根据实施方案102-104中任一项所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的，tcrβv9亚家族，例如，包含tcrβv9*01或tcrβv9*02的tcrβv9亚家族的水平或活性。
201.106.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是siv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv13亚家族，例如包含tcrβv13*01的所述tcrβv13亚家族。
202.107.根据实施方案106所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的，tcrβv13亚家族，例如，包含tcrβv13*01的tcrβv13亚家族的水平或活性。
203.108.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是流感并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv19亚家族，例如包含tcrβv19*01或tcrβv19*02的所述tcrβv19亚家族。
204.109.根据实施方案108所述的方法，其中所述抗原是基质蛋白(58-66)。
205.110.根据实施方案108或109所述的方法，其中所述mhc限制是hla-a2。
206.111.根据实施方案108-110中任一项所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的，tcrβv9亚家族，例如，包含tcrβv19*01或tcrβv19*02的tcrβv9亚家族的水平或活性。
207.112.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是hiv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv19亚家族，例如包含tcrβv19*01或tcrβv19*02的所述tcrβv19亚家族。
208.113.根据实施方案112所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的，tcrβv19亚家族的水平或活性，例如，包含tcrβv19*01或tcrβv19*02的tcrβv19亚家族。
209.114.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病是hiv并且所述抗tcrβv抗体分子结合所述tcrβv23亚家族，例如包含tcrβv23-1的所述tcrβv23亚家族。
210.115.根据实施方案114所述的方法，其中所述受试者具有更高的，例如增加的，tcrβv23亚家族，例如，包含tcrβv23-1的tcrβv23亚家族的水平或活性。
211.116.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子：
212.(i)特异性结合tcrβv上的表位，例如与本文所述的抗tcrβv抗体分子例如第二抗tcrβv抗体分子识别的表位相同或相似的表位；
213.(ii)显示与本文所述的抗tcrβv抗体分子，例如第二抗tcrβv抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性，或两者；
214.(iii)抑制，例如竞争性抑制本文所述的抗tcrβv抗体分子，例如第二抗tcrβv抗体分子的结合；
215.(iv)结合与如本文所述的抗tcrβv抗体分子例如第二抗tcrβv抗体分子相同或重叠的表位；或者
216.(v)竞争结合和/或结合与本文所述的抗tcrβv抗体分子，例如第二抗tcrβv抗体分子相同的表位。
217.117.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，其包含：
218.(i)seq id no：1或seq id no：9的重链互补决定区1(hc cdr1)、重链互补决定区2(hc cdr2)和/或重链互补决定区3(hc cdr3)；或
219.(ii)seq id no：2、seq id no：10或seq id no：11的轻链互补决定区1(lc cdr1)、轻链互补决定区2(lc cdr2)和/或轻链互补决定区3(lc cdr3)。
220.118.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含含有轻链可变区(vl)的抗原结合域，所述轻链可变区(vl)包含seq id no：2、seq id no：10或seq id no：11的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr2中的一个、两个或全部(例如，三个)。
221.119.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含含有重链可变区(vh)的抗原结合域，所述重链可变区(vh)包含seq id no：1或seq id no：9的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3中的一个、两个或全部(例如，三个)。
222.120.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，其包含：
223.(i)vl，包含：seq id no：6的lc cdr1氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)，seq id no：7的lc cdr2氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)，和/或seq id no：8的lc cdr3氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)；和/或
224.(ii)vh，包含：seq id no：3的hc cdr1氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)，seq id no：4的hc cdr2氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)，和/或seq id no：5的hc cdr3氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)。
225.121.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，其包含：
226.seq id no：9的可变重链(vh)，或与其具有至少约85％、90％、95％或99％序列同一性的序列；和/或
227.seq id no：10或seq id no：11的可变轻链(vl)，或与其具有至少约85％、90％、95％或99％序列同一性的序列。
228.122.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：seq id no：9的vh氨基酸序列和seq id no：10的vl氨基酸序列。
229.123.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：seq id no：9的vh氨基酸序列和seq id no：11的vl氨基酸序列。
230.124.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含含有单链fv(scfv)或fab的抗原结合域。
231.125.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子结合所述t细胞上的构象或线性表位。
232.126.根据前述实施方案中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子是完全抗体(例如，包含至少一个且优选两个完整重链和至少一个且优选两个完整轻链的抗体)，或抗原结合片段(例如，fab、f(ab
′
)2、fv、单链fv片段、单域抗体、双抗体(dab)、二价抗体或双特异性抗体或其片段、其单域变体或骆驼抗体)。
233.127.根据实施方案126所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含选自igg1、igg2、igg3或igg4或其片段的重链恒定区。
234.128.根据实施方案126或127所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含选自κ或λ的轻链恒定区或其片段的轻链恒定区。
235.129.一种制备，例如，生产或制造前述实施方案中任一项所述的方法的抗tcrβv抗体分子的方法，包括在合适的条件下，例如，适合抗tcrβv抗体分子的表达的条件下培养包含编码抗tcrβv抗体分子的核酸的宿主细胞。
236.130.一种药物组合物，包含前述实施方案中任一项所述的方法的抗tcrβv抗体分子和药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。
237.131.根据实施方案1-128中任一项所述的方法，其中所述扩增在体内或离体(例如，体外)发生。
238.132.根据实施方案1-128或131中任一项所述的方法，其中所述t细胞群包括t细胞、自然杀伤细胞、b细胞或骨髓细胞。
239.133.根据实施方案1-128、131或132中任一项所述的方法，其中所述t细胞群包含cd4 t细胞、cd8 t细胞，例如效应t细胞或记忆t细胞(例如，记忆效应t细胞)(例如t
em
细胞，例如t
emra
细胞)，或其组合。
240.134.根据实施方案1-128或131-133中任一项所述的方法，其中所述t细胞群获自健康受试者。
241.135.根据实施方案1-128或131-134中任一项所述的方法，其中所述t细胞群获自患有疾病例如感染性疾病例如，如本文所述的感染性疾病的受试者(例如，来自所述受试者的单采血液成分术样品)。
242.136.根据实施方案1-128或131-135中任一项所述的方法，其中所述方法导致至少1.1-10倍扩增(例如，至少1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍扩增)。
243.137.根据实施方案1-128或131-136中任一项所述的方法，还包括使所述细胞群与促进例如增加免疫细胞(例如，t细胞)扩增的试剂接触。
244.138.根据实施方案1-128或131-137中任一项所述的方法，还包括使所述细胞群与另外的治疗剂接触。
245.139.根据实施方案138所述的方法，其中所述另外的治疗剂靶向所述感染性疾病。
246.140.根据实施方案1-128或131-139中任一项所述的方法，还包括使所述细胞群与非分裂细胞群接触，例如饲养细胞，例如经辐射的同种异体人pbmc。
247.141.根据实施方案1-128或131-140中任一项所述的方法，其中所述细胞群在包括
一种或多种细胞因子例如il-2、il-7、il-15或其组合的合适培养基(例如，本文所述的培养基)中扩增。
248.142.根据实施方案1-128或131-141中任一项所述的方法，其中将所述细胞群扩增至少约4小时、6小时、10小时、12小时、15小时、18小时、20小时或22小时，或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天，或至少约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周的时间段。
249.143.根据实施方案1-128或131-142中任一项所述的方法，其中将所述t细胞群的扩增与用结合至以下的抗体的类似细胞群的扩增进行比较：cd3分子，例如cd3ε(cd3e)分子；或tcr阿尔法(tcrα)分子。
250.144.根据实施方案1-128或131-143中任一项所述的方法，其中将所述t细胞群的扩增与未与所述抗tcrβv抗体分子接触的类似细胞群的扩增进行比较。
251.145.根据实施方案1-128或131-144中任一项所述的方法，其中将所述t细胞，例如记忆效应t细胞，例如t
em
细胞，例如t
emra
细胞，的群的扩增与结合以下的抗体的类似细胞群的扩增进行比较：cd3分子，例如cd3ε(cd3e)分子；或tcr阿尔法(tcrα)分子。
252.146.根据实施方案1-128或131-145中任一项所述的方法，其中所述扩增的t细胞群，例如扩增的t效应记忆细胞，包含细胞，所述细胞：
253.(i)具有可检测水平的cd45ra，例如表达或再表达cd45ra；
254.(ii)具有ccr7的低表达或无表达；和/或
255.(iii)具有可检测水平的cd95，例如表达cd95，
256.例如，cd45ra+、ccr7-、cd95+t细胞群，任选地其中所述t细胞包括cd3+、cd4+或cd8+t细胞。
257.147.根据实施方案1-128或131-146中任一项所述的方法，其中结合例如特异性结合所述tcrβv区的所述抗体分子例如人源化抗体分子(所述抗tcrβv抗体分子)选自：
258.(a)结合，例如特异性结合选自tcrβvv5-6、tcrβv v6-5、tcrβv v7、tcrβv v9、tcrβv v10、tcrβv v12(例如，tcrβv v12-4)、tcrβv v13、tcrβv v14、tcrβv v19、tcrβv v23-1或其亚家族成员的t细胞受体β可变链(tcrβv)区的人源化抗体分子(例如，如表1或表2中所列)；
259.(b)人源化抗体分子，其：
260.(i)特异性结合tcrβv上的表位，例如与被第二抗tcrβv抗体分子识别的表位相同或相似的表位；
261.(ii)显示与第二抗tcrβv抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性，或两者；
262.(iii)抑制，例如，竞争性抑制，第二抗tcrβv抗体分子的结合；
263.(iv)结合与抗tcrβv抗体分子如第二抗tcrβv抗体分子相同或重叠的表位；或者
264.(v)竞争结合和/或结合与第二抗tcrβv抗体分子相同的表位，
265.其中所述第二抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
266.(1)seq id no：3、seq id no：4和/或seq id no：5的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
267.(2)seq id no：6、seq id no：7和/或seq id no：8的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3；
cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
288.(2)seq id no：20、seq id no：21和/或seq id no：22的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3；
289.(1)seq id no：57、seq id no：58和/或seq id no：59的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
290.(2)seq id no：63、seq id no：64和/或seq id no：65的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3；
291.(1)seq id no：60、seq id no：61和/或seq id no：62的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
292.(2)seq id no：66、seq id no：67和/或seq id no：68的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3；或
293.(1)seq id no：15、seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
294.(ii)seq id no：16、seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
295.148.根据实施方案1-128或131-147中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含含有轻链可变区(vl)的抗原结合域，所述轻链可变区(vl)包含seq id no：16、seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3中的一个、两个或全部。
296.149.根据实施方案1-128或131-148中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含含有重链可变区(vh)的抗原结合域，所述重链可变区(vh)包含seq id no：15、seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3中的一个、两个或全部。
297.150.根据实施方案1-128或131-149中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，其包含：
298.(i)vl，包含：seq id no：20的lc cdr1氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)，seq id no：21的lc cdr2氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)，和/或seq id no：22的lc cdr3氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)；和/或
299.(ii)vh，包含：seq id no：17的hc cdr1氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)，seq id no：18的hc cdr2氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)，和/或seq id no：19的hc cdr3氨基酸序列(或具有不大于1、2、3或4个修饰，例如其置换、添加或缺失的氨基酸序列)。
300.151.根据实施方案1-128或131-150中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，其包含：
301.seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的可变重链(vh)，或与其具有至少约85％、90％、95％或99％序列同一性的序列；和/或
302.seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的可
变轻链(vl)，或与其具有至少约85％、90％、95％或99％序列同一性的序列。
303.152.根据实施方案1-128或131-151中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含含构架区例如构架区1(fr1)的轻链，所述构架区包含以下的一个、两个或所有(例如，三个)：
304.(i)位置1处的天冬氨酸，例如根据kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸的置换；或者
305.(ii)位置2处的天冬酰胺，例如根据kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸到天冬酰胺、丝氨酸到天冬酰胺或酪氨酸到天冬酰胺的置换；或者
306.(iii)位置4处的亮氨酸，例如根据kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸到亮氨酸的置换，
307.其中所述置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
308.153.根据实施方案1-128或131-153中任一项所述的方法，其中所述抗tcrβv抗体分子包含含有构架区例如构架区3(fr3)的轻链，所述构架区包含以下的一个、两个或所有(例如，三个)：
309.(i)位置66处的甘氨酸，例如根据kabat编号在位置69处的置换，例如赖氨酸到甘氨酸或丝氨酸到甘氨酸的置换；或者
310.(ii)位置69处的天冬酰胺，例如根据kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸到天冬酰胺置换；或者
311.(iii)位置71处的酪氨酸，例如根据kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸到酪氨酸或丙氨酸到酪氨酸的置换；或者
312.其中所述置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
313.154.根据实施方案1-128或131-153中任一项所述的方法，其中所述方法导致表达包含tcrα和/或tcrβ分子的t细胞受体(tcr)的t细胞例如，tcrα-βt细胞(αβt细胞)的扩增，例如选择性或优先扩增。
314.155.根据实施方案1-128或131-154中任一项所述的方法，其中所述方法导致αβt细胞的扩增超过表达包含tcrγ和/或tcrδ分子的tcr的t细胞例如tcrγ-δt细胞(γδt细胞)的扩增。
315.在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子会产生较少的或者不产生与细胞因子释放综合征(crs)有关的细胞因子，例如，il-6、il1β和tnfα；增加和/或延迟产生il-2和ifng。在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子会导致免疫细胞(例如，t细胞或称为t
emra
的记忆效应t细胞亚群、nk细胞或其他免疫细胞(例如，如本文所述))扩增。本文还提供了制备所述抗tcrβv抗体分子的方法和使用所述抗tcrβv抗体分子的方法，包括使用抗tcrβv抗体分子扩增免疫细胞或免疫细胞群的方法。本发明还提供了多特异性分子，例如，双特异性分子，包括所述抗tcrβv抗体分子。在一些实施方案中，可以使用包含本公开的抗tcrβv抗体分子的组合物例如来激活和/或重定向t细胞以治疗感染性疾病。在一些实施方案中，包含本文公开的抗tcrβv抗体分子的组合物限制crs(例如，与抗cd3e靶向有关的crs)的不希望的副作用。
316.因此，本文提供了抗tcrβv抗体分子、包含所述抗tcrβv抗体分子的多特异性或多功能分子(例如，多特异性或多功能抗体分子)(在本文中也称为“组合物”)、编码它们的核
酸、产生前述分子的方法、包含前述分子的药物组合物和使用前述分子治疗疾病或病症(例如，感染性疾病，如本文所述)的方法。可以使用(单独使用或与其他试剂或治疗形式组合使用)本文公开的抗体分子和药物组合物治疗、预防和/或诊断病症和病况，例如，感染性疾病，例如如本文所述的感染性疾病。
317.一方面，本公开提供了一种非鼠(例如，人或人源化)抗体分子，该抗体分子结合(例如，特异性结合)t细胞受体β可变(tcrβv)区。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致出现以下中一种、两种、三种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或更多种(例如，全部)情况：
318.(i)il-1β的水平(例如，表达水平)和/或活性降低；
319.(ii)il-6的水平(例如，表达水平)和/或活性降低；
320.(iii)tnfα的水平(例如，表达水平)和/或活性降低；
321.(iv)il-2的水平(例如，表达水平)和/或活性增加；
322.(v)il-2的水平(例如，表达水平)和/或活性增加的延迟，例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10小时或更长时间的延迟；
323.(vi)ifng的水平(例如，表达水平)和/或活性增加的延迟，例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10小时或更长时间的延迟；
324.(vii)降低的t细胞增殖动力学降低；或者
325.(viii)降低的细胞因子风暴(例如，细胞因子释放综合征(crs))，如通过实施例3的测定所测量的；
326.(ix)细胞杀伤，例如靶细胞杀伤；
327.(x)il-5的水平(例如，表达水平)和/或活性增加；或者
328.(xi)自然杀伤(nk)细胞增殖(例如，扩增)增加。
329.在一些实施方案中，将由本文公开的抗tcrβv抗体分子产生的抗(i)-(xi)中的任意一种或全部或其组合与结合cd3分子(例如，cd3ε(cd3e)分子；或tcr阿尔法(tcrα)分子)的抗体进行比较。
330.在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合会导致分泌(例如，产生)穿孔素和/或粒酶b。
331.另一方面，本公开提供了非鼠(例如，人或人源化)抗体分子，该抗体分子结合(例如，特异性结合)t细胞受体β可变(tcrβv)区。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子的结合导致记忆t细胞(例如t效应记忆(t
em
)细胞，例如表达cd45ra的t
em
细胞(t
emra
)细胞，例如cd4+或cd8+t
emra
细胞)群扩增，例如，扩增至少大约1.1-50倍(例如，扩增至少大约1.5-40倍、2-35倍、3-30倍、5-25倍、8-20倍或10-15倍)。在一些实施方案中，所述扩增为至少大约1.1-10倍扩增(例如，至少大约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍扩增)。
332.在一些实施方案中，将记忆效应t细胞(例如t
em
细胞，例如t
emra
细胞，例如cd4+或cd8+t
emra
细胞)群的扩增与带有抗体的细胞群的扩增进行比较，所述抗体结合cd3分子，例如cd3ε(cd3e)分子；或tcr阿尔法(tcrα)分子。
333.在一些实施方案中，扩增的t效应记忆细胞群包括细胞t细胞，例如cd3+、cd8+或cd4+t细胞。在一些实施方案中，扩增的t效应记忆细胞群包括cd3+和cd8+t细胞。在一些实施方案中，扩增的t效应记忆细胞群包括cd3+和cd4+t细胞。
334.在一些实施方案中，扩增的t效应记忆(t
em
)细胞群包括细胞t细胞，例如cd3+、cd8+或cd4+t细胞，其表达或重表达cd45ra，例如cd45ra+。在一些实施方案中，群包括t
em
细胞，所述t
em
细胞表达cd45ra，例如t
emra
细胞。在一些实施方案中，cd45ra在t
emra
细胞(例如，cd4+或cd8+t
emra
细胞)上的表达可以通过本文公开的方法(例如，流式细胞术)来检测。
335.在一些实施方案中，t
emra
细胞具有较低的ccr7表达或者不表达ccr7，例如ccr7-或ccr7低。在一些实施方案中，ccr7在t
emra
细胞上的表达无法通过本文公开的方法(例如，流式细胞术)来检测。
336.在一些实施方案中，t
emra
细胞表达cd95，例如cd95+。在一些实施方案中，cd95在t
emra
细胞上的表达可以通过本文公开的方法(例如，流式细胞术)来检测。
337.在一些实施方案中，t
emra
细胞表达cd45ra(例如，cd45ra+)具有较低的ccr7表达或不表达ccr7，例如ccr7-或ccr7低，并且表达cd95，例如cd95+。在一些实施方案中，t
emra
细胞可鉴定为cd45ra+、ccr7-和cd95+细胞。在一些实施方案中，t
emra
细胞包括cd3+、cd4+或cd8+t细胞(例如，cd3+t细胞、cd3+cd8+t细胞或cd3+cd4+t细胞)。
338.在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合，与结合cd3分子(例如cd3ε(cd3e)分子；或tcr阿尔法(tcrα)分子)的抗体相比，导致以下中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或更多种(例如，全部)情况的发生：
339.(i)il-1β的水平(例如，表达水平)和/或活性降低；
340.(ii)il-6的水平(例如，表达水平)和/或活性降低；
341.(iii)tnfα的水平(例如，表达水平)和/或活性降低；
342.(iv)il-2的水平(例如，表达水平)和/或活性增加；
343.(v)il-2的水平例如表达水平和/或活性增加的延迟，例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10小时或更长时间的延迟；
344.(vi)ifng的水平例如表达水平和/或活性增加的延迟，例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10小时或更长时间的延迟；
345.(vii)降低的t细胞增殖动力学；或者
346.(viii)降低的细胞因子风暴(例如，细胞因子释放综合征(crs))，如通过实施例3的测定所测量的；
347.(ix)细胞杀伤，例如靶细胞杀伤；
348.(x)il-5的水平(例如，表达水平)和/或活性增加；或者
349.(xi)自然杀伤(nk)细胞增殖(例如，扩增)增加。
350.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致il-1β的表达水平或活性降低至少2、5、10、20、50、100或200倍或至少2-200倍(例如，5-150、10-100、20-50倍)，如通过实施例3的测试所测量的。
351.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致il-6的表达水平或活性降低至少2、5、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000倍，或至少2-1000倍(例如，5-900、10-800、20-700、50-600、100-500或200-400倍)，如通过实施例3的测试所测量的。
352.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致tnfα的表达水平或活性降低至少2、5、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700、800、
900、1000或2000倍，或至少2-2000倍(例如，5-1000、10-900、20-800、50-700、100-600、200-500或300-400倍)，如通过实施例3的测试所测量的。
353.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致il-2的表达水平或活性增加至少2、5、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或2000倍，或至少2-2000倍(例如，5-1000、10-900、20-800、50-700、100-600、200-500或300-400倍)，如通过实施例3的测试所测量的。
354.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致il-15的表达水平或活性增加至少2、5、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或2000倍，或至少2-2000倍(例如，5-1000、10-900、20-800、50-700、100-600、200-500或300-400倍)。
355.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子的结合导致自然杀伤(nk)细胞群增殖，例如扩增，例如扩增至少大约1.1-50倍(例如，扩增至少约1.5-40倍、2-35倍、3-30倍、5-25倍、8-20倍或10-15倍)。在一些实施方案中，nk细胞扩增至少大约1.1-30倍(例如，扩增至少约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25，或至少约1.1-5、5-10、10-15、15-20、20-25或25-30倍)。在一些实施方案中，将通过例如抗tcrβv抗体分子的结合进行的nk细胞的扩增与未与抗tcrβv抗体分子接触的其他相似群的扩增进行比较。
356.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子的结合导致细胞杀伤，例如靶细胞杀伤。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子的结合导致体外或体内细胞杀伤。
357.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致本文所述的任意活性比如美国专利5,861,155所述的抗体b或鼠抗体c或其人源化形式(例如，人源化mab b-h.1至b-h.6)的活性增加或降低至少2、5、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或2000倍，或至少2-2000倍(例如，5-1000、10-900、20-800、50-700、100-600、200-500或300-400倍)。
358.在一方面，本文提供了一种抗体分子，所述抗体分子结合(例如，特异性结合)t细胞受体β可变链(tcrβv)区(抗tcrβv抗体分子)，其中所述抗tcrβv抗体分子：
359.(i)特异性结合tcrβv上的表位，例如与由本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)识别的表位相同或相似的表位；
360.(ii)显示出与本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)相同或相似的结合亲和力或特异性，或两者；
361.(iii)抑制(例如，竞争性抑制)本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)的结合；
362.(iv)与本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)结合相同的或重叠的表位；或者
363.(v)与本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)竞争性结合，和/或结合相同的表位。
364.在一些实施方案中，第二抗tcrβv抗体分子包含选自表3或表4的抗原结合域，或者与其基本上相同的序列。在一些实施方案中，第二抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述
抗原结合域包含：
365.seq id no：1或seq id no：9的重链互补决定区1(hc cdr1)、重链互补决定区2(hc cdr2)和/或重链互补决定区3(hc cdr3)；和/或seq id no：2、seq id no：10或seq id no：11的轻链互补决定区1(lc cdr1)、轻链互补决定区2(lc cdr2)和/或轻链互补决定区3(lc cdr3)。
366.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，与如美国专利5,861,155所述的抗体b或鼠抗体c或其人源化形式(例如，人源化mab抗体bh.1至bh.6)的活性相比，抗tcrβv抗体分子与tcrβv区的结合导致(i)-(v)中的任一个(例如，一个、两个、三个、四个或全部)发生不同的变化，例如增加或减少至少2、5、10、20、50、100倍。
367.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子结合tcrβv家族(例如，基因家族)，例如包括本文所述的亚家族的tcrβv基因家族。在一些实施方案中，tcrβv家族(例如，基因家族)包括tcrβv6亚家族、tcrβv10亚家族、tcrβv12亚家族、tcrβv5亚家族、tcrβv7亚家族、tcrβv11亚家族、tcrβv14亚家族、tcrβv16亚家族、tcrβv18亚家族、tcrβv9亚家族、tcrβv13亚家族、tcrβv4亚家族、tcrβv3亚家族、tcrβv2亚家族、tcrβv15v、tcrβv30亚家族、tcrβv19亚家族、tcrβv27亚家族、tcrβv28亚家族、tcrβv24亚家族、tcrβv20亚家族、tcrβv25亚家族或tcrβv29亚家族。
368.在一些实施方案中，抗tcrβv抗体与选自tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01的tcrβv6的亚家族结合。在一些实施方案中，tcrβv6亚家族的实施方案包括tcrβv6-5*01。
369.在一些实施方案中，抗tcrβv抗体与选自tcrβv10-1*01、tcrβv10-1*02、tcrβv10-3*01或tcrβv10-2*01的tcrβv10亚家族结合。
370.在一些实施方案中，抗tcrβv抗体与选自tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01的tcrβv12亚家族结合。
371.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不与tcrβv12结合或者以小于如美国专利5,861,155所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/结合特异性(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv12。
372.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv12。
373.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/结合特异性(例如，高大约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合除tcrβv12以外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01))。
374.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不包含鼠mab抗体b的cdr。
375.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体与选自tcrβv5-5*01、tcrβv5-6*01、tcrβv5-4*01、tcrβv5-8*01、tcrβv5-1*01的tcrβv5亚家族结合。
376.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体与选自tcrβv5-5*01、tcrβv5-6*01、tcrβv5-4*01、tcrβv5-8*01、tcrβv5-1*01的tcrβv5亚家族结合。
377.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不与tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合，或者以小于如美国专利5,861,155所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/结合特异性(例如，小于大约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01。
378.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01。
379.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155所述的鼠mab抗体c或其人源化形式的亲和力和/结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合除tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01以外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如，tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01))。
380.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不包含鼠抗体c的cdr。
381.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与以下tcrβv亚家族中的一种或多种(例如，全部)结合：
382.(i)tcrβv6，例如tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01；
383.(ii)tcrβv10，例如tcrβv10-1*01、tcrβv10-1*02、tcrβv10-3*01或tcrβv10-2*01；
384.(iii)tcrβv12，例如tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01；或
385.(iv)tcrβv5，例如tcrβv5-5*01、tcrβv5-6*01、tcrβv5-4*01、tcrβv5-8*01、tcrβv5-1*01。
386.在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv6(例如，tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01)结合。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv6-5*01结合。
387.在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不与tcrβv12结合。
388.在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不与tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合。
389.在另一方面，本文提供了一种扩增免疫细胞群(例如，增加其数量)的方法，包括使免疫细胞群与结合(例如，特异性结合)t细胞受体β可变链(tcrβv)区(例如，本文所述的抗tcrβv抗体分子或包含本文所述的抗tcrβv抗体分子的多特异性分子)的抗体分子(例如，人源化抗体分子)接触，从而扩增免疫细胞群。
390.在一些实施方案中，可以进行体内或离体(例如，体外)扩增。
391.在一些实施方案中，免疫细胞群包括t细胞、自然杀伤细胞、b细胞、抗原呈递细胞
或骨髓细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞或粒细胞)。
392.在一些实施方案中，免疫细胞群包括t细胞，例如cd4+t细胞、cd8+t细胞、tcrα-βt细胞或tcrγ-δt细胞。在一些实施方案中，t细胞包括记忆t细胞(例如，中央记忆t细胞或效应记忆t细胞(例如，t
emra
)或效应t细胞。
393.在一些实施方案中，免疫细胞群从健康受试者中获得。
394.在一些实施方案中，免疫细胞群从患有疾病(例如，感染性疾病，如本文所述的感染性疾病)的受试者(例如，来自受试者的单采血液成分术样品)中获得。在一些实施方案中，从患有疾病(例如，感染性疾病)的受试者中获得的免疫细胞群包括t细胞、自然杀伤细胞、b细胞或骨髓细胞。
395.在一些实施方案中，该方法导致扩增至少1.1-10倍(例如，扩增至少1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍)。
396.在一些实施方案中，该方法进一步包括使细胞群与促进(例如，增加)免疫细胞扩增的试剂接触。在一些实施方案中，所述试剂包括免疫检查点抑制剂，如本文所述的那些。在一些实施方案中，所述试剂包括4-1bb(cd127)激动剂，例如抗4-1bb抗体。
397.在一些实施方案中，该方法进一步包括使细胞群与非分裂细胞群(例如饲养细胞，例如经辐射的同种异体人pbmc))接触。
398.在一些实施方案中，本文所述的扩增方法包括将细胞扩增至少大约4小时、6小时、10小时、12小时、15小时、18小时、20小时或22小时，或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天，或至少约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周。
399.在一些实施方案中，将免疫细胞群的扩增与带有抗体的相似细胞群的扩增进行比较，所述抗体结合：cd3分子，例如，cd3ε(cd3e)分子；或tcr阿尔法(tcrα)分子。
400.在一些实施方案中，将免疫细胞群的扩增与未与抗tcrβv抗体分子接触的相似细胞群的扩增进行比较。
401.在一些实施方案中，将记忆效应t细胞(例如，t
em
细胞，例如，t
emra
细胞)群的扩增与带有抗体的相似细胞群进行比较，所述抗体结合：cd3分子，例如cd3ε(cd3e)分子；或tcr阿尔法(tcrα)分子。
402.在一些实施方案中，该方法导致表达t细胞受体(tcr)的t细胞扩增(例如，选择性或优先扩增)，所述t细胞受体(tcr)包含tcrα和/或tcrβ分子，例如tcrα-βt细胞(αβt细胞))。
403.在一些实施方案中，该方法导致αβt细胞的扩增超过表达包含tcrγ和/或tcrδ分子的tcr的t细胞例如tcrγ-δt细胞(γδt细胞)的扩增。在一些实施方案中，αβt细胞的扩增超过γδt细胞的扩增，这导致与crs有关的细胞因子的生产下降。在一些实施方案中，αβt细胞的扩增超过γδt细胞的扩增，这导致免疫细胞在施用于受试者后诱导crs的能力下降，例如，不易于在施用于受试者后诱导crs。
404.在一些实施方案中，在本文公开的抗tcrβv抗体存在下培养的，例如用本文公开的抗tcrβv抗体扩增的免疫细胞群(例如，t细胞(例如，t
emra
细胞或tils)或nk细胞)在施用于受试者例如患有本文所述的疾病或病况的受试者时不诱导crs。
405.选择地或者与本文公开的任意实施方案组合，本文提供了一种抗tcrβv抗体分子，该抗tcrβv抗体分子：
406.(i)特异性结合tcrβv上的表位，例如与本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)识别的表位相同或相似的表位；
407.(ii)显示出与如本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)相同或相似的结合亲和力或特异性，或两者；
408.(iii)抑制(例如，竞争性抑制)本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)的结合；
409.(iv)与本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)结合相同的或重叠的表位；或者
410.(v)与本文所述的抗tcrβv抗体分子(例如，第二抗tcrβv抗体分子)竞争性结合和/或结合相同的表位。
411.在一些实施方案中，第二抗tcrβv抗体分子包含选自表3或表4的抗原结合域，或者与其基本上相同的序列。在一些实施方案中，第二抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
412.seq id no：1或seq id no：9的重链互补决定区1(hc cdr1)、重链互补决定区2(hc cdr2)和/或重链互补决定区3(hc cdr3)；和/或seq id no：2、seq id no：10或seq id no：11的轻链互补决定区1(lc cdr1)、轻链互补决定区2(lc cdr2)和/或轻链互补决定区3(lc cdr3)。
413.在另一方面，本公开提供了一种多特异性分子，例如双特异性分子，包括本文公开的抗tcrβv抗体分子。
414.在一些实施方案中，多特异性分子进一步包含：感染性疾病靶向部分、细胞因子分子、免疫细胞衔接物(engager)(例如，第二免疫细胞衔接物)和/或基质修饰部分。
415.在另一方面，本文公开了一种多特异性分子，例如双特异性分子，包括：
416.(i)第一部分，包含含有本文公开的抗tcrβv抗体分子的第一免疫细胞衔接物；和
417.(ii)第二部分，包含以下中的一个或多个：感染性疾病靶向部分；第二免疫细胞衔接物；细胞因子分子或基质修饰部分。
418.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
419.(i)seq id no：1或seq id no：9的重链互补决定区1(hc cdr1)、重链互补决定区2(hc cdr2)和/或重链互补决定区3(hc cdr3)；或
420.(ii)seq id no：2、seq id no：10或seq id no：11的轻链互补决定区1(lc cdr1)、轻链互补决定区2(lc cdr2)和/或轻链互补决定区3(lc cdr3)。
421.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含轻链可变区(vl)，所述轻链可变区(vl)包括seq id no：2、seq id no：10或seq id no：11的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3中的一个、两个或全部(例如，三个)。
422.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含重链可变区(vh)，所述重链可变区(vh)包括seq id no：1或seq id no：9的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3中的一个、两个或全部(例如，三个)。
423.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
424.(i)vl，包含：seq id no：6的lc cdr1氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)、seq id no：7的lc cdr2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)和/或seq id no：8的lc cdr3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)；和/或
425.(ii)vh，包含seq id no：3的hc cdr1氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)、seq id no：4的hc cdr2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)和/或seq id no：5的hc cdr3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)。
426.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
427.seq id no：9的可变重链(vh)或与其有至少大约85％、90％、95％或99％序列同一性的序列；和/或
428.seq id no：10或seq id no：11的可变轻链(vl)或与其有至少大约85％、90％、95％或99％序列同一性的序列。
429.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含seq id no：9的vh氨基酸序列和seq id no：10的vl氨基酸序列。
430.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含seq id no：9的vh氨基酸序列和seq id no：11的vl氨基酸序列。
431.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含重链，所述重链包含构架区(例如，构架区3(fr3))，所述构架区包括以下中的一个或两个：(i)在位置73处的苏氨酸，例如在根据kabat编号的位置73处的置换，例如谷氨酸至苏氨酸的置换；或者(ii)在位置94处的甘氨酸，例如在根据kabat编号的位置94处的置换，例如精氨酸至甘氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系重链构架区序列而言的。
432.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区1(fr1))，所述构架区包括在位置10处的苯丙氨酸，例如在根据kabat编号的位置10处的置换，例如丝氨酸至苯丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
433.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区2(fr2))，所述构架区包括以下中的一个或两个：(i)在位置36处的组氨酸，例如在根据kabat编号的位置36处的置换，例如酪氨酸至组氨酸的置换；或者(ii)在位置46处的丙氨酸，例如在根据kabat编号的位置46处的置换，例如精氨酸至丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
434.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区3(fr3))，所述构架区包括在位置87处的苯丙氨酸，例如在根据kabat编号位置87处的置换，例如酪氨酸至苯丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
435.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv6(例如，
tcrβv6-4*01，tcrβv6-4*02，tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01tcrβv6-1*01)结合。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv6-5*01结合。
436.在一些实施方案中，由seq id no：1和/或seq id no：2识别(例如，结合)tcrβv6，例如tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01。在一些实施方案中，由seq id no：9和/或seq id no：10识别(例如，结合)tcrβv6，例如tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01。在一些实施方案中，由seq id no：9和/或seq id no：11识别(例如，结合)tcrβv6，例如tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01。在一些实施方案中，由seq id no：9和/或seq id no：10或者与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列识别(例如，结合)tcrβv6-5*01。在一些实施方案中，由seq id no：9和/或seq id no：11或者与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列识别(例如，结合)tcrβv6-5*01。
437.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
438.(i)seq id no：15、seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
439.(ii)seq id no：16、seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
440.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含轻链可变区(vl)，所述轻链可变区(vl)包括seq id no：16、seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的lc cdr1、lc cdr2和/或lc cdr3中的一个、两个或全部。
441.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含重链可变区(vh)，所述重链可变区(vh)包括seq id no：15、seq id no：23、seq id no：24或seo id no：25的hc cdr1、hc cdr2和/或hc cdr3中的一个、两个或全部。
442.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包括：
443.(i)vl，包含seq id no：20的lc cdr1氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)、seq id no：21的lc cdr2氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)和/或seq id no：22的lc cdr3氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)；和/或
444.(ii)vh，包含seq id no：17的hc cdr1氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)、seq id no：18的hc cdr2氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)，和/或
seq id no：19的hc cdr3氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)。
445.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包括：
446.seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的可变重链(vh)，或者与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列；和/或
447.seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的可变轻链(vl)，或者与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列。
448.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区1(fr1))，所述构架区包括以下中的一个、两个或全部(例如，三个)：在位置1处的天冬氨酸，例如在根据kabat编号的位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸的置换；或者(ii)在位置2处的天冬酰胺，例如在根据kabat编号的位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺的置换、丝氨酸至天冬酰胺的置换或酪氨酸至天冬酰胺的置换；或者(iii)在位置4处的亮氨酸，例如在根据kabat编号的位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
449.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区3(fr3))，所述构架区包括以下中的一个、两个或全部(例如，三个)：在位置66处的甘氨酸，例如在根据kabat编号的位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸的置换或丝氨酸至甘氨酸的置换；或者(ii)在位置69处的天冬酰胺，例如在根据kabat编号的位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺的置换；或者(iii)在位置71处的酪氨酸，例如在根据kabat编号的位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸的置换或丙氨酸至酪氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
450.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv12(例如，tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01)结合。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv12-4*01或tcrβv12-3*01结合。
451.在一些实施方案中，由seq id no：15和/或seq id no：16识别(例如，结合)tcrβv12，例如tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01。在一些实施方案中，由seq id no：23-25中任一个和/或由seq id no：26-30a中任一个或者与其具有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列识别(例如，结合)tcrβv12，例如tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01。在一些实施方案中，由seq id no：23-25中任一个和/或seq id no：26-30或者与其具有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列识别(例如，结合)tcrβv12-4*01。由seq id no：23-25中任一个和/或seq id no：26-30中任一个或者与其具有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列识别(例如，结合)tcr v12-3*01。
452.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包括单链fv(scfv)或fab。
453.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与t细胞上的构象或线性表位结合。
454.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子是完全抗体(例
如，包括至少一个且优选两个完整重链和至少一个且优选两个完整轻链的抗体)或抗原结合片段(例如，fab、f(ab
′
)2、fv、单链fv片段、单域抗体、双抗体(dab)、二价抗体或双特异性抗体或其片段、其单域变体或骆驼抗体)。
455.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含选自igg1、igg2、igg3或igg4或其片段的重链恒定区。
456.在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含选自κ或λ或其片段的轻链恒定区。
457.在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子中的抗tcrβv抗体分子是第一免疫细胞衔接物部分。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不与tcrβv12结合，或者以小于如美国专利5,861,155中所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/或结合特异性(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv12。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv12。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合除tcrβv12以外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01))。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不包含鼠mab抗体b的cdr。
458.在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子中的抗tcrβv抗体分子是第一免疫细胞衔接物部分。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不与tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合，或者以小于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，高于大约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合除tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01以外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01))。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不包含鼠抗体c的cdr。
459.在一些实施方案中，多特异性分子还包含第二免疫细胞衔接物部分。在一些实施方案中，第一和/或第二免疫细胞衔接物结合并激活免疫细胞，例如效应细胞。在一些实施方案中，第一和/或第二免疫细胞衔接物结合但不激活免疫细胞，例如效应细胞。在一些实施方案中，第二免疫细胞衔接物选自nk细胞衔接物、t细胞衔接物、b细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物或其组合。在一些实施方案中，第二免疫细胞衔接物包括与cd3、
tcrα、tcγ、tcrζ、icos、cd28、cd27、hvem、light、cd40、4-1bb、ox40、dr3、gitr、cd30、tim1、slam、cd2或cd226结合的t细胞衔接物。
460.在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子包含感染性疾病靶向部分。在一些实施方案中，感染性疾病靶向部分包括与来自感染性试剂(例如，细菌(例如，结核分枝杆菌)、病毒(如爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、流感病毒、人免疫缺陷病毒(hiv)、猿猴免疫缺陷病毒(siv)、人巨细胞病毒(hcmv))或真核传染源(如疟原虫))的抗原结合的抗体分子(例如，fab或scfv)、受体分子(例如，受体、受体片段或其功能变体)或配体分子(例如，配体、配体片段或其功能变体)或其组合。在一些实施方案中，感染性疾病靶向部分结合存在于感染性试剂(例如，细菌(例如，结核分枝杆菌)、病毒(例如爱泼斯坦-巴尔病毒、流感病毒、人免疫缺陷病毒(hiv)、猿猴免疫缺陷病毒(siv)、人巨细胞病毒(hcmv))或真核传染源(例如，疟原虫))上的抗原。
461.在一些实施方案中，感染性疾病靶向抗体分子与来自感染性试剂(例如如本文所述的)的抗原上的构象或线性表位结合。
462.在本文公开的任意组合物或方法的一些实施方案中，感染性疾病靶向部分是抗原，例如感染性疾病抗原，例如来自细菌(例如，结核分枝杆菌)、病毒(例如，爱泼斯坦-巴尔病毒、流感病毒、人免疫缺陷病毒(hiv)、猿猴免疫缺陷病毒(siv)、人巨细胞病毒(hcmv))或真核传染源(例如，疟原虫)的抗原。
463.在本文公开的任意组合物或方法的一些实施方案中，感染性疾病靶向部分与选自以下的抗原结合：ebna3(例如，339-347)、ebna1(例如，407-417)、bzlf1(例如，52-64)、基质蛋白(例如，流感病毒基质蛋白，例如，58-66)、hiv gag(例如hiv gag p17，例如77-85)、hiv env、hiv p24衣壳、siv tat(例如，28-35)、siv gag(例如，181-189)或hcmv pp65(例如，495-503)。
464.在一些本文公开的组合物或方法的一些实施方案中，感染性疾病包括但不限于：爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、流感、人免疫缺陷病毒(hiv)、猿猴免疫缺陷病毒(siv)、结核病、疟疾或人巨细胞病毒(hcmv)。
465.在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子还包括细胞因子分子，例如一个或两个细胞因子分子。在一些实施方案中，细胞因子分子选自白介素-2(il-2)、白介素-7(il-7)、白介素-12(il-12)、白介素-15(il-15)、白介素-18(il-18)、白介素-21(il-21)或者干扰素γ，或其片段、变体或组合。在一些实施方案中，细胞因子分子是单体或二聚体。在一些实施方案中，细胞因子分子还包含受体二聚结构域，例如，il15rα二聚结构域。在一些实施方案中，细胞因子(例如，il-15)和受体二聚结构域(例如，il15rα二聚结构域)不共价连接，例如是非共价结合的。
466.在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括：
467.(i)抗tcrβv抗体分子(例如，如本文所述的抗tcrβv抗体分子)；和
468.(ii)感染性疾病靶向抗体分子(例如，与本文所述的抗原结合的抗体分子，所述抗原例如选自ebna3(例如，339-347)、ebna1(例如，407-417)、bzlf1(例如，52-64)、基质蛋白(例如流感病毒基质蛋白，例如，58-66)、hiv gag(例如，hiv gag p17，例如，77-85)、hiv env、hiv p24衣壳、siv tat(例如，28-35)、siv gag(例如，181-189)或hcmv pp65(例如，495-503)中的一个或多个)。
469.在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子还包含选自igg1、igg2和igg4的重链恒定区(更具体地是人igg1、igg2和igg4的重链恒定区)的免疫球蛋白恒定区(例如，fc区)。在一些实施方案中，免疫球蛋白恒定区(例如，fc区)与感染性疾病靶向部分(例如，其可与ebna3(例如，339-347)、ebna1(例如，407-417)、bzlf1(例如，52-64)、基质蛋白(例如，流感病毒基质蛋白，例如，58-66)、hiv gag(例如，hiv gag p17，例如，77-85)、hiv env、hiv p24衣壳、siv tat(例如，28-35)、siv gag(例如，181-189)或hcmv pp65(例如，495-503)中的一个或多个结合)、免疫细胞衔接物、细胞因子分子或基质修饰部分中的一个或多个连接(例如，共价连接)。在一些实施方案中，例如相对于非工程化的界面，改变(例如，使其突变)第一免疫球蛋白链恒定区和第二免疫球蛋白链恒定区(例如，fc区)的界面以增加或减少二聚作用。在一些实施方案中，通过向第一和第二fc区的界面提供配对的腔-突起(“杵臼结构(knob-in-a hole)”)、静电相互作用或链交换中的一个或多个来增强免疫球蛋白链恒定区(例如，fc区)的二聚作用，以使得例如相对于非工程化界面，异多聚体：同多聚体形式的比例更大。
470.在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子还包含接头，例如本文所述的接头，任选地，其中所述接头选自可裂解接头、不可裂解接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头。
471.在一些实施方案中，多特异性分子包含至少两个非连续多肽链。
472.在一些实施方案中，多特异性分包含以下结构：a，b-[二聚化模块]-c，-d其中：(1)二聚化模块包含免疫球蛋白恒定域，例如重链恒定域(例如，同二聚体或异二聚体重链恒定区，例如fc区)或免疫球蛋白可变区(例如，fab区)的恒定域；和(2)a、b、c和d独立地不存在；(i)抗原结合域，其与包含本文公开的抗tcrβv抗体分子的第一免疫细胞衔接物优先结合；(ii)感染性疾病靶向部分(例如，如本文所述的)；(iii)选自t细胞衔接物、nk细胞衔接物、b细胞衔接物、树突状细胞衔接物或巨噬细胞衔接物的第二免疫细胞衔接物；(iv)细胞因子分子；或者(v)基质修饰部分，条件是：
[0473]
a、b、c和d中的至少一个、两个或三个包括优先与本文公开的tcrβv区结合的抗原结合域，和
[0474]
其余a、b、c和d中任一个缺失或者包括感染性疾病靶向部分、第二免疫细胞衔接物、细胞因子分子或基质修饰部分中的一个。
[0475]
在一些实施方案中，二聚化模块包含一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，fc区)，所述免疫球蛋白链恒定区包含以下中的一个或多个：配对的腔-突起(“杵臼结构”)、静电相互作用或链交换。在一些实施方案中，所述一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，fc区)包含在选自例如人igg1的fc区的347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个的一位置处的氨基酸置换。在一些实施方案中，所述一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，fc区)包含选自t366s、l368a或y407v(例如对应于腔或臼)或t366w(例如对应于突起或杵)或其组合的氨基酸置换。
[0476]
在一些实施方案中，多特异性分子还包括接头，例如以下中的一个或多个之间的接头：本文公开的抗tcrβv抗体分子的抗原结合域和感染性疾病靶向部分；本文公开的抗
tcrβv抗体分子的抗原结合域和第二免疫细胞衔接物，本文公开的抗tcrβv抗体分子的抗原结合域和细胞因子分子，本文公开的抗tcrβv抗体分子的抗原结合域和基质修饰部分，第二免疫细胞衔接物和细胞因子分子、第二免疫细胞衔接物和基质修饰部分、细胞因子分子和基质修饰部分、本文公开的抗tcrβv抗体分子的抗原结合域和二聚化模块、第二免疫细胞衔接物和二聚化模块、细胞因子分子和二聚化模块、基质修饰部分和二聚化模块、感染性疾病靶向部分和二聚化模块、感染性疾病靶向部分和细胞因子分子、感染性疾病靶向部分和第二免疫细胞衔接物，或感染性疾病靶向部分和本文公开的抗tcrβv抗体分子的抗原结合域。在一些实施方案中，接头选自可裂解接头、不可裂解接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头。在一些实施方案中，接头是肽接头。在一些实施方案中，肽接头包括gly和ser。在一些实施方案中，肽接头包含选自seq id no：3460-3463或3467-3470的氨基酸序列。
[0477]
在另一方面，本文明提供了一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包含编码本文公开的抗tcrβv抗体分子的核苷酸序列或与其具有至少75％、80％、85％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列。
[0478]
在另一方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包含编码本文公开的多特异性分子的核苷酸序列或与其具有至少75％、80％、85％、90％、95％或99％同一性的核苷酸序列。
[0479]
在另一方面，本发明提供了一种制备(例如，产生)抗tcrβv抗体分子或本文公开的多特异性分子的方法，包括在适宜的条件下培养本文所述的宿主细胞。在一些制备多特异性分子的方法的实施方案中，所述条件包括例如适于基因表达和/或同二聚化或异源二聚化的条件。
[0480]
在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含抗tcrβv抗体分子，或本文所述的多特异性分子和药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。
[0481]
在一方面，本文提供了一种治疗受试者的疾病(例如，感染性疾病)的方法，包括向受试者施用有效量(例如，治疗有效量)的抗tcrβv抗体分子或包含本文公开的抗tcrβv抗体分子的多特异性分子，从而治疗所述疾病。
[0482]
在有关方面，本文提供了一种组合物，所述组合物包含抗tcrβv抗体分子或包含本文公开的抗tcrβv抗体分子的多特异性分子，用于治疗受试者的疾病(例如，感染性疾病)。
[0483]
在一些实施方案中，所述方法还包括施用第二试剂，例如治疗剂，如本文所述。在一些实施方案中，第二试剂包括治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂是生物剂。
[0484]
在另一方面，本文提供了一种将疗法(例如，治疗)靶向(例如定向或重定向)患有疾病(例如，感染性疾病)的受试者中的t细胞的方法，包括施用有效量的(i)本文公开的抗tcrβv抗体；和(ii)疗法，例如感染性疾病靶向疗法(例如，结合本文所述的抗原的抗体)，如本文所述的，从而靶向t细胞。
[0485]
在一些实施方案中，将(i)和(ii)接合，例如连接。
[0486]
在一些实施方案中，同时或并行施用(i)和(ii)。
[0487]
在一些实施方案中，所述方法导致：与单独施用(ii)相比，细胞因子释放综合征(crs)减少(例如，crs持续时间更短或者无crs)，或者crs(例如，无严重的crs，例如4或5级crs)的严重程度降低。在一些实施方案中，通过实施例3的测定评估crs。
[0488]
在另一方面，本公开提供了一种用本文公开的抗tcrβv抗体或包含本文公开的抗tcrβv抗体的多特异性分子靶向患有疾病(例如，感染性疾病)的受试者中的t细胞的方法。
[0489]
在另一方面，本公开提供了一种治疗(例如，预防或减少)受试者的细胞因子释放综合征(crs)(例如，与治疗(例如，先前施用的治疗)有关的crs)的方法，包括向受试者施用有效量的本文公开的抗tcrβv抗体或包含本文公开的抗tcrβv抗体的多特异性分子，其中所述受试者患有疾病，例如感染性疾病，从而治疗(例如，预防或减少)受试者中的crs。
[0490]
在有关方面，本公开提供了一种组合物，所述组合物包含本文公开的抗tcrβv抗体或包含本文公开的抗tcrβv抗体的多特异性分子，用于治疗(例如，预防或减少)受试者的细胞因子释放综合征(crs)(例如与治疗(例如先前施用的治疗)有关的crs)，所述治疗包括向受试者施用有效量的抗tcrβv抗体，其中所述受试者患有疾病，例如感染性疾病。
[0491]
在本文公开使用的方法和组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体与crs相关治疗同时施用或者在crs相关治疗之后施用。
[0492]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
[0493]
(i)seq id no：1或seq id no：9的重链互补决定区1(hc cdr1)、重链互补决定区2(hc cdr2)和/或重链互补决定区3(hc cdr3)；或
[0494]
(ii)seq id no：2、seq id no：10或seq id no：11的轻链互补决定区1(lc cdr1)、轻链互补决定区2(lc cdr2)和/或轻链互补决定区3(lc cdr3)。
[0495]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含轻链可变区(vl)，所述轻链可变区(vl)包括seq id no：2、seq id no：10或seq id no：11的lc cdr1、lc cdr2和/或lc cdr3中的一个、两个或全部(例如，三个)。
[0496]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含重链可变区(vh)，所述重链可变区(vh)包括seq id no：1或seq id no：9的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3中的一个、两个或全部(例如，三个)。
[0497]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
[0498]
(i)vl，包含seq id no：6的lc cdr1氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)、seq id no：7的lc cdr2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)和/或seq id no：8的lc cdr3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)；和/或
[0499]
(ii)vh，包含seq id no：3的hc cdr1氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)、seq id no：4的hc cdr2氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)和/或seq id no：5的hc cdr3氨基酸序列(或具有不超过1、2、3或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)。
[0500]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
[0501]
seq id no：9的可变重链(vh)或与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或
99％序列同一性的序列；和/或
[0502]
seq id no：10或seq id no：11的可变轻链(vl)或与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列。
[0503]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含seq id no：9的vh氨基酸序列和seq id no：10的vl氨基酸序列。
[0504]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含seq id no：9的vh氨基酸序列和seq id no：11的vl氨基酸序列。
[0505]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含重链，所述重链包含构架区(例如，构架区3(fr3))，所述构架区包含以下中的一个或两个：(i)在位置73处的苏氨酸，例如在根据kabat编号的位置73处的置换，例如谷氨酸至苏氨酸的置换；或者(ii)在位置94处的甘氨酸，例如在根据kabat编号的位置94处的置换，例如精氨酸至甘氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系重链构架区序列而言的。
[0506]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区1(fr1))，所述构架区包含在位置10处的苯丙氨酸，例如在根据kabat编号的位置10处的置换，例如丝氨酸至苯丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0507]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区2(fr2))，所述构架区包含以下中的一个或两个：(i)在位置36处的组氨酸，例如根据在卡巴特编号的位置36处的置换，例如酪氨酸至组氨酸的置换；或者(ii)在位置46处的丙氨酸，例如在根据kabat编号的位置46处的置换，例如精氨酸至丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0508]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区3(fr3))，所述构架区包含在位置87处的苯丙氨酸，例如在根据kabat编号的位置87处的置换，例如酪氨酸至苯丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0509]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv6(例如，tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01tcrβv6-1*01)结合。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv6-5*01结合。
[0510]
在一些实施方案中，由seq id no：1和/或seq id no：2识别(例如，结合)tcrβv6，例如tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01。在一些实施方案中，由seq id no：9和/或seq id no：10识别(例如，结合)tcrβv6，例如tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01。在一些实施方案中，由seq id no：9和/或seq id no：11识别(例如，结合)tcrβv6，例如tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01。在一些实施方案中，由seq id no：9和/或seq id no：10或者与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列识别(例如，结合)tcrβv6-5*01。在一些实施方案中，由seq id no：9和/
或seq id no：11或者与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列识别(例如，结合)tcrβv6-5*01。
[0511]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含：
[0512]
(i)seq id no：15、seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的重链互补决定区(hc cdr1)、hc cdr2和/或hc cdr3；和/或
[0513]
(ii)seq id no：16、seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的轻链互补决定区1(lc cdr1)、lc cdr2和/或lc cdr3。
[0514]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含轻链可变区(vl)，所述轻链可变区(vl)包括seq id no：16、seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的lc cdr1、lc cdr2和/或lc cdr3中的一个、两个或全部。
[0515]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包含重链可变区(vh)，所述重链可变区(vh)包括seq id no：15、seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的hc cdr1、hc cdr2和/或hc cdr3中的一个、两个或全部。
[0516]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包括：
[0517]
(i)vl，包含seq id no：20的lc cdr1氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)、seq id no：21的lc cdr2氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)，和/或seq id no：22的lc cdr3氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)；和/或
[0518]
(ii)vh，包含seq id no：17的hc cdr1氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)、seq id no：18的hc cdr2氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)，和/或seq id no：19的hc cdr3氨基酸序列(或具有不超过1个、2个、3个或4个修饰(例如，其置换、添加或缺失)的氨基酸序列)。在本文公开的任意组合物的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包括：
[0519]
seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的可变重链(vh)，或者与其具有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列；和/或
[0520]
seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的可变轻链(vl)，或者与其具有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列。
[0521]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区1(fr1))，所述构架区包含以下中的一个、两个或全部(例如，三个)：在位置1处的天冬氨酸，例如在根据kabat编号的位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸的置换；或者(ii)在位置2处的天冬酰胺，例如在根据kabat编号的位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺的置换、丝氨酸至天冬酰胺的置换或酪氨酸至天冬酰胺的置换；或者
(iii)在位置4处的亮氨酸，例如在根据kabat编号的位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0522]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含轻链，所述轻链包含构架区(例如，构架区3(fr3))，所述构架区包含以下中的一个、两个或全部(例如，三个)：在位置66处的甘氨酸，例如在根据kabat编号的位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸的置换或丝氨酸至甘氨酸的置换；或者(ii)在位置69处的天冬酰胺，例如在根据kabat编号的位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺的置换；或者(iii)在位置71处的酪氨酸，例如在根据kabat编号的位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸的置换或丙氨酸至酪氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0523]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv12(例如，tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01)结合。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv12-4*01或tcrβv12-3*01结合。
[0524]
在一些实施方案中，由seq id no：15和/或seq id no：16识别(例如，结合)tcrβv12，例如tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01。在一些实施方案中，由seq id no：23-25中任一个和/或seq id no：26-30a中任一个或者与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列识别(例如，结合)tcrβv12，例如tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01。在一些实施方案中，由seq id no：23-25中任一个和/或seq id no：26-30中任一个或者与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列识别(例如，结合)tcrβv12-4*01。由seq id no：23-25中任一个和/或seq id no：26-30中任一个或者与其有至少大约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列识别(例如，结合)tcrβv12-3*01。
[0525]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含抗原结合域，所述抗原结合域包括单链fv(scfv)或fab。
[0526]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与t细胞上的构象或线性表位结合。
[0527]
在本文使用的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子是完全抗体(例如，包含至少一个且优选两个完整重链和至少一个且优选两个完整轻链的抗体)，或抗原结合片段(例如，fab、f(ab
′
)2、fv、单链fv片段、单域抗体、双抗体(dab)、二价抗体或双特异性抗体或其片段、其单域变体或骆驼抗体)。
[0528]
在本文使用的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含选自igg1、igg2、igg3或igg4或其片段的重链恒定区。
[0529]
在本文使用的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含选自κ或λ或其片段的轻链恒定区。
[0530]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不与tcrβv12结合，或者以小于如美国专利5,861,155中所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/或结合特异性(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv12。
[0531]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲
和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv12。
[0532]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合除tcrβv12以外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01))。
[0533]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不包含鼠mab抗体b的cdr。
[0534]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不与tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合，或者以小于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01。
[0535]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01。
[0536]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或大约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性结合除tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01以外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01))。
[0537]
在本文公开的任意方法的一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不包含鼠抗体c的cdr。
[0538]
在本文公开使用的任意方法或组合物的一些实施方案中，疾病为感染性疾病，所述感染性疾病选自爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、流感、人免疫缺陷病毒(hiv)、猿猴免疫缺陷病毒(siv)、结核病、疟疾或人巨细胞病毒(hcmv)或其组合。
[0539]
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。下面描述了合适的方法和材料，但类似于或等同于本文所述方法和材料的方法和材料均可以用于本发明的实践或测试中。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用以其全文并入本文。在发生冲突的情况下，以包括定义的本说明书为准。此外，材料、方法和示例仅是说明性的，并不意图是限制性的。
[0540]
通过以下详细描述和权利要求，本发明的其他特征和优点将显而易见。
附图说明
[0541]
图1a-图1b示出了源自抗体a的小鼠vh和vl构架区1、cdr1、构架区2、cdr2、构架区3、cdr3和构架区4以其各自的人源化序列的比对。kabat cdr以粗体示出，chothia cdr以斜体示出，并且组合的cdr以方框示出。反向突变的构架位置用双下划线标出。图1a示出了鼠抗体a的vh序列(seq id no：1)和人源化抗体a-h的vh序列(seq id no：9)。图1b示出了鼠抗
体a的vl序列(seq id no：2)和人源化抗体a-h的vl序列(seq id no：10和seq id no：11)。
[0542]
图2a-图2b示出了源自抗体b的小鼠vh和vl构架区1、cdr1、构架区2、cdr2、构架区3、cdr3和构架区4以其各自的人源化序列的比对。kabat cdr以粗体示出，chothia cdr以斜体示出，组合的cdr以方框示出。反向突变的构架位置用双下划线标出。图2a示出了鼠抗体b的vh序列(seq id no：15)和人源化vh序列b-h.1a至b-h.1c(seq id no：23-25)。图2b示出了鼠抗体b的vl序列(seq id no：16)和人源化vl序列b-h.1d至b-h.1h(seq id no：26-30)。
[0543]
图3描绘了tcrbv基因家族和亚家族的系统树，并映射了相应的抗体。亚家族身份如下：亚家族a：tcrβv6；亚家族b：tcrβv10；亚家族c：tcrβv12；亚家族d：tcrβv5；亚家族e：tcrβv7；亚家族f：tcrβv11；亚家族g：tcrβv14；亚家族h：tcrβv16；亚家族i：tcrβv18；亚家族j：tcrβv9；亚家族k：tcrβv13；亚家族l：tcrβv4；亚家族m：tcrβv3；亚家族n：tcrβv2；亚家族o：tcrβv15；亚家族p：tcrβv30；亚家族q：tcrβv19；亚家族r：tcrβv27；亚家族s：tcrβv28；亚家族t：tcrβv24；亚家族u：tcrβv20；亚家族v：tcrβv25；以及亚家族w：tcrβv29亚家族。亚家族成员在本文标题为“tcr beta v(tcrβv)”的部分详细描述。
[0544]
图4a-图4c示出了被抗tcr vβ13.1抗体(a-h.1)激活6天的人cd3+t细胞。使用磁珠分离(阴性选择)分离人cd3+t细胞，并用固定的(板包被的)抗tcr vβ13.1(a-h.1)或抗cd3∈(okt3)抗体以100nm激活6天。图4a示出了先使用抗tcrvβ13.1(a-h.1)，后使用荧光物缀合的二抗用于流式细胞术分析而评估了tcrvβ13.1表面表达的扩增t细胞的两个散点图(左：用okt3激活；右：用a-h.1激活)。图4b示出了由抗tcrvβ13.1(a-h.1)或抗cd3e(okt3)激活的tcrvβ13.1阳性t细胞相对于总t细胞(cd3+)的百分比(％)。图4c示出了通过以60μl/min的恒定速率对20秒内每个t细胞亚群门(cd3或tcrvβ13.1)中的事件数进行计数而获得的相对细胞计数。数据为3个供体的平均值。
[0545]
图5a-图5b示出了被抗tcrvβ13.1抗体(a-h.1)激活的人cd3+t细胞对转化细胞系rpmi 8226的溶细胞活性。图5a描述了用a-h.1或okt3激活的人cd3+t细胞的靶细胞裂解。使用磁珠分离(阴性选择)分离人cd3+t细胞，并在指定的浓度下用固定的(板包被的)a-h.1或okt3激活4天，然后与rpmi 8226细胞在5∶1的(e∶t)比下共培养2天。接下来，使用流式细胞术分析，通过cfse/cd138标记的且膜不透性的dna染料(draq7)进行facs染色，来分析样品中rpmi 8226细胞的细胞裂解。图5b示出了将被a-h.1或okt3激活的人cd3+t细胞以5∶1的(e∶t)比与rpmi-8226温育6天，随后如上所述对rpmi 8226细胞进行细胞裂解分析而得到的靶细胞裂解。靶细胞裂解百分比(％)通过使用公式[(x-基础)/(100％-基础)，其中x为样品的细胞裂解]，相对于基础靶细胞裂解(即，无抗体处理)归一化来确定。示出的数据代表n＝1个供体。
[0546]
图6a-图6b示出了用所示抗体激活的人pbmc产生的ifng。从指定数量的供体的全血中分离人pbmc，然后用100nm的所示抗体进行固相(板包被)刺激。在第1、2、3、5或6天收集上清液。图6a是比较在激活后第1、2、3、5或6天，在用所示抗体激活(用抗tcrvβ13.1抗体(a-h.1或a-h.2)或抗cd3e抗体(okt3或sp34-2)激活)的人pbmc中产生的ifng的图。图6b示出了在激活后第1、2、3、5或6天，在用所示抗体激活(用抗tcrvβ13.1抗体或抗cd3e抗体(okt3)激活)的人pbmc中产生的ifng。
[0547]
图7a-图7b示出了用所示抗体激活的人pbmc产生的il-2。使用与图6a-图6b所述的类似实验设定。
[0548]
图8a-图8b示出了用所示抗体激活的人pbmc产生的il-6。使用与图6a-图6b所述的类似实验设定。
[0549]
图9a-图9b示出了用所示抗体激活的人pbmc产生的tnf-α。使用与图6a-图6b所述的类似实验设定。
[0550]
图10a-图10b示出了用所示抗体激活的人pbmc产生的il-1β。使用与图6a-图6b所述的类似实验设定。
[0551]
图11a-图11b是示出与抗cd3e抗体okt3激活的pbmc相比，抗tcrvβ13.1抗体a-h.1激活的人pmbc中的ifng分泌的延迟动力学的图。图11a示出了来自4个供体的ifng分泌数据。图11b示出了来自另外4个供体的ifng分泌数据。示出的数据代表n＝8个供体。
[0552]
图12描绘了与被抗cd3e抗体(okt3或sp34-2)激活的pbmc相比，被抗tcrvβ13.1抗体(a-h.1或a-h.2)激活的人pbmc中增加的cd8+tscm和temra t细胞亚群。
具体实施方式
[0553]
先前的研究表明，即使是低“激活”剂量的抗cd3e mab可能导致长期t细胞功能障碍并发挥免疫抑制作用。此外，抗cd3e mab与大量t细胞激活引起的副作用有关。大量激活的t细胞分泌大量细胞因子，其中最重要的是干扰素γ(ifng)。这种过量的ifng反过来激活巨噬细胞，巨噬细胞随后过度产生促炎细胞因子，例如il-1、il-6和tnf-α，导致称为细胞因子释放综合征(crs)的“细胞因子风暴”。因此，需要开发能够仅结合和激活效应t细胞的亚群的抗体，例如，以减少crs。
[0554]
本公开内容尤其提供了针对tcrβ亚基(tcrβv)的可变链的抗体，其结合并例如激活t细胞亚群。本文公开的抗tcrβv抗体分子导致较少或不产生与crs相关的细胞因子，例如il-6、il-1β和tnfα；增强和/或延迟il-2和ifng的产生。在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体导致称为t
emra
的记忆效应t细胞亚群的扩增。不希望受理论束缚，人们认为在一些实施方案中，t
emra
细胞可促进细胞裂解但不促进crs。因此，本文提供了制备所述抗tcrβv抗体分子的方法及其用途。本文还公开了多特异性分子，例如包含所述抗tcrβv抗体分子的双特异性分子。在一些实施方案中，包含本公开的抗tcrβv抗体分子的组合物可用于例如激活和重定向t细胞以治疗感染性疾病。在一些实施方案中，包含本文公开的抗tcrβv抗体分子的组合物限制了crs的有害副作用，例如与抗cd3e靶向相关的crs。
[0555]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不结合tcrβv12，或以小于如美国专利5,861,155中所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/或结合特异性(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2倍、5倍或10倍)的亲和力和/或结合特异性与tcrβv12结合。
[0556]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2倍、5倍或10倍)的亲和力和/或结合特异性与tcrβv12结合。
[0557]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠mab抗体b或其人源化形式(例如，人源化mab抗体b-h.1至b-h.6)的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2倍、5倍或10倍)的
亲和力和/或结合特异性与除tcrβv12之外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01)结合。
[0558]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不包含鼠mab抗体b的cdr。
[0559]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不结合tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01，或以小于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2倍、5倍或10倍)的亲和力和/或结合特异性与tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合。
[0560]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2倍、5倍或10倍)的亲和力和/或结合特异性与tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合。
[0561]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2倍、5倍或10倍)的亲和力和/或结合特异性与除tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01之外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01)结合。
[0562]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不包含鼠抗体c的cdr。
[0563]
因此，本文尤其提供了抗tcrβv抗体分子、包含抗tcrβv抗体分子的多特异性或多功能分子(例如，多特异性或多功能抗体分子)、编码其的核酸、产生上述分子的方法、包含上述分子的药物组合物，以及使用上述分子治疗疾病或病症例如感染性疾病的方法。本文公开的抗体分子和药物组合物可用于(单独地或与其他试剂或治疗方式组合地)治疗、预防和/或诊断病症和病况，例如感染性疾病，例如，如本文所述的。定义
[0564]
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0565]
术语“一”和“一个”是指一个或一个以上(即，至少一个)的冠词语法对象。例如，“一个元素”是指一个元素或一个以上元素。
[0566]
当指代可测量值，如量、持续时间等时，术语“约”旨在涵盖与指定值偏离
±
20％的变化，或在一些情况下
±
10％，或在一些情况下
±
5％，或在一些情况下
±
1％，或在一些情况下
±
0.1％，这样的变化适合执行所公开的方法。
[0567]
如本文所用，术语“获取”是指获得物理实体(例如，样品、多肽、核酸或序列)，或值(例如，数值)的所有权，这是通过“直接获取”或“间接获取”物理实体或值。“直接获取”是指执行过程(例如，执行合成或分析方法)以获得物理实体或值。“间接获取”是指从另一方或来源(例如，直接获取物理实体或值的第三方实验室)接收物理实体或值。直接获取物理实体包括执行一过程，该过程包括物理物质，例如，起始材料中的物理变化。直接获取值包括执行一过程，该过程包括样品或另一种物质中的物理变化，例如，执行包括物质(例如，样品)中的物理变化的分析过程。
[0568]
如本文所用，术语“t细胞受体β可变链”或“tcrβv”是指包含t细胞受体的抗原识别结构域的t细胞受体β链的胞外区。术语tcrβv包括包含至少一个与tcrβv的共同表位的亚
型、哺乳动物(例如人tcrβv)、人的物种同系物和类似物。人tcrβv包含基因家族，该基因家族包括但不限于以下的亚家族：tcrβv6亚家族、tcrβv10亚家族、tcrβv12亚家族、tcrβv5亚家族、tcrβv7亚家族、tcrβv11亚家族、tcrβv14亚家族、tcrβv16亚家族、tcrβv18亚家族、tcrβv9亚家族、tcrβv13亚家族、tcrβv4亚家族、tcrβv3亚家族、tcrβv2亚家族、tcrβv15亚家族、tcrβv30亚家族、tcrβv19亚家族、tcrβv27亚家族、tcrβv28亚家族、tcrβv24亚家族、tcrβv20亚家族、tcrβv25亚家族或tcrβv29亚家族。在一些实施方案中，tcrβv6亚家族包括：tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01。在一些实施方案中，tcrβv包括tcrβv6-5*01。tcrβv6-5*01也称为trbv65；tcrbv6s5；tcrbv13s1或tcrβv13.1。tcrβv6-5*01的氨基酸序列，例如人tcrβv6-5*01，是本领域已知的，例如由imgt id l36092提供。在一些实施方案中，tcrβv6-5*01由seq id no：43的核酸序列，或与其具有85％、90％、95％、99％或更高同一性的序列编码。在一些实施方案中，tcrβv6-5*01包含seq id no：44的氨基酸序列，或与其具有85％、90％、95％、99％或更高同一性的序列。
[0569]
在一些实施方案中，多功能分子包括免疫细胞衔接物。“免疫细胞衔接物”是指结合和/或激活免疫细胞(例如，参与免疫应答的细胞)的一种或多种结合特异性。在实施方案中，免疫细胞选自t细胞、nk细胞、b细胞、树突细胞和/或巨噬细胞。免疫细胞衔接物可以是抗体分子、受体分子(例如，全长受体、受体片段或其融合体(例如，受体-fc融合体))或配体分子(例如，全长配体、配体片段或其融合体(例如，配体-fc融合体))，其结合至免疫细胞抗原(例如，t细胞、nk细胞抗原、b细胞抗原、树突细胞抗原和/或巨噬细胞抗原)。在实施方案中，免疫细胞衔接物特异性结合至靶免疫细胞，例如，优先结合至靶免疫细胞。例如，当免疫细胞衔接物是抗体分子时，它以小于约10nm的解离常数结合至免疫细胞抗原(例如，t细胞抗原、nk细胞抗原、b细胞抗原、树突细胞抗原和/或巨噬细胞抗原)
[0570]
在一些实施方案中，多功能分子包括细胞因子分子。如本文所用，“细胞因子分子”是指细胞因子的全长、片段或变体；还包括受体结构域，例如，细胞因子受体二聚结构域的细胞因子；或细胞因子受体的激动剂，例如，针对细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)，其激发天然存在的细胞因子的至少一种活性。在一些实施方案中，细胞因子分子选自白介素2(il-2)、白介素7(il-7)、白介素12(il-12)、白介素15(il-15)、白介素18(il-18)、白介素21(il-21)或干扰素γ，或其片段或变体，或任何上述细胞因子的组合。细胞因子分子可以是单体或二聚体。在实施方案中，细胞因子分子可以进一步包括细胞因子受体二聚结构域。在其他实施方案中，细胞因子分子是细胞因子受体的激动剂，例如，针对选自il-15ra或il-21r的细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)。
[0571]
如本文所用，在例如抗体分子、细胞因子分子、受体分子中使用的术语“分子”包括全长的、天然存在的分子，以及变体，例如，功能变体(例如，其截短、片段、突变(例如，基本上相似的序列)或衍生形式)，只要未修饰的(例如，天然存在的)分子的至少一种功能和/或活性得到保留。
[0572]
在一些实施方案中，多功能分子包括基质修饰部分。如本文所用，“基质修饰部分”是指能够改变，例如，降解基质组分的试剂，例如，蛋白质(例如，酶)。在实施方案中，基质的组分选自，例如，ecm组分，例如，糖胺聚糖，例如，乙酸透明质酸(也称为透明质酸或ha)、硫酸软骨素、软骨素、硫酸皮肤素、硫酸肝素、肝素、巢蛋白、生腱蛋白、聚集蛋白聚糖和硫酸角
蛋白；或细胞外蛋白，例如，胶原蛋白、层粘连蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白原、纤连蛋白和玻连蛋白。
[0573]
某些术语定义如下。
[0574]
如本文所用，冠词“一”和“一个(种)”是指一个(种)或一个(种)以上(例如，至少一个(种))的冠词语法对象。当与术语“包括”一起使用时，术语“一”或“一个(种)”的使用可以表示“一个(种)”，但也与“一个(种)或多个(种)”、“至少一个(种)”和“一个(种)或超过一个(种)”的含义一致。
[0575]
如本文所用，“约”和“近似”通常是指在给定测量的性质或精度的情况下，所测量的量的可接受的误差程度。示例性误差程度在给定值范围的20％之内，通常在10％之内，更通常在5％之内。
[0576]
如本文所用，“抗体分子”是指包含至少一个免疫球蛋白可变域序列的蛋白质，例如免疫球蛋白链或其片段。抗体分子包括抗体(例如，全长抗体)和抗体片段。在实施方案中，抗体分子包括全长抗体的抗原结合或功能片段，或全长免疫球蛋白链。例如，全长抗体是天然存在或通过正常免疫球蛋白基因片段重组过程形成的免疫球蛋白(ig)分子(例如，igg抗体)。在实施方案中，抗体分子是指免疫球蛋白分子的免疫活性的抗原结合部分，如抗体片段。抗体片段，例如，功能片段，是抗体的一部分，例如，fab、fab’、f(ab’)2、f(ab)2、可变片段(fv)、域抗体(dab)或单链可变片段(scfv)。功能性抗体片段与完整(例如，全长)抗体识别的相同抗原结合。术语“抗体片段”或“功能片段”还包括由可变区组成的分离的片段(如由重链和轻链的可变区组成的“fv”片段)，或重组单链多肽分子，其中轻链和重链可变区通过肽接头连接(“scfv蛋白”)。在一些实施方案中，抗体片段不包括无抗原结合活性的抗体部分，如fc片段或单个氨基酸残基。示例性抗体分子包括全长抗体和抗体片段，例如，dab(域抗体)、单链、fab、fab’和f(ab’)2片段，以及单链可变片段(scfv)。
[0577]
如本文所用，“免疫球蛋白可变域序列”是指可以形成免疫球蛋白可变域的结构的氨基酸序列。例如，该序列可以包括天然存在的可变域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可以包括或可以不包括一个、两个或更多个n-或c-末端氨基酸，或可以包括与蛋白质结构的形成相容的其他改变。
[0578]
在实施方案中，抗体分子是单特异性的，例如，其包含对单个表位的结合特异性。在一些实施方案中，抗体分子是多特异性的，例如，其包含多个免疫球蛋白可变域序列，其中第一免疫球蛋白可变域序列对第一表位具有结合特异性，而第二免疫球蛋白可变域序列对第二表位具有结合特异性。在一些实施方案中，抗体分子是双特异性抗体分子。如本文所用，“双特异性抗体分子”是指对超过一个(例如，两个、三个、四个或更多个)的表位和/或抗原具有特异性的抗体分子。
[0579]
如本文所用，“抗原”(ag)是指可以激发免疫应答的分子，例如，涉及某些免疫细胞的激活和/或抗体产生。任何大分子，包括几乎所有的蛋白质或肽，都可以是抗原。抗原也可以源自基因组重组或dna。例如，包含编码能够诱发免疫应答的蛋白质的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何dna编码“抗原”。在实施方案中，抗原不需要仅由基因的全长核苷酸序列编码，抗原也根本不需要由基因编码。在实施方案中，抗原可被合成或可源自生物学样品，例如组织样品、细胞或具有其他生物组分的流体。如本文所用，“感染性疾病抗原”包括存在于感染性疾病或引起感染性疾病的试剂上或与之相关的任何分子，例如细菌、病毒、真核病
原体(例如，真菌或寄生虫，例如，疟原虫)或其部分。感染性疾病抗原的非限制性实例包括蛋白质、多肽、肽、核酸、糖、小分子、脂质或与引起感染性疾病的试剂相关、从其衍生或包含在其中的其他分子(例如，ebna3(例如，339-347)、ebna1(例如，407-417)、bzlf1(例如，52-64)、基质蛋白(例如，流感病毒基质蛋白，例如，58-66)，hiv gag(例如，hiv gag p17，例如，77-85)、hiv env、hiv p24衣壳、siv tat(例如，28-35)、siv gag(例如，181-189)或hcmv pp65(例如，495-503))。如本文所用，“免疫细胞抗原”包括存在于可激发免疫应答的免疫细胞上或与之相关的任何分子。
[0580]
抗体分子的“抗原结合位点”或“结合部分”是指参与抗原结合的抗体分子例如免疫球蛋白(ig)分子的一部分。在实施方案中，抗原结合位点由重(h)链和轻(l)链的可变(v)区的氨基酸残基形成。在重链和轻链的可变区内的三个高度分歧的序列段称为高变区，位于更保守的侧翼序列段(称为“构架区”(fr))之间。fr是天然存在于免疫球蛋白中的高变区之间并与其相邻的氨基酸序列。在实施方案中，在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中相对于彼此布置以形成抗原结合表面，其与结合抗原的三维表面互补。每一个重链和轻链中的三个高变区称为“互补决定区”或“cdr”。构架区和cdr已经在例如kabat，e.a.，等人，(1991)sequences of proteins of immunological interest，第五版，u.s.department of health and human services，nih publication no.91-3242和chothia，c.等人，(1987)j.mol.biol.196：901-917中定义和描述。每条可变链(例如，可变重链和可变轻链)通常由三个cdr和四个fr组成，它们按以下氨基酸顺序从氨基末端到羧基末端排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3和fr4。
[0581]
如本文所用，“感染性疾病”可包括与传染性病原体相关(例如，由其引起)的所有类型的疾病、病症或病况。传染性病原体的非限制性实例包括细菌、病毒、真核病原体(例如，真菌病原体或寄生虫，例如疟原虫)或其部分。感染性疾病的非限制性实例包括爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、流感、人免疫缺陷病毒(hiv)、猿猴免疫缺陷病毒(siv)、结核病、疟疾或人巨细胞病毒(hcmv)。
[0582]
如本文所用，“免疫细胞”是指在免疫系统中起作用以例如保护免受感染试剂和异物侵害的各种细胞中的任何一种。在实施方案中，该术语包括白细胞，例如嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。固有的白细胞包括吞噬细胞(例如巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞)、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和天然杀伤细胞。固有白细胞通过经由接触来攻击更大的病原体或通过吞噬并杀死微生物来识别和消灭病原体，并且是激活适应性免疫应答的介质。适应性免疫系统的细胞是特殊类型的白细胞，称为淋巴细胞。b细胞和t细胞是重要的淋巴细胞类型，它们来源于骨髓中的造血干细胞。b细胞参与体液免疫应答，而t细胞参与细胞介导的免疫应答。术语“免疫细胞”包括免疫效应细胞。
[0583]
如本文所用，术语“免疫效应细胞”是指参与免疫应答，例如，促进免疫效应子应答的细胞。免疫效应细胞的实例包括但不限于t细胞(例如α/βt细胞和γ/6t细胞)、b细胞、天然杀伤(nk)细胞、天然杀伤t(nk t)细胞和肥大细胞。
[0584]
术语“效应子功能”或“效应子应答”是指细胞的专有功能。t细胞的效应子功能例如可以是溶细胞活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。
[0585]
本发明的组合物和方法包括具有指定序列或与其基本上相同或相似的序列(例如
与指定序列至少80％、85％、90％、95％相同或更高相同的序列)的多肽和核酸。在氨基酸序列的上下文中，本文使用的术语“基本上相同”是指包含足够或最少数目的氨基酸残基的第一氨基酸，所述氨基酸残基与第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基i)相同，或ii)具有保守置换，使得第一氨基酸序列和第二氨基酸序列可以具有共同的结构域和/或共同的功能活性。例如，氨基酸序列含有与参考序列(例如本文提供的序列)具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的共同结构域。
[0586]
在核苷酸序列的上下文中，本文使用的术语“基本上相同”是指第一核酸序列包含与第二核酸序列中的比对核苷酸相同的足够或最小数目的核苷酸，使得第一核苷酸序列和第二核苷酸序列编码具有共同功能活性的多肽，或编码共同的结构多肽结构域或共同的功能多肽活性的多肽。例如，与参考序列(例如本文提供的序列)具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。
[0587]
术语“变体”是指具有与参考氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列，或由基本上相同的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施方案中，变体是功能变体。
[0588]
术语“功能变体”是指具有与参考氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列，或由基本上相同的核苷酸序列编码，并且能够具有参考氨基酸序列的一个或多个活性的多肽。
[0589]
如下进行序列之间的同源性或序列同一性(这些术语在本文中可互换使用)的计算。
[0590]
为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分比，出于最佳比较目的而对序列进行比对(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一个或两个中引入空位，以供最佳比对，并且出于比较的目的可以忽略非同源序列)。在一个优选的实施方案中，出于比较的目的而比对的参考序列的长度为参考序列长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％、60％，并且甚至更优选至少70％、80％、90％、100％。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中相应位置的相同氨基酸残基或核苷酸占据时，则分子在该位置是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸的“同一性”等同于氨基酸酸或核酸“同源性”)。
[0591]
在考虑到需要将其引入以供两个序列进行最佳比对的空位的数目和每个空位的长度的情况下，两个序列之间的同一性百分比是由该序列共享的相同位置的数目的函数。
[0592]
可以使用数学算法来完成序列的比较和两个序列之间的同一性百分比的确定。在一个优选的实施方案中，使用needleman和wunsch((1970)j.mol.biol.48：444-453)算法(已结合到gcg软件包中的gap程序中(可从http：//www.gcg.com获取))，使用blossum 62矩阵或pam250矩阵以及空位权重为16、14、12、10、8、6或4以及长度权重为1、2、3、4、5或6，来确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。在又一个优选的实施方案中，使用gcg软件包(可从http：//www.gcg.com获得)中的gap程序，使用nwsgapdna.cmp矩阵，空位权重为40、50、60、70或80以及长度权重为1、2、3、4、5或6，来确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。一组特别优选的参数(除非另有说明，否则应使用的一组参数)是blossum 62评分矩阵，其空位罚分为12，空位延伸罚分为4，移码空位罚分为5。
[0593]
可以使用e.meyers和w.miller((1989)cabios，4：11-17)的算法(已结合至align程序(2.0版)中)，使用pam120权重残基表，空位长度罚分为12和空位罚分为4，来确定两个氨基酸或核苷酸序列之间的同一性百分比。
[0594]
本文所述的核酸和蛋白质序列可以用作“查询序列”以对公共数据库进行搜索，从而例如鉴定其他家族成员或相关序列。可以使用altschul等人，(1990)j.mol.biol.215：403-10的nblast和xblast程序(2.0版)进行搜索。可以用nblast程序(评分＝100，字长＝12)进行blast核苷酸搜索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可以使用xblast程序(评分＝50，字长＝3)进行blast蛋白质搜索，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对，可以利用altschul等人，(1997)nucleic acids res.25：3389-3402中描述的空位blast。使用blast和空位blast程序时，可以使用各个程序(例如xblast和nblast)的默认参数。
[0595]
应当理解，本发明的分子可以具有另外的保守或非必需氨基酸置换，该置换对它们的功能没有实质性影响。
[0596]
术语“氨基酸”旨在涵盖所有分子，无论是天然的还是合成的，其既包括氨基官能团又包括酸官能团并且能够被包括在天然存在的氨基酸的聚合物中。示例性的氨基酸包括天然存在的氨基酸；类似物、衍生物和同类物；具有变异侧链的氨基酸类似物；以及前述的任一种的所有立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括d-或l-旋光异构体和拟肽。
[0597]“保守氨基酸置换”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基置换的一种置换。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、具有β支链侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
[0598]
本文可互换地使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(如果是单链的话)是指任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可以是直链或支链的，它可以包含修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。该术语还涵盖已被修饰的氨基酸聚合物，所述修饰是例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，例如与标记组分的缀合。多肽可以从天然来源中分离，可以通过重组技术从真核或原核宿主中产生，或者可以是合成方法的产物。
[0599]
术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”可互换使用。它们是指任何长度的核苷酸的聚合形式，即脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。多核苷酸可以是单链或双链的，并且如果是单链的，则可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，例如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可在聚合后进一步被修饰，例如与标记组分缀合。核酸可以是重组多核苷酸，或者是基因组、cdna、半合成或合成来源的多核苷酸，其不是天然存在的，或是以非天然的方式与另一多核苷酸连接。
[0600]
如本文所用，术语“分离的”是指从其来源或天然环境(例如，自然环境，如果其天然存在的话)中取出的材料。例如，存在于活体动物中的天然存在的多核苷酸或多肽是没有分离的，而是通过人为干预从天然系统中的某些或全部共存物质中分离的相同多核苷酸或多肽则是分离的。这样的多核苷酸可以是载体的一部分，并且/或者这样的多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分，并且仍然是分离的，因为这样的载体或组合物不是其在自然界中发现的环境的一部分。
[0601]
下面进一步详细描述本发明的各个方面。整个说明书中阐述了其他定义。人类t细胞受体(tcr)复合物
[0602]
t细胞受体(tcr)可以在t细胞表面发现。tcr识别呈现在(例如结合在)细胞(例如抗原呈递细胞)表面上的主要组织相容性复合体(mhc)分子上的抗原(例如肽)。tcr是异源二聚体分子，并且可以包含α链、β链、γ链或δ链。包含α链和β链的tcr也称为tcrαβ。tcrβ链由以下区域(也称为区段)组成：可变(v)、多样(d)、连接(j)和恒定(c)(参见mayer g.和nyland j.(2010)第10章：major histocompatibility complex and t-cell receptors-role in immune responses.in：microbiology and immunology on-line，university of south carolina school of medicine)。tcrα链由v区、j区和c区组成。通过可变(v)、多样(d)、连接(j)和恒定(c)区的体细胞重组而进行的t细胞受体(tcr)重排是t细胞发育和成熟的决定性事件。tcr基因重排发生在胸腺中。
[0603]
tcr可包含被称为tcr复合物的受体复合物，其包含由α链和β链组成的tcr异源二聚体和二聚体信号分子，例如cd3共受体，例如cd36/ε和/或cd3γ/ε。tcrβv(tcrβv)
[0604]
免疫系统的多样性使得能够对多种病原体提供保护。由于种系基因组的大小受到限制，多样性不仅可以通过v(d)j重组的过程来实现，而且可以通过核苷酸的连接(v-d和d-j区段之间的连接)缺失和伪随机非模板核苷酸的添加来实现。tcrβ基因经过基因排列产生多样性。
[0605]
由于例如在功能性基因区段中经常出现7种失活多态性以及涵盖2个vβ基因区段的大的与插入/缺失相关的多态性，tcr vβ的所有组成成分因个人和群体而异。
[0606]
本公开内容尤其提供了抗体分子及其片段，其结合(例如特异性结合)至人tcrβv链(tcrβv)，例如tcrβv基因家族(也称为组)，例如tcrβv亚家族(也称为亚组)，例如，如本文所述。tcrβv家族和亚家族是本领域已知的，例如，如yassai等人，(2009)immunogenetics 61(7)第493-502页；wei s.和concannon p.(1994)human immunology 41(3)第201-206页所述。本文所述的抗体可以是重组抗体，例如重组非鼠抗体，例如重组人或人源化抗体。
[0607]
在一方面，本公开内容提供了与人tcrβv，例如tcrβv家族，例如基因家族或其变体结合的抗tcrβv抗体分子。在一些实施方案中，tcrbv基因家族包含例如如本文例如图3、表1或表2中所述的一个或多个亚家族。在一些实施方案中，tcrβv基因家族包括：tcrβv6亚家族、tcrβv10亚家族、tcrβv12亚家族、tcrβv5亚家族、tcrβv7亚家族、tcrβv11亚家族、tcrβv14亚家族、tcrβv16亚家族、tcrβv18亚家族、tcrβv9亚家族、tcrβv13亚家族、tcrβv4亚家族、tcrβv3亚家族、tcrβv2亚家族、tcrβv15亚家族、tcrβv30亚家族、tcrβv19亚家族、tcrβv27亚家族、tcrβv28亚家族、tcrβv24亚家族、tcrβv20亚家族、tcrβv25亚家族、tcrβv29亚家族、tcrβv1亚家族、tcrβv17亚家族、tcrβv21亚家族、tcrβv23亚家族或tcrβv26亚家族。
[0608]
在一些实施方案中，tcrβv6亚家族也称为tcrβv13.1。在一些实施方案中，tcrβv6亚家族包括：tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-4*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-4*02或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-9*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-8*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-5*01或其变体。在一些实
施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-6*02或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-6*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-2*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-3*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-1*01或其变体。
[0609]
在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-5*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6，例如tcrβv6-5*01，被seq id no：1和/或seq id no：2识别，例如结合。在一些实施方案中，tcrβv6，例如tcrβv6-5*01，被seq id no：9和/或seq id no：10识别，例如结合。在一些实施方案中，tcrβv6被seq id no：9和/或seq id no：11识别a例如结合。
[0610]
在一些实施方案中，tcrβv10亚家族也称为tcrβv12。在一些实施方案中，tcrβv10亚家族包括：tcrβv10-1*01、tcrβv10-1*02、tcrβv10-3*01或tcrβv10-2*01或其变体。
[0611]
在一些实施方案中，tcrβv12亚家族也称为tcrβv8.1。在一些实施方案中，tcrβv12亚家族包括：tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv12被seq id no：15和/或seq id no：16识别，例如结合。在一些实施方案中，tcrβv12被seq id no：23-25中的任何一个和/或seq id no：26-30中的任何一个识别，例如结合。
[0612]
在一些实施方案中，tcrβv5亚家族选自：tcrβv5-5*01、tcrβv5-6*01、tcrβv5-4*01、tcrβv5-8*01、tcrβv5-1*01或其变体。
[0613]
在一些实施方案中，tcrβv7亚家族包括tcrβv7-7*01、tcrβv7-6*01、tcrβv7-8*02、tcrβv7-4*01、tcrβv7-2*02、tcrβv7-2*03、tcrβv7-2*01、tcrβv7-3*01、tcrβv7-9*03或tcrβv7-9*01或其变体。
[0614]
在一些实施方案中，tcrβv11亚家族包括：tcrβv11-1*01、tcrβv11-2*01或tcrβv11-3*01或其变体。
[0615]
在一些实施方案中，tcrβv14亚家族包括tcrβv14*01或其变体。
[0616]
在一些实施方案中，tcrβv16亚家族包括tcrβv16*01或其变体。
[0617]
在一些实施方案中，tcrβv18亚家族包括tcrβv18*01或其变体。
[0618]
在一些实施方案中，tcrβv9亚家族包括tcrβv9*01或tcrβv9*02或其变体。
[0619]
在一些实施方案中，tcrβv13亚家族包括tcrβv13*01或其变体。
[0620]
在一些实施方案中，tcrβv4亚家族包括tcrβv4-2*01、tcrβv4-3*01或tcrβv4-1*01或其变体。
[0621]
在一些实施方案中，tcrβv3亚家族包括tcrβv3-1*01或其变体。
[0622]
在一些实施方案中，tcrβv2亚家族包括tcrβv2*01或其变体。
[0623]
在一些实施方案中，tcrβv15亚家族包括tcrβv15*01或其变体。
[0624]
在一些实施方案中，tcrβv30亚家族包括tcrβv30*01或tcrβv30*02或其变体。
[0625]
在一些实施方案中，tcrβv19亚家族包括tcrβv19*01或tcrβv19*02或其变体。
[0626]
在一些实施方案中，tcrβv27亚家族包括tcrβv27*01或其变体。
[0627]
在一些实施方案中，tcrβv28亚家族包括tcrβv28*01或其变体。
[0628]
在一些实施方案中，tcrβv24亚家族包括tcrβv24-1*01或其变体。
[0629]
在一些实施方案中，tcrβv20亚家族包括tcrβv20-1*01或tcrβv20-1*02或其变体。
[0630]
在一些实施方案中，tcrβv25亚家族包括tcrβv25-1*01或其变体。
[0631]
在一些实施方案中，tcrβv29亚家族包括tcrβv29-1*01或其变体。表1：tcrβv亚家族和亚家族成员的列表
表2：另外的tcrβv亚家族亚家族tcrβv1tcrβv17tcrβv21tcrβv23tcrβv26抗tcrβv抗体
[0632]
本文公开了一类新抗体的发现，即本文公开的抗tcrβv抗体分子，尽管其具有低序列相似性(例如，识别不同tcrβv亚家族的不同抗体分子之间的低序列同一性)，但识别tcrβv蛋白上的结构保守的区域，例如结构域，并具有相似的功能(例如，相似的细胞因子谱)。因此，本文公开的抗tcrβv抗体分子具有结构-功能关系。
[0633]
在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子不识别(例如不结合至)tcrβv：tcrα复合物的界面。
[0634]
在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子不识别(例如不结合至)tcrβv蛋白的恒定区。结合到tcrbv区域的恒定区的示例性抗体是viney等人，(hybridoma.1992年12月；11(6)：701-13)中所述的jovi.1。
[0635]
在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子不识别(例如不结合至)tcrβv蛋白的一个或多个(例如全部)互补决定区(例如cdr1、cdr2和/或cdr3)。
[0636]
在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子结合(例如特异性结合)至tcrβv区。在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子的结合导致的细胞因子谱不同于与除tcrβv区以外的受体或分子结合的t细胞衔接物(“非tcrβv-结合t细胞衔接物”)的细胞因子谱。在一些实施方案中，非tcrβv结合t细胞衔接物包括与cd3分子(例如，cd3ε(cd3e)分子)或tcr阿尔法(tcrα)分子结合的抗体。在一些实施方案中，非tcrβv结合t细胞衔接物是okt3抗体或sp34-2抗体。
[0637]
在一方面，本公开内容提供了与人tcrβv，例如tcrβv基因家族，例如tcrβv亚家族中的一个或多个，例如，如本文例如在图3、表1或表2中所述的那些结合的抗tcrβv抗体分子。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与选自以下的一个或多个tcrβv亚家族结合：tcrβv6亚家族、tcrβv10亚家族、tcrβv12亚家族、tcrβv5亚家族、tcrβv7亚家族、tcrβv11亚家族、tcrβv14亚家族、tcrβv16亚家族、tcrβv18亚家族、tcrβv9亚家族、tcrβv13亚家族、tcrβv4亚家族、tcrβv3亚家族、tcrβv2亚家族、tcrβv15亚家族、tcrβv30亚家族、tcrβv19亚家族、tcrβv27亚家族、tcrβv28亚家族、tcrβv24亚家族、tcrβv20亚家族、tcrβv25亚家族、tcrβv29亚家族、tcrβv1亚家族、tcrβv17亚家族、tcrβv21亚家族、tcrβv23亚家族或tcrβv26亚家族或其变体。
[0638]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv6亚家族结合，所述tcrβv6亚家族包括：tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6亚家族包括tcrβv6-5*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-4*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-4*02或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-9*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-8*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-5*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-6*02或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-6*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-2*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-3*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-1*01或其变体。
[0639]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv10亚家族结合，所述tcrβv10亚家族包括：tcrβv10-1*01、tcrβv10-1*02、tcrβv10-3*01或tcrβv10-2*01或其变体。
[0640]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv12亚家族结合，所述tcrβv12亚家族包括：tcrβv12-4*01、tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01或其变体。
[0641]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子与tcrβv5亚家族结合，所述tcrβv5亚家族包括：tcrβv5-5*01、tcrβv5-6*01、tcrβv5-4*01、tcrβv5-8*01、tcrβv5-1*01或其变体。
[0642]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不结合tcrβv12，或以小于如美国专利5,861,155中所述的16g8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性与tcrβv12结合。
[0643]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的16g8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性与tcrβv12结合。
[0644]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的16g8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)的亲和力和/或结合特异性与除tcrβv12以外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如，tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01))结合。
[0645]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子不结合tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01，或以小于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2倍、5倍或10倍)的亲和
力和/或结合特异性与tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合。
[0646]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2倍、5倍或10倍)的亲和力和/或结合特异性与tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01结合。
[0647]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子以大于如美国专利5,861,155中所述的鼠抗体c或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2倍、5倍或10倍)的亲和力和/或结合特异性与除tcrβv5-5*01或tcrβv5-1*01之外的tcrβv区(例如，如本文所述的tcrβv区，例如tcrβv6亚家族(例如，tcrβv6-5*01)结合。抗tcrβv6抗体
[0648]
因此，一方面，本公开内容提供了与人tcrβv6(例如，tcrβv6亚家族)结合的抗tcrβv抗体分子，所述tcrβv6亚家族包括：tcrβv6-4*01、tcrβv6-4*02、tcrβv6-9*01、tcrβv6-8*01、tcrβv6-5*01、tcrβv6-6*02、tcrβv6-6*01、tcrβv6-2*01、tcrβv6-3*01或tcrβv6-1*01。在一些实施方案中，tcrβv6亚家族包括tcrβv6-5*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-4*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-4*02或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-9*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-8*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-5*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-6*02或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-6*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-2*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-3*01或其变体。在一些实施方案中，tcrβv6包括tcrβv6-1*01或其变体。
[0649]
在一些实施方案中，tcrβv6-5*01由seq id no：43的核酸序列，或与其具有85％、90％、95％、99％或更高同一性的序列编码。
[0650]
seq id no：43atgagcatcggcctcctgtgctgtgcagccttgtctctcctgtgggcaggtccagtgaatgctggtgtcactcagaccccaaaattccaggtcctgaagacaggacagagcatgacactgcagtgtgcccaggatatgaaccatgaatacatgtcctggtatcgacaagacccaggcatggggctgaggctgattcattactcagttggtgctggtatcactgaccaaggagaagtccccaatggctacaatgtctccagatcaaccacagaggatttcccgctcaggctgctgtcggctgctccctcccagacatctgtgtacttctgtgccagcagttactc
[0651]
在一些实施方案中，tcrβv6-5*01包含seq id no：44的氨基酸序列，或与其具有85％、90％、95％、99％或更高同一性的氨基酸序列。
[0652]
seq id no：44msigllccaalsllwagpvnagvtqtpkfqvlktgqsmtlqcaqdmnheymswyrqdpgmglrlihysvgagitdqgevpngynvsrsttedfplrllsaapsqtsvyfcassy
[0653]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子是非鼠抗体分子，例如人或人源化抗体分子。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子是人抗体分子。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子是人源化抗体分子。
[0654]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体
分子是分离的或重组的。
[0655]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含至少一个来自本文所述抗体(例如选自ah.1至ah.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的抗原结合区，例如可变区或其抗原-结合片段，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
[0656]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如选自ah.1至ah.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的至少一个、两个、三个或四个可变区，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。
[0657]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如选自ah.1至ah.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的或由表3中的核苷酸序列编码的抗体分子)的至少一个或两个重链可变区，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。
[0658]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含具有seq id no：231或3290的共有序列的重链可变区(vh)。
[0659]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如选自ah.1至ah.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的至少一个或两个轻链可变区，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。
[0660]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子包含具有seq id no：230或3289的共有序列的轻链可变区(vl)。
[0661]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括igg4(例如人igg4)的重链恒定区。在又一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括igg1(例如人igg1)的重链恒定区。在一个实施方案中，重链恒定区包含表5中列出的氨基序列或与其基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。
[0662]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括κ轻链恒定区，例如人κ轻链恒定区。在一个实施方案中，轻链恒定区包含表5中列出的氨基序列或与其基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。
[0663]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的抗体，或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区(vh)的至少一个、两个或三个互补决定区(cdr)，或与前述序列中任何序列基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。
[0664]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括来自包含表3所示氨基酸序列或由表3所示核苷酸序列编码的氨基酸序列的重链可变区的至少一个、两个或三个cdr(或所有cdr)。在一个实施方案中，相对于表3中所示的氨基酸序列，或由表3中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或所有cdr)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。
[0665]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中任一个的抗体，例如a-h.1、a-h.2或a-h.68，或表3中所述的抗体，或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的轻链可变区的至少一个、两个或三个互补决定区(cdr)，或与前述序列中任何序列基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。
[0666]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括来自包含表3所示氨基酸序列或由表3所示核苷酸序列编码的氨基酸序列的轻链可变区的至少一个、两个或三个cdr(或所有cdr)。在一个实施方案中，相对于表3中所示的氨基酸序列，或由表3中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或所有cdr)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。
[0667]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括来自包含表3所示氨基酸序列或由表3所示核苷酸序列编码的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr(或所有cdr)。在一个实施方案中，相对于表3中所示的氨基酸序列，或由表3中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或所有cdr)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。
[0668]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如选自ah.1至ah.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的所有六个cdr，或密切相关的cdr，例如相同的或具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)的cdr。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，可以包括本文所述的任何cdr。
[0669]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述的抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的抗体)的重链可变区的根据kabat等人的cdr(例如，根据表3中列出的kabat定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表3所示的kabat等人的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0670]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的抗体)的轻链可变区的根据kabat等人的cdr(例如，根据表3中列出的kabat定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序
列；或相对于根据表3所示的kabat等人的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0671]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括至少一个、两个、三个、四个、五个或六个来自本文所述抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区和轻链可变区的根据kabat等人的cdr(例如，根据表3中列出的kabat定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表3所示的kabat等人的一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0672]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括所有六个来自本文所述抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据kabat等人的cdr(例如，根据表3中列出的kabat定义的所有六个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表3所示的kabat等人的所有六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。在一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，可以包括本文所述的任何cdr。
[0673]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括具有与本文所述抗体(例如选自ah.1至ah.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68)的相应高变环相同的正则结构的至少一个、两个或三个高变环，例如与本文所述的抗体的重链和/或轻链可变域的至少环1和/或环2相同的正则结构。高变环正则结构的描述参见例如chothia等人，(1992)j.mol.biol.227：799-817；tomlinson等人，(1992)j.mol.biol.227：776-798。这些结构可以通过查看这些参考文献中描述的表格来确定。
[0674]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的抗体)的重链可变区的根据chothia等人的cdr(例如，根据表3中列出的chothia定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表3所示的chothia等人的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0675]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的抗体)的轻链可变区的根据chothia等人的cdr(例如，根据表3中列出的chothia定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表3所示的chothia等人的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0676]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括至少一个、两个、三个、四个、五个或六个来自本文所述抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的抗体或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据chothia等人的cdr(例如，根据表3中列出的kabat定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表3所示的chothia等人的一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0677]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括所有六个来自本文所述抗体(例如选自a-h.1至a-h.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或表3中所述的抗体或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据chothia等人的cdr(例如，根据表3中列出的kabat定义的所有六个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表3所示的chothia等人的所有六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。在一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，可以包括本文所述的任何cdr。
[0678]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括根据kabat等人、chothia等人定义或如表3所述的cdr或高变环的组合。
[0679]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子可包含根据kabat和chothia定义的cdr或高变环的任何组合。
[0680]
在一些实施方案中，如表3列出的组合的cdr是包括kabat cdr和chothia cdr的cdr。
[0681]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括cdr或高变环的组合，其被标识为表3中的组合的cdr。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子可包含根据表3中所述的“组合的”cdr的cdr或高变环的任何组合。
[0682]
在一个实施方案中，例如在包含可变区、cdr(例如组合的cdr、chothia cdr或kabat cdr)或本文在例如表3中提及的其他序列的实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子、二价抗体分子、双互补位抗体分子，或包含抗体的抗原结合片段(例如，半抗体或半抗体的抗原结合片段)的抗体分子。在某些实施方案中，抗体分子包括多特异性分子，例如双特异性分子，例如，如本文所述的。
[0683]
在一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括：(i)seq id no：2、seq id no：10或seq id no：11的轻链互补决定区1(lc cdr1)、轻链互补决定区2(lc cdr2)和轻链互补决定区3(lc cdr3)的一个、两个或全部，和/或(ii)seq id no：1或seq id no：9的重链互补决定区1(hc cdr1)、重链互补决定区2(hc cdr2)和重链互补决定区3(hc cdr3)的一个、两个或全部。
[0684]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体
分子包括seq id no：2的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3，以及seq id no：1的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3。
[0685]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括seq id no：10的lccdr1、lc cdr2和lc cdr3，以及seq id no：9的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3。
[0686]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括seq id no：11的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3，以及seq id no：9的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3。
[0687]
在一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括：(i)seq id no：6的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：7的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：8的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)seq id no：3的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：4的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：5的hc cdr3氨基酸序列。
[0688]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括：(i)轻链可变区(vl)，其包括seq id no：6的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：7的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：8的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)重链可变区(vh)，其包括seq id no：3的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：4的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：5的hc cdr3氨基酸序列。
[0689]
在一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括：(i)seq id no：51的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：52的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：53的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)seq id no：45的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：46的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：47的hc cdr3氨基酸序列。
[0690]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括：(i)轻链可变区(vl)，其包括seq id no：51的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：52的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：53的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)重链可变区(vh)，其包括seq id no：45的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：46的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：47的hc cdr3氨基酸序列。
[0691]
在一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括：(i)seq id no：54的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：55的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：56的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)seq id no：48的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：49的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：50的hc cdr3氨基酸序列。
[0692]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体
分子包括：(i)轻链可变区(vl)，其包括seq id no：54的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：55的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：56的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)重链可变区(vh)，其包括seq id no：48的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：49的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：50的hc cdr3氨基酸序列。
[0693]
在一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子的轻链或重链可变构架(例如包括至少fr1、fr2、fr3和任选fr4的区域)可以选自：(a)轻链或重链可变构架，包括至少80％、85％、87％、90％、92％、93％、95％、97％、98％或100％的来自人轻链或重链可变构架的氨基酸残基，例如来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变构架残基；(b)轻链或重链可变构架，包括20％至80％、40％至60％、60％至90％或70％至95％的来自人轻链或重链可变构架的氨基酸残基，例如来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变构架残基；(c)非人构架(例如，啮齿动物构架)；或(d)已被修饰的非人构架，例如去除抗原或细胞毒性决定簇，例如去免疫或部分人源化的非人构架。在一个实施方案中，轻链或重链可变构架区(特别是fr1、fr2和/或fr3)包括与人种系基因的vl或vh区段的构架相同或至少70、75、80、85、87、88、90、92、94、95、96、97、98、99％相同的轻链或重链可变构架序列。
[0694]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含重链可变域，其相对于来自ah.1至ah.68中的任一个(例如a-h.1、a-h.2或a-h.68)的氨基酸序列，例如整个可变区中的fr区的氨基酸序列(例如在图1a中或在seq id no：9中示出的)具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个改变(例如氨基酸置换或缺失)。
[0695]
备选地，或与本文所述的重链置换组合地，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含轻链可变域，其相对于来自ah.1至ah.68中的任一个(例如a-h.1、a-h.2或a-h.68)的氨基酸序列，例如整个可变区中的fr区的氨基酸序列(例如在图1b中或在seq id no：10或seq id no：11中示出的)具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个氨基酸改变(例如氨基酸置换或缺失)。
[0696]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括如图1a所示的一个、两个、三个或四个重链构架区，或与其基本上相同的序列。
[0697]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括如图1b所示的一个、两个、三个或四个轻链构架区，或与其基本上相同的序列。
[0698]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括例如如图1b所示的a-h.1或a-h.2的轻链构架区1。
[0699]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括例如如图1b所示的a-h.1或a-h.2的轻链构架区2。
[0700]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括例如如图1b所示的a-h.1或a-h.2的轻链构架区3。
[0701]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括例如如图1b所示的a-h.1或a-h.2的轻链构架区4。
[0702]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体
分子，包含轻链可变域，其包含构架区，例如构架区1(fr1)，所述构架区包括改变，例如根据kabat编号在位置10处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，fr1在位置10处包含苯丙氨酸，例如丝氨酸至苯丙氨酸置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0703]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含轻链可变域，其包含构架区，例如构架区2(fr2)，所述构架区包括改变，例如根据kabat编号在本文公开的位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，fr2在位置36处包含组氨酸，例如根据kabat编号在位置36处的置换，例如酪氨酸至组氨酸的置换。在一些实施方案中，fr2在位置46处包含丙氨酸，例如根据kabat编号在位置46处的置换，例如精氨酸至丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0704]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含轻链可变域，其包含构架区，例如构架区3(fr3)，所述构架区包括改变，例如根据kabat编号在本文公开的位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，fr3在位置87处包含苯丙氨酸，例如根据kabat编号在位置87处的置换，例如酪氨酸至苯丙氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0705]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括轻链可变域，所述轻链可变域包括：(a)构架区1(fr1)，其在位置10处包含苯丙氨酸，例如根据kabat编号在位置10处的置换，例如丝氨酸至苯丙氨酸置换；(b)构架区2(fr2)，其在位置36处包含组氨酸，例如根据kabat编号在位置36处的置换，例如酪氨酸至组氨酸的置换，以及在位置46处包含丙氨酸，例如根据kabat编号在位置46处的置换，例如精氨酸至丙氨酸的置换；和(c)构架区3(fr3)，其在位置87处包含苯丙氨酸，例如根据kabat编号在位置87处的置换，例如酪氨酸至苯丙氨酸的置换，例如，如seq id no：10的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0706]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括轻链可变域，所述轻链可变域包括：(a)构架区2(fr2)，其在位置36处包含组氨酸，例如根据kabat编号在位置36处的置换，例如酪氨酸至组氨酸置换，以及在位置46处包含丙氨酸，例如根据kabat编号在位置46处的置换，例如精氨酸至丙氨酸的置换；和(b)构架区3(fr3)，其在位置87处包含苯丙氨酸，例如根据kabat编号在位置87处的置换，例如酪氨酸至苯丙氨酸的置换，例如，如seq id no：11的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0707]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括轻链可变域，所述轻链可变域包括：(a)构架区1(fr1)，其包括根据kabat编号在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)；(b)构架区2(fr2)，其包括根据kabat编号在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)；以及(c)构架区3(fr3)，其包括根据kabat编号在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0708]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括例如如图1a所示的a-h.1或a-h.2的重链构架区1。
[0709]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括例如如图1a所示的a-h.1或a-h.2的重链构架区2。
[0710]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括例如如图1a所示的a-h.1或a-h.2的重链构架区3。
[0711]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括例如如图1a所示的a-h.1或a-h.2的重链构架区4。
[0712]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含重链可变域，其包含构架区，例如构架区3(fr3)，所述构架区包括改变，例如根据kabat编号在本文公开的位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，fr3在位置73处包含苏氨酸，例如根据kabat编号在位置73处的置换，例如谷氨酸至苏氨酸的置换。在一些实施方案中，fr3在位置94处包含甘氨酸，例如根据kabat编号在位置94处的置换，例如精氨酸至甘氨酸的置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系重链构架区序列而言的。
[0713]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含重链可变域，其包含构架区，例如构架区3(fr3)，所述构架区在位置73处包含苏氨酸，例如根据kabat编号在位置73处的置换，例如谷氨酸至苏氨酸的置换，以及在位置94处包含甘氨酸，例如根据kabat编号在位置94处的置换，例如精氨酸至甘氨酸的置换，例如，如seq id no：10的氨基酸序列所示。
[0714]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括a-h.1或a-h.2的重链构架区1-4，例如seq id no：9或如图1a和图1b所示。
[0715]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括a-h.1的轻链构架区1-4，例如seq id no：10或如图1a和图1b所示。
[0716]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括a-h.2的轻链构架区1-4，例如seq id no：11或如图1a和图1b所示。
[0717]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括a-h.1的重链构架区1-4(例如seq id no：9)；和a-h.1的轻链构架区1-4(例如seq id no：10)，或如图1a和图1b所示。
[0718]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括a-h.2的重链构架区1-4(例如seq id no：9)；和a-h.2的轻链构架区1-4(例如seq id no：11)，或如图1a和图1b所示。
[0719]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子的重链或轻链可变域或两者包括氨基酸序列，其与本文公开的氨基酸基本上相同，例如与本文所述的抗体(例如选自ah.1至ah.68中的任一个的抗体，例如ah.1、ah.2或ah.68，或如表3中所述的抗体，或由表3中的核苷酸序列编码的抗体)的可变区至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同；或其与本文所述的抗体的可变区相差至少1或5个残基但小于40、30、20或10个残基。
[0720]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包含至少一个、两个、三个或四个抗原结合区(例如，可变区)，该抗原结合区具有表3所列的氨基酸序列或与其基本上相同的序列(例如，序列与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，或与表3中所示序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基)。在另一个实施
方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，包括由具有表3所列的核苷酸序列或与其基本上相同的序列(例如，序列与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，或与表3中所示序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸)的核酸编码的vh和/或vl结构域。
[0721]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括：
[0722]
vh结构域，其包含seq id no：9的氨基酸序列、与seq id no：9的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：9的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或
[0723]
vl结构域，其包含seq id no：10的氨基酸序列、与seq id no：10的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：10的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0724]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子包括：
[0725]
vh结构域，其包含seq id no：9的氨基酸序列、与seq id no：9的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：9的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或
[0726]
vl结构域，其包含seq id no：11的氨基酸序列、与seq id no：11的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：11的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0727]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子是完整的抗体或其片段(例如，fab、f(ab’)2、fv或单链fv片段(scfv))。在实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子是单克隆抗体或具有单一特异性的抗体。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如抗tcrβv6-5*01)抗体分子，也可以是人源化的、嵌合的、骆驼的、鲨鱼的或体外产生的抗体分子。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子是人源化抗体分子。抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcr3v6-5*01)抗体分子的重链和轻链可以是全长的(例如，抗体可以包括至少一条，优选两条完整的重链，以及至少一条，优选两条完整的轻链)或可以包含抗原结合片段(例如fab、f(ab’)2、fv、单链fv片段、单域抗体、双抗体(dab)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单域变体或骆驼抗体)。
[0728]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子为多特异性分子，例如双特异性分子的形式，例如如本文所述。
[0729]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，具有选自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige的重链恒定区的重链恒定区(fc)。在一些实施方案中，fc区选自igg1、igg2、igg3和igg4的重链恒定区。在一些实施方案中，fc区选自igg1或igg2(例如人igg1或igg2)的重链恒定区。在一些实施方案中，重链恒定区是人igg1。在一些实施方案中，fc区包含fc区变体，例如如本文所述。
[0730]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子，具有选自例如κ或λ，优选κ(例如人κ)的轻链恒定区的轻链恒定区。在一个实施方案
中，恒定区被改变，例如使其突变，以修饰抗tcrβv抗体分子例如抗tcrβv6(例如抗tcrβv6-5*01)抗体分子的性质(例如增加或减少以下一项或多项：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能)。例如，相对于例如人igg1，恒定区在位置296(m至y)、298(s至t)、300(t至e)、477(h至k)和478(n至f)处发生突变，以改变fc受体结合(例如突变位置对应于seq id no：212或214的位置132(m至y)、134(s至t)、136(t至e)、313(h至k)和314(n至f)；或seq id no：215、216、217或218的位置135(m至y)、137(s至t)、139(t至e)、316(h至k)和317(n至f))。
[0731]
抗体a-h.1包含含有seq id no：3278氨基酸序列的重链和含有seq id no：72氨基酸序列的轻链。抗体a-h.2包含含有seq id no：3278氨基酸序列的重链和含有seq id no：3279氨基酸序列的轻链。抗体a-h.68包含seq id no：1337的氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。
[0732]
表3中提供了另外的示例性人源化抗tcrb v6抗体。在一些实施方案中，抗tcrβv6是抗体a，例如人源化抗体a(抗体a-h)，如表3中提供的。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体包含表3中提供的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3中的一个或多个(例如，全部三个)；和/或表3中提供的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3中的一个或多个(例如，全部三个)，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体a包含表3中提供的可变重链(vh)和/或可变轻链(vl)，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的序列。
[0733]
表3：结合tcrvb6，例如tcrvb6-5的鼠、嵌合和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。抗体分子包括鼠mab抗体a和人源化mab抗体a-h克隆a-h.1至a-h.68。显示了重链和轻链cdr的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。
[0734]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如抗tcrβv6-5*01)抗体分子包含表3所述抗体的vh和/或vl，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。
[0735]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如抗tcrβv6-5*01)抗体分子包含表3所述抗体的vh和vl，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。
[0738]
在一些实施方案中，本文公开的抗tcrvb抗体具有抗原结合域，该抗原结合域具有含有seq id no：230共有序列的vl，其中位置30是g、e、a或d；位置31是n或d；位置32是r或k；
位置36是y或h；并且/或者位置56是k或s。
[0739]
在一些实施方案中，本文公开的抗tcrvb抗体具有抗原结合域，该抗原结合域具有含有seq id no：231共有序列的vh，其中：位置27是h或t或g或y；位置28是d或t或s；位置30是h或r或d或k或t；位置31是l或d或k或t或n；位置32是w或f或t或i或y或g；位置49是r或w；位置50是v或i或f；位置51是f或s或y；位置52是a或p；位置56是n或s；位置57是t或v或y或i；位置58是k或r；位置97为g或v；位置99是y或i；位置102是y或a；并且/或者位置103是d或g。抗tcrβv12抗体
[0740]
因此，一方面，本公开内容提供了与人tcrβv12，例如，tcrβv12亚家族结合的抗tcrβv抗体分子，所述tcrβv12亚家族包括：tcrβv12-4*01，tcrβv12-3*01或tcrβv12-5*01。在一些实施方案中，tcrβv12亚家族包括tcrβv12-4*01。在一些实施方案中，tcrβv12亚家族包括tcrβv12-3*01。
[0741]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子是非鼠抗体分子，例如人或人源化抗体分子。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子是人抗体分子。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子是人源化抗体分子。
[0742]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子是分离的或重组的。
[0743]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表4中所述抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的至少一个抗原结合区，例如可变区或其抗原结合片段，或与前述序列中任何序列基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)。
[0744]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表4中所述抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的至少一个、两个、三个或四个可变区，或与前述序列中任何序列基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)。
[0745]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表4中所述抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的至少一个或两个重链可变区，或与前述序列中任何序列基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)。
[0746]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包含来自本文所述抗体(例如，表4中所述抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的至少一个或两个轻链可变区，或与前述序列中任何序列基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)。
[0747]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包含igg4(例如人igg4)的重链恒定区。在另一实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包含igg1(例如人igg1)的重链恒定区。在一个实施方案中，重链恒定区包含表5中列出的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)。
[0748]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包括κ轻链恒定
区，例如人κ轻链恒定区。在一个实施方案中，轻链恒定区包含表5中列出的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)。
[0749]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如表4中所述的抗体或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区的至少一个、两个或三个互补决定区(cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。
[0750]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包括来自包含表4中所示的氨基酸序列，或由表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列的重链可变区的至少一个、两个或三个cdr(或所有cdr)。在一个实施方案中，相对于表4中所示的氨基酸序列，或由表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或所有cdr)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。
[0751]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包括来自本文所述抗体(例如表4中所述的或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的轻链可变区的至少一个、两个或三个互补决定区(cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列。
[0752]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包括来自包含表4中所示的氨基酸序列，或由表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列的轻链可变区的至少一个、两个或三个cdr(或所有cdr)。在一个实施方案中，相对于表4中所示的氨基酸序列，或由表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或所有cdr)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。
[0753]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包括来自包含表4中所示的氨基酸序列，或由表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr(或所有cdr)。在一个实施方案中，相对于表4中所示的氨基酸序列，或由表4中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，一个或多个cdr(或所有cdr)具有1、2、3、4、5、6个或更多个改变，例如氨基酸置换或缺失。
[0754]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表4中所述的抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的所有六个cdr，或密切相关的cdr，例如相同cdr或具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)的cdr。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子可以包括本文所述的任何cdr。
[0755]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述的抗体(例如表4中所述选定的抗体)的重链可变区的根据kabat等人的cdr(例如，根据表4中列出的kabat定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表4所示的kabat等人的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0756]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述的抗体(例如表4中所述的抗体)的轻链可变区的根据kabat等人的
cdr(例如，根据表4中列出的kabat定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表4所示的kabat等人的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0757]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表4中所述的抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区和轻链可变区的根据kabat等人的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr(例如，根据表4所列的kabat定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr)；或与前述序列中任何序列基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)；或相对于表4中所示的根据kabat等人的一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0758]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括所有六个来自本文所述的抗体(例如表4中所述的抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区和轻链可变区的根据kabat等人的cdr(例如，根据表4中列出的kabat定义的所有六个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表4所示的kabat等人的所有六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，可以包括本文所述的任何cdr。
[0759]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括至少一个、两个或三个具有与本文所述抗体(例如表4中所述的抗体)的相应高变环相同的正则结构的高变环，例如与本文所述抗体的重链和/或轻链可变域的至少环1和/或环2具有相同的正则结构。高变环正则结构的描述参见，例如chothia等人，(1992)j.mol.biol.227：799-817；tomlinson等人，(1992)j.mol.biol.227：776-798。这些结构可以通过查看这些参考文献中描述的表来确定。
[0760]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述的抗体(例如如表4中所述选定的抗体)的重链可变区的根据chothia等人的cdr(例如，根据表4中列出的chothia定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表4所示的chothia等人的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0761]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述的抗体(例如如表4中所述的抗体)的轻链可变区的根据chothia等人的cdr(例如，根据表4中列出的chothia定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)的序列；或相对于根据表4所示的chothia等人的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0762]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表4中所述的抗体，或由表4中的核苷酸编码的抗体)的重链可变区和轻链可变区的根据chothia等人的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr(例如，根据表4所列的chothia定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr)；或与前述序列中任何序列基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)；或相对于表4中所示的根据chothia等人的一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0763]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表4中所述的抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区和轻链可变区的根据chothia等人的所有六个cdr(例如，根据表4所列的kabat定义的所有六个cdr)；或与前述序列中任何序列基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)；或相对于表4中所示的根据chothia等人的所有六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子可以包括本文所述的任何cdr。
[0764]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如表4中所述选定的抗体)的重链可变区的根据组合的cdr的cdr(例如，根据表4中列出的组合的cdr定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列；或相对于根据表4所示的组合的cdr的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0765]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如表4中所述的抗体)的轻链可变区的根据组合的cdr的cdr(例如，根据表4中列出的组合的cdr定义的至少一个、两个或三个cdr)，或与上述序列中的任一个基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列；或相对于根据表4所示的组合的cdr的一个、二个或三个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不大于两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0766]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表4中所述的抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区和轻链可变区的根据组合的cdr的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr(例如，根据表4所列的组合的cdr定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr)；或与前述序列中任何序列基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)；或相对于表4中所示的根据组合的cdr的一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[0767]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括来自本文所述抗体(例如表4中所述的抗体，或由表4中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区和轻链可变区的根据组合的cdr的所有六个cdr(例如，根据表4所列的组合的cdr定义的所有六个
cdr)；或与前述序列中任何序列基本上相同的序列(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同)；或相对于表4中所示的根据组合的cdr的所有六个cdr，其具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子可以包括本文所述的任何cdr。
[0768]
在一些实施方案中，表3中所列出的组合的cdr为包括kabatcdr和chothia cdr的cdr。
[0769]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括cdr或高变环的组合，其被标识为表3中的组合的cdr。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，可以包含cdr或高变环的任何组合，如表3中所述的“组合的”cdr。
[0770]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括根据kabat等人和chothia等人定义的或如表3所述的cdr或高变环的组合。
[0771]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，可以包含根据kabat和chothia定义的cdr或高变环的任何组合。
[0772]
在一个实施方案中，例如在包含可变区、cdr(例如组合的cdr、chothia cdr或kabat cdr)或本文在例如表4中提及的其他序列的实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子、二价抗体分子、双互补位抗体分子，或包含抗体的抗原结合片段(例如，半抗体或半抗体的抗原结合片段)的抗体分子。在某些实施方案中，抗体分子包括多特异性分子，例如双特异性分子，例如，如本文所述的。
[0773]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：(i)seq id no：16、seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的轻链互补决定区1(lc cdr1)、轻链互补决定区2(lc cdr2)和轻链互补决定区3(lc cdr3)中的一个、两个或全部，和/或(ii)seq id no：15、seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的重链互补决定区1(hc cdr1)、重链互补决定区2(hc cdr2)和重链互补决定区3(hc cdr3)中的一个、两个或全部。
[0774]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：(i)seq id no：20的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：21的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：22的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)seq id no：17的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：18的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：19的hc cdr3氨基酸序列。
[0775]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：(i)轻链可变区(vl)，其包括seq id no：20的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：21的lc cdr2氨基酸序列，和seq id no：2的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)重链可变区(hl)，其包括seq id no：17的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：18的hc cdr2氨基酸序列，和seq id no：19的hc cdr3氨基酸序列。
[0776]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：(i)seq id no：63的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：64的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：65的lc cdr3氨基酸序列；和/或
(ii)seq id no：57的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：58的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：59的hc cdr3氨基酸序列。
[0777]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：(i)轻链可变区(vl)，其包括seq id no：63的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：64的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：65的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)重链可变区(hl)，其包括seq id no：57的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：58的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：59的hc cdr3氨基酸序列。
[0778]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：(i)seq id no：66的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：67的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：68的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)seq id no：60的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：61的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：62的hc cdr3氨基酸序列。
[0779]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：(i)轻链可变区(vl)，其包括seq id no：63的lc cdr1氨基酸序列、seq id no：64的lc cdr2氨基酸序列，或seq id no：65的lc cdr3氨基酸序列；和/或(ii)重链可变区(hl)，其包括seq id no：57的hc cdr1氨基酸序列、seq id no：58的hc cdr2氨基酸序列，或seq id no：59的hc cdr3氨基酸序列。
[0780]
在一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子的轻链或重链可变构架(例如包括至少fr1、fr2、fr3和任选fr4的区域)可以选自：(a)轻链或重链可变构架，包括至少80％、85％、87％、90％、92％、93％、95％、97％、98％或100％的来自人轻链或重链可变构架的氨基酸残基，例如来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变构架残基；(b)轻链或重链可变构架，包括20％至80％、40％至60％、60％至90％或70％至95％的来自人轻链或重链可变构架的氨基酸残基，例如来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变构架残基；(c)非人构架(例如，啮齿动物构架)；或(d)已被修饰的非人构架，例如去除抗原或细胞毒性决定簇，例如去免疫或部分人源化的非人构架。在一个实施方案中，轻链或重链可变构架区(特别是fr1、fr2和/或fr3)包括与人种系基因的vl或vh区段的构架相同或至少70、75、80、85、87、88、90、92、94、95、96、97、98、99％相同的轻链或重链可变构架序列。
[0781]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包含重链可变域，其相对于表4所述氨基酸序列，例如整个可变区(例如图2a和图2b所示)中的fr区的氨基酸序列，或在seq id no：23-25中的氨基酸序列具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个改变(例如氨基酸置换或缺失)。
[0782]
备选地，或与本文所述的重链置换组合，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包含轻链可变域，其相对于本文所述抗体的氨基酸序列，例如整个可变区(例如图2a和图2b所示)中的fr区的氨基酸序列，或在seq id no：26-30中的氨基酸序列具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个氨基酸改变(例如氨基酸置换或缺失)。
[0783]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括如图2a所示的一个、两个、三个或四个重链构架区，或与其基本上相同的序列。
[0784]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括如图2b所示的一个、两个、三个或四个轻链构架区，或与其基本上相同的序列。
[0785]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2b所示的轻链构架区1。
[0786]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2b所示的轻链构架区2。
[0787]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2b所示的轻链构架区3。
[0788]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2b所示的轻链构架区4。
[0789]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(fr1)，所述构架区包括改变，例如根据kabat编号在本文公开的一个或多个(例如所有)位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，fr1在位置1处包含天冬氨酸，例如根据kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换。在一些实施方案中，fr1在位置2处包含天冬酰胺，例如根据kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换、丝氨酸至天冬酰胺置换或酪氨酸至天冬酰胺置换。在一些实施方案中，fr1在位置4处包含亮氨酸，例如根据kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换。
[0790]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(fr1)，所述构架区包括根据kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换；根据kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换、丝氨酸至天冬酰胺置换或酪氨酸至天冬酰胺置换；和根据kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(fr1)，所述构架区包括根据kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换；和根据kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换、丝氨酸至天冬酰胺置换或酪氨酸至天冬酰胺置换。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(fr1)，所述构架区包括根据kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换；和根据kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区1(fr1)，所述构架区包括根据kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换、丝氨酸至天冬酰胺置换或酪氨酸至天冬酰胺置换；和根据kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0791]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(fr3)，所述构架区包括改变，例如根据kabat编号在本文公开的一个或多个(例如所有)位置处的置换(例如，保守置换)。在一些实施方案中，fr3在位置66处包含甘氨酸，例如根据kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换，或丝氨酸至甘氨酸置换。在一些实施方案中，fr3在位置69处包含天冬酰胺，例如根据kabat编号在位置69处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换。在一些实施方案中，fr3在位置71处包含酪氨酸，
例如根据kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，或丙氨酸至酪氨酸置换。
[0792]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(fr3)，所述构架区包括根据kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换，或丝氨酸至甘氨酸置换；和根据kabat编号在位置69处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(fr3)，所述构架区包括根据kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换，或丝氨酸至甘氨酸置换；和根据kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，或丙氨酸至酪氨酸置换。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(fr3)，所述构架区包括根据kabat编号在位置69处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换；和根据kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，或丙氨酸至酪氨酸置换。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，其包含构架区，例如构架区3(fr3)，所述构架区包括根据kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换，或丝氨酸至甘氨酸置换；根据kabat编号在位置69处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换；和根据kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，或丙氨酸至酪氨酸置换。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0793]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，所述轻链包含构架区1(fr1)，其包括根据kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换；以及构架区3(fr3)，其包括根据kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换和根据kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，例如如seq id no：26的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0794]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，所述轻链包含：(a)构架区1(fr1)，其包括根据kabat编号在位置1处的置换，例如丙氨酸至天冬氨酸置换，以及根据kabat编号在位置2处的置换，例如异亮氨酸至天冬酰胺置换；和(b)构架区3(fr3)，其包括根据kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换，以及根据kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，例如如seq id no：27的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0795]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，所述轻链包含：(a)构架区1(fr1)，其包括根据kabat编号在位置2处的置换，例如丝氨酸至天冬酰胺置换，以及根据kabat编号在位置4处的置换，例如蛋氨酸至亮氨酸置换；和(b)构架区3(fr3)，其包括根据kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换，以及根据kabat编号在位置71处的置换，例如苯丙氨酸至酪氨酸置换，例如如seq id no：28的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0796]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，所述轻链包含：(a)构架区1(fr1)，其包括根据kabat编号在位置2处的置换，例如丝氨酸至天冬酰胺置换；以及(b)构架区3(fr3)，其包括根据kabat编号在位置66处的置换，例如赖氨酸至甘氨酸置换；根据kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换，以及根据kabat
编号在位置71处的置换，例如丙氨酸至酪氨酸置换，例如如seq id no：29的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0797]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链，所述轻链包含：(a)构架区1(fr1)，其包括根据kabat编号在位置2处的置换，例如酪氨酸至天冬酰胺置换；以及(b)构架区3(fr3)，其包括根据kabat编号在位置66处的置换，例如丝氨酸至甘氨酸置换；根据kabat编号在位置69处的置换，例如苏氨酸至天冬酰胺置换；和根据kabat编号在位置71处的置换，例如丙氨酸至酪氨酸置换，例如如seq id no：29的氨基酸序列所示。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0798]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括轻链可变域，所述轻链可变域包含：(a)构架区1(fr1)，其包括根据kabat编号的在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)；和(b)构架区3(fr3)，其包括根据kabat编号的在本文公开的一个或多个(例如全部)位置处的改变，例如置换(例如保守置换)。在一些实施方案中，置换是相对于人种系轻链构架区序列而言的。
[0799]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2a所示的重链构架区1。
[0800]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2a所示的重链构架区2。
[0801]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2a所示的重链构架区3。
[0802]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2a所示的重链构架区4。
[0803]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2a所示的重链构架区1-4，例如seq id no：20-23。
[0804]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括例如如图2b所示的轻链构架区1-4，例如seq id no：26-30。
[0805]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括重链构架区1-4，例如seq id no：23-25；和轻链构架区1-4，例如seq id no：26-30，或图2a和图2b所示的那些。
[0806]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子的重链或轻链可变域或两者包含氨基酸序列，其与本文公开的氨基酸基本上相同，例如与本文所述抗体(例如，表4所述的抗体，或由表4的核苷酸序列编码的抗体)的可变区至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更加相同；或与本文所述抗体的可变区相差至少1或5个残基，但相差少于40、30、20或10个残基。
[0807]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包含至少一个、两个、三个或四个具有表4所列的氨基酸序列的抗原结合区(例如，可变区)，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的序列，或与表4中所示序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基)。在另一个实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子，包括由具有表4所列的核苷酸序列的核酸编码的vh和/或vl结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的序列，或与表4
中所示序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸)。
[0808]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0809]
vh结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的氨基酸序列、与seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：23、seq id no：24或seq id no：25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或
[0810]
vl结构域，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的氨基酸序列、与seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：26、seq id no：27、seq id no：28、seq id no：29或seq id no：30的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0811]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0812]
vh结构域，其包含：seq id no：23的氨基酸序列、与seq id no：23的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：23的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0813]
vl结构域，其包含：seq id no：26的氨基酸序列、与seq id no：26的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：26的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0814]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0815]
vh结构域，其包含：seq id no：23的氨基酸序列、与seq id no：23的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：23的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0816]
vl结构域，其包含：seq id no：27的氨基酸序列、与seq id no：27的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：27的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0817]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0818]
vh结构域，其包含：seq id no：23的氨基酸序列、与seq id no：23的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：23的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0819]
vl结构域，其包含：seq id no：28的氨基酸序列、与seq id no：28的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：28的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0820]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0821]
vh结构域，其包含：seq id no：23的氨基酸序列、与seq id no：23的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：23的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0822]
vl结构域，其包含：seq id no：29的氨基酸序列、与seq id no：29的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：29的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0823]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0824]
vh结构域，其包含：seq id no：23的氨基酸序列、与seq id no：23的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：23的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0825]
vl结构域，其包含：seq id no：30的氨基酸序列、与seq id no：30的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：30的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0826]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0827]
vh结构域，其包含：seq id no：24的氨基酸序列、与seq id no：24的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：24的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0828]
vl结构域，其包含：seq id no：26的氨基酸序列、与seq id no：26的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：26的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0829]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0830]
vh结构域，其包含：seq id no：24的氨基酸序列、与seq id no：24的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：24的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0831]
vl结构域，其包含：seq id no：27的氨基酸序列、与seq id no：27的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：27的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0832]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0833] vh结构域，其包含：seq id no：24的氨基酸序列、与seq id no：24的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：24的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0834]
vl结构域，其包含：seq id no：28的氨基酸序列、与seq id no：28的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：28的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0835]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0836]
vh结构域，其包含：seq id no：24的氨基酸序列、与seq id no：24的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：24的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0837]
vl结构域，其包含：seq id no：29的氨基酸序列、与seq id no：29的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：29的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0838]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0839]
vh结构域，其包含：seq id no：24的氨基酸序列、与seq id no：24的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：24的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0840]
vl结构域，其包含：seq id no：30的氨基酸序列、与seq id no：30的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：30的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0841]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0842]
vh结构域，其包含：seq id no：25的氨基酸序列、与seq id no：25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0843]
vl结构域，其包含：seq id no：26的氨基酸序列、与seq id no：26的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：26的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0844]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0845]
vh结构域，其包含：seq id no：25的氨基酸序列、与seq id no：25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0846]
vl结构域，其包含：seq id no：27的氨基酸序列、与seq id no：27的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：27的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0847]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0848]
vh结构域，其包含：seq id no：25的氨基酸序列、与seq id no：25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0849]
vl结构域，其包含：seq id no：28的氨基酸序列、与seq id no：28的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：28的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0850]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0851]
vh结构域，其包含：seq id no：25的氨基酸序列、与seq id no：25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0852]
vl结构域，其包含：seq id no：29的氨基酸序列、与seq id no：29的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：29的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0853]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子包括：
[0854]
vh结构域，其包含：seq id no：25的氨基酸序列、与seq id no：25的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：25的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和
[0855]
vl结构域，其包含：seq id no：30的氨基酸序列、与seq id no：30的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的氨基酸序列，或与seq id no：30的氨基酸序列相差不超过1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
[0856]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子是完全抗体或其
片段(例如，fab、f(ab’)2、fv或单链fv片段(scfv))。在实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv6(例如，抗tcrβv6-5*01)抗体分子是单克隆抗体或具有单一特异性的抗体。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子也可以是人源化的、嵌合的、骆驼的、鲨鱼的或体外产生的抗体分子。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子是人源化抗体分子。抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子的重链和轻链可以是全长的(例如，抗体可以包括至少一条，优选两条完整的重链，以及至少一条，优选两条完整的轻链)或可以包含抗原结合片段(例如fab、f(ab’)2、fv、单链fv片段、单域抗体、双抗体(dab)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单域变体或骆驼抗体)。
[0857]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子为多特异性分子，例如双特异性分子的形式，例如，如本文所述的。
[0858]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子具有选自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige的重链恒定区的重链恒定区(fc)。在一些实施方案中，fc区选自igg1、igg2、igg3和igg4的重链恒定区。在一些实施方案中，fc区选自igg1或igg2(例如人igg1或igg2)的重链恒定区。在一些实施方案中，重链恒定区是人igg1。
[0859]
在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子，例如抗tcrβv12抗体分子具有选自例如κ或λ，优选κ(例如人κ)的轻链恒定区的轻链恒定区。在一个实施方案中，恒定区被改变，例如使其突变，以修饰抗tcrβv抗体分子例如抗tcrβv12抗体分子的性质(例如增加或减少以下一项或多项：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能)。例如，恒定区在位置296(m至y)、298(s至t)、300(t至e)、477(h至k)和478(n至f)处发生突变，以改变fc受体结合(例如突变位置对应于seq id no：212或214的位置132(m至y)、134(s至t)、136(t至e)、313(h至k)和314(n至f)；或seq id no：215、216、217或218的位置135(m至y)、137(s至t)、139(t至e)、316(h至k)和317(n至f))。
[0860]
抗体b-h.1包含含有seq id no：3280氨基酸序列的第一链和含有seq id no：3281氨基酸序列的第二链。
[0861]
本公开的另外的示例性抗tcrβv12抗体在表4中提供。在一些实施方案中，抗tcrβv12是抗体b，例如人源化抗体b(抗体b-h)，如表4中所提供。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体包含表4中提供的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3中的一个或多个(例如，全部三个)；和/或表4中提供的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3中的一个或多个(例如，全部三个)，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体b包含表4中提供的可变重链(vh)和/或可变轻链(vl)，或与其具有至少95％同一性的序列。
[0862]
表4：结合tcrvb 12，例如tcrvb 12-3或tcrvb 12-4的鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。抗体分子包括鼠mab抗体b和人源化mab抗体b-h.1至b-h.6。显示了重链和轻链cdr的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。
表5.人igg重链和人κ轻链的恒定区氨基酸序列
抗tcrβv5抗体
[0863]
因此，一方面，本公开内容提供了与人tcrβv5结合的抗tcrβv抗体分子。在一些实施方案中，tcrβv5亚家族包括tcrβv5-5*01、tcrβv5-6*01、tcrβv5-4*01、tcrβv5-8*01、tcrβv5-1*01或其变体。
[0864]
本公开的示例性抗tcrβv5抗体在表6中提供。在一些实施方案中，抗tcrβv5是抗体c，例如人源化抗体c(抗体c-h)，如表6中所提供。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体包含表6
中提供的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3中的一个或多个(例如，全部三个)；和/或表6中提供的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3中的一个或多个(例如，全部三个)，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体c包含表6中提供的可变重链(vh)和/或可变轻链(vl)，或与其具有至少95％同一性的序列。表6：抗tcrβv5抗体的氨基酸序列
[0865]
结合tcrvb 5(例如，tcrvb 5-5或tcrvb 5-6)的鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。显示了重链和轻链cdr的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。
[0866]
本公开的示例性抗tcrβv5抗体在表7中提供。在一些实施方案中，抗tcrβv5是抗体e，例如人源化抗体e(抗体e-h)，如表7中所提供。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体包含表7
中提供的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3中的一个或多个(例如，全部三个)；和/或表7中提供的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3中的一个或多个(例如，全部三个)，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体e包含表7中提供的可变重链(vh)和/或可变轻链(vl)，或与其具有至少95％同一性的序列。
[0867]
在一些实施方案中，抗体e包含含有seq id no：3284的氨基酸序列的重链和/或含有seq id no：3285的氨基酸序列的轻链，或与其具有至少95％同一性的序列。表7：抗tcrβv5抗体的氨基酸序列
[0868]
结合tcrvb 5(例如，tcrvb 5-5或tcrvb 5-6)的鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。显示了重链和轻链cdr的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。
[0869]
在一些实施方案中，抗tcrβv5抗体分子包含表6中所述抗体的vh和/或vl，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。
[0870]
在一些实施方案中，抗tcrβv5抗体分子包含表6中所述抗体的vh和vl，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。
[0871]
在一些实施方案中，抗tcrβv5抗体分子包含表7中所述抗体的vh和/或vl，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。
[0872]
在一些实施方案中，抗tcrβv5抗体分子包含表7中所述抗体的vh和vl，或与其具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性的序列。抗tcrβv10抗体
[0873]
因此，一方面，本公开内容提供了与人tcrβv10亚家族成员结合的抗tcrβv抗体分子。在一些实施方案中，tcrβv10亚家族也称为tcrβv12。在一些实施方案中，tcrβv10亚家族包括：tcrβv10-1*01、tcrβv10-1*02、tcrβv10-3*01或tcrβv10-2*01或其变体。
[0874]
本公开的示例性抗tcrβv10抗体在表8中提供。在一些实施方案中，抗tcrβv10是抗体d，例如人源化抗体d(抗体d-h)，如表8中所提供。在一些实施方案中，抗体d包含表8中提供的一个或多个(例如，三个)轻链cdr和/或一个或多个(例如，三个)重链cdr，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体d包含表8中提供的可变重链(vh)和/或可变轻链(vl)，或与其具有至少95％同一性的序列。表8：抗tcrβv10抗体的氨基酸序列
[0875]
结合tcrbv 10(例如，tcrbv 10-1、tcrbv 10-2或tcrbv 10-3)的鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。显示了重链和轻链cdr的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。
cdr1、lc cdr2和lc cdr3中的一个或多个(例如，所有三个)；和/或表9中提供的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3中的一个或多个(例如，所有三个)，或与其具有至少95％同一性的序列。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体包含表9中提供的可变重链(vh)和/或可变轻链(vl)，或与其具有至少95％同一性的序列。表9：另外的抗tcrβv抗体的氨基酸序列
[0879]
公开了与各种tcrvb家族结合的鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。显示了重链和轻链cdr的氨基酸，以及重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。表中公开的抗体包括mpb2d5、cas1.1.3、immu222、rea1062和jovi-3。mpb2d5结合人tcrβv 20-1(tcrβv2，根据旧命名法)。cas1.1.3结合人tcrβv 27(tcrβv14，根据旧命名法)。immu 222结合人tcrβv 6-5、tcrβv 6-6或tcrβv 6-9(tcrβv13.1，根据旧命名法)。rea1062结合人tcrβv 5-1。jovi-3结合人tcrβv 28(tcrβv3.1，根据旧命名法)。
抗tcrvβ抗体效应子功能和fc变体
[0880]
在一些实施方案中，本文公开的抗tcrvβ抗体包含fc区，例如，如本文所述。在一些实施方案中，fc区是野生型fc区，例如野生型人fc区。在一些实施方案中，fc区包含变体，例如包含fc区中至少一个氨基酸残基的添加、置换或缺失的fc区，这导致例如对至少一种fc受体的降低或消融的亲和力。
[0881]
抗体的fc区与许多受体或配体相互作用，所述受体或配体包括fc受体(例如，fcγri、fcγriia、fcγriiia)、补体蛋白ciq和其他分子，例如蛋白a和g。这些相互作用对于包括：抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)、抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)和补体依赖性细胞毒性(cdc)的多种效应子功能和下游信号传导事件至关重要。
[0882]
在一些实施方案中，包含变体fc区的抗tcrvβ抗体对fc受体(例如，本文所述的fc受体)具有降低的，例如消融的亲和力。在一些实施方案中，将降低的亲和力与具有野生型fc区的其他方面相似的抗体进行比较。
[0883]
在一些实施方案中，包含变体fc区的抗tcrvβ抗体具有以下一种或多种特性：(1)降低的效应子功能(例如，降低的adcc、adcp和/或cdc)；(2)减少的与一种或多种fc受体的结合；和/或(3)减少的与c1q补体的结合。在一些实施方案中，将特性(1)-(3)中任一项或全
部的降低与具有野生型fc区的其他方面相似的抗体进行比较。
[0884]
在一些实施方案中，包含变体fc区的抗tcrvβ抗体对人fc受体例如fcγr i、fcγr ii和/或fcγr iii具有降低的亲和力。在一些实施方案中，包含变体fc区的抗tcrvβ抗体包含人igg1区或人igg4区。
[0885]
在一些实施方案中，包含变体fc区的抗tcrvβ抗体激活和/或扩增t细胞，例如，如本文所述。在一些实施方案中，包含变体fc区的抗tcrvβ抗体具有本文所述的细胞因子谱，例如，与结合除tcrβv区(“非tcrβv结合的t细胞衔接物”)之外的受体或分子的t细胞衔接物的细胞因子谱不同的细胞因子谱。在一些实施方案中，非tcrβv结合的t细胞衔接物包含结合cd3分子(例如cd3ε(cd3e)分子)的抗体；或tcr阿尔法(tcrα)分子。
[0886]
示例性的fc区变体在表10中提供并且还在saunders o，(2019)；frontiers in immunology；第10卷，第1296章中公开，其全部内容通过引用并入本文。
[0887]
在一些实施方案中，本文公开的抗tcrvβ抗体包含表10中公开的fc区变体例如突变的任何一种或全部或任何组合。在一些实施方案中，本文公开的抗tcrvβ抗体包含asn297ala(n297a)突变。在一些实施方案中，本文公开的抗tcrvβ抗体包含leu234a1a/leu235ala(lala)突变。表10：示例性fc修饰
抗体分子
[0888]
在一个实施方案中，抗体分子结合感染性疾病抗原，例如，如本文所述。在一些实施方案中，抗原是例如，细菌、病毒、真菌或疟疾抗原。在其他实施方案中，抗体分子结合免疫细胞抗原，例如哺乳动物(例如人)免疫细胞抗原。例如，抗体分子特异性结合感染性疾病抗原或免疫细胞抗原上的表位，例如线性或构象表位。
[0889]
在一个实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子，并结合单个表位。例如，单特异性抗体分子具有多个免疫球蛋白可变域序列，每个序列结合相同的表位。
[0890]
在一个实施方案中，抗体分子是多特异性或多功能抗体分子，例如，其包含多个免疫球蛋白可变域序列，其中所述多个中的第一免疫球蛋白可变域序列对第一表位具有结合特异性，而所述多个中的第二免疫球蛋白可变域序列对第二表位具有结合特异性。在一个实施方案中，第一表位和第二表位在相同抗原例如相同蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基)上。在一个实施方案中，第一表位和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一表位和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一表位和第二表位在不同的抗原上，例如不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)上。在一个实施方案中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变域。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。
[0891]
在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不超过两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变域序列。在一个实施方案中，第一表位和第二表位在相同的抗原上，例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基)上。在一个实施方案中，第一表位和第二表位重叠。在一个实施方案中，第一表位和第二表位不重叠。在一个实施方案中，第一表位和第二表位在不同的抗原上，例如，不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基)上。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的重链可变域序列和轻链可变域序列以及对第二表位具有结合特异性的重链可变域序列和轻链可变域序列。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体和对第二表位具有结合特异性的半抗体。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段和对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在一个实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的scfv或fab或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的scfv或fab或其片段。
[0892]
在一个实施方案中，抗体分子包含双抗体、单链分子以及抗体的抗原结合片段(例如，fab、f(ab’)2和fv)。例如，抗体分子可以包括重(h)链可变域序列(在本文中缩写为vh))和轻(l)链可变域序列(在本文中缩写为vl)。在一个实施方案中，抗体分子包含重链和轻链或由其组成(在本文中称为半抗体)。在另一个实例中，抗体分子包括两个重(h)链可变域序列和两个轻(l)链可变域序列，从而形成两个抗原结合位点，例如fab、fab
′
、f(ab’)2、fc、fd、fd’、fv、单链抗体(例如scfv)、单可变域抗体、双抗体(dab)(双价和双特异性)和嵌合(例如人源化)抗体，它们可以通过修饰完整抗体而产生或使用重组dna技术从头合成。这些功能性抗体片段保留与它们各自的抗原或受体选择性结合的能力。抗体和抗体片段可以来自任何种类的抗体，包括但不限于igg、iga、igm、igd和ige，以及来自抗体的任何亚类(例如igg1、igg2、igg3和igg4)。抗体分子的制剂可以是单克隆的或多克隆的。抗体分子也可以是人的、人源化的、cdr移植的或体外产生的抗体。抗体可以具有选自例如igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区。抗体还可具有选自例如κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白”(ig)在本文中可以与术语“抗体”互换使用。
[0893]
抗体分子的抗原结合片段的实例包括：(i)fab片段，一种由vl、vh、cl和ch1结构域
65(hcdr2)和95-102(hcdr3)；而轻链可变域(vl)中的cdr氨基酸残基编号为24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)和89-97(lcdr3)。在chothia下，vh中的cdr氨基酸编号为26-32(hcdr1)、52-56(hcdr2)和95-102(hcdr3)；而vl中的氨基酸残基编号为26-32(lcdr1)、50-52(lcdr2)和91-96(lcdr3)。
[0901]
每个vh和vl通常包括三个cdr和四个fr，它们按以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。
[0902]
抗体分子可以是多克隆或单克隆抗体。
[0903]
如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单一分子组成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物显示出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术或不使用杂交瘤技术的方法(例如重组方法)制备。
[0904]
抗体可以重组产生，例如通过噬菌体展示或通过组合方法产生。
[0905]
用于产生抗体的噬菌体展示和组合方法在本领域中是已知的(如在例如ladner等人，美国专利号5,223,409；kang等人，国际公开号wo 92/18619；dower等人，国际公开号wo 91/17271；winter等人，国际公开号wo92/20791；mark1and等人，国际公开号wo 92/15679；breitling等人，国际公开号wo 93/01288；mccafferty等人，国际公开号wo 92/01047；garrard等人，国际公开号wo 92/09690；ladner等人，国际公开号wo 90/02809；fuchs等人，(1991)bio/technology 9：1370-1372；hay等人，(1992)hum antibod hybridomas 3：81-85；huse等人，(1989)science 246：1275-1281；griffths等人，(1993)embo j 12：725-734；hawkins等人，(1992)j mol biol 226：889-896；clackson等人，(1991)nature 352：624-628；gram等人，(1992)pnas 89：3576-3580；garrad等人，(1991)bio/technology 9：1373-1377；hoogenboom等人，(1991)nuc acidres 19：4133-4137；以及barbas等人，(1991)pnas88：7978-7982中所述，其全部内容通过引用并入本文)。
[0906]
在一个实施方案中，抗体是完全人抗体(例如，在已被基因工程化以从人免疫球蛋白序列产生抗体的小鼠中制备的抗体)，或非人抗体，例如啮齿动物(小鼠或大鼠)、山羊、灵长类动物(例如猴)、骆驼的抗体。优选地，非人抗体是啮齿动物抗体(小鼠或大鼠抗体)。产生啮齿动物抗体的方法是本领域已知的。
[0907]
可以使用携带人免疫球蛋白基因而非小鼠系统的转基因小鼠来产生人单克隆抗体。这些用感兴趣的抗原免疫的转基因小鼠的脾细胞被用于产生杂交瘤，该杂交瘤分泌对人蛋白质的表位具有特定亲和力的人mab(参见，例如，wood等人，国际申请wo 91/00906，kucherlapati等人，pct公开wo 91/10741；lonberg等人，国际申请wo 92/03918；kay等人，国际申请92/03917；lonberg，n等人，1994nature 368：856-859；green，l.l.等人，1994nature genet.7：13-21；morrison，s.l.等人，1994proc.natl.acad.sci.usa 81：6851-6855；bruggeman等人，1993year immunol 7：33-40；tuaillon等人，1993pnas 90：3720-3724；bruggeman等人，1991eur j immunol 21：1323-1326)。
[0908]
抗体分子可以是在非人类生物体例如大鼠或小鼠中产生可变区或其一部分例如cdr的抗体分子。嵌合的、cdr移植的和人源化的抗体在本发明之内。在非人类生物体例如大鼠或小鼠中产生，然后例如在可变构架或恒定区中修饰以降低在人中的抗原性的抗体分子在本发明之内。
[0909]“有效人”蛋白是基本上不引起中和抗体应答，例如人抗鼠抗体(hama)应答的蛋
cancer res 2：245-52)。可以将单链抗体二聚化或多聚化以产生对相同靶蛋白的不同表位具有特异性的多价抗体。
[0917]
在其他实施方案中，抗体分子具有重链恒定区，所述重链恒定区选自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige的重链恒定区；特别地选自例如igg1、igg2、igg3和igg4的(例如人的)重链恒定区。在另一个实施方案中，抗体分子具有选自例如κ或λ的(例如人的)轻链恒定区的轻链恒定区。恒定区可以被改变，例如使其突变，以修饰抗体的性质(例如，增加或减少以下一项或多项：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施方案中，该抗体具有：效应子功能；并可以修复补体。在其他实施方案中，抗体不会：募集效应细胞；或修复补体。在另一个实施方案中，抗体具有降低的结合fc受体的能力或没有结合fc受体的能力。例如，它是不支持与fc受体的结合的同种型或亚型、片段或其他突变体，例如，其具有诱变或缺失的fc受体结合区。
[0918]
改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。功能改变(例如对效应子配体(例如细胞上的fcr或补体的c1成分)的亲和力改变)的抗体，可以通过用不同的残基替换抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基来产生(参见例如ep 388,151 a1，美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260，其全部内容通过引用并入本文)。可以描述相似类型的改变，如果其应用于鼠或其他物种，免疫球蛋白将减少或消除这些功能。
[0919]
抗体分子可以被衍生或连接至另一功能分子(例如，另一种肽或蛋白质)。如本文所用，“衍生的”抗体分子是已被修饰的一种。衍生方法包括但不限于添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体例如生物素。因此，本发明的抗体分子旨在包括本文所述抗体的衍生形式和其他修饰形式，包括免疫粘附分子。例如，抗体分子可以被功能性地连接(通过化学偶联、遗传融合、非共价缔合或其他方式)至一个或多个其他分子实体，例如另一种抗体(例如，双特异性抗体或双抗体)、可检测试剂、细胞毒剂、药物试剂，和/或可介导抗体或抗体部分与另一种分子结合的蛋白质或肽(例如链霉亲和素核心区或多组氨酸标签)。
[0920]
一种类型的衍生抗体分子是通过交联两种或更多种抗体(相同或不同类型，例如以产生双特异性抗体)而产生的。合适的交联剂包括异双功能的交联剂，具有两个被适当的间隔基隔开的不同的反应性基团(例如，间马来酰亚胺基苯甲酰基-n-羟基琥珀酰亚胺酯)，或同双功能的交联剂(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)。此类接头可从pierce chemical company，rockford，ill获得。多特异性或多功能抗体分子
[0921]
全文描述了本文定义的多特异性和多功能分子的示例性结构。在以下文献中进一步描述了示例性结构：weidle u等人，(2013)the intriguing options of multispecific antibody formats for treatment of cancer，cancer genomics&proteomics 10：1-18(2013)；以及spiess c等人(2015)alternative molecular formats and therapeutic applications for bispecific antibodies，molecular immunology 67：95-106；其全部内容通过引用并入本文。
[0922]
在实施方案中，多特异性抗体分子可包含多于一个抗原结合位点，其中不同位点对不同抗原具有特异性。在实施方案中，多特异性抗体分子可以结合相同抗原上的多于一个(例如，两个或更多个)表位。在实施方案中，多特异性抗体分子包含对靶细胞(例如，传染原)特异的抗原结合位点和对免疫效应细胞特异的不同抗原结合位点。在一个实施方案中，
多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体分子可分类为五个不同的结构组：(i)双特异性免疫球蛋白g(bsigg)；(ii)附加有额外抗原结合部分的igg；(iii)双特异性抗体片段；(iv)双特异性融合蛋白；和(v)双特异性抗体缀合物。
[0923]
bsigg是对每种抗原为单价的形式。示例性的bsigg形式包括但不限于crossmab、daf(二合一)、daf(四合一)、dutamab、dt-igg、杵臼结构的常见lc、杵臼结构组装体、电荷对、fab臂交换、seedbody、triomab、luz-y、fcab、κλ-body、正交fab。参见spiess等人，mol.immunol.67(2015)：95-106。示例性的bsigg包括卡妥索单抗(catumaxomab)(fresenius biotech，trion pharma，neopharm)，其包含抗cd3臂和抗epcam臂；以及厄马索单抗(ertumaxomab)(neovii biotech，fresenius biotech)，其靶向cd3和her2。在一些实施方案中，bsigg包含经工程化用于异源二聚化的重链。例如，可以使用“杵臼结构”策略、seed平台、常见的重链(例如，在kλ体中)和使用异源二聚体fc区来将重链工程化以进行异二聚化。参见spiess等人，mol.immunol.67(2015)：95-106。用来避免bsigg中同源二聚体的重链配对的策略包括杵臼结构、duobody、azymetric、电荷对、ha-tf、seedbody和差异a蛋白亲和力。参见同上。bsigg可以通过在不同宿主细胞中分别表达组分抗体并随后纯化/组装成bsigg来产生。bsigg也可以通过在单个宿主细胞中表达组分抗体来产生。可以使用亲和色谱法纯化bsigg，例如使用a蛋白和连续的ph洗脱。
[0924]
附加有额外的抗原结合部分的igg是双特异性抗体分子的另一种形式。例如，可以通过在单特异性igg上(例如在重链或轻链的n-末端或c-末端)附加额外的抗原结合单元，将单特异性igg工程化为具有双特异性。示例性的额外的抗原结合单元包括单域抗体(例如，可变重链或可变轻链)、工程化的蛋白支架和成对的抗体可变域(例如，单链可变片段或可变片段)。参见同上。附加的igg形式的实例包括双可变域igg(dvd-ig)、igg(h)-scfv、scfv-(h)igg、igg(l)-scfv、scfv-(l)igg、igg(l，h)-fv、igg(h)-v、v(h)-igg、igg(l)-v、v(l)-igg、kih igg-scfab、2scfv-igg、igg-2scfv、scfv4-ig、zybody和dvi-igg(四合一)。参见spiess等人，mol.immunol.67(2015)：95-106。igg-scfv的实例是mm-141(merrimack pharmaceuticals)，其结合igf-1r和her3。dvd-ig的实例包括结合il-1α和il-1β的abt-981(abbvie)；以及结合tnf和il-17a的abt-122(abbvie)。
[0925]
双特异性抗体片段(bsab)是一种缺少一些或全部抗体恒定域的双特异性抗体分子形式。例如，一些bsab缺少fc区。在实施方案中，双特异性抗体片段包括通过允许bsab在单个宿主细胞中有效表达的肽接头连接的重链和轻链区。示例性双特异性抗体片段包括但不限于，纳米抗体、纳米抗体-has、bite、双抗体、dart、tandab、sc双抗体、sc双抗体-ch3、双抗体-ch3、三链抗体(triple body)、微型抗体、微抗体、tribi微抗体、scfv-ch3 kih、fab-scfv、scfv-ch-cl-scfv、f(ab’)2、f(ab’)2-scfv2、scfv-kih、fab-scfv-fc、四价hcab、sc双抗体-fc、双抗体-fc、串联scfv-fc和胞内抗体。参见同上。例如，bite形式包含串联scfv，其中组分scfv与t细胞上的cd3和传染原或其部分的抗原结合。
[0926]
双特异性融合蛋白包括与其他蛋白连接的抗体片段，例如，以增加额外的特异性和/或功能。双特异性融合蛋白的一个实例是immtac，其包含与识别hla呈递肽的亲和力成熟的t细胞受体连接的抗cd3scfv。在实施方案中，对接锁定(dock-and-lock，dnl)方法可用于产生具有更高价态的双特异性抗体分子。而且，与白蛋白结合蛋白或人血清白蛋白的融合体可以延长抗体片段的血清半衰期。参见同上。
[0927]
在实施方案中，化学缀合，例如抗体和/或抗体片段的化学缀合，可用于产生bsab分子。参见同上。示例性的双特异性抗体缀合物包括covx体形式，其中低分子量药物在每个fab臂或抗体或其片段中位点特异性地缀合至单个反应性赖氨酸。在实施方案中，缀合改善了低分子量药物的血清半衰期。示例性的covx体是cvx-241(nct01004822)，其包含缀合至两个抑制vegf或ang2的短肽的抗体。参见同上。
[0928]
可以通过在宿主系统中重组表达例如至少一种或多种组分来产生抗体分子。示例性的宿主系统包括真核细胞(例如哺乳动物细胞，例如cho细胞，或昆虫细胞，例如sf9或s2细胞)和原核细胞(例如，大肠杆菌)。双特异性抗体分子可以通过组分在不同宿主细胞中的单独表达以及随后的纯化/组装来产生。或者，可以通过在单个宿主细胞中表达组分来产生抗体分子。双特异性抗体分子的纯化可以通过各种方法进行，例如亲和色谱法，例如，使用a蛋白和连续的ph洗脱。在其他实施方案中，亲和标签可以用于纯化，例如含组氨酸的标签、myc标签或链霉亲和素标签。感染性疾病抗原部分
[0929]
在一个方面，本文提供了一种多特异性分子，例如双特异性分子，其包含：
[0930]
(i)包含本文所述的抗tcrβv抗体分子的第一部分(例如，第一免疫细胞衔接物)；和
[0931]
(ii)包含以下一项或多项的第二部分：感染性疾病靶向部分；第二免疫细胞衔接物；细胞因子分子或基质修饰部分。
[0932]
在本文公开的任何组合物或方法的一些实施方案中，感染性疾病靶向部分是抗原，例如感染性疾病抗原，例如，如本文所述。
[0933]
在本文公开的任何组合物或方法的一些实施方案中，感染性疾病靶向部分，例如来自传染原的抗原，选自：ebna3(例如，339-347)、ebna1(例如，407-417)、bzlf1(例如，52-64)、基质蛋白(例如，流感病毒基质蛋白，例如，58-66)、hiv gag(例如，hiv gag p17，例如，77-85)、hiv env、hiv p24衣壳、siv tat(例如，28-35)、siv gag(例如，181-189)或hcmv pp65(例如，495-503)。cdr移植的支架
[0934]
在实施方案中，抗体分子是cdr移植的支架结构域。在实施方案中，支架结构域基于纤连蛋白结构域，例如纤连蛋白iii型结构域。纤连蛋白iii型(fn3)结构域的整体折叠与最小的功能性抗体片段(抗体重链的可变域)的折叠紧密相关。fn3的末尾有三个环；bc、de和fg环的位置大致对应于抗体的vh结构域的cdr1、2和3的位置。fn3没有二硫键；因此，与抗体及其片段不同，fn3在还原条件下是稳定的(参见，例如，wo 98/56915；wo 01/64942；wo 00/34784)。可以修饰(例如，使用本文所述的cdr或高变环)或改变fn3结构域，例如，以选择与本文所述的抗原/标志物/细胞结合的结构域。
[0935]
在实施方案中，支架结构域，例如折叠结构域，是基于抗体，例如通过从单克隆抗体的重链可变域中删除三条β链而产生的“微抗体”支架(参见，例如，tramontano等人，1994，j mol.recognit.7：9；和martin等人，1994，embo j.13：5303-5309)。“微抗体”可用于呈现两个高变环。在实施方案中，支架结构域是v样结构域(参见，例如，coia等人，wo 99/45110)或是衍生自tendamistatin的结构域，tendamistatin是由两个二硫键保持在一起的74残基的六链β片层夹心结构(例如参见mcconnell和hoess，1995，j mol.biol.250：460)。
例如，可以修饰(例如，使用cdr或高变环)tendamistatin的环或将其改变，例如以选择与本文所述的标志物/抗原/细胞结合的结构域。另一个示例性的支架结构域是衍生自ctla-4的细胞外结构域的β-夹心结构(参见，例如，wo 00/60070)。
[0936]
其他示例性的支架结构域包括但不限于t细胞受体；mhc蛋白；细胞外结构域(例如纤连蛋白iii型重复序列，egf重复序列)；蛋白酶抑制剂(例如kunitz域、大肠杆菌素、bpti等)；tpr重复序列；三叶(trifoil)结构；锌指结构域；dna结合蛋白；特别是单体dna结合蛋白；rna结合蛋白；酶，例如蛋白酶(特别是灭活的蛋白酶)，rna酶；蛋白伴侣分子，例如硫氧还蛋白和热休克蛋白；以及细胞内信号传导域(例如sh2和sh3域)。参见，例如，us 20040009530和us 7,501,121，其通过引用并入本文。
[0937]
在实施方案中，例如通过以下标准中的一个或多个来评估和选择支架结构域：(1)氨基酸序列，(2)几个同源结构域的序列，(3)3维结构，和/或(4)在ph、温度、盐度、有机溶剂、氧化剂浓度范围内的稳定性数据。在实施方案中，支架结构域是小的、稳定的蛋白质结构域，例如少于100、70、50、40或30个氨基酸的蛋白质。该结构域可以包括一个或多个二硫键或可以螯合金属，例如锌。基于抗体的融合体
[0938]
可以产生包含附着于抗体n或c末端的另外结合实体的多种形式。这些与单链或二硫键稳定化的fv或fab的融合体导致产生对每种抗原具有二价结合特异性的四价分子。scfv和scfab与igg的结合可产生可识别三种或更多种不同抗原的分子。抗体-fab融合体
[0939]
抗体-fab融合体是双特异性抗体，其包含与抗体重链的c末端融合的针对第一靶标的传统抗体和针对第二靶标的fab。通常，抗体和fab将具有共同的轻链。抗体融合体可以通过以下方式产生：(1)将靶标融合体的dna序列工程化，以及(2)将靶标dna转染到合适的宿主细胞中以表达融合蛋白。如coloma，j.等人(1997)nature biotech 15：159所述，似乎抗体-scfv融合体可以通过ch3结构域的c末端与scfv的n末端之间的(gly)-ser接头连接。抗体-scfv融合体
[0940]
抗体-scfv融合体是双特异性抗体，其包含与抗体重链的c末端融合的传统抗体和具有独特特异性的scfv。scfv可以直接通过scfv重链或通过接头肽融合至c末端。抗体融合体可以通过以下方式产生：(1)将靶标融合体的dna序列工程化，以及(2)将靶标dna转染到合适的宿主细胞中以表达融合蛋白。如coloma，j.等人(1997)nature biotech 15：159所述，似乎抗体-scfv融合体可以通过ch3结构域的c末端与scfv的n末端之间的(gly)-ser接头连接。可变域免疫球蛋白dvd
[0941]
一种相关的形式是双重可变域免疫球蛋白(dvd)，其通过较短的接头序列由在v结构域n末端的第二个特异性位置的vh和vl结构域组成。
[0942]
其他示例性的多特异性抗体形式包括，例如在以下专利中描述的那些：us20160114057a1、us20130243775a1、us20140051833、us20130022601、us20150017187a1、us20120201746a1、us20150133638a1、us20130266568a1、us20160145340a1、wo2015127158a1、us20150203591a1、us20140322221a1、us20130303396a1、us20110293613、us20130017200a1、us20160102135a1、wo2015197598a2、wo2015197582a1、us9359437、
us20150018529、wo2016115274a1、wo2016087416a1、us20080069820a1、us9145588b、us7919257和us20150232560a1。采用完整抗体-fab/scfab形式的示例性的多特异性分子包括在以下专利中描述的那些：us9382323b2、us20140072581a1、us20140308285a1、us20130165638a1、us20130267686a1、us20140377269a1、us7741446b2和wo1995009917a1。采用结构域交换形式的示例性的多特异性分子包括在以下专利中描述的那些：us20150315296a1、wo2016087650a1、us20160075785a1、wo2016016299a1、us20160130347a1、us20150166670、us8703132b2、us20100316645、us8227577b2、us20130078249。含fc的实体(微抗体)
[0943]
含fc的实体(也称为微抗体)可以通过将scfv与恒定重链结构域3的c末端(ch3-scfv)和/或与具有不同特异性的抗体的铰链区(scfv-铰链-fc)融合而产生。也可以制备具有与igg的ch3结构域的c末端融合的二硫键稳定化的可变域(无肽接头)的三价实体。含fc的多特异性分子
[0944]
在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括免疫球蛋白恒定区(例如，fc区)。示例性的fc区可以选自igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区；更特别地，人igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区。
[0945]
在一些实施方案中，改变免疫球蛋白链恒定区(例如，fc区)，例如使其突变，以增加或减少以下一项或多项：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能。
[0946]
在其他实施方案中，第一免疫球蛋白链恒定区和第二免疫球蛋白链恒定区(例如，第一fc区和第二fc区)的界面被改变(例如使其突变)，以例如相对于非工程化界面(例如自然存在的界面)增加或减少二聚化。例如，免疫球蛋白链恒定区(例如，fc区)的二聚化可以通过为第一fc区和第二fc区的fc界面提供以下一种或多种来增强：成对的突起-腔(“杵臼结构”)、静电相互作用或链交换，使得例如相对于非工程化界面，异源多聚体与同源多聚体的比例更大。
[0947]
在一些实施方案中，多特异性分子包括在选自例如人igg1的fc区的347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409的一个或多个中的位置的成对的氨基酸置换。例如，免疫球蛋白链恒定区(例如，fc区)可以包括选自以下的成对的氨基酸置换：t366s、l368a或y407v(例如，对应于腔或臼)和t366w(例如，对应于突起或杵)。
[0948]
在其他实施方案中，多功能分子包括半衰期延长剂，例如人血清白蛋白，或针对人血清白蛋白的抗体分子。异二聚化的抗体分子及其制备方法
[0949]
已经公开了产生多特异性抗体的各种方法来解决不正确的重链配对的问题。示例性方法描述如下。示例性的多特异性抗体形式和制备所述多特异性抗体的方法也公开于例如speiss等人，molecular immunology 67(2015)95-106；和klein等人，mabs 4：6，653-663；2012年11月/12月中；其每一个的全部内容通过引用并入本文。
[0950]
异二聚化的双特异性抗体基于天然igg结构，其中两个结合臂识别不同的抗原。通过强制重链异二聚化，并结合将轻链(例如共有轻链)错配最小化的技术，来产生能够实现确定的单价(和同时)抗原结合的igg衍生形式。强制重链异二聚化可以使用例如杵-臼结构
distinct target antigens.mabs 2011；3：546-57；pmid：22123055)。
[0955]
促进多特异性抗体异二聚化的其他示例性的fc突变包括在以下参考文献中描述的那些，其各自内容通过引用并入本文：wo2016071377a1、us20140079689a1、us20160194389a1、us20160257763、wo2016071376a2、wo2015107026a1、wo2015107025a1、wo2015107015a1、us20150353636a1、us20140199294a1、us7750128b2、us20160229915a1、us20150344570a1、us8003774a1、us20150337049a1、us20150175707a1、us20140242075a1、us20130195849a1、us20120149876a1、us20140200331a1、us9309311b2、us8586713、us20140037621a1、us20130178605a1、us20140363426a1、us20140051835a1和us20110054151a1。
[0956]
稳定化半胱氨酸突变也已经与kih和其他促进fc异二聚化的变体组合使用，参见例如us7183076。其他示例性半胱氨酸修饰包括，例如在us20140348839a1、us7855275b2和us9000130b2公开的那些。链交换工程化结构域(seed)
[0957]
通过设计链交换工程化结构域(seed)c(h)3异二聚体来支持双特异性和不对称融合蛋白设计的异二聚体fc平台是已知的。人igg和iga c(h)3结构域的这些衍生物可形成互补的人seed c(h)3异二聚体，其由人iga和igg c(h)3序列的交替区段组成。当在哺乳动物细胞中表达时，所得的一对seed c(h)3结构域优先缔合形成异二聚体。seedbody(sb)融合蛋白由[iggl铰链]-c(h)2-[seed c(h)3]组成，可以与一个或多个融合伴侣遗传连接(例如，参见davis jh等人，seedbodies：fusion proteins based on strand exchange engineered domain(seed)ch3 heterodimers in an fc analogue platform for asymmetric binders or immunofusions and bispecific antibodies，protein eng des sel 2010；23：195-202；pmid：20299542和us8871912。其每一个的内容通过引用并入本文)。duobody
[0958]
产生具有正确重链配对的双特异性抗体的“duobody”技术是已知的。duobodv技术涉及三个基本步骤，用于在生产后的交换反应中生成稳定的双特异性人igg1抗体。第一步，使用标准的哺乳动物重组细胞系分别生产两个igg1，每个igg1在第三恒定(ch3)结构域中包含单个匹配的突变。随后，根据用于回收和纯化的标准方法来纯化这些igg1抗体。在生产和(生产后的)纯化后，两个抗体在定制的实验室条件下重组，从而以非常高的产率(通常＞95％)产生双特异性抗体产品(参见例如labrijn等人，pnas 2013；110(13)：5145-5150和labrijn等人，nature protocols 2014；9(10)：2450-63，其各自的内容通过引用并入本文)。静电相互作用
[0959]
公开了采用带电荷的氨基酸，使用ch3氨基酸变化而制备多特异性抗体的方法，使得同二聚体的形成在静电上是不利的。ep1870459和wo 2009089004描述了在宿主细胞中共表达不同抗体结构域时有利于异二聚体形成的其他策略。在这些方法中，用带电荷的氨基酸替换两个ch3结构域中组成重链恒定域3(ch3)、ch3-ch3界面的一个或多个残基，使得同二聚体形成在静电上是不利的并且异二聚化在静电上是有利的。在以下参考文献中描述了使用静电相互作用制备多特异性分子的其他方法，每个参考文献的内容通过引用并入本文，包括us20100015133、us8592562b2、us9200060b2、us20140154254a1和us9358286a1。
共有经链
[0960]
需要避免轻链错配以产生双特异性igg的均质制剂。其实现方式之一是通过使用共有轻链原理，即将共享一个轻链但仍具有不同特异性的两种结合物组合。增强由单体混合物形成期望的双特异性抗体的示例性方法是通过提供共有的可变轻链来与双特异性抗体的每个异聚可变重链区相互作用。产生具有共同轻链的双特异性抗体的组合物和方法公开于例如us7183076b2、us20110177073a1、ep2847231a1、wo2016079081a1和ep3055329a1中，其各自的内容通过引用并入本文。crossmab
[0961]
减少轻链错配的另一种选择是crossmab技术，它通过交换一半双特异性抗体的fab中的ch1和cl结构域来避免非特异性l链错配。这样的交错变体保留了结合特异性和亲和力，但是使两个臂如此不同，以至于防止了l链错配。crossmab技术(如前述klein等人中所概述)涉及重链和轻链之间的域互换，以促进正确配对的形成。简而言之，为了通过使用两个不同的轻链-重链对来构建可以结合两种抗原的双特异性igg样crossmab抗体，采用了两步式修饰过程。首先，使用异二聚化方法(例如，杵臼(kih)技术)将二聚化界面工程化到每个重链的c末端，以确保仅有效地形成了来自一个抗体(例如，抗体a)和第二抗体(例如抗体b)的两条不同重链的异源二聚体。接下来，交换一种抗体(抗体a)的恒定重链1结构域(ch1)和恒定轻链结构域(cl)，同时使可变重链(vh)和可变轻链(vl)结构域保持如一。ch1和cl结构域的交换确保修饰的抗体(抗体a)轻链仅能与修饰的抗体(抗体a)重链有效地二聚化，而未修饰的抗体(抗体b)轻链仅能与未修饰的抗体(抗体b)的重链有效地二聚化；因此仅有效地形成期望的双特异性crossmab(参见例如cain，c.scibx 4(28)；doi：10.1038/scibx.2011.783，其内容通过引用并入本文)。共有重链
[0962]
增强由单体混合物形成期望的双特异性抗体的示例性方法是通过提供共有的可变重链来与双特异性抗体的每个异聚可变轻链区相互作用。产生具有共有重链的双特异性抗体的组合物和方法公开于例如us20120184716、us20130317200和us20160264685a1中，其各自的内容通过引用并入本文。氨基酸修饰
[0963]
产生具有正确的轻链配对的多特异性抗体的替代组合物和方法包括各种氨基酸修饰。例如，zymeworks描述了在ch1和/或cl结构域中具有一个或多个氨基酸修饰，在vh和/或vl结构域中具有一个或多个氨基酸修饰，或其组合的杂二聚体，这些修饰是轻链和重链之间的界面的一部分，并在每条重链和所期望的轻链之间建立优先配对，使得当异源二聚体对的两条重链和两条轻链在细胞中共表达时，第一异源二聚体的重链优先与一条轻链而不是彼此配对(例如，参见wo2015181805)。其他示例性方法记载于wo2016026943(argen-x)、us20150211001、us20140072581a1、us20160039947a1和us20150368352中。λ/κ形式
[0964]
包括λ轻链多肽和κ轻链多肽的多特异性分子(例如，多特异性抗体分子)可用于允许异二聚化。产生包含λ轻链多肽和κ轻链多肽的双特异性抗体分子的方法公开于2017年9月22日提交的pct/us 17/53053，指定公开号为wo2018/057955，其通过引用整体并入本文。
[0965]
在实施方案中，多特异性分子包括多特异性抗体分子，例如，具有两种结合特异性
的抗体分子，例如，双特异性抗体分子。多特异性抗体分子包括：对第一表位具有特异性的λ轻链多肽1(llcp1)；对第一表位具有特异性的重链多肽1(hcp1)；对第二表位具有特异性的κ轻链多肽2(klcp2)；以及对第二表位具有特异性的重链多肽2(hcp2)。
[0966]
如本文所用，术语“λ轻链多肽1(llcp1)”是指包含足够的轻链(lc)序列的多肽，使得当与同源重链可变区结合时，可以介导与其表位的特异性结合以及与hcp1的复合。在一个实施方案中，llcp1包含ch1区的全部或片段。在一个实施方案中，llcp1包含lc-cdr1、lc-cdr2、lc-cdr3、fr1、fr2、fr3、fr4和ch1，或来自其中的足以介导其表位的特异性结合以及与hcp1的复合的序列。llcp1与其hcp1一起对第一表位提供特异性(而klcp2与其hcp2一起对第二表位提供特异性)。如本文其他地方所述，llcp1对hcp1的亲和力高于对hcp2的亲和力。
[0967]
如本文所用，术语“κ轻链多肽2(klcp2)”是指包含足够的轻链(lc)序列的多肽，使得当与同源重链可变区结合时，可以介导与其表位的特异性结合以及与hcp2的复合。在一个实施方案中，klcp2包含ch1区的全部或片段。在一个实施方案中，klcp2包含lc-cdr1、lc-cdr2、lc-cdr3、fr1、fr2、fr3、fr4和ch1，或来自其中的足以介导其表位的特异性结合以及与hcp2的复合的序列。klcp2与其hcp2一起为第二表位提供特异性(而llcp1及其hcp1为第一表位提供特异性)。
[0968]
如本文所用，术语“重链多肽1(hcp1)”是指包含足够的重链(hc)序列(例如，hc可变区序列)的多肽，使得当与同源llcp1结合时可以介导与其表位的特异性结合以及与hcp1的复合。在一个实施方案中，hcp1包含ch1区的全部或片段。在一个实施方案中，hcp1包含ch2和/或ch 3区的全部或片段。在一个实施方案中，hcp1包含hc-cdr1、hc-cdr2、hc-cdr3、fr1、fr2、fr3、fr4、ch1、ch2和ch3，或来自其中的足以实现以下各项的序列：(i)介导其表位的特异性结合以及与llcp1的复合，(ii)如本文所述优先与llcp1而非klcp2复合；以及(iii)如本文所述优先与hcp2而非另一hcp1分子复合。hcp1与其llcp1一起提供对第一表位的特异性(而klcp2与其hcp2一起提供对第二表位的特异性)。
[0969]
如本文所用，术语“重链多肽2(hcp2)”是指包含足够的重链(hc)序列(例如，hc可变区序列)的多肽，使得当与同源llcp1结合时可以介导与其表位的特异性结合以及与hcp1的复合。在一个实施方案中，hcp2包含ch1区的全部或片段。在一个实施方案中，hcp2包含ch2和/或ch3区的全部或片段。在一个实施方案中，hcp1包含hc-cdr1、hc-cdr2、hc-cdr3、fr1、fr2、fr3、fr4、ch1、ch2和ch3，或来自其中的足以实现以下各项的序列：(i)介导其表位的特异性结合以及与klcp2的复合，(ii)如本文所述优先与klcp2而非llcp1复合；以及(iii)如本文所述优先与hcp1而非另一hcp2分子复合。hcp2与其klcp2一起提供了对第二表位的特异性(而llcp1与其hcp1一起提供了对第一表位的特异性)。
[0970]
在本文公开的多特异性抗体分子的一些实施方案中：llcp1对hcp1的亲和力高于对hcp2的亲和力；并且/或者klcp2对hcp2的亲和力高于对hcp1的亲和力。
[0971]
在实施方案中，llcp1对hcp1的亲和力充分大于其对hcp2的亲和力，使得在预选条件下，例如在水性缓冲液中(例如在ph 7下)、在盐水中(例如在ph 7下)，或在生理条件下，
至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％的多特异性抗体分子具有与hcp1复合或接合的llcp1。
[0972]
在本文公开的多特异性抗体分子的一些实施方案中：hcp1对hcp2的亲和力大于对hcp1第二分子的亲和力；并且/或者hcp2对hcp1的亲和力大于对hcp2第二分子的亲和力。
[0973]
在实施方案中，hcp1对hcp2的亲和力充分大于其对第二hcp1分子的亲和力，使得在预选条件下，例如在水性缓冲液中(例如在ph 7下)、在盐水中(例如在ph 7下)，或在生理条件下，至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％的多特异性抗体分子具有与hcp2复合或接合的hcp1。
[0974]
在另一方面，本文公开了用于制备或产生多特异性抗体分子的方法。该方法包括在(i)-(iv)缔合的条件下：(i)提供第一重链多肽(例如，包含第一重链可变区(第一vh)、第一ch1、第一重链恒定区(例如，第一ch2、第一ch3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)；(ii)提供第二重链多肽(例如，包含第二重链可变区(第二vh)、第二ch1、第二重链恒定区(例如，第二ch2、第二ch3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)；(iii)提供优先与第一重链多肽(例如第一vh)缔合的λ链多肽(例如λ轻可变区(vlλ)、λ轻恒定链(vlλ)或两者)；和(iv)提供优先与第二重链多肽(例如第二vh)缔合的κ链多肽(例如κ轻可变区(vlk)、κ轻恒定链(vlk)或两者)。
[0975]
在实施方案中，第一重链和第二重链多肽形成增强异二聚化的fc界面。
[0976]
在实施方案中，将(i)-(iv)(例如，编码(i)-(iv)的核酸)引入单个细胞，例如单个哺乳动物细胞，例如cho细胞中。在实施方案中，(i)-(iv)在细胞中表达。
[0977]
在实施方案中，将(i)-(iv)(例如，编码(i)-(iv)的核酸)引入不同的细胞，例如不同的哺乳动物细胞，例如两个或更多个cho细胞中。在实施方案中，(i)-(iv)在细胞中表达。
[0978]
在一个实施方案中，该方法进一步包括例如使用λ特异性和/或κ特异性纯化，例如亲和色谱，纯化细胞表达的抗体分子。
[0979]
在实施方案中，该方法进一步包括评估细胞表达的多特异性抗体分子。例如，纯化的细胞表达的多特异性抗体分子可以通过本领域已知的技术(包括质谱法)进行分析。在一个实施方案中，将纯化的细胞表达的抗体分子裂解，例如用木瓜蛋白酶消化以产生fab部分，并使用质谱法进行评估。
[0980]
在实施方案中，该方法以高产率，例如至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％，产生正确配对的κ/λ多特异性(例如双特异性)抗体分子。
[0981]
在其他实施方案中，多特异性(例如双特异性)抗体分子包括：(i)第一重链多肽(hcp1)(例如，包含第一重链可变区(第一vh)、第一ch1、第一重链恒定区(例如，第一ch2、第一ch3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)，例如，其中hcp1与第一表位结合；(ii)第二重链多肽(hcp2)(例如，包含第二重链可变区(第二vh)、第二ch1、第二重链恒定区(例如，第二ch2、第二ch3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)，例如，其中hcp2与第二表位结合；
(iii)优先与第一重链多肽(例如第一vh)缔合的λ轻链多肽(llcp1)(例如，λ轻可变区(vl1)、λ轻恒定链(vl1)或两者)，例如，其中llcp1与第一表位结合；以及(iv)优先与第二重链多肽(例如，第二vh)缔合的κ轻链多肽(klcp2)(例如，κ轻可变区(vlk)、κ轻恒定链(vlk)或两者)，例如其中klcp2与第二表位结合。
[0982]
在实施方案中，第一重链多肽和第二重链多肽形成增强异二聚化的fc界面。在实施方案中，多特异性抗体分子具有第一结合特异性和第二结合特异性，所述第一结合特异性包括杂合的vl1-cl1，其异二聚化至与fc恒定ch2-ch3结构域连接的第一重链可变区(具有杵修饰)，而所述第二结合特异性包括杂合的vlk-clk，其异二聚化至与fc恒定ch2-ch3结构域连接的第二重链可变区(具有臼修饰)。细胞因子分子
[0983]
细胞因子通常是例如通过信号转导途径影响细胞活性的多肽。因此，多特异性或多功能多肽的细胞因子是有用的，并且可以与受体介导的信号传导相关，该信号传导从细胞膜外传递信号以调节细胞内的应答。细胞因子是蛋白质信号传导化合物，其为免疫应答的介质。它们控制许多不同的细胞功能，包括增殖、分化和细胞存活/凋亡；细胞因子也参与多种病理生理过程，包括病毒感染和自身免疫性疾病。细胞因子在先天免疫系统(单核细胞、巨噬细胞、树突细胞)和适应性免疫系统(t细胞和b细胞)的各种细胞的不同刺激下合成。细胞因子可分为两组：促炎的和抗炎的。包括ifnγ、il-1、il-6和tnf-α在内的促炎细胞因子主要来源于先天免疫细胞和th1细胞。包括il-10、il-4、il-13和il-5在内的抗炎细胞因子由th2免疫细胞合成。
[0984]
本公开内容尤其提供了多特异性(例如，双、三、四特异性)或多功能分子，其包括例如经工程化以包含一种或多种细胞因子分子，例如免疫调节性(例如促炎性)细胞因子及其变体，例如其功能变体。因此，在一些实施方案中，细胞因子分子是白介素或其变体，例如其功能变体。在一些实施方案中，白介素是促炎白介素。在一些实施方案中，白介素选自白介素-2(il-2)、白介素-12(il-12)、白介素-15(il-15)、白介素-18(il-18)、白介素-21(il-21)、白介素-7(il-7)或干扰素γ。在一些实施方案中，细胞因子分子是促炎细胞因子。
[0985]
在某些实施方案中，细胞因子是单链细胞因子。在某些实施方案中，细胞因子是多链细胞因子(例如，细胞因子包含2个或更多个(例如2个)多肽链。示例性的多链细胞因子是il-12。
[0986]
有用的细胞因子的实例包括但不限于gm-csf、il-1α、il-1β、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-7、il-8、il-10、il-12、il-21、ifn-a、ifn-β、ifn-γ、mip-1α、mip-1β、tgf-β、tnf-α和tnfβ。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是选自以下的细胞因子：gm-csf、il-2、il-7、il-8、il-10、il-12、il-15、il-21、ifn-α、ifn-γ、mip-1α、mip-1β和tgf-β。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是选自il-2、il-7、il-10、il-12、il-15、ifn-α和ifn-γ的细胞因子。在某些实施方案中，使细胞因子突变以去除n-和/或o-糖基化位点。消除糖基化增加了重组生产中可获得的产物的均质性。
[0987]
在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是il-2。在具体的实施方案中，il-2细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：激活的t淋巴细胞的增殖、激活的t淋巴细胞的分化、细胞毒性t细胞(ctl)活性、激活的b细胞的增殖、激活的b细胞的分
化、天然杀伤(nk)细胞的增殖、nk细胞的分化、由激活的t细胞或nk细胞的细胞因子分泌，以及nk/淋巴细胞激活的杀伤细胞(lak)细胞毒性。在另一个特定的实施方案中，il-2细胞因子是对il-2受体的α-亚基具有降低的结合亲和力的突变体il-2细胞因子。α-亚基(也称为cd 25)与β-亚基和γ-亚基(分别称为cd 122和cd132)一起形成异三聚体的高亲和力il-2受体，而仅由β-亚基和γ-亚基组成的二聚体受体称为中等亲和力il-2受体。如在pct专利申请号pct/ep2012/051991中描述的(其通过引用整体并入本文)，与il-2受体的α-亚基的结合减少的突变体il-2多肽，与野生型il-2多肽相比，具有降低的在调节性t细胞中诱导il-2信号传导的能力，在t细胞中诱导更少的激活诱导的细胞死亡(aicd)，并且在体内具有降低的毒性特征。这种具有降低的毒性的细胞因子的使用在本发明的多特异性或多功能多肽中特别有利，该多肽由于存在fc结构域而具有较长的血清半衰期。在一个实施方案中，根据本发明的多特异性或多功能多肽的突变体il-2细胞因子包含至少一种氨基酸突变，其与未突变的il-2细胞因子相比，降低或消除了突变体il-2细胞因子对il-2受体的α-亚基(cd25)的亲和力，但保留突变体il-2细胞因子对中等亲和力il-2受体(由il-2受体的β和γ亚基组成)的亲和力。在一个实施方案中，一个或多个氨基酸突变是氨基酸置换。在一个具体的实施方案中，突变体il-2细胞因子在选自对应于人il-2的残基42、45和72的位置的一个、两个或三个位置上包含一个、两个或三个氨基酸置换。在更具体的实施方案中，突变体il-2细胞因子在对应于人il-2的残基42、45和72的位置上包含三个氨基酸置换。在甚至更具体的实施方案中，突变体il-2细胞因子是人il-2，其包含氨基酸置换f42a、y45a和l72g。在一个实施方案中，突变体il-2细胞因子在与人il-2的位置3相对应的位置处另外包含氨基酸突变，这消除了il-2的o-糖基化位点。特别地，所述另外的氨基酸突变是通过丙氨酸残基代替苏氨酸残基的氨基酸置换。可用于本发明的特定的突变体il-2细胞因子在对应于人il-2的残基3、42、45和72的位置处包含四个氨基酸置换。特定的氨基酸置换是t3a、f42a、y45a和l72g。如pct专利申请号pct/ep2012/051991和所附实施例所示，所述四重突变体il-2多肽(il-2qm)与cd25没有可检测的结合，在t细胞中诱导凋亡的能力降低，在t.sub.reg细胞中诱导il-2信号传导的能力降低，以及体内毒性特征降低。但是，它保留了激活效应细胞中il-2信号传导，诱导效应细胞增殖以及由nk细胞产生ifn-γ作为次级细胞因子的能力。
[0988]
根据上述实施方案中任一项的il-2或突变体il-2细胞因子可包含提供进一步的优势例如增加的表达或稳定性的其他突变。例如，位置125处的半胱氨酸可以用中性氨基酸例如丙氨酸代替，以避免形成二硫键桥接的il-2二聚体。因此，在某些实施方案中，本发明的多特异性或多功能多肽的il-2或突变体il-2细胞因子在对应于人il-2的残基125的位置处包含另外的氨基酸突变。在一个实施方案中，所述另外的氨基酸突变是氨基酸置换c125a。
[0989]
在一个具体的实施方案中，多特异性或多功能多肽的il-2细胞因子包含seq id no：227的多肽序列[aptssstkktqlqlehllldlqmilnginnyknpkltrmltfkfympkkatelkhlqcleeelkpleevlnlaqsknfhlrprdlisninvivlelkgsettfmceyadetativeflnrwitfaqsiistlt]。
[0990]
在另一个具体的实施方案中，多特异性或多功能多肽的il-2细胞因子包含seq id no：228的多肽序列[apassstkkt qlqlehllld lqmilnginn yknpkltrmltakfampkkatelkhlqcle eelkpleevlngaqsknfhl rprdlisnin vivlelkgsettfmceyadetativeflnrwitfaqsiistlt]。
[0991]
在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是il-12。在具体的实施方案中，所述il-12细胞因子是单链il-12细胞因子。在甚至更具体的实施方案中，单链il-12细胞因子包含seq id no：229的多肽序列[iwelkkdvyvveldwypdapgemvvltcdtpeedgitwtldqssevlgsgktltiqvkefgdagqytchkggevlshsllllhkkedgiwstdilkdqkepknktflrceaknysgrftcwwlttistdltfsvkssrgssdpqgvtcgaatlsaervrgdnkeyeysvecqedsacpaaeeslpievmvdavhklkyenytssffirdiikpdppknlqlkplknsrqvevsweypdtwstphsyfsltfcvqvqgkskrekkdrvftdktsatvicrknasisvraqdryyssswsewasvpcsggggsggggsggggsrnlpvatpdpgmfpclhhsqnllravsnmlqkarqtlefypctseeidheditkdktstveaclpleltknesclnsretsfitngsclasrk丁sfmmalclssiyedlkmyqvefktmnakllmdpkrqifldqnmlavidelmqalnfnsetvpqkssleepdfyktkiklcillhafriravtidrvmsylnas]。在一个实施方案中，il-12细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：nk细胞的增殖、nk细胞的分化、t细胞的增殖和t细胞的分化。
[0992]
在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是il-10。在具体的实施方案中，所述il-10细胞因子是单链il-10细胞因子。在甚至更具体的实施方案中，单链il-10细胞因子包含seq id no：3471的多肽序列[spgqgtqsenscthfpgnlpnmlrdlrdafsrvktffqmkdqldnlllkeslledfkgylgcqalsemiqfyleevmpqaenqdpdikahvnslgenlktlrlrlrrchrflpcenkskaveqvknafnklqekgiykamsefdifinyieaymtmkirnggggsggggsggggsggggsspgqgtqsenscthfpgnlpnmlrdlrdafsrvktffqmkdqldnlllkeslledfkgylgcqalsemiqfyleevmpqaenqdpdikahvnslgenlktlrlrlrrchrflpcenkskaveqvknafnklqekgiykamsefdifinyieaymtmkirn]。
[0993]
在另一个具体的实施方案中，if-10细胞因子是单体if-10细胞因子。在更具体的实施方案中，单体if-10细胞因子包含seq id no：3472的多肽序列[spgqgtqsenscthfpgnlpnmlrdlrdafsrvktffqmkdqldnlllkeslledfkgylgcqalsemiqfyleevmpqaenqdpdikahvnslgenlktlrlrlrrchrflpcengggsggkskaveqvknafnklqekgiykamsefdifinyieaymtmkirn]。在一个实施方案中，il-10细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：抑制细胞因子分泌、抑制抗原呈递细胞的抗原呈递、减少氧自由基释放和抑制t细胞增殖。根据本发明的多特异性或多功能多肽，其中细胞因子是il-10，特别适用于下调炎症，例如用于治疗炎性疾病。
[0994]
在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子是il-15。在具体的实施方案中，所述il-15细胞因子是对il-15受体的α-亚基具有降低的结合亲和力的突变体il-15细胞因子。不希望受到理论的束缚，与野生型il-15多肽相比，与il-15受体的α-亚基的结合减少的突变体il-15多肽具有降低的与整个身体的成纤维细胞结合的能力，从而导致改善其药代动力学和毒性特征。使用毒性降低的细胞因子，如所述的突变体il-2和突变体il-15效应子部分，在根据本发明的多特异性或多功能多肽中特别有利，该多肽由于存在fc结构域而具有较长的血清半衰期。在一个实施方案中，根据本发明的多特异性或多功能多肽的突变体il-15细胞因子包含至少一种氨基酸突变，与未突变的il-15细胞因子相比，其降低或消除了突变体il-15细胞因子对il-15受体的α-亚基的亲和力，但保留突变体il-15细胞因子对中等亲和力il-15/il-2受体(由il-15/il-2受体的β-亚基和γ-亚基组成)的亲和力。在一个实施方案中，氨基酸突变是氨基酸置换。在具体的实施方案中，突变体il-15细胞因子在对应于人il-15的残基53的位置处包含氨基酸置换。在更具体的实施方案中，突变体il-15细胞因子是包含氨基酸置换e53a的人il-15。在一个实施方案中，突变体il-15细胞因
子在对应于人il-15的位置79的位置处另外包含氨基酸突变，其消除了il-15的n-糖基化位点。特别地，所述另外的氨基酸突变是用丙氨酸残基代替天冬酰胺残基的氨基酸置换。在甚至更具体的实施方案中，il-15细胞因子包含seq id no：3473[nwvnvisdlkkiedliqsmhidatlytesdvhpsckvtamkcfllelqvislasgdasihdtvenliilannslssngavtesgckeceeleeknikeflqsfvhivqmfints]的多肽序列。在一个实施方案中，if-15细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：激活的t淋巴细胞的增殖、激活的t淋巴细胞的分化、细胞毒性t细胞(ctl)活性、激活的b细胞的增殖、激活的b细胞的分化、天然杀伤(nk)细胞的增殖、nk细胞的分化、由激活的t细胞或nk细胞的细胞因子分泌，以及nk/淋巴细胞激活的杀伤细胞(fak)细胞毒性。
[0995]
可用作多特异性或多功能多肽中的效应子部分的突变体细胞因子分子可以使用本领域熟知的遗传或化学方法通过缺失、置换、插入或修饰来制备。遗传方法可包括编码dna序列的位点特异性诱变、pcr、基因合成等。正确的核苷酸改变可以例如通过测序来验证。置换或插入可涉及天然以及非天然氨基酸残基。氨基酸修饰包括众所周知的化学修饰方法，例如添加或去除糖基化位点或碳水化合物附着等。
[0996]
在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是gm-csf。在具体的实施方案中，gm-csf细胞因子可以在粒细胞、单核细胞或树突细胞中引起增殖和/或分化。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是ifn-α。在具体的实施方案中，ifn-α细胞因子可以引起选自以下的一种或多种细胞应答：抑制病毒感染的细胞中的病毒复制，以及上调主要组织相容性复合体i(mhci)的表达。在另一个具体的实施方案中，ifn-α细胞因子可以抑制细胞的增殖。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是ifnγ。在具体的实施方案中，ifnγ细胞因子可以引起选自以下的一种或多种细胞应答：增加的巨噬细胞活性、增加的mhc分子表达和增加的nk细胞活性。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是il-7。在具体的实施方案中，il-7细胞因子可引起t和/或b淋巴细胞的增殖。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是il-8。在具体的实施方案中，il-8细胞因子可以引起嗜中性粒细胞的趋化性。在一个实施方案中，多特异性或多功能的细胞因子，特别是单链细胞因子多肽是mip-1α。在具体的实施方案中，mip-1α细胞因子可引起单核细胞和t淋巴细胞的趋化性。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是mir-1β。在具体的实施方案中，mir-1β细胞因子可引起单核细胞和t淋巴细胞的趋化性。在一个实施方案中，多特异性或多功能多肽的细胞因子，特别是单链细胞因子是tgf-β。在具体的实施方案中，tgf-β细胞因子可引起选自以下的一种或多种细胞应答：单核细胞的趋化性、巨噬细胞的趋化性、激活的巨噬细胞中il-1表达的上调，和激活的b细胞中iga表达的上调。
[0997]
在一个实施方案中，本发明的多特异性或多功能多肽以比对照细胞因子大至少约1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10倍的解离常数(kd)结合细胞因子受体。在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽以比对应的包括两个或更多个效应子部分的多特异性或多功能多肽高至少2、3、4、5、6、7、8、9或10倍的kd结合细胞因子受体。在另一个实施方案中，多特异性或多功能多肽以比对应的包含两种或更多种细胞因子的多特异性或多功能多肽大10倍的解离常数kd与细胞因子受体结合。
[0998]
在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括细胞因子分子。在实施方案中，细胞因子分子包括细胞因子的全长、片段或变体；细胞因子受体结构域，例如，细胞因子受体二聚结构域；或细胞因子受体的激动剂，例如针对细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)。
[0999]
在一些实施方案中，细胞因子分子选自il-2、il-12、il-15、il-18、il-7、il-21或干扰素γ，或其片段或变体，或任何上述细胞因子的组合。细胞因子分子可以是单体或二聚体。在实施方案中，细胞因子分子可以进一步包括细胞因子受体二聚结构域。
[1000]
在其他实施方案中，细胞因子分子是细胞因子受体的激动剂，例如针对选自il-15ra或il-21r的细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)。
[1001]
在一个实施方案中，细胞因子分子是il-15，例如人il-15(例如，包含氨基酸序列：nwvnvisdlkkiedliqsmhidatlytesdvhpsckvtamkcfllelqvislesgdasihdtvenliilannslssngnvtesgckeceeleeknikeflqsfvhivqmfints(seq id no：3437)、其片段或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3437的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不大于五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1002]
在一些实施方案中，细胞因子分子包含受体二聚结构域，例如il15rα二聚结构域。在一个实施方案中，il15rα二聚结构域包含氨基酸序列：maprrargcrtlglpalllllllrppatrgitcpppmsvehadiwvksyslysreryicnsgfkrkagtssltecvl(seq id no：3438)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或对seq id no：3438的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。在一些实施方案中，多特异性分子的细胞因子分子(例如il-15)和受体二聚结构域(例如il15rα二聚结构域)例如通过接头(例如gly-ser接头，例如，包含氨基酸序列sggsggggsgggsggggslq(seq id no：3439)的接头)共价连接。在其他实施方案中，多特异性分子的细胞因子分子(例如il-15)和受体二聚结构域(例如il15rα二聚结构域)没有共价连接，例如是非共价缔合的。
[1003]
在其他实施方案中，细胞因子分子是il-2，例如人il-2(例如，包含氨基酸序列：aptssstkktqlqlehllldlqmilnginnyknpkltrmltfkfympkkatelkhlqcleeelkpleevlnlaqsknfhlrprdlisninvivlelkgsettfmceyadetativeflnrwitfcqsiistlt(seq id no：3440)、其片段或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3440的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不大于五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1004]
在其他实施方案中，细胞因子分子是il-18，例如人il-18，包含氨基酸序列：yfgklesklsvirnlndqvlfidqgnrplfedmtdsdcrdnaprtifiismykdsqprgmavtisvkcekistlscenkiisfkemnppdnikdtksdiiffqrsvpghdnkmqfesssyegyflacekerdlfklilkkedelgdrsimftvqned(seq id no：121)、其片段或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3441的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不大于五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1005]
在其他实施方案中，细胞因子分子是il-21，例如人il-21，例如，包含氨基酸序列：
qgqdrhmirmrqlidivdqlknyvndlvpeflpapedvetncewsafscfqkaqlksantgnneriinvsikklkrkppstnagrrqkhrltcpscdsyekkppkeflerfksllqkmihqhlssrthgseds(seq id no：3442)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或对seq id no：3442的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1006]
在其他实施方案中，细胞因子分子是干扰素γ，例如人干扰素γ，例如，包含氨基酸序列：qdpyvkeaenlkkyfnaghsdvadngtlflgilknwkeesdrkimqsqivsfyfklfknfkddqsiqksvetikedmnvkffnsnkkkrddfekltnysvtdlnvqrkaiheliqvmaelspaaktgkrkrsqmlfrg(seq id no：3443)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或对seq id no：3443的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。免疫细胞衔接物
[1007]
本文公开的多特异性或多功能分子的免疫细胞衔接物，例如第一和/或第二免疫细胞衔接物，可以介导与免疫细胞例如免疫效应细胞的结合和/或活化。在一些实施方案中，免疫细胞选自t细胞、nk细胞、b细胞、树突细胞或巨噬细胞衔接物，或其组合。在一些实施方案中，免疫细胞衔接物选自t细胞衔接物、nk细胞衔接物、b细胞衔接物、树突细胞衔接物或巨噬细胞衔接物中的一个、两个、三个或全部，或其组合。免疫细胞衔接物可以是免疫系统的激动剂。在一些实施方案中，免疫细胞衔接物可以是抗体分子、配体分子(例如，进一步包含免疫球蛋白恒定区，例如fc区的配体)、小分子、核苷酸分子。天然杀伤细胞衔接物
[1008]
天然杀伤(nk)细胞以独立于抗体的方式识别和破坏感染的细胞。nk细胞的调节是通过激活和抑制nk细胞表面的受体来介导的。激活受体的一个家族是天然细胞毒性受体(ncr)，其包括nkp30、nkp44和nkp46。ncr通过识别细胞上的硫酸乙酰肝素来启动靶向。nkg2d是一种受体，可在激活的杀伤(nk)细胞上提供刺激性和共刺激性先天免疫应答，从而导致细胞毒活性。dnam1是参与细胞毒性t淋巴细胞(ctl)和nk细胞介导的细胞间粘附、淋巴细胞信号传导、细胞毒性和淋巴因子分泌的受体。dap10(也称为hcst)是一种跨膜衔接蛋白，可与klrk1缔合形成淋巴样和髓样细胞中的激活受体klrk1-hcst；该受体在触发针对表达细胞表面配体(例如mhc i类链相关的mica和micb)和u(任选地l1)6-结合蛋白(ulbp)的靶细胞的细胞毒性中起主要作用；klrk1-hcst受体在免疫监视中起作用，并且参与细胞的细胞溶解；实际上，不表达klrk1配体的黑色素瘤细胞逃脱了nk细胞介导的免疫监视。cd16是igg fc区的受体，它结合复合或聚集的igg以及单体igg，从而介导抗体依赖性的细胞毒性(adcc)和其他抗体依赖性应答，例如吞噬作用。
[1009]
在一些实施方案中，nk细胞衔接物是病毒血凝素(ha)，ha是在流感病毒表面上发现的糖蛋白。它负责使病毒与膜上带有唾液酸的细胞，例如上呼吸道中的细胞或红细胞结合。ha具有至少18种不同的抗原。这些亚型被命名为h1至h18。ncr可以识别病毒蛋白。已经证明nkp46能够与流感的ha和副粘病毒(包括仙台病毒和新城疫病毒)的ha-na相互作用。除了nkp46，nkp44也可以在功能上与不同流感亚型的ha相互作用。
[1010]
本公开内容尤其提供了多特异性(例如，双、三、四特异性)或多功能分子，其被工
程化为包含一个或多个介导与nk细胞结合和/或激活nk细胞的nk细胞衔接物。因此，在一些实施方案中，nk细胞衔接物选自结合(例如激活)以下项的抗原结合域或配体：nkp30、nkp40、nkp44、nkp46、nkg2d、dnam1、dap10、cd16(例如cd16a、cd16b或两者)、crtam、cd27、psgl1、cd96、cd100(sema4d)、nkp80、cd244(也称为slamf4或2b4)、slamf6、slamf7、kir2ds2、kir2ds4、kir3ds1、kir2ds3、kir2ds5、kir2ds1、cd94、nkg2c、nkg2e或cd160。
[1011]
在一个实施方案中，nk细胞衔接物是nkp30的配体，即b7-6，例如，包含以下氨基酸序列：dlkvemmaggtqitplndnvtifcnifysqplnitsmgitwfwksltfdkevkvfeffgdhqeafrpgaivspwrlksgdaslrlpgiqleeageyrcevvvtplkaqgtvqlevvaspasrllldqvgmkenedkymcessgfypeainitwekqtqkfphpieisedvitgptiknmdgtfnvtsclklnssqedpgtvyqcvvrhaslhtplrsnftltaarhslsetektdnfs(seq id no：3444)、其片段或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3444的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不大于五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1012]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是nkp44或nkp46的配体，即病毒ha。病毒血凝素(ha)是病毒表面的糖蛋白。ha蛋白允许病毒通过唾液酸糖部分与细胞膜结合，唾液酸糖部分有助于病毒膜与细胞膜融合(参见例如，eur j immunol.2001年9月；31(9)：2680-9“recognition of viral hemagglutinins by nkp44 but not by nkp30”；以及nature.2001年2月22日；409(6823)：1055-60“recognition of haemagglutinins on virus-infected cells by nkp46 activates lysis by human nk cells”，其各自的内容均通过引用并入本文)。
[1013]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是选自mica、micb或ulbp1的nkg2d配体，例如，其中：
[1014]
(i)mica包含氨基酸序列：ephslrynltvlswdgsvqsgfltevhldgqpflrcdrqkcrakpqgqwaedvlgnktwdretrdltgngkdlrmtlahikdqkeglhslqeirvceihednstrssqhfyydgelflsqnletkewtmpqssraqtlamnvrnflkedamktkthyhamhadclqelrrylksgvvlrrtvppmvnvtrseasegnitvtcrasgfypwnitlswrqdgvslshdtqqwgdvlpdgngtyqtwvatricqgeeqrftcymehsgnhsthpvpsgkvlvlqshw(seq id no：3445)、其片段或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3445的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不大于五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))；
[1015]
(ii)micb包含氨基酸序列：aephslrynlmvlsqdesvqsgflaeghldgqpflrydrqkrrakpqgqwaedvlgaktwdtetedltengqdlrrtlthikdqkgglhslqeirvceihedsstrgsrhfyydgelflsqnletqestvpqssraqtlamnvtnfwkedamktkthyramqadclqklqrylksgvairrtvppmvnvtcsevsegnitvtcrassfyprnitltwrqdgvslshntqqwgdvlpdgngtyqtwvatrirqgeeqrftcymehsgnhgthpvpsgkvlvlqsqrtd(seq id no：3446)、其片段或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3446的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不大于五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))；或
[1016]
(iii)ulbp1包含氨基酸序列：
gwvdthclcydfiitpksrpepqwcevqglvderpflhydcvnhkakafaslgkkvnvtktweeqtetlrdvvdflkgqlldiqvenlipiepltlqarmsceheahghgrgswqflfngqkfllfdsnnrkwtalhpgakkmtekweknrdvtmffqkislgdckmwleeflmyweqmldptkppslapg(seq id no：3447)、其片段或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3447的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不大于五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1017]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是选自nectin2或necl5的dnam1配体，例如，其中：
[1018]
(i)nectin2包含氨基酸序列：qdvrvqvlpevrgqlggtvelpchllppvpglyislvtwqrpdapanhqnvaafhpkmgpsfpspkpgserlsfvsakqstgqdteaelqdatlalhgltvedegnytcefatfpkgsvrgmtwlrviakpknqaeaqkvtfsqdpttvalciskegrppariswlssldweaketqvsgtlagtvtvtsrftlvpsgradgvtvtckvehesfeepalipvtlsvryppevsisgyddnwylgrtdatlscdvrsnpeptgydwsttsgtfptsavaqgsqlvihavdslfnttfvctvtnavgmgraeqvifvretpntagagatgg(seq id no：3448)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3448的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))；或者
[1019]
(ii)necl5包含氨基酸序列：wpppgtgdvvvqaptqvpgflgdsvtlpcylqvpnmevthvsqltwarhgesgsmavfhqtqgpsyseskrlefvaarlgaelrnaslrmfglrvedegnytclfvtfpqgsrsvdiwlrvlakpqntaevqkvqltgepvpmarcvstggrppaqitwhsdlggmpntsqvpgflsgtvtvtslwilvpssqvdgknvtckvehesfekpqlltvnltvyyppevsisgydnnwylgqneatltcdarsnpeptgynwsttmgplppfavaqgaqllirpvdkpinttlicnvtnalgarqaeltvqvkegppsehsgisrn(seq id no：3449)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3449的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1020]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是dap10的配体，该配体是nkg2d的衔接子(参见例如proc natl acad sci u s a.2005年5月24日；102(21)：7641-7646；和blood，2011年9月15日，第118卷第11期，其各自的全部内容通过引用并入本文。
[1021]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是cd 16的配体，该配体是cd16a/b配体，例如，进一步包含抗体fc区的cd16a/b配体(参见，例如，front immunol.2013；4：76讨论了抗体如何使用fc通过cd16触发nk细胞，其全部内容并入本文)。
[1022]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是crtam的配体，即necl2，例如其中necl2包含氨基酸序列：qnlftkdvtviegevatiscqvnksddsviqllnpnrqtiyfrdfrplkdsrfqllnfssselkvsltnvsisdegryfcqlytdppqesyttitvlvpprnlmidiqkdtavegeeievnctamaskpattirwfkgntelkgkseveewsdmytvtsqlmlkvhkeddgvpvicqvehpavtgnlqtqrylevqykpqvhiqmtyplqgltregdaleltceaigkpqpvmvtwvrvddempqhavlsgpnlfinnlnktdngtyrceasnivgkahsdymlyvydppttippptttttttttttttiltiitdsrageegsiravdh(seq id no：3450)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3450的氨基酸序列具有至
少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1023]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是cd27的配体，即cd70，例如，其中cd70包含氨基酸序列：qrfaqaqqqlpleslgwdvaelqlnhtgpqqdprlywqggpalgrsflhgpeldkgqlrihrdgiymvhiqvtlaicssttasrhhpttlavgicspasrsisllrlsfhqgctiasqrltplargdtlctnltgtllpsrntdetffgvqwvrp(seq id no：3451)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3451的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1024]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是psgl1的配体，即l-选择蛋白(cd62l)，例如，其中l-选择蛋白包含氨基酸序列：wtyhysekpmnwqrarrfcrdnytdlvaiqnkaeieylektlpfsrsyywigirkiggiwtwvgtnkslteeaenwgdgepnnkknkedcveiyikrnkdagkwnddachklkaalcytascqpwscsghgecveiinnytcncdvgyygpqcqfviqcepleapelgtmdcthplgnfsfssqcafscsegtnltgieettcgpfgnwsspeptcqviqceplsapdlgimncshplasfsftsactficsegteligkkkticessgiwsnpspicqkldksfsmikegdyn(seq id no：3452)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3452的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1025]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是cd96的配体，即necl5，例如其中necl5包含氨基酸序列：wpppgtgdvvvqaptqvpgflgdsvtlpcylqvpnmevthvsqltwarhgesgsmavfhqtqgpsyseskrlefvaarlgaelrnaslrmfglrvedegnytclfvtfpqgsrsvdiwlrvlakpqntaevqkvqltgepvpmarcvstggrppaqitwhsdlggmpntsqvpgflsgtvtvtslwilvpssqvdgknvtckvehesfekpqlltvnltvyyppevsisgydnnwylgqneatltcdarsnpeptgynwsttmgplppfavaqgaqllirpvdkpinttlicnvtnalgarqaeltvqvkegppsehsgisrn(seq id no：3449)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3449的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1026]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是cd 100(sema4d)的配体，即cd72，其中cd72包含氨基酸序列：rylqvsqqlqqtnrvlevtnsslrqqlrlkitqlgqsaedlqgsrrelaqsqealqveqrahqaaegqlqacqadrqktketlqseeqqrraleqklsnmenrlkpfftcgsadtccpsgwimhqkscfyisltsknwqesqkqcetlssklatfseiypqshsyyflnsllpnggsgnsywtglssnkdwkltddtqrtrtyaqsskcnkvhktwswwtlesescrsslpyicemtafrfpd(seq id no：3453)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3453的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1027]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是nkp80的配体，即clec2b(aicl)，例如其中clec2b(aicl)包含氨基酸序列：kltrdsqslcpydwigfqnkcyyfskeegdwnsskyncstqhadltiidnieemnflrrykcssdhwiglkmaknrtgqwvdgatftksfgmrgsegcaylsddgaatarcyterkwicrkrih(seq id no：3454)，其片
段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3454的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1028]
在其他实施方案中，nk细胞衔接物是cd244的配体，即cd48，例如，其中cd48包含氨基酸序列：qghlvhmtvvsgsnvtlniseslpenykqltwfytfdqkivewdsrkskyfeskfkgrvrldpqsgalyiskvqkednstyimrvlkktgneqewkiklqvldpvpkpvikiekiedmddncylklscvipgesvnytwygdkrpfpkelqnsvlettlmphnysrcytcqvsnsvsskngtvclsppctlars(seq id no：3455)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3455的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。t细胞衔接物
[1029]
本公开内容尤其提供了多特异性(例如，双、三、四特异性)或多功能分子，其被工程化以包含介导与t细胞结合和/或激活的一个或多个t细胞衔接物。在一些实施方案中，t细胞衔接物是抗原结合域，其结合例如激活tcrβ，例如本文所述的tcrβv区。在一些实施方案中，t细胞衔接物选自与以下一种或多种结合(并且例如在一些实施方案中进行激活)的抗原结合域或配体：cd3、tcrα、tcrγ、tcrζ、icos、cd28、cd27、hvem、light、cd40、4-1bb、ox40、dr3、gitr、cd30、tim1、slam、cd2或cd226。在其他实施方案中，t细胞衔接物选自与以下一种或多种结合但不进行激活的抗原结合域或配体：cd3、tcrα、tcrγ、tcrζ、icos、cd28、cd27、hvem、light、cd40、4-1bb、ox40、dr3、gitr、cd30、tim1、slam、cd2或cd226。b细胞、巨噬细胞和树突细胞衔接物
[1030]
从广义上讲，b细胞，也称为b淋巴细胞，是淋巴细胞亚型的一类白细胞。它们通过分泌抗体在适应性免疫系统的体液免疫组分中起作用。此外，b细胞呈递抗原(它们也被归类为专职性抗原提呈细胞(apc))并分泌细胞因子。巨噬细胞是一类白细胞，其通过吞噬作用吞噬和消化细胞碎片、外来物质、微生物和其他传染原。除了吞噬作用外，它们在非特异性防御(先天免疫)中也发挥着重要作用，并且还通过招募其他免疫细胞如淋巴细胞帮助启动特异性防御机制(适应性免疫)。例如，它们作为t细胞的抗原提呈剂很重要。除了增加炎症和刺激免疫系统，巨噬细胞还发挥重要的抗炎作用，并且可以通过释放细胞因子来减少免疫反应。树突细胞(dc)是抗原提呈细胞，其功能是处理抗原物质并将其在细胞表面上提呈到免疫系统的t细胞。
[1031]
本公开内容尤其提供了多特异性(例如，双、三、四特异性)或多功能分子，其包括例如经工程化以包含一种或多种介导与b细胞、巨噬细胞和/或树突细胞的结合和/或激活的b细胞、巨噬细胞和/或树突细胞衔接物。
[1032]
因此，在一些实施方案中，免疫细胞衔接物包括选自以下的一种或多种的b细胞、巨噬细胞和/或树突细胞衔接物：cd40配体(cd40l)或cd70配体；与cd40或cd70结合的抗体分子；针对ox40的抗体分子；ox40配体(ox40l)；toll样受体的激动剂(例如，如本文所述，例如tlr4，例如组成型活性tlr4(catlr4)，或tlr9激动剂)；41bb；cd2；cd47；或sting激动剂，或其组合。
[1033]
在一些实施方案中，b细胞衔接物是cd40l、ox40l或cd70配体，或与ox40、cd40或
cd70结合的抗体分子。
[1034]
在一些实施方案中，巨噬细胞衔接物是cd2激动剂。在一些实施方案中，巨噬细胞衔接物是与以下结合的抗原结合域：cd40l或与cd40结合的抗原结合域或配体、toll样受体(tlr)激动剂(例如，如本文所述)，例如tlr9或tlr4(例如catlr4(组成型活性tlr4))、cd47或sting激动剂。在一些实施方案中，sting激动剂是环二核苷酸，例如环二gmp(cdgmp)或环二amp(cdamp)。在一些实施方案中，sting激动剂是生物素化的。
[1035]
在一些实施方案中，树突细胞衔接物是cd2激动剂。在一些实施方案中，树突细胞衔接物是与以下一种或多种结合的配体、受体激动剂或抗体分子：ox40l、41bb、tlr激动剂(例如，如本文所述)(例如tlr9激动剂、tlr4(例如catlr4(组成型活性tlr4))、cd47或sting激动剂。在一些实施方案中，sting激动剂是环二核苷酸，例如环二gmp(cdgmp)或环二amp(cdamp)。在一些实施方案中，sting激动剂是生物素化的。
[1036]
在其他实施方案中，免疫细胞衔接物介导与b细胞、巨噬细胞和/或树突细胞中的一个或多个的结合或激活。示例性的b细胞、巨噬细胞和/或树突细胞衔接物可以选自以下一种或多种：cd40配体(cd40l)或cd70配体；与cd40或cd70结合的抗体分子；针对ox40的抗体分子；ox40配体(ox40l)；toll样受体激动剂(例如tlr4，例如组成型活性tlr4(catlr4)或tlr9激动剂)；41bb激动剂；cd2；cd47；或sting激动剂，或其组合。
[1037]
在一些实施方案中，b细胞衔接物选自cd40l、ox40l或cd70配体或与ox40、cd40或cd70结合的抗体分子中的一种或多种。
[1038]
在其他实施方案中，巨噬细胞衔接物选自以下一种或多种：cd2激动剂；cd40l；ox40l；与ox40、cd40或cd70结合的抗体分子；toll样受体激动剂或其片段(例如tlr4，例如组成型活性tlr4(catlr4))；cd47激动剂；或sting激动剂。
[1039]
在其他实施方案中，树突细胞衔接物选自以下一种或多种：cd2激动剂、ox40抗体、ox40l、41bb激动剂、toll样受体激动剂或其片段(例如tlr4，例如组成型活性tlr4(catlr4))、cd47激动剂或sting激动剂。
[1040]
在一个实施方案中，ox40l包含氨基酸序列：qvshrypriqsikvqfteykkekgfiltsqkedeimkvqnnsviincdgfylislkgyfsqevnislhyqkdeeplfqlkkvrsvnslmvasltykdkvylnvttdntslddfhvnggelilihqnpgefcvl(seq id no：3456)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3456的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1041]
在另一个实施方案中，cd40l包含氨基酸序列：mqkgdqnpqiaahviseasskttsvlqwaekgyytmsnnlvtlengkqltvkrqglyyiyaqvtfcsnreassqapfiaslclkspgrferillraanthssakpcgqqsihlggvfelqpgasvfvnvtdpsqvshgtgftsfgllkl(seq id no：3457)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3457的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
[1042]
在其他实施方案中，sting激动剂包含环二核苷酸，例如环二gmp(cdgmp)、环二amp(cdamp)或其组合，任选地具有2
′
，5
′
或3
′
，5
′
磷酸酯键。
[1043]
在一个实施方案中，免疫细胞衔接物包括41bb配体，例如，其包含氨基酸序列：
acpwavsgaraspgsaasprlregpelspddpaglldlrqgmfaqlvaqnvllidgplswysdpglagvsltgglsykedtkelvvakagvyyvffqlelrrvvagegsgsvslalhlqplrsaagaaalaltvdlppassearnsafgfqgrllhlsagqrlgvhlhteararhawqltqgatvlglfrvtpeipaglpsprse(seq id no：3458)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3458的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。toll样受体
[1044]
toll样受体(tlr)是进化保守的受体，是果蝇属toll蛋白的同源物，可识别被称为病原体相关微生物模式(pamp)(仅由微生物病原体表达)或与危险相关的分子模式(damp)(从坏死或垂死细胞释放的内源性分子)的高度保守的结构基序。pamp包括各种细菌细胞壁组分，例如脂多糖(lps)、肽聚糖(pgn)和脂肽，以及鞭毛蛋白、细菌dna和病毒双链rna。damp包括细胞内蛋白(例如热激蛋白)以及来自细胞外基质的蛋白质片段。相应的pamp或damp对tlr的刺激会引发信号级联反应，从而导致转录因子(例如ap-1、nf-κb和干扰素调节因子(irf))的激活。tlr发出的信号导致多种细胞反应，包括干扰素(ifn)、促炎性细胞因子和效应细胞因子的产生，它们指导适应性免疫应答。tlr与多种炎症和免疫疾病有关。
[1045]
tlr是i型跨膜蛋白，其特征在于含有富含亮氨酸的重复序列(lrr)的细胞外结构域和含有称为toll/il-1受体(tir)结构域的保守区域的胞质尾区。已鉴定出十个人类tlr和十二个鼠tlr，人类中为tlr1至tlr10，小鼠中为tlr1至tlr9、tlr11、tlr12和tlr13，tlr10的同源物是假基因。tlr2对于识别革兰氏阳性细菌中的多种pamp，包括细菌脂蛋白、脂甘露聚糖和脂磷壁酸至关重要。tlr3与病毒衍生的双链rna有关。tlr4主要被脂多糖激活。tlr5检测细菌鞭毛蛋白，而对未甲基化的cpg dna的应答则需要tlr9。最后，tlr7和tlr8识别小的合成抗病毒分子，据报道单链rna是其天然配体。据报道，tlr11识别来自尿道致病性大肠杆菌和鼠弓形虫的抑制蛋白样蛋白质。tlr彼此异源二聚化的能力显然可以扩展tlr的全部特异性。例如，对二酰化脂蛋白的应答需要tlr2和tlr6的二聚体，而tlr2和tlr1相互作用以识别三酰化脂蛋白。tlr的特异性还受到各种衔接子和辅助分子的影响，例如md-2和cd 14，它们响应于lps而与tlr4形成复合物。
[1046]
tlr信号传导由至少两个不同的途径组成：导致炎症细胞因子产生的myd88依赖性途径，以及与ifn-β刺激和树突细胞成熟相关的myd88非依赖性途径。除tlr3以外，myd88依赖性途径是除tlr3以外的所有tlr共有的(adachi o.等人，1998.targeted disruption of the myd88 gene results in loss of il-1-and il-18-mediated function，immunity.9(1)：143-50)。通过pamp或damp激活后，tlr异源或同源二聚化通过胞质tir结构域诱导衔接蛋白的募集。各个tlr通过使用不同的衔接分子诱导不同的信号传导响应。tlr4和tlr2信号传导需要衔接子tirap/mal，该衔接子参与myd 88依赖性途径。tlr3以myd88非依赖性方式通过衔接子trif/ticam-1触发对双链rna的应答的ifn-β产生。tram/tic am-2是参与myd 88非依赖性途径的另一个衔接分子，其功能被限制于tlr4途径。
[1047]
tlr3、tlr7、tlr8和tlr9识别病毒核酸并诱导i型ifn。根据激活的tlr，导致i型ifn诱导的信号传导机制不同。它们涉及干扰素调节因子irf——已知在抗病毒防御、细胞生长和免疫调节中起关键作用的转录因子亚家族。三个irf(irf3、irf5和irf7)充当病毒介导的tlr信号传导的直接转导物。tlr3和tlr4激活irf3和irf7，而tlr7和tlr8激活irf5和irf7
(doyle s.等人，2002.irf3 mediates a tlr3/tlr4-specific antiviral gene program，immunity.17(3)：251-63)。此外，已显示由tlr9配体cpg-a刺激的i型ifn产生是由pi(3)k和mtor介导的(costa-mattioli m.和sonenberg n.2008.rapping production of type i interferon in pdcs through mtor，nature immunol.9：1097-1099)tlr-9
[1048]
tlr9识别dna分子中未甲基化的cpg序列。与细菌基因组或病毒dna相比，cpg位点在脊椎动物基因组上相对较少(约1％)。tlr9由免疫系统的许多细胞表达，例如b淋巴细胞、单核细胞、天然杀伤(nk)细胞和浆细胞样树突细胞。tlr9在内体区室中细胞内表达，并通过与富含cpg基序的dna结合来提醒免疫系统有病毒和细菌感染。tlr9信号导致激活引发促炎症反应的细胞，从而导致产生细胞因子，如i型干扰素和il-12。tlr激动剂
[1049]
tlr激动剂可以激动一种或多种tlr，例如人tlr-1、2、3、4、5、6、7、8、9或10中的一种或多种。在一些实施方案中，本文所述的辅助剂是tlr激动剂。在一些实施方案中，tlr激动剂特异性地激动人tlr-9。在一些实施方案中，tlr-9激动剂是cpg部分。如本文所用，cpg部分是线性的二核苷酸，具有序列：5
’‑
c-磷酸盐-g-3’，即，仅被一个磷酸盐分开的胞嘧啶和鸟嘌呤。
[1050]
在一些实施方案中，cpg部分包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多个cpg二核苷酸。在一些实施方案中，cpg部分由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个cpg二核苷酸组成。在一些实施方案中，cpg部分具有1-5、1-10、1-20、1-30、1-40、1-50、5-10、5-20、5-30、10-20、10-30、10-40或10-50个cpg二核苷酸。
[1051]
在一些实施方案中，tlr-9激动剂是合成的odn(寡脱氧核苷酸)。cpg odn是短的合成的单链dna分子，在特定的序列环境(cpg基序)中包含未甲基化的cpg二核苷酸。与基因组细菌dna中发现的天然磷酸二酯(po)骨架相反，cpg odn具有部分或完全硫代磷酸酯(ps)骨架。cpg odn主要分为三类：a、b和c类，它们的免疫刺激活性不同。cpg-a odn的特征是po中心含cpg回文基序和ps修饰的3’多聚鸟苷酸(poly-g)串(string)。它们诱导pdc产生大量ifn-α，但是是tlr9依赖性nf-κb信号传导和促炎性细胞因子(例如il-6)产生的较弱刺激物。cpg-b odn包含具有一个或多个cpg二核苷酸的完整ps骨架。它们强烈激活b细胞和tlr9依赖性nf-κb信号传导，但微弱刺激ifn-α分泌。cpg-c odn结合了a类和b类的特征。它们包含完整的ps骨架和含cpg的回文基序。c类cpg odn诱导pdc产生大量的ifn-α并刺激b细胞。感染性疾病靶向部分
[1052]
本公开尤其提供了多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)分子，其包括，例如，被工程改造为含有一种或多种将分子引导至传染原或其部分(例如，如本文所述)的感染性疾病靶向部分。
[1053]
在某些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括感染性疾病靶向部分。感染性疾病靶向部分可以选自抗体分子(例如，如本文所述的抗原结合域)、受体或受体片段或配体或配体片段，或其组合。在一些实施方案中，感染性疾病靶向部分与传染原或其部分(例如，分子，例如抗原，存在于、源自或包含在传染原中)缔合，例如结合。在某些实施方案中，感染性疾病靶向部分靶向，例如，将本文公开的多特异性分子引导至传染原或其部分，例
如，如本文所述。基质修饰部分
[1054]
本文所述的基质修饰部分包括能够降解基质组分的部分，该基质组分是例如ecm组分，例如糖胺聚糖，例如乙酰透明质酸(也称为透明质酸或ha)、硫酸软骨素、软骨素、硫酸皮肤素、硫酸肝素、肝素、巢蛋白、生腱蛋白、聚集蛋白聚糖和硫酸角蛋白；或细胞外蛋白，例如胶原蛋白、层粘连蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白原、纤连蛋白和玻连蛋白。基质修饰酶
[1055]
在一些实施方案中，基质修饰部分是酶。例如，基质修饰部分可包括但不限于透明质酸酶、胶原酶、软骨素酶、基质金属蛋白酶(例如，巨噬细胞金属弹性蛋白酶)。透明质酸酶
[1056]
透明质酸酶是在整个动物界中发现的一组中性和酸性的活性酶。透明质酸酶在底物特异性和作用机理方面有所不同。透明质酸酶一般分为三类：(1)哺乳动物型透明质酸酶(ec 3.2.1.35)，它们是内切-β-n-乙酰基己糖苷酶，四糖和六糖为主要终产物。它们同时具有水解和转糖苷酶活性，并且可以降解乙酰透明质酸和硫酸软骨素；(2)细菌透明质酸酶(ec 4.2.99.1)降解乙酰透明质酸，并在不同程度上降解硫酸软骨素和硫酸皮肤素。它们是内切-β-n-乙酰基己糖胺酶，通过β消除反应起作用，主要产生二糖终产物；(3)来自水蛭、其他寄生虫和甲壳类的透明质酸酶(ec 3.2.1.36)是内切β-葡糖醛酸糖苷酶，可通过水解β1-3键产生四糖和六糖终产物。
[1057]
哺乳动物的透明质酸酶可以进一步分为两组：(1)中性活性酶和(2)酸性活性酶。人类基因组中有六个透明质酸酶样基因：hyal1、hyal2、hyal3、hyal4、hyalp1和ph20/spam1。hyalp1是假基因，尚未显示hyal3具有针对任何已知底物的酶活性。hyal4是一种软骨素酶，对乙酰透明质酸缺乏活性。hyal1是原型酸活性酶，ph20是原型中性活性酶。酸性活性透明质酸酶(例如hyal1和hyal2)在中性ph下缺乏催化活性。例如，hyal1在ph超过4.5的条件下在体外没有催化活性(frost和stern，“a microtiter-based assay for hyaluronidase activity not requiring specialized reagents”，analytical biochemistry，第251卷，第263-269页(1997)。hyal2是一种在体外具有非常低的特异性活性的酸性活性酶。
[1058]
在一些实施方案中，透明质酸酶是哺乳动物透明质酸酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是重组人透明质酸酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是中性活性透明质酸酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是中性活性的可溶性透明质酸酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是重组ph20中性活性酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是重组ph20中性活性的可溶性酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是糖基化的。在一些实施方案中，透明质酸酶具有至少一种n-连接的聚糖。重组透明质酸酶可以使用本领域技术人员已知的常规方法例如us7767429来生产，其全部内容通过引用并入本文。
[1059]
在一些实施方案中，透明质酸酶是rhuph20(也称为目前由halozyme制造；在2005年被fda批准(参见例如scodeller p(2014)hyaluronidase and other extracellular matrix degrading enzymes for cancer therapy：new uses and nano-formulations.j carcinog mutage 5：178；us7767429；us8202517；us7431380；us8450470；us8772246；us8580252，其各自的全部内容通过引用并入本文)。rhuph20由基因改造的cho
细胞产生，该细胞含有编码人透明质酸酶ph20的可溶性片段的dna质粒。在一些实施方案中，透明质酸酶是糖基化的。在一些实施方案中，透明质酸酶具有至少一种n-连接的聚糖。重组透明质酸酶可以使用本领域技术人员已知的常规方法例如us7767429来生产，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，rhuph20具有与以下氨基酸序列至少95％(例如，至少96％、97％、98％、99％、100％)相同的序列lnfrappvipnvpflwawnapsefclgkfdepldmslfsfigsprinatgqgvtifyvdrlgyypyidsitgvtvnggipqkislqdhldkakkditfympvdnlgmavidweewrptwarnwkpkdvyknrsielvqqqnvqlslteatekakqefekagkdflvetiklgkllrpnhlwgyylfpdcynhhykkpgyngscfnveikrnddlswlwnestalypsiylntqqspvaatlyvrnrvreairvskipdaksplpvfaytrivftdqvlkflsqdelvytfgetvalgasgiviwgtlsimrsmkscllldnymetilnpyiinvtlaakmcsqvlcqeqgvcirknwnssdylhlnpdnfaiqlekggkftvrgkptledleqfsekfycscystlsckekadvkdtdavdvciadgvcidaflkppmeteepqifynaspstls(seq id no：3459)。
[1060]
在本文提供的任何方法中，抗乙酰透明质酸试剂可以是降解乙酰透明质酸的试剂或可以是抑制乙酰透明质酸合成的试剂。例如，抗乙酰透明质酸试剂可以是乙酰透明质酸降解酶。在另一个实例中，抗乙酰透明质酸试剂为抑制乙酰透明质酸合成的试剂。例如，抗乙酰透明质酸试剂是抑制乙酰透明质酸合成的试剂，例如针对ha合酶的有义或反义核酸分子，或者是小分子药物。例如，抗乙酰透明质酸试剂是4-甲基伞形酮(mu)或其衍生物，或来氟米特或其衍生物。这样的衍生物包括例如4-甲基伞形酮(mu)的衍生物，即6，7-二羟基-4-甲基香豆素或5，7-二羟基-4-甲基香豆素。
[1061]
在本文提供的方法的其他实例中，乙酰透明质酸降解酶是透明质酸酶。在一些实例中，乙酰透明质酸降解酶是ph20透明质酸酶或其截短形式，该截短形式缺乏c末端糖基磷脂酰肌醇(gpi)附着位点或gpi附着位点的一部分。在特定的实例中，透明质酸酶是选自人、猴、牛、绵羊、大鼠、小鼠或豚鼠的ph20的ph20。例如，乙酰透明质酸降解酶是具有中性活性并被n-糖基化的人ph20透明质酸酶，并且选自(a)为全长ph20或为ph20的c末端截短形式的透明质酸酶多肽，其中截短形式至少包含seq id no：3459的氨基酸残基36-464，例如36-481、36-482、36-483，其中全长ph20具有seq id no：3459所示的氨基酸序列；或(b)包含的氨基酸序列与seq id no：3459所示的氨基酸序列的多肽或截短形式具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性的透明质酸酶多肽；或(c)包含氨基酸置换的(a)或(b)的透明质酸酶多肽，其中该透明质酸酶多肽具有的氨基酸序列与seq id no：3459所示的多肽或其相应的截短形式具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性。在示例性实例中，乙酰透明质酸降解酶是ph20，其包含称为rhuph20的组成。
[1062]
在其他实例中，抗乙酰透明质酸试剂是乙酰透明质酸降解酶，其通过缀合至聚合物而被修饰。聚合物可以是peg，抗乙酰透明质酸试剂是peg化的乙酰透明质酸降解酶。因此，在本文提供的方法的一些实例中，乙酰透明质酸降解酶通过缀合至聚合物而被修饰。例如，乙酰透明质酸降解酶缀合至peg，因此乙酰透明质酸降解酶被peg化。在示例性的实例中，乙酰透明质酸降解酶是peg化的ph20酶(pegph20)。在本文提供的方法中，皮质类固醇可以是糖皮质激素，选自可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙和泼尼松。软骨素酶
[1063]
软骨素酶是在整个动物界中发现的一种酶，其通过内切糖苷酶反应降解糖胺聚糖，特别是软骨素和硫酸软骨素。在一些实施方案中，软骨素酶是哺乳动物软骨素酶。在一些实施方案中，软骨素酶是重组人软骨素酶。在一些实施方案中，软骨素酶是hyal4。其他示例性的软骨素酶包括软骨素酶abc(衍生自普通变形杆菌(proteus vulgaris)；日本专利申请公开号6-153947；t.yamagata等人，j.biol.chem.，243，1523(1968)；s.suzuki等人，j.biol.chem.，243，1543(1968))、软骨素酶ac(衍生自肝素黄杆菌(flavobacterium heparinum)；t.yamagata等人，j.biol.chem.，243，1523(1968))、软骨素酶ac ii(衍生自金黄节杆菌(arthrobacter aurescens)；k.hiyama和s.okada，j.biol.chem.，250，1824(1975)；k.hiyama和s.okada，j.biochem.(tokyo)，80，1201(1976))、透明质酸酶aciii(衍生自黄杆菌属种(flavobacterium sp.)hpl02；hirofumi miyazono等人，seikagaku，61，1023(1989))、软骨素酶b(衍生自肝素黄杆菌；y.m.michelacci和c.p.dietrich，biochem.biophys.res.commun.，56，973(1974)；y.m.michelacci和c.p.dietrich，biochem.j.，151，121(1975)；kenichi maeyama等人，seikagaku，57，1189(1985))、软骨素酶c(衍生自黄杆菌属种hp102；hirofumi miyazono等人，seikagaku，61，1023(1939))等。基质金属蛋白酶
[1064]
基质金属蛋白酶(mmp)是锌依赖性内肽酶，是参与细胞外基质(ecm)降解的主要蛋白酶。mmp能够降解各种细胞外分子和许多生物活性分子。已在人体中鉴定出二十四个mmp基因，根据域排布和底物偏好可将其分为六类：胶原酶(mmp-1、-8和-13)、明胶酶(mmp-2和mmp-9)、基质溶素(mmp-3、-10和-11)、基质溶解因子(mmp-7和mmp-26)、膜类型(mt)-mmp(mmp-14、-15、-16、-17、-24和-25)和其他(mmp-12、-19、-20、-21、-23、-27和-28)。在一些实施方案中，基质修饰部分是人重组mmp(例如，mmp-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-9、10、-11、-12、-13、-14、15、-15、-17、-18、-19、20、-21、-22、-23或-24)。胶原酶
[1065]
三种哺乳动物胶原酶(mmp-1、mmp-8和mmp-13)是能够裂解胶原细胞外基质的主要分泌的内肽酶。除了纤维胶原，胶原酶还可以裂解其他几种基质和非基质蛋白，包括生长因子。胶原酶被合成为非活性的替代形式，一旦被激活，其活性就会被金属蛋白酶、timp的特异性组织抑制剂以及非特异性蛋白酶抑制剂所抑制(ala-aho r等人，biochimie.collagenases in cancer.2005年3月-4月；87(3-4)：273-86)。在一些实施方案中，基质修饰部分是胶原酶。在一些实施方案中，胶原酶是人重组胶原酶。在一些实施方案中，胶原酶是mmp-1。在一些实施方案中，胶原酶是mmp-8。在一些实施方案中，胶原酶是mmp-13。巨噬细胞金属弹性蛋白酶
[1066]
巨噬细胞金属弹性蛋白酶(mme)，也称为mmp-12，是mmp基质溶素亚组的成员，催化可溶和不可溶弹性蛋白以及多种基质和非基质底物的水解，包括iv型胶原蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白、巢蛋白、乙酰肝素和硫酸软骨素(erja等人，journal of investigative dermatology(2000)114，1113-1119；doi：10.1046/j.1523-1747.2000.00993)。在一些实施方案中，基质修饰部分是mme。在一些实施方案中，mme是人重组mme。在一些实施方案中，mme是mmp-12。额外的基质修饰部分
[1067]
在一些实施方案中，基质修饰部分降低基质或细胞外基质(ecm)组分的水平或产生。
[1068]
在一些实施方案中，降低的基质或ecm组分选自糖胺聚糖或细胞外蛋白，或其组合。在一些实施方案中，糖胺聚糖选自乙酰透明质酸(也称为透明质酸或ha)、硫酸软骨素、软骨素、硫酸皮肤素、肝素、硫酸肝素、巢蛋白、生腱蛋白、聚集蛋白聚糖和硫酸角蛋白。在一些实施方案中，细胞外蛋白选自胶原蛋白、层粘连蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白原、纤连蛋白或玻连蛋白。在一些实施方案中，基质修饰部分包括降解基质或细胞外基质(ecm)的酶分子。在一些实施方案中，酶分子选自透明质酸酶分子、胶原酶分子、软骨素酶分子、基质金属蛋白酶分子(例如，巨噬细胞金属弹性蛋白酶)或上述任何一种的变体(例如，片段)。术语“酶分子”包括酶的全长、片段或变体，例如保留天然存在的酶的至少一种功能性质的酶变体。
[1069]
在一些实施方案中，基质修饰部分降低了透明质酸的水平或产生。在其他实施方案中，基质修饰部分包含乙酰透明质酸降解酶、抑制乙酰透明质酸合成的试剂或抗透明质酸的抗体分子。
[1070]
在一些实施方案中，乙酰透明质酸降解酶是透明质酸酶分子，例如其全长或其变体(例如，其片段)。在一些实施方案中，乙酰透明质酸降解酶在中性或酸性ph，例如约4-5的ph中具有活性。在一些实施方案中，透明质酸酶分子是哺乳动物透明质酸酶分子，例如重组人透明质酸酶分子，例如其全长或变体(例如其片段，例如截短形式)。在一些实施方案中，透明质酸酶分子选自hyal1、hyal2或ph-20/spam1，或其变体(例如，其截短形式)。在一些实施方案中，截短形式缺乏c末端糖基磷脂酰肌醇(gpi)附着位点或gpi附着位点的一部分。在一些实施方案中，透明质酸酶分子被糖基化，例如包含至少一种n-连接的聚糖。
[1071]
在一些实施方案中，透明质酸酶分子包含氨基酸序列：lnfrappvipnvpflwawnapsefclgkfdepldmslfsfigsprinatgqgvtifyvdrlgyypyidsitgvtvnggipqkislqdhldkakkditfympvdnlgmavidweewrptwarnwkpkdvyknrsielvqqqnvqlslteatekakqefekagkdflvetiklgkllrpnhlwgyylfpdcynhhykkpgyngscfnveikrnddlswlwnestalypsiylntqqspvaatlyvrnrvreairvskipdaksplpvfaytrivftdqvlkflsqdelvytfgetvalgasgiviwgtlsimrsmkscllldnymetilnpyiinvtlaakmcsqvlcqeqgvcirknwnssdylhlnpdnfaiqlekggkftvrgkptledleqfsekfycscystlsckekadvkdtdavdvciadgvcidaflkppmeteepqifynaspstls(seq id no：3464)，或其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3464的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换)。
[1072]
在一些实施方案中，透明质酸酶分子包括：(i)seo id no：3464的36-464的氨基酸序列；(ii)ph20的36-481、36-482或36-483的氨基酸序列，其中ph20具有seq id no：3464所示的氨基酸序列；或者(iii)与seq id no：3464所示的氨基酸序列的多肽或截短形式具有至少95％至100％序列同一性的氨基酸序列；或者(iv)对seq id no：3464所示的氨基酸序列具有30、20、10、5或更少的氨基酸置换的氨基酸序列。在一些实施方案中，透明质酸酶分子包含与seq id no：3464的氨基酸序列至少95％(例如，至少95％、96％、97％、98％、99％、100％)相同的氨基酸序列。在一些实施
方案中，透明质酸酶分子由与seq id no：3464的核苷酸序列至少95％(例如，至少96％、97％、98％、99％、100％)相同的核苷酸序列编码。
[1073]
在一些实施方案中，透明质酸酶分子是ph20，例如rhuph20。在一些实施方案中，透明质酸酶分子是hyal1并包含氨基酸序列：frgpllpnrpfttvwnantqwclerhgvdvdvsvfdvvanpgqtfrgpdmtifyssqgtypyytptgepvfgglpqnasliahlartfqdilaaipapdfsglavidweawrprwafnwdtkdiyrqrsralvqaqhpdwpapqveavaqdqfqgaarawmagtlqlgralrprglwgfygfpdcynydflspnytgqcpsgiraqndqlgwlwgqsralypsiympavlegtgksqmyvqhrvaeafrvavaagdpnlpvlpyvqifydttnhflpldelehslgesaaqgaagvvlwvswentrtkescqaikeymdttlgpfilnvtsgallcsqalcsghgrcvrrtshpkallllnpasfsiqltpgggplslrgalsledqaqmavefkcrcypgwqapwcerksmw(seq id no：3465)，或其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3465的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))的氨基酸序列。
[1074]
在一些实施方案中，乙酰透明质酸降解酶，例如透明质酸酶分子，进一步包含聚合物，例如缀合至聚合物，例如peg。在一些实施方案中，乙酰透明质酸降解酶是peg化的ph20酶(pegph20)。在一些实施方案中，乙酰透明质酸降解酶，例如透明质酸酶分子，进一步包含免疫球蛋白链恒定区(例如fc区)，该免疫球蛋白链恒定区选自例如igg1、igg2、igg3和igg4的重链恒定区，更具体而言，人igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区。在一些实施方案中，免疫球蛋白恒定区(例如fc区)与乙酰透明质酸降解酶例如透明质酸酶分子连接，例如共价连接。在一些实施方案中，改变免疫球蛋白链恒定区(例如fc区)，例如使其突变，以增加或减少以下一种或多种：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能。在一些实施方案中，乙酰透明质酸降解酶，例如透明质酸酶分子形成二聚体。
[1075]
在一些实施方案中，基质修饰部分包含乙酰透明质酸合成例如ha合酶的抑制剂。在一些实施方案中，抑制剂包含针对ha合酶的有义或反义核酸分子或为小分子药物。在一些实施方案中，抑制剂是4-甲基伞形酮(mu)或其衍生物(例如6，7-二羟基-4-甲基香豆素或5，7-二羟基-4-甲基香豆素)或来氟米特或其衍生物。
[1076]
在一些实施方案中，基质修饰部分包含针对透明质酸的抗体分子。
[1077]
在一些实施方案中，基质修饰部分包含胶原酶分子，例如哺乳动物胶原酶分子，或其变体(例如，片段)。在一些实施方案中，胶原酶分子是胶原酶分子iv，例如，包含以下氨基酸序列：ynffprkpkwdknqityriigytpdldpetvddafarafqvwsdvtplrfsrihdgeadiminfgrwehgdgypfdgkdgllahafapgtgvggdshfdddelwtlgegqvvrvkygnadgeyckfpflfngkeynsctdtgrsdgflwcsttynfekdgkygfcphealftmggnaegqpckfpfrfqgtsydscttegrtdgyrwcgttedydrdkkygfcpetamstvggnsegapcvfpftflgnkyesctsagrsdgkmwcattanydddrkwgfcpdqgyslflvaahefghamglehsqdpgalmapiytytknfrlsqddikgiqelygaspdidlgtgptptlgpvtpeickqdivfdgiaqirgeifffkdrfiwrtvtprdkpmgpllvatfwpelpekidavyeapqeekavffagneywiysastlergypkpltslglppdvqrvdaafnwsknkktyifagdkfwrynevkkkmdpgfpkliadawnaipdnldavvdlqggghsyffkgayylklenqslksvkfgsiksdwlgc(seq id no：3466)，其片段，或与其基本上相同的氨基酸序列(例如，与其95％至99.9％相同，或相对于seq id no：3466的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，置换、缺失或插入，例如保守置换))。
接头
[1078]
本文公开的多特异性或多功能分子可以进一步包括接头，例如，在以下一种或多种之间的接头：抗原结合域和细胞因子分子、抗原结合域和免疫细胞衔接物、抗原结合域和基质修饰部分、细胞因子分子和免疫细胞衔接物、细胞因子分子和基质修饰部分、免疫细胞衔接物和基质修饰部分、抗原结合域和免疫球蛋白链恒定区、细胞因子分子和免疫球蛋白链恒定区、免疫细胞衔接物和免疫球蛋白链恒定区，或基质修饰部分和免疫球蛋白链恒定区。在实施方案中，接头选自：可裂解的接头、不可裂解的接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头，或其组合。
[1079]
在一个实施方案中，多特异性分子可包括一个、两个、三个或四个接头，例如肽接头。在一个实施方案中，肽接头包括gly和ser。在一些实施方案中，肽接头选自ggggs(seq id no：3460)；ggggsggggs(seq id no：3461)；ggggsggggsggggs(seq id no：3462)；和dvpsgpgggggsggggs(seq id no：3463)。在一些实施方案中，肽接头是接头的a(eaaak)na(seq id no：3477)家族(例如，如protein eng.(2001)14(8)：529-532)所述)。这些是刚性螺旋接头，n范围为2-5。在一些实施方案中，肽接头选自aeaaakeaaakaaa(seq id no：3467)；aeaaakeaaakeaaakaaa(seq id no：3468)；aeaaakeaaakeaaakeaaakaaa(seq id no：3469)；和aeaaakeaaakeaaakeaaakeaaakaaa(seq id no：3470)。核酸
[1080]
还公开了编码前述抗体分子，例如抗tcrβv抗体分子，多特异性或多功能分子的核酸。
[1081]
在某些实施方案中，本发明的特征在于核酸，其包含编码如本文所述的抗体分子的重链和轻链可变区和cdr或高变环的核苷酸序列。例如，本发明的特征在于分别编码选自本文公开的一种或多种抗体分子的抗体分子的重链和轻链可变区的第一核酸和第二核酸。核酸可包含如本文表中所列的核苷酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同的序列)或与本文表中所示的序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列。
[1082]
在某些实施方案中，核酸可包含编码来自重链可变区的至少一个、两个或三个cdr或高变环的核苷酸序列，所述重链可变区具有如本文表中所列的氨基酸序列或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或具有一个或多个置换，例如保守置换的序列)。在其他实施方案中，核酸可包含编码来自轻链可变区的至少一个、两个或三个cdr或高变环的核苷酸序列，所述轻链可变区具有如本文表中所列的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或具有一个或多个置换，例如保守置换)。在又一个实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr或高变环的核苷酸序列，所述重链可变区和轻链可变区具有本文表中所列的氨基酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或具有一个或多个置换，例如保守置换的序列)。
[1083]
在某些实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区的至少一个、两个或三个cdr或高变环的核苷酸序列，所述重链可变区具有如本文表中所列的核苷酸序列，与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或能够在本文描述的
严格条件下杂交的序列)。在另一个实施方案中，核酸可以包含编码来自轻链可变区的至少一个、两个或三个cdr或高变环的核苷酸序列，所述轻链可变区具有如本文表中所列的核苷酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或能够在本文描述的严格条件下杂交的序列)。在另一个实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr或高变环的核苷酸序列，所述重链可变区和轻链可变区具有本文表中所列的核苷酸序列，或与其基本同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更加相同，和/或能够在本文描述的严格条件下杂交的序列)。
[1084]
在某些实施方案中，核酸可以包含编码本文公开的细胞因子分子、免疫细胞衔接物或基质修饰部分的核苷酸序列。
[1085]
在另一方面，本技术的特征在于含有本文所述核酸的宿主细胞和载体。核酸可以存在于同一宿主细胞或不同的宿主细胞中的单个载体或不同载体中，如下文更详细地描述。载体
[1086]
本文还提供了载体，其包含编码抗体分子例如抗tcrβv抗体分子或本文所述的多特异性或多功能分子的核苷酸序列。在一个实施方案中，载体包含编码抗体分子例如抗tcrβv抗体分子或本文所述的多特异性或多功能分子的核酸序列。在一个实施方案中，载体包含本文所述的核苷酸序列。载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工合成染色体(yac)。
[1087]
可以采用许多载体系统。例如，一类载体利用来自动物病毒的dna元件，所述动物病毒例如牛乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、杆状病毒、逆转录病毒(rous肉瘤病毒、mmtv或momlv)或sv40病毒。另一类载体利用来自rna病毒(例如西门利克森林病毒、东方马脑炎病毒和黄病毒)的rna元件。
[1088]
另外，可以通过引入一种或多种允许选择转染的宿主细胞的标记来选择dna被稳定整合到其染色体中的细胞。例如，标记可以向营养缺陷宿主提供质子移变、杀生物剂抗性(例如抗生素)或对重金属如铜的抗性等。可选择的标记基因可以直接连接到要表达的dna序列，或可以通过共转化引入相同的细胞。mrna的最佳合成可能还需要其他元件。这些元件可能包括剪接信号，以及转录启动子、增强子和终止信号。
[1089]
一旦准备好用于表达的表达载体或包含dna序列的构建体，就可以将表达载体转染或引入合适的宿主细胞中。可以采用多种技术来实现这一点，例如，原生质体融合、磷酸钙沉淀、电穿孔、逆转录病毒转导、病毒转染、基因枪、基于脂质的转染或其他常规技术。在原生质体融合的情况下，将细胞在培养基中生长并筛选适当的活性。
[1090]
用于培养所得转染细胞和用于回收产生的抗体分子的方法和条件是本领域技术人员已知的，并且基于本说明书，可以根据所使用的特定表达载体和哺乳动物宿主细胞进行改变或优化。细胞
[1091]
另一方面，本技术的特征在于含有本文所述核酸的宿主细胞和载体。核酸可以存在于同一宿主细胞或不同宿主细胞中的单个载体或不同载体中。宿主细胞可以是真核细胞，例如，哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或原核细胞，例如，大肠杆菌。例如，哺乳动物
细胞可以是培养的细胞或细胞系。示例性的哺乳动物细胞包括淋巴细胞细胞系(例如，nso)、中国仓鼠卵巢细胞(cho)、cos细胞、卵母细胞和来自转基因动物的细胞，例如，乳腺上皮细胞。
[1092]
本发明还提供了包含编码本文所述抗体分子的核酸的宿主细胞。
[1093]
在一个实施方案中，对宿主细胞进行遗传工程化以包含编码抗体分子的核酸。
[1094]
在一个实施方案中，通过使用表达盒对宿主细胞进行遗传工程化。短语“表达盒”是指核苷酸序列，其能够影响基因在与此类序列相容的宿主中的表达。这样的盒可以包括启动子，具有或没有内含子的可读框以及终止信号。也可以使用对影响表达所必需或有帮助的其他因素，例如可诱导的启动子。
[1095]
本发明还提供了包含本文所述载体的宿主细胞。
[1096]
该细胞可以是但不限于真核细胞、细菌细胞、昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于vero细胞、hela细胞、cos细胞、cho细胞、hek293细胞、bhk细胞和mdckii细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于sf9细胞。用抗tcrvb抗体扩增细胞的方法
[1097]
本文所述的任何组合物和方法均可用于扩增免疫细胞群。本文提供的免疫细胞包括衍生自造血干细胞的免疫细胞或衍生自非造血干细胞的免疫细胞，例如通过分化或去分化。
[1098]
免疫细胞包括造血干细胞，其后代和/或已经从所述hsc分化的细胞，例如淋巴样细胞或髓样细胞。免疫细胞可以是适应性免疫细胞或先天免疫细胞。免疫细胞的实例包括t细胞、b细胞、天然杀伤细胞、天然杀伤t细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、单核细胞、巨噬细胞和粒细胞。
[1099]
在本文公开的组合物的任何方法的一些实施方案中，免疫细胞是t细胞。在一些实施方案中，t细胞包括cd4+t细胞、cd8+t细胞、tcrα-βt细胞、tcrγ-δt细胞。在一些实施方案中，t细胞包括记忆t细胞(例如，中央记忆t细胞，或效应记忆t细胞(例如，temra))或效应t细胞。
[1100]
在本文公开的组合物的任何方法的一些实施方案中，免疫细胞是nk细胞。
[1101]
在本公开内容的某些方面，可以使用本领域技术人员已知的许多技术，例如ficolltm分离，在从受试者收集的血液单位中获得免疫细胞，例如t细胞。一方面，通过单采血液成分术获得来自个体循环血液的细胞。单采血液成分术产品通常包含淋巴细胞，包括t细胞、单核细胞、粒细胞、b细胞、其他有核白细胞、红细胞和血小板。一方面，可以洗涤通过单采血液成分术收集的细胞以除去血浆级分，并且任选地，将细胞置于适当的缓冲液或培养基中以用于随后的处理步骤。在一个实施方案中，细胞用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤。在替代实施方案中，洗涤溶液缺乏钙，并且可能缺乏镁，或者可能缺少许多(如果不是所有的话)二价阳离子。本文描述的方法可以包括一个以上的选择步骤，例如，一个以上的耗尽步骤。
[1102]
在一个实施方案中，本技术的方法可以利用包含dmem、dmem f12、rpmi 1640和/或aim v培养基的培养基条件。可以向培养基补充谷氨酰胺、hepes缓冲液(例如10mm)，血清(例如热灭活的血清，例如10％)和/或β巯基乙醇(例如55um)。在一些实施方案中，本文公开的培养条件包含一种或多种补充剂、细胞因子、生长因子或激素。在一些实施方案中，培养
条件包含il-2、il-15或il-7中的一种或多种，或其组合。
[1103]
免疫效应细胞，例如t细胞，通常可以使用例如在美国专利6,352,694；6,534,055；或6,905,680中描述的方法激活和扩增。通常，可以通过与刺激cd3/tcr复合物相关信号的试剂和刺激t细胞表面上的共刺激分子的配体接触来扩增免疫细胞群；和/或通过与细胞因子例如il-2、il-15或il-7接触来扩增免疫细胞群。t细胞扩增方案还可以包括刺激，例如通过与抗cd3抗体或其抗原结合片段或固定在表面上的抗cd2抗体接触，或通过与蛋白激酶c激活剂(例如，苔藓抑制素)以及钙离子载体接触。例如，可以在适于刺激t细胞增殖的条件下使t细胞群与抗cd3抗体和抗cd28抗体接触。为了刺激cd4+t细胞或cd8+t细胞的增殖，可以使用抗cd3抗体和抗cd28抗体。抗cd28抗体的实例包括9.3、b-t3、xr-cd28(diaclone，bcsancon，france)，也可以使用本领域中通常已知的其他方法(berg等人，transplant proc.30(8)：3975-3977，1998；haanen等人，j.exp.med.190(9)：13191328，1999；garland等人，j.immunol meth.227(1-2)：53-63，1999)。
[1104]
til群也可以通过本领域已知的方法扩增。例如，可以如hall等人，journal for immuno therapy of cancer(2016)4：61中所述扩增til群，其全部内容通过引用并入本文。简而言之，可以通过机械和/或物理消化从样品中分离til。在不分裂的饲养细胞的存在下，可用抗cd3抗体刺激所得的til群。在一些实施方案中，可以在il-2例如人il-2的存在下培养例如扩增til群。在一些实施方案中，可以将培养til细胞，例如使其扩增至少1-21天的时间段，例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天。
[1105]
如本文所公开，在一些实施方案中，可以通过使免疫细胞群与例如本文所述的抗tcrvb抗体接触来扩增免疫细胞群(例如，t细胞(例如，t
emra
细胞或til群))。
[1106]
在一些实施方案中，扩增发生在例如受试者体内。在一些实施方案中，向受试者施用本文公开的抗tcrβv抗体分子，从而导致体内免疫细胞的扩增。
[1107]
在一些实施方案中，扩增在离体例如体外发生。在一些实施方案中，使用本文公开的抗tcrβv抗体分子在体外扩增来自受试者的细胞，例如t细胞，例如til细胞。在一些实施方案中，将扩增的til施用给受试者以治疗疾病或疾病症状。
[1108]
在一些实施方案中，本文公开的扩增方法导致扩增至少1.1-10倍、10-20倍或20-50倍的扩增。在一些实施方案中，扩增为至少1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45或50倍的扩增。
[1109]
在一些实施方案中，本文公开的扩增方法包括培养(例如扩增)细胞至少约4小时、6小时、10小时、12小时、15小时、18小时、20小时或22小时。在一些实施方案中，本文公开的扩增方法包括培养(例如扩增)细胞至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14。15、1、6、17、18、19、20或21天。在一些实施方案中，本文公开的扩增方法包括培养(例如扩增)细胞至少约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周。
[1110]
在一些实施方案中，本文公开的扩增方法在获自健康受试者的免疫细胞上进行。
[1111]
在一些实施方案中，本文公开的扩增方法在从患有本文公开的疾病例如感染性疾病的受试者获得的免疫细胞(例如til)上进行。
[1112]
在一些实施方案中，本文公开的扩增方法还包括使细胞群与促进例如增加免疫细胞扩增的试剂接触。在一些实施方案中，该试剂包含免疫检查点抑制剂，例如pd-1抑制剂、lag-3抑制剂、ctla4抑制剂或tim-3抑制剂。在一些实施方案中，该试剂包含4-1bb激动剂，
例如抗4-1bb抗体。
[1113]
不希望受理论的束缚，人们认为本文公开的抗tcrβv抗体分子可以扩增，例如选择性或优先地扩增表达包含tcrα和/或tcrβ分子的t细胞受体(tcr)的t细胞，例如tcrα-βt细胞(αβt细胞)。在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子不扩增表达包含tcrγ和/或tcrδ分子的tcr的t细胞，例如tcrγ-δt细胞(γδt细胞)，也不诱导其增殖。在一些实施方案中，相比γδt细胞，本文公开的抗tcrβv抗体分子选择性或优先扩增αβt细胞。
[1114]
不希望受理论束缚，人们认为在一些实施方案中，γδt细胞与细胞因子释放综合征(crs)相关。在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子导致非γδt细胞的选择性扩增，例如αβt细胞的扩增，从而降低crs。
[1115]
在一些实施方案中，本文公开的任何组合物或方法导致免疫细胞群的γδt细胞减少，例如耗竭。在一些实施方案中，免疫细胞群与减少例如，抑制或耗竭γδt细胞的试剂接触，所述试剂例如抗il-17抗体或结合tcrγ和/或tcrδ分子的试剂。用途和联合疗法
[1116]
本文描述的方法包括通过使用抗tcrβv抗体分子、本文描述的多特异性或多功能分子，例如使用本文描述的药物组合物来治疗受试者的感染性疾病。还提供了用于减轻或改善受试者的感染性疾病的症状的方法，以及用于抑制感染性疾病的生长和/或杀死一种或多种传染原的方法。
[1117]
在实施方案中，感染性疾病选自爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、流感、人免疫缺陷病毒(hiv)、猿猴免疫缺陷病毒(siv)、结核病、疟疾或人巨细胞病毒(hcmv)或其组合。
[1118]
在实施方案中，抗tcrβv抗体分子、多特异性或多功能分子(或药物组合物)以适合于待治疗或预防的疾病的方式施用。施用的量和频率将由诸如患者的病况以及患者的疾病的类型和严重性等因素来确定。适当的剂量可通过临床试验确定。例如，当指定“有效量”或“治疗量”时，待施用的药物组合物(或多特异性或多功能分子)的精确量可由医师考虑症状的个体差异(或其严重程度)、感染程度、受试者的年龄、体重和状况决定。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以104至109个细胞/kg体重，例如105至106个细胞/kg体重的剂量施用，包括那些范围内的所有整数值。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以以这些剂量施用多次。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以使用免疫疗法中所述的输注技术来施用(参见，例如rosenberg等人，new eng.j.of med.319：1676，1988)。
[1119]
在实施方案中，将抗tcrβv抗体分子、多特异性或多功能分子或药物组合物经肠胃外施用于受试者。在实施方案中，细胞通过静脉内、皮下、结内、肌肉内、皮内或腹膜内施用于受试者。在实施方案中，将细胞直接施用，例如注射到淋巴结中。在实施方案中，细胞以输注(例如，如rosenberg等人，new eng.j.ofmed.319：1676，1988)或静脉推注形式施用。在实施方案中，细胞以可注射贮库制剂形式施用。
[1120]
在实施方案中，受试者是哺乳动物。在实施方案中，受试者是人、猴、猪、狗、猫、牛、绵羊、山羊、兔、大鼠或小鼠。在一些实施方案中，受试者是人。在实施方案中，受试者是儿科受试者，例如小于18岁，例如小于17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1岁或以下。在实施方案中，受试者是成年人，例如至少18岁，例如至少19、20、21、22、23、24、25、25-30、30-35、35-40、40-50、50-60、60-70、70-80或80-90岁。联合疗法
[1121]
本文公开的抗tcrβv抗体分子、多特异性或多功能分子可与第二治疗剂或程序联合使用。
[1122]
在实施方案中，抗tcrβv抗体分子、多特异性或多功能分子和第二治疗剂或程序在受试者被诊断患有感染性疾病之后，例如在感染性疾病已从受试者中消除之前施用/进行。在实施方案中，同时或共同施用/进行抗tcrβv抗体分子、多特异性或多功能分子和第二治疗剂或程序。例如，当第二递送开始时，一种治疗的递送仍在发生，例如，治疗的施用存在重叠。在其他实施方案中，抗tcrβv抗体分子、多特异性或多功能分子和第二治疗剂或程序顺序施用/进行。例如，一种治疗的递送在另一种治疗的递送开始之前停止。
[1123]
在实施方案中，联合疗法可导致比单独使用任一试剂的单一疗法更有效的治疗。在实施方案中，第一治疗和第二治疗的组合比单独的第一或第二治疗更有效(例如，导致症状和/或传染原的更大减少)。在实施方案中，与以单一疗法形式施用时实现相似效果通常所需的第一或第二治疗的剂量相比，联合疗法允许使用较低剂量的第一治疗或第二治疗。在实施方案中，联合疗法具有部分相加作用、完全相加作用或大于相加作用。
[1124]
在一个实施方案中，抗tcrbv抗体、多特异性或多功能分子与疗法例如用于治疗感染性疾病的疗法联合施用。多特异性或多功能分子的施用和治疗可以是顺序的(有或没有重叠)或同时的。抗tcrbv抗体、多特异性或多功能分子的施用在治疗过程期间可以是连续的或间断的。感染性疾病
[1125]
在一些实施方案中，本文公开的抗tcrβv抗体分子，例如多特异性抗体分子，可用于治疗感染性疾病。在一些实施方案中，本文公开的抗体分子，例如多特异性抗体分子耗竭表达病毒或细菌抗原的细胞。在一些实施方案中，抗tcrβv抗体分子进一步包含结合存在于受感染细胞例如病毒感染细胞表面上的抗原的结合特异性。
[1126]
可通过方法治疗的引起感染的病原病毒的一些实例包括hiv、肝炎(a、b或c)、疱疹病毒(例如，vzv、hsv-1、hav-6、hsv-ii和cmv、爱泼斯坦-巴尔病毒)、腺病毒、流感病毒、黄病毒、埃可病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、痘苗病毒、htlv病毒、登革病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒(molluscumvirus)、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、jc病毒和虫媒病毒脑炎病毒。在一个实施方案中，感染是流感感染。
[1127]
在另一个实施方案中，感染是肝炎感染，例如乙型肝炎或丙型肝炎感染。
[1128]
可以治疗的示例性病毒病症包括但不限于爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、流感病毒、hiv、siv、结核、疟疾和hcmv。
[1129]
可通过本发明的方法治疗的引起感染的病原菌的一些实例包括梅毒、衣原体、立克次体细菌、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌和淋球菌、克雷伯菌、变形杆菌、沙雷氏菌、假单胞菌、军团菌、白喉、沙门氏菌、杆菌、霍乱、破伤风、肉毒杆菌、炭疽、鼠疫、钩端螺旋体病和莱姆病细菌。抗tcrβv抗体分子可以与上述感染的现有治疗方式联合使用。例如，梅毒的治疗包括青霉素(例如，青霉素g.)、四环素、强力霉素、头孢曲松和阿奇霉素。crs分级
[1130]
在一些实施方案中，crs可以按严重性分为如下1-5级。1-3级低于严重crs。4-5级
是严重crs。对于1级crs，仅需要对症治疗(例如，恶心、发烧、疲劳、肌痛、全身乏力、头痛)，并且症状不会危及生命。对于2级crs，症状需要进行中等程度的干预，并且通常会对中等程度的干预产生应答。患有2级crs的受试者出现对流体或一种低剂量的升压药产生应答的低血压；或他们出现对低流量氧气(＜40％氧气)产生应答的2级器官毒性或轻度呼吸道症状。在3级crs受试者中，低血压通常无法通过流体疗法或一种低剂量升压药逆转。这些受试者通常需要超过低流量的氧气，并具有3级器官毒性(例如，肾或心脏功能障碍或凝血病)和/或4级转氨酶升高。3级crs受试者需要更积极的干预，例如40％或更高的氧气、高剂量的升压药和/或多种升压药。4级crs受试者患有立即威胁生命的症状，包括4级器官毒性或需要机械通气。4级crs受试者通常不具有转氨酶升高。在5级crs受试者中，毒性导致死亡。本文表12、表13和表14提供了用于对crs进行分级的标准集。除非另有说明，否则本文使用的crs指的是根据表13的标准的crs。
[1131]
在实施方案中，crs根据表12分级：表12：crs分级表13：ctcae v 4.0 crs分级量表表14：nci crs分级量表实施例
vb13.1 mab(a-h.1和a-h.2)，显示可以扩增通过用a-h.1阳性染色定义的t细胞群(从细胞培养的第0天的约5％的t细胞到第6天的几乎60％总t细胞)(图4a-4c)。对于该实验，使用磁珠分离(阴性选择)分离人cd3+t细胞，并用固定化的(板包被的)a-h.1或okt3(抗cd3e)抗体以100nm激活6天。当与纯化的cd3+t细胞共培养时，扩增的vb13.1+t细胞显示出对转化的细胞系rpmi-8226的溶细胞活性(图5a-5b)。
[1138]
接下来，评估了被抗tcr vb抗体激活的pbmc产生细胞因子的能力。将用抗tcr vb抗体激活的pbmc的细胞因子产生与用以下抗体激活的pbmc的细胞因子产生进行比较：(i)抗cd3e抗体(okt3或sp34-2)；(ii)抗tcr vα(tcr va)抗体，包括抗tcr va 12.1抗体6d6.6，抗tcr va24ja18抗体6b 11；(iii)抗tcrαβ抗体t10b9；和/或(iv)同型对照(bgm0109)。测试的抗tcr vb抗体包括：人源化抗tcrvb 13.1抗体(a-h.1或a-h.2)、鼠抗tcr vb5抗体e、鼠抗tcrvb8.1抗体抗体b和鼠抗tcrvb 12抗体抗体d。bgm0109包含以下氨基酸序列metdtlllwvlllwvpgstgglndifeaqkiewheggggseprtdtdtcpnppdpcptcptpdllggpsvfifppkpkdvlmisltpkitcvvvdvseeepdvqfnwyvnnvedktaqtetrqrqynstyrvvsvlpikhqdwmsgkvfkckvnnnalpspiektiskprgqvrvpqiytfpppieqtvkkdvsvtclvtgflpqdihvewesngqpqpeqnykntqpvldsdgsyflysklnvpksrwdqgdsftcsvihealhnhhmtktisrslgnggggs(seq id no：3282)。
[1139]
如图6a所示，当使用板结合的a-h.1或a-h.2或抗cd3e抗体(okt3或sp34-2)来激活人pbmc时，诱导了t细胞细胞因子ifng(图6a)。测试的所有抗tcrvb抗体对ifng的产生具有相似的作用(图6b)。抗tcr va抗体没有诱导类似的ifng产生。
[1140]
关于il-2产生，与用抗cd3e抗体(okt3或sp34-2)激活的pbmc相比，用a-h.1和a-h.2激活的pbmc导致il-2的产生增加(图7a)，且具有延迟的动力学(图7b)。图7b显示，抗tcr vb抗体激活的pbmc在激活(与板包被的抗体一起温育)后第5天或第6天显示il-2的产生达到峰值。相比之下，用okt3激活的pbmc中il-2的产生在激活后第2天达到峰值。与ifng一样，在所有测试的抗tcr vb抗体中，il-2影响(例如，il-2的产生增加和动力学延迟)相似(图7b)。
[1141]
在相似的条件下也评估了与“细胞因子风暴”相关的细胞因子il-6、il-1β和tnf-α的产生(以及相应的crs)。图8a、9a和10a显示，尽管用抗cd3e抗体激活的pbmc显示出il-6(图8a)、tnf-α(图9a)和il-1β(图10a)的产生，但是没有或几乎没有观察到用a-h.1或a-h.2激活的pbmc诱导这些细胞因子。如图9b和10b所示，tnf-α和il-1β的产生未通过用任何抗tcr vb抗体激活pbmc来诱导。
[1142]
进一步注意到，相对于由抗cd3e mab(okt3和sp34-2)激活的cd3+t细胞产生的动力学，由a-h.1-1激活的cd3+t细胞产生ifng的动力学被延迟(图11a和11b)。
[1143]
最后，观察到被称为t
emra
的记忆效应t细胞亚群优先在被a-h.1或a-h.2激活的cd8+t细胞中扩增(图12)。将分离的人pbmc用固定的(板包被的)抗cd3e或抗tcr vβ13.1以100nm激活6天。温育6天后，通过facs染色以下细胞的表面标记来鉴定t细胞亚群：幼稚t细胞(cd8+、cd95-、cd45ra+、ccr7+)、干细胞记忆t细胞(tscm；cd8+、cd95+、cd45ra+、ccr7+)、中央记忆t细胞(tcm；cd8+、cd95+、cd45ra-、ccr7+)、效应记忆t细胞(tem；cd8+、cd95+、cd45ra-、ccr7-)和重新表达cd45ra的效应记忆t细胞(temra；cd8+、cd95+、cd45ra+、ccr7-)。与被抗cd3e抗体(okt3或sp34-2)激活的pbmc相比，被抗tcr vβ13.1抗体(a-h.1或a-h.2)激活的人pbmc增加了cd8+tscm和temra t细胞亚群。用cd4+t细胞观察到类似的扩
增。结论
[1144]
本实施例中提供的数据表明，针对tcr vb的抗体可以例如优先激活t细胞的亚群，从而导致t
emra
扩增，这可以例如促进肿瘤细胞裂解而非crs。因此，利用针对tcr vb的fab或scfv或肽的双特异性构建体可以例如用于激活和重定向t细胞以促进肿瘤细胞裂解以用于癌症免疫疗法，而没有例如与抗cd3e靶向相关的crs的有害副作用。援引并入
[1145]
本文提及的所有出版物和专利均通过引用整体并入本文，如同每个单独的出版物或专利均被特别地和单独地指出通过引用并入。等同方案
[1146]
本领域技术人员将认识到，或仅通过常规实验便能够确定本文所述的本发明的特定实施方案的许多等同方案。这些等同方案旨在由以下权利要求书涵盖。