防御大气污染物质的保护剂和防御大气污染物质的保护用组合物的制作方法

1.本发明涉及防御大气污染物质的保护剂和防御大气污染物质的保护用组合物。
2.本技术基于2019年5月13日在日本技术的特愿2019
‑
090544号主张优先权，并将其内容援引于此。


背景技术：

3.在大气中，存在有二惡英和pcb等芳香族烃类、多环芳香族烃(pah)等化学物质、以及这些化学物质通过紫外线等的作用被氧化后的氧化物质等。这些物质给人体带来各种各样的影响。已知这些有害物质通过呼吸被吸入人体内或者经由粘膜被吸收，由此在肺等呼吸器官、皮肤粘膜、和内脏中引起各种炎症，进而发生细胞的癌化。报道有：该大气粉尘所包含的pah及其氧化物等有害物质，通过存在于细胞的芳香族烃受体(ahr)与这些有害物质结合，并且移动到细胞核内，由此诱导药物代谢基因的表达，在细胞内产生活性氧(reactive oxygen species：ros)，结果引发炎症和癌细胞的浸润(非专利文献1、2)。
4.作为防御大气污染物质的防御剂、保护剂、以及与大气污染关联的症状的抑制剂，为了抑制细胞内产生的ros，报道有具有抗氧化效果的物质、和源自植物的提取物等(专利文献1～3)。另外，报道有与ahr竞争性结合而抑制有害物质的影响的物质等(非专利文献3)。然而，其效果仍不充分。
5.另外，作为为了不让大气污染物质物理性接近的保护剂，提出了配合油性的被膜剂而被覆体表面的制剂、捕捉大气污染物质所含的刺激性物质的制剂、以及抑制氧化作用的制剂等。但是，这些保护剂虽然在不让刺激物质接近之类的意义上是有效的，但并不是能够防御可引起的生物体内的作用而保护细胞的物质。
6.现有技术文献
7.专利文献
8.专利文献1：日本特开2016
‑
88928号公报
9.专利文献2：日本特开2017
‑
186276号公报
10.专利文献3：专利第6456815号公报
11.非专利文献
12.非专利文献1：moorthy b et al.，polycyclic aromatic hydrocarbons：from metabolism to lung cancer.toxicol sci.2015may；145(1)：5
‑
15.
13.非专利文献2：nebert dw et al.，role of aryl hydrocarbon receptor
‑
mediated induction of the cyp1 enzymes in environmental toxicity and cancer.j biol chem.2004jun 4；279(23)：23847
‑
50.
14.非专利文献3：furue m et al.，antioxidative phytochemicals accelerate epidermal terminal differentiation via the ahr
‑
ovol1 pathway：implications for atopic dermatitis.acta derm venereol.2018 nov 5；98(10)：918
‑
923.


技术实现要素：

15.发明要解决的课题
16.如上所述，大气中的pah或其氧化物质会对生物体引发炎症等各种各样的有害作用，因此需要能够防御这些大气污染物质而保护细胞的药剂。
17.因此，本发明的目的在于提供一种能够防御大气污染物质所致的有害作用而保护细胞的防御大气污染物质的保护剂、和含有前述防御大气污染物质的保护剂的、防御大气污染物质的保护用组合物。
18.用于解决课题的手段
19.本发明包含以下的方案。
20.(1)一种防御大气污染物质的保护剂，其含有生育酚磷酸酯或其盐作为有效成分。
21.(2)根据(1)所述的防御大气污染物质的保护剂，其中，前述生育酚磷酸酯为α
‑
生育酚磷酸酯。
22.(3)根据(1)或(2)所述的防御大气污染物质的保护剂，其中，前述生育酚磷酸酯的盐为生育酚磷酸酯的钠盐。
23.(4)根据(1)～(3)中任一项所述的防御大气污染物质的保护剂，其促进nrf2基因的表达。
24.(5)根据(1)～(4)中任一项所述的防御大气污染物质的保护剂，其抑制活性氧的产生。
25.(6)一种防御大气污染物质的保护用组合物，其含有(1)～(5)中任一项所述的防御大气污染物质的保护剂和药物学上允许的载体。
26.(7)根据(6)所述的防御大气污染物质的保护用组合物，其中，前述生育酚磷酸酯或其盐的合计含量为0.1～2质量％。
27.(8)一种(6)或(7)所述的防御大气污染物质的保护用组合物的使用方法，其散布于体表面而使用。
28.(9)一种(6)或(7)所述的防御大气污染物质的保护用组合物的使用方法，其涂抹于粘膜而使用。
29.发明效果
30.根据本发明，能够提供一种可以防御大气污染物质所致的有害作用而保护细胞的、防御大气污染物质的保护剂、和含有前述防御大气污染物质的保护剂的防御大气污染物质的保护用组合物。
具体实施方式
31.[防御大气污染物质的保护剂]
[0032]
在一实施方式中，本发明提供一种含有生育酚磷酸酯或其盐作为有效成分的防御大气污染物质的保护剂。
[0033]
本实施方式的防御大气污染物质的保护剂能够防御大气污染物质而保护细胞，并且适合用于抑制大气污染物质对细胞的有害作用。本说明书中，“大气污染物质”是指存在于大气中，并且给人体带来有害作用的物质。作为大气污染物质所具有的有害作用，可列举出例如ros产生作用、控制氧化应激适应反应的nrf2(nuclear factor，erythroid 2
‑
related factor
‑
2)基因的表达抑制作用、癌细胞增殖促进作用、和癌细胞浸润促进作用等。另外，可列举出氧化应激等所致的炎症。
[0034]
作为大气污染物质，可列举出例如美国国立标准技术研究所(national instituteof standardsand technology：nist)供给的标准参考物(standard reference material)1648a中所含的物质。具体而言，可列举出多环芳香族烃类(pahs)、硝基多环芳香族烃类(硝基pahs)、多氯代联苯类(pcbs)、氯系杀虫剂等。
[0035]
作为多环芳香族烃类，可列举出例如萘、苊、菲、甲基菲、蒽、苯并蒽、二苯并蒽、萤蒽、苯并萤蒽、二苯并萤蒽、芘、苯并芘、二苯并芘、苝、苯并苝、茚并苝、(chrysene)、苯并苯并菲、苉、晕苯、联苯等，但并不限定于这些。
[0036]
作为硝基多环芳香族烃类，可列举出例如前述例示的多环芳香族烃类的氢原子的一部分被硝基取代后的化合物。具体而言，可列举出1
‑
硝基萘、2
‑
硝基萘、3
‑
硝基苊、4
‑
硝基菲、9
‑
硝基菲、9
‑
硝基蒽、1
‑
硝基芘、2
‑
硝基芘、4
‑
硝基芘、2
‑
硝基萤蒽、3
‑
硝基萤蒽、8
‑
硝基萤蒽、7
‑
硝基苯并蒽、6
‑
硝基等，但并不限定于这些。
[0037]
作为多氯代联苯类，可列举出例如二氯联苯、三氯联苯、四氯联苯、五氯联苯、六氯联苯、七氯联苯、八氯联苯、九氯联苯、十氯联苯等，但并不限定于这些。
[0038]
作为氯系杀虫剂，可列举出例如六氯化苯、六氯苯、氯丹、灭蚁灵(mirex)、二氯二苯基三氯乙烷(ddt)等，但并不限定于这些。
[0039]
大气污染物质并不限定于单独具有有害作用(ros产生、nrf2基因表达抑制、癌增殖、癌浸润等)的物质，也可以是多种物质复合作用而表现有害作用的物质。
[0040]
如后述的实施例所示，若大气污染物质存在，则nrf2基因的表达受到抑制，ros产生得以促进。另外，癌细胞增殖和癌细胞浸润得以促进。本实施方式的防御大气污染物质的保护剂能够有效抑制这样的大气污染物质所诱导的有害作用。即，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂在大气污染物质的存在下，与不投加前述保护剂的情况相比较能够使nrf2基因的表达量上升。
[0041]
如后述的实施例所示，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂能够诱导被大气污染物质抑制的nrf2基因的表达。因此，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂也可以称作nrf2基因的表达诱导剂。或者也可以称作被大气污染物质抑制的nrf2基因表达的正向调节剂。
[0042]
nrf2(ncbi gene id：4780)是具有碱性亮氨酸拉链结构的转录因子，属于cnc转录因子组。nrf2是启动子中包含抗氧化反应元件(are)的基因组的转录调节因子，并控制氧化应激适应反应。作为人nrf2基因的碱基序列，可例示例如ncbi reference sequence数据库中登记的、nm_001145412.3、nm_001145413.3、nm_001313900.1、nm_001313901.1、nm_001313902.1、nm_001313903.1、nm_001313904.1、nm_006164.5等。nrf2基因包含他们的同源而并不限定于前述序列。
[0043]
如后述的实施例所示，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂能够抑制大气污染物质诱致的ros的产生。因此，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂也称作ros的产生抑制剂。即，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂在大气污染物质的存在下，与没有投加前述保护剂的情况比较能够使ros的产生量下降。
[0044]
如后述的实施例所示，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂能够抑制被大气污染物质促进的癌细胞的增殖。因此，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂也可以称作癌细胞的增殖抑制剂。即，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂在大气污染物质的存在下，与没有投与前述保护剂的情况比较能够抑制癌细胞的增殖。
[0045]
如后述的实施例所示，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂能够抑制被大气污染物质促进的癌细胞的浸润。因此，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂也可以称作癌细胞的浸润抑制剂。即，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂在大气污染物质的存在下，与没有投与前述保护剂的情况比较能够抑制癌细胞的浸润。
[0046]
(生育酚磷酸酯或其盐)
[0047]
本实施方式的防御大气污染物质的保护剂将生育酚磷酸酯或其盐作为有效成分。
[0048]
作为生育酚磷酸酯，可列举出下述通式(1)所示的化合物。
[0049][0050]
[式中、r1、r2和r3彼此独立地表示氢原子或甲基。]
[0051]
生育酚磷酸酯中根据上述通式(1)中的r1、r2和r3的种类，存在α
‑
生育酚磷酸酯(r1,r2,r3＝ch3)、β
‑
生育酚磷酸酯(r1,r3＝ch3、r2＝h)、γ
‑
生育酚磷酸酯(r1,r2＝ch3、r3＝h)、δ
‑
生育酚磷酸酯(r 1
＝ch 3
、r2,r3＝h)、ζ2‑
生育酚磷酸酯(r2,r3＝ch3、r1＝h)、和η
‑
生育酚磷酸酯(r2＝ch3、r1,r3＝h)等。
[0052]
生育酚磷酸酯没有特别限定，可以是这些生育酚磷酸酯中的任一种。这些之中，优选α
‑
生育酚磷酸酯和γ
‑
生育酚磷酸酯，更优选α
‑
生育酚磷酸酯。
[0053]
上述通式(1)所示的化合物由于在色满环的2位具有手性碳原子，所以存在d体和l体的立体异构体以及dl体。生育酚磷酸酯可以是这些立体异构体中的任一种，但优选dl体。
[0054]
上述之中，作为生育酚磷酸酯优选dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯和dl
‑
γ
‑
生育酚磷酸酯，更优选dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯。
[0055]
生育酚磷酸酯的盐，没有特别限定，但可列举出例如与无机碱的盐、和与有机碱的盐等。
[0056]
作为与无机碱的盐，可列举出例如钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐等碱土金属盐；铝盐；铵盐；锌盐等。
[0057]
作为与有机碱的盐，可列举出例如烷基铵盐、与碱性氨基酸的盐等。
[0058]
上述之中，作为生育酚磷酸酯的盐，优选碱金属盐，更优选钠盐。生育酚磷酸酯的碱金属盐、尤其钠盐具有对水的溶解性高，且因性状为粉末所以处理容易的优点。
[0059]
作为生育酚磷酸酯优选的方案，可列举出上述通式(1)所示的化合物的碱金属盐(例如钠盐)、α
‑
生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如钠盐)、γ
‑
生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如钠盐)、dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如钠盐)、dl
‑
γ
‑
生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如钠盐)等。
[0060]
dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯的钠盐以tpna(注册商标)(显示名称：生育酚磷酸钠)的产品
名由昭和电工市售。前述tpna作为生育酚磷酸酯的优选例而例示。
[0061]
本实施方式的防御大气污染物质的保护剂可以单独使用从生育酚磷酸酯及其盐中选择的1种，也可以并用2种以上。本实施方式的防御大气污染物质的保护用组合物优选含有生育酚磷酸酯的盐，更优选单独使用生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如钠盐)。
[0062]
生育酚磷酸酯或其盐可以通过公知的制造方法、例如日本特开昭59
‑
44375号公报、wo97/14705号等记载的方法来制造。例如可以通过使溶解于溶剂中的生育酚与氧氯化磷等磷氧化剂发生作用，反应结束后适当纯化，由此得到生育酚磷酸酯。进而，可以将得到的生育酚磷酸酯用氧化镁等金属氧化物、氢氧化钠等金属氢氧化物、或者氢氧化铵、氢氧化烷基铵等中和，由此得到生育酚磷酸酯的盐。
[0063]
以下有时将生育酚磷酸酯及其盐一并记载为“生育酚磷酸酯等”。
[0064]
本实施方式的防御大气污染物质的保护剂出于防御大气污染物质而保护细胞的目的，可以将其自身投药给患者使用。另外，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂为了赋予防御大气污染物质而保护细胞的功能，也可以在医药品或化妆品中配合使用。另外，也可以在后述的防御大气污染物质的保护用组合物中配合使用。
[0065]
本实施方式的防御大气污染物质的保护剂可以在大气污染物质浓度高的地域投药给患者，且为了预防大气污染物质所致的炎症或致癌而使用。另外，本实施方式的防御大气污染物质的保护剂可以投药给罹患了炎症和/或癌症的患者，并且为了抑制大气污染物质所致的炎症的悪化以及/或癌细胞的增殖和/或浸润而使用。
[0066]
本实施方式的防御大气污染物质的保护剂可以用与后述的防御大气污染物质的保护用组合物相同的方法投药给患者，并且优选经皮给药。
[0067]
[防御大气污染物质的保护用组合物]
[0068]
一实施方式中，本发明提供一种含有上述的防御大气污染物质的保护剂和药物学上允许的载体的防御大气污染物质的保护用组合物。
[0069]
本实施方式的防御大气污染物质的保护用组合物可以根据常规方法(例如日本药典记载的方法)，通过混合上述的防御大气污染物质的保护剂、药物学上允许的载体、和根据情况添加的其他成分进行制剂化来制造。
[0070]
本说明书中，“药物学上允许的载体”是指不阻碍有效成分的生理活性，且对该给药对象不显示实质上的毒性的载体。“不显示实质上的毒性”是指在其成分通常使用的给药量中，对于给药对象不显示毒性。作为药物学上允许的载体，没有特别地限制，可列举出赋形剂、结合剂、崩溃剂、滑润剂、乳化剂、稳定剂、稀释剂、注射剂用溶剂、油性基剂、保湿剂、触感改进剂、表面活性剂、高分子、增稠剂、凝胶化剂、溶剂、喷射剂、抗氧化剂、还原剂、氧化剂、螯合剂、酸、碱、粉体、无机盐、水、含金属的化合物、不饱和单体、多元醇、高分子添加剂、辅助剂、湿润剂、赋粘物质、油性原料、液状基质、脂溶性物质、高分子羧酸盐等。作为这些成分的具体例，可列举出例如国际公开公报第2016/076310号记载的内容。进而，作为高分子、增粘剂和凝胶化剂的具体例，可列举出甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱、甲基丙烯酸丁酯、或它们的聚合物等。药物学上允许的载体可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
[0071]
作为其他的成分，没有特别限制，可以列举出防腐剂、抗菌剂、紫外线吸收剂、美白剂、维生素类及其衍生物类、消炎剂、抗炎症剂、药用育毛剂、血液循环促进剂、兴奋剂、激素类、抗皱剂、抗老化剂、收缩剂(
ひきしめ
剤)、冷感剂、温感剂、创伤治愈促进剂、兴奋缓和
剂、阵痛剂、细胞赋活剂、植物提取物、动物提取物、微生物提取物、种子油、止痒剂、角质剥离
·
溶解剂、除臭剂、清凉剂、收敛剂、酶、核酸、香料、色素、着色剂、染料、颜料、消炎镇痛剂、抗真菌剂、抗组胺剂、催眠镇静剂、精神安定剂、抗高血压剂、降压利尿剂、抗生物质、麻醉剂、抗菌性物质、抗癫痫剂、冠状血管扩张剂、中草药、止痒剂、角质软化剥离剂、紫外线阻隔剂、防腐杀菌剂、抗氧化物质、ph调节剂、添加剂、金属皂等。作为这些成分的具体例，可列举出例如国际公开公报第2016/076310号记载的内容。进而，作为植物提取物的具体例，可列举出欧洲稻槎菜的花/叶/茎、茶叶等。作为种子油的具体例，可列举出辣木(moringa oleifera lam)种子油。作为香料的具体例，可列举出紫苏醛(perillaldehyde)。其他的成分可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
[0072]
本实施方式的防御大气污染物质的保护用组合物可以含有治疗有效量的前述防御大气污染物质的保护剂。“治疗有效量”是指用于治疗或预防患者的疾病的有效的药剂量。治疗有效量可根据给药对象的疾病的状态、年龄、性別、和体重等进行变化。本实施方式的防御大气污染物质的保护用组合物中，上述防御大气污染物质的保护剂的治疗的有效量可以是保护剂中的生育酚磷酸酯等能够抑制大气污染物质所致的有害作用的量。例如本实施方式的防御大气污染物质的保护用组合物中的前述防御大气污染物质的保护剂的治疗的有效量，作为生育酚磷酸酯等的组合物中的合计含量，例如可以为0.01～20质量％，例如也可以为0.1～10质量％，例如也可以为0.1～5质量％，例如也可以为0.1～3质量％，例如也可以为0.1～2质量％，例如也可以为0.3～2质量％，例如还可以为0.6～1.5质量％。
[0073]
前述防御大气污染物质的保护用组合物中的生育酚磷酸酯等的含量在单独含有1种生育酚磷酸酯等的情况下是指其化合物的含量，在组合含有2种以上的生育酚磷酸酯等的情况下是指这些化合物的合计含量。
[0074]
本实施方式的防御大气污染物质的保护用组合物可以是医药组合物，也可以是化妆品。
[0075]
(医药组合物)
[0076]
在一个实施方式中，本发明提供一种含有上述的防御大气污染物质的保护剂和药物学上允许的载体的用于防御大气污染物质而保护细胞的医药组合物。
[0077]
本实施方式的医药组合物中，作为药物学上允许的载体，没有特别限制，除了上述列举出的载体以外还可以使用医药品中通常使用的载体。可以使用例如日本药典、日本药典外医药品规格、医药品添加物规格2013(药事日报社、2013年)、医药品添加物辞典2016(日本医药品添加剂协会编、药事日报社、2016年)、handbook of pharmaceutical excipients，7
th edition(pharmaceutical press、2012年)等记载的通常的原料。药物学上允许的载体可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
[0078]
本实施方式的医药组合物除了前述防御大气污染物质的保护剂和药物学上允许的载体以外，还可以含有其他的成分。作为其他的成分，没有特别限制，可以使用通常的医药品添加物。另外，作为其他的成分，还可以使用上述的防御大气污染物质的保护剂以外的活性成分。作为其他成分的医药品添加物和活性成分，除了上述列举的以外，可以使用例如日本药典、日本药典外医药品规格、医药品添加物规格2013(药事日报社、2013年)、医药品添加物辞典2016(日本医药品添加剂協会編、药事日报社、2016年)、handbook of pharmaceutical excipients，7
th edition(pharmaceutical press、2012年)等记载的通常
的原料。其他的成分可以单独使用1种，还可以并用2种以上。
[0079]
作为本实施方式的医药组合物的剂型，没有特别限制，可以作成医药品制剂通常使用的剂型。可列举出例如片剂、包衣片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、液剂、悬浊剂、乳剂等经口给药的剂型；和注射剂、栓剂、皮肤外用剂、滴鼻剂等非经口给药的剂型等。这些剂型的医药组合物可以根据常规法(例如日本药典记载的方法)来制剂化。
[0080]
作为本实施方式的医药组合物，优选皮肤外用剂、或滴鼻剂。作为皮肤外用剂，更具体而言，可列举出乳剂、洗剂、涂敷剂、泡沫剂、皮肤清洗剂、萃取剂、硬膏剂、软膏剂、酒精剂、悬浊剂、酊剂、贴剂、泥敷剂、擦剂、气雾剂、喷雾剂、凝胶剂等剂型。
[0081]
本实施方式的医药组合物的给药方法没有特别限制，作为医药品的给药方法可以用通常使用的方法进行给药。例如可以作为片剂、包衣片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、液剂、悬浊剂、乳剂等形式经口给药，也可以作为注射剂、输液制剂等形式单独或者与葡萄糖液、林格氏溶液等的通常的输液混合，给药至静脉内、动脉内、肌肉内、皮内、皮下、腹腔内等，也可以作为栓剂形式给药直肠内，可以作为皮肤外用剂给药至皮肤，也可以作为滴鼻剂形式给药至鼻腔中。在优选方案中，本实施方式的医药组合物被作为皮肤外用剂涂布、贴付或喷雾至患部。或者作为滴鼻药被给药至鼻腔中。
[0082]
本实施方式的医药组合物的给药量可以为治疗的有效量。治疗的有效量可以根据患者的症状、体重、年龄、和性別等以及医药组合物的剂型、和给药方法等进行适宜确定。例如本实施方式的医药组合物的给药量在经口给药的情况下，作为生育酚磷酸酯等可例示每个给药单位方式为0.01～500mg，在注射剂的情况下，作为生育酚磷酸酯等可例示每个给药单位方式为0.02～250mg，在栓剂的情况下，作为生育酚磷酸酯等可例示每给药单位方式为0.01～500mg等。本实施方式的医药组合物的给药量在皮肤外用剂或滴鼻药的情况下，例如作为生育酚磷酸酯等可例示每个给药单位方式为0.15～500mg，例如可以为0.15～300mg，例如可以为0.15～200mg，例如也可以为0.2～100mg。
[0083]
本实施方式的医药组合物的给药间隔可以根据患者的症状、体重、年龄、和性別等以及医药组合物的剂型、和给药方法等适当决定。例如可以设为1日1次或1日2～3次左右等。
[0084]
本实施方式的医药组合物可用于例如投药给具有大气污染物质所致的炎症的患者来抑制炎症的恶化。另外，本实施方式的医药组合物可用于投药给癌症患者来抑制由大气污染物质诱致的癌细胞的增殖和/或浸润。
[0085]
城市中，由于日常与大气污染物质接触的机会多，所以居民曝露于受到大气污染物质所致的有害作用的风险中。另外，具有炎症的患者存在因与大气污染物质接触所以炎症恶化的风险。进而，癌症患者存在因与大气污染物质接触，所以癌细胞症的增殖和/或浸润受到促进的风险。因此，通过将本实施方式的医药组合物投药给炎症患者或癌症患者，由此能够减轻大气污染物质所致的炎症或癌症的症状恶化的风险。
[0086]
或者，本实施方式的医药组合物在大气污染物质存在的地域中，预防性地给患者投药，可以用于预防炎症的发作。另外，还可以抑制癌化后的细胞因与大气污染物质的接触而增殖，并用于预防癌症的发作。
[0087]
(化妆品)
[0088]
在一实施方式中，本发明提供一种含有上述的防御大气污染物质的保护剂和药物
学上允许的载体的、防御大气污染物质的保护用化妆品。
[0089]
在本实施方式的化妆品中，作为药物学上允许的载体，并没有特别限制，可以使用除了上述列举的载体以外的、化妆品中通常使用的载体。可以使用例如化妆品原料基准第二版注解(日本公定书协会编、药事日报社、1984年)、化妆品原料基准外成分规格(厚生省药务局审查课主编、药事日报社、1993年)、化妆品原料基准外成分规格追加(厚生省药务局审查课主编、药事日报社、1993年)、化妆品种类许可基准(厚生省药务局审查课主编、药事日报社、1993年)、化妆品原料辞典(日光
ケミカルズ
社、平成3年)、international cosmetic ingredient dictionary and handbook 2002 ninth edition vol.1～4，by ctfa等记载的通常的原料。药物学上允许的载体可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
[0090]
本实施方式的化妆品除了防御大气污染物质的保护剂和药物学上允许的载体以外，还可以含有其他的成分。作为其他的成分，没有特别限制，可以使用通常的化妆品添加物。另外，作为其他的成分，还可以使用上述的防御大气污染物质的保护剂以外的活性成分。作为其他的成分即化妆品添加物和活性成分，除了上述列举的以外，可以使用例如化妆品原料基准第二版注解(日本公定书协会编、药事日报社、1984年)、化妆品原料基准外成分规格(厚生省药务局审查课主编、药事日报社、1993年)、化妆品原料基准外成分规格追加(厚生省药务局审查课主编、药事日报社、1993年)、化妆品种类别许可基准(厚生省药务局审查课主编、药事日报社、1993年)、化妆品原料辞典(日光
ケミカルズ
社、平成3年)、international cosmetic ingredient dictionary and handbook 2002 ninth edition vol.1～4，by ctfa等记载的通常的原料。其他的成分可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
[0091]
作为本实施方式的化妆品的方式，没有特别限制，可以是作为化妆品通常使用的形态。可列举出例如洗发水、护发素、美发剂等美发用化妆品；洗面奶、洁面膏、化妆水、乳液、露、霜、凝胶、防晒霜、剥撕式面膜、面膜、美容液等基础化妆品；粉底类、底妆、口红类、唇彩、腮红类等的上妆化妆品；沐浴露、爽身粉、除臭化妆品等身体化妆品等。这些化妆品可以根据常规方法制造。这些之中，本实施方式的化妆品优选是作为皮肤外用剂在皮肤上涂抹或贴付等的形式的化妆品。可列举出例如化妆水、乳液、露、霜、凝胶、防晒霜、剥撕式面膜、面膜、美容液、粉底类、底妆等作为适合的例子。
[0092]
作为本实施方式的化妆品的剂型，没有特别限制，可列举出例如水包油(o/w)型、油包水(w/o)型、w/o/w型、o/w/o型等乳化型、乳化高分子型、油性、固态、液状、丝状、棒状、挥发性油型、粉状、果冻状、凝胶状、糊状、奶油状、片状、膜状、雾状、喷淋型、气溶胶状、多层状、泡状、薄片状等。
[0093]
本实施方式的化妆品的使用量没有特别限制，但可以是用于防御大气污染物质所致的有害作用来保护细胞的有效量。例如本实施方式的化妆品的使用量，作为生育酚磷酸酯等的量，可例示每1次的使用0.15～500mg，例如可以为0.15～300mg，例如也可以为0.15～200mg，例如还可以为0.2～100mg。
[0094]
本实施方式的化妆品的使用间隔没有特别限制，可以制成例如1日1次或1日2～3次左右。
[0095]
本实施方式的化妆品可以在例如大气污染物质浓度高的城市等为了降低大气污染物质所致的有害作用而被炎症患者或癌症患者等使用。或者在大气污染物质的分布浓度
高的地域或季节中，为了预防大气污染物质所致的炎症或癌症的发作而可以使用于日常的护肤或化妆中。
[0096]
[其他的实施方式]
[0097]
一实施方式中，本发明提供一种防御大气污染物质的细胞保护方法，其含有将生育酚磷酸酯或其盐投药给哺乳动物的步骤。
[0098]
一实施方式中，本发明提供一种在大气污染物质的存在下促进nrf2基因的表达的方法，其含有将生育酚磷酸酯或其盐投药给哺乳动物的步骤。
[0099]
一实施方式中，本发明提供一种在大气污染物质的存在下抑制ros产生的方法，其包含将生育酚磷酸酯或其盐投药给哺乳动物的步骤。
[0100]
一实施方式中，本发明提供一种在大气污染物质的存在下抑制癌细胞增殖的方法，其包含将生育酚磷酸酯或其盐投药给哺乳动物的步骤。
[0101]
一实施方式中，本发明提供一种在大气污染物质的存在下抑制癌细胞的浸润的方法，其包含将生育酚磷酸酯或其盐投药给哺乳动物的步骤。
[0102]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐，其用于防御大气污染物质、保护细胞。
[0103]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐，其用于在大气污染物质的存在下促进nrf2基因表达。
[0104]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐，其用于在大气污染物质的存在下抑制ros产生。
[0105]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐，其用于在大气污染物质的存在下抑制癌细胞增殖。
[0106]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐，其用于在大气污染物质的存在下抑制癌细胞的浸润。
[0107]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐的用途，其用于制造防御大气污染物质的保护剂。
[0108]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐的用途，其用于制造在大气污染物质存在下的nrf2基因表达的促进剂。
[0109]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐的用途，其用于制造大气污染物质存在下的ros产生的抑制剂。
[0110]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐的用途，其用于制造在大气污染物质存在下的癌细胞增殖的抑制剂。
[0111]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐的用途，其用于制造在大气污染物质存在下的癌细胞浸润的抑制剂。
[0112]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐的用途，其用于制造防御大气污染物质的保护用组合物。
[0113]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐的用途，其用于制造大气污染物质存在下的nrf2基因表达的促进用组合物。
[0114]
一实施方式中，本发明提供一种生育酚磷酸酯或其盐的用途，其用于制造大气污染物质存在下的ros产生的抑制用组合物。
[0115]
实施例
[0116]
以下利用实施例对本发明进行说明，本发明并不受限于以下的实施例。
[0117]
以下的实验例中，作为生育酚磷酸钠，使用dl
‑
α
‑
生育酚磷酸钠即tpna(注册商标)(昭和电工制)。
[0118]
[实验例1]
[0119]
(nrf2基因的表达促进效果)
[0120]
用下述条件测定生育酚磷酸钠对人正常表皮细胞(nhek、
クラボウ
公司制)中的nrf2基因的表达促进效果。
[0121]
将nhek细胞以10000个/cm2的播种密度播种于
クラボウ
公司制的hu media kg2培养基中，在24小时、37℃、5％co2的条件下进行培养。接着，将使生育酚磷酸钠或生育酚乙酸酯溶解于0.05％(v/v)的乙醇水溶液而成的试样添加到培养基中，以使生育酚磷酸钠或生育酚乙酸酯的最终浓度为10μm，并培养24小时。另外，准备将0.05％(v/v)的乙醇水溶液添加到5μl培养基中而培养了24小时的样品。然后，每100ml培养基中添加0.1ml的大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，使大气粉尘在培养基中的最终浓度为500μg/ml，进一步培养48小时。之后，回收nhek细胞，使用nucleospin
tm
rx(
タ
力
ラバイ
才社)，提取总rna。由得到的rna使用prime script(注册商标)rt master mix(
タ
力
ラバイ
才公司)合成cdna。将该cdna作为模板，通过定量实时处理pcr使用nrf2特异性引物(perfect real time primer、
タ
力
ラ
公司制)对nrf2基因的表达量进行定量。定量gapdh(使用引物：perfect real time primer、
タ
力
ラ
公司制)的表达量作为内部标准基因，并以gapdh的表达量作为基准使nrf2基因的表达量标准化。以未添加大气粉尘的样品为对照品。
[0122]
将结果示于表1。表1中，作为将未添加大气粉尘的对照品的nrf2基因表达量设为1时的相对表达量，示出了大气粉尘添加组中的nrf2基因的表达量。生育酚磷酸钠添加组中，与0.05％乙醇添加组和生育酚乙酸酯添加组相比，nrf2基因的表达得以促进。由该结果可确认到：生育酚磷酸钠具有恢复被大气粉尘抑制的nrf2基因的表达的效果。
[0123]
表1
[0124][0125]
[实验例2]
[0126]
(ros的产生抑制效果)
[0127]
用下述的条件测定生育酚磷酸钠对人正常表皮细胞(nhek、
クラボウ
公司制)中的ros产生抑制效果。
[0128]
将nhek细胞以10000个/cm2的播种密度播种到
クラボウ
公司制的hu media kg2培养基中，在24小时、37℃、5％co2的条件下进行培养。接着，将使生育酚磷酸钠或生育酚乙酸酯溶解于0.05％(v/v)乙醇水溶液而成的试样添加到培养基中以使生育酚磷酸钠或生育酚
乙酸酯的最终浓度为10μm，在24小时、37℃、5％co2的条件下进行培养。另外，准备将0.05％(v/v)乙醇水溶液添加到1μl培养基中而培养了24小时的试样。然后，每100ml培养基中添加0.1ml的大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，并使大气粉尘的培养基中的最终浓度为500μg/ml，再培养48小时。之后，使用ros试剂盒(assay kit)(oz biosciences公司制)测定ros产生量。将去除培养基后的细胞用磷酸缓冲液(pbs、和光纯药公司制)洗涤后，将ros试剂盒中添付的二氯荧光素二乙酸酯向各组的细胞中各添加100μl，在37℃、遮光下静置30分钟。再次用pbs洗涤后，添加100μl的pbs，用microplate reader(
マイクロプレートリーダ
)i
‑
control(
テカン
公司制)测定激发波长485nm/吸收波长535nm下的荧光强度。以未添加大气粉尘的样品作为对照品。
[0129]
结果示于表2。表2中，作为将未添加大气粉尘的对照品中的荧光强度设为1时的相对量，示出了大气粉尘添加组中的ros产生量。生育酚磷酸钠添加组中，与0.05％乙醇添加组和生育酚乙酸酯添加组相比较，ros产生量受到抑制。由该结果可以确认到：生育酚磷酸钠相对于大气粉尘诱致的ros产生具有高的抑制效果。
[0130]
表2
[0131][0132]
[实验例3]
[0133]
(癌细胞增殖抑制效果)
[0134]
用下述条件测定生育酚磷酸钠对来自路易斯肺癌的细胞株(llc、jcrb细胞库)中的细胞增殖抑制效果。
[0135]
将llc细胞以50000个/cm2的播种密度播种到以3：7(体积比)混合hamf10培养基和l15培养基(均为sigma
‑
aldrich公司制)而成的培养基中，在24小时、37℃、5％co2条件下进行培养。接着，将使生育酚磷酸钠或生育酚乙酸酯溶解于0.05％(v/v)的乙醇水溶液而成的试样添加到培养基中以使生育酚磷酸钠或生育酚乙酸酯的最终浓度为10μm，并进行24小时培养。另外，准备将0.05％(v/v)乙醇水溶液添加到1μl培养基中而培养了24小时的样品。然后，每100ml培养基中添加0.1ml大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，以使大气粉尘的培养基中的最终浓度为500μg/ml，再进行培养48小时。之后，将培养基换成含有10％(v/v)的
ナ
力
ライ
公司的wst
‑
8的培养基，再培养3小时，然后用
マイク
口
プレ
一卜
リ
一
ダ
i
‑
control(
テ
力
ン
公司制)测定450nm的波长下的吸光度。以未添加大气粉尘的样品为对照品。
[0136]
结果示于表3。表3中作为将未添加大气粉尘的对照品中的吸光度设为1时的相对量，示出了大气粉尘添加组中的细胞增殖量。生育酚磷酸钠添加组中，与0.05％乙醇添加组和生育酚乙酸酯添加组相比较，癌细胞的细胞增殖量受到抑制。由该结果可确认到：生育酚磷酸钠对于由大气粉尘增强癌细胞的细胞增殖具有高的抑制效果。
[0137]
表3
[0138][0139]
[实验例4]
[0140]
(癌细胞的浸润抑制效果)
[0141]
用下述的条件测定生育酚磷酸钠对源自路易斯肺癌的细胞株(llc、jcrb细胞库)中的细胞浸润抑制效果。试验使用cellbiolabs，inc公司制的cytoselect浸润试剂盒(assay kit)。
[0142]
使用hamf10培养基与l15培养基(均为sigma
‑
aldrich公司制)以3：7(体积比)混合而成的培养基，以100000个/ml的方式将llc细胞播种到前述的浸润试剂盒附带的浸润试验用的小室板(
チヤンバ
一
プレ
一卜)上，在24小时、37℃、5％co2的条件下进行培养。接着，以生育酚磷酸钠或生育酚乙酸酯的最终浓度为10μm的方式，将使生育酚磷酸钠或生育酚乙酸酯溶解于0.05％(v/v)的乙醇水溶液而成的试样添加到培养基中，再在24小时、37℃、5％co2条件下进行培养。另外，准备将0.05％(v/v)的乙醇水溶液添加到5μl培养基中而培养24小时后的样品。然后，每100ml培养基中添加大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液0.1ml，以使大气粉尘的培养基中的最终浓度为500μg/ml，进一步培养6小时。接下来，除去含有大气粉尘的培养基，换成新的培养基，每100ml培养基中添加大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液0.1ml，以使大气粉尘的培养基中的最终浓度为500μg/ml，进一步培养18小时。随后，使用前述的浸润试剂盒对细胞进行染色，用
マイク
口
プレ
一卜
リ
一
ダ
i
‑
control(
テ
力
ン
公司制)测定激发波长480nm/吸收波长570nm时的荧光强度。以未添加大气粉尘的样品作为对照品。
[0143]
结果示于表4。表4中，作为将未添加大气粉尘的对照品中的荧光强度设为1时的相对量，示出了大气粉尘添加组中的细胞浸润。生育酚磷酸钠添加组与0.05％乙醇添加组和生育酚乙酸酯添加组相比较，癌细胞的细胞浸润受到抑制。由该结果可确认到：生育酚磷酸钠抑制了因大气粉尘处理增进的癌细胞细胞浸润。
[0144]
表4
[0145][0146]
[配方例]
[0147]
将防御大气污染物质的保护用组合物的配方例示于以下。作为以下的配方例中的生育酚磷酸钠，例示出dl
‑
α
‑
生育酚磷酸钠即tpna(注册商标)(昭和电工制)。
[0148]
(配方例1)
[0149]
散布剂(喷雾)的配方例示于表5。
[0150]
表5
[0151]
成分配方(质量％)生育酚磷酸钠0.2羧基乙烯基聚合物1乙醇30苯氧基乙醇0.2水68.6
[0152]
(配方例2)
[0153]
散布剂(气溶胶)的配方例示于表6。
[0154]
表6
[0155]
成分配方(质量％)生育酚磷酸钠0.2乙醇35水10氮气(喷射剂)54.8
[0156]
(配方例3)
[0157]
散布剂(皮肤用喷雾)的配方例示于表7。
[0158]
表7
[0159]
成分配方(质量％)生育酚磷酸钠0.2羧基乙烯基聚合物1乙醇25氧化钛0.5玻璃酸钠0.5苯氧基乙醇0.2水72.6
[0160]
(配方例4)
[0161]
滴鼻药的配方例示于表8。
[0162]
表8
[0163]
成分配方(质量％)生育酚磷酸钠0.2羧基乙烯基聚合物0.5氯化钠1苯扎氯铵0.2乙醇0.1乙二胺四乙酸0.2薄荷醇微量失水山梨醇倍半油酸酯0.2
水97.1
[0164]
产业上的可利用性
[0165]
根据本发明，提供一种能够防御大气污染物质所致的有害作用而保护细胞的、防御大气污染物质的保护剂、和含有前述防御大气污染物质的保护剂的防御大气污染物质的保护用组合物。