癌细胞增殖抑制剂及癌细胞增殖抑制用组合物的制作方法

1.本发明涉及癌细胞增殖抑制剂及癌细胞增殖抑制用组合物。
2.本技术基于2019年5月13日在日本技术的特愿2019
‑
090846号来主张优先权，将其内容援用到本文中。


背景技术：

3.在大气中存在二噁英及pcb等芳香烃类、多环芳香烃(pah)等化学物质、以及这些化学物质通过紫外线等的作用被氧化而成的氧化物质等。这些物质对人体造成各种影响。已知由于通过呼气将这些有害物质吸入人体内、或者从粘膜吸收这些有害物质，导致在肺等呼吸器官、皮肤粘膜、及内脏中发生各种炎症，进而引起细胞的癌化。作为由该大气粉尘中所含的pah及其氧化物等有害物质引起的致癌的机理，报道了这些有害物质与细胞中存在的芳香烃受体(ahr)结合，其向细胞核内迁移，由此诱导cyp1a1基因、cyp1b1基因的表达，在细胞内产生活性氧(reactive oxygen species：ros)，结果引起炎症、细胞的癌化及癌细胞的浸润(非专利文献1、2)。
4.作为针对大气污染物质的防御剂、保护剂、及与大气污染相关的症状的抑制剂，出于抑制在细胞内产生的ros的目的，报道了具有抗氧化效果的物质、及来源于植物的提取物等(专利文献1～3)。另外，报道了竞争性地与ahr结合从而抑制有害物质的影响的物质等(非专利文献3)。然而，其效果尚不充分。
5.另外，作为用于物理性地使大气污染物质不靠近的保护剂，提出了混配油性的被膜剂来被覆体表面的制剂、捕捉大气污染物质中所含的刺激原物质的试剂、及抑制氧化作用的试剂等。然而，这些保护剂虽然在使刺激物质不靠近这样的意义上是有效的，但并不能保护细胞不受可能会引起的生物体内的致癌作用的影响。
6.现有技术文献
7.专利文献
8.专利文献1：日本特开2016
‑
88928号公报
9.专利文献2：日本特开2017
‑
186276号公报
10.专利文献3：日本专利第6456815号公报
11.非专利文献
12.非专利文献1：moorthy b et al.,polycyclic aromatic hydrocarbons:from metabolism to lung cancer.toxicol sci.2015may；145(1):5
‑
15.
13.非专利文献2：nebert dw et al.,role of aryl hydrocarbon receptor
‑
mediated induction of the cyp1 enzymes in environmental toxicity and cancer.j biol chem.2004jun 4；279(23):23847
‑
50.
14.非专利文献3：furue m et al.,antioxidative phytochemicals accelerate epidermal terminal differentiation via the ahr
‑
ovol1 pathway:implications for atopic dermatitis.acta derm venereol.2018 nov 5；98(10):918
‑
923.


技术实现要素：

15.发明所要解决的课题
16.如上所述，认为大气中的pah及其氧化物质参与了致癌，需要能抑制这些大气污染物质的作用的药剂。然而，专利文献1～3、及非专利文献3中记载的物质没有确认对因这些大气污染物质而产生的癌细胞的增殖抑制效果。
17.因此，本发明的目的是提供能够抑制因大气污染物质而亢进的癌细胞的增殖及浸润的、癌细胞增殖抑制剂及含有上述癌细胞增殖抑制剂的癌细胞增殖抑制用组合物。
18.用于解决课题的手段
19.本发明包含以下方案。
20.(1)一种癌细胞增殖抑制剂，其含有糖结合于肌醇而成的肌醇衍生物作为有效成分。
21.(2)根据(1)所述的癌细胞增殖抑制剂，其中，上述糖为葡萄糖或包含葡萄糖作为结构单元的低聚糖。
22.(3)根据(1)或(2)所述的癌细胞增殖抑制剂，其中，上述肌醇为肌肉肌醇。
23.(4)根据(1)～(3)中任一项所述的癌细胞增殖抑制剂，其抑制cyp1a1基因及cyp1b1基因的表达。
24.(5)根据(1)～(4)中任一项所述的癌细胞增殖抑制剂，其抑制arnt基因的表达。
25.(6)根据(1)～(5)中任一项所述的癌细胞增殖抑制剂，其抑制活性氧的产生。
26.(7)一种癌细胞增殖抑制用组合物，其含有(1)～(6)中任一项所述的癌细胞增殖抑制剂及药学上可接受的载体。
27.(8)根据(7)所述的癌细胞增殖抑制用组合物，其中，上述肌醇衍生物的合计含量为0.1～2质量％。
28.(9)根据(7)或(8)所述的癌细胞增殖抑制用组合物，其还含有生育酚磷酸酯或其盐。
29.(10)根据(9)所述的癌细胞增殖抑制用组合物，其中，上述生育酚磷酸酯为α
‑
生育酚磷酸酯。
30.(11)根据(9)或(10)所述的癌细胞增殖抑制用组合物，其中，上述生育酚磷酸酯的盐为生育酚磷酸酯的钠盐。
31.(12)根据(9)～(11)中任一项所述的癌细胞增殖抑制用组合物，其中，上述生育酚磷酸酯或其盐的合计含量为0.1～2质量％。
32.发明效果
33.通过本发明，可以提供能够抑制因大气污染物质而亢进的癌细胞的增殖及浸润的、癌细胞增殖抑制剂及含有上述癌细胞增殖抑制剂的癌细胞增殖抑制用组合物。
具体实施方式
34.[癌细胞增殖抑制剂]
[0035]
在一实施方式中，本发明提供一种癌细胞增殖抑制剂，其含有糖结合于肌醇而成的肌醇衍生物作为有效成分。
[0036]
本实施方式的癌细胞增殖抑制剂可以适合用于抑制因大气污染物质而亢进的癌
细胞的细胞增殖。本说明书中，所谓“大气污染物质”，是存在于大气中、对人体造成有害作用的物质，特别是指与癌的发生、进展等有关的物质。作为大气污染物质所具有的有害作用，可举出例如致癌作用、促进癌细胞增殖的作用、及促进癌细胞浸润的作用等。
[0037]
作为大气污染物质，可举出例如美国国家标准技术研究所(national institute of standards and technology：nist)供给的标准参考物质(standard reference material)1648a中包含的物质。具体而言，可举出多环芳香烃类(pahs)、硝基多环芳香烃类(nitro
‑
pahs)、多氯联苯类(pcbs)、氯类杀虫剂等。
[0038]
作为多环芳香烃类，可举出例如萘、苊、菲、甲基菲、蒽、苯并蒽、二苯并蒽、荧蒽、苯并荧蒽、二苯并荧蒽、芘、苯并芘、二苯并芘、苝、苯并苝、茚并苝、苯并苯并菲(triphenylene)、苉(picene)、蒄、联苯等，但不限定于这些。
[0039]
作为硝基多环芳香烃类，可举出例如前文例示的多环芳香烃类的氢原子的一部分被硝基取代而得的化合物。具体而言，可举出1
‑
硝基萘、2
‑
硝基萘、3
‑
硝基苊、4
‑
硝基菲、9
‑
硝基菲、9
‑
硝基蒽、1
‑
硝基芘、2
‑
硝基芘、4
‑
硝基芘、2
‑
硝基荧蒽、3
‑
硝基荧蒽、8
‑
硝基荧蒽、7
‑
硝基苯并蒽、6
‑
硝基等，但不限定于这些。
[0040]
作为多氯联苯类，可举出例如二氯联苯、三氯联苯、四氯联苯、五氯联苯、六氯联苯、七氯联苯、八氯联苯、九氯联苯、十氯联苯等，但不限定于这些。
[0041]
作为氯类杀虫剂，可举出例如六氯环己烷(benzene hexachloride)、六氯苯、氯丹、灭蚁灵、二氯二苯三氯乙烷(ddt)等，但不限定于这些。
[0042]
大气污染物质不限定于单独具有有害作用(致癌、癌增殖、癌浸润等)的物质，也可以是多种物质复合作用而呈现有害作用的物质。
[0043]
如后述的实施例所示，若存在大气污染物质，则癌细胞的细胞增殖被促进。本实施方式的癌细胞增殖抑制剂能够有效地抑制这样的由大气污染物质促进的癌细胞的细胞增殖。即，就本实施方式的癌细胞增殖抑制剂而言，在大气污染物质的存在下，与未施予上述癌细胞增殖抑制剂的情况相比，能够抑制癌细胞的细胞增殖。
[0044]
多环芳香烃若侵入细胞内，则与ahr结合，由arnt(aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator，芳香烃受体核转位蛋白)输送至核内，诱导cyp1a1及cyp1b1等药物代谢基因的表达。通过由cyp1a1及cyp1b1等引起的药物代谢，从而在细胞内生成ros。报道了由于ros引起dna变异及/或基因表达谱的扰乱而诱发癌化(moorthy b et al.,toxicol sci.2015may；145(1):5
‑
15.；nebert dw et al.,j biol chem.2004jun 4；279(23):23847
‑
50.)。
[0045]
如后述的实施例所示，本实施方式的癌细胞增殖抑制剂能够抑制由大气污染物质诱导的cyp1a1基因及cyp1b1基因的表达。因此，本实施方式的癌细胞增殖抑制剂也可以称为cyp1a1基因及cyp1b1基因的表达抑制剂。即，就本实施方式的癌细胞增殖抑制剂而言，在大气污染物质的存在下，与未施予上述癌细胞增殖抑制剂的情况相比，能够抑制cyp1a1基因及cyp1b1基因的表达。
[0046]
cyp1a1(ncbi基因id：1543)是作为催化与药物代谢有关的反应的单加氧酶的、细胞色素p450超家族酶中的1种。cyp1a1在内质网中局部存在，由多环芳香烃来诱导表达，将多环芳香烃代谢而生成致癌性物质。作为人cyp1a1基因的碱基序列，可例示例如在ncbi参考序列数据库中登记的、nm＿000499.5、nm＿001319216.2、nm＿001319217.2等。cyp1a1基
因不限定于具有上述序列的基因，包括它们的同源物。
[0047]
cyp1b1(ncbi基因id：1545)是作为催化与药物代谢有关的反应的单加氧酶的、细胞色素p450超家族酶中的1种。cyp1b1在内质网中局部存在，由多环芳香烃来诱导表达，将多环芳香烃代谢而生成致癌性物质。作为人cyp1b1基因的碱基序列，可例示例如在ncbi参考序列数据库中登记的nm＿000104.3等。cyp1b1基因不限定于具有上述序列的基因，包括它们的同源物。
[0048]
如后述的实施例所示，本实施方式的癌细胞增殖抑制剂能够抑制由大气污染物质诱导的arnt基因的表达。因此，本实施方式的癌细胞增殖抑制剂也可以称为arnt基因的表达抑制剂。即，就本实施方式的癌细胞增殖抑制剂而言，在大气污染物质的存在下，与未施予上述癌细胞增殖抑制剂的情况相比，能够抑制arnt基因的表达。
[0049]
arnt(ncbi基因id：405)是与结合有多环芳香烃等配体的ahr结合、将上述配体
‑
ahr复合体输送至核中的蛋白质。作为人arnt基因的碱基序列，可例示例如在ncbi参考序列数据库中登记的、nm＿001197325.1、2.nm＿001286035.1、3.nm＿001286036.1、4.nm＿001350224.1、5.nm＿001350225.1、6.nm＿001350226.1、7.nm＿001668.4、8.nm＿178427.2等。arnt基因不限定于具有上述序列的基因，包括它们的同源物。
[0050]
如后述的实施例所示，本实施方式的癌细胞增殖抑制剂能够抑制由大气污染物质诱导的ros的产生。因此，本实施方式的癌细胞增殖抑制剂也可以称为ros的产生抑制剂。即，就本实施方式的癌细胞增殖抑制剂而言，在大气污染物质的存在下，与未施予上述癌细胞增殖抑制剂的情况相比，能够抑制ros的产生。
[0051]
如后述的实施例所示，本实施方式的癌细胞增殖抑制剂能够抑制由大气污染物质促进的癌细胞的浸润。因此，本实施方式的癌细胞增殖抑制剂也可以称为癌细胞的浸润抑制剂。即，就本实施方式的癌细胞增殖抑制剂而言，在大气污染物质的存在下，与未施予上述癌细胞增殖抑制剂的情况相比，能够抑制癌细胞的浸润。
[0052]
(肌醇衍生物)
[0053]
本实施方式的癌细胞增殖抑制剂将糖结合于肌醇而成的肌醇衍生物作为有效成分。
[0054]
所谓肌醇，是c6h6(oh)6所示的环状六元醇。肌醇中，存在顺式肌醇(cis
‑
肌醇)、表肌醇(epi
‑
肌醇)、异肌醇(allo
‑
肌醇)、肌肉肌醇(myo
‑
肌醇)、粘质肌醇(muco
‑
肌醇)、新肌醇(neo
‑
肌醇)、手性肌醇(chiro
‑
肌醇)(存在d体及l体。)、鲨肌醇(scyllo
‑
肌醇)这9种立体异构体。
[0055]
在本实施方式的癌细胞增殖抑制剂中，构成肌醇衍生物的肌醇优选为上述异构体中的具有生理活性的肌肉肌醇。肌醇可以通过从米糠提取的方法、化学合成法、及发酵法等合成。
[0056]
在本实施方式的癌细胞增殖抑制剂中，肌醇衍生物为糖结合于肌醇的羟基而成的化合物。糖可以结合于肌醇分子内存在的6个羟基中的任意1个，也可以结合于任意2个以上。
[0057]
结合于肌醇的糖可以为单糖，也可以为低聚糖。例如，可以1个或多个单糖结合于1分子的肌醇，也可以1个或多个低聚糖结合于1分子的肌醇，还可以1个或多个单糖及1个或多个低聚糖结合于1分子的肌醇。在肌醇衍生物中，结合于1分子的肌醇的单糖或低聚糖的
合计换算成单糖单元为1个以上，例如可以为2个以上，例如可以为3个以上，例如可以为4个以上。
[0058]
本说明书中，所谓单糖，是指不能被进一步水解的糖类，是指成为形成多糖时的构成要素的化合物。单糖也可以称为糖类的最小结构单元。本说明书中，所谓“单糖单元”，是指相当于单糖的化学结构。“单糖单元”也可以称为来源于单糖的化学结构。例如，若将二糖换算成单糖单元则为2，若将三糖换算成单糖单元则为3。更具体而言，例如，若将甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藓醇、季戊四醇、葡萄糖、果糖、木糖等换算成单糖单元则为1。若将麦芽糖醇、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖等换算成单糖单元则为2。例如，若将α
‑
环糊精换算成单糖单元则为6，若将β
‑
环糊精换算成单糖单元则为7，若将γ
‑
环糊精换算成单糖单元则为8。
[0059]
肌醇衍生物也可以为结合有换算成单糖单元为不同数目的糖的肌醇衍生物的混合物。例如，肌醇衍生物可以为每1分子肌醇结合有1个单糖单元的糖的肌醇衍生物、结合有2个单糖单元的糖的肌醇衍生物、结合有3个单糖单元的糖的肌醇衍生物、结合有4个单糖单元的糖的肌醇衍生物、和结合有5个以上的单糖单元的糖的肌醇衍生物的混合物。例如，肌醇衍生物可以包含相对于肌醇衍生物总质量(100质量％)而言为10～100质量％的每1分子肌醇结合有2个以上的单糖单元的糖的肌醇衍生物。作为每1分子肌醇结合有2个以上的单糖单元的糖的肌醇衍生物相对于肌醇衍生物总质量(100质量％)的比例，例如可以为20质量％以上、30质量％以上、40质量％以上、50质量％以上、60质量％以上、70质量％以上、或80质量％以上。
[0060]
作为构成肌醇衍生物的糖，没有特别限制，可举出例如甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、赤藓醇、季戊四醇、葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、麦芽糖、木糖、海藻糖、α
‑
环糊精、β
‑
环糊精、γ
‑
环糊精等。
[0061]
构成肌醇衍生物的糖可以为葡萄糖，也可以为包含葡萄糖作为结构单元的低聚糖。上述低聚糖可以仅包含葡萄糖作为结构单元。或者，上述低聚糖可以包含至少1分子的葡萄糖、和除葡萄糖以外的糖作为结构单元。上述低聚糖的分子量例如可以为300～3000左右。作为更具体的低聚糖，可举出蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖等二糖类、棉子糖、松三糖、麦芽三糖等三糖类、水苏糖等四糖类等。
[0062]
肌醇衍生物可以是糖为单糖的肌醇衍生物、与糖为低聚糖的肌醇衍生物的混合物。另外，肌醇衍生物也可以是结合有不同种类的糖的肌醇衍生物的混合物。
[0063]
从易于得到高纯化度的肌醇衍生物的观点考虑，作为肌醇衍生物的原料，优选使用工业上便宜且能够稳定供给的β
‑
环糊精。在该情况下，构成肌醇衍生物的糖包含葡萄糖作为结构单元。另一方面，作为肌醇衍生物的原料，若使用更便宜的淀粉等，则在合成肌醇衍生物时各种糖被转移到各种场所，因此有所得的肌醇衍生物的纯化度不稳定的倾向。
[0064]
肌醇衍生物可以为药学上可接受的盐的形态。本说明书中，所谓“药学上可接受的盐”，是指不损害肌醇衍生物的起因于大气污染物质的癌细胞增殖抑制效果的盐的形态。作为肌醇衍生物的药学上可接受的盐，没有特别限制，可举出例如与碱金属(钠、钾等)所成的盐；与碱土金属(镁、钙等)所成的盐；与有机碱(吡啶、三乙胺等)所成的盐、与胺所成的盐、与有机酸(乙酸、甲酸、丙酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、草酸、苯甲酸、甲磺酸等)所成的盐、及与无机酸(盐酸、磷酸、氢溴酸、硫酸、硝酸等)所成的盐等。
[0065]
肌醇衍生物可以为溶剂合物的形态。肌醇衍生物也可以为肌醇衍生物的盐的溶剂
合物的形态。作为溶剂合物，没有特别限制，可举出例如水合物、乙醇溶剂合物等。
[0066]
(肌醇衍生物的合成方法)
[0067]
作为肌醇衍生物的合成方法，没有特别限制，可以通过以往已知的方法适当合成。例如，可以使肌醇及作为低聚糖中的1种的环糊精在环糊精葡萄糖基转移酶的存在下反应，合成肌醇衍生物(例如，参照日本特开昭63
‑
196596号公报)。或者，也可以通过使用糖基亚磷酸酯作为糖供体而得到糖基体的方法来合成肌醇衍生物(例如，参照日本特开平6
‑
298783号公报)。
[0068]
本实施方式的癌细胞增殖抑制剂中，作为肌醇衍生物，可以单独含有选自由上述的肌醇衍生物、肌醇衍生物的盐、及它们的溶剂合物组成的组中的化合物中的1种，也可以组合含有2种以上。
[0069]
本实施方式的癌细胞增殖抑制剂可以出于抑制由大气污染物质诱导的癌细胞增殖的目的而将其本身施予至患者来使用。本实施方式的癌细胞增殖抑制剂也可以出于赋予抑制由大气污染物质诱导的癌细胞增殖的功能的目的而混配在医药品或化妆品中来使用。本实施方式的癌细胞增殖抑制剂也可以混配在后述的癌细胞增殖抑制用组合物中来使用。
[0070]
本实施方式的癌细胞增殖抑制剂可以在癌发病前施予至患者，从而用于预防已癌化的细胞增殖而使癌发病。本实施方式的癌细胞增殖抑制剂也可以施予至癌患者，从而用于抑制由大气污染物质诱导的癌细胞增殖。
[0071]
作为应用本实施方式的癌细胞增殖抑制剂的癌细胞，可举出例如肺癌、胰腺癌、胃癌、头颈部癌、间皮瘤、成神经细胞瘤(neuroblastoma)、肝癌、恶性黑素瘤、子宫癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌、骨肉瘤、睾丸肿瘤、甲状腺癌、急性髓性白血病、脑瘤、前列腺癌、头颈部鳞状细胞癌、大肠癌、肾癌、卵巢癌、及乳腺癌等癌细胞，但不限定于这些。本实施方式的癌细胞增殖抑制剂适合用于抑制肺癌细胞的细胞增殖。
[0072]
本实施方式的癌细胞增殖抑制剂可以通过与后述的癌细胞增殖抑制用组合物同样的方法来施予至患者，优选经皮施予。
[0073]
[癌细胞增殖抑制用组合物]
[0074]
在一实施方式中，本发明提供一种癌细胞增殖抑制用组合物，其含有上述的癌细胞增殖抑制剂及药学上可接受的载体。
[0075]
本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物可以通过下述方式来制造：按照常规方法(例如，日本药局方记载的方法)，将上述的癌细胞增殖抑制剂、药学上可接受的载体、及根据情况而添加的其他成分混合并进行制剂化。
[0076]
本说明书中，所谓“药学上可接受的载体”，是指不损害有效成分的生理活性、并且对其施予对象不显示实质毒性的载体。所谓“不显示实质毒性”，是指在通常使用该成分的施予量下，对施予对象不显示毒性。作为药学上可接受的载体，没有特别限制，可以举出赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、乳化剂、稳定剂、稀释剂、注射剂用溶剂、油性基剂、保湿剂、触感改进剂、表面活性剂、高分子、增稠剂、凝胶化剂、溶剂、喷射剂、抗氧化剂、还原剂、氧化剂、螯合剂、酸、碱、粉体、无机盐、水、含有金属的化合物、不饱和单体、多元醇、高分子添加剂、辅助剂、湿润剂、增粘物质、油性原料、液态基质、脂溶性物质、高分子羧酸盐等。作为这些成分的具体例，可举出例如国际公开公报第2016/076310号中记载的成分等。作为高分子、增稠剂及凝胶化剂的具体例，可举出甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、甲基丙烯酸丁酯、或
它们的聚合物等。药学上可接受的载体可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
[0077]
作为其他成分，没有特别限制，可举出防腐剂、抗菌剂、紫外线吸收剂、美白剂、维生素类及其衍生物类、消炎剂、抗炎剂、育毛用药剂、血液循环促进剂、刺激剂、激素类、抗皱纹剂、抗老化剂、紧致剂、冷感剂、温感剂、创伤治愈促进剂、刺激缓和剂、镇痛剂、细胞活化剂、植物提取物、动物提取物、微生物提取物、种子油、镇痒剂、角质剥离/溶解剂、止汗剂、清凉剂、收敛剂、酶、核酸、香料、色素、着色剂、染料、颜料、消炎镇痛剂、抗真菌剂、抗组胺剂、催眠镇静剂、精神稳定剂、抗高血压剂、降压利尿剂、抗生素、麻醉剂、抗菌性物质、抗癫痫剂、冠状血管扩张剂、生药、止痒剂、角质软化剥离剂、紫外线阻断剂、防腐杀菌剂、抗氧化物质、ph调节剂、添加剂、金属皂等。作为这些成分的具体例，可举出例如国际公开公报第2016/076310号中记载的成分等。作为植物提取物的具体例，可举出欧洲稻槎菜(lapsana communis)花/叶/茎、茶叶等。作为种子油的具体例，可举出辣木籽油。作为香料的具体例，可举出紫苏醛。其他成分可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
[0078]
本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物可以含有治疗有效量的上述癌细胞增殖抑制剂。所谓“治疗有效量”，是指为了治疗或预防患者的疾病而有效的药剂的量。治疗有效量可根据施予对象的疾病的状态、年龄、性别、及体重等而变动。在本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物中，上述的癌细胞增殖抑制剂的治疗有效量可以是癌细胞增殖抑制剂中的肌醇衍生物能够抑制由大气污染物质促进的癌细胞增殖的量。例如，本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物中的上述癌细胞增殖抑制剂的治疗有效量以肌醇衍生物在组合物中的合计含量计，例如可以为0.01～20质量％，例如可以为0.1～10质量％，例如可以为0.1～5质量％，例如可以为0.1～3质量％，例如可以为0.1～2质量％，例如可以为0.3～2质量％，例如可以为0.6～1.5质量％。
[0079]
关于上述癌细胞增殖抑制用组合物中的肌醇衍生物的含量，在单独含有1种肌醇衍生物的情况下是指该化合物的含量，在组合含有2种以上肌醇衍生物的情况下是指这些化合物的合计含量。
[0080]
(生育酚磷酸酯)
[0081]
本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物可以含有生育酚磷酸酯或其盐作为其他成分。
[0082]
肌醇衍生物抑制由ahr介导的cyp1a1基因、cyp1b1基因、及arnt基因的表达。生育酚磷酸酯通过其抗氧化效果来抑制由大气污染物质诱导的ros的产生。肌醇衍生物和生育酚磷酸酯各自阻碍癌化的过程的不同部分。因此，推测通过将它们组合使用，癌化抑制效果协同性地提高。
[0083]
如后述的实施例所示，通过将肌醇衍生物与生育酚磷酸酯或其盐组合使用，可协同性地抑制由大气污染物质诱导的癌细胞增殖。因此，在优选的方案中，本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物包含肌醇衍生物和生育酚磷酸酯或其盐。
[0084]
如后述的实施例所示，通过将肌醇衍生物与生育酚磷酸酯或其盐组合使用，可协同性地抑制由大气污染物质诱导的ros产生。因此，本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物也可以说是包含肌醇衍生物和生育酚磷酸酯或其盐的、ros产生抑制用组合物。
[0085]
作为生育酚磷酸酯，可举出下述通式(1)所示的化合物。
[0086]
[化学式1]
[0087][0088]
[式中，r1、r2及r3相互独立地表示氢原子或甲基。]
[0089]
生育酚磷酸酯中，根据上述通式(1)中的r1、r2及r3的种类，存在α
‑
生育酚磷酸酯(r1、r2、r3＝ch3)、β
‑
生育酚磷酸酯(r1、r3＝ch3，r2＝h)、γ
‑
生育酚磷酸酯(r1、r2＝ch3，r3＝h)、δ
‑
生育酚磷酸酯(r1＝ch3，r2、r3＝h)、ζ2‑
生育酚磷酸酯(r2、r3＝ch3，r1＝h)、及η
‑
生育酚磷酸酯(r2＝ch3，r1、r3＝h)等。
[0090]
生育酚磷酸酯没有特别限定，为这些生育酚磷酸酯中的任一者均可。这些生育酚磷酸酯中，优选为α
‑
生育酚磷酸酯及γ
‑
生育酚磷酸酯，更优选为α
‑
生育酚磷酸酯。
[0091]
上述通式(1)所示的化合物在色满环的2位具有手性碳原子，因此存在d体及l体的立体异构体、以及dl体。生育酚磷酸酯为这些立体异构体中的任一者均可，但优选为dl体。
[0092]
上述之中，作为生育酚磷酸酯，优选为dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯及dl
‑
γ
‑
生育酚磷酸酯，更优选为dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯。
[0093]
生育酚磷酸酯的盐没有特别限定，可举出例如与无机碱所成的盐、及与有机碱所成的盐等。
[0094]
作为与无机碱所成的盐，可举出例如钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐等碱土金属盐；铝盐；铵盐；锌盐等。
[0095]
作为与有机碱所成的盐，可举出例如烷基铵盐、与碱性氨基酸所成的盐等。
[0096]
上述之中，作为生育酚磷酸酯的盐，优选为碱金属盐，更优选为钠盐。生育酚磷酸酯的碱金属盐、特别是钠盐具有在水中的溶解性高、而且因性状为粉末而容易操作这样的优点。
[0097]
作为生育酚磷酸酯的优选的方案，可举出上述通式(1)所示的化合物的碱金属盐(例如，钠盐)、α
‑
生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如，钠盐)、γ
‑
生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如，钠盐)、dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如，钠盐)、dl
‑
γ
‑
生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如，钠盐)等。
[0098]
dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯的钠盐以tpna(注册商标)(显示名称：生育酚磷酸酯na)的制品名而由昭和电工进行市售。上述tpna可例示为生育酚磷酸酯的优选例。
[0099]
本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物可以单独使用选自生育酚磷酸酯及其盐中的1种，也可以并用2种以上。本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物优选包含生育酚磷酸酯的盐，更优选单独使用生育酚磷酸酯的碱金属盐(例如，钠盐)。
[0100]
生育酚磷酸酯或其盐可以通过已知的制造方法、例如日本特开昭59
‑
44375号公报、wo97/14705号等中记载的方法来制造。例如，可以使磷酰氯等磷酸化剂作用于已溶解在溶剂中的生育酚，在反应结束后适当地纯化，由此得到生育酚磷酸酯。进而，可以利用氧化镁等金属氧化物、氢氧化钠等金属氢氧化物、或氢氧化铵、氢氧化烷基铵等对所得的生育酚磷酸酯进行中和，由此得到生育酚磷酸酯的盐。
[0101]
在本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物包含生育酚磷酸酯或其盐的情况下，生育酚磷酸酯或其盐的含量没有特别限定。本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物中的生育
酚磷酸酯或其盐的含量优选为，在与肌醇衍生物组合使用时，能够协同性地发挥对癌细胞增殖的抑制效果的量。例如，本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物可以含有治疗有效量的生育酚磷酸酯或其盐。本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物中的生育酚磷酸酯或其盐的治疗有效量以生育酚磷酸酯或其盐在组合物中的合计含量计，例如可以为0.01～20质量％，例如可以为0.1～10质量％，例如可以为0.1～5质量％，例如可以为0.1～3质量％，例如可以为0.1～2质量％，例如可以为0.3～2质量％，例如可以为0.6～1.5质量％。
[0102]
关于上述癌细胞增殖抑制用组合物中的生育酚磷酸酯或其盐的含量，在单独含有1种生育酚磷酸酯或其盐的情况下是指该化合物的含量，在组合含有2种以上生育酚磷酸酯或其盐的情况下是指这些化合物的合计含量。
[0103]
本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物中的肌醇衍生物与生育酚磷酸酯或其盐之比没有特别限定，例如可以为肌醇衍生物：生育酚磷酸酯或其盐＝1：10～10：1(质量比)，优选为1：5～5：1(质量比)，更优选为1：3～3：1(质量比)。
[0104]
本实施方式的癌细胞增殖抑制用组合物可以为药物组合物，也可以为化妆品。
[0105]
(药物组合物)
[0106]
在一实施方式中，本发明提供一种用于抑制癌细胞增殖的药物组合物，其含有上述的癌细胞增殖抑制剂及药学上可接受的载体。
[0107]
在本实施方式的药物组合物中，作为药学上可接受的载体，没有特别限制，除了上文举出的载体以外，还可以使用通常用于医药品的载体。例如，可以使用日本药局方、日本药局方外医药品规格、医药品添加物规格2013(药事日报社，2013年)、医药品添加物辞典2016(日本医药品添加剂协会编，药事日报社，2016年)、handbook of pharmaceutical excipients,7th edition(药用辅料手册第七版)(pharmaceutical press，2012年)等中记载的通常的原料。药学上可接受的载体可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
[0108]
本实施方式的药物组合物可以除了上述癌细胞增殖抑制剂及药学上可接受的载体以外还含有其他成分。作为其他成分，没有特别限制，可以使用通常的医药品添加物。另外，作为其他成分，也可以使用除上述癌细胞增殖抑制剂以外的活性成分。关于作为其他成分的医药品添加物及活性成分，除了上文举出的成分以外，还可以使用例如日本药局方、日本药局方外医药品规格、医药品添加物规格2013(药事日报社，2013年)、医药品添加物辞典2016(日本医药品添加剂协会编，药事日报社，2016年)、handbook of pharmaceutical excipients,7th edition(药用辅料手册第七版)(pharmaceutical press，2012年)等中记载的通常的原料。其他成分可以单独使用1种，也可以并用2种以上。作为其他成分，可优选例示生育酚磷酸酯或其盐。
[0109]
作为本实施方式的药物组合物的剂型，没有特别限制，可以制成通常作为医药品制剂来使用的剂型。例如，可举出片剂、包衣片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、液剂、悬浮剂、乳剂等经口施予的剂型；及注射剂、栓剂、皮肤外用剂、滴鼻药等非经口施予的剂型等。这些剂型的药物组合物可以按照通用方法(例如，日本药局方记载的方法)来进行制剂化。
[0110]
作为本实施方式的药物组合物，优选为皮肤外用剂或滴鼻药。作为皮肤外用剂，更具体而言，可举出霜剂、洗剂、面膜剂、泡沫剂、皮肤洗涤剂、浸膏剂、硬膏剂、软膏剂、酒精剂、悬浮剂、酊剂、贴剂、巴布剂、搽剂、气雾剂、喷雾剂、凝胶剂等剂型。
[0111]
本实施方式的药物组合物的施予方法没有特别限制，可以通过作为医药品的施予
方法而通常使用的方法来施予。例如，可以制成片剂、包衣片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、液剂、悬浮剂、乳剂等而经口施予，也可以制成注射剂、输液制剂等而单独或与葡萄糖液、林格液等通常的输液混合并施予至静脉内、动脉内、肌肉内、皮内、皮下、腹腔内等，也可以制成栓剂而进行直肠内施予，也可以制成皮肤外用剂而施予至皮肤，也可以制成滴鼻药而施予至鼻腔中。在优选的方案中，本实施方式的药物组合物被制成皮肤外用剂而向患部涂布、贴附或喷雾。或者，制成滴鼻药而施予至鼻腔中。
[0112]
本实施方式的药物组合物的施予量可以为治疗有效量。治疗有效量根据患者的症状、体重、年龄及性别等、以及药物组合物的剂型及施予方法等来适当地确定即可。例如，关于本实施方式的药物组合物的施予量，在经口施予的情况下，可例示以肌醇衍生物计、每施予单位形态为0.01～500mg，在注射剂的情况下，可例示以肌醇衍生物计、每施予单位形态为0.02～250mg，在栓剂的情况下，可例示以肌醇衍生物计、每施予单位形态为0.01～500mg；等等。关于本实施方式的药物组合物的施予量，在皮肤外用剂或滴鼻药的情况下，可例示例如以肌醇衍生物计、每施予单位形态为0.15～500mg，例如可以为0.15～300mg，例如可以为0.15～200mg，例如可以为0.2～100mg。
[0113]
本实施方式的药物组合物的施予间隔根据患者的症状、体重、年龄及性别等、以及药物组合物的剂型及施予方法等来适当地确定即可。例如，可以为1天1次或1天2～3次左右等。
[0114]
本实施方式的药物组合物例如可以施予至癌患者，从而用于抑制癌细胞增殖。另外，本实施方式的药物组合物可以施予至癌患者，从而用于抑制癌细胞的浸润、转移。
[0115]
在城镇中，癌患者日常与大气污染物质接触，暴露于由大气污染物质促进癌细胞增殖的风险。因此，可以通过将本实施方式的药物组合物施予至癌患者，从而降低由大气污染物质产生的促进癌细胞增殖的风险。
[0116]
或者，本实施方式的药物组合物也可以在存在大气污染物质的地域中预防性地施予至患者，从而用于抑制已癌化的细胞的增殖并预防癌的发病。
[0117]
(化妆品)
[0118]
在一实施方式中，本发明提供一种用于抑制癌细胞增殖的化妆品，其含有上述的癌细胞增殖抑制剂及药学上可接受的载体。
[0119]
在本实施方式的化妆品中，作为药学上可接受的载体，没有特别限制，除了上文举出的载体以外，还可以使用通常用于化妆品的载体。例如，可以使用化妆品原料基准第二版注解(日本公定书协会编，药事日报社，1984年)、化妆品原料基准外成分规格(厚生省药务局审查课监修，药事日报社，1993年)、化妆品原料基准外成分规格追补(厚生省药务局审查课监修，药事日报社，1993年)、化妆品种别许可基准(厚生省药务局审查课监修，药事日报社，1993年)、化妆品原料辞典(日光
ケミカルズ
社，平成3年)、international cosmetic ingredient dictionary and handbook 2002ninth edition(国际化妆品原料字典和手册2002年第九版)vol.1～4,by ctfa等中记载的通常的原料。药学上可接受的载体可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
[0120]
本实施方式的化妆品可以除了癌细胞增殖抑制剂及药学上可接受的载体以外还含有其他成分。作为其他成分，没有特别限制，可以使用通常的化妆品添加物。另外，作为其他成分，也可以使用除上述癌细胞增殖抑制剂以外的活性成分。关于作为其他成分的化妆
品添加物及活性成分，除了上文举出的成分以外，还可以使用例如化妆品原料基准第二版注解(日本公定书协会编，药事日报社，1984年)、化妆品原料基准外成分规格(厚生省药务局审查课监修，药事日报社，1993年)、化妆品原料基准外成分规格追补(厚生省药务局审查课监修，药事日报社，1993年)、化妆品种别许可基准(厚生省药务局审查课监修，药事日报社，1993年)、化妆品原料辞典(日光
ケミカルズ
社，平成3年)、international cosmetic ingredient dictionary and handbook 2002ninth edition(国际化妆品原料字典和手册2002年第九版)vol.1～4,by ctfa等中记载的通常的原料。其他成分可以单独使用1种，也可以并用2种以上。作为其他成分，可优选例示生育酚磷酸酯或其盐。
[0121]
作为本实施方式的化妆品的形态，没有特别限制，可以制成通常作为化妆品来使用的形态。例如，可举出洗发水、护发素、整发剂等毛发用化妆品；洗面奶、卸妆剂、化妆水、乳液、爽肤水、霜、凝胶、防晒霜剂、面膜(pack)、护肤膜(mask)、美容液等基础化妆品；粉底类、妆前乳、口红类、唇蜜、腮红类等彩妆化妆品；沐浴露、爽身粉、防臭化妆品等身体化妆品等。这些化妆品可以按照通用方法来制造。这些化妆品中，本实施方式的化妆品优选为制成皮肤外用剂而向皮肤涂布或贴附等的形态的化妆品。例如，可举出化妆水、乳液、爽肤水、霜、凝胶、防晒霜剂、面膜、护肤膜、美容液、粉底类、妆前乳等作为适合的例子。
[0122]
作为本实施方式的化妆品的剂型，没有特别限制，可举出例如水包油(o/w)型、油包水(w/o)型、w/o/w型、o/w/o型等乳化型、乳化高分子型、油性、固态、液态、膏状、棒状、挥发性油型、粉状、啫喱状、凝胶状、糊状、霜状、片状、膜状、雾状、喷雾型、多层状、泡状、薄片状等。
[0123]
本实施方式的化妆品的使用量没有特别限制，可以是为了抑制起因于大气污染物质的癌细胞增殖而有效的量。例如，关于本实施方式的化妆品的使用量，可例示以肌醇衍生物的量计、每1次使用0.15～500mg，例如可以为0.15～300mg，例如可以为0.15～200mg，例如可以为0.2～100mg。
[0124]
本实施方式的化妆品的使用间隔没有特别限制，例如可以为1天1次或1天2～3次左右等。
[0125]
对于本实施方式的化妆品而言，可以在例如大气污染物质的浓度高的城镇等，为了降低由大气污染物质产生的促进癌细胞增殖的风险而由癌患者使用。或者，在大气污染物质的分布浓度高的地域或季节，可以为了抑制已癌化的细胞的增殖并预防癌的发病而用于日常的皮肤护理、彩妆。
[0126]
[其他实施方式]
[0127]
在一实施方式中，本发明提供一种癌细胞增殖的抑制方法，其包括将糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物施予至哺乳动物的工序。上述癌细胞增殖优选为由大气污染物质促进的癌细胞增殖。
[0128]
在一实施方式中，本发明提供一种癌细胞浸润的抑制方法，其包括将糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物施予至哺乳动物的工序。上述癌细胞浸润优选为由大气污染物质促进的癌细胞浸润。
[0129]
在一实施方式中，本发明提供一种抑制选自由cyp1a1基因、cyp1b1基因、及arnt基因组成的组中的至少一个基因的表达的方法，其包括将糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物施予至哺乳动物的工序。上述基因表达优选为由大气污染物质促进的基因表
达。
[0130]
在一实施方式中，本发明提供一种抑制ros产生的方法，其包括将糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物施予至哺乳动物的工序。上述ros产生优选为由大气污染物质促进的ros产生。
[0131]
在一实施方式中，本发明提供用于抑制癌细胞增殖的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物。上述癌细胞增殖优选为由大气污染物质促进的癌细胞增殖。
[0132]
在一实施方式中，本发明提供用于抑制癌细胞浸润的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物。上述癌细胞浸润优选为由大气污染物质促进的癌细胞浸润。
[0133]
在一实施方式中，本发明提供用于抑制选自由cyp1a1基因、cyp1b1基因、及arnt基因组成的组中的至少一个基因的表达的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物。上述基因表达优选为由大气污染物质促进的基因表达。
[0134]
在一实施方式中，本发明提供用于抑制ros产生的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物。上述ros产生优选为由大气污染物质促进的ros产生。
[0135]
在一实施方式中，本发明提供用于制造癌细胞增殖抑制剂的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物的使用。优选上述癌细胞增殖抑制剂抑制由大气污染物质促进的癌细胞增殖。
[0136]
在一实施方式中，本发明提供用于制造癌细胞浸润抑制剂的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物的使用。优选上述癌细胞浸润抑制剂抑制由大气污染物质促进的癌细胞浸润。
[0137]
在一实施方式中，本发明提供用于制造选自由cyp1a1基因、cyp1b1基因、及arnt基因组成的组中的至少一个基因的表达抑制剂的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物的使用。优选上述基因表达抑制剂抑制由大气污染物质促进的基因表达。
[0138]
在一实施方式中，本发明提供用于制造ros产生抑制剂的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物的使用。优选上述ros产生抑制剂抑制由大气污染物质促进的ros产生。
[0139]
在一实施方式中，本发明提供用于制造癌细胞增殖抑制用组合物的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物的使用。优选上述癌细胞增殖抑制用组合物抑制由大气污染物质促进的癌细胞增殖。
[0140]
在一实施方式中，本发明提供用于制造癌细胞浸润抑制用组合物的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物的使用。优选上述癌细胞浸润抑制用组合物抑制由大气污染物质促进的癌细胞浸润。
[0141]
在一实施方式中，本发明提供用于制造选自由cyp1a1基因、cyp1b1基因、及arnt基因组成的组中的至少一个基因的表达抑制用组合物的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物的使用。优选上述基因表达抑制用组合物抑制由大气污染物质促进的基因表达。
[0142]
在一实施方式中，本发明提供用于制造ros产生抑制用组合物的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物的使用。优选上述ros产生抑制用组合物抑制由大气污染物质促进的ros产生。
[0143]
在一实施方式中，本发明提供一种癌细胞增殖的抑制方法，其包括将糖(单糖或低
聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐施予至哺乳动物的工序。上述癌细胞增殖优选为由大气污染物质促进的癌细胞增殖。
[0144]
在一实施方式中，本发明提供一种癌细胞浸润的抑制方法，其包括将糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐施予至哺乳动物的工序。上述癌细胞浸润优选为由大气污染物质促进的癌细胞浸润。
[0145]
在一实施方式中，本发明提供一种抑制选自由cyp1a1基因、cyp1b1基因、及arnt基因组成的组中的至少一个基因的表达的方法，其包括将糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐施予至哺乳动物的工序。上述基因表达优选为由大气污染物质促进的基因表达。
[0146]
在一实施方式中，本发明提供一种抑制ros产生的方法，其包括将糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐施予至哺乳动物的工序。上述ros产生优选为由大气污染物质促进的ros产生。
[0147]
在一实施方式中，本发明提供用于抑制癌细胞增殖的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合。上述癌细胞增殖优选为由大气污染物质促进的癌细胞增殖。
[0148]
在一实施方式中，本发明提供用于抑制癌细胞浸润的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合。上述癌细胞浸润优选为由大气污染物质促进的癌细胞浸润。
[0149]
在一实施方式中，本发明提供用于抑制选自由cyp1a1基因、cyp1b1基因、及arnt基因组成的组中的至少一个基因的表达的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合。上述基因表达优选为由大气污染物质促进的基因表达。
[0150]
在一实施方式中，本发明提供用于抑制ros产生的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合。上述ros产生优选为由大气污染物质促进的ros产生。
[0151]
在一实施方式中，本发明提供用于制造癌细胞增殖抑制剂的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合的使用。优选上述癌细胞增殖抑制剂抑制由大气污染物质促进的癌细胞增殖。
[0152]
在一实施方式中，本发明提供用于制造癌细胞浸润抑制剂的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合的使用。优选上述癌细胞浸润抑制剂抑制由大气污染物质促进的癌细胞浸润。
[0153]
在一实施方式中，本发明提供用于制造选自由cyp1a1基因、cyp1b1基因、及arnt基因组成的组中的至少一个基因的表达抑制剂的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合的使用。优选上述基因表达抑制剂抑制由大气污染物质促进的基因表达。
[0154]
在一实施方式中，本发明提供用于制造ros产生抑制剂的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合的使用。优选上述ros产生抑制剂抑制由大气污染物质促进的ros产生。
[0155]
在一实施方式中，本发明提供用于制造癌细胞增殖抑制用组合物的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合的使用。优选上述癌细
胞增殖抑制用组合物抑制由大气污染物质促进的癌细胞增殖。
[0156]
在一实施方式中，本发明提供用于制造癌细胞浸润抑制用组合物的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合的使用。优选上述癌细胞浸润抑制用组合物抑制由大气污染物质促进的癌细胞浸润。
[0157]
在一实施方式中，本发明提供用于制造选自由cyp1a1基因、cyp1b1基因、及arnt基因组成的组中的至少一个基因的表达抑制用组合物的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合的使用。优选上述基因表达抑制用组合物抑制由大气污染物质促进的基因表达。
[0158]
在一实施方式中，本发明提供用于制造ros产生抑制用组合物的、糖(单糖或低聚糖)结合于肌醇而成的肌醇衍生物及生育酚磷酸酯或其盐的组合的使用。优选上述ros产生抑制用组合物抑制由大气污染物质促进的ros产生。
[0159]
实施例
[0160]
以下，通过实施例来对本发明进行说明，但本发明不限定于以下实施例。
[0161]
[肌醇衍生物的制造例]
[0162]
使肌肉肌醇与β
‑
环糊精在环糊精葡萄糖基转移酶的存在下反应，制作了葡萄糖或以葡萄糖作为单糖单元的低聚糖结合于肌肉肌醇而成的肌醇衍生物。通过液相色谱质谱分析法(lc
‑
ms)对所制作的肌醇衍生物进行了分析，结果，结合于肌肉肌醇的葡萄糖链的葡萄糖数为1个的分子的比例为12质量％，结合于肌肉肌醇的葡萄糖链的葡萄糖数为2个的分子的比例为30质量％，结合于肌肉肌醇的葡萄糖链的葡萄糖数为3个的分子的比例为9质量％，结合于肌肉肌醇的葡萄糖链的葡萄糖数为4个的分子的比例为12质量％，结合于肌肉肌醇的葡萄糖链的葡萄糖数为5个的分子的比例为2质量％。
[0163]
在以下的实验例中，使用了由本制造例制得的肌醇衍生物。
[0164]
[实验例1]
[0165]
(cyp1a1基因及cyp1b1基因的表达抑制效果)
[0166]
在下述条件下测定了由肌醇衍生物产生的、人正常表皮细胞(nhek，
クラボウ
社制)中的cyp1a1基因及cyp1b1基因的表达抑制效果。
[0167]
将nhek细胞以10000个/cm2的接种密度接种至
クラボウ
社制的humedia kg2培养基中，在37℃、5％co2的条件下培养了24小时。接着，以肌醇衍生物或肌肉肌醇的终浓度成为0.001质量％的方式，将肌醇衍生物的水溶液、或肌肉肌醇的水溶液添加至培养基中，或者将水(纯水)添加至培养基中，进一步培养了24小时。其后，以每100ml培养基为0.1ml的量添加大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，使得大气粉尘在培养基中的终浓度成为500μg/ml，进一步培养了48小时。其后，回收nhek细胞，使用nucleospin
tm rx(
タカラバイオ
社)而提取了总rna。使用primescript(注册商标)rt master mix(
タカラバイオ
社)，由所得的rna合成了cdna。以该cdna作为模板，通过定量实时pcr，使用对cyp1a1基因及cyp1b1基因具有特异性的引物(quantitect primer assays，
キアゲン
社制)，对cyp1a1基因及cyp1b1基因的表达量进行了定量。作为内标基因，对作为观察不到由添加大气粉尘导致的表达变动的持家基因的gapdh基因(使用的引物：perfect real time primer，
タカラ
社制)的表达量进行定量，以gapdh的表达量作为基准，将cyp1a1基因及cyp1b1基因的表达量标准化。将未添加大气粉尘的情况作为对照。
[0168]
将结果示于表1。在表1中，作为将未添加大气粉尘的对照中的各基因表达量设为1时的相对表达量而示出了大气粉尘添加组中的各基因的表达量。在肌醇衍生物添加组中，与水添加组及肌肉肌醇添加组相比，cyp1a1基因及cyp1b1基因中的任意基因的表达量均受到抑制。由该结果确认到，肌醇衍生物对由大气粉尘诱导的cyp1a1基因及cyp1b1基因的表达具有高的抑制效果。
[0169]
[表1]
[0170][0171]
[实验例2]
[0172]
(arnt基因的表达抑制效果)
[0173]
在下述条件下测定了由肌醇衍生物产生的、人正常表皮细胞(nhek，
クラボウ
社制)中的arnt基因的表达抑制效果。
[0174]
将nhek细胞以10000个/cm2的接种密度接种至
クラボウ
社制的humedia kg2培养基中，在37℃、5％co2的条件下培养了24小时。接着，以肌醇衍生物或肌肉肌醇的终浓度成为0.001质量％的方式，将肌醇衍生物的水溶液、或肌肉肌醇的水溶液添加至培养基中，或者将水(纯水)添加至培养基中，进一步培养了24小时。其后，以每100ml培养基为0.1ml的量添加大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，使得大气粉尘在培养基中的终浓度成为500μg/ml，进一步培养了48小时。其后，回收nhek细胞，使用nucleospin
tm rx(
タカラバイオ
社)而提取了总rna。使用primescript(注册商标)rt master mix(
タカラバイオ
社)，由所得的rna合成了cdna。以该cdna作为模板，通过定量实时pcr，使用对arnt基因具有特异性的引物(perfect real time primer，
タカラ
社制)，对arnt基因的表达量进行了定量。作为内标基因，对gapdh(使用的引物：perfect real time primer，
タカラ
社制)的表达量进行定量，以gapdh的表达量作为基准，将arnt基因的表达量标准化。将未添加大气粉尘的情况作为对照。
[0175]
将结果示于表2。在表2中，作为将未添加大气粉尘的对照中的arnt基因表达量设为1时的相对表达量而示出了大气粉尘添加组中的arnt基因的表达量。在肌醇衍生物添加组中，与水添加组及肌肉肌醇添加组相比，arnt基因的表达量受到抑制。由该结果确认到，肌醇衍生物对由大气粉尘诱导的arnt基因的表达具有高的抑制效果。
[0176]
[表2]
[0177][0178]
[实验例3]
[0179]
(ros的产生抑制效果(1))
[0180]
在下述条件下测定了由肌醇衍生物产生的、人正常表皮细胞(nhek，
クラボウ
社制)中的ros产生抑制效果。
[0181]
将nhek细胞以10000个/cm2的接种密度接种至
クラボウ
社制的humedia kg2培养基中，在37℃、5％co2的条件下培养了24小时。接着，以肌醇衍生物或肌肉肌醇的终浓度成为0.001质量％的方式，将肌醇衍生物的水溶液、或肌肉肌醇的水溶液添加至培养基中，或者将水(纯水)添加至培养基中，进一步培养了24小时。其后，以每100ml培养基为0.1ml的量添加大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，使得大气粉尘在培养基中的终浓度成为500μg/ml，进一步在与上述同样的条件下培养了48小时。其后，使用ros分析试剂盒(oz biosciences社制)测定了ros产生量。将除去培养基而得的细胞用磷酸缓冲液(pbs，和光纯药社制)洗涤后，将ros分析试剂盒所附带的二氯荧光素二乙酸盐(dichlorofluorescein diacetate)向各组的细胞中分别添加100μl，在37℃、遮光的条件下静置了30分钟。再次将细胞用pbs洗涤后，添加100μl的pbs，利用酶标仪i
‑
control(
テカン
社制)测定了激发波长485nm/吸收波长535nm处的荧光强度。将未添加大气粉尘的情况作为对照。
[0182]
将结果示于表3。在表3中，作为将未添加大气粉尘的对照中的荧光强度设为1时的相对量而示出了大气粉尘添加组中的ros产生量。在肌醇衍生物添加组中，与水添加组及肌肉肌醇添加组相比，ros产生量受到抑制。由该结果确认到，肌醇衍生物对由大气粉尘诱导的ros产生具有高的抑制效果。另一方面，在肌肉肌醇添加组中，与水添加组相比，未确认到对ros产生的抑制效果。
[0183]
[表3]
[0184][0185]
[实验例4]
[0186]
(癌细胞的增殖抑制效果(1))
[0187]
在下述条件下测定了由肌醇衍生物产生的、来源于lewis肺癌的细胞株(llc，jcrb细胞库)中的细胞增殖抑制效果。
[0188]
将llc细胞以50000个/cm2的接种密度接种至使hamf10培养基与l15培养基(均为sigma
‑
aldrich社制)按3：7(体积比)混合而得的培养基中，在37℃、5％co2的条件下培养了24小时。接着，以肌醇衍生物或肌肉肌醇的终浓度成为0.001质量％的方式，将肌醇衍生物的水溶液、或肌肉肌醇的水溶液添加至培养基中，或者将水(纯水)添加至培养基中，进一步培养了24小时。其后，以每100ml培养基为0.1ml的量添加大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，使得大气粉尘在培养基中的终浓度成为500μg/ml，在与上述同样的条件下进一步培养了48小时。其后，将培养基更换为含有10％(v/v)的
ナカライ
社的wst
‑
8的培养基，进一步培养3小时后，利用酶标仪i
‑
control(
テカン
社制)测定了450nm的波长处的吸光度。将未添加大气粉尘的情况作为对照。
[0189]
将结果示于表4。在表4中，作为将未添加大气粉尘的对照中的吸光度设为1时的相
对量而示出了大气粉尘添加组中的细胞增殖量。在肌醇衍生物添加组中，与水添加组及肌肉肌醇添加组相比，癌细胞的细胞增殖量受到抑制。由该结果确认到，肌醇衍生物对因大气粉尘而亢进的癌细胞的细胞增殖具有高的抑制效果。
[0190]
[表4]
[0191][0192]
[实验例5]
[0193]
(癌细胞的浸润抑制效果)
[0194]
在下述条件下测定了由肌醇衍生物产生的、来源于lewis肺癌的细胞株(llc，jcrb细胞库)中的细胞浸润抑制效果。试验使用了cellbiolabs,inc社制的cytoselect浸润分析试剂盒。
[0195]
使用使hamf10培养基与l15培养基(均为sigma
‑
aldrich社制)按3：7(体积比)混合而得的培养基，将llc细胞以成为100000个/ml的方式接种至附属于上述浸润分析试剂盒的浸润试验用腔室培养板(chamber plate)上，在37℃、5％co2的条件下培养了24小时。接着，以肌醇衍生物或肌肉肌醇的终浓度成为0.001质量％的方式，将肌醇衍生物的水溶液、或肌肉肌醇的水溶液添加至培养基中，或者将水(纯水)添加至培养基中，进一步培养了24小时。其后，以每100ml培养基为0.1ml的量添加大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，使得大气粉尘在培养基中的终浓度成为500μg/ml，进一步培养了6小时。接着，将包含大气粉尘的培养基除去，更换为新的培养基，以每100ml培养基为0.1ml的量添加大气粉尘(nist1648a)的dmso溶液，使得大气粉尘在培养基中的终浓度成为500μg/ml，进一步培养了18小时。其后，使用上述浸润分析试剂盒，对细胞进行染色，利用酶标仪i
‑
control(
テカン
社制)测定了激发波长480nm/吸收波长570nm处的荧光强度。将未添加大气粉尘的情况作为对照。
[0196]
将结果示于表5。在表5中，作为将未添加大气粉尘的对照中的荧光强度设为1时的相对量而示出了大气粉尘添加组中的细胞浸润。在肌醇衍生物添加组中，与水添加组及肌肉肌醇添加组相比，癌细胞的细胞浸润受到抑制。由该结果确认到，肌醇衍生物抑制因大气粉尘而亢进的癌细胞的细胞浸润。
[0197]
[表5]
[0198][0199]
[实验例6]
[0200]
(ros的产生抑制效果(2))
[0201]
在下述条件下测定了由肌醇衍生物及生育酚磷酸酯na产生的、人正常表皮细胞(nhek，
クラボウ
社制)中的ros产生抑制效果。下述的生育酚磷酸酯na使用了作为dl
‑
α
‑
生
育酚磷酸酯钠的tpna(注册商标)(昭和电工制)。
[0202]
将nhek细胞以10000个/cm2的接种密度接种至
クラボウ
社制的humedia kg2培养基中，在37℃、5％co2的条件下培养了24小时。接着，将生育酚磷酸酯na单独(培养基中的终浓度为10μm)、肌醇衍生物单独(培养基中的终浓度为0.001质量％)、或生育酚磷酸酯na(培养基中的终浓度为10μm)及肌醇衍生物(培养基中的终浓度为0.001质量％)的组合添加至培养基中。生育酚磷酸酯na及肌醇衍生物是以溶解于0.05％(v/v)乙醇水溶液而成为上述终浓度的方式添加至培养基中的。另外，还准备了将0.05％(v/v)乙醇水溶液添加至培养基中而得的产物。其后，在37℃、5％co2的条件下培养了24小时。其后，以每100ml培养基为0.1ml的量添加大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，使得大气粉尘在培养基中的终浓度成为500μg/ml，进一步培养了48小时。其后，使用ros分析试剂盒(oz biosciences社制)测定了ros产生量。将除去培养基而得的细胞用磷酸缓冲液(pbs，和光纯药社制)洗涤后，将ros分析试剂盒所附带的二氯荧光素二乙酸盐向各组的细胞中分别添加100μl，在37℃、遮光的条件下静置了30分钟。再次将细胞用pbs洗涤后，添加100μl的pbs，利用酶标仪i
‑
control(
テカン
社制)测定了激发波长485nm/吸收波长535nm处的荧光强度。将未添加大气粉尘的情况作为对照。
[0203]
将结果示于表6。在表6中，作为将未添加大气粉尘的对照中的荧光强度设为1时的相对量而示出了大气粉尘添加组中的ros产生量。在肌醇衍生物单独添加组、生育酚磷酸酯na单独添加组、以及肌醇衍生物+生育酚磷酸酯na添加组中的任意组中，与0.05％乙醇添加组相比，ros产生量均受到抑制。在肌醇衍生物+生育酚磷酸酯na添加组中，与肌醇衍生物单独添加组、及生育酚磷酸酯na单独添加组相比，ros的产生进一步受到抑制。由该结果确认到，肌醇衍生物通过与生育酚磷酸酯na一同使用，从而对由大气粉尘诱导的ros产生，获得协同性的抑制效果。
[0204]
[表6]
[0205][0206][0207]
[实验例7]
[0208]
(癌细胞增殖抑制效果(2))
[0209]
在下述条件下测定了由肌醇衍生物及生育酚磷酸酯na产生的、来源于lewis肺癌的细胞株(llc，jcrb细胞库)中的细胞增殖抑制效果。下述的生育酚磷酸酯na使用了作为dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯钠的tpna(注册商标)(昭和电工制)。
[0210]
将llc细胞以50000个/cm2的接种密度接种至使hamf10培养基与l15培养基(均为sigma
‑
aldrich社制)按3：7(体积比)混合而得的培养基中，在37℃、5％co2的条件下培养了24小时。接着，将生育酚磷酸酯na单独(培养基中的终浓度为10μm)、肌醇衍生物单独(培养
基中的终浓度为0.001质量％)、或生育酚磷酸酯na(培养基中的终浓度为10μm)及肌醇衍生物(培养基中的终浓度为0.001质量％)的组合添加至培养基中。生育酚磷酸酯na及肌醇衍生物是以溶解于0.05％(v/v)乙醇水溶液而成为上述终浓度的方式添加至培养基中的。另外，还准备了将0.05％(v/v)乙醇水溶液添加至培养基中而得的产物。其后，在37℃、5％co2的条件下培养了24小时。其后，以每100ml培养基为0.1ml的量添加大气粉尘(nist 1648a)的dmso溶液，使得大气粉尘在培养基中的终浓度成为500μg/ml，进一步培养了48小时。其后，将培养基更换为含有10％(v/v)的
ナカライ
社的wst
‑
8的培养基，进一步培养3小时后，利用酶标仪i
‑
control(
テカン
社制)测定了450nm的波长处的吸光度。将未添加大气粉尘的情况作为对照。
[0211]
将结果示于表7。在表7中，作为将未添加大气粉尘的对照中的吸光度设为1时的相对量而示出了大气粉尘添加组中的细胞增殖量。在肌醇衍生物单独添加组、生育酚磷酸酯na单独添加组、以及肌醇衍生物+生育酚磷酸酯na添加组中的任意组中，与0.05％乙醇添加组相比，细胞增殖量均受到抑制。在肌醇衍生物+生育酚磷酸酯na添加组中，与肌醇衍生物单独添加组、及生育酚磷酸酯na单独添加组相比，细胞增殖量进一步受到抑制。由该结果确认到，肌醇衍生物通过与生育酚磷酸酯na一同使用，从而协同性地抑制因大气粉尘而亢进的癌细胞的细胞增殖。
[0212]
[表7]
[0213][0214]
[处方例]
[0215]
以下示出癌细胞增殖抑制用组合物的处方例。作为以下的处方例中的肌醇衍生物，可例示在[肌醇衍生物的制造例]中制得的肌醇衍生物。另外，作为生育酚磷酸酯na，可例示作为dl
‑
α
‑
生育酚磷酸酯钠的tpna(注册商标)(昭和电工制)。
[0216]
(处方例1)
[0217]
将散布剂(喷雾)的处方例示于表8。
[0218]
[表8]
[0219][0220]
(处方例2)
[0221]
将散布剂(气雾)的处方例示于表9。
[0222]
[表9]
[0223][0224]
(处方例3)
[0225]
将散布剂(肌肤用喷雾)的处方例示于表10。
[0226]
[表10]
[0227][0228]
(处方例4)
[0229]
将滴鼻药的处方例示于表11。
[0230]
[表11]
[0231][0232][0233]
产业上的可利用性
[0234]
通过本发明，可提供能够抑制因大气污染物质而亢进的癌细胞的增殖的、癌细胞
增殖抑制剂及含有上述癌细胞增殖抑制剂的癌细胞增殖抑制用组合物。