蜜蜂疾病的预防的制作方法

蜜蜂疾病的预防
发明领域
1.本发明涉及通过将过氧化氢或过氧化物源组分添加到喂食给蜜蜂的材料中来预防和/或治疗蜜蜂中不期望的病原体或疾病的方法。将过氧化氢喂食给密封提供了通过交哺将过氧化氢传播到整个蜂巢中，从而用作预防蜜蜂疾病的手段。


背景技术：

2.存在许多威胁着蜜蜂和蜂蜜生产的疾病。这些疾病源于细菌、真菌、病毒、真菌、原生动物和螨虫等来源。
3.蜜蜂[意大利峰(apis mellifera)]通过协助多种作物的授粉，在农业中发挥着至关重要的作用。不幸的是，蜜蜂蜂群的健康和活力受到许多寄生虫和病原体的威胁，包括病毒、细菌、原生动物和螨虫。作为由数千个相关个体组成的相对同质社区，人们认为蜜蜂蜂群对疾病生物体的传播非常敏感。蜂群内的高密度个体、其密切的身体接触(通过偶然接触、交流和相互梳理)以及食物和腺体物质的交哺交换都为病原体传播提供了大量且多样的机会。此外，蜂箱具有相对恒定的温度和适度的湿度，为病原体的生长提供了理想的环境。
[0004]
根据美国农业部动植物卫生检验局2017年4月7日的蜜蜂病虫害调查，已多年记录了蜜蜂健康状况下降。近年来，冬季损失居高不下，全国范围内为22％至36％。这些损失率威胁到养蜂业的生存能力以及依赖蜜蜂授粉的作物生产和蜂蜜生产。
[0005]
除了害虫和寄生虫，蜜蜂还患有多种疾病：细菌疾病，例如，美洲幼虫腐臭病(american foulbrood)、欧洲幼虫腐臭病(european foulbrood)；真菌疾病，例如，白垩病(chalkbrood)；蜜蜂曲霉病(stonebrood)；蜜蜂微孢子虫病(nosema)；和病毒性疾病，例如，麻痹病毒属(cripaviridae)
‑
慢性蜜蜂麻痹病毒(chronic bee paralysis virus)、双反顺子病毒科(dicistroviridae)
‑
急性蜜蜂麻痹病毒(acute bee paralysis virus)、以色列急性麻痹病毒(israeli acute paralysis virus)、克什米尔蜜蜂病毒(kashmir bee virus)、黑皇后细胞病毒(black queen cell virus)；多云翅病毒(cloudy wing virus)；囊雏病毒(sacbrood virus)；传染性软腐病病毒科畸翅病毒(iflaviridae
‑
deformed wing virus)、角五病毒(kakugo virus)；虹彩病毒科无脊椎动物彩虹病毒6型(iridoviridae
‑
invertebrate iridescent virus type 6)、伴生豇豆病毒科烟草环斑病毒(secoviridae
‑
tobacco ringspot virus)；西奈湖病毒(lake sinai virus)。
[0006]
美洲幼虫腐臭病(afb)是蜜蜂中已知的最致命的幼虫疾病之一。该疾病是由孢子形成菌，幼虫芽孢杆菌(paenibacillus larvae)引起的。美洲幼虫腐臭病孢子(american foulbrood spore)极耐干燥，可在蜂蜜和养蜂设备中保持存活超过40年。每只死去的幼虫可能含有多达1亿个孢子。由于孢子可以保持存活数年，许多国家要求焚烧患有afb的蜂群。其他国家(例如美国、加拿大和阿根廷)允许使用抗生素来控制疾病。
[0007]
美国专利1,242,770中描述的喷雾组合物包含由水、盐、石炭酸、过氧化氢和硫酸制成的组合物，其直接喷洒在蜂箱中作为治疗欧洲幼虫腐臭病的补救措施。
[0008]
孢子虫病(nosemosis)是迄今为止最普遍和最具破坏性的成年蜜蜂疾病。感染是通过在喂食或梳理期间摄取孢子而获得的。蜜蜂微孢子(nosema apis)是一种微孢子虫，一种小型单细胞寄生虫，最近重新归类为主要影响蜜蜂的真菌。它会引起孢子虫病，也称为微孢子病(nosema)，这是最常见且最普遍的成年蜜蜂疾病。实际上，微孢子病非常普遍，以至于据推测每个蜂群都有一些受感染的蜜蜂。其通常用抗生素处理。
[0009]
用抗生素处理以预防或拯救蜂群免受疾病侵害显然是一个问题，因为这会在蜂箱中引入持久的化学残留物，而这些残留物继而可能最终进入蜂蜜和蜡框。在欧盟，蜜蜂被归类为生产食品的动物。因此，在授予上市许可之前，必须满足蜂蜜的最大残留限量(mrl)。因此，原则上，只有不会在蜂蜜导致残留的医药产品才能获得批准。
[0010]
这显然是一个贸易问题，因为一些国家禁止使用抗生素，而一些国家仅在特定情况下才批准使用抗生素。蜂蜡和蜂蜜中可能含有抗生素也非常令人不安。
[0011]
在不同国家使用的抗生素或化学治疗剂的非限制性实例是链霉素、四环素、磺胺类、红霉素、泰乐菌素、林可霉素、恩诺沙星、环丙沙星、甲氧苄啶、甲硝唑、氯霉素、硝基呋喃。[养蜂中的抗菌剂(antimicrobials in beekeeping)
–
w.reybroeck、e.daeseleire、h.de brabander、l.herman，兽医微生物学(veterinary microbiology)158(2012)1
‑
11]。
[0012]
与使用抗生素控制蜜蜂疾病相关的风险是感染的持续存在、疾病的复发和蜂蜜污染。因此，有利的是能够使用不会留下任何化学残留物的产品来对抗细菌、病毒、真菌、原生动物和螨虫。本发明涉及使用氧化剂(例如过氧化氢)来提供处理的卫生效果和零残留方面。
[0013]
在现有技术中提出并公开了使用非抗生素产品对蜂箱和蜂箱设备进行消毒。美国专利公开号2009/0104288公开了啤酒花衍生物(hop derivative)处理蜂箱的用途。美国专利6,096,350公开了通过施加有效量的包含质子酸和亚氯酸根离子的水性组合物来处理蜜蜂。美国专利公开号2009/01182143公开了通过给蜜蜂喂食有效量的核酸试剂来增加蜜蜂对疾病的耐受性，所述核酸试剂包含下调蜜蜂病原体基因产物表达的核酸序列。尽管所有这些方法都有优点，但它们要么复杂、昂贵，要么难以实施。此外，添加到蜂箱中的溶液的残留物预计在处理后仍存在。
[0014]
污染物可以在蜜蜂从植物(plant)中采集花粉、花蜜和水后被输送到蜂箱中，接触蜂产品的原料，所述植物已由农民、农药专家、园丁等喷洒农药(或通过种子处理等其他方式添加到植物(vegetation)中，以控制各种可能损害农作物的农业害虫。
[0015]
然而，最重要的污染物可能是用于控制蜜蜂害虫的物质。存在许多蜜蜂害虫、寄生虫和疾病：瓦螨(varroa mites)[狄斯瓦螨(varroa destructor)或雅氏瓦螨(varroa jacobsoni)]、武氏盾螨(气管螨)(acarine(tracheal)mites)[武氏蜂盾螨(acarapis woodi)]、小蜂房甲虫(small hive beetles)[小蜂窝甲虫(aethina tumida)]、蜡蛾(wax moths)[大蜡螟(galleria mellonella)]、和热厉螨属(tropilaelaps)[小蜂螨(tropilaelaps clareae)和梅氏热厉螨(t.mercedesae)]、蜜蜂微孢子虫病(nosema disease)、美洲幼虫腐臭病和欧洲幼虫腐臭病等。
[0016]
目前，世界范围内最重要的害虫之一是狄斯瓦螨(varroa destructor)。狄斯瓦螨(varroa destructor)[瓦螨(varroa mite)]是一种外部寄生螨，其会攻击蜜蜂[中华蜜蜂(apis cerana)和意大利蜂(apis mellifera)]。由螨虫引起的疾病称为瓦螨病
(varroosis)。用于控制狄斯瓦螨(varroa destructor)的杀螨剂是主要的污染源，因其通常涉及缓释产品，并且必须在蜂箱中存在长达45天的时间才能生效并防止再次感染[蜂蜡基础中所选杀螨剂对蜜蜂蜂群存活的浓度影响(the concentration effect of selected acaricides present in beeswax foundation on the survival of apis mellifera colonies)，s.medici、a.castro、e.sralo、j.marioli、m.eguaras，《养蜂研究杂志》(journal of apicultural research)51(2)：164
‑
168
·
2012年4月]。
[0017]
蜜蜂(和其他传粉媒介)无意和有意接触农药会导致在蜂箱、蜜蜂、花粉、蜂蜜，以及尤其是蜂蜡(蜂巢蜡(brood nest wax)和蜡片(beeswax foundation))中检测到农药残留。这些农药及其在蜂箱产品中残留物的作用可能在蜂群崩溃综合症(ccd)和过去几年观察到的其他蜂群问题里发挥了作用[农药和蜜蜂毒性(pesticides and honey bee toxicity)——美国，r.m.johnson、m.d.ellis、c.a.mullin、m.frazier，《养蜂学》(apidologie)，41，第3期，(2010)，312
‑
331]。由于世界范围内的许多农作物都是由西方蜜蜂授粉的，因此蜂群崩溃综合症会造成重大的经济损失。尽管蜜蜂数量减少的原因多种多样并且不总是很清楚，但蜜蜂暴露于农药会产生严重影响。
[0018]
长期以来，人们一直怀疑长期暴露于农药是蜜蜂数量减少的潜在原因。在最近发表的研究[北美养蜂场的杀螨剂和农药含量高：对蜜蜂健康的影响(high levels of miticides and agrochemicals in north america apiaries:implications for honey bee health)，c.mullin、m.frazier、j.frazier、s.ashcraft、r.simonds、d.vanengelsdorp、j.pettis，plos one,2010年3月，第5卷，第3期，e9754]，发现采样的大多数蜂巢蜡和巢础蜡(comb and foundation wax)被87种不同的农药和代谢物污染，单个样品中有多达39种不同的检测，平均每个有8种不同的农药残留物。最常见的检测是蜂巢内杀螨剂[氟胺氰菊酯和蝇毒磷(coumaphos)(两种非常常见的杀螨剂)]、有机磷酸酯农药[毒死蜱(chlorpyriphos)和百菌清(chlorothalonil)，一种广泛使用的杀菌剂]。
[0019]
蜂箱中使用的典型杀螨剂市售产品的实例是氟胺氰菊酯(抗瓦螨条)、双甲脒或蝇毒磷(蜂箱防虫条(beehive pest control strip))。此类化学品的完整清单可以在环境保护署(epa)注册的批准专门用于蜂箱的农药产品清单和批准用于农作物不同生命阶段的农药清单中找到。
[0020]
如本文所用，术语“农药”(pesticide)包括以下所有内容：除草剂(herbicides)、杀昆虫剂(insecticides)、昆虫生长调节剂(insect growth regulator)、杀线虫剂(nematicide)、白蚁防治剂(termiticide)、杀软体动物剂(molluscicide)、杀鱼剂(piscicide)、杀鸟剂(avicide)、杀鼠剂(rodenticide)、杀肉食动物剂(predacide)、杀菌剂(bactericide)、驱虫剂(insect repellent)、驱动物剂(animal repellent)、抗微生物剂(antimicrobial)、杀真菌剂(fungicide)、消毒剂(disinfectant)[抗菌剂(antimicrobials)]和消毒杀菌剂(sanitizer)。
[0021]
大多数农药、杀真菌剂和杀螨剂是亲脂性或脂溶性的，非挥发性且持久的，因此容易在蜂蜡中积累。几乎连续回收蜂蜡是养蜂业的常见做法。因此，农药会在几年内累积，为蜜蜂和蜂群创造不健康的有毒环境。此外，农药在蜡加工期间所用的蜡熔化温度下通常是抗降解的。已经显示出，当亲脂性污染物以相对较高的浓度存在时，包括使蜂蜡在沸水中熔
化的纯化过程基本不会改变蜂蜡中亲脂性污染物的初始含量[蜂蜡中有机污染物的残留(residues of organic contaminants in beeswax)，j.j.jimenez、j.l.bernal、m.j.del nozal、m.t.martin，eur.j.lipid sci.technol.107(2005)896
‑
902]。


技术实现要素：

[0022]
本发明中提出的新颖构思涉及使用交哺来散播能够处理、减少或限制不期望病原体在蜂群中传播的过氧化物化学品。例如，发现在糖溶液存在下，过氧化氢是稳定的。在喂食蜜蜂的糖溶液中加入过氧化氢有助于在整个蜂群内传播过氧化氢，并起到蜜蜂疾病预防作用。
[0023]
方面1：一种用于处理、预防或减少蜜蜂和蜂箱中病原体传染的方法，所述方法包括给蜜蜂喂食组合物、基本由给蜜蜂喂食组合物组成、或由给蜜蜂喂食组合物组成，所述组合物包含至少一种氧化剂、基本由至少一种氧化剂组成、或由至少一种氧化剂组成。
[0024]
方面2：如方面1所述的方法，其中，所述组合物包含至少一种过氧化物作为氧化剂。
[0025]
方面3：如方面1
‑
2中任一项所述的方法，其中，所述组合物包含选自下组的至少一种过氧化物、基本由选自下组的至少一种过氧化物组成、或由选自下组的至少一种过氧化物组成：过氧化氢、过羧酸、过碳酸盐/酯、脲过氧化氢、过硼酸盐化合物以及它们的组合。
[0026]
方面4：如方面1至3所述的方法，其中，过氧化物组合物包含约0.001重量％至约50重量％、约0.01重量％至约5重量％、或约0.1重量％至约3重量％的过氧化物。
[0027]
方面5：如方面1至4所述的方法，其中，所述组合物另外包含至少一种过氧化物活化剂。
[0028]
方面6：如方面5所述的方法，其中，所述至少一种过氧化物活化剂包含选自下组的至少一种过氧化物活化剂、基本由选自下组的至少一种过氧化物活化剂组成、或由选自下组的至少一种过氧化物活化剂组成：含金属过氧化合物活化剂、碳酸盐以及它们的组合。
[0029]
方面7：如方面5至6中任一项所述的方法，其中，组合物包含约0.001重量％至约20重量％、或约0.001重量％至约5重量％的过氧化物活化剂。
[0030]
方面8：如方面1至7中任一项所述的方法，其中，所述组合物还包含至少一种增粘试剂和/或凝胶化试剂。
[0031]
方面9：如方面1至8中任一项所述的方法，其中，组合物包含总计约0.1重量％至约10.0重量％、或约0.1重量％至约5.0重量％的增粘试剂和/或凝胶化试剂。
[0032]
方面10：如方面1至9中任一项所述的方法，其中，病原体选自下组：美洲幼虫腐臭病(american foulbrood，afb)、白垩病(chalkbrood)和蜜蜂微孢子虫病(nosema)。
[0033]
方面11：如方面1至10中任一项所述的方法，其中，所述病原体选自下组：美洲幼虫腐臭病(afb)和欧洲幼虫腐臭病(efb)；真菌病害，所述真菌病害选自白垩病(chalkbrood)、蜜蜂曲霉病(stonebrood)和蜜蜂微孢子虫病(nosema)；和病毒性疾病，所述病毒性疾病选自麻痹病毒属(cripaviridae)、慢性蜜蜂麻痹病毒(chronic bee paralysis virus)、双反顺子病毒科(dicistroviridae)、急性蜜蜂麻痹病毒(acute bee paralysis virus)、以色列急性麻痹病毒(israeli acute paralysis virus)、克什米尔蜜蜂病毒(kashmir bee virus)、黑皇后细胞病毒(black queen cell virus)、多云翅病毒(cloudy wing virus)、
囊雏病毒(sacbrood virus)；传染性软腐病病毒科畸翅病毒(iflaviridae
‑
deformed wing virus)、角五病毒(kakugo virus)；虹彩病毒科无脊椎动物虹彩病毒6型(iridoviridae
‑
invertebrate iridescent virus type 6)、伴生豇豆病毒科烟草环斑病毒(secoviridae
‑
tobacco ringspot virus)和西奈湖病毒(lake sinai virus)。
[0034]
方面12：如方面1至10中任一项所述的方法，其中，病原体是选自下组的细菌：蜂房蜜蜂球菌(melissococcus plutonius)、幼虫芽孢杆菌(paenibacillus larvae)、蜂螺旋原体(spiroplasma apis)、蜜蜂螺原体(s.melliferum)、铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、欧迪斯无色杆菌(achromobacter euridice)、粪肠球菌(enterococcus faecalis)、蜂房芽胞杆菌(paenibacillus alvei)和侧孢短芽孢杆菌(brevibacillus laterosporus)。
[0035]
方面13：如方面1至10中任一项所述的方法，其中，病原体是选自下组的真菌：蜜蜂微孢子(nosema apis)、东方蜜蜂微孢子(nosema ceranae)、蜜蜂球囊菌(ascosphaera apis)和曲霉属(aspergillus spp.)。
[0036]
方面14：如方面1至9中任一项所述的方法，其中，导致疾病的病原体是病毒。
[0037]
方面15：如方面1至10中任一项所述的方法，其中，病原体是选自下组的病毒：以色列急性麻痹病毒(israeli acute paralysis virus)、急性蜜蜂麻痹病毒(acute bee paralysis virus)、克什米尔蜜蜂病毒(kashmir bee virus)、黑皇后细胞病毒(black queen cell virus)、畸翅病毒(deformed wing virus)/角五病毒(kakugo virus)、狄斯瓦螨病毒(varroa destructor virus)、囊雏病毒(sacbrood virus)、蜜蜂慢麻痹病毒(slow bee paralysis virus)、慢性蜜蜂麻痹病毒(chronic bee paralysis virus)和西奈湖病毒(lake sinai virus)。
[0038]
方面16：如方面1至10中任一项所述的方法，其中，病原体选自下组：细菌孢子、真菌孢子或酵母。
[0039]
方面17：如方面1至10中任一项所述的方法，其中，病原体选自下组：瓦螨(varroa mites)[狄斯瓦螨(varroa destructor)或雅氏瓦螨(varroa jacobsoni)]、蜱螨(气管螨)(acarine(tracheal)mites)[武氏蜂盾螨(acarapis woodi)]、小蜂房甲虫(small hive beetles)[小蜂窝甲虫(aethina tumida)]、蜡蛾(wax moths)[大蜡螟(galleria mellonella)]和热厉螨属(tropilaelaps)[小蜂螨(tropilaelaps clareae)和梅氏热厉螨(t.mercedesae)]。
[0040]
方面18：如方面1至17中任一项所述的方法，其中，所述组合物是液体形式的蜜蜂可摄取组合物。
[0041]
方面19：如方面1至17中任一项所述的方法，其中，所述组合物是固体形式的蜜蜂可摄取组合物。
[0042]
方面20：如方面1至19中任一项所述的方法，其中，所述组合物含有蛋白质。
[0043]
方面21：如方面1至20中任一项所述的方法，其中，所述组合物基于花粉和/或大豆馅饼。
[0044]
方面22：如方面1至21中任一项所述的方法，其中，所述组合物是基于蔗糖溶液的蜜蜂可摄取组合物。
[0045]
方面23：如方面1至22中任一项所述的方法，其中，所述组合物是基于玉米糖浆溶
液的蜜蜂可摄取组合物。
[0046]
方面24：如方面1至23中任一项所述的方法，其中，所述组合物是蜜蜂可摄取组合物，所述蜜蜂可摄取组合物还包含碳水化合物或糖补充剂。
[0047]
方面25：如方面1至24中任一项所述的方法，其中，组合物通过选自下组的装置给予蜜蜂：包含该组合物的条、控释条、片剂、储器、聚合物盘、蒸发装置、纤维、管、聚合物块、膜、丸粒和微毛细管。
[0048]
本发明某些实施方式的详细说明
[0049]
可以通过在用于蜜蜂补充喂食的组合物中引入该化合物将过氧化氢分配到蜂巢中，这是常见的做法。可以给蜜蜂喂食各种食物，以补充花粉或蜂蜜供应不足。在花粉和花蜜(nectar)可用之前的早春或一年中这些材料短缺的其他时间，补充喂食可能有助于蜂群生存或使其数量增加和生产力更高。在实践中，养蜂人给蜜蜂喂食补充食物，以发展并维持具有最佳种群的蜂群。过氧化氢化合物以所需浓度加入到待喂食给蜜蜂的组合物中。所述组合物可以是液体、凝胶或固体。作为替代方案，通过从多种形式或装置分配可以将组合物给予蜜蜂。所述装置可以包括：条、控释条、片剂、储器、聚合物盘、蒸发装置、纤维、管、聚合物块、膜、丸粒和微毛细管。
[0050]
蜜蜂的常见食物是水和糖的混合物，即蔗糖溶液。典型的水/糖混合物包含以重量测量的一份糖与一份水的比例(称为1:1)也可以使用两份糖与一份水的浓稠糖浆(称为2:1)。通常，1:1糖浆用于补充蜂蜜储存，刺激蜂群育雏，特别是在春季促进蜂巢巢础拉制(drawing)。当蜂巢中的蜂蜜储存量不足时，使用更浓的糖浆来提供食物。按重量或体积测量糖和水完全可以，因为糖浓度不需要100％准确。类似的蜜蜂食品溶液可以基于玉米糖浆。
[0051]
本发明的组合物也可以是添加或不添加蛋白质、碳水化合物或糖补充剂的固体蜜蜂食物如花粉和/或大豆馅饼(soy patties)的组分。
[0052]
本发明使用的组合物包括至少一种氧化剂，其可以是能够对任何细菌、病毒、真菌和原生动物传染进行处理的任何有机或无机化合物。氧化剂可以选自各种过氧化物。例如，无机和有机过氧化物例如但不限于：过氧化氢或产生过氧化物的化合物，例如过羧酸(例如过乙酸)、过碳酸盐/酯、脲过氧化氢、过硼酸盐化合物，以及类似化合物和/或这些化合物的组合。在食品、优选蔗糖溶液中，组合物中的氧化剂的浓度可以为0.001％至50％，或0.01％至5％，或0.1％至3％。
[0053]
可以使用至少一种增粘试剂使组合物胶凝化或以其他方式增加粘度以便更好地处理组合物，所述增粘试剂可以是无机增粘试剂或有机增粘试剂或增粘试剂的组合。合适的增粘试剂的实例包括：例如，改性二氧化硅(例如，由赢创公司(evonik)以商品名和销售的二氧化硅)、高分子量交联聚丙烯酸聚合物(例如，由路博润公司(lubrizol)以商品名销售的聚合物)、黄原胶(例如，由cp kelco公司以商品名销售的黄原胶)和其他此类胶(瓜尔胶、藻酸盐等)、多元醇和聚醚二醇化合物(例如甘油、聚乙二醇、聚丙二醇)以及与组合物的其他组分相容并且优选对蜜蜂无毒且环境友好的(例如，非持久性和/或可生物降解的)所有其他增粘试剂或胶凝化试剂。在本发明的某些实施方式中，增粘试剂和/或胶凝化试剂用作触变剂。在本发明的某些实施方式中，组合物中的增粘试剂或胶凝化试剂浓度为0.01重量％至20重量％或0.1重量％至5重
量％。
[0054]
组合和配制组合物的上述组分的顺序和方式被认为没有特别限制。本领域已知的方法和技术可以根据选择使用的组分的类型和相对量适当地进行调整和修改。在某些实施方式中，组合物可以是单组分制剂，具有足够的物理和化学稳定性以允许在正常条件下(例如，在室温下在桶、罐或其他容器中)长时间储存。然后可以根据本文所述的任何程序直接使用此类制剂。在其它实施方式中，组合物可以作为多组分制剂提供，当组合物的某些组分彼此反应并且希望在将组合物喂食给蜜蜂之前避免这种反应时尤为如此。例如，在组合物包含过氧化物和过氧化物活化剂的情况下，过氧化物活化剂可能不合适地与过氧化物反过早应或以其他方式转化过氧化物，以使组合物失去效力。在这种情况下，组合物可包含分开储存的两部分，其中，一部分包含过氧化物(和组合物中除过氧化物活化剂之外的任选的一种或多种组分)，第二部分包含过氧化物活化剂(和组合物中除过氧化物以外的任选的一种或多种组分)。然后，将两部分以所需比例组合以获得组合物，或者在使用前不久进行组合。
[0055]
该组合物可以通过用于氧化剂的活化剂的存在被激活，所述活化剂即帮助催化或以其他方式促进针对任何细菌、病毒、真菌、原生动物和螨虫传染进行消毒的物质。例如，活化剂可以将氧化剂转化为更具反应性的物质，例如，能够更好地对任何细菌、病毒、真菌、原生动物和螨虫传染进行消毒的物质。在本发明的某些实施方式中，配制到组合物中的氧化剂可被视为氧化剂前体，其本身具有很小的影响或没有影响，但通过与本文所述的活化剂的相互作用而原位转化为反应性氧化剂。可以实施将活化剂后添加至根据本发明的组合物。活化剂可以在使用组合物前添加到组合物中。活化剂可以是例如含金属的物质，例如，氧化铁(芬顿反应)、碳酸盐化合物(例如，碳酸的盐，如碳酸氢钾或碳酸氢钠)、更复杂的活化剂，例如卡内基梅隆大学(carnegie mellon)开发的fe
‑
taml(四酰氨基大环配体)或已知在各种条件下(包括使用紫外线)诱导自由基化合物形成的任何活化剂或活化剂组合。例如，组合物中活化剂的浓度可以为0.001重量％至20重量％或0.001重量％至5重量％。
[0056]
在本说明书中，已经以能够写出清楚和简明的说明的方式对实施方式进行了描述，但是旨在于并且应当理解，可以各种方式对实施方式进行组合或分离而不背离本发明。例如，应当理解，本文描述的所有优选特征适用于本文描述的本发明的所有方面。
[0057]
在一些实施方式中，本文中的发明可以解释为没有包括任何对组合物或使用组合物的方法的基本特性和新颖特性没有实质性影响的元素或方法步骤。另外，在一些实施方式中，本发明可以被解释为没有包括本文中未指定的任意元素或方法步骤。
实施例
[0058]
实施例1：过氧化氢在糖溶液中的稳定性
[0059]
过氧化氢[peroxal 50％clg(购自阿科玛公司(arkema inc))用于在50％(w/w)糖(蔗糖)溶液中产生浓度为0.1％和1.0％的过氧化氢。实验在环境温度下进行。在7周后未观察到过氧化氢的降解。
[0060]
表1：糖溶液中过氧化氢稳定性
[0061][0062]
表1中的数据显示出，过氧化氢在可用作蜜蜂食物的糖溶液中是稳定的。
[0063]
实施例2：测定所配制过氧化氢对蜜蜂[意大利峰(apis mellifera)]的口服毒性
[0064]
对一周龄和两周龄的蜜蜂[意大利峰(apis mellifera)]工蜂喂食一系列以2摩尔(m)蔗糖稀释的过氧化氢(hp)溶液，测定所配制的hp的24和48小时口服致死浓度(lc50)。
[0065]
使用35％食品级过氧化氢、分子级蔗糖(美国西格玛奥尔德里奇公司(sigma aldrich))和分子级水(美国西格玛奥尔德里奇公司)以2摩尔(m)蔗糖制备4.7、3.7、2.7、1.7、0.7m hp的五种过氧化氢(hp)溶液和0.00m hp 2m蔗糖溶液。
[0066]
将约200只蜜蜂收集到几个木笼中，提供任意不含hp的2m蔗糖溶液、水和补充花粉馅饼(supplemented pollen patty)。在将新出现的蜜蜂放入笼中后第7天和第14天开始实验。
[0067]
表2提供了未经调整的死亡率数据(平均值
±
标准误差(se))。
[0068]
表2.喂食过氧化氢
‑
2m蔗糖溶液24或48小时后，一周龄和两周龄的蜜蜂的平均(
±
标准误差)死亡率。
[0069][0070]
表3给出了使用log
10
浓度的probit分析预测的各评估点的lc
50
值、由预测值计算的lc
50
过氧化氢浓度和相应的过氧化氢百分比(对于h2o2，使用mw＝34g/mol，和对于2m蔗糖溶液，使用ρ＝1.25g/ml)。
[0071]
一周龄(z＝3.41,p<0.001)和两周龄蜜蜂(z＝2.57,p＝0.010)的24小时死亡率均显著低于48小时死亡率(表2)。然而，在24或48小时评估点，一周龄和两周龄蜜蜂的死亡率没有显著差异。
[0072]
一周龄和两周龄蜜蜂的24小时lc
50
值大于48小时值(表3)。这可能是因为即使在开始试验前饿6小时后，其产物(蜜蜂的社会胃)中仍残留不含hp的蔗糖溶液。蜜蜂工蜂具有高新陈代谢率，而且也有能力在同巢伙伴(nest mate)中分享食物(通过交哺)。然而，在48小时后，工蜂产物和蜜蜂所有不含hp的蔗糖溶液都耗尽了，然后直接喂食含hp的蔗糖溶液。
[0073]
表3.喂食过氧化氢
‑
2m蔗糖溶液24或48小时后，一周龄和两周龄的蜜蜂50％死亡率(lc
50
)的过氧化氢平均(
±
标准误差)log
10
致死浓度，以过氧化氢摩尔计的预测的lc
50
值是通过取log
10
数据的倒数来计算的。
[0074][0075]
在24小时和48小时评估点，两周龄蜜蜂的lc
50
值略低于一周龄蜜蜂的lc
50
值(表2)。这可能是由于随着蜜蜂年龄增长，蔗糖消耗量增加。在萌发后(post
‑
emergence)的第一周，年轻的成年蜜蜂(保姆蜂)消耗的蛋白质多于碳水化合物，但此后蔗糖消耗迅速增加。
[0076]
无法从数据中确定最大无影响浓度(no observed effect concentration，noec)；在所有测试浓度下观察到的蜜蜂死亡率均显著高于对照组蜜蜂死亡率(威尔科克森(wilcoxon)多重比较法：χ2＝113.5；df＝5；p<0.001)。在此之后，ec5通过以假定截距项限制为零(浓度)和0.05的“y”值，求解“x”的立方(s形)模型来计算。表4中提供了模型溶液和所计算的ec5(以h2o2％表示)。
[0077]
表4.用于ecx估算的立方模型的溶液。x3(粗体)的值是ec5浓度(以摩尔过氧化氢计)的最佳估算值，用于计算以h2o2％计的ec5。
[0078][0079]
尽管本文参考具体实施方式对本发明进行了说明和描述，但是本发明并非旨在对所示细节进行限制。然而，在不背离本发明的情况下，可以在方面的范围和等同范围内对细节进行各种修改。