自组装肽在预防和治疗空洞性龋损中的应用的制作方法

自组装肽在预防和治疗空洞性龋损中的应用
1.本发明属于龋齿治疗领域，特别是微创或无创性龋齿治疗领域。它涉及一种组合物和一种试剂盒，其包含自组装肽(例如自组装肽p11-4或p11-8)、牙科剂(即牙科封闭剂，例如粘固粉基(cement-based)封闭剂(例如玻璃离子粘固粉基封闭剂或树脂基封闭剂))、氟化物清漆、粘合剂或其他牙科修复材料。本发明还涉及一种组合物和试剂盒，包括自组装肽和牙科剂，用于治疗龋损，优选为空洞性龋损。龋损可以是原发性龋或继发龋。原发性龋与先前的修复无关。相比之下，继发龋被定义为与牙齿修复或封闭剂有关的病变。在本发明的背景下，所述自组装肽阻止了用于治疗空洞性龋齿的牙科剂失效后的继发龋，尤其在修复体与牙科剂和牙齿之间的界面失效的情况下。本发明所述的组合物和试剂盒也可以用于盖髓。
2.蛀牙，又称龋齿，是世界上最常见的细菌感染之一。它是由细菌代谢产物，主要是细菌在分解牙齿表面或生物膜中的食物碎片或糖类时产生的酸，导致的牙齿材料的破坏。这导致去矿化作用和再矿化作用过程之间不平衡。坚硬的牙齿结构，即牙釉质、牙本质和牙骨质，由于持续的去矿化作用被损坏，导致龋损，并最终出现龋洞。新龋损的最早标志是牙齿表面出现粉笔状白斑，即所谓的白斑病损(也特指早期龋损)，即亚表面病损。随着去矿化的进行，病变的矿化表面(部分)塌陷和破裂，并在牙齿上出现微腔、空洞、洞。这被称为(部分)空洞性龋损或空洞性龋损。
3.已有记载，龋齿的预防方法包括局部氟化物治疗和应用牙科封闭剂，又称窝沟封闭剂。封闭剂的应用涉及将封闭剂引入易龋牙齿的凹坑和/或裂隙中。目前市面上封闭剂材料的主要类型有树脂基封闭剂和玻璃离子粘固粉基封闭剂(naaman等人,2017，dent j.，5，34)。释氟性能被认为是玻璃离子粘固粉的优点之一(sidhu and nicholson,2016,j funct biomater.,7,16)，从而将氟化物的再矿化作用和封闭剂对凹坑和裂缝的保护作用进行了结合。
4.迄今为止，龋齿的治疗通常取决于龋损是空洞的还是非空洞的。无创的方法被建议用于非空洞性龋损，如亚表面病损。例如，通过局部使用氟化物来尝试再矿化。
5.此外，釉质基质衍生物或自组装肽已被证明对亚表面龋损的再矿化有效(ruan等人,2013.acta biomater.9(7):7289-97；ruan等人,2014.j vis exp.10(89),doi 10.379151606；schmidlin等人,2016,j appl oral sci.24(1),31-36；alkilzy等人,2018,adv dent res.29(1),42-47；brunton等人,2013,br dent j,215:e6；kind等人,2017,j dent res.,96(7),790-797；kirkham等人,2007,j dent res.,86,426-430)。在wo2014/027012 a1中，记载了一种将自组装肽靶向递送至牙亚表面病变，目的是使龋损再矿化的方法。alkilzy等人(2018年，如上)发现与单独应用氟化物相比，将自组装肽p11-4与氟化物联合应用对早期龋损有附加效应。
6.在wo2017/123986 a1、us 2014/0186273a1和us2017/0007737a1中，在牙本质过敏、牙齿美白或漂白以及龋齿治疗背景下，描述了用于牙齿修复的釉原蛋白基生物矿化方法。
7.在wo2017/168183 a1中，记载了一种基于弹性蛋白样肽的仿生矿化磷灰石结构用
作牙科修复材料，特别是用于牙釉质的重建，以及用于治疗牙科疾病如龋齿。
8.此外，已经开发了基于酪蛋白的釉质再矿化和预防和/或治疗龋齿或牙齿腐蚀的策略(例如wo 00/06108 a1和wo 2010/042754a2)。酪蛋白磷酸肽无定形磷酸钙复合物(cpp-acp)和cpp稳定的无定形氟化磷酸钙复合物与玻璃离子粘固粉组合作为再矿化牙齿修复材料已被记载在如wo 02/094204 a1中。一些研究还表明，当将封闭剂应用于非空洞性龋损时，龋齿进展会减慢或停止(griffin s.o.等人,2008,j dent res.,87(2),169-174)。
9.一旦龋损形成空洞并在牙齿上出现洞，迄今为止常用的治疗是侵入性的，因为对于非空洞性龋损在此阶段再矿化要困难得多。通常使用如牙科手机(“钻头”)去除腐烂的材料。或者，可以使用激光、牙科勺或化学机械系统去除龋齿。
10.在去除(即挖掘)龋牙釉质后，缺失的牙齿结构需要使用牙科修复材料(例如封闭剂、汞合金、牙科复合材料、瓷或金)进行牙体修复。这种常规的空洞性龋齿的侵入性治疗有几个缺点。
11.首先，因为在去除腐烂的齿科材料的过程中也会去除健康的牙齿材料，天然牙齿结构受到严重破坏。在去除龋齿材料的过程通常伴随疼痛和焦虑，通常不得不通过使用局部麻醉剂来缓解。此外，由于去除了龋齿牙釉质，相邻的牙齿结构会受到影响。
12.此外，修复体，尤其是使用封闭剂或复合材料的修复体，经常会失效，最终不得不重新填充，导致牙齿结构进一步丧失。失效可能是由牙齿和修复体之间间隙的存在或形成和/或封闭剂部分或完全脱落造成的。这种失效通常与继发龋(也称为复发性龋齿或cars(与修复体和封闭剂相邻的龋齿))有关。填充物的位置是进一步腐烂的易损部位(burke和lucarotti,the ultimate guide to restoration longevity in england andwales.part 3:glass ionomer restorations-time to next intervention and to extraction of the restored tooth.br dent j.224(10):789-800；nedeljkovic等人,2015,dental materials 31(11):e247-e277)。
13.因此，需要改进对空洞性龋齿的治疗，至少克服现有技术方法的一些缺点，特别是预防继发龋的发展。本发明可以解决这个问题，特别是权利要求的主题。本发明的发明者惊人地发现，自组装肽可以与常规牙科剂即牙科封闭剂(如玻璃离子粘固粉)、氟化物清漆或粘合剂有效地结合使用，以利于空洞性龋损的治疗。
14.因此，本发明涉及一种组合物，包括(a)自组装肽和(b)选自牙科修复材料例如牙科封闭剂、氟化物清漆和粘结剂的牙科剂，其中优选地，所述牙科剂为牙科封闭剂，例如，粘固粉基封闭剂，更优选为玻璃离子粘固粉基封闭剂。所述组合物可以是药物组合物。
15.优选地，在本发明的组合物中，所述自组装肽和牙科剂是均匀混合的形式。“均匀混合”是指该组合物是其成分的一致性混合物。因此，本发明所述的组合物优选为，在任何给定样本中具有基本上相同比例的其成分的组合物。
16.此外，本发明提供了一种试剂盒，包括(a)自组装肽和(b)牙科剂，其中所述牙科剂为玻璃离子基封闭剂。所述试剂盒可以是药物试剂盒。
17.所述试剂盒以分开的形式包含本发明所述组合物的成分，例如在分开的小瓶、烧瓶、注射器、涂抹器或其他容器中。在本发明所述的试剂盒中，自组装肽可包含在组合物中，所述组合物可进一步包含溶剂如水和/或缓冲剂。非极性或极性有机溶剂也可以使用。在本发明的背景下，除非另有说明，否则“一个”(“a”)被解释为表示“一个或多个”。所述试剂盒
还可以包含其他成分，例如多于一种的本发明所定义的牙科剂。例如，除了所述自组装肽之外，该试剂盒还可以包含复合材料和适合于粘合该复合材料的粘合剂。其他可选的成分为，例如能够提供钙、氟和/或磷酸盐的蚀刻剂和/或缓冲剂。
18.本发明所述试剂盒可以包括(a)包括自组装肽的组合物，以及(b)至少一种本发明所定义的牙科剂，其中所述组合物与牙科剂以分开的形式。可选地，所述自组装肽和所述溶剂如水可以是分开的形式，例如，在应用装置的分开的隔室中(例如可商购获得的repair，credentisag，windisch，ch)。如wo2014/027012中公开的，所述自组装肽可以是干燥的缓冲的形式。
19.包括自组装肽的组合物或试剂盒是指所述组合物可包括单一类型的自组装肽或两种或更多种，例如三种、四种或五种等不同类型的自组装肽。例如，如下文详细记载的，所述组合物可以包括自组装结合的两种互补肽。
20.本文使用的术语“包括”(comprising)包含“由
……
组成”的含义。
21.本发明进一步提供了一种用于治疗龋损的组合物或试剂盒，其包括(a)自组装肽和(b)本文所定义的牙科剂。所述龋损优选为空洞性龋损，更优选为活动性龋损，例如活动性空洞龋损，其中所述组合物或试剂盒优选为本发明所述组合物或试剂盒，例如包含自组装肽和牙科封闭剂的试剂盒。
22.本发明还提供了一种用于预防在用于治疗空洞性龋损的牙科剂失效后的继发龋的组合物或试剂盒，其包括(a)自组装肽和(b)选自牙科封闭剂、氟化物清漆和牙科粘合剂的牙科剂。优选地，牙科剂为牙科封闭剂，优选为玻璃离子粘固粉基封闭剂。
23.在本发明的背景下，术语“龋损”(carious lesion)(或“龋损”(caries lesion))是指来自膳食碳水化合物的细菌发酵的酸性副产物对牙齿硬组织的局部破坏。龋齿可以被定义为牙齿钙化组织的微生物疾病，其特征在于牙齿无机部分的去矿化作用和牙齿有机物质的破坏。所述术语包括，例如牙釉质龋，牙骨质龋和牙本质龋。在本发明的背景下，所述治疗的病变主要是牙釉质龋损。龋损可以进一步细分为非空洞或亚表面龋损和空洞性龋损。本技术所治疗的龋损可以是原发性或继发性龋损。
[0024]“空洞性龋损”，是指导致牙齿表面不完整的龋损，即龋损区域中的牙齿结构的表面至少存在部分的损坏，例如出现洞，例如局部牙釉质破坏。
[0025]
牙科有一些指标用来评估龋损的严重程度和活动性。在本发明的背景下，优选使用临床评分系统icdas(国际龋齿检测和评估系统)，优选为icdas-ii系统。在dikmen(2015，j istanbul univ fac dent 49(3)：63-72)或www.icdas.org中可以找到有关根据icdas
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的龋损评分和活动标准的资料。作为概述，icdas
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阶段描述牙齿状态如下：icdas
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第0阶段：完好；icdas
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第1阶段：牙釉质首次视觉变化；icdas
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第2阶段：牙釉质有明显的视觉变化；icdas
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第3阶段：局部牙釉质破坏(无牙本质受累的临床视觉征象)；icdas
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第4阶段：来自牙本质的底层暗影；icdas
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第5阶段：可见牙本质的明显空洞；icdas
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第6阶段：可见牙本质的广泛的明显空洞。icdas系统还用于疾病活动评估(laa)，这通常基于病变临床外观、病变是否位于斑块停滞区以及将具有球末端的who探针轻轻地拉过牙齿表面的触感的综合信息。有关laa的更多信息，可以在ekstrand等人(2007，oper dent.32(3):225-235)或者nyvad等人(2018，caries res.52(5):397-405)中找到。
[0026]
在一个优选的实施方案中，使用本发明所述的组合物或试剂盒用于治疗icdas-ii
第3-6阶段的龋损，例如icdas-ii第3阶段、icdas-ii第4阶段、icdas-ii第5阶段或icdas-ii第6阶段，优选为第3-5阶段，更优选为icdas-ii第3-4阶段。优选地，所述龋损是活动性龋损。
[0027]
龋损的检测和评估可以通过常规的龋齿检测和评估方法进行。举例来说，外部检查，例如，在诸如球头探针之类的探针、或射线照相法或其组合的辅助下，被广泛使用。在本发明的背景下，“空洞性龋损”可以是可以通过球头探针例如球端具有0.5毫米直径的球体的探针(例如，who探针)检测的龋损。可以在例如braga等人(2010,dent clin n am 54:479-493)中找到关于龋损诊断和评估的信息。
[0028]
因此，举例来说，本发明提供了一种组合物，其包括(a)自组装肽和(b)本文所定义的牙科剂，用于治疗龋损，例如icdas-ii第1、2、3、4或5阶段的龋损，优选为空洞性龋损，更优选为icdas-ii第3、4或5阶段的龋损，更优选为icdas-ii第3或4阶段龋损。此外，本发明提供了一种试剂盒，例如包含(a)自组装肽和(b)玻璃离子粘固粉基牙科封闭剂的试剂盒，用于治疗空洞性龋损，即icdas-ii第3、4、5或6阶段的龋损，更优选为icdas-ii第3、4、5阶段的龋损，更优选为icdas-ii第3或4阶段的龋损，其中，优选地，所述龋损是活动性龋损。
[0029]
在用于治疗空洞性龋损的牙科剂失效后预防继发龋意味着降低继发龋的发生率。继发龋通常在修复体下方或边缘形成。牙科剂的失效可以是用于修复空洞性龋损的牙科剂之间存在或形成间隙(部分失效)。也可以是牙科剂或修复体部分或完全磨损或脱落(完全失效)。在一个实施方案中，本文所述的治疗不仅降低了牙科剂失效后继发龋的发生率，而且还增加了牙科剂部分或完全失效前的时间，因为继发龋(例如在修复体边缘发生的继发龋)也可以造成这种失效。然而，这不是不可避免的，本技术足以预防牙科剂部分或完全失效后的继发龋。
[0030]
通常用本文所定义的牙科剂制备的修复体通常在相对较短的时间内失效，在现有技术中，这通常与继发龋相关。例如，氟化物清漆通常在口腔中可以保留长达三天，包括咀嚼磨损。在被保护的区域内，所述清漆可以保持更长时间。封闭剂，例如，玻璃离子粘固粉基封闭剂通常在2-10年内缓慢失效。粘合剂通常用于将如组合物或牙冠等修复体粘合到牙齿表面。粘合剂的失效和修复体通常联系在一起。牙科剂失效前的时间段还取决于除材料之外的几个因素，即患者(例如广泛的牙科治疗史与高失效率有关)、卫生情况、牙科医生的技术熟练程度、病变位置等。
[0031]
在本发明的背景下，发明人发现牙科剂和自组装肽的组合可以防止继发龋，因为牙科剂失效后(例如修复体和牙科剂形成了间隙、或牙科剂或使用牙科剂粘合到牙齿上的修复体磨损/脱落)，自组装肽形成基质，允许再矿化，保护牙齿避免发展继发龋。当牙齿(即空洞)与自组装肽接触时，由自组装肽形成的基质的再矿化可能已经被诱导，取决于牙科材料覆盖下的离子(例如，源自牙科材料和/或唾液)的可用性。在任何情况下，一旦牙科材料失效，例如，当材料与牙齿之间形成间隙时，由自组装肽形成的基质可以再矿化并保护牙齿免受继发龋的侵害。自组装肽还可以在使用牙科材料的修复体的边缘周围组装，并保护这些极易发生继发龋的部位。
[0032]
如果自组装肽和牙科剂混合，牙科剂还可以作为自组装肽的延迟释放储库。
[0033]
用自组装肽进行预处理已被用于增加去矿化的牙本质的粘合强度(barbosa-martins等，2018.j mech behav biomed mater 81:214-221)。本领域已知修复体的粘合，
特别是复合材料与牙本质的结合是有问题的，因为与牙釉质相比，牙本质中胶原蛋白作为有机成分存在，而且牙本质的水含量远高于牙釉质，离子浓度远低于牙釉质。barbosa-martins等人测试了用自组装肽进行预处理是否增加了两种粘合剂系统adper single bond(sb)和clearfil se bond(cse)的粘合。两种试剂都是树脂基复合材料。结果表明对sb的粘合有好处，而对cse没有。讨论认为这是由于sb需要用磷酸蚀刻这一事实，通常认为磷酸可以增强自组装肽的组装。相比之下，cse是一种自蚀刻系统，它对ph的降低少得多。由于牙本质和牙釉质表面之间的显着差异，上述出版物仅考虑到了牙本质病变的结论，而没有考虑到牙釉质病变。本发明优选为牙釉质病变。该出版物也没有提供结果是否也适用于复合材料以外的牙科剂的指示。本发明的一个实施例中，所述牙科剂不是树脂基复合材料。事实上，其他牙科剂，例如玻璃离子粘固粉基牙科封闭剂，如本文所述，与自组装肽组合具有有利的特性。
[0034]
本文所定义的牙科剂是本领域技术人员已知的，并且它们通常是可商购的。牙科剂包括牙科封闭剂、牙科清漆(例如氟化物清漆)和牙科粘合剂。因此，本发明提供了一种组合物或试剂盒，其包含(a)自组装肽，和(b)选自牙科修复材料例如牙科封闭剂、牙科清漆和牙科粘合剂(在试剂盒的情况下为玻璃离子粘固粉基封闭剂)的牙科剂，优选用于治疗icdas-ii第1-6阶段的龋损，如icdas-ii第3，4或5阶段的龋损，如上所述，特别是用于预防继发龋。
[0035]
本发明中使用的牙科剂可包含酸性聚合物，所述聚合物选自丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯、离聚物、玻璃复合体(giomer)、无机-有机杂化聚合物和任何其他合适的聚合物和/或他们的单体形式。优选地，所述牙科剂包括的组分可以聚合，例如，在空洞性龋损中或在填充到这种病变中之前。因此，牙科剂的组分最初可以是单体形式，并且在所述单体组分聚合时可以形成修复体(特别是在封闭剂的情况下)或保护层(特别是在清漆的情况下)或用于粘合修复体(特别是在粘合剂的情况下)。所述牙科剂可以为适合可见光固化的材料、自聚合材料或适合紫外光固化的材料，优选为适合可见光固化的材料。
[0036]
在本发明的一个实施例中，所述牙科剂是牙科清漆，例如氟化物清漆。氟化物清漆是本领域技术人员公知的并且是可商购的。常规的氟化物清漆通常包括氟化物，其作为盐或硅烷制剂以高浓度包含于粘合剂溶液中，例如在快干醇和树脂基溶液中。氟化物的浓度、形式和分配方法因制造商而异。常用的浓度为2.5％-5％的氟化钠或约1％的二氟硅烷，例如，在聚氨酯、聚丙烯酸酯、松香或虫蜡基质中。清漆可以包括cpp-acp，例如mi清漆(gc，日本)。其他合适的氟化物清漆包括例如悬浮液(gaba瑞士ag)、氟化物清漆和双氟12(沃柯，库克斯港，德国)、氟保护漆(ivoclar/vivadent，艾摩斯特市，纽约)、duraflor(pharmascience，蒙特利尔，加拿大)、cavityshield(omnii oral pharmaceuticals，西棕榈滩，佛罗里达州，美国)和carex(沃斯，挪威)。可以在chu和lo(gen dent.jul-aug 2006；54(4):247-253)中找到关于氟化物清漆的信息。
[0037]
在优选的实施方案中，所述牙科剂是牙科封闭剂。牙科封闭剂，也称为窝沟封闭剂，是本领域技术人员熟知的，广泛用于牙科领域并且可商购获得。可以在如naaman等人(dent j.2017,5,34)中找到有关牙科封闭剂的信息。在本发明的背景下，牙科封闭剂可以选自玻璃离子粘固粉基封闭剂、树脂基封闭剂和改性陶瓷材料(例如)。玻璃离
子粘固粉基封闭剂包括玻璃离子粘固粉，树脂改性玻璃离子粘固粉。树脂基封闭剂包括聚酸改性复合树脂(也称“复合体”)和树脂基复合材料(也称“复合树脂”)如可流动的复合树脂。
[0038]
优选地，所述牙科剂为粘固粉基封闭剂，特别是玻璃离子粘固粉基封闭剂。因此，在本发明的一个实施方案中，提供了一种组合物或试剂盒，其包含(a)自组装肽，和(b)玻璃离子粘固粉基封闭剂，如玻璃离子粘固粉，树脂改性玻璃离子粘固粉或玻璃离子型材料。所述组合物或试剂盒，可以用于治疗龋损，如icdas-ii第1-6阶段的龋损。封闭剂通常用于治疗非空洞性龋损，为此可以与自组装肽(例如p11-4)以混合形式或试剂盒形式组合使用，其中所述自组装肽可以先施用，然后施用封闭剂。
[0039]
本发明进一步开辟了治疗空洞性龋损的可能性，例如将玻璃离子粘固粉基封闭剂和自组装肽如p11-4组合用于icdas-ii第3-5阶段，特别是第3-4阶段的龋损。优点是，与自组装肽相结合，可以预防继发龋(或降低继发龋的发生率)。
[0040]
玻璃离子粘固粉属于被称为酸碱粘固粉的一类材料，广泛用于牙科领域，并且可以商购获得。可以在如sidhu和nicholson(j funct biomater.2016,7,16)中找到有关玻璃离子粘固粉的信息。术语“玻璃离子粘固粉”和“玻璃离子”可以互换使用。牙科行业中另一个用做玻璃离子粘固粉的术语是“玻璃聚烯酸酯粘固粉”。玻璃离子粘固粉的主要成分是聚合水溶性酸、碱性(浸出的离子)玻璃和水。通常用于玻璃离子粘固粉的聚合物是聚链烯酸。用于玻璃离子粘固粉的玻璃是碱性的，因此能够与酸反应形成盐，例如，经常使用添加了氟和磷酸盐的铝硅酸盐玻璃。用于玻璃离子粘固粉的商用玻璃通常以钙或锶化合物为基础并含有氟。玻璃离子粘固粉通常在酸碱反应混合后2-3分钟内固化，并通过化学键粘附到牙齿表面，通过多元酸分子上的羧酸根与牙齿表面钙离子之间形成的离子键。
[0041]
在本发明的背景下，“glass”(gcp dental，荷兰)也包括在术语“玻璃离子粘固粉基封闭剂”中。它是一种新型的玻璃离子型商业材料，其中包括通常不包含在玻璃离子配方中的物质，例如包含聚二甲基硅氧烷的硅油。类似的，“activa”是一种橡胶化的玻璃离子粘固粉基封闭剂，也包含在术语“玻璃离子粘固粉基封闭剂”中。
[0042]
树脂改性玻璃离子粘固粉也可以用作本发明的牙科封闭剂。这些材料包含与常规玻璃离子(碱性玻璃粉、水、多元酸)相同的基本成分，但还包括单体成分和相关的引发剂系统。所述单体通常是甲基丙烯酸2-羟乙酯(hema)，所述引发剂可以是樟脑醌或其他合适的光引发剂。
[0043]
在另一个实施方案中，树脂基封闭剂，即树脂基牙科封闭剂，用作本发明的牙科封闭剂。树脂基封闭剂在牙科领域是众所周知的，通常基于低聚物基质，包括双酚a-甲基丙烯酸缩水甘油酯(bisgma)、氨基甲酸乙酯双甲基丙烯酸酯(udma)或其他二甲基丙烯酸酯单体(例如tegma或hddma)，或半结晶聚陶瓷(pex)。根据聚合方法，它们可以分为四代。第一代是通过紫外线的作用聚合而成的。第二代是自聚合树脂基封闭剂或化学固化封闭剂。在这种情况下，将叔胺(活化剂)添加到一种组分中并与另一种组分混合。这两种成分之间的反应会产生自由基，引发树脂封闭材料的聚合。第三代包括可见光聚合树脂基封闭剂，因此，可见光(通常在大约470nm的波长范围内)激活存在于封闭材料中的光引发剂(如本文所解释的)。第四代树脂基封闭剂是氟化物树脂基封闭剂，是在常规树脂基封闭剂材料中添加释氟颗粒的产物。树脂基封闭剂可以填充或不填充，即树脂基密封剂可以包含填充材料，例如，
本文所述的树脂基复合材料。通常，未填充树脂基封闭剂材料表现出更低的粘度。适合商用的树脂基封闭剂包括clinpro
tm
(3m-espe，st.paul，mn，美国)、fs(dentsply-de trey，康斯坦茨，德国)、f(heraerus-kulzer，哈瑙，德国)和guardian seal
tm
(kerr，奥兰治，加州，美国)。因此，在本发明的一个实施方案中，提供了一种组合物或试剂盒，包括(a)自组装肽和(b)树脂基封闭剂，例如用于治疗龋损。树脂基封闭剂一般用于治疗非空洞性龋损，也可以与p11-4等自组装肽结合使用以治疗非空洞性龋损。
[0044]
本发明进一步开拓了治疗空洞性龋损(例如icdas
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第3-5阶段，特别是第3-4阶段的龋损)的可能性，例如使用树脂基封闭剂结合如p11-4的自组装肽。其优点是，与自组装肽结合后，可预防继发龋(或降低继发龋的发生率)。
[0045]
如本文所述，“树脂基封闭剂”还包括树脂基复合材料，优选为可流动树脂基复合材料(又称可流动树脂复合材料)。因此，在本发明中，树脂基复合材料，优选为可流动树脂基复合材料可用作牙科封闭剂或预防性树脂修复体。术语“树脂基复合材料”和“复合树脂”在本文中可互换使用。树脂基复合材料是一种合成树脂，广泛作为修复材料、牙科粘合剂和封闭剂用于牙科。常规的树脂基复合材料包括树脂基低聚物基质和填充材料，例如以玻璃或陶瓷材料为基础。例如，双酚a-甲基丙烯酸缩水甘油酯(bisgma)、氨基甲酸酯双甲基丙烯酸酯(udma)或其他二甲基丙烯酸酯单体(如tegma或hddma)或半结晶聚陶瓷(pex)用作树脂基低聚物基质。玻璃填料通常由结晶二氧化硅、二氧化硅、锂/钡-铝玻璃或含锌/锶/锂的硼硅酸盐玻璃制成。陶瓷填料包括氧化锆-二氧化硅和氧化锆。复合树脂通常也含有引发体系，如光引发剂，如樟脑醌、苯丙二酮(ppd)和lucrin(tpo)。当应用蓝光时，这些引发剂系统启动树脂的聚合反应。也可以用化学固化树脂复合体系(也称为“自动聚合”树脂基封闭剂)，通常以两种糊状体系(基质和催化剂)的形式提供，当基质和催化剂混合时开始固化。可以添加各种添加剂，例如，用于控制牙科复合树脂的反应速率或物理特性，如可以添加二甲基乙二胺以获得一定的流动性。牙科复合材料表现出通过微机械结合粘附在牙齿结构上的能力，而酸蚀会增加这种结合能力。通过额外使用牙科粘合剂可以实现对牙齿结构的非常高的粘合强度。
[0046]
树脂基复合材料可根据其操作特征分为“可流动”和“可压缩”两类。通常，可流动树脂复合材料的填料含量低于60％(体积)，例如约35-55％(体积)。可压缩的树脂复合材料通常具有更高的填料含量，例如高于60％(体积)。与可压缩的树脂基复合材料相比，可流动的树脂复合材料通常表现出较低的粘度，因此具有良好的润湿性和易于操作的特征。
[0047]
合适的市售复合树脂包括例如metafil(sun medical，守山市，日本)、(ivoclar-vivadent，列支敦士登)、(heraeaus kulzer，哈瑙，德国)、arabesk(vocvo，库克斯港，德国)和(heraeaus kulzer，哈瑙，德国)。举例来说，合适的市售可流动树脂复合材料有flow(voco，库克斯港，德国)、filtek
tm supreme(3m-espe，圣保罗，明尼苏达州，美国)、flowline(heraeus-kulzer，哈瑙，德国)、flow(voco，库克斯港，德国)、point-4
tm flowable(kerr，奥兰治，加利福尼亚州，美国)、premise
tm flowable(kerr，奥兰治，加利福尼亚州，美国)、revolution
tm formula2(kerr，奥兰治，加利福尼亚州，美国)和x-flow
tm
(dentsply-de trey，康斯坦茨，德国)。因此，在本发明的一个实施方案中，提供了一种组合物或试剂盒，其包含(a)自组装肽
和(b)树脂基复合材料，优选为可流动的树脂基复合材料，优选用于治疗龋损，更优选用于治疗空洞性龋损，例如本文所述的icdas-ii第3、4或5阶段的龋损。
[0048]
如本文所用的树脂基封闭剂还包括多元酸改性的复合树脂(也称为“复合体”)。因此，本发明中使用的牙科封闭剂可以是多元酸改性的复合树脂(也称为“复合体”)。复合体类似于常规的复合树脂，因为它们的固化反应通常是加成聚合反应，因为它们不含水，而且大部分成分是相同的。他们通常是大分子单体，例如双缩水甘油醚双甲基丙烯酸酯(bisgma)或其衍生物和/或氨基甲酸酯二甲基丙烯酸酯，它们与降低粘度的稀释剂(例如三乙二醇二甲基丙烯酸酯(tegdma))混合。这些聚合物系统填充有非反应性无机粉末，例如石英或硅酸盐玻璃，如sralfsio4。这些粉末通常涂有硅烷，以促进填料与固化材料中的基质之间的结合。复合体通常包含不同于常规的复合材料的额外单体，这些单体含有酸性官能团，例如甲基丙烯酸2-羟乙酯与丁烷四羧酸(tgb)的二酯。固化反应通常是光引发的，但也有通过混合两种糊剂而导致固化的体系，每种糊剂都含有自由基引发剂体系的一种成分。合适的市售复合体的实例包括ana compomer(nordiska dental,瑞典)、(dentsply,康斯坦茨,德国)、(ivoclar-vivadent，列支敦斯登)、f2000 compomer(3m-espe，圣保罗，明尼苏达州，美国)、freedom(sdi，贝华特，维多利亚州，澳大利亚)、(3m-espe，塞费尔德，德国)、magicfil(zenith，恩格尔伍德，新泽西州，美国)、twinky star(voco，库克斯港，德国)。因此，在本发明的一个实施方案中，提供了一种组合物或试剂盒，其包含(a)自组装肽和(b)多元酸改性的复合树脂，优选地，用于治疗龋损，更优选用于治疗空洞性龋损，例如本文所述的icdas-ii第3、4或5阶段的龋损。
[0049]
在另一个实施方案中，本发明中使用的牙科剂是牙科粘合剂，也称为“牙本质粘合剂”。牙科粘合剂在牙科领域是众所周知的，通常是树脂材料，用于使牙科复合填充材料牢固地粘附到牙本质和牙釉质上。牙科粘合剂通常是带有一些挥发性载体和溶剂(如丙酮或乙醇/水)的甲基丙烯酸酯。通常使用bisgma或tegma作为粘合剂。牙科剂的应用通常需要使用蚀刻剂，如磷酸、柠檬酸/氯化钙或草酸/硝酸铝等，使用底漆，如ntg-gmma/bpdm、hema/gpdm或4meta。将所有必要成分组合在一种组合物中的牙科粘合剂系统是可得的。另一些则分别提供所述组分。合适的市售牙科粘合剂包括3m
tm scotchbond
tm
通用粘合剂(3m espe，圣保罗，明尼苏达州，美国)、all-bond(bisco dental products，绍姆堡，伊利诺伊州，美国)、admira bond(voco，库克斯港，德国)、beautibond
7th-新一代粘合剂(shofu dental corporation，拉丁根市，德国)，clearfil se bond 2(kuraray america inc.，休斯顿，德克萨斯州，美国)，futurabond u(voco，库克斯港，德国)，g-premio bond
tm
(gc america inc.，alisp，伊利诺伊州，美国)和prelude
tm
(zest dental solutions，卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国)。因此，在本发明的一个实施方案中，提供了一种组合物或试剂盒，其包含(a)自组装肽和(b)牙科粘合剂，优选地，用于治疗龋损，更优选地用于治疗空洞性龋损，例如本文所述的icdas-ii第3、4或5阶段的龋损。
[0050]
在本技术中，可以使用一种以上的牙科剂。例如，本技术所述的试剂盒可以包括玻璃离子粘固粉基封闭剂和氟化物清漆。因此，举例来说，当使用这种试剂盒治疗龋损，可以首先将自组装肽施加到可选地清洁和/或处理过的牙齿表面，例如龋损表面(在使用氟化物清漆或者含有氟化物清漆的组合物之前)，所述玻璃离子粘固粉可以在应用氟化物清漆后
f-x1-w-x1-f-x1-x4-x4组成，其中x1独立地选自谷氨酸和鸟氨酸，其中x3选自精氨酸、谷氨酸和鸟氨酸，其中x4独立地选自谷氨酰胺、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸和鸟氨酸。x3优选为精氨酸。独立地，x4优选为谷氨酰胺。
[0062]
本发明的自组装肽可包含seq id no:5，或优选地，其由q-q-r-f-x1-w-x1-f-x1-q-q组成，其中x1独立地选自谷氨酸和鸟氨酸。
[0063]
优选地，本发明使用的自组装肽包含选自下文表1中列出的共有序列的序列，或由其组成。
[0064]
最优选地，所述肽包括表2中列示的特定肽或由其组成。当然，与另一种自组装肽组合组装的自组装肽，如本文所公开的，可以配置在一个试剂盒或一种组合物中。
[0065]
seq id no:6、9、11、12、16或17的肽是特别有利的，例如，因为它们可以以相对低的浓度使用，它们与细胞高度相容并且具有有益的电荷分布。
[0066]
优选地，所述自组装肽包含seq id no:6的序列或由其组成。由seq id no:6的序列组成的肽也称为p11-4，其在本发明中是优选的。在另一个优选的实施方案中，所述自组装肽包含seq id no:9的序列或由其组成(p11-8)。
[0067]
本发明的试剂盒或组合物还可以包含至少一种与由seq id no:6组成的肽具有至少45％序列一致性的自组装肽。优选地，该肽与由seq id no:6组成的肽具有至少54％、至少63％、至少72％、至少81％、或至少90％的序列一致性，或就是所述肽。本发明的肽的长度是例如11个氨基酸。
[0068]
自组装肽可以是包含ac-n-末端和/或nh
2-c-末端的修饰肽，优选为，有两种修饰的或者没有修饰的肽。由于非封闭形式更倾向于启动脱氨反应，seq id no:1的所有自组装肽中的末端最好都被封闭以增加稳定性。特别是seq id no:6、9、11、12、16和17的多肽可以包括一个ac-n-末端和nh
2-c-末端。seq id no:18-29对应于本发明的修饰肽。
[0069]
表1：优选的自组装肽的共有序列
[0070][0071]
表2：优选的自组装肽(x1的位置标有下划线)
[0072]
[0073][0074]
所述自组装肽优选地，不具有针对受试者的内肽酶的限制性位点。它们也不需要包含细胞的特殊识别基序。
[0075]
在一个实施例中，本发明所述的试剂盒或组合物中，自组装肽主要以单体形式存在，例如至少70％，至少80％或者至少90％的自组装肽以单体形式存在。为此，如果所述肽在ph为7.5或低于7.5时组装，所述组合物的ph可以高于所述肽开始发生自组装的ph(例如，p11-4自组装的ph为7.5)，优选地，高于该ph的0.1～0.5个ph单位，或者高于所述ph 0.5个ph单位。所述ph在该ph下缓冲可避免快速聚集。在应用于龋齿腔后，如果聚集并且快速开始形成水凝胶是有益的。因此，所述组合物的ph可以高于所述肽开始自组装的ph 0.1～0.5个ph单位，不需要缓冲。在一个实施方案中，所述组合物可以包括干燥的肽，如根据wo2014/027012可以获得。
[0076]
在另一个实施例中，本发明所述的试剂盒或组合物包括主要以组装形式存在(例如至少70％，至少80％或者至少90％以组装形式，或者本质上是组装形式)的自组装肽，和缓冲液(在组装形式稳定的ph下)。组装的自组装肽通常形成水凝胶。
[0077]
蛋白质组装状态的选择取决于几个因素。自组装肽主要以单体形式存在，可提高单体向去矿化釉质中的扩散，特别有利于较小的空洞性病变，例如部分空洞性病变或微腔病变(例如，icdas 1-3)。主要以组装形式存在可能导致肽的更快作用，从而改善功能，特别是对于较大的空洞(例如，icdas 4、5或6)。如果将自组装肽与牙科剂混合，牙科剂固化所需的ph值和离子强度通常是决定性的。至于包含牙科剂和自组装肽的组合物，在各自的ph下，主要是单体的自组装肽或主要是聚合的自组装肽都可以使用。
[0078]
互补的自组装肽的组合，例如p11-4和p11-8，由于它们相互吸引，提供了明显更快的组装时间，从而导致更快的作用和稳定性。
[0079]
例如，本发明提供了一种组合物或试剂盒，其包含(a)自组装肽，该肽包含seq id no：1-5的共有序列，例如seq id no：1的共有序列，优选为seq id no：2的共有序列，更优选为seq id no：3的共有序列，更优选为seq id no：4的共有序列，最优选为seq id no：5的共有序列，和(b)牙科剂，例如牙科封闭剂，优选为玻璃离子粘固粉基封闭剂，例如用于治疗空
洞性龋损，例如如上所述icdas-ii第4或第5阶段的龋损。特别地，它可以用于预防继发龋。
[0080]
在本发明的一个优选的实施方案中，提供了一种组合物或试剂盒，其包含(a)自组装肽，优选为选自seq id no:6-17和30-33的序列，或与其具有至少80％，更优选地至少90％一致性的序列，优选为seq id no:6的序列或与其具有至少80％，更优选地至少90％一致性的序列，以及(b)牙科剂，例如牙科封闭剂，优选玻璃离子粘固粉基封闭剂，优选用于治疗早期和晚期龋损，更优选用于治疗空洞性龋损，例如如上所述的icdas-ii第3-5阶段的龋损。在本发明的背景下，p-11最适合使用。特别地，它可用于预防继发龋。
[0081]
在本发明的一个特别优选的实施方案中，提供了一种组合物或试剂盒，其包含(a)自组装肽，优选地由seq id no:6的序列组成，和(b)玻璃离子粘固粉基封闭剂，优选地用于治疗龋损，更优选地用于治疗如上所述的icdas-ii第3-5阶段，例如4或5的龋损。特别地，它可以用于预防继发龋。
[0082]
在本发明的背景下，所述自组装肽可以在低ph下进行自组装，特别是在低于7.5的ph下，例如p11-4。龋损通常具有酸性ph值，这确保了自组装肽在病变中的组装。在低ph值下，特别是在低于7.5的ph值下进行自组装的优选肽为p11-4。
[0083]
术语“自组装肽”(saps)在低于7.5的ph下进行自组装，意味着它们能够在低于7.5的ph下自动装配。离子强度也会影响所述自组装肽的组装状态。优选地，用于本发明的自组装肽能够在低于7.5的ph和至少生理离子强度下自组装。能够在低于7.5的ph值和至少生理离子强度下自组装的自组装肽可以在所述ph值下开始进行自组装，例如优选肽p11-4的情况，但不是必需的。它们还可以在更高或更低的ph值下处于自组装状态。
[0084]
本领域技术人员知道如何确定和测量溶液的离子强度。所述离子强度i一般根据公式i＝1/2∑zi2bi计算，其中z是价因子，bi是第i个离子浓度的摩尔浓度[mol/kg{h2o}]。总和∑是对溶液中所有离子的求和。例如，150mm nacl溶液的离子强度约为0.15mol/l。这也大约是血液的离子强度。口腔中唾液的离子强度通常要低很多，例如大约0.04mol/l。在本发明的背景下，生理范围内的离子强度被认为对应于0.15mol/l的离子强度。
[0085]
如果需要，机械性能可受自组装肽的浓度以及组合物中存在的分子和离子类型的影响。本发明所述的包含自组装肽的组合物可以包含例如nacl和任选的生物学适用的缓冲液例如tris。
[0086]
在一个实施方案中，所述自组装肽的组装状态也可以通过离子强度来控制，例如可以通过与高离子强度(例如，高于0.15mol/l)的缓冲液组合来诱导组装，其可以进一步包括钙、磷酸盐和/或氟离子。
[0087]
所述病变中(或空洞性龋损表面与牙科剂之间)的ph值可能受牙科剂ph值的影响。大多数牙科剂具有中性或酸性ph值，例如，壳聚糖-精氨酸-酰胺。
[0088]
或者，在本发明的背景下，所述自组装肽可替代地在高ph下进行自组装，特别是在不低于7.5的ph下。在这种情况下，通常牙科剂的ph值不低于7.5，例如硅酸盐粘固粉(portland cement)或任何氢氧化钙基的材料。在高ph值下，特别是在不低于7.5的ph值下进行自组装的优选肽是p11-8。
[0089]
本发明的一方面是根据本发明的组合物或试剂盒，用于治疗如上所述的空洞性龋损，优选为釉质的空洞性龋损，特别地，用于预防或减少牙科剂失效后继发龋的发生率。通过本发明的治疗降低继发龋的发生率，从而可以治疗原发性龋损。本发明背景下龋损的治
疗通常由牙科医生进行。
[0090]
治疗可以包括以下步骤：(a)清洁牙齿表面，(b)可选地，干燥牙齿表面，(c)可选地，蚀刻牙齿表面，(d)将组合物或试剂盒的组分施用于龋损，和(e)可选地，固化，其中步骤(b)和(c)，如果存在，可以以任何顺序进行。
[0091]
通常，治疗程序的步骤(a)在步骤(b)～(e)之前。步骤(b)～(d)的应用顺序更为灵活，步骤(e)通常在步骤(b)～(d)之后。因此，例如，可以在干燥之前或之后或在步骤(d)之中进行蚀刻(如果应用)等。这些步骤的顺序和应用通常取决于本发明中使用的牙科剂的类型，并且对应于不与自组装肽共同使用的牙科剂采取的步骤的顺序和应用。例如，如果树脂基封闭剂用作牙科剂，则在施加树脂基封闭剂之前蚀刻牙齿表面是有利的。树脂基封闭剂也比玻璃离子粘固粉对湿度更敏感。因此，在应用树脂基封闭剂的情况下，干燥牙齿表面是有利的。优选地，在这种情况下，牙齿既被干燥又被蚀刻。牙科医生了解不同牙科剂的值得推荐的治疗步骤。
[0092]
步骤(a)，“牙齿表面的清洁”是指至少清洁龋损的表面，即通过适当的方法，从牙齿表面，至少从龋损的表面开始，去除诸如食物残渣、牙齿沉积物、牙菌斑或牙膜等物质。此类清洁方法可包括用常规的刷牙处理，用特定牙刷处理，例如用于去除牙菌斑的刷子、用刮牙器和刮匙(currettes)处理、应用漱口水，例如使用抗菌漱口水等。清洁优选包括去除牙菌斑。清洁还可包括部分或完全去除龋齿材料，例如通过钻孔、空气磨蚀或激光烧蚀，通过应用挖勺，或通过化学机械去除(例如，使用系统)。在本发明的背景下通常不需要去除龋齿材料，并且优选地，不进行钻孔。
[0093]
尽管如此，对于更晚期龋齿阶段的龋损，例如icdas-ii第3、4、5和6阶段的龋损，至少去除部分腐烂的牙齿材料可能是有利的。在去除龋齿材料的情况下，优选通过“温和”方法，例如通过使用挖勺或化学机械去除方法去除龋齿材料，而不是通过钻孔。发明人发现，在没有牙本质参与的牙釉质损伤的情况下(如本文优选的)，没有必要完全去除龋材料。特别优选的是，在去除龋齿材料的过程中无需去除完整的牙齿材料，这是使用钻孔作为去除技术时的通常情况。如果病变涉及牙本质，最好去除龋齿材料。
[0094]
如上所述，步骤(b)的应用，即牙齿表面的干燥，可能对特定的牙科剂的应用有利，例如树脂基封闭剂、牙科粘合剂或树脂基复合材料。干燥可以在蚀刻之前(如果进行蚀刻)、蚀刻之后或在步骤(d)中进行，例如在自组装肽的施加和牙科剂的施加之间进行。牙齿表面的干燥通常使用气流进行。
[0095]
此外，步骤(c)，即蚀刻牙齿表面，可能对特定的牙科剂的应用有利，例如树脂基封闭剂、牙科粘合剂或树脂基复合材料。蚀刻是牙科封闭过程中常规使用的常规技术。“蚀刻”是指在牙齿表面创建微孔，自组装肽和/或牙科剂，如牙科封闭剂材料，可以流入其中，从而增加保留时间，增加表面积并提高牙科剂和牙齿之间的结合强度。可用于本发明背景下的蚀刻剂包括马来酸、乙二胺四乙酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、硝酸和聚丙烯酸。特别优选的蚀刻剂是磷酸，其通常也被指定为调节剂。通常，将蚀刻剂施加到清洁的和可选的干燥的牙齿表面上持续10到60秒之间的时间段，例如15-30秒。在蚀刻时，优选地，例如用水冲洗牙齿表面。取决于所使用的牙科剂，在可选地冲洗步骤之后，在使用牙科剂之前干燥牙齿表面，例如使用树脂基封闭剂的情况。在一个实施方案中，蚀刻在施加自组装肽之后和施加牙科剂之前进行。
[0096]
步骤(d)包括将组合物或试剂盒的组分施用于龋损，优选空洞性龋损。这意味着通过牙科医生已知的合适技术，例如通过填充，将组合物或试剂盒的组分施用于龋损。当将本发明的试剂盒用于治疗龋损时，优选地，步骤(d)包括(i)将自组装肽或包含自组装肽的组合物(由试剂盒包含)施用于龋损然后(ii)将牙科剂施用于龋损。“牙科剂的应用”通常是指由牙科医生专业地和常规地进行的应用，例如根据制造商的说明书。自组装肽可以例如作为合适的缓冲液中的溶液施用。可以通过任何合适的涂药器例如注射器、海绵等将自组装肽施用于龋损。例如，repair中使用的应用方法可以被用于龋损。所述试剂盒还包括涂抹器。
[0097]
在一个实施方案中，步骤(d)包括向空洞性龋损施用自组装肽和牙科剂的混合物。该混合物可以是本发明所述的组合物或在给药前或给药后混合的本发明所述试剂盒的组分。可以按照牙科领域中对于相应牙科剂的常规实施来施用混合物，例如，根据制造商的说明书。
[0098]
可选步骤(e)的应用，即固化，取决于所使用的牙科剂。大多数牙科剂需要某种形式的固化。术语“固化”是指发生化学反应(如聚合)或物理作用(如蒸发)，从而产生更硬、更坚韧或更稳定的连接(如键)或物质(如固化树脂)。牙科材料的常见固化是化学固化、通过应用光固化、热固化或它们的组合实现固化。
[0099]
因此，本发明提供了诸如根据本发明的组合物或试剂盒，其用于治疗龋损，优选为空洞性龋损，例如上文所述的icdas
‑ⅱ
第3、4或5阶段的龋损，其中龋损的治疗包括以下步骤：(i)清洁牙齿表面，包括去除牙菌斑，特别是清洁龋损的表面，可选地，包括部分或全部去除腐烂材料，其中优选地不进行钻孔；(ii)对龋损施用上述包含自组装肽的组合物，例如包含seq id no：1-5(例如，p11-4)的共有序列的自组装肽；(iii)对龋损施用牙科剂，例如玻璃离子粘固粉基封闭剂或氟化物清漆，以及(iv)固化氟化物清漆，例如通过烘干，或干燥玻璃离子粘固粉基封闭剂，如化学固化或化学固化与可见光固化相结合。步骤的顺序可以是从(i)到(iv)。
[0100]
根据本发明使用组合物或试剂盒的另一个实施例是本发明所述组合物或试剂盒用于治疗龋损，优选地，治疗空洞性龋损，例如上述icdas-ii第3、4或5阶段的龋损，其中龋损的治疗包括以下步骤(i)清洁牙齿表面，包括去除牙菌斑，特别是清洁龋损的表面，可选地，部分或全部去除腐烂的材料，其中优选地不进行钻孔，(ii)可选地干燥龋损表面，(iii)将蚀刻剂例如磷酸施加到龋损表面适当的时间，从而蚀刻具有龋损的牙齿表面，(iv)去除蚀刻剂，例如通过冲洗，(v)对龋损施用包含上述自组装肽的组合物，例如包含seq id no:1-5(例如p11-4)的共有序列的自组装肽，(vi)干燥具有龋损的牙齿表面，(vii)施用树脂基封闭剂，优选地根据制造商的说明书，和(viii)通过合适的固化方法固化树脂基封闭剂。
[0101]
在本发明的背景下牙科剂的选择受需要治疗的龋损类型的影响。例如，本发明有利地使牙科封闭剂能够用于任何大小的空洞性龋损或用于牙齿凹坑和/或裂隙中的咬合龋损。
[0102]
此外，本发明提供了一种治疗空洞性龋损的方法，包括将本发明的组合物或试剂盒的组分施用于所述龋损。例如，该方法可以包括如上所述的步骤(a)至(e)，即(a)清洁牙齿表面，(b)可选地，干燥牙齿表面，(c)可选地，蚀刻或调节牙齿表面，(d)将组合物或试剂盒的组分施用于龋损，和(e)可选地，进行固化，如上文对于用于治疗龋损的组合物和试剂
盒所述。
[0103]
本发明还解决了附加的技术问题。尤其是在龋损的挖掘过程中，牙髓可能会暴露或接近暴露，由于牙髓对牙科材料(封闭剂、粘合剂、填料、树脂等)的不良反应，导致牙髓炎或牙髓回缩的危险增加。发明人惊奇地发现，当牙科修复体离牙髓很近时，为了防止牙髓恶化，牙医可以使用本发明的试剂盒或组合物。因此，本发明提供了用于盖髓的根据本发明的组合物或试剂盒。牙科材料可以是如上所述的牙科剂，例如牙科封闭剂或粘合剂，或填料等。它可以是选自玻璃离子粘固粉和树脂改性玻璃离子粘固粉的玻璃离子粘固粉基封闭剂，或选自多元酸改性复合树脂和树脂基复合材料的树脂基封闭剂。在这种情况下，树脂基复合材料是优选的牙科材料。
[0104]
例如，如果在清洁过程中，特别是在挖掘龋损时，牙髓暴露或接近暴露(在某种程度上，这可以被本领域技术人员识别，其增加了牙髓回缩或牙髓炎的风险)，可应用自组装肽(例如p11-4或p11-4和p11-8的混合物，优选为p11-4)溶液以保护牙髓并提高再矿化，然后应用牙科材料，例如牙科封闭剂。
[0105]
或者，自组装肽(例如p11-4或p11-4和p11-8的混合物，优选为p11-4)和牙科材料可以在应用前混合，如果牙科材料也与牙髓生物相容(例如，mta)，这是最适宜的。
[0106]
本发明所述组合物或试剂盒可以用于盖髓。
[0107]
盖髓可以是直接盖髓或间接盖髓。本发明背景下使用的自组装肽对提高用于间接盖髓的软化的牙本质薄层的再矿化是特别有利的。玻璃离子或树脂改性的玻璃离子也可用于本发明盖髓的情况，特别是用于间接盖髓。如果需要，可在牙髓帽上应用不同层的牙科封闭剂。
[0108]
如果将自组装肽置于牙髓上以保护牙髓免于由于牙科填充材料的细胞毒性而回缩，则用于再矿化的钙离子的一种来源可以是牙髓。在盖髓的情况下，用于再矿化的离子来自牙髓(或通过牙髓的血液供应)，并且再矿化可以在放置后(不存在填充失败或形成微间隙或微渗漏/在填充失败或形成微间隙或微渗漏之前)立即开始。当然，额外的离子，包括氟，可以来自牙科材料。因此，释放氟的牙科材料如玻璃离子粘固粉在这种情况也是有利的。
[0109]
本发明通过以下实施例进行说明，但不限于此。本文引用的所有参考文献均完全并入本文。
附图说明
[0110]
图1.1治疗部分空洞性龋损(icdas第3级)。
[0111]
a：部分空化齿的横截面；左侧部分空化。
[0112]
b：牙齿清洁后，不挖掘，在牙齿表面应用主要为单体的自组装肽(例如，p11-4，条带)溶液。自组装肽开始向空洞内扩散。
[0113]
c：自组装肽，例如p11-4，由于低ph在空洞中组装，生成基质。
[0114]
d：干燥牙齿表面，在病变内部留下组装好的p11-4条带和纤维。
[0115]
e：在溶液被吸收进空洞后，使用封闭剂，如玻璃离子粘固粉(gic)，使唾液和玻璃离子粘固粉中的离子(钙和磷酸盐)扩散到病变体内。
[0116]
f：病变内的矿化(六边形)保护失效的封闭剂，形成病变下方的矿化结构(受如gic
的封闭剂保护)。
[0117]
gic失效后，完全再生的牙齿表面和结构仍然存在。
[0118]
图1.2
[0119]
a：部分空化齿的横截面；左侧有部分空化。
[0120]
b：挖掘龋损。
[0121]
c：应用单体p11-4(条状)，或者同时作为填料，或者依次应用。
[0122]
d：在牙与填料界面处使用了填料(灰色)和纤维状p11-4(较长的条状)的挖掘后的牙齿。
[0123]
e：填料与牙齿之间的微间隙内的矿化(六边形)。磷酸钙是由填料(如玻璃离子粘固粉)、唾液或牙髓(通过牙本质的流体)提供的。
[0124]
图2在龋损模型中用本发明所述药物组合物治疗空洞性龋损(icdas第4级)，如实施例2所述。在右列和左列中，展示了两个具有代表性的实施例。
[0125]
a、b：人造空洞钻孔。
[0126]
c、d：应用1滴10mg/ml，ph8的p11-4。
[0127]
e、f：应用玻璃离子粘固粉(aqual ionofill plus、voco)。
[0128]
图3如实施例3所述，用本发明的试剂盒在龋损模型中治疗空洞性龋损(icdas第4级)。在右列和左列中，展示了两个具有代表性实施例。
[0129]
a、b：人造空洞钻孔。
[0130]
c、d：应用混合有1滴10mg/ml，ph 8的p11-4的玻璃离子粘固粉(aqual ionofill plus，voco)。
[0131]
图4从清漆、玻璃离子粘固粉和paro-amin fluor gel
é
e中释放模型物质刚果红和p11-4的释放曲线。实验如实施例6和7中所述进行。释放量按所述计量，并以任意单位(au)指定。图4a示出了刚果红从清漆duraphat(样品a1)和玻璃离子粘固粉aqua ionofil plus(样品b1)中的释放，图4b示出了刚果红从paroamin fluor gel
é
e(样品2)中的释放。图4c示出了单体p11-4从清漆duraphat(样品ap)和玻璃离子粘固粉aqua ionofil plus(样品bp)中的释放。
实施例
[0132]
实施例1
[0133]
对部分空洞性龋损(icdas 3级)进行清洁。它可以已经被挖掘(图1.2)，也可以没有被挖掘(图1.1)。在清洁之后，可选地，挖掘，然后将自组装肽(例如，p11-4)施加到清洁的牙齿表面上，特别是施加到空洞里。自组装肽开始扩散到空洞内。在空洞里，自组装肽由于低ph值而组装，生成基质。在溶液被牙本质或牙釉质吸收后(10秒-5分钟，例如，取决于表面，牙本质比牙釉质吸收更快)，应用封闭剂，如玻璃离子粘固粉，允许离子(ca和磷酸盐)从唾液或玻璃离子进入病变体。这使得封闭剂保护的基质开始矿化。通常几个月或几年后，封闭剂从牙齿上脱落后，完全再生的牙齿表面和结构仍然存在，没有继发龋。
[0134]
实施例2
[0135]
用本发明的试剂盒处理通过在切离的牛门牙上钻孔产生的人工icdas 4级病变，特别是通过应用1滴10mg/ml，ph 8的p11-4，然后根据制造商的说明书应用玻璃离子黏固粉
(aqual ionofill plus，voco)。简而言之，应用聚丙烯酸调节剂10秒，冲洗，稍微干燥，应用玻璃离子，并在整理程序之前让材料成熟。主要步骤如图2所示。玻璃离子粘固粉固化后形成坚硬的修复体，与未与p11-4结合使用的修复体无法区别开来(数据没有提供)。在施用后一周内也不不会发现任何差异。
[0136]
实施例3
[0137]
用本发明的组合物处理通过在切离的牛门牙上钻孔产生的人工icdas 4级病变。根据制造商的说明书制备玻璃离子粘固粉粉末(aqual ionofill plus，voco)。每100mg粉末中添加1mg的p11-4(每1ml粉末10mg p11-4)并与水混合。根据制造商的建议溶解粉末。将溶液混合30秒，然后按照制造商的建议(如上所述)应用在牙齿表面。主要步骤如图3所示。
[0138]
所述玻璃离子粘固粉固化形成坚硬的修复体，与未与p11-4结合使用的修复体无法区分(数据没有提供)。在施用后一周内不会发现任何差异。
[0139]
实施例4-预防继发龋
[0140]
根据三个不同方案，用牙科剂(例如，玻璃离子(例如，aqual ionofill plus，voco))在不存在或存在p11-4的情况下，处理通过在切离的牛门牙上钻孔产生的人工icdas 4级病变：
[0141]
1)根据制造商的说明书，将牙科封闭剂应用于清洁过的空洞表面。
[0142]
2)将一滴10mg/ml，ph 8的p11-4滴在清洁过的空洞表面上，以覆盖空洞表面。在溶液基本上被牙齿表面吸收后，根据制造商的说明书将牙科封闭剂应用在清洁过的空洞表面。
[0143]
3)根据制造商的说明书制备玻璃离子粘固粉粉末(aqual ionofill plus,voco)。每100mg添加1mg p11-4(每1ml粉末10mg p11-4)并与水混合。根据制造商的建议溶解粉末。将溶液混合30秒，然后按照制造商的建议(如上所述)应用于牙齿表面。
[0144]
牙齿在蒸馏水中保存24小时。然后，对牙齿进行热循环(500次循环，5-55℃)，浸入碱性品红中，切片，并使用立体显微镜分析染料渗透和再矿化(例如，如hepdeniz等人,2016.eur j dent.10(2):163-169中记载的)。
[0145]
随着时间的推移监测微间隙或微渗漏的形成和牙科封闭剂的收缩，并分析微间隙部位的再矿化。将不同的组进行比较。
[0146]
实施例5-盖髓-由于牙髓和血液供给的磷酸钙而再矿化
[0147]
由于龋齿，会挖出一个暴露牙髓的空洞。在根据制造商的说明书(例如，分层应用和光固化，视情况而定)放置牙科材料(例如，树脂复合材料)之前，用p11-4溶液(例如，100μl，10mg/ml，ph 8)覆盖所述牙髓。
[0148]
所述牙髓保持无症状(即无牙髓炎)，1年后随访x-射线，评估牙髓回缩情况。
[0149]
实施例6-释放曲线
[0150]
如本领域技术人员所熟知的，药剂的释放曲线，即氟或自组装肽的释放曲线，取决于材料的基质(mousavinasab等人,2009,dent res j(isfahan)6(2):75-81)。在以下的实验中，用模型物质刚果红模拟自组装肽，在将其掺入牙科材料后，对其的释放曲线进行了测定。
[0151]
所述材料是按照使用说明书(ifu)制备和应用的，通常记载各产品使用0.5-0.75ml。使用磷酸盐缓冲盐水(pbs)来模拟唾液。pbs与人体的渗透压和离子浓度相匹
配——它是等渗的。为了模拟恒定的唾液流量，将所施用的量设置为等于1小时的唾液流量的溶液，即约20ml的溶液。使用光度计测定在500nm处材料的扩散。
[0152]
材料
[0153][0154][0155]
释放曲线
[0156]
a)清漆(多乐氟)和paro amin fluor gel
é
e的制备
[0157]
根据供应商的使用说明书，其建议在龋齿部位添加0.5-1ml的清漆。选择在紫外分光光度计下产生明显信号的刚果红的浓度。
[0158]-将12mg的刚果红放入2ml的微量离心管中
[0159]-用注射器将2ml的清漆直接加入管中
[0160]-将刚果红和清漆充分混合，直至达到含量均匀
[0161]-用注射器取产品
[0162]-将0.5-0.75ml的产品作为薄膜放在显微镜载玻片上-按照使用说明书的建议
[0163]-使其风干-根据使用说明书
[0164]
b)ionofil(玻璃离子修复材料)的制备
[0165]-将12mg的刚果红直接放入牙杯中
[0166]-根据使用说明书添加2勺ionofil plus
[0167]-加入2滴水并按照使用说明书进行混合
[0168]-在显微镜载玻片上放置一定量的产品
[0169]
c)孵育
[0170]
用1％etoh制备pbs溶液以进行保存
[0171]-将载玻片放入50ml的离心管中
[0172]-加入20ml的pbs
[0173]-放置在转轮上
[0174]
d)测量和计算
[0175]-将1ml的孵育液直接倒入紫外线火焰探测器
[0176]-在500nm处测量，对照/空白为含1％ethoh的pbs
[0177]-从测量值中减去不含刚果红的对照值
[0178]
结果和讨论
[0179]
独立于材料的配方，所述模型物质很容易融入产品中。这通过含量均匀度的视觉评估示出，因为可见均匀的红色/棕色分散体。
[0180]
模型物质还能够从所有三种含氟制剂扩散到人工唾液中。根据配方的不同，不同配方的释放曲线是不同的。
[0181]
模型物质刚果红从清漆多乐氟和玻璃离子粘固粉(图4a)以及用于对比的paro amin fluor gel
é
e中释放(图4b)。从清漆中释放比从玻璃离子粘固粉中释放更快。可以看出，玻璃离子粘固粉的的释放是恒定的，并且随着时间的推移而增加。
[0182]
实施例7-p11-4的释放曲线
[0183]
实施例7大体上按照实施例6进行，但如果没有另外说明，则使用自组装肽p11-4。将12mg单体形式的p11-4(credentisag)按上述量和条件添加到清漆多乐氟(样品编号ap)或玻璃离子粘固粉aqua ionofil plus(样品编号bp)中。孵育在室温下以静态方式进行。在280nm下测量，从测量值中减去不含肽的缓冲液的对照值。
[0184]
结果如图4c所示。证实了之前的数据，实验显示肽从被测基质，即多乐氟(样本ap)或aqua ionofil plus(bp)中的扩散出乎意料的好，证实了用模型物质获得的数据。
[0185]
p11-4从清漆和玻璃离离子粘固粉中缓慢而基本上持续地释放出来。测定了几天，释放的肽的量随着时间的增加而增加。从清漆中的释放比从玻璃离子粘固粉中的释放快。因此，根据配方，可以通过使用封闭剂(如玻璃离子粘固粉)获得缓慢释放或使用清漆(如含松香(collophonium)的制剂)获得“快速”释放。
[0186]
如使用清漆(例如多乐氟)所见的快速释放可能在应用后不久对肽的性能产生有益影响，这可能对于例如被清漆覆盖的病变的再矿化特别有利。
[0187]
另一方面，更长的释放可能进一步对于预防或治疗继发龋(在治疗后(填充后的)的病变上的封闭剂下方或边缘处)特别有利，其可以随着时间的推移缓慢发展。可以合理地得出结论，与从清漆中释放相比，该试剂会在更长的时间内从封闭剂(例如玻璃离子粘固粉)中释放出来。这是合适的，因为封闭剂(例如玻璃离子粘固粉)在牙齿上的平均时间也比清漆长。此外，从填料中释放的自组装肽可能会长时间保持原位。