抗硬骨素抗体配制品相关申请的交叉引用1.本技术要求2019年8月12日提交的美国临时申请号62/885,672的优先权权益，将其披露内容通过引用以其整体并入。
技术领域：
：2.本技术涉及包含抗硬骨素抗体的药物配制品。通过引用并入以电子方式提交的材料3.通过引用以其整体并入的是与本文同时提交的计算机可读核苷酸/氨基酸序列表，其鉴定如下：名为“53956_seqlisting.txt”的ascii(文本)文件，17,909字节，创建于2020年8月7日。通过引用并入4.以下申请通过引用以其整体特此并入：于2012年8月2日提交的国际专利申请号pct/us2012/049331，其要求于2011年8月4日提交的美国临时专利申请号61/515,191的优先权；于2006年4月25日提交的美国专利申请号11/410,540，其要求于2006年4月17日提交的美国临时专利申请号60/792,645、于2006年3月13日提交的美国临时专利申请号60/782,244、于2006年2月24日提交的美国临时专利申请号60/776,847、和于2005年5月3日提交的美国临时专利申请号60/677,583的优先权；以及于2006年4月25日提交的美国专利申请号11/411,003(以美国专利号7,592,429发布)，其要求于2006年4月17日提交的美国临时专利申请号60/792,645、于2006年3月13日提交的美国临时专利申请号60/782,244、于2006年2月24日提交的美国临时专利申请号60/776,847、和于2005年5月3日提交的美国临时专利申请号60/677,583的优先权。以下申请也通过引用特此并入：于2008年9月17日提交的美国专利申请号12/212,327，其要求于2007年9月17日提交的美国临时专利申请号60/973,024的优先权；以及于2010年6月29日提交的美国专利申请号12/811,171，其是依照于2008年12月15日提交的国际专利申请号pct/us08/86864的35u.s.c.§371的美国国家阶段申请，其要求于2007年12月14日提交的美国临时专利申请号61/013,917的优先权。
背景技术：
：：5.基于蛋白质的药物是临床(前)开发和商业产品中增长最快的治疗剂之一。与小化学药物相比，蛋白质药物在相对低的浓度下具有高特异性和活性，并且典型地提供对高影响疾病的治疗，这些高影响疾病是例如各种癌症、自身免疫疾病、和代谢障碍(roberts,trendsbiotechnol.[生物技术趋势]2014年7月；32(7):372-80,wang,intjpharm.[国际药学杂志]1999年8月20日；185(2):129-88)。[0006]由于商业规模纯化方法的进步，因此现在可以在首次制造时以高纯度获得基于蛋白质的药物，例如重组蛋白质。然而，蛋白质仅临界稳定(marginallystable)并且极易受到化学和物理降解二者的影响。化学降解是指涉及共价键的修饰，例如脱酰胺化、氧化、裂解或形成新的二硫桥键、水解、异构化或去糖基化。物理降解包括蛋白质去折叠、对表面的不希望的吸附、和聚集。处理这些物理和化学不稳定性是蛋白质药物开发中最具挑战性的任务之一(chi等人,pharmres[药物研究],第20卷，第9期,2003年9月,第1325-1336页,roberts,trendsbiotechnol.[生物技术趋势]2014年7月；32(7):372-80)。[0007]蛋白质聚集代表蛋白质物理不稳定性的主要事件，并且其发生归因于使溶剂和疏水蛋白质残基之间的热力学上不利的相互作用最小化的固有倾向。这可能是特别有问题的，因为会在重折叠、纯化、灭菌、运输和储存过程中遇到。即使在蛋白质天然状态在热力学上高度有利(例如，中性ph和37℃)并且没有应激的溶液条件下也会发生聚集(chi等人,pharmres[药物研究],第20卷，第9期,2003年9月,第1325-1336页,roberts,trendsbiotechnol.[生物技术趋势]2014年7月；32(7):372-80,wang,intjpharm.[国际药学杂志]1999年8月20日；185(2):129-88,mahlerjpharmsci.[药物科学杂志]2009年9月；98(9):2909-34)。[0008]在生物学和生物技术应用中保持蛋白质稳定性和活性面临严重挑战。本领域需要优化的药物组合物，其提供治疗蛋白质的增强的稳定性并减少在配制、填充、运输、储存和施用期间的聚集和变性或降解，从而防止功能丧失和不良免疫原性反应。技术实现要素：[0009]在一方面，本文描述了药物组合物，其包含抗硬骨素抗体；含有谷氨酸、组氨酸或琥珀酸的缓冲液；以及多元醇，其中该药物组合物包含ph4-ph7的ph。[0010]在一些实施例中，缓冲液以约10mm至约50mm的浓度存在。在一些实施例中，多元醇以约1％至约10％w/v的量存在。在一些实施例中，多元醇是山梨糖醇，并且以约5％至约10％w/v的量存在。在一些实施例中，山梨糖醇以约5％w/v的量存在。[0011]在一些实施例中，药物组合物进一步包含甘油(例如，以约1％至约5％w/v的量)。[0012]在一些实施例中，药物组合物进一步包含蔗糖(例如，以约1％至约10％w/v的量)。[0013]在一些实施例中，药物组合物进一步包含除组氨酸之外的氨基酸。在一些实施例中，氨基酸是精氨酸。在一些实施例中，精氨酸以范围从10mm至约250mm的量存在。在一些实施例中，氨基酸是甲硫氨酸。在一些实施例中，甲硫氨酸以约10mm至约100mm的量存在。[0014]在一些实施例中，药物组合物进一步包含表面活性剂。在一些实施例中，表面活性剂是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、f16或曲拉通(triton)。[0015]在一些实施例中，药物组合物包含浓度为至少70mg/ml的抗硬骨素抗体。在一些实施例中，药物组合物包含浓度为约70mg/ml至约210mg/ml的抗硬骨素抗体。[0016]在一些实施例中，抗硬骨素抗体是洛莫索珠单抗(romosozumab)。[0017]在一些实施例中，药物组合物包含10mm谷氨酸和5％山梨糖醇，ph为4.5。在一些实施例中，药物组合物包含10mm谷氨酸和5％山梨糖醇，ph为5.2。在一些实施例中，药物组合物包含10mm琥珀酸和5％山梨糖醇，ph为5.2。在一些实施例中，药物组合物包含10mm组氨酸和5％山梨糖醇，ph为6。[0018]应理解，虽然说明书中的多个实施例是使用“包含”语言呈现的，但在多种情况下，也可以使用“由……组成”或“基本上由……组成”语言来描述相关的实施例。应注意，术语“一种/一个(a或an)”是指一种或多种/一个或多个(oneormore)，例如，“一种/一个免疫球蛋白分子”应理解为代表一种或多种/一个或多个免疫球蛋白分子。同样地，术语“一种/一个”、“一种或多种/一个或多个”以及“至少一种/至少一个(atleastone)”可互换地使用。[0019]还应理解，当描述值范围时，所描述的特征可以是在该范围内找到的单个值。例如，“从约ph4至约ph6的ph”可以是但不限于，ph4、4.2、4.6、5.1、5.5等，以及这些值之间的任何值。另外，“从约ph4至约ph6的ph”不应被解释为意指所考虑配制品的ph在储存期间在ph4至ph6的范围内变化2个ph单位，而是指溶液的ph可以在该范围内挑选值，并且ph在约该ph下保持缓冲。在一些实施例中，当使用术语“约”时，其意指所列举数字加上或减去所列举数字的5％、10％、15％或更多。预期的实际变化可从上下文确定。[0020]在本文描述的任何范围内，该范围的端点包括在该范围内。然而，该描述还考虑了排除较低和/或较高端点的相同范围。从本技术的整体，包括附图和具体实施方式，本发明的另外的特征和变化对于本领域技术人员而言将是显而易见的，并且所有这些特征都旨在作为本发明的方面。同样，本文描述的本说明书的特征可以重组成另外的实施例，这些实施例也旨在作为本发明的方面，无论这些特征的组合是否在上文作为本发明的一个方面或实施例具体提及。而且，只有本文描述为对本发明至关重要的这些限制才应被视为这样的限制；本文未描述为至关重要的、本发明的缺少限制的变化旨在作为本发明的方面。附图说明[0021]图1是显示在4℃下储存长达24个月的各种配制品中洛莫索珠单抗高分子量(hmw)峰面积百分比的图。[0022]图2是显示在37℃下储存长达4周的各种配制品中洛莫索珠单抗高分子量(hmw)峰面积百分比的图。[0023]图3是显示在45℃下储存长达4周的各种配制品中洛莫索珠单抗高分子量(hmw)峰面积百分比的图。[0024]图4是显示如通过阳离子交换hplc评估的在4℃下储存长达24个月的各种配制品中洛莫索珠单抗的主峰面积(％)的图。[0025]图5是显示如通过阳离子交换hplc评估的在-70℃下储存长达24个月的各种配制品中洛莫索珠单抗的主峰面积(％)的图。[0026]图6是显示如通过阳离子交换hplc评估的在4℃、-30℃和-70℃下储存长达24个月的各种配制品中洛莫索珠单抗的主峰面积(％)的图。[0027]图7是显示如通过阳离子交换hplc评估的在4℃、25℃、37℃、45℃、-30℃和-70℃下储存长达4周的各种配制品中洛莫索珠单抗的主峰面积(％)的图。[0028]图8是显示如通过阳离子交换hplc评估的在4℃、25℃、37℃、45℃、-30℃和-70℃下储存长达4周的各种配制品中洛莫索珠单抗的酸性峰面积(％)的图。[0029]图9是显示如通过阳离子交换hplc评估的在4℃、-30℃和-70℃下储存长达24个月的各种配制品中洛莫索珠单抗的酸性峰面积(％)的图。[0030]图10是显示如通过阳离子交换hplc评估的在4℃、-30℃和-70℃下储存长达24个月的各种配制品中洛莫索珠单抗的酸性峰面积(％)的图。[0031]图11是如通过阳离子交换hplc评估的在4℃、25℃和37℃下储存3个月后的配制品配制品4中洛莫索珠单抗的色谱图。[0032]图12是显示在4℃、-30℃和-70℃下储存两年的各种配制品中洛莫索珠单抗的主峰面积(％)的图。[0033]图13是显示如通过阳离子交换hplc评估的在4℃、-30℃和-70℃下储存两年的各种配制品中洛莫索珠单抗的酸性峰面积(％)的图。[0034]图14是显示如通过阳离子交换hplc评估的在4℃、-30℃和-70℃下储存两年的各种配制品中洛莫索珠单抗的碱性峰稳定性的图。[0035]图15是显示如通过毛细管电泳-sds评估的在4℃下储存不同时间点(4周、3个月、6个月、1年、1.5年和2年)的各种配制品中洛莫索珠单抗的高分子量种类百分比的图。[0036]图16是显示如通过hiac评估的在时间0下高浓度注射器研究(各种配制品中的70mg/ml洛莫索珠单抗)结果的图。[0037]图17是显示如通过hiac评估的在2年时间点下高浓度注射器研究(各种配制品中的70mg/ml洛莫索珠单抗)结果的图。[0038]图18是显示如通过hiac评估的在时间0下高浓度注射器研究(各种配制品中的120mg/ml洛莫索珠单抗)结果的图。[0039]图19是显示如通过hiac评估的在2年时间点下高浓度注射器研究(各种配制品中的120mg/ml洛莫索珠单抗)结果的图。具体实施方式[0040]本披露描述了包含抗硬骨素抗体的配制品。配制品的各个方面描述如下。节标题的使用仅仅是为了便于阅读，而不是旨在限制本身。整个文件旨在被视为统一的披露，并且应理解，可以考虑本文描述的特征的所有组合。[0041]在一方面，本文描述了药物配制品，其包含(a)抗硬骨素抗体；(b)含有谷氨酸、组氨酸或琥珀酸的缓冲液；以及(c)多元醇；其中该药物组合物包含ph4-ph7的ph。如实例中所展示的，包含本文所述组分的组合的配制品在温度范围(例如-30℃、-70℃和4℃)下、在多种条件下稳定持续延长的时间段(长达两年)。[0042]稳定性[0043]在包含抗体(或其抗原结合片段)的组合物的上下文中，如本文所用，术语“稳定性”和“稳定的”是指组合物中抗体(或其抗原结合片段)在给定的制造、制备、运输和/或储存条件下对聚集、降解或破碎的抗性。包含高度稳定性的抗体配制品表现出增强的可靠性和安全性，因此对临床用途是有利的。[0044]任选地通过检查组合物中抗体的所希望的参数(例如，重链和/或轻链的聚集、降解，化学修饰等)随时间的变化来评估组合物中的抗体稳定性。在这一点上，通常在初始时间点(t0)和评估时间点(t1)检查参数，任选地同时将抗体暴露于多种环境条件中的任何一种，并进行比较。初始时间点可以是，例如，抗体首次在组合物中配制或首次检查质量的时间(即，检查以确定抗体组合物是否满足关于聚集或降解的法规或制造规范)。初始时间点也可以是抗体在组合物中重新配制的时间(例如，与初始制剂相比，以更高或更低的浓度重新配制)。在多种实施例中，评估时间点是在初始时间点之后约1周(或约2周、或约3周、或约4周、或约5周、或约6周、或约7周、或约8周、或约10周、或约3个月、或约6个月、或约1年)。可在各种储存条件下评估组合物中抗体或其片段的所希望的参数(例如，聚集或降解)，这些储存条件如-30℃、4℃、20℃或40℃的温度、摇动、ph、储存在不同容器材料(例如，玻璃瓶、预填充注射器等)等。[0045]用于确定包含抗体的组合物中存在的聚集体的聚集程度、和/或类型、和/或大小的示例性方法包括但不限于尺寸排阻色谱(sec)、高效尺寸排阻色谱(hpsec)、静态光散射(sls)、傅立叶变换红外光谱(ftir)、圆二色性(cd)、尿素引起的蛋白质去折叠技术、内源性色氨酸荧光、差示扫描量热法、和1-苯胺基-8-萘磺酸(ans)蛋白质结合技术。可以进行尺寸排阻色谱(sec)以基于它们的尺寸分离分子，通过使分子通过填充有适当树脂的柱，较大分子(例如聚集体)将在较小分子(例如单体)之前洗脱。通常通过在280nm处的uv吸光度检测分子，并且可以收集分子用于进一步表征。高压液相色谱柱通常用于sec分析(hp-sec)。可替代地，可以使用分析超离心(auc)。auc是确定液体样品中大分子沉降系数的正交技术。与sec一样，auc能够从单体中分离和检测抗体片段/聚集体，并且进一步能够提供有关分子量的信息。组合物中的抗体聚集也可以通过使用库尔特计数器的颗粒计数器分析、或通过使用浊度计的浊度测量来表征。浊度是溶液中的颗粒散射光的量的量度，因此可以用作蛋白质聚集的一般指标。另外，非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳(page)或毛细管凝胶电泳(cge)可用于表征组合物中抗体或抗体片段的聚集和/或破碎状态。[0046]用于确定抗体降解的示例性方法包括但不限于尺寸排阻色谱(sec)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)和伴sds的毛细管电泳(ce-sds)、以及伴在线ms检测的反相hplc。[0047]在多种实施例中，组合物中小于5％的本文描述的抗体在感兴趣的条件下是聚集形式。例如，在-30℃、4℃、20℃或40℃储存约1周(或约2周、或约3周、或约4周、或约5周、或约6周、或约7周、或约8周、或约10周、或约3个月、或约6个月或约1年)的时间后，组合物中的小于4％、或小于3％、或小于2％、或小于1％的抗体是聚集形式。在一些实施例中，在约4℃储存两周后，组合物中小于5％(或小于4％、或小于3％、或小于2％、或小于1％、或更少)的本文描述的抗体是聚集形式。[0048]例如，在-30℃、4℃、20℃或40℃储存约1周(或约2周、或约3周、或约4周、或约5周、或约6周、或约7周、或约8周、或约10周、或约3个月、或约6个月、或约1年)的时间后，组合物中的至少85％(或至少90％、或至少91％、或至少92％、或至少93％、或至少94％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％)的抗体任选地以非聚集(即，单体)形式存在。在一些实施例中，在约4℃储存两周后，至少85％(或至少90％、或至少91％、或至少92％、或至少93％、或至少94％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％或更多)的抗体在组合物中以非聚集形式存在。在一些实施例中，在约4℃储存两周持续两周后，至少99％的抗体在组合物中以非聚集形式存在，和/或在40℃储存两周后，至少95％的抗体在组合物中以非聚集形式存在。[0049]在多种实施例中，组合物中小于5％的本文描述的抗体是降解的。例如，组合物中小于4％、或小于3％、或小于2％、或小于1％或更少的抗体在感兴趣的条件下降解。例如，任选地储存在约-30℃、约4℃、约20℃或约40℃持续约1周(或约2周、或约3周、或约4周、或约5周、或约6周、或约7周、或约8周、或约10周、或约3个月、或约6个月或约1年)的时间的组合物中的至少85％(或至少90％、或至少91％、或至少92％、或至少93％、或至少94％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％)的抗体是完整的(即，未降解的)。在一些方面，将组合物在约4℃储存两周的时间后，至少85％(或至少90％、或至少91％、或至少92％、或至少93％、或至少94％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％或更多)的抗体是完整的(即非降解的)。在一些实施例中，当在组合物在约4℃储存两周时至少99％的抗体保持完整，和/或当在组合物在约40℃储存两周时至少95％保持完整。[0050]本文还考虑了组合物中抗体的功能或活性稳定性。用于检测和/或定量例如抗体与靶的结合、或硬骨素中和的测定法是本领域已知的。任选地，与在初始时间点的抗体活性相比，抗体在感兴趣的条件下表现出约50％-100％的活性。例如，与初始时间点的活性相比，抗体保持约60％-90％或70％-80％之间的活性水平。因此，抗体的功能稳定性包括至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的活性保留，并且可包括与初始时间点的活性相比，活性测量值大于100％，如105％、110％、115％、120％、125％或150％或更多。[0051]缓冲液[0052]本文描述的药物配制品包含缓冲液，该缓冲液可任选地选自由以下组成的组：组氨酸、谷氨酸和琥珀酸，及其组合。在一些实施例中，药物组合物包含至少一种缓冲液，该缓冲液选自由以下组成的组：组氨酸、谷氨酸和琥珀酸，及其组合。[0053]通常采用缓冲剂来控制配制品中的ph。在一些实施例中，以一定浓度添加缓冲液使配制品的ph保持在约4至7、或约4.5至6、或约5.2。ph对配制品的影响可以使用几种途径中的任何一种或多种来表征，例如加速稳定性研究和量热筛选研究(remmeler.l.jr.,等人,biochemistry[生物化学],38(16):5241-7(1999))。[0054]有机酸、磷酸盐和tris是蛋白质配制品中的合适缓冲液(表1)。缓冲种类的缓冲容量在等于pka的ph下最大，并且随着ph从这个值增加或减小而降低。百分之九十的缓冲能力存在于其pka的一个ph单位内。缓冲容量也随缓冲液浓度的增加而成比例增加。[0055]选择缓冲液时典型地会考虑几个因素。例如，缓冲液种类及其浓度应基于其pka和所希望的配制品ph来定义。同样，缓冲液优选地与蛋白质药物、其他配制品赋形剂相容，并且不催化任何降解反应。聚阴离子羧酸盐缓冲液例如柠檬酸盐和琥珀酸盐可以与蛋白质的侧链残基形成共价加合物。要考虑的第三个方面是缓冲液可能引起的刺痛和刺激感。例如，已知柠檬酸盐在注射时引起刺痛(laursent,等人,basicclinpharmacoltoxicol.[基础临床药理学与毒理学],98(2):218-21(2006))。对于经由sc或im途径施用的药物，刺痛和刺激的可能性更大，其中药物溶液在该位点保留的时间比通过iv途径施用的时间段相对更长，在iv途径中配制品在施用后迅速稀释到血液中。对于通过直接iv输注施用的配制品，需要监测缓冲液(和任何其他配制品组分)的总量。例如，据报道，以磷酸钾缓冲液形式施用的钾离子可以在患者中诱导心血管效应(hollander-rodriguezjc,等人,am.fam.physician.[美国家庭医师],73(2):283-90(2006))。表1.缓冲剂及其pk值[0056]选择配制品中存在的缓冲液系统以在生理学上相容并保持所希望的ph。[0057]缓冲液能以适于将配制品的ph维持在预定水平的任何量存在。缓冲液可以按约0.1mm和约1000mm(1m)之间、或约5mm和约200mm之间、或约5mm至约100mm之间、或约10mm和约50mm之间的浓度存在。合适的缓冲液浓度涵盖约200mm或更低的浓度。在一些实施例中，配制品中的缓冲液以约190mm、约180mm、约170mm、约160mm、约150mm、约140mm、约130mm、约120mm、约110mm、约100mm、约80mm、约70mm、约60mm、约50mm、约40mm、约30mm、约20mm、约10mm或约5mm的浓度存在。在一些实施例中，缓冲液的浓度为至少0.1、0.5、0.7、0.8、0.9、1.0、1.2、1.5、1.7、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500、700、或900mm。在一些实施例中，缓冲液的浓度为在1、1.2、1.5、1.7、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、或90mm和100mm之间。在一些实施例中，缓冲液的浓度为在5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、或40mm和50mm之间。在一些实施例中，缓冲液的浓度为约10mm。[0058]表面活性剂[0059]这里描述的药物组合物包含至少一种表面活性剂。表面活性剂通常用于蛋白质配制品中以防止表面引起的降解。表面活性剂是两亲性分子，具有与蛋白质竞争界面位置的能力。表面活性剂分子的疏水部分占据界面位置(例如，空气/液体)，而分子的亲水部分保持朝向主体溶剂定向。在足够的浓度下(典型地在洗涤剂的临界胶束浓度附近)，表面活性剂分子的表面层用于防止蛋白质分子吸附在界面处。因此，表面引起的降解被最小化。表面活性剂包括例如脱水山梨糖醇聚乙氧基化物的脂肪酸酯，即聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80(参见例如)。两者的不同之处仅在于脂族链的长度，它们分别赋予分子c-12和c-18疏水特征。因此，聚山梨醇酯80比聚山梨醇酯20具有更高的表面活性并且具有更低的临界胶束浓度。表面活性剂泊洛沙姆188也已用于几种市售的液体产品，例如和[0060]洗涤剂还可以影响蛋白质的热力学构象稳定性。在此同样地，给定赋形剂的作用可以是蛋白质特异性的。例如，聚山梨醇酯可以降低一些蛋白质的稳定性并增加其他蛋白质的稳定性。蛋白质的洗涤剂不稳定可以根据洗涤剂分子的疏水尾部来合理解释，这些洗涤剂分子能以部分或完全去折叠的蛋白质状态进行特异性结合。这些类型的相互作用可以引起构象平衡向更扩展的蛋白质状态的转变(即，增加蛋白质分子的疏水部分的暴露以补充结合聚山梨醇酯)。可替代地，如果蛋白质天然状态展现出一些疏水表面，则与天然状态结合的洗涤剂可稳定该构象。[0061]聚山梨醇酯的另一个方面是它们固有地易受氧化降解的影响。通常，作为原料，它们含有足够量的过氧化物以引起蛋白质残基侧链的氧化，尤其是甲硫氨酸。添加稳定剂引起的氧化损伤的可能性强调了配制品中应使用最低有效浓度的赋形剂。对于表面活性剂，给定蛋白质的有效浓度将取决于稳定机制。已经假定，如果表面活性剂稳定的机制与防止表面变性有关，则有效浓度将在洗涤剂的临界胶束浓度附近。相反，如果稳定机制与特定的蛋白质-洗涤剂相互作用相关，则有效的表面活性剂浓度将与蛋白质浓度和相互作用的化学计量有关(randolpht.w.,等人,pharmbiotechnol.[药物生物技术],13:159-75(2002))。[0062]还能以适当的量添加表面活性剂以防止在冷冻和干燥过程中表面相关的聚集现象(chang,b,j.pharm.sci.[药物科学杂志]85:1325,(1996))。示例性表面活性剂包括阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、和两性表面活性剂，包括衍生自天然存在的氨基酸的表面活性剂。阴离子表面活性剂包括但不限于月桂基硫酸钠、丁二酸二辛基磺酸钠和二辛基磺酸钠、鹅去氧胆酸、n-月桂酰肌氨酸钠盐、十二烷基硫酸锂、1-辛烷磺酸钠盐、胆酸钠水合物、脱氧胆酸钠、和甘氨脱氧胆酸钠盐。阳离子表面活性剂包括但不限于苯扎氯铵或苄索氯铵、氯化十六烷基吡啶一水合物和溴化十六烷基三甲铵。两性离子表面活性剂包括但不限于chaps、chapso、sb3-10、和sb3-12。非离子表面活性剂包括但不限于毛地黄皂苷、曲拉通x-100、曲拉通x-114、吐温(tween)20和吐温80。在另一个实施例中，表面活性剂包括聚桂醇400；聚氧乙烯40硬脂酸酯；聚氧乙烯氢化蓖麻油10、40、50和60；甘油单硬脂酸酯；聚山梨醇酯40、60、65和80；大豆卵磷脂和其他磷脂例如dopc、dmpg、dmpc、和dopg；蔗糖脂肪酸酯；甲基纤维素和羧甲基纤维素。[0063]本文描述的药物组合物包含单独的或呈不同比率的混合物的至少一种表面活性剂。在一些实施例中，组合物包含浓度为约0.001％至约5％w/v(或约0.004至约0.5％w/v或约0.001至约0.01％w/v或约0.004至约0.01％w/v)的表面活性剂。在一些实施例中，组合物包含浓度为至少0.001、至少0.002、至少0.003、至少0.004、至少0.005、至少0.007、至少0.01、至少0.05、至少0.1、至少0.2、至少0.3、至少0.4、至少0.5、至少0.6、至少0.7、至少0.8、至少0.9、至少1.0、至少1.5、至少2.0、至少2.5、至少3.0、至少3.5、至少4.0、或至少4.5％w/v的表面活性剂。在一些实施例中，组合物包含浓度为约0.004％至约0.5％w/v的表面活性剂。在一些实施例中，组合物包含浓度为约0.004至约0.5％w/v的表面活性剂。在一些实施例中，组合物包含浓度为约0.001至约0.01％w/v的表面活性剂。在一些实施例中，组合物包含浓度为约0.004至约0.01％w/v的表面活性剂。在一些实施例中，组合物包含浓度为约0.004、约0.005、约0.007、约0.01、约0.05、约0.1、约0.2、约0.3、约0.4％w/v至约0.5％w/v的表面活性剂。在一些实施例中，组合物包含以约0.001％至约0.01％w/v的浓度掺入的表面活性剂。[0064]糖[0065]本文描述的药物组合物包含至少一种糖。可以添加糖作为稳定剂或膨胀剂。如本文所用，术语“稳定剂”是指能够防止聚集或其他物理降解以及水和固态的化学降解(例如，自溶、脱酰胺化、氧化等)的赋形剂。应用于药物组合物中的稳定剂包括但不限于蔗糖、海藻糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、葡萄糖、棉子糖、纤维二糖、龙胆二糖、异麦芽糖、阿拉伯糖、葡糖胺、果糖、甘露糖醇、山梨糖醇、甘氨酸、精氨酸hcl、多羟基化合物(包括多糖例如葡聚糖、淀粉、羟乙基淀粉、环糊精、n-甲基吡咯烷、纤维素和透明质酸)、和氯化钠(carpenter等人,develop.biol.standard[生物标准化的发展]74:225,(1991))。[0066]在一些实施例中，至少一种糖选自由以下组成的组：单糖、二糖、环状多糖、糖醇、线性支链型葡聚糖和线性非支链型葡聚糖、或其组合。在一些实施例中，至少一种糖是选自下组的二糖，该组由以下组成：蔗糖、海藻糖、甘露糖醇和山梨糖醇或其组合。[0067]在一些实施例中，药物组合物包含浓度为约0.01％至约40％w/v、或约0.1％至约20％w/v、或约1％至约15％w/v的至少一种糖。在一些实施例中，药物组合物包含浓度为至少0.5、至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少30、或至少40％w/v的至少一种糖。在一些实施例中，药物组合物包含浓度为约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％至约15％w/v的至少一种糖。在一些实施例中，药物组合物包含浓度为约1％至约15％w/v的至少一种糖。在又另一个实施例中，药物组合物包含浓度为约9％、约9.5％、约10％、约10.5％、约11％、约11.5％、或约12％w/v的至少一种糖。在一些实施例中，药物组合物包含浓度为约9％至约12％w/v的至少一种糖。在一些实施例中，至少一种糖在组合物中的浓度为约9％w/v。在一些实施例中，至少一种糖是山梨糖醇、蔗糖、海藻糖或甘露糖醇或其组合。[0068]在一些实施例中，配制品包含约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、或约12％的量的山梨糖醇。在一些实施例中，配制品包含约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、或约10％的量的山梨糖醇。在一些实施例中，配制品包含约5％的量的山梨糖醇。[0069]在一些实施例中，配制品进一步包含蔗糖，并且在组合物中以范围从1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％至约15％w/v存在。在一些实施例中，配制品进一步包含约9％的量的蔗糖。[0070]在一些实施例中，配制品进一步包含甘油。在一些实施例中，配制品进一步包含约1％、约2％、约3％、约4％、或约5％的量的甘油。配制品任选地进一步包含约1％或约2.5％的量的甘油。[0071]如果希望，配制品还包括适于形成冻干的“饼”的适量的膨胀和渗透压调节剂，例如糖。[0072]在一些实施例中，配制品进一步包含甘油。在一些实施例中，配制品进一步包含约1％、约2％、约3％、约4％、或约5％的量的甘油。配制品进一步包含约1％或约2.5％的量的甘油。[0073]在一些实施例中，配制品包含10mm谷氨酸和5％山梨糖醇，ph为4.5。[0074]在一些实施例中，配制品包含10mm谷氨酸和5％山梨糖醇，ph为5.2。[0075]在一些实施例中，配制品包含10mm琥珀酸和5％山梨糖醇，ph为5.2。[0076]在一些实施例中，配制品包含10mm组氨酸和5％山梨糖醇，ph为6。[0077]其他考虑[0078]如本文所用，术语“药物组合物”涉及适于向有需要的受试者施用的组合物。术语“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”在本文中可互换地使用，是指任何希望施用本发明的药物组合物的受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人、非人灵长类动物、狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、牛、母牛等，优选人。本披露的药物组合物是稳定的和药学上可接受的，即能够引发所希望的治疗效果，而不会在施用药物组合物的受试者中引起显著不希望的局部或全身性作用。本披露的药学上可接受的组合物可以是无菌的和/或药学上惰性的。具体地，术语“药学上可接受的”可以意指由管理机构或其他受普遍承认的药典批准在动物中使用，并且更特别地在人中使用。[0079]本披露提供的配制品包含本文描述的抗体。在一些实施例中，提供了治疗有效量的抗体。“治疗有效量”是指所述异源二聚体抗体的引发所希望的治疗效果的量。可以通过标准药物方法在细胞培养物或实验性动物中确定治疗功效和毒性，例如ed50(在群体的50％中治疗有效的剂量)和ld50(对群体的50％致死的剂量)。治疗和毒性作用之间的剂量比为治疗指数，并且它能以ed50/ld50比表示。通常优选展现出大治疗指数的配制品。[0080]蛋白质配制品通常肠胃外施用。肠胃外给予时，它们必须是无菌的。无菌稀释剂包括药学上可接受的(对人施用是安全且无毒的)并且对于制备液体配制品(例如冻干后重构的配制品)是有用的液体。示例性稀释剂包括无菌水、注射用抑菌水(bwfi)、ph缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。稀释剂可包括盐和/或缓冲液的水溶液。[0081]赋形剂是包括在配制品中的添加剂，因为它们赋予或增强药物产品的稳定性、递送和可制造性。无论其包含的原因如何，赋形剂都是药物产品的整体组分，并且因此需要安全且患者耐受良好。对于蛋白质药物，赋形剂的选择特别重要，因为它们可以影响药物的功效和免疫原性两者。因此，需要在适当选择赋形剂的情况下开发蛋白质配制品，这些赋形剂提供合适的稳定性、安全性和适销性。[0082]本文描述的赋形剂通过它们的化学类型或它们在配制品中的功能作用来组织。当讨论每种赋形剂类型时，提供了稳定模式的简要说明。鉴于本文提供的教导和指导，本领域技术人员将能够容易地改变赋形剂的量或范围，而不会将粘度增加至不希望的水平。可以选择赋形剂以实现最终溶液的所希望的渗透压(即等渗、低渗或高渗)，ph，所希望的稳定性，抗聚集或抗降解或抗沉淀，在冷冻、冻干或高温条件下的保护，或其他性质。本领域已知各种类型的赋形剂。示例性赋形剂包括盐、氨基酸、其他张度剂、表面活性剂、稳定剂、膨胀剂、冷冻保护剂、冻干保护剂、抗氧化剂、金属离子、螯合剂和/或防腐剂。[0083]此外，在以例如百分比(％)w/v报告在配制品中的特定赋形剂的情况下，本领域技术人员将认识到也考虑了该赋形剂的当量摩尔浓度。[0084]其他稳定剂和膨胀剂[0085]稳定剂包括一类可用作冷冻保护剂、冻干保护剂、和玻璃形成剂的化合物。冷冻保护剂用于在低温下在冷冻期间或在冷冻状态稳定蛋白质。通过在冷冻干燥的脱水阶段期间保留蛋白质的天然样构象性质，冻干保护剂稳定冷冻干燥的固体剂型中的蛋白质。玻璃态性质根据其作为温度的函数的松弛性质被分类为“强”或“易碎”。重要的是，冷冻保护剂、冻干保护剂和玻璃形成剂与蛋白质保持相同的相以赋予稳定性。糖、聚合物和多元醇落入此类别，并且有时可以发挥所有三种作用。[0086]多元醇涵盖一类赋形剂，其包括糖(例如甘露糖醇、蔗糖、或山梨糖醇)和其他多元醇(例如甘油和丙二醇)。聚合物聚乙二醇(peg)包括在这个类别中。多元醇通常用作液体和冻干的肠胃外蛋白质配制品两者中的稳定赋形剂和/或等张剂。多元醇可以保护蛋白质免受物理和化学降解途径的影响。[0087]示例性c3-c6多元醇包括丙二醇、丙三醇(甘油)、苏糖、苏糖醇、赤藓糖、赤藓糖醇、核糖、阿拉伯糖、阿拉伯糖醇、来苏糖、麦芽糖醇、山梨糖醇、山梨糖、葡萄糖、甘露糖、甘露糖醇、左旋糖、右旋糖、麦芽糖、海藻糖、果糖、木糖醇、肌醇、半乳糖、木糖、果糖、蔗糖、1,2,6-己三醇等。高级糖包括葡聚糖、丙二醇或聚乙二醇。与非还原糖相比，还原糖，例如果糖、麦芽糖或半乳糖更容易氧化。糖醇的另外的实例是葡糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇或异麦芽酮糖。另外的示例性冻干保护剂包括丙三醇和明胶，以及蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖和水苏糖。还原糖的实例包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、麦芽酮糖、异麦芽酮糖和乳果糖。非还原糖的实例包括选自糖醇和其他直链多元醇的多羟基化合物的非还原糖苷。单糖苷包括通过还原二糖(例如乳糖、麦芽糖、乳果糖和麦芽酮糖)而获得的化合物。[0088]氨基酸[0089]在一些实施例中，本文描述的药物组合物进一步包含一种或多种氨基酸作为缓冲液、膨胀剂、稳定剂和/或抗氧化剂。可以采用组氨酸和谷氨酸来缓冲蛋白质配制品，ph范围分别为ph5.5-ph6.5和ph4.0-ph5.5。氨基酸甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸和丙氨酸稳定蛋白质。[0090]在一些实施例中，配制品进一步包含除组氨酸之外的氨基酸。[0091]在一些实施例中，配制品进一步包含精氨酸，任选地量的范围为从约10mm至约250mm(例如约10mm、约20mm、约30mm、约40mm、约50mm、约60mm、约70mm、约80mm、约90mm、约100mm、约110mm、约120mm、约130mm、约140mm、约150mm、约160mm、约170mm、约180mm、约190mm、约200mm、约210mm、约220mm、约230mm、约240mm或约250mm)。在一些实施例中，配制品进一步包含约100mm的量的精氨酸。[0092]在一些实施例中，配制品进一步包含甲硫氨酸，任选地量的范围为从约10mm至约100mm(例如约10mm、约20mm、约30mm、约40mm、约50mm、约60mm、约70mm、约80mm、约90mm、或约100mm)。在一些实施例中，配制品进一步包含约20mm的量的甲硫氨酸。[0093]抗氧化剂[0094]在一些实施例中，本文描述的药物组合物进一步包含一种或多种抗氧化剂。蛋白质残基的氧化来自许多不同的来源。除了添加具体的抗氧化剂之外，防止氧化蛋白质损害涉及在整个制造过程和产品储存中仔细控制许多因素，例如大气氧、温度、光暴露和化学污染。最常用的药物抗氧化剂是还原剂、氧/自由基清除剂或螯合剂。治疗蛋白质配制品中的抗氧化剂必须是水溶性的并且在整个产品保质期内保持活性。还原剂和氧/自由基清除剂通过消融溶液中的活性氧种类起作用。通过结合促进自由基形成的痕量金属污染物，例如edta的螯合剂可以是有效的。[0095]然而，抗氧化剂本身可以诱导对蛋白质的其他共价或物理变化。根据蛋白质的特定应激和敏感性选择合适的抗氧化剂。[0096]金属离子[0097]在一些实施例中，药物组合物进一步包含一种或多种金属离子。通常，过渡金属离子在蛋白质配制品中是不希望的，因为它们可以催化蛋白质中的物理和化学降解反应。然而，当它们是蛋白质的辅因子且在蛋白质的悬浮液配制品中时，特定金属离子包括在配制品中，其中它们形成配位络合物(例如胰岛素的锌悬浮液)。[0098]防腐剂[0099]在一些实施例中，药物组合物进一步包含一种或多种防腐剂。当开发涉及从相同容器中多次提取的多次使用肠胃外配制品时，防腐剂可以是必需的。可以使用的防腐剂包括苯酚、苯甲醇、间甲酚、烷基对羟基苯甲酸酯(例如羟苯甲酸甲酯或羟基苯甲酸丙酯)、苯扎氯铵和苄索氯铵。具有抗微生物防腐活性的化合物的其他实例包括十八烷基二甲基苄基氯化铵、氯化六烃季铵。其他类型的防腐剂包括芳香醇，例如丁醇、苯酚、苯甲醇；邻苯二酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇。[0100]一些防腐剂会引起注射位点反应，这是选择防腐剂时需要考虑的另一个因素。然而，本披露还考虑了不包含任何防腐剂的药物组合物。[0101]配制品中的抗体[0102]“抗硬骨素抗体”或“与硬骨素结合的抗体”是与seqidno:1的硬骨素结合的抗体或其部分。重组人硬骨素/sost可从例如，r&d系统公司(r&dsystems)(明尼阿波里斯市，明尼苏达州，美国；2006目录号1406-st-025)商购。美国专利号6,395,511和6,803,453、以及美国专利公开号2004/0009535和2005/0106683通常是指抗硬骨素抗体。适用于本发明上下文的硬骨素抗体的实例也描述在美国专利公开号2007/0110747和2007/0072797中，将其通过引用以其整体特此并入。关于产生硬骨素抗体的材料和方法的另外的信息可以在美国专利公开号20040158045(通过引用特此并入)中找到。[0103]术语“抗体”是指完整的免疫球蛋白分子(包括具有全长重链和/或轻链的多克隆、单克隆、嵌合、人源化、和/或人形式)。[0104]如本文所用，“特异性结合”意指抗体优先结合抗原而不是其他蛋白质。在一些实施例中，“特异性结合”意指抗体对抗原的亲和力高于对其他蛋白质的亲和力。特异性结合抗原的抗体对于抗原可具有以下结合亲和力：小于或等于1x10-7m、小于或等于2x10-7m、小于或等于3x10-7m、小于或等于4x10-7m、小于或等于5x10-7m、小于或等于6x10-7m、小于或等于7x10-7m、小于或等于8x10-7m、小于或等于9x10-7m、小于或等于1x10-8m、小于或等于2x10-8m、小于或等于3x10-8m、小于或等于4x10-8m、小于或等于5x10-8m、小于或等于6x10-8m、小于或等于7x10-8m、小于或等于8x10-8m、小于或等于9x10-8m、小于或等于1x10-9m、小于或等于2x10-9m、小于或等于3x10-9m、小于或等于4x10-9m、小于或等于5x10-9m、小于或等于6x10-9m、小于或等于7x10-9m、小于或等于8x10-9m、小于或等于9x10-9m、小于或等于1x10-10m、小于或等于2x10-10m、小于或等于3x10-10m、小于或等于4x10-10m、小于或等于5x10-10m、小于或等于6x10-10m、小于或等于7x10-10m、小于或等于8x10-10m、小于或等于9x10-10m、小于或等于1x10-11m、小于或等于2x10-11m、小于或等于3x10-11m、小于或等于4x10-11m、小于或等于5x10-11m、小于或等于6x10-11m、小于或等于7x10-11m、小于或等于8x10-11m、小于或等于9x10-11m、小于或等于1x10-12m、小于或等于2x10-12m、小于或等于3x10-12m、小于或等于4x10-12m、小于或等于5x10-12m、小于或等于6x10-12m、小于或等于7x10-12m、小于或等于8x10-12m、或小于或等于9x10-12m。[0105]在一些或任何实施例中，抗体与seqidno:1的硬骨素、或其天然存在的变体以小于或等于1x10-7m、小于或等于1x10-8m、小于或等于1x10-9m、小于或等于1x10-10m、小于或等于1x10-11m、或小于或等于1x10-12m的亲和力(kd)进行结合。使用多种技术，例如亲和elisa测定确定亲和力。在多种实施例中，通过biacore测定确定亲和力。在多种实施例中，通过动力学方法确定亲和力。在多种实施例中，通过平衡/溶液方法确定亲和力。美国专利公开号2007/0110747(其披露内容通过引用并入本文)含有适用于确定抗体对硬骨素的亲和力(kd)的亲和力测定的另外的描述。[0106]在一些或任何实施例中，本文描述的抗硬骨素抗体优选地在美国专利公开号2007/0110747中描述的基于细胞的测定和/或美国专利公开号20070110747中描述的体内测定中调节硬骨素功能、和/或与美国专利公开号2007/0110747中描述的一个或多个表位结合、和/或交叉阻断美国专利公开号2007/0110747中描述的抗体之一的结合、和/或被美国专利公开号2007/0110747中描述的抗体之一与硬骨素的结合而交叉阻断(通过引用以其整体并入，以及针对用于表征抗硬骨素抗体的测定的描述)。[0107]“cdr”是指在抗体可变序列内的互补决定区。对于每个可变区，在重链和轻链的每个可变区中存在三个cdr，其被称为cdr1、cdr2和cdr3。如本文所用，术语“六个cdr的组”是指在轻链可变区和重链可变区中出现的能够结合抗原的三个cdr的组。根据不同的系统，cdr的确切边界已被不同地定义。由kabat(kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest[免疫学感兴趣的蛋白质序列]nationalinstitutesofhealth[国立卫生研究院],贝塞斯达,马里兰州(1987)和(1991))描述的系统不仅提供了适用于抗体的任何可变区的精确的残基编号系统，而且提供了定义三个cdr的精确残基边界。这些cdr可以被称为kabatcdr。chothia和同事(chothia和lesk,j.mol.biol.[分子生物学杂志]196:901-917(1987)以及chothia等人,nature[自然]342:877-883(1989))发现kabatcdr内的某些子部分采用几乎相同的肽骨架构象，尽管在氨基酸序列水平上具有很大的多样性。这些子部分被指定为l1、l2和l3或h1、h2和h3，其中“l”和“h”分别表示轻链区域和重链区域。这些区域可以称为chothiacdr，其具有与kabatcdr重叠的边界。由padlan(fasebj.[美国实验生物学会联合会期刊]9:133-139(1995))和maccallum(jmolbiol[分子生物学杂志]262(5):73245(1996))描述了定义与kabatcdr重叠的cdr的其他边界。其他cdr边界定义可以不严格遵循上述系统之一，但将仍然会与kabatcdr重叠，尽管根据特定残基或残基组或甚至整个cdr的预测或实验结果，它们可能会被缩短或延长而不显著影响抗原结合。本文使用的方法可以利用根据任何这些系统定义的cdr，但优选的实施例使用kabat或chothia定义的cdr。[0108]通过例如构建编码感兴趣的cdr的多核苷酸来获得cdr。例如，通过使用聚合酶链反应、使用产生抗体的细胞的mrna作为模板合成可变区来制备此类多核苷酸(参见例如，larrick等人,methods:acompaniontomethodsinenzymology,[方法：酶学方法指南]2:106(1991)；courtenay-luck,“geneticmanipulationofmonoclonalantibodies[单克隆抗体的遗传操作],”在monoclonalantibodiesproduction[单克隆抗体生产]中,engineeringandclinicalapplication[工程及临床应用],ritter等人(编辑),第166页,剑桥大学出版社(cambridgeuniversitypress)(1995)；以及ward等人,“geneticmanipulationandexpressionofantibodies[抗体的遗传操作和表达],”在monoclonalantibodies:principlesandapplications[单克隆抗体：原理与应用]中,birch等人,(编辑),第137页(威利利斯出版公司(wiley-liss,inc.)1995))。[0109]在多个方面，抗体包含与选自cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2、和cdr-l3的cdr具有至少75％同一性(例如，至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性)的至少一个cdr序列，其中cdr-h1具有seqidno:2中给出的序列，cdr-h2具有seqidno:3中给出的序列，cdr-h3具有seqidno:4中给出的序列，cdr-l1具有seqidno:5中给出的序列，cdr-l2具有seqidno:6中给出的序列，并且cdr-l3具有seqidno:7中给出的序列。在多个方面，抗硬骨素抗体包含两个cdr或六个cdr。[0110]在优选的实施例中，抗硬骨素抗体包含如下六个cdr的组：seqidno:2的cdr-h1、seqidno:3的cdr-h2、seqidno:4的cdr-h3、seqidno:5的cdr-l1、seqidno:6的cdr-l2、和seqidno:7的cdr-l3。[0111]在一些或任何实施例中，抗体包含轻链可变区和重链可变区，该轻链可变区包含与seqidno:8中所示的氨基酸序列具有至少75％同一性(例如，至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性)的氨基酸序列，该重链可变区包含与seqidno:9中所示的氨基酸序列具有至少75％同一性(例如，至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性)的氨基酸序列。在多个方面，与seqidno:8或9相比，序列的差异位于对应序列中的cdr区域之外。在一些或任何实施例中，抗体包含轻链可变区和重链可变区，该轻链可变区包含seqidno:8中所示的氨基酸序列，该重链可变区包含seqidno:9中所示的氨基酸序列。[0112]在一些或任何实施例中，抗硬骨素抗体包含重链(例如，两条重链)的全部或部分和轻链(例如，两条轻链)的全部或部分，该重链包含与seqidno:11中所示的氨基酸序列具有至少75％同一性(例如，至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性)的氨基酸序列，该轻链包含与seqidno10中所示的氨基酸序列具有至少75％同一性(例如，至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性)的氨基酸序列。[0113]在一些或任何实施例中，抗硬骨素抗体包含重链(例如，两条重链)的全部或部分和轻链(例如，两条轻链)的全部或部分，该重链包含与seqidno:13中所示的氨基酸序列具有至少75％同一性(例如，至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性)的氨基酸序列，该轻链包含与seqidno12中所示的氨基酸序列具有至少75％同一性(例如，至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一性)的氨基酸序列。[0114]其他抗硬骨素抗体的实例包括但不限于披露于国际专利公开号wo2008/092894、wo2008/115732、wo2009/056634、wo2009/047356、wo2010/100200、wo2010/100179、wo2010/115932、和wo2010/130830(其每个通过引用以其整体并入本文)中的抗硬骨素抗体。[0115]本领域技术人员将理解，一些蛋白质(如抗体)可以经历多种翻译后修饰。这些修饰的类型和程度通常取决于用于表达蛋白质的宿主细胞系以及培养条件。此类修饰可包括糖基化、甲硫氨酸氧化、二酮哌嗪形成、天冬氨酸异构化、和天冬酰胺脱酰胺的变化。频繁的修饰是由于羧肽酶的作用而丧失羧基末端碱性残基(例如赖氨酸或精氨酸)(如描述在harris,rj.journalofchromatography[色谱学杂志]705:129-134,1995中)。[0116]其他修饰包括对脯氨酸和赖氨酸的羟基化、对丝氨酰或苏氨酰残基的羟基基团的磷酸化、对赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基基团的甲基化(t.e.creighton,proteins:structureandmolecularproperties[蛋白质：结构和分子特性],w.h.弗里曼公司(w.h.freeman&co.),旧金山,第79-86页[1983]，通过引用整体并入)、对n末端胺的乙酰化、和对任何c末端羧基基团的酰胺化。[0117]在一些实施例中，配制品中的抗硬骨素抗体以至少约70mg/ml、约71mg/ml、约72mg/ml、约73mg/ml、约74mg/ml、约75mg/ml、约76mg/ml、约77mg/ml、约78mg/ml、约79mg/ml、约80mg/ml、约81mg/ml、约82mg/ml、约83mg/ml、约84mg/ml、约85mg/ml、约86mg/ml、约87mg/ml、约88mg/ml、约89mg/ml、约90mg/ml、约91mg/ml、约92mg/ml、约93mg/ml、约94mg/ml、约95mg/ml、约96mg/ml、约97mg/ml、约98mg/ml、约99mg/ml、约100mg/ml、约101mg/ml、约102mg/ml、约103mg/ml、约104mg/ml、约105mg/ml、约106mg/ml、约107mg/ml、约108mg/ml、约109mg/ml、约110mg/ml、约111mg/ml、约112mg/ml、约113mg/ml、约114mg/ml、约115mg/ml、约116mg/ml、约117mg/ml、约118mg/ml、约119mg/ml、约120mg/ml、约121mg/ml、约122mg/ml、约123mg/ml、约124mg/ml、约125mg/ml、约126mg/ml、约127mg/ml、约128mg/ml、约129mg/ml、约130mg/ml、约131mg/ml、约132mg/ml、约132mg/ml、约133mg/ml、约134mg/ml、约135mg/ml、约136mg/ml、约137mg/ml、约138mg/ml、约139mg/ml、约140mg/ml、约141mg/ml、约142mg/ml、约143mg/ml、约144mg/ml、约145mg/ml、约146mg/ml、约147mg/ml、约148mg/ml、约149mg/ml、约150mg/ml、约151mg/ml、约152mg/ml、约153mg/ml、约154mg/ml、约155mg/ml、约156mg/ml、约157mg/ml、约158mg/ml、约159mg/ml、或约160mg/ml的浓度存在，并且范围可以高达例如约300mg/ml、约290mg/ml、约280mg/ml、约270mg/ml、约260mg/ml、约250mg/ml、约240mg/ml、约230mg/ml、约220mg/ml、约210mg/ml、约200mg/ml、约190mg/ml、约180mg/ml、或约170mg/ml。考虑了具有前述端点的组合的任何范围，该范围包括但不限于：约70mg/ml至约250mg/ml、约70mg/ml至约200mg/ml、约70mg/ml至约160mg/ml、约100mg/ml至约250mg/ml、约100mg/l至约200mg/ml、或约100mg/ml至约180mg/ml。[0118]粘度[0119]在一些实施例中，确定包含一种或多种本文描述的抗体的组合物的粘度。如本文所用，术语“粘度”是指“绝对粘度”。绝对粘度(有时称为动态或简单粘度)是运动粘度和流体密度的乘积(绝对粘度＝运动粘度x密度)。运动粘度的尺寸为l2/t，其中l是长度并且t是时间。通常，运动粘度以厘司(cst)表示。运动粘度的si单位是mm2/s，其是1cst。绝对粘度以厘泊(cp)的单位表示。绝对粘度的si单位是毫帕-秒(mpa-s)，其中1cp＝1mpa-s。[0120]组合物的粘度可以在向组合物中添加抗体后数小时(例如，1-23小时)、数天(例如，1-10天)、数周(例如，1-5周)、数月(例如，1-12个月)、或数年(例如，1-2年、1-3年)测量。粘度测量可以在储存或施用温度(例如2℃-8℃或25℃(室温))下进行。在一些实施例中，液体或重构的液体组合物在储存和/或施用温度下的绝对粘度为15cp或更低，或14、13、12、11、10、9、8、7、6、5或4cp或更低。在一些实施例中，液体或重构的液体组合物的绝对粘度为6cp或更低。[0121]在一些实施例中，在添加抗体之前和之后测量抗体组合物的粘度。测量粘度的方法是本领域公知的，这些方法包括例如使用毛细管粘度计、或锥板流变仪。可以使用任何方法，其条件是使用相同的方法来比较测试和参考配制品。[0122]治疗方法[0123]本文描述的抗体和药物组合物可用于治疗或预防骨相关障碍，如与异常成骨细胞或破骨细胞活性相关的骨相关障碍。在一些实施例中，将抗体施用至经受选自下组的骨相关障碍的受试者，该组由以下组成：软骨发育不全、颅骨锁骨发育不良、内生软骨瘤病、纤维性结构不良、戈谢病(gaucher'sdisease)、低血磷性佝偻病、马方综合征、多发性遗传性外生骨疣、神经纤维瘤病、成骨不全、骨硬化病、全身脆性骨硬化、硬化性病变、假关节、化脓性骨髓炎、牙周病、抗癫痫药物引起的骨质流失、原发性和继发性甲状旁腺功能亢进、家族性甲状旁腺功能亢进综合征、失重引起的骨质流失、男性骨质疏松症、绝经后骨质流失、骨关节炎、肾性骨营养不良、骨浸润性障碍、口腔骨质流失、颌骨坏死、幼年型佩吉特病(juvenilepaget'sdisease)、肢骨纹状肥大、代谢性骨病、肥大细胞增多症、镰状细胞性贫血/疾病、器官移植相关的骨质流失、肾移植相关的骨质流失、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、癫痫、幼年型关节炎、地中海贫血、黏多糖贮积症、法布里病(fabrydisease)、特纳综合征、唐氏综合征、克兰费尔特综合征(klinefeltersyndrome)、麻风、股骨头骨骺骨软骨病(perthe’sdisease)、青少年特发性脊柱侧凸、婴儿期发病的多系统炎症性疾病、温彻斯特综合征(winchestersyndrome)、门克斯病(menkesdisease)、威尔逊氏病(wilson'sdisease)、缺血性骨病(如雷卡佩氏病(legg-calve-perthesdisease)和局限性游走性骨质疏松症)、贫血状态、类固醇引起的病症、糖皮质激素引起的骨质流失、肝素引起的骨质流失、骨髓障碍、坏血病、营养不良、钙缺乏、骨质疏松症、骨质减少、酗酒、慢性肝病、绝经后状态、慢性炎症性病症、类风湿性关节炎、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、炎症性结肠炎、克罗恩氏病(crohn'sdisease)、月经过少、闭经、怀孕相关的骨质流失、糖尿病、甲状腺功能亢进、甲状腺障碍、甲状旁腺障碍、库欣病(cushing'sdisease)、肢端肥大症、性腺功能减退症、固定术或废用(immobilizationordisuse)、反射性交感神经营养不良综合征、局限性骨质疏松症、骨软化、与关节置换相关的骨质流失、hiv相关的骨质流失、与生长激素损失相关的骨质流失、与囊性纤维化相关的骨质流失、化学疗法相关的骨质流失、肿瘤引起的骨质流失、癌症相关的骨质流失、激素消融性骨质流失(hormoneablativeboneloss)、多发性骨髓瘤、药物引起的骨质流失、神经性厌食、疾病相关的面部骨质流失、疾病相关的颅骨骨质流失、疾病有关的颌骨骨质流失、疾病相关的头骨骨质流失、与衰老相关的骨质流失、与衰老相关的面部骨质流失、与衰老相关的颅骨骨质流失、与衰老相关的颌骨骨质流失、与衰老相关的头骨骨质流失、以及与太空旅行有关的骨质流失。[0124]在一些实施例中，本文描述的抗体可用于改善整形外科手术、牙科手术、植入手术、关节置换、骨移植、骨整形手术和骨修复(如骨折愈合、骨不连愈合、延迟愈合(delayedunionhealing)和面部重建)的结局。可在手术、置换、移植、外科手术或修复之前、期间和/或之后施用包含一种或多种抗体的组合物。[0125]在一些实施例中，本文描述的抗体可用于治疗任何骨折，该骨折包含两段骨之间的间隙(例如，两段骨之间的间隙为至少约1mm)。在一些或任何实施例中，间隙是至少约2mm、至少约3mm、至少约4mm、至少约5mm、至少约6mm、至少约7mm、至少约8mm、至少约9mm、或至少约1cm或更大。在一些或任何实施例中，间隙是约5mm至1cm、或高达1cm。术语“骨间隙缺损”和“节段性骨骼缺损”在本文中同义使用，并且是指两段骨之间的间隙(例如，至少1mm的间隙)。[0126]示例性骨间隙缺损包括但不限于粉碎性骨折、非愈合性骨折、节段性骨骼缺损、外科手术创建的骨缺损、外科手术治疗的骨缺损、以及由骨或疾病的创伤性损伤产生的骨缺损(包括但不限于关节炎、肿瘤去除(切除)、或感染去除)。在一些或任何实施例中，通过去除感染的骨切片或由于骨癌而从骨中去除癌症产生骨间隙缺损，这些骨癌包括但不限于骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、纤维肉瘤、和脊索瘤。在一些或任何实施例中，骨间隙缺损是发育畸形，例如，由于遗传缺损。[0127]在一些或任何实施例中，通过去除含有良性肿瘤的骨切片产生骨间隙缺损。示例性良性骨肿瘤包括但不限于骨瘤、骨样骨瘤、成骨细胞瘤、骨软骨瘤、内生软骨瘤、软骨粘液样纤维瘤、动脉瘤样骨囊肿、单房性骨囊肿、骨纤维性结构不良、和骨巨细胞肿瘤。[0128]抗体不需要治愈受试者的障碍或完全保护免于骨相关障碍的发作以实现有益的生物反应。可以将抗体预防性使用，意指全部或部分保护免于骨相关障碍或其症状。抗体还可以在治疗上用于全部或部分改善骨相关障碍或其症状，或者全部或部分保护免于骨相关障碍或其症状的进一步进展。实际上，本发明的材料和方法特别适用于增加骨矿物质密度，并且任选地在一段时间内保持增加的骨矿物质密度。[0129]在一些实施例中，在例如约1周至约18个月(例如，约1个月至约12个月、约1个月至约9个月、或约1个月至约6个月、或约1个月至约3个月)的治疗期内进行本文描述的抗体的一次或多次施用。在一些实施例中，在例如约1个月至约12个月(52周)(例如，约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、或约11个月)的治疗期内向受试者施用一个或多个剂量的本文描述的抗体。[0130]另外，取决于针对特定受试者选择的治疗方案，施用多剂量的抗体或间隔开施用剂量可能是有利的。在一些实施例中，在一年(12个月、52周)或更少(例如，9个月或更少、6个月或更少、或3个月或更少)的时间段内定期施用抗体或其片段。在这一点上，将抗体或其片段以每约3天、或约7天、或2周、或3周、或4周、或5周、或6周、或7周、或8周、或9周、或10周、或11周、或12周、或13周、或14周、或15周、或16周、或17周、或18周、或19周、或20周、或21周、或22周、或23周、或6月、或12月一次施用至人。[0131]在一些实施例中，以有效增加骨矿物质密度或治疗与骨矿物质密度降低相关的骨障碍的量和持续时间施用一个或多个剂量的抗体。在多种实施例中，每周向受试者(例如，人受试者)施用包含从约50毫克至约1,000毫克的一个或多个剂量的抗体。例如，抗体的剂量可以包含至少约5mg、15mg、25mg、50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约120mg、约150mg、约200mg、约210mg、约240mg、约250mg、约280mg、约300mg、约350mg、约400mg、约420mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg或高达约1,000mg的抗体。还考虑了在任何与所有这些端点之间的范围，例如约50mg至约80mg、约70mg至约140mg、约70mg至约270mg、约75mg至约100mg、约100mg至约150mg、约140mg至约210mg、或约150mg至约200mg、或约180mg至约270mg、或约280至约410mg。剂量以任何间隔施用，例如每周多次(例如，每周两次或三次)、每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次。在一些或任何实施例中，每月两次施用范围为从约120mg至约210mg的剂量的抗体。在一些或任何实施例中，每月两次施用约140mg剂量的抗体。在多个方面，每月一次施用约210mg剂量的抗体。[0132]在一些实施例中，一个或多个剂量的抗体可以包含在约0.1至约50毫克之间(例如，在约5至约50毫克之间)、或约1至约100毫克的抗体/千克体重(mg/kg)。例如，抗体的剂量可以包含至少约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约26mg/kg、约27mg/kg、约28mg/kg、约29mg/kg、约30mg/kg、约31mg/kg、约32mg/kg、约33mg/kg、约34mg/kg、约35mg/kg、约36mg/kg、约37mg/kg、约38mg/kg、约39mg/kg、约40mg/kg、约41mg/kg、约42mg/kg、约43mg/kg、约44mg/kg、约45mg/kg、约46mg/kg、约47mg/kg、约48mg/kg、或约49mg/kg、或约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、或高达约100mg/kg。还考虑了任何与所有这些端点之间的范围，例如约1mg/kg至约3mg/kg、约1mg/kg至约5mg/kg、约1mg/kg至约8mg/kb、约3mg/kg至约8mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约20mg/kg、约1mg/kg至约40mg/kg、约5mg/kg至约30mg/kg、或约5mg/kg至约20mg/kg。[0133]监测疗法[0134]可以使用单能量和双能量x射线吸收测量法、超声波、计算机断层扫描、射线照相术、和磁共振成像来测量抗体介导的骨矿物质含量或骨密度的增加。骨量的量也可以通过体重或通过使用其他方法计算(参见，guinness-hey,metab.bonedis.relat.res.[代谢性骨病及相关研究],5:177-181(1984))。将动物模型用于本领域中以测试药物组合物和方法对例如骨质流失、骨吸收、骨形成、骨强度、或骨矿化的参数的影响，这些动物模型模拟人疾病的条件，如骨质疏松症和骨质减少。此类模型的实例包括卵巢切除的大鼠模型(kalu,boneandmineral[骨和矿物质],15:175-192(1991)；frost和jee,boneandmineral[骨和矿物质],18:227-236(1992)；以及jee和yao,j.musculoskel.neuron.interact.[肌肉骨骼和神经元相互作用杂志],1:193-207(2001))。本文描述的测量抗体活性的方法也可用于确定其他硬骨素抑制剂的功效。[0135]在人中，骨矿物质密度可以使用例如髋部和脊柱的双x射线吸收测定(dxa)在临床上确定。其他技术包括定量计算机断层扫描(qct)、超声波检查、单能x射线吸收测定(sxa)、和射线照相吸收测定。用于测量的常见中央骨骼部位包括脊柱和髋部；外围部位包括前臂、手指、手腕和脚后跟。除超声波检查外，美国医学协会指出bmd技术通常涉及使用x射线，并且基于辐射衰减取决于辐射路径中组织的厚度和组成的原理。所有技术都涉及将结果与规范数据库进行比较。[0136]可替代地，可以通过监测骨标记水平来测量对一种或多种抗硬骨素抗体的生理反应。骨标记是在骨重塑过程中产生的产物，并且由骨、成骨细胞、和/或破骨细胞释放。骨吸收和/或骨形成“标记”水平的波动意味着骨重塑/建模的变化。国际骨质疏松症基金会(iof)推荐使用骨标记来监测骨密度疗法(参见，例如，delmas等人,osteoporosint.[国际骨质疏松症],增刊6:s2-17(2000)，通过引用并入本文)。指示骨吸收(或破骨细胞活性)的标记包括例如，c-端肽(例如，1型胶原的c末端端肽(ctx)或血清交联的c-端肽)、n-端肽(1型胶原的n末端端肽(ntx))、脱氧吡啶啉(dpd)、吡啶啉、尿羟基脯氨酸、半乳糖基羟基赖氨酸、和抗酒石酸酸性磷酸酶(例如，血清抗酒石酸酸性磷酸酶异形体5b)。骨形成/矿化标记包括但不限于骨特异性碱性磷酸酶(bsap)、从i型原胶原的n末端和c末端延伸释放的肽(p1np，picp)、和骨钙蛋白(ostca)。几种试剂盒可商购获得以检测和定量临床样品(如尿液和血液)中的标记。[0137]组合疗法[0138]通过靶向相同病原体或生物化学途径或生物过程的两种或更多种药剂组合来治疗病理有时导致相对于单独使用治疗相关剂量的每种药剂而言更大的功效和减少的副作用。在一些情况下，药物组合的功效是累加的(组合的功效大约等于每种药物单独效果的总和)，但在其他情况下，效果是协同的(组合的功效大于单独给予每种药物的效果总和)。如本文所用，术语“组合疗法”意指两种或更多种药剂以同时方式递送(例如同时发生地)，或其中首先施用药剂之一、随后施用第二药剂，例如顺序地施用。[0139]在一些实施例中，将抗体与标准护理治疗剂一起施用，用于治疗降低的骨矿物质密度(即，抗体和标准护理治疗剂是同一治疗计划的一部分)。如本文所用，术语“标准护理”是指通常被临床医生接受用于经诊断患有某种疾病的某类患者的治疗。在一些实施例中，将抗体与第二骨增强剂一起施用，用于治疗降低的骨矿物质密度或骨缺损。在一些实施例中，骨增强剂选自由以下组成的组：抗再吸收剂、骨形成剂(即，合成代谢剂)，雌激素受体调节剂(包括但不限于雷洛昔芬、巴多昔芬、和拉索昔芬)和对破骨细胞具有抑制作用的药物。在一些实施例中，第二骨增强剂选自由以下组成的组：二膦酸盐(包括但不限于阿仑膦酸钠利塞膦酸盐、伊班膦酸钠和唑来膦酸)；雌激素或雌激素类似物；抗rank配体(rankl)抑制剂，如抗rankl抗体(例如，迪诺舒单抗(denosumab)，)；维生素d、或维生素d衍生物、或其模拟物；钙源、组织蛋白酶-k(cat-k)抑制剂(例如，奥当卡替(odanacatib))、替勃龙(tibolone)、降钙素或骨化三醇；和激素替代疗法。在一些实施例中，第二骨增强剂包括但不限于甲状旁腺素(pth)或其肽片段、pth相关的蛋白质(pthrp)、骨形态发生蛋白质、成骨素、naf、pge2激动剂、他汀类、雷尼酸锶、和硬骨素抑制剂(例如，描述于例如美国专利号7,592,429或7,872,106中的抗硬骨素抗体)。在一些实施例中，第二骨增强剂是(阿巴洛肽(abaloparatide))、(特立帕肽)、或在一些实施例中，第二骨增强剂包含骨形态发生蛋白质(例如bmp-1、bmp-2、bmp-3、bmp-4、bmp-5、bmp-6、bmp-7、bmp-8、bmp-9、bmp-10、bmp-11、bmp-12、bmp-13、bmp-14和/或bmp-15)。[0140]在一些实施例中，采用本文描述的抗体的组合疗法可以在施用一种或多种另外的治疗剂(例如，第二骨增强剂)之前或之后，以范围从数分钟至数周至数月的间隔进行。例如，在彼此约24小时内，例如在彼此约6-12小时内、或在彼此约1-2小时内、或在彼此约10-30分钟内施用单独的模式。在一些情况下，可能需要显著延长治疗时间段，其中几天(2、3、4、5、6、或7天)至几周(1、2、3、4、5、6、7、或8周)在不同模式的各施用之间失效。特别考虑了使用组合疗法的一种或两种药剂/疗法的重复治疗。[0141]试剂盒[0142]可以将包含一种或多种本文描述的抗体的药物组合物与提供关于使用此类药物组合物的说明书的包装材料一起放置在容器内(例如，小瓶或注射器)。通常，此类说明书将包括描述抗体浓度，以及在某些实施例中，可能是重构药物组合物所必需的赋形剂成分或稀释剂(例如，水、盐水或pbs)的相对量的明确表达。实例实例1-稳定性评估[0143]将蛋白质和安慰剂两者的样品以1ml填充至3cc小瓶中。将洛莫索珠单抗(70mg/ml)透析至下表2中鉴定的配制品缓冲液中，无菌过滤，然后在无菌条件下填充。储存温度是-70℃、-30℃、4℃、25℃、37℃和45℃。将样品储存长达24个月，在指定时间点抽取并进行分析。将在升高温度(25℃、37℃和45℃)下储存的样品储存四周。[0144]表2.评估的洛莫索珠单抗配制品2.评估的洛莫索珠单抗配制品[0145]在4℃下储存24个月后，当通过高分子量种类的se-hplc分析测量时，配制品5在小组中表现最差(图1)。结果鉴定了配制品1、2和6在4℃下储存2年后产生最少量的hmw(二聚体)形式。对于在-30℃和-70℃下储存24个月的样品(数据未显示)，显示出类似的稳定性概况。[0146]如通过峰面积积分测量的，所研究的所有配制品都在0.5％主峰的范围内(数据未显示)。当在低于0℃的温度下储存时，2年内的ph数据显示出与4℃数据类似的趋势，但并不显著(数据未显示)。[0147]在37℃升高温度下的储存揭示了储存四周内的类似的稳定性概况，尽管hmw种类的百分比高于在较低储存温度下的百分比。对于在45℃下储存的样品，配制品1中洛莫索珠单抗的hmw百分比增加最显著。(图2和3)。[0148]通过光阻法亚可见颗粒检测(hiac)确定的亚可见颗粒的趋势与含有洛莫索珠单抗的样品和安慰剂样品两者类似(数据未显示)。所有颗粒计数均低于药典测定限值，尽管注意到配制品5、7、8和9中的洛莫索珠单抗在整个稳定性期间产生可检测的水平，而测量的最后一个时间点2年(24个月)在10μm或25μm处没有相同水平的亚可见颗粒。在安慰剂样品中，配制品1在2年后显示出最高水平的亚可见颗粒，但仍在usp对尺寸和容器的限值内(数据未显示)。[0149]阳离子交换hplc[0150]图4-10显示了在4℃和-70℃下的长期洛莫索珠单抗主峰稳定性数据。一般来说，基于阳离子交换hplc，两个温度均表现出类似的稳定性。在不同温度和时间范围内，组氨酸配制品h6s的表现最为一致(图6为主峰数据的比较，图9为酸性峰数据)。将通过单独的温度储存至2年的配制品进行比较，可提供更多详细信息(包括另外的时间点)，并且示于图4和5中。在升高温度(包括25℃、37℃和45℃)下储存的洛莫索珠单抗显示出一些不同的趋势；对在4℃下储存的含有乙酸盐的配制品与25℃、37℃和45℃主峰数据进行比较(图4和7)。主峰趋势逆转。短期稳定性趋势一致，但在将较高温度结果与长期稳定性数字进行比较时会出现分歧。实例2-ph和溶解度研究[0151]九种配制品是基于乙酸盐的，并且八种是谷氨酸盐、组氨酸或琥珀酸盐缓冲配制品。单独或组合使用等渗量的赋形剂：甘油、蔗糖、精氨酸和甲硫氨酸。通过将洛莫索珠单抗透析至如表3所列的每个配制品中来制备所有配制品。[0152]测试的每个配制品含有70mg/ml洛莫索珠单抗。3cc小瓶中填充量为0.5ml。在-70℃、-30℃、4℃、25℃、37℃和45℃下储存瓶装样品。通过sec-hplc、cex-hplc、还原性ce-sds、hiac以及还原性和非还原性sds-page，在设定的相关时间点处分析样品。[0153]在2周、4周、8周和3个月的时间点处分析在升高温度下储存的样品。在延长至两年的时间点处分析在所有其他温度下储存的样品。[0154]表3.评估的配制品表3.评估的配制品[0155]储存两年后进行的hiac分析测量了usp指南中对10和25微米大小颗粒的颗粒计数(数据未显示)。[0156]在-30℃和-70℃下经五个和十个循环的冷冻-解冻后，精氨酸配制品26出现混浊(数据未显示)。由于该浊度，未对这些样品的颗粒进行分析。在低于0℃下储存的所有其他配制品和安慰剂的颗粒计数均低于usp指南的10和25微米大小颗粒(数据未显示)。在4℃下在2年时间点处储存的所有样品均远低于usp指南限值(数据未显示)。与所研究的配制品一致，3个月时间点的样品显示出颗粒增加，尽管在后来的时间点没有这种趋势。[0157]尺寸排阻hplc[0158]高分子量种类通常随着ph的增加而增加。基于se-hplc数据，配制品17、25、26和28在4℃抑制hmw种类形成方面的表现类似。含有精氨酸的配制品在升高温度下抑制高分子量形式。下表4和5分别提供了在-30℃和-70℃下，在不同时间点(t0、4周、3个月、6个月、1年、1.5年和2年)处储存时各种配制品中的洛莫索珠单抗结果。[0159]表4.如通过sec评估的，在-30℃储存时洛莫索珠单抗的主峰％。配制品04w3m6m1yr1.5yr2yr1397.897.897.697.397.896.997.02997.897.997.897.397.996.896.91497.897.797.697.297.896.997.01597.797.797.497.297.796.897.02197.897.897.597.397.896.797.02297.797.797.597.397.696.696.81697.797.797.597.297.696.997.02397.797.897.297.796.7[0160]表5.如通过sec评估的，在-70℃储存时洛莫索珠单抗的主峰％。配制品04w3m6m1yr1.5yr2yr1397.897.797.797.497.996.997.12997.897.997.797.497.796.897.01497.897.797.697.397.697.097.01597.797.797.697.297.697.097.02197.897.897.797.397.796.796.82297.797.797.697.397.696.996.81697.797.897.697.397.796.997.02397.7ꢀꢀ97.297.796.8[0161]阳离子交换hplc[0162]在4℃、25℃和37℃下储存3个月后，通过cex-hplc分析a52su中的洛莫索珠单抗(图11)。两年稳定性数据显示，基于酸性峰数据，含有精氨酸的配制品(配制品25和26)表现良好，尤其是在4℃下(图13)。还显示了碱性峰稳定性数据(图14)和主峰稳定性数据(图12)用于比较。[0163]毛细管电泳-sds[0164]在4℃下储存2年后，琥珀酸盐和精氨酸配制品以及ph4.8的乙酸盐配制品通过ce-sds显示出最高水平的高分子量种类，如图15所示。储存2年的所有样品均显示出0.3％-0.4％之间的非糖基化重链(nghc)峰面积％的类似概况(数据未显示)。[0165]总之，该实例中提供的数据证明，与测试的其他配制品相比，包含精氨酸的配制品在升高温度下抑制洛莫索珠单抗的高分子量种类。实例3-运输和聚山梨醇酯20浓度研究[0166]使用具有pes膜(10kd截止值)的密理博公司(millipore)搅拌室(型号8400，400ml容量)将配制品4中的洛莫索珠单抗浓缩至100mg/ml。将浓缩的洛莫索珠单抗透析至每个配制品中，用配制品缓冲液将浓度调节至70mg/ml，并且将聚山梨醇酯20添加至规定浓度。[0167]在模拟真实世界运输条件的条件下运输样品。到达后，在指定温度以及冷冻/解冻循环下储存之前，目视检查所有样品连同静态样品。[0168]表7.尺寸排阻hplc[0169]洛莫索珠单抗的尺寸排阻hplc分析显示，与在稳定性储存前经受实时运输应力的样品相比，在4℃储存下静态保存的样品之间的差异非常小(数据未显示)。不同水平的聚山梨醇酯20表现类似。光阻法亚可见颗粒计数(hiac)[0170]对配制的样品和安慰剂(静态和运输样品两者)进行亚可见颗粒(hiac)分析。值得注意的是，10μm和25μm计数结果均显示，随时间的变化，较高浓度的聚山梨醇酯20往往会抑制颗粒形成(表8-11)。表8.表9.表9.表10.表11.[0171]目视分析[0172]虽然尺寸排阻hplc和hiac分析均未指明配制品随时间的变化表现得更好，但目视分析确实表明某些配制品应该被排除在进一步的研究之外。在时间零处的所有样品都是透明的，并且目视分析得分为0，这意味着不含颗粒(数据未显示)。然而，除了-20℃下的样品，谷氨酸盐配制品(配制品35和36)储存两年后在不同温度下均不透明。除了两个冷冻样品(一个在-20℃下，一个在-30℃下)，含有甘油和精氨酸两者的配制品29在两年后也是不透明的。所有样品在两年时的可见颗粒得分也为0(几乎不含颗粒)(数据未显示)。[0173]总之，该实例中提供的数据还证明，与测试的其他配制品相比，在各种测试条件下包含精氨酸的洛莫索珠单抗配制品更稳定。实例4-高浓度注射器研究[0174]以静态(未运送)和运输(运送)两种模式研究六个注射器配制品和三个小瓶配制品。洛莫索珠单抗浓度是70mg/ml和120mg/ml。注射器(1cc)以1.0ml填充，小瓶(5cc)以2.0ml填充。经由国内商业包装载体，模拟真实世界运输条件运送瓶装样品和注射器样品，然后在4℃或29℃下储存长达两年。[0175]表12.研究的洛莫索珠单抗配制品。光阻法亚可见颗粒分析(hiac)[0176]hiac测定(光阻法亚可见颗粒检测)的结果显示，所有含蛋白质的配制品(无论是以小瓶还是注射器呈现)均低于usp指南的10μm和25μm颗粒。参见图16至19。对于琥珀酸盐配制品，0.010％(w/v)聚山梨醇酯20在70mg/ml下抑制亚可见颗粒形成，但在120mg/ml洛莫索珠单抗下不太有效。无论聚山梨醇酯20水平如何，瓶装样品显示出比注射器更少的亚可见颗粒。通常，在120mg/ml下检测到的亚可见颗粒多于在70mg/ml下检测到的亚可见颗粒。[0177]目视测定[0178]在4℃或29℃下储存2年后，目视评估样品。2年后，小瓶和注射器中的所有安慰剂样品均是透明的，并且不含颗粒。小瓶和注射器中的所有洛莫索珠单抗样品也不含颗粒，尽管大量样品在外观上是“模糊的(hazy)”或“浑浊的(cloudy)”(数据未显示)。[0179]浑浊的配制品是琥珀酸盐组合物，一个在小瓶中，两个在注射器中，并且这些结果排除了这些配制品以供进一步考虑。聚山梨醇酯20的存在似乎并未阻止“浑浊的”结果。较低浓度的洛莫索珠单抗样品是“浑浊的”，而120mg/ml的样品仅是“模糊的”。储存2年后唯一能始终更“透明”的样品是配制品32小瓶。[0180]尺寸排阻hplc(se-hplc)[0181]尺寸排阻hplc数据显示，高分子量(hmw)种类在2年储存期间在4℃下确实增加(数据未显示)。与4℃下的70mg/ml配制品相比，以120mg/ml配制的洛莫索珠单抗显示出随时间的变化更高的hmw产生，并且这在研究的所有配制品中均可见。在经受运输应力的样品中，hmw的水平略高(数据未显示)。虽然差异很小，但小瓶和注射器中的配制品23表现最差，可能是由于缺少聚山梨醇酯20。[0182]在29℃下储存2年的样品数据显示，与4℃下稳定性数据相比，通过尺寸排阻hplc定量的hmw种类水平要高得多(数据未显示)。经受运输应力的样品再次显示，hmw种类水平高于静态样品。120mg/mlhmw％结果的1.5年时间点较低，并且与趋势不符；这一观察结果对于温度和静态样品(相比于运输样品)都是正确的，因此该效应可能是一种测定伪影(assayartifact)。[0183]阳离子交换hplc[0184]使用阳离子交换hplc，在4℃下静态储存或经受运输应力的70mg/ml和120mg/ml洛莫索珠单抗蛋白质浓度均显示良好的稳定性(数据未显示)。当前第1页12当前第1页12